“Nunca duvide que um pequeno grupo de cidadãos dedicados e conscientes possa mudar o mundo. Na verdade, é o único que existe.”
A missão da Cureus é mudar o modelo tradicional de publicação médica, no qual a submissão de pesquisas pode ser cara, complexa e demorada.
Plasma rico em plaquetas/PRP, regeneração tecidual, ativação plaquetária, terapia proliferativa com glicose, plaquetas, terapia proliferativa
Cite este artigo como: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 de maio de 2022) O efeito da glicose na contagem e no volume de plaquetas: implicações para a medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
O plasma rico em plaquetas (PRP) e soluções hipertônicas de glicose são comumente usados ​​para injeção em medicina regenerativa, às vezes em conjunto. O efeito da glicose hipertônica na lise e ativação plaquetária não foi relatado anteriormente. Testamos o efeito de concentrações elevadas de glicose na contagem de plaquetas e eritrócitos, bem como nos volumes celulares em PRP e sangue total (ST). Uma rápida redução parcial na contagem de plaquetas ocorreu com todas as misturas de glicose misturadas com PRP ou sangue total, consistente com lise parcial. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas permaneceu estável, sugerindo uma rápida adaptação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm). Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas permaneceu estável, sugerindo uma rápida adaptação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm). Depois de cada minuto, o trombo está estável, o que é usado na sua conta остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 mОсм) hipértono. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas permaneceu estável, indicando uma rápida adaptação das plaquetas residuais à hipertonicidade extrema (>2000 mOsm).第一分钟后,血小板计数保持稳定,表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Após cada minuto de coleta do trombo, você terá uma conexão estável, que será usada no seu adaptador остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 mОсм) гиперосмолярному состоянию. Após o primeiro minuto, a contagem de plaquetas permaneceu estável, indicando uma rápida adaptação das plaquetas residuais ao estado hiperosmolar extremo (>2000 mOsm).Concentrações de glicose de 25% ou superiores resultaram em um aumento significativo no volume plaquetário médio (VPM), indicando um estágio inicial de ativação plaquetária. Estudos adicionais são necessários para determinar se ocorre lise ou ativação plaquetária e se a injeção de glicose hipertônica, isoladamente ou em combinação com PRP, pode proporcionar benefícios clínicos adicionais.
Na década de 1950, o cirurgião americano George Hackett descobriu que podia aliviar permanentemente as dores articulares e lombares em muitos pacientes através da injeção de uma solução proliferativa em tendões e ligamentos. As suas experiências em coelhos mostraram que o tratamento, que denominou terapia proliferativa, provocava o aumento e fortalecimento dos tendões. Estudos histológicos confirmaram que é produzido novo colagénio durante este processo [1].
Durante as primeiras décadas, muitas soluções de distribuição diferentes foram testadas. Na década de 1990, a maioria dos profissionais considerava altas concentrações de glicose o método mais seguro e eficaz. No entanto, o mecanismo de ação permanece obscuro.
Poucos estudos clínicos foram conduzidos no século XX após o trabalho de Hackett. No entanto, na década de 2000 houve um interesse renovado e vários ensaios clínicos bem-sucedidos de terapia proliferativa foram concluídos para o tratamento de dor lombar [2], osteoartrite do joelho [3] e epicondilite lateral [4].
A regeneração tecidual requer a participação de células-tronco. Portanto, altas concentrações de glicose devem, de alguma forma, induzir a migração, replicação e diferenciação dessas células. Nossa hipótese é que as plaquetas podem atuar como mensageiras e que altas concentrações de glicose podem levar as plaquetas a liberar citocinas e fatores de crescimento, promovendo assim processos regenerativos, especialmente a migração de células-tronco para áreas com altas concentrações de glicose.
A ativação plaquetária sempre precede um aumento no cálcio intracelular [5]. Liu et al., em 2008, mostraram que altos níveis de glicose aumentam a atividade dos canais do potencial receptor transitório canônico tipo 6 (TRPC6) na membrana plasmática, o que leva a um influxo de íons de cálcio nas plaquetas [6]. Outro estudo mostrou que a exposição da zona marginal dos microtúbulos aos íons de cálcio causa relaxamento, expansão e deformação da zona marginal, o que, por sua vez, causa uma mudança na forma de disco para esférica, resultando no volume plaquetário médio (VPM) [7].
