«Tvil aldri på at en liten gruppe omtenksomme, dedikerte borgere kan forandre verden. Faktisk er det den eneste som finnes.»
Cureus' oppgave er å endre den langvarige modellen for medisinsk publisering, der innsending av forskningsmateriale kan være dyrt, komplekst og tidkrevende.
Blodplaterikt plasma/prp, vevsregenerering, blodplateaktivering, glukoseproliferativ terapi, blodplater, proliferativ terapi
Siter denne artikkelen som: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17. mai 2022) Effekten av glukose på blodplatetall og volum: implikasjoner for regenerativ medisin. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Blodplaterikt plasma (PRP) og hypertoniske glukoseløsninger brukes ofte til injeksjon i regenerativ medisin, noen ganger sammen. Effekten av hypertonisk glukose på blodplatelyse og -aktivering har ikke blitt rapportert tidligere. Vi testet effekten av forhøyede glukosekonsentrasjoner på blodplate- og erytrocyttall, samt cellevolum i PRP og fullblod (WB). En rask delvis reduksjon i blodplatetall forekom med alle glukoseblandinger blandet med PRP eller fullblod, noe som stemmer overens med delvis lysis. Etter det første minuttet forble trombocytttallet stabilt, noe som tyder på en rask akkommodasjon av gjenværende trombocytter til ekstrem (>2000 mOsm) hypertonicitet. Etter det første minuttet forble trombocytttallet stabilt, noe som tyder på en rask akkommodasjon av gjenværende trombocytter til ekstrem (>2000 mOsm) hypertonicitet. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккомоходац тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Etter det første minuttet forble blodplatetallet stabilt, noe som indikerer en rask akkommodasjon av de gjenværende blodplatene til ekstrem (>2000 mOsm) hypertonicitet.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацих тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Etter det første minuttet forble blodplatetallet stabilt, noe som indikerer en rask tilpasning av de gjenværende blodplatene til den ekstreme (>2000 mOsm) hyperosmolare tilstanden.Glukosekonsentrasjoner på 25 % og over resulterte i en betydelig økning i gjennomsnittlig blodplatevolum (MPV), noe som indikerer et tidlig stadium av blodplateaktivering. Ytterligere studier er nødvendige for å avgjøre om blodplatelyse eller -aktivering forekommer, og om hypertonisk glukoseinjeksjon alene eller i kombinasjon med PRP kan gi ytterligere klinisk fordel.
På 1950-tallet oppdaget den amerikanske kirurgen George Hackett at han kunne lindre ledd- og ryggsmerter permanent hos mange pasienter ved å injisere en proliferativ løsning i sener og leddbånd. Hans eksperimenter på kaniner viste at behandlingen, som han kalte proliferativ terapi, fikk senene til å forstørres og styrkes. Histologiske studier har bekreftet at nytt kollagen produseres under denne prosessen [1].
I løpet av de første tiårene ble mange forskjellige distribusjonsløsninger prøvd ut. På 1990-tallet anså de fleste utøvere høye konsentrasjoner av glukose for å være den sikreste og mest effektive metoden. Virkningsmekanismen er imidlertid fortsatt uklar.
Få kliniske studier ble utført på 1900-tallet etter Hacketts arbeid. På 2000-tallet var det imidlertid fornyet interesse, og flere vellykkede kliniske studier av proliferativ terapi ble fullført for behandling av korsryggsmerter [2], kneleddsartrose [3] og lateral epikondylitt [4].
Vevsregenerering krever deltakelse fra stamceller. Derfor må høye konsentrasjoner av glukose på en eller annen måte indusere migrasjon, replikasjon og differensiering av stamceller. Vi antar at blodplater kan fungere som budbringere, og at høye glukosekonsentrasjoner kan føre til at blodplater frigjør cytokiner og vekstfaktorer, og dermed fremmer regenerative prosesser, spesielt stamcellemigrasjon til områder med høye glukosekonsentrasjoner.
Blodplateaktivering går alltid forut for en økning i intracellulært kalsium [5]. Liu et al. viste i 2008 at høye glukosenivåer øker aktiviteten til transient receptor potential canonical type 6 (TRPC6)-kanaler i plasmamembranen, noe som fører til en tilstrømning av kalsiumioner til blodplatene [6]. En annen studie viste at eksponering av mikrotubuli-marginalsonen for kalsiumioner forårsaker relaksasjon, ekspansjon og deformasjon av marginalsonen, som igjen forårsaker en endring i form fra skive til sfærisk, noe som resulterer i gjennomsnittlig blodplatevolum (MPV) [7].
