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Plasma rico en plaquetas/PRP, regeneración tisular, activación plaquetaria, terapia proliferativa con glucosa, plaquetas, terapia proliferativa
Cite este artículo como: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 de mayo de 2022) El efecto de la glucosa en el recuento y volumen de plaquetas: implicaciones para la medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
El plasma rico en plaquetas (PRP) y las soluciones de glucosa hipertónica se utilizan comúnmente para inyección en medicina regenerativa, a veces de forma conjunta. El efecto de la glucosa hipertónica sobre la lisis y activación plaquetaria no se había descrito previamente. Evaluamos el efecto de concentraciones elevadas de glucosa sobre el recuento de plaquetas y eritrocitos, así como sobre el volumen celular en PRP y sangre total (ST). Se observó una rápida reducción parcial del recuento de plaquetas con todas las mezclas de glucosa combinadas con PRP o sangre total, lo que concuerda con una lisis parcial. Tras el primer minuto, el recuento de plaquetas se mantuvo estable, lo que sugiere una rápida adaptación de las plaquetas residuales a la hipertonicidad extrema (>2000 mOsm). Tras el primer minuto, el recuento de plaquetas se mantuvo estable, lo que sugiere una rápida adaptación de las plaquetas residuales a la hipertonicidad extrema (>2000 mOsm). Después de que los trombocitos se establezcan estables, qué se coloca en el cuerpo de los trombocitos hacer экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Tras el primer minuto, el recuento de plaquetas se mantuvo estable, lo que indica una rápida adaptación de las plaquetas residuales a la hipertonicidad extrema (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态。 Después de que los trombocitos de origen estén instalados de forma estable, cómo instalarlos en las adaptaciones de los trombocitos k экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Tras el primer minuto, el recuento de plaquetas se mantuvo estable, lo que indica una rápida adaptación de las plaquetas residuales al estado hiperosmolar extremo (>2000 mOsm).Las concentraciones de glucosa del 25 % o superiores provocaron un aumento significativo del volumen plaquetario medio (VPM), lo que indica una fase temprana de activación plaquetaria. Se necesitan más estudios para determinar si se produce lisis o activación plaquetaria y si la inyección de glucosa hipertónica, sola o en combinación con plasma rico en plaquetas (PRP), puede proporcionar un beneficio clínico adicional.
En la década de 1950, el cirujano estadounidense George Hackett descubrió que podía aliviar de forma permanente el dolor articular y de espalda en muchos pacientes mediante la inyección de una solución proliferativa en tendones y ligamentos. Sus experimentos con conejos demostraron que el tratamiento, al que denominó terapia proliferativa, provocaba el ensanchamiento y fortalecimiento de los tendones. Estudios histológicos han confirmado que durante este proceso se produce nuevo colágeno [1].
Durante las primeras décadas, se probaron diversas soluciones de distribución. Para la década de 1990, la mayoría de los profesionales consideraba que las altas concentraciones de glucosa eran el método más seguro y eficaz. Sin embargo, su mecanismo de acción aún no está claro.
En el siglo XX se realizaron pocos estudios clínicos tras el trabajo de Hackett. Sin embargo, en la década de 2000 resurgió el interés y se llevaron a cabo varios ensayos clínicos exitosos de terapia proliferativa para el tratamiento del dolor lumbar [2], la osteoartritis de rodilla [3] y la epicondilitis lateral [4].
La regeneración tisular requiere la participación de células madre. Por lo tanto, las altas concentraciones de glucosa deben inducir de alguna manera la migración, replicación y diferenciación de estas células. Planteamos la hipótesis de que las plaquetas actúan como mensajeras y que las altas concentraciones de glucosa provocan la liberación de citocinas y factores de crecimiento por parte de las plaquetas, promoviendo así los procesos regenerativos, en especial la migración de células madre hacia zonas con altas concentraciones de glucosa.
La activación plaquetaria siempre precede a un aumento del calcio intracelular [5]. Liu et al. en 2008 demostraron que los altos niveles de glucosa aumentan la actividad de los canales de potencial de receptor transitorio canónico tipo 6 (TRPC6) en la membrana plasmática, lo que conduce a un influjo de iones de calcio en las plaquetas [6]. Otro estudio demostró que la exposición de la zona marginal de los microtúbulos a los iones de calcio provoca relajación, expansión y deformación de la zona marginal, lo que a su vez provoca un cambio de forma de disco a esfera, resultando en el volumen plaquetario medio (VPM) [7].