Nossa hipótese neste estudo é que a exposição das plaquetas a altas concentrações de glicose afeta a zona marginal dos microtúbulos e o ambiente intracelular, levando a um aumento no VPM (Volume Plaquetário Médio).
Todos os participantes assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido após os detalhes do estudo terem sido explicados e antes de receberem as amostras. Neste estudo, foram utilizadas apenas amostras de PRP com hematócrito superior a 2%, de forma a permitir a inclusão da contagem de eritrócitos e do volume corpuscular médio (VCM) para fins de comparação.
O estudo foi conduzido em quatro fases, sendo a primeira com PRP e as fases restantes com sangue total (Tabela 1). Conforme descrito anteriormente [8], todas as forças centrífugas relativas (FCR, força g) foram calculadas a partir do ponto médio (Rmid, em cm) da coluna de sangue na seringa de centrífuga. Optamos por utilizar o VPM como marcador de sensibilização plaquetária e a contagem de plaquetas como indicador de potencial lise plaquetária, ambos facilmente mensuráveis ​​em analisadores hematológicos padrão.
Na primeira fase, 47 voluntários doaram amostras de sangue — um tubo com ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e uma amostra de sangue total para PRP (anticoagulado com citrato de sódio (NaCl, 3%)) (Tabela 1). O agitador orbital foi inserido imediatamente no tubo. O hemograma completo (HC) foi realizado em triplicata nas amostras com EDTA, e as amostras com NaCl foram analisadas em triplicata para a análise do HC. Em seguida, o PRP foi preparado por diversos métodos descritos anteriormente [8]. Todas as amostras de PRP foram preparadas por centrifugação a 900–1000 g. Cada amostra de PRP foi homogeneizada em um agitador vortex por 5–10 segundos e, em seguida, cinco alíquotas de 0,5 ml foram distribuídas em tubos.
Para avaliar o efeito da exposição das plaquetas sobre as concentrações elevadas de glicose, quantidades iguais (0,5 ml) de glicose em água a 0%, 5%, 12,5%, 25% e 50% foram misturadas com amostras de plaquetas para obter concentrações de 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% e 25% da mistura de glicose. Os tubos foram então agitados em um agitador de tubos de ensaio por 15 minutos. A concentração plasmática total (CPT) de cada mistura foi analisada em triplicata após 15 minutos. A contagem de plaquetas (PLT), a contagem de eritrócitos (RBC), o volume corpuscular médio (VCM) e o volume plaquetário médio (VPM) foram calculados como a média para cada tubo, e a média da contagem de plaquetas, da contagem de eritrócitos, do VCM e do VPM foi calculada para todas as amostras de plasma rico em plaquetas (PRP).
Após a conclusão da primeira fase de coleta de dados, observamos um aumento significativo no volume plaquetário das plaquetas em PRP após a adição de D50W. As plaquetas em PRP não representam necessariamente todas as plaquetas do sangue, e o meio de cultura do PRP difere do meio de cultura do sangue total. Portanto, decidimos realizar um segundo estudo para avaliar o efeito da adição de D50W ao sangue total.
Para a segunda rodada, selecionamos uma amostra de 30 participantes com base nos resultados da primeira série, conforme descrito na seção Análise. Nesta série, 20 voluntários doaram amostras de sangue (Tabela 1). Foram coletados 1,8 ml de sangue total em uma seringa de 3 ml e anticoagulados com 0,2 ml de NaCl a 40%. O sangue total foi homogeneizado por cinco segundos em um agitador vortex e o hemograma completo foi analisado em triplicata. Após a análise, o sangue anticoagulado foi adicionado a 2 ml de glicose a 50% em uma seringa de 5 ml (concentração final de glicose de aproximadamente 25% (D25)) e colocado em um tubo de agitação por 30 minutos. Após 30 minutos, as amostras de sangue total (D25/hemograma completo) foram analisadas em triplicata. A contagem de plaquetas, a contagem de eritrócitos, o VCM e o VPM por seringa foram calculados em média, e a média de plaquetas, contagem de eritrócitos, VCM e VPM foi calculada para cada amostra antes e depois da adição de glicose.
