“Jangan pernah ragu bahwa sekelompok kecil warga negara yang bijaksana dan berdedikasi dapat mengubah dunia. Bahkan, merekalah satu-satunya yang ada.”
Misi Cureus adalah untuk mengubah model penerbitan medis yang sudah lama ada, di mana pengajuan penelitian bisa mahal, rumit, dan memakan waktu.
Plasma kaya trombosit/PRP, regenerasi jaringan, aktivasi trombosit, terapi proliferatif glukosa, trombosit, terapi proliferatif
Sitasi artikel ini sebagai: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, dkk. (17 Mei 2022) Pengaruh glukosa terhadap jumlah dan volume trombosit: implikasi untuk pengobatan regeneratif. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Plasma kaya trombosit (PRP) dan larutan glukosa hipertonik umumnya digunakan untuk injeksi dalam pengobatan regeneratif, terkadang bersamaan. Efek glukosa hipertonik pada lisis dan aktivasi trombosit belum pernah dilaporkan sebelumnya. Kami menguji efek peningkatan konsentrasi glukosa pada jumlah trombosit dan eritrosit, serta volume sel dalam PRP dan darah utuh (WB). Penurunan parsial yang cepat pada jumlah trombosit terjadi dengan semua campuran glukosa yang dicampur dengan PRP atau darah utuh, yang konsisten dengan lisis parsial. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan adaptasi cepat trombosit residual terhadap hipertonisitas ekstrem (>2000 mOsm). Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan adaptasi cepat trombosit residual terhadap hipertonisitas ekstrem (>2000 mOsm). Jika Anda ingin mengetahui lebih lanjut tentang hal ini, Anda tidak perlu khawatir tentang hal ini. аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 juta) гипертонуса. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan adaptasi cepat trombosit yang tersisa terhadap hipertonisitas ekstrem (>2000 mOsm).第一分钟后）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Jika Anda ingin mengetahui lebih lanjut tentang hal ini, Anda tidak perlu khawatir tentang hal ini. penyesuaian tarif экстремальному (>2000 juta) гиперосмолярному состоянию. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan adaptasi cepat trombosit yang tersisa terhadap kondisi hiperosmolar ekstrem (>2000 mOsm).Konsentrasi glukosa 25% atau lebih tinggi menghasilkan peningkatan signifikan pada volume trombosit rata-rata (MPV), yang menunjukkan tahap awal aktivasi trombosit. Studi lebih lanjut diperlukan untuk menentukan apakah terjadi lisis atau aktivasi trombosit dan apakah injeksi glukosa hipertonik saja atau dikombinasikan dengan PRP dapat memberikan manfaat klinis tambahan.
Pada tahun 1950-an, ahli bedah Amerika George Hackett menemukan bahwa ia dapat secara permanen menghilangkan nyeri sendi dan punggung pada banyak pasien dengan menyuntikkan larutan proliferatif ke dalam tendon dan ligamen. Eksperimennya pada kelinci menunjukkan bahwa pengobatan yang ia sebut terapi proliferatif menyebabkan tendon membesar dan menguat. Studi histologis telah mengkonfirmasi bahwa kolagen baru diproduksi selama proses ini [1].
Selama beberapa dekade pertama, banyak solusi distribusi yang berbeda dicoba. Pada tahun 1990-an, sebagian besar praktisi menganggap konsentrasi glukosa tinggi sebagai metode yang paling aman dan efektif. Namun, mekanisme kerjanya masih belum jelas.
Hanya sedikit penelitian klinis yang dilakukan pada abad ke-20 setelah karya Hackett. Namun, pada tahun 2000-an muncul kembali minat dan beberapa uji klinis terapi proliferatif yang berhasil diselesaikan untuk pengobatan nyeri punggung bawah [2], osteoartritis lutut [3], dan epikondilitis lateral [4].
Regenerasi jaringan membutuhkan partisipasi sel punca. Oleh karena itu, konsentrasi glukosa yang tinggi harus dapat menginduksi migrasi, replikasi, dan diferensiasi sel punca. Kami berhipotesis bahwa trombosit dapat bertindak sebagai pembawa pesan dan bahwa konsentrasi glukosa yang tinggi dapat menyebabkan trombosit melepaskan sitokin dan faktor pertumbuhan, sehingga mendorong proses regeneratif, terutama migrasi sel punca ke area dengan konsentrasi glukosa tinggi.