Nuestra hipótesis en este estudio es que la exposición de las plaquetas a altas concentraciones de glucosa afecta la zona marginal de los microtúbulos y el entorno intracelular, lo que provoca un aumento del VPM (volumen plaquetario medio).
Todos los participantes firmaron un formulario de consentimiento informado tras explicarles los detalles del estudio y antes de recibir las muestras. En este estudio, solo se utilizaron muestras de PRP con un hematocrito superior al 2%, de modo que se pudiera incluir el recuento de eritrocitos y el volumen corpuscular medio (VCM) para la comparación.
El estudio se realizó en cuatro fases: la primera consistió en plasma rico en plaquetas (PRP) y las restantes en sangre total (Tabla 1). Como se describió previamente [8], todas las fuerzas centrífugas relativas (FCR, g) se calcularon a partir del punto medio (Rmid, en cm) de la columna de sangre en la jeringa centrífuga. Elegimos utilizar el volumen plaquetario medio (VPM) como marcador de sensibilización plaquetaria y el recuento de plaquetas como indicador de posible lisis plaquetaria, ambos fácilmente medibles en analizadores hematológicos estándar.
En la primera fase, 47 voluntarios donaron muestras de sangre: un tubo de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y una muestra de sangre total PRP (anticoagulada con citrato de sodio (NaCl, 3%)) (Tabla 1). Coloque el agitador en el tubo inmediatamente. Se realizó un hemograma completo (CBC) en las muestras de EDTA por triplicado, y las muestras de NaCl se analizaron por triplicado para el análisis del CBC, y luego se preparó el PRP mediante varios métodos descritos anteriormente [8]. Todas las muestras de PRP se prepararon mediante centrifugación a 900–1000 g. Mezcle cada muestra de PRP en un mezclador de vórtice durante 5–10 segundos, luego divida cinco alícuotas de 0,5 ml en tubos.
Para evaluar el efecto de la exposición de plaquetas sobre concentraciones elevadas de glucosa, se mezclaron cantidades iguales (0,5 ml) de glucosa al 0%, 5%, 12,5%, 25% y 50% en agua con muestras de plaquetas para obtener concentraciones de la mezcla de glucosa al 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% y 25%, y se agitaron los tubos en un agitador de tubos de ensayo durante 15 minutos. El TAC de cada mezcla se analizó por triplicado después de 15 minutos. El recuento de plaquetas (PLT), el recuento de glóbulos rojos (RBC), el VCM y el VPM se promediaron para cada tubo, y se calculó el recuento medio de plaquetas, el recuento de glóbulos rojos, el VCM y el VPM para todas las muestras de PRP.
Tras completar la primera fase de recolección de datos, observamos un aumento significativo en el volumen de plaquetas en el plasma rico en plaquetas (PRP) después de la adición de D50W. Las plaquetas del PRP no representan necesariamente todas las plaquetas de la sangre, y el medio de PRP difiere del medio de sangre total. Por lo tanto, decidimos realizar un ensayo de segunda fase para evaluar el efecto de añadir D50W a la sangre total.
Para la segunda ronda, elegimos un tamaño de muestra de 30 basado en los resultados de la primera serie, como se describe en la sección de Análisis. En esta serie, 20 voluntarios donaron muestras de sangre (Tabla 1). Se extrajo sangre entera (1,8 ml) en una jeringa de 3 ml y se anticoaguló con 0,2 ml de NaCl al 40%. La jeringa de sangre entera se mezcló durante cinco segundos con un mezclador de vórtice y el hemograma completo se analizó por triplicado. Después del análisis, se añadió sangre anticoagulada a 2 ml de glucosa al 50% en una jeringa de 5 ml (la concentración final de glucosa fue aproximadamente del 25% (D25)) y se colocó en un tubo de agitación durante 30 minutos. Después de 30 minutos, el hemograma completo D25 en jeringas de sangre entera se analizó por triplicado. Se promediaron el recuento de plaquetas, el recuento de glóbulos rojos, el VCM y el VPM por jeringa, y se calculó la media de PLT, recuento de glóbulos rojos, VCM y VPM para cada muestra antes y después de añadir glucosa.