Como as plaquetas no sangue total são comumente expostas à glicose hipertônica durante a terapia proliferativa com glicose devido à injeção minimamente invasiva, e não é comum combinar PRP com glicose hipertônica imediatamente antes da injeção, decidimos estudar a glicose hipertônica em combinação com o sangue total na Seção 1. Etapas três e quatro. Em cada etapa, 20 voluntários doaram 7-8 ml de ACD-A (ácido contendo citrato trissódico (22,0 g/l), ácido cítrico (8,0 g/l) e glicose (24,5 g/l), solução de citrato de dextrose) para anticoagulação sanguínea (Tabela 1). Apenas misturas com glicose superior a 12,5% foram utilizadas para determinar a porcentagem limite associada ao aumento do VPM (Volume Plaquetário Médio). Na terceira etapa, 1 ml de sangue é colocado em um tubo de ensaio. Em seguida, misture o sangue em um agitador vortex por 10 segundos, adicionando 1 ml de glicose a 30%, 40% ou 50% ao tubo para obter uma concentração final de glicose de 15%, 20% e 25%, respectivamente. As amostras de sangue com glicose foram analisadas para hemograma completo imediatamente após a mistura e repetidas a cada dois minutos durante 30 minutos.
Durante a mistura inicial, a adição de glicose hipertônica na proporção de 1:1 com sangue total (ST) ou plasma rico em plaquetas (PRP) expõe as plaquetas a concentrações acima de 25% por alguns segundos. Na quarta etapa, para avaliar o efeito da glicose hipertônica com concentrações iniciais de pico mínimas e testar o limite superior do efeito da glicose, adicionamos apenas uma pequena quantidade de sangue ao D25W ou D50W. Colocamos 1 ml de D25W ou D50W em um tubo e adicionamos 0,2 ml de ST, agitando a amostra em vórtex por 10 segundos. Nesses casos, o sangue foi exposto à glicose em uma concentração aproximadamente 20% acima da concentração final, em vez de 50% acima da concentração final como na Fase 3, resultando em concentrações finais de glicose de 20,8% e 41,6%. As amostras misturadas foram analisadas no mesmo intervalo de tempo da etapa 3.
Na primeira etapa de cada série de diluição de glicose, foram coletadas 30 amostras, pois esse era o tamanho de amostra apropriado para o estudo piloto [9]. Ao final de cada fase (incluindo a primeira fase), avaliou-se a adequação do tamanho da amostra utilizando a fórmula usada para determinar o tamanho da amostra necessário para estimar a média da variável de desfecho contínua em uma população. Fórmula: n = Z² x SD² / E². Nesta equação, Z é o escore Z, SD é o desvio padrão e E é o erro desejado [10]. Nosso alfa é 0,05, o que corresponde a um valor Z de 1,96, e esperamos um erro de 5 (em porcentagem). Portanto, resolvemos para n = (1,96² x SD²)/5². Os resultados mostraram que o tamanho da amostra necessário para cada etapa foi menor do que o número efetivamente coletado.
Durante os períodos 1, 3 e 4, utilizando mais de uma concentração de glicose, o efeito das diferentes concentrações de glicose foi analisado comparando-se a variação fracionária entre o tempo 0 e cada tempo subsequente (fase 1 aos 15 minutos, período 3 aos 15 minutos e período 4 aos 15 segundos, e depois a cada dois minutos). As taxas de variação para cada período foram comparadas utilizando o teste U de Mann-Whitney, visto que os dados não seguiram uma distribuição normal, conforme determinado pelo teste de normalidade de Shapiro-Wilk. Como uma análise 1:1 de vários grupos (cinco) foi realizada na primeira, terceira e quarta etapas (cinco no total), uma correção de Bonferroni foi aplicada para ajustar o valor alfa desejado para ≤0,01, mas não ≤0,05.
