“Jangan pernah meragukan bahwa sekelompok kecil warga negara yang peduli dan berdedikasi dapat mengubah dunia. Faktanya, hanya mereka yang ada di sana.”
Misi Cureus adalah mengubah model penerbitan medis yang sudah ada sejak lama, di mana penyerahan penelitian bisa mahal, rumit, dan memakan waktu.
Plasma kaya trombosit/prp, regenerasi jaringan, aktivasi trombosit, terapi proliferatif glukosa, trombosit, terapi proliferatif
Kutip artikel ini sebagai: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, dkk. (17 Mei 2022) Pengaruh glukosa terhadap jumlah dan volume trombosit: implikasi untuk pengobatan regeneratif. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Plasma kaya trombosit (PRP) dan larutan glukosa hipertonik umumnya digunakan untuk injeksi dalam pengobatan regeneratif, terkadang bersamaan. Efek glukosa hipertonik pada lisis dan aktivasi trombosit belum pernah dilaporkan sebelumnya. Kami menguji efek peningkatan konsentrasi glukosa pada jumlah trombosit dan eritrosit, serta volume sel dalam PRP dan darah utuh (WB). Penurunan jumlah trombosit parsial yang cepat terjadi pada semua campuran glukosa yang dicampur dengan PRP atau darah utuh, yang konsisten dengan lisis parsial. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan akomodasi cepat trombosit sisa terhadap hipertonisitas ekstrem (>2000 mOsm). Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan akomodasi cepat trombosit sisa terhadap hipertonisitas ekstrem (>2000 mOsm). Jika Anda ingin mendapatkan bantuan yang diperlukan, Anda tidak perlu khawatir tentang hal ini. аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 juta) гипертонуса. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan akomodasi cepat trombosit sisa terhadap hipertonisitas ekstrem (>2000 mOsm).第一分钟后）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Jika Anda ingin mendapatkan bantuan yang diperlukan, Anda tidak perlu khawatir tentang hal ini. penyesuaian tarif экстремальному (>2000 juta) гиперосмолярному состоянию. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan adaptasi cepat trombosit sisa terhadap keadaan hiperosmolar ekstrem (>2000 mOsm).Konsentrasi glukosa 25% ke atas mengakibatkan peningkatan signifikan dalam volume trombosit rata-rata (MPV), yang menunjukkan tahap awal aktivasi trombosit. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menentukan apakah terjadi lisis atau aktivasi trombosit dan apakah injeksi glukosa hipertonik saja atau dalam kombinasi dengan PRP dapat memberikan manfaat klinis tambahan.
Pada tahun 1950-an, ahli bedah Amerika George Hackett menemukan bahwa ia dapat meredakan nyeri sendi dan punggung secara permanen pada banyak pasien dengan menyuntikkan larutan proliferatif ke dalam tendon dan ligamen. Eksperimennya pada kelinci menunjukkan bahwa perawatan tersebut, yang ia sebut terapi proliferatif, menyebabkan tendon membesar dan menguat. Studi histologis telah mengonfirmasi bahwa kolagen baru diproduksi selama proses ini [1].
Selama beberapa dekade pertama, banyak solusi distribusi yang berbeda telah dicoba. Pada tahun 1990-an, sebagian besar praktisi menganggap konsentrasi glukosa yang tinggi sebagai metode yang paling aman dan paling efektif. Akan tetapi, mekanisme kerjanya masih belum jelas.
Hanya sedikit penelitian klinis yang dilakukan pada abad ke-20 setelah karya Hackett. Namun, pada tahun 2000-an, minat terhadap terapi proliferatif kembali muncul dan beberapa uji klinis terapi proliferatif yang berhasil diselesaikan untuk pengobatan nyeri punggung bawah [2], osteoartritis lutut [3], dan epikondilitis lateral [4].
Regenerasi jaringan memerlukan partisipasi sel punca. Oleh karena itu, konsentrasi glukosa yang tinggi harus mendorong migrasi, replikasi, dan diferensiasi sel punca. Kami berhipotesis bahwa trombosit dapat bertindak sebagai pembawa pesan dan bahwa konsentrasi glukosa yang tinggi dapat menyebabkan trombosit melepaskan sitokin dan faktor pertumbuhan, sehingga mendorong proses regeneratif, terutama migrasi sel punca ke area dengan konsentrasi glukosa tinggi.