Debido a que las plaquetas en sangre total están comúnmente expuestas a glucosa hipertónica durante la terapia de glucosa proliferativa debido a la inyección mínimamente invasiva, y no es común combinar PRP con glucosa hipertónica justo antes de la inyección, decidimos estudiar la glucosa hipertónica en combinación con WB en la Sección 1. Paso tres y cuatro. En cada etapa, 20 voluntarios donaron 7-8 ml de ACD-A (ácido que contiene citrato trisódico (22,0 g/l), ácido cítrico (8,0 g/l) y glucosa (24,5 g/l), solución de citrato de dextrosa) para anticoagulantes sanguíneos (Tabla 1). Solo se utilizaron mezclas de glucosa mayores del 12,5% para determinar el porcentaje umbral asociado con un aumento en MPV. En la tercera etapa, se coloca 1 ml de sangre en un tubo de ensayo. A continuación, mezcle la sangre en un mezclador de vórtice durante 10 segundos añadiendo 1 ml de glucosa al 30%, 40% o 50% al tubo para obtener una concentración final de glucosa del 15%, 20% y 25%, respectivamente. Las muestras de sangre con glucosa se analizaron para realizar un hemograma completo inmediatamente después de la mezcla y se repitió el análisis cada dos minutos durante 30 minutos.
Durante la mezcla inicial, la adición de glucosa hipertónica 1:1 y WB o PRP expone las plaquetas a concentraciones superiores al 25% durante varios segundos. En el cuarto paso, para evaluar el efecto de la glucosa hipertónica con concentraciones máximas iniciales mínimas y probar el límite superior del efecto de la glucosa, agregamos solo una pequeña cantidad de sangre a D25W o D50W. Coloque 1 ml de D25W o D50W en un tubo y agregue 0,2 ml de WB mientras agita la muestra en un vórtex durante 10 segundos. En estos casos, la sangre se expuso a glucosa a una concentración aproximadamente un 20% superior a la concentración final, en lugar de un 50% superior a la concentración final como en la Fase 3, lo que resultó en concentraciones finales de glucosa de 20,8% y 41,6%. Las muestras mezcladas se analizaron en el mismo intervalo de tiempo que en el paso 3.
En el primer paso de cada serie de dilución de glucosa, se tomaron 30 muestras, ya que este era el tamaño de muestra apropiado para el estudio piloto [9]. Al final de cada fase (incluida la primera fase), evalúe la adecuación del tamaño de muestra utilizando la fórmula utilizada para determinar el tamaño de muestra necesario para estimar la media de la variable de resultado continua en una población. Fórmula n = Z2 x SD2 /E2. En esta ecuación, Z es la puntuación Z, SD es la desviación estándar y E es el error deseado [10]. Nuestro alfa es 0,05, que corresponde a un valor Z de 1,96, y esperamos un error de 5 (en porcentaje). Por lo tanto, resolvemos para n = (1,962 x SD2)/52. Los resultados mostraron que el tamaño de muestra requerido para cada etapa fue menor que el número real recolectado.
Durante los periodos 1, 3 y 4, utilizando más de una concentración de glucosa, se analizó el efecto de las diferentes concentraciones de glucosa comparando el cambio fraccional entre el tiempo 0 y cada tiempo subsiguiente (fase 1 a los 15 minutos, periodo 3 a los 15 minutos y cuatro a los 15 segundos, y luego cada dos minutos). Las tasas de cambio para cada periodo de tiempo se compararon utilizando la prueba U de Mann-Whitney porque los datos no seguían una distribución normal según lo determinado por la prueba de normalidad de Shapiro-Wilk. Dado que se realizó un análisis 1 a 1 de varios grupos (cinco) en el primer, tercer y cuarto paso (cinco en total), se realizó una corrección de Bonferroni para ajustar el valor alfa deseado a ≤0,01 pero no ≤0,05.