Redução da contagem de plaquetas com todas as concentrações de dextrose hipertônica e aumento do VPM (Volume Plaquetário Médio) em plaquetas de PRP (plasma rico em plaquetas) em concentrações de dextrose >12,5%: a contagem de plaquetas de PRP aumentou de uma a cinco vezes a concentração em comparação com o sangue total basal, variando de acordo com o método (não ilustrado). Redução da contagem de plaquetas com todas as concentrações de dextrose hipertônica e aumento do VPM (Volume Plaquetário Médio) em plaquetas de PRP (plasma rico em plaquetas) em concentrações de dextrose >12,5%: a contagem de plaquetas de PRP aumentou de uma a cinco vezes em comparação com a concentração basal no sangue total, variando conforme o método (não ilustrado). Definindo uma coleção de trombos através de seu contrato de conexão de áudio e vídeo MPV тромбоцитах PRP por концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (não (mosaico). Diminuição da contagem de plaquetas em todas as concentrações hipertônicas de dextrose e aumento do VPM (volume plaquetário médio) em plaquetas de PRP (plasma rico em plaquetas) em concentrações de dextrose >12,5%: a contagem de plaquetas de PRP aumentou de 1 a 5 vezes em comparação com o sangue total basal, dependendo do método (dados não apresentados). ).在>12,5%增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Em concentrações de glicose superiores a 12,5%, a alta concentração de glicose reduz a contagem sanguínea, enquanto o VPM (volume plaquetário médio) do PRP (plasma rico em plaquetas) aumenta: em comparação com o sangue total, a contagem sanguínea no PRP aumenta de 1 a 5 vezes em concentrações mais elevadas (não descrito). Para glicosídeos concentrados >12,5% em comparação com glicosídeos hipertensivos concentrados Trombose, e MPV usado em tromba PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- a 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, em зависимости от метода (não especificado). Em concentrações de glicose >12,5%, todas as concentrações de glicose hipertensivas diminuíram a contagem de plaquetas e aumentaram o VPM (volume plaquetário médio) nas plaquetas do PRP: a contagem de plaquetas no PRP aumentou de 1 a 5 vezes em comparação com as concentrações basais no sangue total, dependendo do método (conforme descrito).A Figura 1 mostra que o número de plaquetas diminuiu em quase 75% após a diluição em água e em 20-30% após 15 minutos de diluição com diferentes concentrações de glicose, em comparação com o PRP basal e uma diluição 1:1 ajustada para o volume (1- k1 com correção de volume). k -1 reprodução).1 reprodução).
O número de células em cada diluição é expresso como uma fração do número original antes da diluição.
O VPM diminuiu minimamente durante a produção de PRP, sem alteração adicional nas concentrações de diluição para 12,5% em água ou glicose (incluindo misturas de PRP com glicose a 25%) e aumentou em mais de 20% após a diluição em solução de glicose a 50% (Fig. 2). Em contraste, os eritrócitos não apresentaram alteração significativa no volume em nenhuma diluição além de H2O.
O volume médio de células em cada diluição é expresso como uma porcentagem do volume original antes da diluição.
Uma redução semelhante, porém menos pronunciada, na contagem de plaquetas e um aumento no RVC foram observados em BC exposto a 50% de glicose (para formular com 25% de glicose). A Tabela 2 compara o número de células e os volumes celulares no sangue total diluído em 50% de dextrose com os dados da fase 1 do PRP diluído em 50% de dextrose. As alterações na contagem de hemácias e no VCM das hemácias não foram evidentes e não foram o foco de nossa atenção.
DP = desvio padrão, MD = diferença média entre os grupos, EP = desvio padrão da diferença média, RBC = eritrócitos, PLT = plaquetas, PRP = plasma rico em plaquetas, WB = sangue total
Após a adição de D50W ao sangue total, a porcentagem de perda de plaquetas ajustada pela diluição foi de 7,7% (310±73 vs. 286±96), em comparação com 17,8% para a diluição de PRP em D50W (664±348 vs. 544±277). O VPM no sangue total aumentou 16,8% (de 10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6), enquanto o VPM no PRP aumentou 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento do VPM tenham sido significativamente maiores com o PRP, as alterações na redução da contagem de plaquetas no sangue total foram quase significativas (310 ± 73 para 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e o aumento no VPM foi significativo (10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento do VPM tenham sido significativamente maiores com o PRP, as alterações na redução da contagem de plaquetas no sangue total foram quase significativas (310 ± 73 para 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e o aumento no VPM foi significativo (10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Embora as diferenças médias na redução da contagem de plaquetas e no aumento do RVC tenham sido significativamente maiores com o PRP, as alterações na diminuição da contagem de plaquetas no WB foram quase significativas (310 ± 73 para 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).O MPV aumentado é maior que o normal (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). o aumento no MPV foi significativo (de 10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 , 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06）和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。A alteração na redução da contagem de plaquetas no sangue total foi quase significativa (de 310 ± 73 para 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), embora o plasma rico em plaquetas (PRP) tenha apresentado diferenças médias significativamente maiores na redução da contagem de plaquetas e no aumento do volume plaquetário médio (VPM), sendo o aumento do VPM estatisticamente significativo.(de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 para 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Uma concentração final de glicose de 20% foi necessária para observar uma alteração significativa no VPM (Volume Plaquetário Médio), mas a alteração no VPM foi mais pronunciada na concentração final de 25%. A perda de plaquetas estabilizou após a queda inicial. Observamos uma queda acentuada inicial na RVC (Resistência Vascular Cerebral), porém, a RVC foi rapidamente restaurada na concentração final de glicose de 25%, que foi significativamente maior do que os níveis de RVC observados nas concentrações finais de glicose de 20% e 15% (Figura 3 e à esquerda da Tabela 3; caixas sombreadas). Os valores de p ≤ alfa indicam correção de Bonferroni de 0,01. Também houve uma queda acentuada inicial no número de plaquetas, observada na fase inicial de 0 a 15 segundos, que se estabilizou posteriormente (de 15 segundos a 30 minutos; à esquerda da Tabela 4).