Aktivasi trombosit selalu mendahului peningkatan kalsium intraseluler [5]. Liu et al. pada tahun 2008 menunjukkan bahwa kadar glukosa yang tinggi meningkatkan aktivitas saluran transient receptor potential canonical type 6 (TRPC6) di membran plasma, yang menyebabkan masuknya ion kalsium ke dalam trombosit [6]. Studi lain menunjukkan bahwa paparan ion kalsium pada zona marginal mikrotubulus menyebabkan relaksasi, ekspansi, dan deformasi zona marginal, yang pada gilirannya menyebabkan perubahan bentuk dari cakram menjadi bulat, sehingga menghasilkan volume trombosit rata-rata (MPV) [7].
Hipotesis kami dalam penelitian ini adalah bahwa paparan trombosit terhadap konsentrasi glukosa yang tinggi memengaruhi zona marginal mikrotubulus dan lingkungan intraseluler, yang menyebabkan peningkatan MPV.
Semua peserta menandatangani formulir persetujuan setelah rincian penelitian dijelaskan dan sebelum menerima sampel. Dalam penelitian ini, hanya sampel PRP dengan hematokrit lebih besar dari 2% yang digunakan sehingga jumlah eritrosit (eritrosit) dan volume korpuskular rata-rata sel darah merah (MCV) dapat disertakan untuk perbandingan.
Penelitian ini dilakukan dalam empat fase, fase pertama adalah PRP dan fase sisanya adalah darah lengkap (Tabel 1). Seperti yang dijelaskan sebelumnya [8], semua gaya sentrifugal relatif (RCF, g-force) dihitung dari titik tengah (Rmid, dalam cm) kolom darah dalam spuit sentrifugal. Kami memilih untuk menggunakan MPV sebagai penanda sensitisasi trombosit dan jumlah trombosit sebagai indikator potensi lisis trombosit, yang keduanya dapat dengan mudah diukur pada alat analisis hematologi standar.
Pada tahap pertama, 47 relawan menyumbangkan sampel darah—satu tabung asam etilendiamintetraasetat (EDTA) dan satu sampel darah lengkap PRP (diberi antikoagulan dengan natrium sitrat (NaCl, 3%)) (Tabel 1). Segera letakkan pengayun di dalam tabung. Hitung darah lengkap (CBC) dilakukan pada sampel EDTA sebanyak tiga kali, dan sampel NaCl dianalisis sebanyak tiga kali untuk analisis CBC, lalu PRP disiapkan dengan berbagai metode yang dijelaskan di atas [8]. Semua sampel PRP disiapkan dengan sentrifugasi pada kecepatan 900–1000 g. Campur setiap sampel PRP pada mixer vortex selama 5–10 detik, lalu bagi lima alikuot 0,5 ml ke dalam tabung.
Untuk mengevaluasi efek paparan trombosit terhadap peningkatan konsentrasi glukosa, jumlah yang sama (0,5 ml) glukosa 0%, 5%, 12,5%, 25%, dan 50% dalam air dicampur dengan sampel trombosit untuk mendapatkan konsentrasi campuran glukosa 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5%, dan 25% dan mengocok tabung reaksi pada pengocok tabung reaksi selama 15 menit. TAC setiap campuran dianalisis dalam rangkap tiga setelah 15 menit. Jumlah trombosit (PLT), jumlah sel darah merah, MCV, dan MPV dirata-ratakan untuk setiap tabung, dan jumlah trombosit rata-rata, jumlah sel darah merah, MCV, dan MPV dihitung untuk semua sampel PRP.
Setelah tahap pertama pengumpulan data selesai, kami melihat peningkatan signifikan dalam volume trombosit pada trombosit PRP setelah penambahan D50W. Trombosit PRP tidak selalu mewakili semua trombosit dalam darah, dan medium PRP berbeda dari medium WB. Oleh karena itu, kami memutuskan untuk melakukan uji coba tahap kedua tentang efek penambahan D50W ke darah utuh.