Reducción del recuento de plaquetas con todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y un aumento del VPM en las plaquetas de PRP a una concentración de dextrosa >12,5%: los recuentos de plaquetas de PRP aumentaron de una a cinco veces la concentración en comparación con la sangre total basal, variando según el método (no se muestra). Reducción del recuento de plaquetas con todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y un aumento del VPM en plaquetas de PRP a una concentración de dextrosa >12,5%: los recuentos de plaquetas de PRP aumentaron de una a cinco veces la concentración en comparación con la sangre total basal, variando según el método (no se muestra). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы and увеличение MPV в тромбоцитах PRP при conferencias декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от método (no показано). Disminución del recuento de plaquetas en todas las concentraciones de dextrosa hipertónica y aumento del VPM en las plaquetas de PRP a una concentración de dextrosa >12,5%: el recuento de plaquetas de PRP aumentó de 1 a 5 veces en comparación con la sangre total basal, dependiendo del método (no se muestra). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Con una concentración de glucosa >12,5 %, la alta concentración de glucosa reduce el recuento sanguíneo, el MPV sanguíneo del PRP aumenta: en comparación con el recuento sanguíneo basal, el recuento sanguíneo del PRP aumenta de 1 a 5 veces la concentración (no se describe). При гипертонической глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество тромбоцитов, а MPV повышали en тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). En concentraciones de glucosa >12,5%, todas las concentraciones hipertensivas de glucosa disminuyeron el recuento de plaquetas y aumentaron el VPM en las plaquetas del PRP: el recuento de plaquetas del PRP aumentó de 1 a 5 veces en comparación con las concentraciones basales de sangre total, dependiendo del método (como se describe).La Figura 1 muestra que el número de plaquetas disminuyó en casi un 75% después de la dilución en agua y en un 20-30% después de 15 minutos de dilución con diferentes concentraciones de glucosa en comparación con el PRP basal y una dilución 1:1 ajustada por volumen (1- k1 con corrección de volumen). k -1 cría).1 cría).
El número de células en cada dilución se expresa como una fracción del número original antes de la dilución.
El MPV disminuyó mínimamente durante la producción de PRP, sin cambios adicionales en las concentraciones de dilución al 12,5 % en agua o glucosa (incluidas las mezclas de glucosa de PRP al 25 %) y aumentó en más del 20 % después de la dilución en una solución de glucosa al 50 % (Fig. 2). En contraste, los eritrocitos no mostraron cambios significativos en el volumen en ninguna dilución que no fuera H2O.
El volumen promedio de células en cada dilución se expresa como un porcentaje del volumen original antes de la dilución.
Se observó una reducción similar, aunque menos pronunciada, en el recuento de plaquetas y un aumento en el CVR en BC expuesto a glucosa al 50 % (para formular con glucosa al 25 %). La Tabla 2 compara el número y el volumen celular en sangre total diluida en dextrosa al 50 % con los datos de PRP de la fase 1 diluidos en dextrosa al 50 %. Los cambios en el recuento de glóbulos rojos y el VCM de glóbulos rojos no fueron evidentes y no fueron el foco de nuestra atención.
DE = desviación estándar, DM = diferencia media entre grupos, EE = desviación estándar de la diferencia media, GR = eritrocitos, PLT = plaquetas, PRP = plasma rico en plaquetas, WB = sangre total
Después de agregar D50W a la sangre total, la pérdida de plaquetas ajustada por dilución porcentual fue del 7,7% (310±73 frente a 286±96) en comparación con el 17,8% para la dilución de PRP en D50W (664±348 frente a 544±277). El VPM de la sangre total aumentó un 16,8% (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6), mientras que el VPM del PRP aumentó un 26% (9,2 ± 0,8 frente a 11,6 ± 0,7). Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento del VPM fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la reducción del recuento de plaquetas dentro de la sangre total fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) y el aumento del VPM fue significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento del VPM fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la reducción del recuento de plaquetas dentro de la sangre total fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) y el aumento del VPM fue significativo (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Aunque las diferencias medias tanto en la reducción del recuento de plaquetas como en el aumento de la CVR fueron significativamente mayores con PRP, los cambios en la disminución del recuento de plaquetas dentro de la WB fueron casi significativos (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). El aumento del VPM fue significativo (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7.7%)；p = .06）和MPV的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001)。尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数 减少的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。El cambio en la reducción del recuento de plaquetas dentro de la sangre total fue casi significativo (de 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), aunque el PRP tuvo diferencias medias significativamente mayores en la disminución del recuento de plaquetas y el aumento del VPM, y el aumento del VPM fue significativo.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Se requirió una concentración final de glucosa del 20% para observar un cambio significativo en el VPM, pero el cambio en el VPM fue más pronunciado en la concentración final del 25%. La pérdida de plaquetas se estabilizó después de la disminución inicial. Observamos una disminución inicial brusca en el CVR; sin embargo, el CVR se restableció rápidamente en la concentración final de glucosa del 25%, que fue significativamente más alta que los niveles de CVR observados en las concentraciones finales de glucosa del 20% y 15% (Fig. 3 y a la izquierda de la Tabla 3; recuadros sombreados). indican valores p ≤ alfa con una corrección de Bonferroni de 0,01). También hubo una caída brusca inicial en el número de PLT, observada en la fase inicial de 0-15 s, y luego se mantuvo estable (de 15 s a 30 min; izquierda de la tabla 4).