A adição de diversas concentrações de glicose ao sangue total resultou em uma rápida diminuição inicial do VPM (Volume Plaquetário Médio), seguida por uma recuperação dependente da concentração de mais de 20%. A legenda mostra a concentração de glicose após a diluição. Os ensaios D15, D20 e D25 foram realizados com diluição de 1:1. Os ensaios D21 e D41 foram realizados com diluição de 1:5.
A Tabela 4 mostra a variação na contagem de plaquetas quando diluídas em glicose hipertônica. Observamos uma relação dose-dependente entre a queda imediata na contagem de plaquetas na diluição 1:1 e na diluição 1:5. Comparando as diluições 1:1 como um único grupo com as diluições 1:5, o grupo 1:1 apresentou uma diminuição imediata na contagem de plaquetas menor do que o grupo 1:5 (66±48.000 (23%) versus 99±69.000 (37%); p = 0,014) no grupo 1:5. Após uma queda inicial no primeiro ponto de medição, a contagem de plaquetas como porcentagem da glicose estabilizou (Figura 4).
Quando se adiciona sangue total à glicose na proporção de 1:1, a contagem de plaquetas é reduzida em cerca de 25%. No entanto, quando o sangue total foi adicionado na proporção de 1:5, a redução foi muito maior – cerca de 50%.
A glicose a 41% aumentou o VPM mais rapidamente e de forma mais acentuada do que as concentrações de 25% ou 21%. Os resultados do VPM são mostrados na Figura 3. Em todas as outras diluições, não foi observada nenhuma diminuição inicial imediata no VPM após a adição de glicose a 50%. Ao usar glicose a 25% (concentração de glicose de 20,8% na diluição final), a alteração no VPM foi comparável à alteração observada com glicose a 20% em uma diluição de 1:1 (Figura 3). Embora as alterações no VPM tenham sido inicialmente maiores na concentração mista de 41% do que em 25%, a diferença no VPM entre 41% e 25% após 16 minutos deixou de ser significativa (Tabela 3, à direita). É interessante notar também que a glicose a 25% aumentou o VPM de forma mais eficaz do que a glicose a 20,8%.
Este estudo in vitro confirmou parcialmente nossa hipótese. O estudo demonstrou potencial lise parcial de plaquetas pela adição de dextrose, uma rápida adaptação das plaquetas à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM (volume plaquetário médio) em resposta a concentrações de dextrose hipertônica superiores a 25%. O estudo demonstrou potencial lise parcial de plaquetas pela adição de dextrose, uma rápida adaptação das plaquetas à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM (volume plaquetário médio) em resposta a concentrações de dextrose hipertônica superiores a 25%. Em cada caso, você pode encontrar uma solução de problemas para obter os primeiros downloads, por favor, adicione-os тромбоцитов до экстремального A hipertonia e o uso de MPV têm uma taxa de conversão de hipertonia > 25%. O estudo demonstrou potencial lise parcial de plaquetas com dextrose, rápida adaptação plaquetária à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM (volume plaquetário médio) em resposta a níveis hipertônicos de dextrose superiores a 25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 , 以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Em caso de problemas potenciais, você pode usar tubos de vidro com glicosímetro, adaptando-os тромбоцитов к экстремальному Hipertonus e aumento de volume do MPV são obtidos com concentração de hiperglicemia > 25%. Isso demonstra potencial lise parcial de plaquetas por misturas de glicose, rápida adaptação plaquetária à hipertonicidade extrema e um aumento significativo no VPM (volume plaquetário médio) em resposta à glicose hipertônica >25%.O aumento inicial foi máximo com uma exposição à glicose de 41,6%, mas o aumento no VPM (Volume Plaquetário Médio) aproximou-se de 25% de exposição à glicose aproximadamente 20 minutos após a exposição.