Untuk putaran kedua, kami memilih ukuran sampel 30 berdasarkan hasil dari seri pertama, seperti yang dijelaskan di bagian Analisis. Dalam seri ini, 20 relawan menyumbangkan sampel darah (Tabel 1). Darah utuh (1,8 ml) ditarik ke dalam spuit 3 ml dan diantikoagulasi dengan 0,2 ml NaCl 40%. Spuit darah utuh dicampur selama lima detik dengan mixer vortex dan CBC dianalisis dalam rangkap tiga. Setelah analisis, darah antikoagulasi ditambahkan ke 2 ml glukosa 50% dalam spuit 5 ml (konsentrasi glukosa akhir sekitar 25% (D25) dan ditempatkan dalam tabung goyang selama 30 menit. Setelah 30 menit, D25/CBC dalam spuit WB dianalisis dalam rangkap tiga. Jumlah trombosit, jumlah RBC, MCV, dan MPV per spuit dirata-ratakan, dan rata-rata PLT, jumlah RBC, MCV, dan MPV dihitung untuk setiap sampel sebelum dan setelah menambahkan glukosa.
Karena trombosit dalam darah lengkap umumnya terpapar glukosa hipertonik selama terapi glukosa proliferatif karena injeksi minimal invasif, dan tidak umum untuk menggabungkan PRP dengan glukosa hipertonik tepat sebelum injeksi, kami memutuskan untuk mempelajari glukosa hipertonik dalam kombinasi dengan WB di Bagian 1. Langkah Tiga dan empat. Pada setiap tahap, 20 relawan menyumbangkan 7-8 ml ACD-A (asam yang mengandung trisodium sitrat (22,0 g/l), asam sitrat (8,0 g/l) dan glukosa (24,5 g/l), larutan dekstrosa sitrat) untuk antikoagulan darah (Tabel 1). Hanya campuran glukosa yang lebih besar dari 12,5% yang digunakan untuk menentukan persentase ambang batas yang terkait dengan peningkatan MPV. Pada tahap ketiga, 1 ml darah ditempatkan dalam tabung reaksi. Kemudian campurkan darah pada mixer vortex selama 10 detik dengan menambahkan 1 ml glukosa 30%, glukosa 40%, atau glukosa 50% ke dalam tabung untuk memperoleh konsentrasi glukosa akhir masing-masing sebesar 15%, 20%, dan 25%. Sampel darah glukosa dianalisis untuk CBC segera setelah pencampuran dan diulang setiap dua menit selama 30 menit.
Selama pencampuran awal, penambahan glukosa hipertonik 1:1 dan WB atau PRP memaparkan trombosit pada konsentrasi di atas 25% selama beberapa detik. Pada langkah keempat, untuk mengevaluasi efek glukosa hipertonik dengan konsentrasi puncak awal minimal dan menguji batas atas efek glukosa, kami hanya menambahkan sedikit darah ke D25W atau D50W. Masukkan 1 ml D25W atau D50W ke dalam tabung dan tambahkan 0,2 ml WB sambil mengocok sampel selama 10 detik. Dalam kasus ini, darah terpapar glukosa pada konsentrasi sekitar 20% di atas konsentrasi akhir, bukan 50% di atas konsentrasi akhir seperti pada Fase 3, sehingga menghasilkan konsentrasi glukosa akhir sebesar 20,8% dan 41,6%. Sampel campuran dianalisis pada interval waktu yang sama seperti pada langkah 3.
Pada langkah pertama dari setiap seri pengenceran glukosa, 30 sampel diambil karena ini adalah ukuran sampel yang tepat untuk studi percontohan [9]. Pada akhir setiap fase (termasuk fase pertama), evaluasi kecukupan ukuran sampel menggunakan rumus yang digunakan untuk menentukan ukuran sampel yang diperlukan untuk memperkirakan rata-rata variabel hasil berkelanjutan dalam satu populasi. Rumus n = Z2 x SD2 / E2. Dalam persamaan ini, Z adalah skor-Z, SD adalah simpangan baku, dan E adalah kesalahan yang diinginkan [10]. Alfa kami adalah 0,05, yang sesuai dengan nilai Z 1,96, dan kami mengharapkan kesalahan 5 (dalam persen). Oleh karena itu, kami memecahkan untuk n = (1,962 x SD2) / 52. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ukuran sampel yang diperlukan untuk setiap tahap lebih kecil dari jumlah aktual yang dikumpulkan.