Aktivasi trombosit selalu mendahului peningkatan kalsium intraseluler [5]. Liu et al. pada tahun 2008 menunjukkan bahwa kadar glukosa tinggi meningkatkan aktivitas saluran transient receptor potential canonical type 6 (TRPC6) di membran plasma, yang menyebabkan masuknya ion kalsium ke dalam trombosit [6]. Studi lain menunjukkan bahwa paparan zona marginal mikrotubulus terhadap ion kalsium menyebabkan relaksasi, ekspansi, dan deformasi zona marginal, yang pada gilirannya menyebabkan perubahan bentuk dari cakram menjadi bulat, sehingga menghasilkan volume trombosit rata-rata (MPV) [7].
Hipotesis kami dalam penelitian ini adalah bahwa paparan trombosit terhadap konsentrasi glukosa yang tinggi memengaruhi zona marginal mikrotubulus dan lingkungan intraseluler, yang menyebabkan peningkatan MPV.
Semua peserta menandatangani formulir persetujuan informed consent setelah rincian penelitian dijelaskan dan sebelum menerima sampel. Dalam penelitian ini, hanya sampel PRP dengan hematokrit lebih besar dari 2% yang digunakan sehingga jumlah eritrosit (eritrosit) dan volume korpuskular rata-rata sel darah merah (MCV) dapat disertakan untuk perbandingan.
Penelitian ini dilakukan dalam empat fase, fase pertama adalah PRP dan fase selanjutnya adalah darah utuh (Tabel 1). Seperti yang dijelaskan sebelumnya [8], semua gaya sentrifugal relatif (RCF, gaya-g) dihitung dari titik tengah (Rmid, dalam cm) kolom darah dalam jarum suntik sentrifugal. Kami memilih untuk menggunakan MPV sebagai penanda sensitisasi trombosit dan jumlah trombosit sebagai indikator potensi lisis trombosit, yang keduanya dapat dengan mudah diukur pada alat analisis hematologi standar.
Pada fase pertama, 47 relawan menyumbangkan sampel darah—satu tabung asam etilenediaminetetraasetat (EDTA) dan satu sampel darah utuh PRP (diantikoagulasi dengan natrium sitrat (NaCl, 3%)) (Tabel 1). Letakkan pengaduk di dalam tabung segera. Hitung darah lengkap (CBC) dilakukan pada sampel EDTA sebanyak tiga kali, dan sampel NaCl dianalisis sebanyak tiga kali untuk analisis CBC, kemudian PRP disiapkan dengan berbagai metode yang dijelaskan di atas [8]. Semua sampel PRP disiapkan dengan sentrifugasi pada 900–1000 g. Campur setiap sampel PRP pada pengaduk vortex selama 5–10 detik, kemudian bagi lima aliquot 0,5 ml ke dalam tabung.
Untuk mengevaluasi efek paparan trombosit pada peningkatan konsentrasi glukosa, sejumlah yang sama (0,5 ml) glukosa 0%, 5%, 12,5%, 25%, dan 50% dalam air dicampur dengan sampel trombosit untuk mendapatkan konsentrasi campuran glukosa 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5%, dan 25%, kemudian tabung dicampur pada pengocok tabung reaksi selama 15 menit. TAC dari setiap campuran dianalisis secara triplikat setelah 15 menit. Jumlah trombosit (PLT), jumlah RBC, MCV, dan MPV dirata-ratakan untuk setiap tabung, dan rata-rata jumlah trombosit, jumlah RBC, MCV, dan MPV dihitung untuk semua sampel PRP.
Setelah fase pertama pengumpulan data selesai, kami memperhatikan peningkatan volume trombosit yang signifikan pada trombosit PRP setelah penambahan D50W. Trombosit PRP tidak selalu mewakili semua trombosit dalam darah, dan medium PRP berbeda dari medium WB. Oleh karena itu, kami memutuskan untuk melakukan uji coba fase kedua tentang efek penambahan D50W pada darah utuh.