A concentração de plaquetas é afetada pela glicose. Observamos que a quantidade de plaquetas diminuiu em todas as diluições de glicose. Uma queda acentuada no número de plaquetas nas diluições de H2O (0%) da série de PRP pode estar associada à lise osmótica. Alternativamente, isso poderia ser um artefato causado pela agregação plaquetária, mas isso contrasta com a ausência de alteração no VPM (volume plaquetário médio) nessa diluição. Esse achado significa que algumas plaquetas são muito sensíveis à hipoosmolaridade.
Em todas as diluições de glicose na proporção de 1:1, a quantidade de plaquetas diminuiu de 20 a 30%, mesmo com glicose a 5% (hipotônica a 252 mOsm), o que pode indicar um efeito não osmótico específico da glicose, visto que tanto a quantidade de plaquetas quanto o volume plaquetário médio (VPM) permaneceram inalterados com um aumento de três vezes na concentração de glicose, de glicose a 5% para glicose a 25%. De fato, as concentrações de plaquetas tenderam a aumentar ligeiramente com o aumento da osmolaridade.
A diminuição na contagem de plaquetas entre as diluições 1:1 e 1:5 significa que o efeito de dissolução depende da concentração inicial e final de glicose. Se dependesse apenas da concentração inicial, seria de se esperar uma diferença na redução de plaquetas entre as concentrações 1:1. Mas não observamos isso. Se o efeito de lise dependesse apenas da concentração final de glicose, não esperaríamos muita diferença entre uma diluição de 20% em 1:1 e uma diluição de 20,8% em 1:5. E, no entanto, conseguimos.
Se ocorrer perda de plaquetas devido à lise plaquetária, forma-se um lisado parcial, após o qual citocinas e fatores de crescimento são liberados no ambiente extracelular. Vários estudos demonstraram que o lisado plaquetário é quase tão eficaz quanto o PRP como solução para proliferação [11]. O próprio PRP demonstrou ser uma solução eficaz para o tratamento da proliferação [12-14].
As plaquetas inativas circulam na forma de um disco reforçado por diversas estruturas internas. Durante a ativação, elas assumem uma forma mais esférica ou amebiana, resultando em um aumento de volume. O aumento de volume requer um aumento na área de superfície, que é resultado da extrusão do sistema de túbulos abertos (STA) e da adição de grânulos exocíticos à membrana. Ainda não se sabe se o aumento do VPM induzido pela glicose hipertônica envolve um ou ambos os mecanismos, mas, se envolver o último, um aumento no VPM indicaria degranulação.
Este estudo demonstrou que a exposição a altas concentrações de glicose em plaquetas de PRP ou de sangue total resultou em um aumento do VPM (Volume Plaquetário Médio) em 15 minutos, com concentrações de glicose de 25% e 41,6%, respectivamente.
O aumento no VPM das plaquetas pode ser devido à dilatação dos emaranhados de microtúbulos circundantes em resposta ao influxo de cálcio. Liu et al. demonstraram que a glicose medeia o influxo de cálcio através do canal TRPC6 das plaquetas [6]. Nossa hipótese é que a glicose induz o relaxamento dos emaranhados de microtúbulos, levando a um aumento no VPM e à sensibilização e/ou ativação das plaquetas. No entanto, a julgar pelos nossos resultados, isso é apenas parte da explicação. Em nossos testes, nenhuma concentração abaixo de D25W resultou em aumento do VPM. Dado que não testamos a exposição a concentrações de glicose entre 12,5% e 25%, nossos resultados da fase 1 sugerem que pode haver um limiar nessa faixa de concentrações de glicose que leva a um aumento no VPM. Testes adicionais nas fases 3 e 4 mostraram que 20-25% de glicose parece ser o limiar para isso, mas o motivo ainda não está claro.