Selama periode 1, 3, dan 4 dengan menggunakan lebih dari satu konsentrasi glukosa, efek dari berbagai konsentrasi glukosa dianalisis dengan membandingkan perubahan fraksional antara waktu 0 dan setiap waktu berikutnya (fase 1 pada 15 menit, periode 3 pada 15 menit). dan empat pada 15 detik, kemudian setiap dua menit.) Laju perubahan untuk setiap periode waktu dibandingkan menggunakan uji U Mann-Whitney karena data tidak mengikuti distribusi normal sebagaimana ditentukan oleh uji normalitas Shapiro-Wilk. Karena analisis 1 banding 1 dari beberapa kelompok (lima) dilakukan pada langkah pertama, ketiga, dan keempat (total lima), koreksi Bonferroni dilakukan untuk menyesuaikan nilai alfa yang diinginkan menjadi ≤0,01 tetapi tidak ≤0,05.
Pengurangan jumlah trombosit dengan semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV dalam trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: Jumlah trombosit PRP meningkat satu hingga lima kali lipat konsentrasi dibandingkan dengan darah utuh awal, bervariasi menurut metode (tidak digambarkan). Pengurangan jumlah trombosit dengan semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV pada trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: Jumlah trombosit PRP meningkat satu hingga lima kali konsentrasi dibandingkan dengan darah utuh awal, bervariasi menurut metode (tidak digambarkan). Layanan Pelanggan dan Layanan Pelanggan dan Layanan Anda MPV dan PRP при tingkat kuantitas > 12,5%: jumlah PRP yang digunakan dalam 1-5 hari исходной цельной кровью, в зависимости от метода (bukan показано). Jumlah trombosit menurun pada semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV pada trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: Jumlah trombosit PRP meningkat 1-5 kali lipat dibandingkan dengan darah lengkap awal, bergantung pada metode (tidak diperlihatkan). ).在> 12.5% ​​的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Pada konsentrasi glukosa >12,5%, konsentrasi glukosa yang tinggi mengurangi jumlah darah, MPV darah PRP meningkat: dibandingkan dengan 与基线全血, jumlah darah PRP meningkat dari 1 hingga 5 kali lipat dari konsentrasi (tidak dijelaskan). Untuk kadar gula >12,5% karena kadar gula yang tinggi тромбоцитов, sebuah MPV yang unggul dalam тромбоцитах PRP: jumlah тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- hingga 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (tidak ada masalah ). Pada konsentrasi glukosa >12,5%, semua konsentrasi glukosa hipertensi menurunkan jumlah trombosit dan meningkatkan MPV dalam trombosit PRP: Jumlah trombosit PRP meningkat 1 hingga 5 kali lipat dibandingkan dengan konsentrasi darah lengkap dasar, tergantung pada metodenya (seperti yang dijelaskan).Gambar 1 menunjukkan jumlah trombosit menurun hampir 75% setelah pengenceran dalam air dan 20-30% setelah 15 menit pengenceran dengan berbagai konsentrasi glukosa dibandingkan dengan PRP dasar dan pengenceran 1:1 yang disesuaikan dengan volume (1- k1 dengan koreksi volume). k -1 pembiakan).1 pembiakan).
Jumlah sel dalam setiap pengenceran dinyatakan sebagai pecahan dari jumlah awal sebelum pengenceran.
MPV menurun minimal selama produksi PRP, tanpa perubahan lebih lanjut dalam konsentrasi pengenceran menjadi 12,5% dalam air atau glukosa (termasuk campuran glukosa PRP 25%) dan meningkat lebih dari 20% setelah pengenceran dalam larutan glukosa 50% (Gbr. .2). Sebaliknya, eritrosit tidak menunjukkan perubahan volume yang signifikan pada pengenceran apa pun selain H2O.