Untuk putaran kedua, kami memilih ukuran sampel 30 berdasarkan hasil dari seri pertama, seperti yang dijelaskan di bagian Analisis. Dalam seri ini, 20 sukarelawan menyumbangkan sampel darah (Tabel 1). Darah utuh (1,8 ml) diambil ke dalam jarum suntik 3 ml dan diberi antikoagulan dengan 0,2 ml NaCl 40%. Jarum suntik darah utuh dicampur selama lima detik dengan pengaduk vortex dan CBC dianalisis tiga kali. Setelah analisis, darah yang telah diberi antikoagulan ditambahkan ke 2 ml glukosa 50% dalam jarum suntik 5 ml (konsentrasi glukosa akhir sekitar 25% (D25)) dan ditempatkan dalam tabung kocok selama 30 menit. Setelah 30 menit, D25/CBC dalam jarum suntik WB dianalisis tiga kali. Jumlah trombosit, jumlah RBC, MCV, dan MPV per jarum suntik dirata-ratakan, dan rata-rata PLT, jumlah RBC, MCV, dan MPV dihitung untuk setiap sampel sebelum dan sesudah penambahan glukosa.
Karena trombosit dalam darah utuh umumnya terpapar glukosa hipertonik selama terapi glukosa proliferatif karena injeksi minimal invasif, dan tidak umum untuk menggabungkan PRP dengan glukosa hipertonik tepat sebelum injeksi, kami memutuskan untuk mempelajari glukosa hipertonik dalam kombinasi dengan WB pada Bagian 1. Langkah Ketiga dan keempat. Pada setiap tahap, 20 sukarelawan menyumbangkan 7-8 ml ACD-A (asam yang mengandung trinatrium sitrat (22,0 g/l), asam sitrat (8,0 g/l) dan glukosa (24,5 g/l), larutan dekstrosa sitrat) untuk antikoagulan darah (Tabel 1). Hanya campuran glukosa lebih besar dari 12,5% yang digunakan untuk menentukan persentase ambang batas yang terkait dengan peningkatan MPV. Pada tahap ketiga, 1 ml darah ditempatkan dalam tabung reaksi. Kemudian, campurkan darah menggunakan vortex mixer selama 10 detik dengan menambahkan 1 ml glukosa 30%, 40%, atau 50% ke dalam tabung untuk mendapatkan konsentrasi glukosa akhir masing-masing 15%, 20%, dan 25%. Sampel darah glukosa dianalisis untuk CBC segera setelah pencampuran dan diulangi setiap dua menit selama 30 menit.
Selama pencampuran awal, penambahan glukosa hipertonik 1:1 dan WB atau PRP memaparkan trombosit pada konsentrasi di atas 25% selama beberapa detik. Pada langkah keempat, untuk mengevaluasi efek glukosa hipertonik dengan konsentrasi puncak awal minimal dan menguji batas atas efek glukosa, kami hanya menambahkan sedikit darah ke D25W atau D50W. Masukkan 1 ml D25W atau D50W ke dalam tabung dan tambahkan 0,2 ml WB sambil mengaduk sampel selama 10 detik. Dalam kasus ini, darah terpapar glukosa pada konsentrasi sekitar 20% di atas konsentrasi akhir, bukan 50% di atas konsentrasi akhir seperti pada Fase 3, sehingga menghasilkan konsentrasi glukosa akhir sebesar 20,8% dan 41,6%. Sampel campuran dianalisis pada interval waktu yang sama seperti pada langkah 3.