Vår hypotese i denne studien er at eksponering av blodplater for høye konsentrasjoner av glukose påvirker mikrotubulusmarginalsonen og det intracellulære miljøet, noe som fører til en økning i MPV.
Alle deltakerne signerte et informert samtykkeskjema etter at detaljene i studien ble forklart og før de mottok prøvene. I denne studien ble kun PRP-prøver med en hematokritt på over 2 % brukt, slik at antall erytrocytter (erytrocytter) og gjennomsnittlig korpuskulært volum av røde blodlegemer (MCV) kunne inkluderes for sammenligning.
Studien ble gjennomført i fire faser, den første fasen var PRP og de resterende fasene var fullblod (tabell 1). Som beskrevet tidligere [8], ble alle relative sentrifugalkrefter (RCF, g-kraft) beregnet fra midtpunktet (Rmid, i cm) av blodsøylen i sentrifugalsprøyten. Vi valgte å bruke MPV som en markør for blodplatesensibilisering og blodplatetall som en indikator på potensiell blodplatelyse, som begge enkelt kan måles på standard hematologianalysatorer.
I den første fasen donerte 47 frivillige blodprøver – ett rør med etylendiamintetraeddiksyre (EDTA) og én PRP-fullblodsprøve (antikoagulert med natriumsitrat (NaCl, 3 %)) (tabell 1). Plasser vippemekanismen i røret umiddelbart. Fullstendig blodtelling (CBC) ble utført på EDTA-prøver i triplikat, og NaCl-prøvene ble analysert i triplikat for CBC-analyse, og deretter ble PRP fremstilt ved hjelp av forskjellige metoder beskrevet ovenfor [8]. Alle PRP-prøvene ble fremstilt ved sentrifugering ved 900–1000 g. Bland hver PRP-prøve på en vortexmikser i 5–10 sekunder, og fordel deretter fem 0,5 ml alikvoter i rør.
For å evaluere effekten av blodplateeksponering på forhøyede glukosekonsentrasjoner, ble like mengder (0,5 ml) av 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % og 50 % glukose i vann blandet med blodplateprøvene for å oppnå 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % og 25 % konsentrasjoner av glukoseblandingen, og rørene ble blandet på en reagensrørsrister i 15 minutter. TAC for hver blanding ble analysert i triplikat etter 15 minutter. Blodplatetall (PLT), RBC-tall, MCV og MPV ble gjennomsnittlig for hvert rør, og gjennomsnittlig blodplatetall, RBC-tall, MCV og MPV ble beregnet for alle PRP-prøvene.
Etter at den første fasen av datainnsamlingen var fullført, la vi merke til en betydelig økning i blodplatevolumet i PRP-blodplater etter tilsetning av D50W. PRP-blodplater representerer ikke nødvendigvis alle blodplater i blodet, og PRP-medium er forskjellig fra WB-medium. Derfor bestemte vi oss for å gjennomføre en andre fase av effekten av å tilsette D50W til fullblod.
For andre runde valgte vi en prøvestørrelse på 30 basert på resultatene fra den første serien, som beskrevet i analysedelen. I denne serien donerte 20 frivillige blodprøver (tabell 1). Fullblod (1,8 ml) ble trukket inn i en 3 ml sprøyte og antikoagulert med 0,2 ml 40 % NaCl. Fullblodssprøyten ble blandet i fem sekunder med en vortexmikser, og CBC ble analysert i triplikat. Etter analyse ble antikoagulert blod tilsatt 2 ml 50 % glukose i en 5 ml sprøyte (sluttglukosekonsentrasjonen var omtrent 25 % (D25)) og plassert i et risterør i 30 minutter. Etter 30 minutter ble D25/CBC i WB-sprøyter analysert i triplikat. Gjennomsnittet av blodplatetall, erytrocyttantall, MCV og MPV per sprøyte ble beregnet, og gjennomsnittlig PLT, erytrocyttantall, MCV og MPV ble beregnet for hver prøve før og etter tilsetning av glukose.