Volume rata-rata sel dalam setiap pengenceran dinyatakan sebagai persentase volume awal sebelum pengenceran.
Penurunan jumlah trombosit yang serupa tetapi kurang jelas dan peningkatan CVR diamati pada BC yang terpapar glukosa 50% (untuk diformulasikan dengan glukosa 25%). Tabel 2 membandingkan jumlah sel dan volume sel dalam darah utuh yang diencerkan dalam dekstrosa 50% dengan data PRP fase 1 yang diencerkan dalam dekstrosa 50%. Perubahan jumlah sel darah merah dan MCV sel darah merah tidak jelas dan bukan fokus perhatian kami.
SD = simpangan baku, MD = selisih rata-rata antar kelompok, SE = simpangan baku selisih rata-rata, RBC = eritrosit, PLT = trombosit, PRP = plasma kaya trombosit, WB = darah lengkap
Setelah menambahkan D50W ke WB, persentase kehilangan trombosit yang disesuaikan dengan pengenceran adalah 7,7% (310±73 vs. 286±96) dibandingkan dengan 17,8% untuk pengenceran PRP dalam D50W (664±348 vs. 544±277). MPV WB meningkat sebesar 16,8% (dari 10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6), sedangkan MPV PRP meningkat sebesar 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Meskipun perbedaan rata-rata dalam pengurangan jumlah trombosit dan peningkatan MPV lebih signifikan dengan PRP, perubahan dalam pengurangan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 menjadi 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) dan peningkatan MPV signifikan (10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Meskipun perbedaan rata-rata dalam pengurangan jumlah trombosit dan peningkatan MPV lebih signifikan dengan PRP, perubahan dalam pengurangan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 menjadi 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) dan peningkatan MPV signifikan (10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Meskipun perbedaan rata-rata dalam pengurangan jumlah trombosit dan peningkatan CVR secara signifikan lebih besar dengan PRP, perubahan dalam penurunan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 hingga 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Peningkatan MPV signifikan (dari 10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大,但WB MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 dan 11,8 ± 0,6 (+16,8) hal < .001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 , 但但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。Perubahan dalam pengurangan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (dari 310 ± 73 menjadi 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), walaupun PRP memiliki perbedaan rata-rata yang signifikan lebih besar dalam penurunan jumlah trombosit dan peningkatan MPV, dan peningkatan MPV pun signifikan.(от 10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (dari 10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Konsentrasi akhir glukosa 20% diperlukan untuk melihat perubahan signifikan dalam MPV, tetapi perubahan MPV lebih jelas pada konsentrasi akhir 25%. Kehilangan trombosit stabil setelah penurunan awal. Kami mencatat penurunan tajam awal dalam CVR, namun, CVR dipulihkan dengan cepat pada konsentrasi glukosa akhir 25%, yang secara signifikan lebih tinggi daripada kadar CVR yang diamati pada konsentrasi glukosa akhir 20% dan 15% (Gbr. 3 dan di sebelah kiri Tabel 3; kotak yang diarsir). menunjukkan nilai-p ≤ alfa dengan koreksi Bonferroni 0,01). Ada juga penurunan tajam awal dalam jumlah PLT, yang diamati pada fase awal 0-15 detik, dan kemudian tetap stabil (dari 15 detik hingga 30 menit; kiri tabel 4).
Penambahan berbagai konsentrasi glukosa ke dalam darah utuh menghasilkan penurunan cepat awal dalam MPV yang diikuti oleh pemulihan yang bergantung pada konsentrasi lebih dari 20%. Keterangan menunjukkan konsentrasi glukosa setelah pengenceran. D15, D20, dan D25 dilakukan dalam pengenceran 1:1. D21 dan D41 dilakukan pada pengenceran 1:5.