La adición de diversas concentraciones de glucosa a la sangre total produjo una disminución inicial rápida del VPM, seguida de una recuperación dependiente de la concentración superior al 20 %. La leyenda muestra la concentración de glucosa después de la dilución. Los días 15, 20 y 25 se realizaron con una dilución 1:1. Los días 21 y 41 se realizaron con una dilución 1:5.
La Tabla 4 muestra el cambio en el recuento de plaquetas cuando se diluye en glucosa hipertónica. Observamos una relación dosis-dependiente entre la caída inmediata en el número de PLT en la dilución 1:1 y en la dilución 1:5. Comparando las diluciones 1:1 como un solo grupo con las diluciones 1:5, el grupo 1:1 tuvo una disminución inmediata en el recuento de plaquetas menor que el grupo 1:5 66±48,000 (23%) frente a 99±69,000 (37%). , p = 0,014) en el grupo 1:5. Después de una caída inicial en el primer punto de medición, el recuento de plaquetas como porcentaje de glucosa se estabilizó (Fig. 4).
Cuando se añade sangre entera a la glucosa en una proporción de 1:1, el recuento de plaquetas se reduce en aproximadamente un 25%. Sin embargo, cuando se añade sangre entera en una proporción de 1:5, la reducción es mucho mayor, alrededor del 50%.
La glucosa al 41% aumentó el VPM más rápidamente y de forma más drástica que el 25% o el 21%. Los resultados del VPM se muestran en la Figura 3. En todas las demás diluciones, no se observó una disminución inicial inmediata del VPM tras la adición de glucosa al 50%. Al utilizar glucosa al 25% (concentración de glucosa del 20,8% en la dilución final), el cambio en el VPM fue comparable al cambio en glucosa al 20% en una dilución 1:1 (Fig. 3). Aunque los cambios en el VPM fueron inicialmente mayores en la concentración mixta del 41% que en la del 25%, la diferencia en el VPM entre el 41% y el 25% después de 16 minutos ya no fue significativa (Tabla 3, derecha). También es interesante que la glucosa al 25% aumentara el VPM de forma más eficaz que el 20,8%.
Este estudio in vitro confirmó parcialmente nuestra hipótesis. Se observó una posible lisis parcial de plaquetas por la adición de dextrosa, una rápida adaptación de las plaquetas a la hipertonicidad extrema y un aumento significativo del VPM en respuesta a concentraciones superiores al 25 % de dextrosa hipertónica. Se observó una posible lisis parcial de plaquetas por la adición de dextrosa, una rápida adaptación de las plaquetas a la hipertonicidad extrema y un aumento significativo del VPM en respuesta a concentraciones superiores al 25 % de dextrosa hipertónica. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального Los monovolúmenes monovolúmenes no aptos para el consumo excesivo de alcohol tienen una concentración excesiva de aire > 25%. Se observó una posible lisis parcial de plaquetas con dextrosa, una rápida adaptación plaquetaria a la hipertonicidad extrema y un aumento significativo del VPM en respuesta a niveles hipertónicos de dextrosa superiores al 25 %.> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 En el caso de trombocitos potentes y fuertes, combinados con glucógenos, se adaptan los trombocitos a экстремальному Hipertonus y значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. Muestra una posible lisis parcial de plaquetas por mezclas de glucosa, una rápida adaptación plaquetaria a la hipertonicidad extrema y un aumento significativo del VPM en respuesta a glucosa hipertónica >25%.El aumento inicial fue máximo con una exposición a la glucosa del 41,6%, pero el aumento del VPM se aproximó a una exposición a la glucosa del 25% aproximadamente 20 minutos después de la exposición.