Fordi blodplater i fullblod ofte eksponeres for hypertonisk glukose under proliferativ glukosebehandling på grunn av minimalt invasiv injeksjon, og det ikke er vanlig å kombinere PRP med hypertonisk glukose rett før injeksjon, bestemte vi oss for å studere hypertonisk glukose i kombinasjon med WB i del 1, trinn tre og fire. I hvert trinn donerte 20 frivillige 7–8 ml ACD-A (syre som inneholder trinatriumcitrat (22,0 g/l), sitronsyre (8,0 g/l) og glukose (24,5 g/l), dekstrosecitratløsning) for blodantikoagulantia (tabell 1). Kun blandinger av glukose større enn 12,5 % ble brukt for å bestemme terskelprosenten assosiert med en økning i MPV. I det tredje trinnet plasseres 1 ml blod i et reagensrør. Bland deretter blodet på en vortexmikser i 10 sekunder ved å tilsette 1 ml 30 % glukose, 40 % glukose eller 50 % glukose til røret for å oppnå en endelig glukosekonsentrasjon på henholdsvis 15 %, 20 % og 25 %. Glukoseblodprøver ble analysert for CBC umiddelbart etter blanding og gjentatt hvert andre minutt i 30 minutter.
Under den første blandingen eksponerer tilsetningen av 1:1 hypertonisk glukose og WB eller PRP blodplatene for konsentrasjoner over 25 % i flere sekunder. I det fjerde trinnet, for å evaluere effekten av hypertonisk glukose med minimale initiale toppkonsentrasjoner og teste den øvre grensen for glukoseeffekten, tilsatte vi bare en liten mengde blod til D25W eller D50W. Plasser 1 ml D25W eller D50W i et rør og tilsett 0,2 ml WB mens prøven vortexes i 10 sekunder. I disse tilfellene ble blodet eksponert for glukose i en konsentrasjon omtrent 20 % over sluttkonsentrasjonen, i stedet for 50 % over sluttkonsentrasjonen som i fase 3, noe som resulterte i sluttglukosekonsentrasjoner på 20,8 % og 41,6 %. Blandede prøver ble analysert med samme tidsintervall som i trinn 3.
I det første trinnet i hver glukosefortynningsserie ble det tatt 30 prøver, da dette var den passende utvalgsstørrelsen for pilotstudien [9]. Ved slutten av hver fase (inkludert den første fasen) skal utvalgsstørrelsens tilstrekkelighet vurderes ved hjelp av formelen som brukes for å bestemme utvalgsstørrelsen som trengs for å estimere gjennomsnittet av den kontinuerlige utfallsvariabelen i én populasjon. Formel n = Z2 x SD2 /E2. I denne ligningen er Z Z-poengsummen, SD er standardavviket, og E er den ønskede feilen [10]. Vår alfa er 0,05, som tilsvarer en Z-verdi på 1,96, og vi forventer en feil på 5 (i prosent). Derfor løser vi for n = (1,962 x SD2)/52. Resultatene viste at utvalgsstørrelsen som kreves for hvert trinn var mindre enn det faktiske antallet som ble samlet inn.
I løpet av periode 1, 3 og 4 med mer enn én glukosekonsentrasjon ble effekten av forskjellige glukosekonsentrasjoner analysert ved å sammenligne den brøkdelte endringen mellom tid 0 og hvert påfølgende tidspunkt (fase 1 ved 15 minutter, periode 3 ved 15 minutter), og fire ved 15 sekunder, deretter hvert andre minutt.) Endringsratene for hver tidsperiode ble sammenlignet ved hjelp av Mann-Whitney U-test fordi dataene ikke fulgte en normalfordeling som bestemt av Shapiro-Wilk-normalitetstesten. Siden en 1-til-1-analyse av flere grupper (fem) ble utført i første, tredje og fjerde trinn (fem totalt), ble en Bonferroni-korreksjon utført for å justere ønsket alfaverdi til ≤0,01, men ikke ≤0,05.