Tabel 4 menunjukkan perubahan jumlah trombosit saat diencerkan dalam glukosa hipertonik. Kami mengamati hubungan yang bergantung pada dosis antara penurunan langsung jumlah PLT pada pengenceran 1:1 dan pada pengenceran 1:5. Membandingkan pengenceran 1:1 sebagai satu kelompok dengan pengenceran 1:5, kelompok 1:1 mengalami penurunan langsung jumlah trombosit kurang dari kelompok 1:5 66±48.000 (23%) versus 99±69.000 (37%). , p = 0,014) pada kelompok 1:5. Setelah penurunan awal pada titik pengukuran pertama, jumlah trombosit sebagai persentase glukosa menjadi stabil (Gbr. 4).
Bila darah utuh ditambahkan ke glukosa dalam rasio 1:1, jumlah trombosit berkurang sekitar 25%. Namun, bila darah utuh ditambahkan pada rasio 1:5, pengurangannya jauh lebih besar – sekitar 50%.
Glukosa 41% meningkatkan MPV lebih cepat dan lebih dramatis daripada 25% atau 21%. Hasil MPV ditunjukkan pada Gambar 3. Pada semua pengenceran lainnya, tidak ada penurunan awal langsung dalam MPV yang diamati setelah penambahan glukosa 50%. Saat menggunakan glukosa 25% (konsentrasi glukosa 20,8% pada pengenceran akhir), perubahan MPV sebanding dengan perubahan glukosa 20% pada pengenceran 1:1 (Gbr. 3). Meskipun perubahan MPV awalnya lebih besar pada konsentrasi campuran 41% daripada pada 25%, perbedaan MPV antara 41% dan 25% setelah 16 menit tidak lagi signifikan (Tabel 3, kanan). Yang juga menarik adalah glukosa 25% meningkatkan MPV lebih efektif daripada 20,8%.
Studi in vitro ini sebagian mengonfirmasi hipotesis kami. Hal ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial melalui pencampuran dekstrosa, akomodasi trombosit yang cepat terhadap hipertonisitas ekstrem, dan peningkatan signifikan dalam MPV sebagai respons terhadap konsentrasi dekstrosa hipertonik > 25%. Hal ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial melalui pencampuran dekstrosa, akomodasi trombosit yang cepat terhadap hipertonisitas ekstrem, dan peningkatan signifikan dalam MPV sebagai respons terhadap konsentrasi dekstrosa hipertonik > 25%. Tentang Layanan Pelanggan yang Dapat Diatur, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального peningkatan dan peningkatan volume MPV dalam jumlah tarif > 25%. Hal ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial dengan dekstrosa, akomodasi trombosit cepat terhadap hipertonisitas ekstrem, dan peningkatan signifikan dalam MPV sebagai respons terhadap kadar dekstrosa hipertonik >25%.以及响应> 25% dari segi MPV 显着上升。以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Tentang cara-cara yang dapat digunakan untuk menangani masalah ini, Anda perlu адаптацию тромбоцитов к экстремальному harga MPV dan harga MPV lebih tinggi dari kapasitas > 25%. Ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial oleh campuran glukosa, adaptasi trombosit cepat terhadap hipertonisitas ekstrem, dan peningkatan signifikan dalam MPV sebagai respons terhadap glukosa hipertonik >25%.Peningkatan awal maksimal pada paparan glukosa 41,6%, tetapi peningkatan MPV mendekati paparan glukosa 25% sekitar 20 menit setelah paparan.
Konsentrasi trombosit dipengaruhi oleh glukosa. Kami melihat bahwa jumlah PLT menurun pada semua pengenceran glukosa. Penurunan tajam jumlah trombosit dalam pengenceran H2O (0%) dari seri PRP dapat dikaitkan dengan lisis osmotik. Atau, ini bisa jadi merupakan artefak yang disebabkan oleh penggumpalan trombosit, tetapi ini berbeda dengan tidak adanya perubahan MPV pada pengenceran ini. Temuan ini berarti bahwa beberapa trombosit sangat sensitif terhadap hipoosmolaritas.