Pada langkah pertama setiap rangkaian pengenceran glukosa, 30 sampel diambil karena ini adalah ukuran sampel yang sesuai untuk studi percontohan [9]. Pada akhir setiap fase (termasuk fase pertama), evaluasi kecukupan ukuran sampel menggunakan rumus yang digunakan untuk menentukan ukuran sampel yang dibutuhkan untuk memperkirakan rata-rata variabel hasil kontinu dalam satu populasi. Rumus n = Z2 x SD2 /E2. Dalam persamaan ini, Z adalah skor Z, SD adalah deviasi standar, dan E adalah kesalahan yang diinginkan [10]. Alpha kita adalah 0,05, yang sesuai dengan nilai Z sebesar 1,96, dan kita mengharapkan kesalahan sebesar 5 (dalam persen). Oleh karena itu kita selesaikan untuk n = (1,962 x SD2)/52. Hasilnya menunjukkan bahwa ukuran sampel yang dibutuhkan untuk setiap tahap lebih kecil daripada jumlah sebenarnya yang dikumpulkan.
Selama periode 1, 3, dan 4 menggunakan lebih dari satu konsentrasi glukosa, efek dari berbagai konsentrasi glukosa dianalisis dengan membandingkan perubahan fraksional antara waktu 0 dan setiap waktu berikutnya (fase 1 pada 15 menit, periode 3 pada 15 menit, dan periode 4 pada 15 detik, kemudian setiap dua menit). Laju perubahan untuk setiap periode waktu dibandingkan menggunakan uji Mann-Whitney U karena data tidak mengikuti distribusi normal seperti yang ditentukan oleh uji normalitas Shapiro-Wilk. Karena analisis 1-ke-1 dari beberapa kelompok (lima) dilakukan pada langkah pertama, ketiga, dan keempat (total lima), koreksi Bonferroni dilakukan untuk menyesuaikan nilai alfa yang diinginkan menjadi ≤0,01 tetapi tidak ≤0,05.
Penurunan jumlah trombosit dengan semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV pada trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: Jumlah trombosit PRP meningkat satu hingga lima kali lipat dibandingkan dengan darah utuh dasar, bervariasi tergantung metode yang digunakan (tidak digambarkan). Penurunan jumlah trombosit dengan semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV pada trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: Jumlah trombosit PRP meningkat satu hingga lima kali lipat dibandingkan dengan darah utuh dasar, bervariasi tergantung metodenya (tidak digambarkan). Layanan Pelanggan dan Layanan Pelanggan dan Layanan Anda MPV dan тромбоцитах PRP при концентрации tingkat > 12,5%: jumlah biaya PRP dalam 1-5 jam lebih tinggi dari jumlah yang ditentukan кровью, в зависимости от метода (tidak (показано). Penurunan jumlah trombosit pada semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV pada trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: jumlah trombosit PRP meningkat 1-5 kali lipat dibandingkan dengan darah utuh dasar, tergantung pada metode yang digunakan (tidak ditampilkan). ).在> 12.5% ​​的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Pada konsentrasi glukosa >12,5%, konsentrasi glukosa yang tinggi mengurangi jumlah sel darah, MPV darah PRP meningkat: dibandingkan dengan jumlah sel darah dasar, jumlah sel darah PRP meningkat 1 hingga 5 kali lipat dari konsentrasi (tidak dijelaskan). Untuk kadar gula >12,5% karena kadar gula yang tinggi тромбоцитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (tidak ada masalah ). Pada konsentrasi glukosa >12,5%, semua konsentrasi glukosa hipertensi menurunkan jumlah trombosit dan meningkatkan MPV pada trombosit PRP: jumlah trombosit PRP meningkat 1 hingga 5 kali lipat dibandingkan dengan konsentrasi darah utuh dasar, tergantung pada metodenya (seperti yang dijelaskan).Gambar 1 menunjukkan bahwa jumlah trombosit menurun hampir 75% setelah pengenceran dalam air dan sebesar 20-30% setelah 15 menit pengenceran dengan berbagai konsentrasi glukosa dibandingkan dengan PRP dasar dan pengenceran 1:1 yang disesuaikan volumenya (1- k1 dengan koreksi volume). k -1 breeding).1 breeding).
Jumlah sel dalam setiap pengenceran dinyatakan sebagai pecahan dari jumlah awal sebelum pengenceran.
MPV menurun minimal selama produksi PRP, tanpa perubahan lebih lanjut pada konsentrasi pengenceran hingga 12,5% dalam air atau glukosa (termasuk campuran glukosa PRP 25%) dan meningkat lebih dari 20% setelah pengenceran dalam larutan glukosa 50% (Gambar 2). Sebaliknya, eritrosit tidak menunjukkan perubahan volume yang signifikan pada pengenceran apa pun selain H2O.