Reduksjon av blodplatetall med alle konsentrasjoner av hypertonisk dekstrose og en økning i MPV i PRP-blodplater ved >12,5 % dekstrosekonsentrasjon: PRP-blodplatetall økte fra én til fem ganger konsentrasjonen sammenlignet med baseline fullblod, varierende etter metode (ikke avbildet). Reduksjon av blodplatetall med alle konsentrasjoner av hypertonisk dekstrose og en økning i MPV i PRP-blodplater ved >12,5 % dekstrosekonsentrasjon: PRP-blodplatetall økte fra én til fem ganger konsentrasjonen sammenlignet med baseline fullblod, varierende etter metode (ikke avbildet). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в RP концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной зависимости от метода (nе показано). Redusert blodplatetall ved alle hypertoniske dekstrosekonsentrasjoner og økt MPV i PRP-blodplater ved >12,5 % dekstrosekonsentrasjon: PRP-blodplatetall økte 1–5 ganger sammenlignet med fullblod ved baseline, avhengig av metode (ikke vist). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血数，PRP 血增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方檂朕而增加 Ved glukosekonsentrasjon på >12,5 % reduserer den høye glukosekonsentrasjonen blodtellingen, PRP-blod-MPV øker: sammenlignet med 与基线全血 øker PRP-blodtellingen fra 1 til 5 ganger konsentrasjonen (ikke beskrevet). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество MP, повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- til 5-кратных концентраций исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (ikke tilgjengelig). Ved glukosekonsentrasjoner >12,5 % reduserte alle hypertensive glukosekonsentrasjoner blodplatetallet og økte MPV i PRP-blodplater: PRP-blodplatetallet økte 1 til 5 ganger sammenlignet med baseline fullblodskonsentrasjoner, avhengig av metoden (som beskrevet).Figur 1 viser at antallet blodplater gikk ned med nesten 75 % etter fortynning i vann og med 20–30 % etter 15 minutters fortynning med forskjellige glukosekonsentrasjoner sammenlignet med baseline PRP og en 1:1-fortynning justert for volum (1–k1 med volumkorreksjon). k -1 avl).1 avl).
Antall celler i hver fortynning uttrykkes som en brøkdel av det opprinnelige antallet før fortynning.
MPV sank minimalt under PRP-produksjon, uten ytterligere endring i fortynningskonsentrasjoner til 12,5 % i vann eller glukose (inkludert 25 % PRP-glukoseblandinger) og økte med mer enn 20 % etter fortynning i 50 % glukoseløsning (fig. 2). I motsetning til dette viste erytrocytter ingen signifikant volumendring ved noen annen fortynning enn H2O.
Gjennomsnittsvolumet av celler i hver fortynning uttrykkes som en prosentandel av det opprinnelige volumet før fortynning.
En lignende, men mindre uttalt reduksjon i blodplatetall og økning i CVR ble observert hos brystkreft eksponert for 50 % glukose (for å formulere med 25 % glukose). Tabell 2 sammenligner celletall og cellevolum i fullblod fortynnet i 50 % dekstrose med fase 1 PRP-data fortynnet i 50 % dekstrose. Endringer i antall røde blodlegemer (RBC) og maksimalt blodtrykk (RBC) i røde blodlegemer (RBC) var ikke åpenbare og var ikke i fokus for vår oppmerksomhet.
SD = standardavvik, MD = gjennomsnittlig forskjell mellom gruppene, SE = standardavvik for gjennomsnittlig forskjell, RBC = erytrocytter, PLT = blodplater, PRP = blodplaterikt plasma, WB = fullblod
Etter tilsetning av D50W til WB var det prosentvise fortynningsjusterte blodplatetapet 7,7 % (310 ± 73 vs. 286 ± 96) sammenlignet med 17,8 % for PRP-fortynning i D50W (664 ± 348 vs. 544 ± 277). MPV WB økte med 16,8 % (fra 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6), mens MPV PRP økte med 26 % (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Selv om de gjennomsnittlige forskjellene i både reduksjon av blodplatetall og økning i MPV var signifikant større med PRP, var endringene i reduksjon av blodplatetall innenfor WB nesten signifikante (310 ± 73 til 286 ± 96 (-7,7 %; p = 0,06), og