Dalam semua pengenceran glukosa 1:1, jumlah PLT menurun hingga 20-30%, bahkan pada D5W (hipotonik pada 252 mOsm), yang mungkin menunjukkan efek non-osmotik glukosa yang spesifik, karena baik PLT maupun MPV tetap tidak berubah pada peningkatan konsentrasi glukosa tiga kali lipat dari D5W ke D25W. Faktanya, konsentrasi PLT cenderung sedikit meningkat seiring dengan peningkatan osmolaritas.
Penurunan PLT antara pengenceran 1:1 dan 1:5 berarti bahwa efek pelarutan bergantung pada konsentrasi glukosa awal dan akhir. Jika hanya bergantung pada konsentrasi awal, maka kita akan mengharapkan adanya perbedaan dalam pengurangan PLT antara konsentrasi 1:1. Namun, tidak demikian. Jika efek lisis hanya bergantung pada konsentrasi glukosa akhir, maka kita tidak mengharapkan banyak perbedaan antara pengenceran 20% 1:1 dan pengenceran 20,8% 1:5. Namun, kita berhasil melakukannya.
Jika kehilangan trombosit terjadi karena lisis trombosit, lisat parsial terbentuk, setelah itu sitokin dan faktor pertumbuhan dilepaskan ke lingkungan ekstraseluler. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa lisat trombosit hampir sama efektifnya dengan PRP sebagai larutan proliferasi [11]. PRP sendiri telah terbukti menjadi larutan yang efektif untuk pengobatan proliferasi [12-14].
Trombosit yang tidak aktif beredar dalam bentuk cakram yang diperkuat dengan beberapa struktur internal. Selama aktivasi, trombosit mengambil bentuk yang lebih bulat atau amuba, yang mengakibatkan peningkatan volume. Peningkatan volume memerlukan peningkatan luas permukaan, yang merupakan hasil dari ekstrusi sistem tubulus terbuka (OCS) dan penambahan granula eksosit pada membran. Masih harus ditentukan apakah peningkatan MPV yang disebabkan oleh glukosa hipertonik melibatkan satu atau kedua mekanisme ini, tetapi jika yang terakhir, maka peningkatan MPV akan menunjukkan degranulasi.
Penelitian ini menunjukkan bahwa paparan konsentrasi tinggi glukosa pada PRP atau trombosit darah utuh mengakibatkan peningkatan MPV dalam waktu 15 menit dengan konsentrasi glukosa masing-masing sebesar 25% dan 41,6%.
Peningkatan MPV trombosit mungkin karena dilatasi kusut mikrotubulus di sekitarnya sebagai respons terhadap masuknya kalsium. Liu dkk. Glukosa telah terbukti memediasi masuknya kalsium melalui saluran TRPC6 trombosit [6]. Hipotesis kami adalah bahwa glukosa menginduksi relaksasi kusut mikrotubulus, yang mengarah pada peningkatan MPV dan sensitisasi dan/atau aktivasi trombosit. Namun, dilihat dari hasil kami, ini hanya sebagian dari cerita. Dalam pengujian kami, tidak ada konsentrasi di bawah D25W yang mengakibatkan peningkatan MPV. Mengingat bahwa kami belum menguji paparan konsentrasi glukosa antara 12,5% dan 25%, hasil fase 1 kami menunjukkan bahwa mungkin ada ambang batas dalam kisaran konsentrasi glukosa ini yang mengarah pada peningkatan MPV. Pengujian lebih lanjut pada tahap 3 dan 4 menunjukkan bahwa glukosa 20-25% tampaknya menjadi ambang batas untuk ini, tetapi masih belum jelas mengapa.
Kami juga mengamati penurunan MPV sekitar 9% setelah sentrifugasi. Tidak jelas apakah penurunan MPV ini disebabkan oleh trombosit yang lebih besar dan lebih padat yang terperangkap dalam lapisan sel darah merah pada sentrifus. Pengamatan ini mungkin penting bagi dokter karena dapat menyiratkan bahwa trombosit PRP merupakan subkelompok trombosit WB yang lebih kecil dan kurang padat.