Volume rata-rata sel dalam setiap pengenceran dinyatakan sebagai persentase dari volume awal sebelum pengenceran.
Penurunan jumlah trombosit yang serupa tetapi kurang signifikan dan peningkatan CVR diamati pada BC yang terpapar glukosa 50% (untuk diformulasikan dengan glukosa 25%). Tabel 2 membandingkan jumlah sel dan volume sel dalam darah utuh yang diencerkan dalam dekstrosa 50% dengan data PRP fase 1 yang diencerkan dalam dekstrosa 50%. Perubahan jumlah RBC dan MCV RBC tidak jelas dan bukan fokus perhatian kami.
SD = simpangan baku, MD = perbedaan rata-rata antar kelompok, SE = simpangan baku perbedaan rata-rata, RBC = eritrosit, PLT = trombosit, PRP = plasma kaya trombosit, WB = darah utuh
Setelah menambahkan D50W ke WB, persentase kehilangan trombosit yang disesuaikan dengan pengenceran adalah 7,7% (310±73 vs. 286±96) dibandingkan dengan 17,8% untuk pengenceran PRP dalam D50W (664±348 vs. 544±277). MPV WB meningkat sebesar 16,8% (dari 10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6), sedangkan MPV PRP meningkat sebesar 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Meskipun perbedaan rata-rata dalam penurunan jumlah trombosit dan peningkatan MPV secara signifikan lebih besar dengan PRP, perubahan dalam penurunan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 menjadi 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) dan peningkatan MPV signifikan (10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Meskipun perbedaan rata-rata dalam penurunan jumlah trombosit dan peningkatan MPV secara signifikan lebih besar dengan PRP, perubahan dalam penurunan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 menjadi 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) dan peningkatan MPV signifikan (10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Meskipun perbedaan rata-rata dalam penurunan jumlah trombosit dan peningkatan CVR secara signifikan lebih besar dengan PRP, perubahan penurunan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 menjadi 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Peningkatan MPV signifikan (dari 10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大,但WB MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 , 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。Perubahan penurunan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (dari 310 ± 73 menjadi 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), meskipun PRP memiliki perbedaan rata-rata yang secara signifikan lebih besar dalam penurunan jumlah trombosit dan peningkatan MPV, dan peningkatan MPV signifikan.(от 10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (dari 10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Konsentrasi akhir glukosa 20% diperlukan untuk melihat perubahan signifikan pada MPV, tetapi perubahan pada MPV lebih jelas terlihat pada konsentrasi akhir 25%. Kehilangan trombosit stabil setelah penurunan awal. Kami mencatat penurunan tajam awal pada CVR, namun, CVR dengan cepat pulih pada konsentrasi glukosa akhir 25%, yang secara signifikan lebih tinggi daripada tingkat CVR yang diamati pada konsentrasi glukosa akhir 20% dan 15% (Gambar 3 dan di sebelah kiri Tabel 3; kotak berbayang menunjukkan nilai p ≤ alfa dengan koreksi Bonferroni 0,01). Terdapat juga penurunan tajam awal pada jumlah PLT, yang diamati pada fase awal 0-15 detik, dan kemudian tetap stabil (dari 15 detik hingga 30 menit; sebelah kiri tabel 4).
Penambahan berbagai konsentrasi glukosa ke dalam darah utuh menghasilkan penurunan MPV awal yang cepat, diikuti oleh pemulihan yang bergantung pada konsentrasi lebih dari 20%. Keterangan menunjukkan konsentrasi glukosa setelah pengenceran. D15, D20, dan D25 dilakukan dengan pengenceran 1:1. D21 dan D41 dilakukan dengan pengenceran 1:5.