La concentración de plaquetas se ve afectada por la glucosa. Observamos que la cantidad de plaquetas disminuyó en todas las diluciones de glucosa. Una caída drástica en el número de plaquetas en las diluciones de H2O (0%) de la serie PRP podría estar asociada con lisis osmótica. Alternativamente, esto podría ser un artefacto causado por la agregación plaquetaria, pero esto contrasta con la ausencia de cambios en el VPM en esta dilución. Este hallazgo indica que algunas plaquetas son muy sensibles a la hipoosmolaridad.
En todas las diluciones 1:1 de glucosa, la cantidad de PLT disminuyó en un 20-30%, incluso en D5W (hipotónico a 252 mOsm), lo que puede indicar un efecto no osmótico específico de la glucosa, ya que tanto PLT como MPV permanecieron sin cambios en un aumento de tres veces en la concentración de glucosa. de D5W a D25W. De hecho, las concentraciones de PLT tendieron a aumentar ligeramente con el aumento de la osmolaridad.
La disminución de plaquetas entre las diluciones 1:1 y 1:5 indica que el efecto de disolución depende de la concentración inicial y final de glucosa. Si dependiera únicamente de la concentración inicial, cabría esperar una diferencia en la reducción de plaquetas entre las concentraciones 1:1. Sin embargo, no la observamos. Si el efecto de lisis dependiera únicamente de la concentración final de glucosa, no cabría esperar una gran diferencia entre una dilución 1:1 al 20 % y una dilución 1:5 al 20,8 %. Y, sin embargo, lo conseguimos.
Si se produce una pérdida de plaquetas debido a la lisis plaquetaria, se forma un lisado parcial, tras lo cual se liberan citocinas y factores de crecimiento al medio extracelular. Diversos estudios han demostrado que el lisado plaquetario es casi tan eficaz como el PRP como solución para la proliferación [11]. El propio PRP ha demostrado ser una solución eficaz para el tratamiento de la proliferación [12-14].
Las plaquetas inactivas circulan en forma de disco reforzado con diversas estructuras internas. Durante la activación, adquieren una forma más esférica o ameboide, lo que resulta en un aumento de volumen. Este aumento de volumen requiere un incremento de la superficie, que es consecuencia de la extrusión del sistema de túbulos abiertos (SOA) y la adición de gránulos exocíticos a la membrana. Aún queda por determinar si el aumento del VPM inducido por la glucosa hipertónica implica uno o ambos mecanismos; si se trata de ambos, entonces un aumento del VPM indicaría desgranulación.
Este estudio demostró que la exposición a altas concentraciones de glucosa en plasma rico en plaquetas (PRP) o plaquetas de sangre total produjo un aumento del volumen plaquetario medio (VPM) en 15 minutos con una concentración de glucosa del 25 % y del 41,6 %, respectivamente.
El aumento en el MPV plaquetario puede deberse a la dilatación de los ovillos de microtúbulos circundantes en respuesta al influjo de calcio. Liu et al. Se ha demostrado que la glucosa media el influjo de calcio a través del canal plaquetario TRPC6 [6]. Nuestra hipótesis es que la glucosa induce la relajación de los ovillos de microtúbulos, lo que lleva a un aumento en el MPV y a la sensibilización y/o activación plaquetaria. Sin embargo, a juzgar por nuestros resultados, esto es solo una parte de la historia. En nuestras pruebas, ninguna concentración por debajo de D25W resultó en un aumento en el MPV. Dado que no hemos probado la exposición a concentraciones de glucosa entre 12,5% y 25%, nuestros resultados de la fase 1 sugieren que puede haber un umbral en este rango de concentraciones de glucosa que lleva a un aumento en el MPV. Pruebas adicionales en las etapas 3 y 4 mostraron que 20-25% de glucosa parece ser el umbral para esto, pero aún no está claro por qué.