økningen i MPV var signifikant (10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Selv om de gjennomsnittlige forskjellene i både reduksjon av blodplatetall og økning i MPV var signifikant større med PRP, var endringene i reduksjon av blodplatetall innenfor WB nesten signifikante (310 ± 73 til 286 ± 96 (-7,7 %; p = 0,06), og økningen i MPV var signifikant (10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Selv om de gjennomsnittlige forskjellene i både reduksjon i blodplatetall og økning i CVR var signifikant større med PRP, var endringene i reduksjonen i blodplatetall innenfor WB nesten signifikante (310 ± 73 til 286 ± 96 (-7,7 %; p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Økningen i MPV var signifikant (fra 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = .06）和的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.尽管 PRP.减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的睯暘映瀄睯加1.1. ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Endringen i reduksjonen i blodplatetall innenfor WB var nesten signifikant (fra 310 ± 73 til 286 ± 96 (-7,7 %; p = 0,06), selv om PRP hadde signifikant større gjennomsnittlige forskjeller i reduksjon i blodplatetall og økning i MPV, og økningen i MPV var signifikant.(от 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (fra 10,1 ± 0,5 til 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
En sluttkonsentrasjon på 20 % glukose var nødvendig for å se en signifikant endring i MPV, men endringen i MPV var mer uttalt ved sluttkonsentrasjonen på 25 %. Blodplatetapet stabiliserte seg etter den første nedgangen. Vi observerte en initial kraftig nedgang i CVR, men CVR ble raskt gjenopprettet ved sluttkonsentrasjonen på 25 %, som var betydelig høyere enn CVR-nivåene observert ved sluttglukosekonsentrasjonene på 20 % og 15 % (fig. 3 og til venstre for tabell 3; skyggelagte bokser). indikerer p-verdier ≤ alfa med en Bonferroni-korreksjon på 0,01). Det var også en initial kraftig nedgang i antall PLT, observert i den innledende fasen på 0–15 sekunder, og forble deretter stabil (fra 15 sekunder til 30 minutter; til venstre for tabell 4).
Tilsetning av forskjellige konsentrasjoner av glukose til fullblod resulterte i en initial rask reduksjon i MPV, etterfulgt av en konsentrasjonsavhengig gjenoppretting på mer enn 20 %. Forklaringen viser glukosekonsentrasjonen etter fortynning. D15, D20 og D25 ble utført i en 1:1-fortynning. D21 og D41 ble utført i en 1:5-fortynning.
Tabell 4 viser endringen i blodplatetall ved fortynning i hypertonisk glukose. Vi observerte en doseavhengig sammenheng mellom det umiddelbare fallet i PLT-tall ved 1:1-fortynning og ved 1:5-fortynning. Sammenlignet med 1:1-fortynningene som en enkeltgruppe med 1:5-fortynningene, hadde 1:1-gruppen en umiddelbar reduksjon i blodplatetall mindre enn 1:5-gruppen 66 ± 48 000 (23 %) mot 99 ± 69 000 (37 %). (p = 0,014) i 1:5-gruppen. Etter et innledende fall ved det første målepunktet stabiliserte blodplatetall som en prosentandel av glukose seg (fig. 4).
Når fullblod tilsettes glukose i forholdet 1:1, reduseres blodplatetallet med omtrent 25 %. Når fullblod ble tilsatt i forholdet 1:5, var reduksjonen imidlertid mye større – omtrent 50 %.
41 % glukose økte MPV raskere og mer dramatisk enn 25 % eller 21 %. MPV-resultatene er vist i figur 3. Ved alle andre fortynninger ble det ikke observert noen umiddelbar initial reduksjon i MPV etter tilsetning av 50 % glukose. Ved bruk av 25 % glukose (glukosekonsentrasjon 20,8 % ved den endelige fortynningen) var endringen i MPV sammenlignbar med endringen i 20 % glukose ved en 1:1-fortynning (fig. 3). Selv om endringene i MPV i utgangspunktet var større ved den blandede konsentrasjonen på 41 % enn ved 25 %, var forskjellen i MPV mellom 41 % og 25 % etter 16 minutter ikke lenger signifikant (tabell 3, høyre). Det er også interessant at 25 % glukose økte MPV mer effektivt enn 20,8 %.