Tabel 4 menunjukkan perubahan jumlah trombosit ketika diencerkan dalam glukosa hipertonik. Kami mengamati hubungan yang bergantung pada dosis antara penurunan langsung jumlah trombosit pada pengenceran 1:1 dan pada pengenceran 1:5. Membandingkan pengenceran 1:1 sebagai satu kelompok dengan pengenceran 1:5, kelompok 1:1 mengalami penurunan langsung jumlah trombosit yang lebih kecil daripada kelompok 1:5, yaitu 66±48.000 (23%) dibandingkan dengan 99±69.000 (37%), p = 0,014 pada kelompok 1:5. Setelah penurunan awal pada titik pengukuran pertama, jumlah trombosit sebagai persentase glukosa stabil (Gambar 4).
Ketika darah utuh ditambahkan ke glukosa dengan rasio 1:1, jumlah trombosit berkurang sekitar 25%. Namun, ketika darah utuh ditambahkan dengan rasio 1:5, pengurangannya jauh lebih besar – sekitar 50%.
Glukosa 41% meningkatkan MPV lebih cepat dan lebih dramatis daripada 25% atau 21%. Hasil MPV ditunjukkan pada Gambar 3. Pada semua pengenceran lainnya, tidak ada penurunan awal MPV yang langsung diamati setelah penambahan glukosa 50%. Saat menggunakan glukosa 25% (konsentrasi glukosa 20,8% pada pengenceran akhir), perubahan MPV sebanding dengan perubahan pada glukosa 20% pada pengenceran 1:1 (Gambar 3). Meskipun perubahan MPV awalnya lebih besar pada konsentrasi campuran 41% daripada pada 25%, perbedaan MPV antara 41% dan 25% setelah 16 menit tidak lagi signifikan (Tabel 3, kanan). Menarik juga bahwa glukosa 25% meningkatkan MPV lebih efektif daripada 20,8%.
Studi in vitro ini sebagian mengkonfirmasi hipotesis kami. Hal ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial oleh campuran dekstrosa, adaptasi trombosit yang cepat terhadap hipertonisitas ekstrem, dan peningkatan MPV yang signifikan sebagai respons terhadap konsentrasi dekstrosa hipertonik > 25%. Hal ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial oleh campuran dekstrosa, adaptasi trombosit yang cepat terhadap hipertonisitas ekstrem, dan peningkatan MPV yang signifikan sebagai respons terhadap konsentrasi dekstrosa hipertonik > 25%. Tentang Layanan Pelanggan yang Dapat Diatur, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального peningkatan dan peningkatan volume MPV dalam jumlah tarif > 25%. Hal ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial dengan dekstrosa, akomodasi trombosit yang cepat terhadap hipertonisitas ekstrem, dan peningkatan MPV yang signifikan sebagai respons terhadap kadar dekstrosa hipertonik >25%.以及响应> 25% dari segi MPV 显着上升。以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Tentang cara-cara yang dapat digunakan untuk menangani masalah ini, Anda perlu адаптацию тромбоцитов к экстремальному harga MPV dan harga MPV lebih tinggi dari kapasitas > 25%. Hal ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial oleh campuran glukosa, adaptasi trombosit yang cepat terhadap hipertonisitas ekstrem, dan peningkatan MPV yang signifikan sebagai respons terhadap glukosa hipertonik >25%.Peningkatan awal maksimal terjadi pada paparan glukosa 41,6%, tetapi peningkatan MPV mendekati paparan glukosa 25% sekitar 20 menit setelah paparan.
Konsentrasi trombosit dipengaruhi oleh glukosa. Kami memperhatikan bahwa jumlah trombosit menurun pada semua pengenceran glukosa. Penurunan tajam jumlah trombosit pada pengenceran H2O (0%) dari seri PRP mungkin terkait dengan lisis osmotik. Alternatifnya, ini bisa jadi artefak yang disebabkan oleh penggumpalan trombosit, tetapi ini bertentangan dengan tidak adanya perubahan MPV pada pengenceran ini. Temuan ini berarti bahwa beberapa trombosit sangat sensitif terhadap hipoosmolaritas.