También observamos una disminución de aproximadamente el 9 % en el VPM después de la centrifugación. No está claro si esta disminución se debe a plaquetas más grandes y densas atrapadas en la capa de glóbulos rojos de la centrífuga. Esta observación puede ser importante para los médicos, ya que podría implicar que las plaquetas del PRP constituyen un subconjunto más pequeño y menos denso de las plaquetas de sangre total.
En un estudio previo, demostramos que la preparación de PRP mediante métodos manuales es económica [8]. Si la glucosa sensibiliza las plaquetas tisulares o el PRP, haciéndolos más susceptibles a la activación, o si el PRP se produce con propiedades de lisado parcial, esto podría mejorar la regeneración y reducir la necesidad de terapia. Por lo tanto, la combinación de PRP y glucosa altamente concentrada podría ser más rentable que el PRP o la glucosa por separado.
Nuestro estudio tiene varias limitaciones. Primero, usamos PRP obtenido mediante diferentes métodos, lo que puede generar resultados contradictorios. Segundo, no pudimos realizar un análisis bioquímico de ninguna de nuestras muestras para determinar con mayor precisión si se había producido activación plaquetaria. Nos gustaría medir la P-selectina, el factor plaquetario 4, los agregados plaquetarios monocíticos u otros marcadores de activación plaquetaria para comprender mejor el grado o la presencia de degranulación de gránulos alfa, pero esto está fuera del alcance de este estudio. Tercero, no pudimos confirmar mediante microscopía electrónica u otros métodos que el aumento del VPM en las plaquetas expuestas a glucosa se debiera al efecto sobre los ovillos de microtúbulos.
Las mezclas de sangre total (ST) o plasma rico en plaquetas (PRP) con glucosa al 25% aumentaron el volumen plaquetario medio (VPM), lo que indica el inicio de la activación plaquetaria, aunque este estudio no demostró progresión de la agregación ni de la degranulación. La mezcla hipertónica de glucosa provocó pérdida de plaquetas, posiblemente debido a un efecto lítico. La activación parcial o la lisis de las plaquetas pueden causar regeneración tisular tras la inyección de plaquetas. Aún no se conocen las consecuencias clínicas de estos cambios. Estudios posteriores han demostrado mediciones más precisas de la activación o la lisis y han evaluado los diferentes efectos clínicos de las mezclas hipertónicas de glucosa con ST o PRP.
La terapia proliferativa con glucosa es una terapia regenerativa sencilla y económica que se está expandiendo rápidamente y que impulsa la investigación clínica. Este estudio sugiere un mecanismo fisiológico que, de confirmarse, podría ayudarnos a comprender parte del mecanismo regenerativo de la terapia proliferativa.
Informática Biomédica y de la Salud en la Facultad de Medicina de la Universidad de Missouri, Kansas City, EE. UU.
Sujetos humanos: Todos los participantes en este estudio dieron o no dieron su consentimiento. La Sociedad Internacional de Medicina Celular ha emitido la aprobación ICMS-2017-003. El siguiente protocolo ha sido aprobado para su uso posterior por el Comité de Ética Institucional de la Sociedad Internacional de Medicina Celular: Título: Cálculo del rendimiento del fármaco del plasma rico en plaquetas basado en el recuento de plaquetas basal del hemograma completo. Sujetos animales: Todos los autores confirmaron que no se utilizaron animales ni tejidos en este estudio. Conflictos de interés: De acuerdo con el Formulario Uniforme de Divulgación del ICMJE, todos los autores declaran lo siguiente: Información de pago/servicio: Todos los autores declaran que no recibieron apoyo financiero de ninguna organización para el trabajo presentado. Relaciones financieras: Todos los autores declaran que no tienen actualmente ni en los últimos tres años relaciones financieras con ninguna organización que pueda estar interesada en el trabajo presentado. Otras relaciones: Todos los autores declaran que no hay otras relaciones o actividades que puedan afectar el trabajo presentado.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 de mayo de 2022) El efecto de la glucosa en el recuento y volumen de plaquetas: implicaciones para la medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
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