Também observamos uma diminuição de aproximadamente 9% no VPM após a centrifugação. Não está claro se essa diminuição no VPM se deve a plaquetas maiores e mais densas retidas na camada de hemácias da centrífuga. Essa observação pode ser importante para os clínicos, pois pode indicar que as plaquetas do PRP são um subconjunto menor e menos denso das plaquetas do sangue total.
Em um estudo anterior, mostramos que a preparação de PRP por métodos manuais é de baixo custo [8]. Se a glicose sensibilizar as plaquetas teciduais ou o PRP, tornando-os mais suscetíveis à ativação, ou se o PRP for produzido com propriedades de lisado parcial, isso pode melhorar a regeneração e reduzir a necessidade de terapia. Portanto, a combinação de PRP e glicose altamente concentrada pode ser mais custo-efetiva do que o PRP ou a glicose isoladamente.
Nosso estudo apresenta algumas limitações. Primeiro, utilizamos PRP obtido por diferentes métodos, o que pode levar a resultados conflitantes. Segundo, não foi possível realizar uma análise bioquímica de nenhuma das amostras para determinar com maior precisão se houve ativação plaquetária. Gostaríamos de medir a P-selectina, o fator plaquetário 4, os agregados monocíticos de plaquetas ou outros marcadores de ativação plaquetária para melhor compreender o grau ou a presença de degranulação dos grânulos alfa, mas isso está além do escopo deste estudo. Terceiro, não foi possível confirmar, por microscopia eletrônica ou outros métodos, que o aumento do VPM (volume plaquetário médio) nas plaquetas expostas à glicose se deve ao efeito sobre os emaranhados de microtúbulos.
Misturas de sangue total ou plasma rico em plaquetas (PRP) com 25% de glicose aumentaram o volume plaquetário médio (VPM), sinalizando o início da ativação plaquetária, embora este estudo não tenha demonstrado progressão da agregação ou degranulação. A mistura hipertônica de glicose resultou em perda de plaquetas, possivelmente representando um efeito lítico. A ativação ou lise parcial de plaquetas pode causar regeneração tecidual após a injeção de plaquetas. Não está claro quais consequências clínicas essas alterações podem acarretar. Estudos adicionais demonstraram medições mais precisas de ativação ou lise e avaliaram os diferentes efeitos clínicos de misturas hipertônicas de glicose com sangue total ou PRP.
A terapia proliferativa com glicose é uma terapia regenerativa simples e de baixo custo que está se expandindo rapidamente e sendo alvo de pesquisas clínicas. Este estudo sugere um mecanismo fisiológico que, se confirmado, poderá nos ajudar a compreender parte do mecanismo regenerativo da terapia proliferativa.
Informática Biomédica e da Saúde na Escola de Medicina da Universidade de Missouri, Kansas City, Kansas City, EUA
Sujeitos Humanos: Todos os participantes deste estudo deram ou não consentimento. A Sociedade Internacional de Medicina Celular (ICSM) emitiu a aprovação ICMS-2017-003. O seguinte protocolo foi aprovado para uso posterior pelo Comitê de Ética em Pesquisa da ICSM: Título: Cálculo do rendimento de fármacos em plasma rico em plaquetas com base na contagem basal de plaquetas no hemograma completo. Sujeitos Animais: Todos os autores confirmaram que nenhum animal ou tecido foi envolvido neste estudo. Conflitos de Interesse: De acordo com o Formulário Uniforme de Divulgação do ICMJE, todos os autores declaram o seguinte: Informações sobre pagamento/serviços: Todos os autores declaram que não receberam apoio financeiro de nenhuma organização para o trabalho submetido. Relações Financeiras: Todos os autores declaram que não possuem, atualmente ou nos últimos três anos, relações financeiras com qualquer organização que possa estar interessada no trabalho submetido. Outras Relações: Todos os autores declaram que não existem outras relações ou atividades que possam afetar o trabalho submetido.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 de maio de 2022) O efeito da glicose na contagem e no volume de plaquetas: implicações para a medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença de Atribuição Creative Commons CC-BY 4.0. É permitido o uso, distribuição e reprodução irrestritos em qualquer meio, desde que o autor original e a fonte sejam devidamente citados.