Pada semua pengenceran glukosa 1:1, jumlah PLT menurun sebesar 20-30%, bahkan pada D5W (hipotonik pada 252 mOsm), yang mungkin menunjukkan efek non-osmotik spesifik dari glukosa, karena baik PLT maupun MPV tetap tidak berubah pada peningkatan konsentrasi glukosa tiga kali lipat dari D5W ke D25W. Bahkan, konsentrasi PLT cenderung sedikit meningkat seiring dengan peningkatan osmolaritas.
Penurunan PLT antara pengenceran 1:1 dan 1:5 berarti bahwa efek pelarutan bergantung pada konsentrasi glukosa awal dan akhir. Jika hanya bergantung pada konsentrasi awal, maka kita akan mengharapkan adanya perbedaan pengurangan PLT antara konsentrasi 1:1. Tetapi kita tidak melihatnya. Jika efek lisis hanya bergantung pada konsentrasi glukosa akhir, maka kita tidak mengharapkan banyak perbedaan antara pengenceran 20% 1:1 dan pengenceran 20,8% 1:5. Namun kita berhasil melakukannya.
Jika terjadi kehilangan trombosit akibat lisis trombosit, maka akan terbentuk lisat parsial, setelah itu sitokin dan faktor pertumbuhan dilepaskan ke lingkungan ekstraseluler. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa lisat trombosit hampir sama efektifnya dengan PRP sebagai solusi proliferasi [11]. PRP sendiri telah terbukti sebagai solusi yang efektif untuk pengobatan proliferasi [12-14].
Trombosit yang tidak aktif bersirkulasi dalam bentuk cakram yang diperkuat dengan beberapa struktur internal. Selama aktivasi, trombosit berubah bentuk menjadi lebih bulat atau seperti amuba, sehingga terjadi peningkatan volume. Peningkatan volume ini membutuhkan peningkatan luas permukaan, yang merupakan hasil dari ekstrusi sistem tubulus terbuka (OCS) dan penambahan granula eksositik ke membran. Masih perlu ditentukan apakah peningkatan MPV yang diinduksi oleh glukosa hipertonik melibatkan salah satu atau kedua mekanisme ini, tetapi jika yang terakhir, maka peningkatan MPV akan menunjukkan degranulasi.
Studi ini menunjukkan bahwa paparan konsentrasi glukosa tinggi pada PRP atau trombosit darah utuh menghasilkan peningkatan MPV dalam waktu 15 menit dengan konsentrasi glukosa masing-masing 25% dan 41,6%.
Peningkatan MPV trombosit mungkin disebabkan oleh dilatasi kusut mikrotubulus di sekitarnya sebagai respons terhadap masuknya kalsium. Liu dkk. Glukosa telah terbukti memediasi masuknya kalsium melalui saluran TRPC6 trombosit [6]. Hipotesis kami adalah bahwa glukosa menginduksi relaksasi kusut mikrotubulus, yang menyebabkan peningkatan MPV dan sensitisasi dan/atau aktivasi trombosit. Namun, dilihat dari hasil kami, ini hanya sebagian dari cerita. Dalam pengujian kami, tidak ada konsentrasi di bawah D25W yang menghasilkan peningkatan MPV. Mengingat bahwa kami belum menguji paparan konsentrasi glukosa antara 12,5% dan 25%, hasil fase 1 kami menunjukkan bahwa mungkin ada ambang batas dalam kisaran konsentrasi glukosa ini yang menyebabkan peningkatan MPV. Pengujian lebih lanjut pada tahap 3 dan 4 menunjukkan bahwa glukosa 20-25% tampaknya merupakan ambang batas untuk ini, tetapi masih belum jelas mengapa.
Kami juga mengamati penurunan MPV sekitar 9% setelah sentrifugasi. Tidak jelas apakah penurunan MPV ini disebabkan oleh trombosit yang lebih besar dan lebih padat yang terperangkap dalam lapisan sel darah merah (RBC) pada sentrifugasi. Pengamatan ini mungkin penting bagi dokter karena dapat menyiratkan bahwa trombosit PRP merupakan subset trombosit darah utuh (WB) yang lebih kecil dan kurang padat.