Denne in vitro-studien bekreftet delvis hypotesen vår. Den viste potensiell delvis blodplatelyse ved blanding av dekstrose, en rask tilpasning av blodplater til ekstrem hypertonicitet og en signifikant økning i MPV som respons på > 25 % konsentrasjoner av hypertonisk dekstrose. Den viste potensiell delvis blodplatelyse ved blanding av dekstrose, en rask tilpasning av blodplater til ekstrem hypertonicitet og en signifikant økning i MPV som respons på > 25 % konsentrasjoner av hypertonisk dekstrose. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациц тромби экстремального гипертонуса og значительное повышение MPV в ответ på гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Den viste potensiell delvis blodplatelyse med dekstrose, rask blodplateakkommodasjon til ekstrem hypertonicitet og en signifikant økning i MPV som respons på hypertone dekstrosenivåer >25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适庯 枫速适庸响应> 25 % 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацитов тромбоцитов экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ på концентрацию гипертонической глюкозы. Den viser potensiell delvis blodplatelyse av glukoseblandinger, rask blodplatetilpasning til ekstrem hypertonicitet og en betydelig økning i MPV som respons på hypertonisk glukose >25 %.Den initiale økningen var maksimal ved 41,6 % glukoseeksponering, men økningen i MPV nærmet seg 25 % glukoseeksponering omtrent 20 minutter etter eksponering.
Blodplatekonsentrasjonen påvirkes av glukose. Vi la merke til at mengden PLT minket ved alle fortynninger av glukose. Et kraftig fall i antall blodplater i H2O (0 %)-fortynninger av PRP-serien kan være assosiert med osmotisk lyse. Alternativt kan dette være en artefakt forårsaket av blodplateklumping, men dette står i kontrast til mangelen på MPV-endring ved denne fortynningen. Dette funnet betyr at noen blodplater er svært følsomme for hypoosmolaritet.
I alle 1:1-fortynninger av glukose, minket mengden PLT med 20–30 %, selv med D5W (hypotonisk ved 252 mOsm), noe som kan indikere en spesifikk ikke-osmotisk effekt av glukose, siden både PLT og MPV forble uendret ved en tredobling i glukosekonsentrasjon fra D5W til D25W. Faktisk hadde PLT-konsentrasjonene en tendens til å øke litt med økende osmolaritet.
Reduksjonen i PLT mellom fortynninger på 1:1 og 1:5 betyr at oppløsningseffekten avhenger av den initiale og endelige glukosekonsentrasjonen. Hvis den bare avhengte av den initiale konsentrasjonen, ville man forvente å se en forskjell i PLT-reduksjon mellom 1:1-konsentrasjoner. Men det gjør vi ikke. Hvis lyseeffekten bare avhenger av den endelige glukosekonsentrasjonen, forventer vi ikke mye forskjell mellom en 20 % 1:1-fortynning og en 20,8 % 1:5-fortynning. Og likevel klarte vi det.
Hvis det oppstår blodplatetap på grunn av blodplatelyse, dannes et partiell lysat, hvoretter cytokiner og vekstfaktorer frigjøres til det ekstracellulære miljøet. Flere studier har vist at blodplatelysat er nesten like effektivt som PRP som en proliferasjonsløsning [11]. PRP i seg selv har vist seg å være en effektiv løsning for behandling av proliferasjon [12-14].
Inaktive blodplater sirkulerer i form av en skive forsterket med flere indre strukturer. Under aktivering antar de en mer sfærisk eller amøbeform, noe som resulterer i en økning i volum. Volumøkningen krever en økning i overflateareal, som er et resultat av ekstrudering av det åpne tubulære systemet (OCS) og tilsetning av eksocytiske granuler til membranen. Det gjenstår å avgjøre om økningen i MPV indusert av hypertonisk glukose involverer en eller begge disse mekanismene, men hvis det er sistnevnte, vil en økning i MPV indikere degranulering.
Denne studien viste at eksponering for høye konsentrasjoner av glukose på PRP eller fullblodsplater resulterte i en økning i MPV innen 15 minutter med en glukosekonsentrasjon på henholdsvis 25 % og 41,6 %.
Økningen i blodplate-MPV kan skyldes utvidelse av de omkringliggende mikrotubuli-flokene som respons på kalsiumtilstrømning. Liu et al. Glukose har vist seg å mediere kalsiumtilstrømning gjennom blodplate-TRPC6-kanalen [6]. Vår hypotese er at glukose induserer avslapning av mikrotubuli-floker, noe som fører til en økning i MPV og blodplatesensibilisering og/eller -aktivering. Ut fra resultatene våre er dette imidlertid bare en del av historien. I våre tester resulterte ingen konsentrasjon under D25W i en økning i MPV. Gitt at vi ikke har testet eksponering for glukosekonsentrasjoner mellom 12,5 % og 25 %, tyder våre fase 1-resultater på at det kan være en terskel i dette området av glukosekonsentrasjoner som fører til en økning i MPV. Videre testing i trinn 3 og 4 viste at 20–25 % glukose ser ut til å være terskelen for dette, men det er fortsatt uklart hvorfor.