Dalam penelitian sebelumnya, kami menunjukkan bahwa persiapan PRP dengan metode manual tidak mahal [8]. Jika glukosa membuat trombosit jaringan atau PRP lebih sensitif terhadap aktivasi, atau jika PRP diproduksi dengan sifat lisat parsial, hal ini dapat meningkatkan regenerasi dan mengurangi kebutuhan terapi. Oleh karena itu, kombinasi PRP dan glukosa berkonsentrasi tinggi mungkin lebih hemat biaya daripada PRP atau glukosa saja.
Studi kami memiliki beberapa kekurangan. Pertama, kami menggunakan PRP yang diperoleh dari beberapa metode yang berbeda. Hal ini dapat menyebabkan hasil yang saling bertentangan. Kedua, kami tidak dapat melakukan analisis biokimia dari sampel kami untuk menentukan secara lebih akurat apakah aktivasi trombosit telah terjadi. Kami ingin mengukur P-selectin, faktor trombosit 4, agregat trombosit monosit, atau penanda aktivasi trombosit lainnya untuk lebih memahami tingkat atau keberadaan degranulasi butiran alfa, tetapi hal ini berada di luar cakupan studi ini. Ketiga, kami tidak dapat memastikan melalui mikroskop elektron atau metode lain bahwa peningkatan MPV pada trombosit yang terpapar glukosa disebabkan oleh efek pada kekusutan mikrotubulus.
Campuran WB atau PRP dengan glukosa 25% meningkatkan MPV, menandakan dimulainya aktivasi trombosit, meskipun penelitian ini tidak menunjukkan perkembangan agregasi atau degranulasi. Campuran glukosa hipertonik mengakibatkan hilangnya trombosit, yang mungkin merupakan efek litik. Aktivasi parsial atau lisis trombosit dapat menyebabkan regenerasi jaringan setelah injeksi trombosit. Tidak jelas konsekuensi klinis apa yang dapat ditimbulkan oleh perubahan ini. Penelitian lebih lanjut telah menunjukkan pengukuran aktivasi atau lisis yang lebih akurat dan telah mengevaluasi berbagai efek klinis campuran glukosa hipertonik dengan WB atau PRP.
Terapi proliferatif glukosa merupakan terapi regeneratif yang sederhana dan murah yang berkembang pesat dan mendukung penelitian klinis. Studi ini menunjukkan mekanisme fisiologis yang, jika dikonfirmasi, dapat membantu kita memahami bagian dari mekanisme regeneratif terapi proliferatif.
Informatika Biomedis dan Kesehatan di Fakultas Kedokteran Universitas Missouri, Kansas City, Kansas City, AS
Subjek Manusia: Semua partisipan dalam studi ini memberikan atau tidak memberikan persetujuan. International Society for Cellular Medicine telah mengeluarkan persetujuan ICMS-2017-003. Protokol berikut telah disetujui untuk penggunaan lebih lanjut oleh Institutional Review Board of the International Society for Cellular Medicine: Judul: Perhitungan hasil obat plasma kaya trombosit berdasarkan jumlah trombosit CBC awal. Subjek Hewan: Semua penulis mengonfirmasi bahwa tidak ada hewan atau jaringan yang terlibat dalam studi ini. Konflik Kepentingan: Sesuai dengan Formulir Pengungkapan Seragam ICMJE, semua penulis menyatakan sebagai berikut: Informasi pembayaran/layanan: Semua penulis menyatakan bahwa mereka tidak menerima dukungan finansial dari organisasi mana pun untuk pekerjaan yang diserahkan. Hubungan Finansial: Semua penulis menyatakan bahwa mereka saat ini atau dalam tiga tahun terakhir tidak memiliki hubungan finansial dengan organisasi mana pun yang mungkin tertarik dengan pekerjaan yang diserahkan. Hubungan Lainnya: Semua penulis menyatakan bahwa tidak ada hubungan atau aktivitas lain yang dapat memengaruhi pekerjaan yang diserahkan.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K dkk. (17 Mei 2022) Pengaruh glukosa terhadap jumlah dan volume trombosit: implikasi bagi pengobatan regeneratif. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Hak Cipta 2022 Harrison dkk. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan berdasarkan ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons CC-BY 4.0. Penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun diizinkan, asalkan penulis dan sumber asli disebutkan.