Dalam penelitian sebelumnya, kami menunjukkan bahwa persiapan PRP dengan metode manual tidak mahal [8]. Jika glukosa mensensitisasi trombosit jaringan atau PRP, sehingga membuatnya lebih mudah diaktifkan, atau jika PRP diproduksi dengan sifat lisat parsial, hal ini dapat meningkatkan regenerasi dan mengurangi kebutuhan terapi. Oleh karena itu, kombinasi PRP dan glukosa konsentrasi tinggi mungkin lebih hemat biaya daripada PRP atau glukosa saja.
Studi kami memiliki beberapa kekurangan. Pertama, kami menggunakan PRP yang diperoleh dari beberapa metode berbeda. Hal ini dapat menyebabkan hasil yang saling bertentangan. Kedua, kami tidak dapat melakukan analisis biokimia pada sampel kami untuk menentukan secara lebih akurat apakah aktivasi trombosit telah terjadi. Kami ingin mengukur P-selektin, faktor trombosit 4, agregat trombosit monositik, atau penanda aktivasi trombosit lainnya untuk lebih memahami tingkat atau keberadaan degranulasi granula alfa, tetapi hal ini di luar cakupan studi ini. Ketiga, kami tidak dapat mengkonfirmasi melalui mikroskop elektron atau metode lain bahwa peningkatan MPV pada trombosit yang terpapar glukosa disebabkan oleh efek pada kekusutan mikrotubulus.
Campuran WB atau PRP dengan glukosa 25% meningkatkan MPV, menandakan dimulainya aktivasi trombosit, meskipun penelitian ini tidak menunjukkan perkembangan agregasi atau degranulasi. Campuran glukosa hipertonik mengakibatkan hilangnya trombosit, yang mungkin mewakili efek lisis. Aktivasi parsial atau lisis trombosit dapat menyebabkan regenerasi jaringan setelah injeksi trombosit. Belum jelas konsekuensi klinis apa yang mungkin ditimbulkan oleh perubahan ini. Studi lebih lanjut telah menunjukkan pengukuran aktivasi atau lisis yang lebih akurat dan telah mengevaluasi berbagai efek klinis dari campuran glukosa hipertonik dengan WB atau PRP.
Terapi proliferasi glukosa adalah terapi regeneratif sederhana dan murah yang berkembang pesat dan mendukung penelitian klinis. Studi ini menunjukkan mekanisme fisiologis yang, jika dikonfirmasi, dapat membantu kita memahami sebagian dari mekanisme regeneratif terapi proliferasi.
Informatika Biomedis dan Kesehatan di Fakultas Kedokteran Universitas Missouri, Kansas City, Kansas City, AS
Subjek Manusia: Semua peserta dalam penelitian ini memberikan atau tidak memberikan persetujuan. International Society for Cellular Medicine telah mengeluarkan persetujuan ICMS-2017-003. Protokol berikut telah disetujui untuk penggunaan lebih lanjut oleh Dewan Peninjau Institusional International Society for Cellular Medicine: Judul: Perhitungan hasil obat plasma kaya trombosit berdasarkan jumlah trombosit CBC dasar. Subjek Hewan: Semua penulis mengkonfirmasi bahwa tidak ada hewan atau jaringan yang terlibat dalam penelitian ini. Konflik Kepentingan: Sesuai dengan Formulir Pengungkapan Seragam ICMJE, semua penulis menyatakan hal berikut: Informasi pembayaran/layanan: Semua penulis menyatakan bahwa mereka tidak menerima dukungan keuangan dari organisasi mana pun untuk karya yang diajukan. Hubungan Keuangan: Semua penulis menyatakan bahwa mereka saat ini atau dalam tiga tahun terakhir tidak memiliki hubungan keuangan dengan organisasi mana pun yang mungkin tertarik pada karya yang diajukan. Hubungan Lain: Semua penulis menyatakan bahwa tidak ada hubungan atau aktivitas lain yang dapat memengaruhi karya yang diajukan.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K dkk. (17 Mei 2022) Pengaruh glukosa terhadap jumlah dan volume trombosit: implikasi untuk pengobatan regeneratif. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Hak Cipta 2022 Harrison dkk. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons CC-BY 4.0. Penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun diperbolehkan, dengan syarat penulis dan sumber asli dicantumkan.