Vi observerte også en reduksjon i MPV på ~9 % etter sentrifugering. Det er ikke klart om denne reduksjonen i MPV skyldes større og tettere blodplater fanget i RBC-laget i sentrifugen. Denne observasjonen kan være viktig for klinikere, da den kan antyde at PRP-blodplater er en mindre og mindre tett delmengde av WB-blodplater.
I en tidligere studie viste vi at PRP-preparering ved manuelle metoder er rimelig [8]. Hvis glukose sensibiliserer vevsplater eller PRP, noe som gjør dem mer utsatt for aktivering, eller hvis PRP produseres med delvise lysategenskaper, kan dette forbedre regenerering og redusere behovet for behandling. Derfor kan kombinasjonen av PRP og høykonsentrert glukose være mer kostnadseffektiv enn PRP eller glukose alene.
Studien vår har flere mangler. For det første bruker vi PRP innhentet fra flere forskjellige metoder. Dette kan føre til motstridende resultater. For det andre kunne vi ikke utføre en biokjemisk analyse av noen av prøvene våre for å mer nøyaktig avgjøre om blodplateaktivering hadde skjedd. Vi ønsker å måle P-selektin, blodplatefaktor 4, monocytiske blodplateaggregater eller andre markører for blodplateaktivering for å bedre forstå graden eller tilstedeværelsen av alfa-granula-degranulering, men dette er utenfor rammen av denne studien. For det tredje kunne vi ikke bekrefte ved elektronmikroskopi eller andre metoder at økningen i MPV i glukoseeksponerte blodplater skyldtes effekten på mikrotubuli-floker.
Blandinger av WB eller PRP med 25 % glukose økte MPV, noe som signaliserte starten på blodplateaktivering, selv om denne studien ikke viste progresjon av aggregering eller degranulering. Den hypertone glukoseblandingen resulterte i blodplatetap, noe som muligens representerer en lytisk effekt. Delvis aktivering eller lysis av blodplater kan forårsake vevsregenerering etter blodplateinjeksjon. Det er ikke klart hvilke kliniske konsekvenser disse endringene kan føre til. Ytterligere studier har vist mer nøyaktige målinger av aktivering eller lysis og har evaluert de ulike kliniske effektene av hypertone glukoseblandinger med WB eller PRP.
Glukoseproliferativ terapi er en enkel og rimelig regenerativ terapi som er i rask vekst og støtter klinisk forskning. Denne studien antyder en fysiologisk mekanisme som, hvis bekreftet, kan hjelpe oss å forstå deler av den regenerative mekanismen bak proliferativ terapi.
Biomedisinsk og helseinformatikk ved University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, USA
Mennesker: Alle deltakerne i denne studien ga eller ga ikke samtykke. International Society for Cellular Medicine har utstedt ICMS-2017-003-godkjenning. Følgende protokoll er godkjent for videre bruk av Institutional Review Board of the International Society for Cellular Medicine: Tittel: Beregning av blodplaterikt plasma-legemiddelutbytte basert på baseline CBC-trombocyttall. Dyreforsøk: Alle forfattere bekreftet at ingen dyr eller vev var involvert i denne studien. Interessekonflikter: I samsvar med ICMJE Uniform Disclosure Form erklærer alle forfattere følgende: Betalings-/tjenesteinformasjon: Alle forfattere erklærer at de ikke har mottatt økonomisk støtte fra noen organisasjon for det innsendte arbeidet. Økonomiske forhold: Alle forfattere erklærer at de ikke for øyeblikket eller i løpet av de siste tre årene har økonomiske forhold til noen organisasjon som kan være interessert i det innsendte arbeidet. Andre forhold: Alle forfattere erklærer at det ikke er noen andre forhold eller aktiviteter som kan påvirke det innsendte arbeidet.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17. mai 2022) Effekten av glukose på blodplatetall og volum: implikasjoner for regenerativ medisin. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Dette er en artikkel med åpen tilgang distribuert under vilkårene i Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium er tillatt, forutsatt at den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres.