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Plasma riche en plaquettes (PRP), régénération tissulaire, activation plaquettaire, thérapie proliférative par le glucose, plaquettes, thérapie proliférative
Référence bibliographique : Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 mai 2022) Effet du glucose sur le nombre et le volume des plaquettes : implications pour la médecine régénérative. Cure 14(5) : e25081. doi : 10.7759/cureus.25081
Le plasma riche en plaquettes (PRP) et les solutions de glucose hypertoniques sont couramment utilisés en injection en médecine régénérative, parfois conjointement. L'effet du glucose hypertonique sur la lyse et l'activation plaquettaires n'a pas été décrit jusqu'à présent. Nous avons testé l'effet de concentrations élevées de glucose sur le nombre de plaquettes et d'érythrocytes, ainsi que sur le volume cellulaire dans le PRP et le sang total. Une diminution partielle et rapide du nombre de plaquettes a été observée avec tous les mélanges de glucose incorporés au PRP ou au sang total, ce qui est compatible avec une lyse partielle. Après la première minute, le nombre de plaquettes est resté stable, suggérant une adaptation rapide des plaquettes résiduelles à une hypertonicité extrême (>2000 mOsm). Après la première minute, le nombre de plaquettes est resté stable, suggérant une adaptation rapide des plaquettes résiduelles à une hypertonicité extrême (>2000 mOsm). Après la première minute, les thromboses sont stables, ce qui permet de s'adapter à l'état des trompes. экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Après la première minute, le nombre de plaquettes est resté stable, indiquant une adaptation rapide des plaquettes résiduelles à une hypertonicité extrême (>2000 mOsm).> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Après la première minute, les trompettes sont stables, ce qui permet d'adapter l'état des trompettes. экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Après la première minute, le nombre de plaquettes est resté stable, indiquant une adaptation rapide des plaquettes résiduelles à l'état hyperosmolaire extrême (>2000 mOsm).Des concentrations de glucose supérieures ou égales à 25 % ont entraîné une augmentation significative du volume plaquettaire moyen (VPM), indiquant un stade précoce d'activation plaquettaire. Des études complémentaires sont nécessaires pour déterminer si une lyse ou une activation plaquettaire se produit et si l'injection de glucose hypertonique, seule ou en association avec du PRP, peut apporter un bénéfice clinique supplémentaire.
Dans les années 1950, le chirurgien américain George Hackett découvrit qu'il pouvait soulager durablement les douleurs articulaires et dorsales de nombreux patients en injectant une solution proliférative dans les tendons et les ligaments. Ses expériences sur des lapins montrèrent que ce traitement, qu'il nomma thérapie proliférative, entraînait un élargissement et un renforcement des tendons. Des études histologiques ont confirmé la production de nouveau collagène au cours de ce processus [1].
Au cours des premières décennies, de nombreuses solutions de distribution ont été testées. Dans les années 1990, la plupart des praticiens considéraient les fortes concentrations de glucose comme la méthode la plus sûre et la plus efficace. Cependant, son mécanisme d'action reste encore mal compris.
Peu d'études cliniques ont été menées au XXe siècle suite aux travaux de Hackett. Cependant, dans les années 2000, un regain d'intérêt s'est manifesté et plusieurs essais cliniques concluants de thérapie proliférative ont été réalisés pour le traitement des lombalgies [2], de l'arthrose du genou [3] et de l'épicondylite latérale [4].
La régénération tissulaire nécessite la participation de cellules souches. Par conséquent, des concentrations élevées de glucose doivent induire la migration, la réplication et la différenciation de ces cellules. Nous émettons l'hypothèse que les plaquettes pourraient agir comme messagers et que des concentrations élevées de glucose pourraient les amener à libérer des cytokines et des facteurs de croissance, favorisant ainsi les processus régénérateurs, notamment la migration des cellules souches vers les zones à forte concentration de glucose.
L'activation plaquettaire précède toujours une augmentation du calcium intracellulaire [5]. Liu et al. ont montré en 2008 que des taux élevés de glucose augmentent l'activité des canaux TRPC6 (Transient Receptor Potential Canonical type 6) dans la membrane plasmique, ce qui entraîne un influx d'ions calcium dans les plaquettes [6]. Une autre étude a montré que l'exposition de la zone marginale des microtubules aux ions calcium provoque la relaxation, l'expansion et la déformation de cette zone, ce qui induit un changement de forme, passant d'une forme discoïde à une forme sphérique, et détermine le volume plaquettaire moyen (VPM) [7].
Notre hypothèse dans cette étude est que l'exposition des plaquettes à des concentrations élevées de glucose affecte la zone marginale des microtubules et l'environnement intracellulaire, entraînant une augmentation du MPV.
Tous les participants ont signé un formulaire de consentement éclairé après avoir reçu les détails de l'étude et avant le prélèvement des échantillons. Dans cette étude, seuls les échantillons de PRP présentant un hématocrite supérieur à 2 % ont été utilisés afin de pouvoir inclure le nombre d'érythrocytes et le volume globulaire moyen (VGM) à des fins de comparaison.
L’étude a été menée en quatre phases : la première avec du PRP et les suivantes avec du sang total (tableau 1). Comme décrit précédemment [8], toutes les forces centrifuges relatives (FCR, g) ont été calculées à partir du point médian (Rmid, en cm) de la colonne de sang dans la seringue de centrifugation. Nous avons choisi d’utiliser le VPM comme marqueur de sensibilisation plaquettaire et le nombre de plaquettes comme indicateur de lyse plaquettaire potentielle, ces deux paramètres étant facilement mesurables sur des analyseurs d’hématologie standard.
Dans une première phase, 47 volontaires ont donné des échantillons de sang : un tube contenant de l’acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) et un échantillon de sang total PRP (anticoagulé au citrate de sodium (NaCl, 3 %)) (Tableau 1). L’agitateur a été immédiatement placé dans le tube. Une numération formule sanguine (NFS) a été réalisée en triple sur les échantillons EDTA, et les échantillons NaCl ont également été analysés en triple pour la NFS. Le PRP a ensuite été préparé selon les différentes méthodes décrites précédemment [8]. Tous les échantillons de PRP ont été préparés par centrifugation à 900–1000 g. Chaque échantillon de PRP a été homogénéisé sur un agitateur vortex pendant 5 à 10 secondes, puis réparti en cinq aliquotes de 0,5 ml dans des tubes.
Pour évaluer l'effet de l'exposition plaquettaire sur l'élévation de la glycémie, des volumes égaux (0,5 ml) de solutions aqueuses de glucose à 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % et 50 % ont été mélangés à des échantillons de plaquettes afin d'obtenir des concentrations de glucose de 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % et 25 %. Les tubes ont été agités pendant 15 minutes sur un agitateur à tubes. La capacité antioxydante totale (CAT) de chaque mélange a été analysée en triplicata après 15 minutes. Le nombre de plaquettes (PLT), le nombre d'érythrocytes (GR), le volume globulaire moyen (VGM) et le volume plaquettaire moyen (VPM) ont été moyennés pour chaque tube, et les valeurs moyennes de ces paramètres ont été calculées pour l'ensemble des échantillons de plasma riche en plaquettes (PRP).
Après la première phase de collecte de données, nous avons observé une augmentation significative du volume plaquettaire dans le PRP suite à l'ajout de D50W. Les plaquettes du PRP ne représentent pas nécessairement la totalité des plaquettes sanguines, et le milieu de culture du PRP diffère de celui du sang total. Par conséquent, nous avons décidé de mener une seconde phase d'étude afin d'évaluer l'effet de l'ajout de D50W au sang total.
Pour la deuxième série d'analyses, nous avons sélectionné un échantillon de 30 sujets en nous basant sur les résultats de la première série, comme décrit dans la section « Analyse ». Dans cette série, 20 volontaires ont donné des échantillons de sang (tableau 1). 1,8 ml de sang total ont été prélevés dans une seringue de 3 ml et anticoagulés avec 0,2 ml de NaCl à 40 %. Le sang a été agité pendant cinq secondes à l'aide d'un vortex, et l'hémogramme a été réalisé en triple. Après analyse, 2 ml de glucose à 50 % ont été ajoutés dans une seringue de 5 ml (la concentration finale de glucose était d'environ 25 % [D25]). Le sang a ensuite été placé dans un tube agité pendant 30 minutes. Après 30 minutes, les hémogrammes (D25/hémogramme) contenus dans les seringues de sang total ont été analysés en triple. Les numérations plaquettaires et érythrocytaires, ainsi que les VGM et VPM, ont été moyennés par seringue. Les valeurs moyennes de plaquettes, de globules rouges, de VGM et de VPM ont été calculées pour chaque échantillon avant et après l'ajout de glucose.
Étant donné que les plaquettes du sang total sont fréquemment exposées à une solution de glucose hypertonique lors d'une thérapie proliférative par injection de glucose (procédure d'injection mini-invasive), et qu'il est rare d'associer le PRP à une solution de glucose hypertonique juste avant l'injection, nous avons décidé d'étudier l'association d'une solution de glucose hypertonique et de sang total dans la section 1, étapes 3 et 4. À chaque étape, 20 volontaires ont donné 7 à 8 ml d'ACD-A (solution de dextrose-citrate contenant du citrate trisodique (22,0 g/l), de l'acide citrique (8,0 g/l) et du glucose (24,5 g/l)) comme anticoagulant (tableau 1). Seuls les mélanges contenant plus de 12,5 % de glucose ont été utilisés pour déterminer le seuil associé à une augmentation du VPM. À la troisième étape, 1 ml de sang est placé dans un tube à essai. On mélange ensuite le sang sur un agitateur vortex pendant 10 secondes en ajoutant 1 ml de glucose à 30 %, 40 % ou 50 % dans le tube afin d'obtenir une concentration finale de glucose de 15 %, 20 % et 25 %, respectivement. Les échantillons de sang glycémiques ont été analysés pour une numération formule sanguine (NFS) immédiatement après le mélange, puis toutes les deux minutes pendant 30 minutes.
Lors du mélange initial, l'ajout d'une solution de glucose hypertonique (1:1) et de sang total (ST) ou de plasma riche en plaquettes (PRP) expose les plaquettes à des concentrations supérieures à 25 % pendant quelques secondes. Dans la quatrième étape, afin d'évaluer l'effet du glucose hypertonique avec des concentrations initiales maximales minimales et de tester la limite supérieure de l'effet du glucose, nous avons ajouté seulement une petite quantité de sang à du D25W ou du D50W. Introduire 1 ml de D25W ou de D50W dans un tube et ajouter 0,2 ml de ST tout en vortexant l'échantillon pendant 10 secondes. Dans ces cas, le sang a été exposé à une concentration de glucose environ 20 % supérieure à la concentration finale, au lieu de 50 % comme lors de la phase 3, ce qui a donné des concentrations finales de glucose de 20,8 % et 41,6 %. Les échantillons mélangés ont été analysés au même intervalle de temps qu'à l'étape 3.
Lors de la première étape de chaque série de dilutions de glucose, 30 échantillons ont été prélevés, cette taille correspondant à la taille d'échantillon appropriée pour l'étude pilote [9]. À la fin de chaque phase (y compris la première), l'adéquation de la taille de l'échantillon a été évaluée à l'aide de la formule permettant de déterminer la taille d'échantillon nécessaire à l'estimation de la moyenne de la variable de résultat continue dans une population : n = Z² × SD² / E². Dans cette équation, Z représente le score Z, SD l'écart type et E l'erreur attendue [10]. Notre seuil de signification (α) étant de 0,05, ce qui correspond à une valeur de Z de 1,96, nous anticipons une erreur de 5 %. Par conséquent, nous calculons n = (1,96² × SD²) / 52. Les résultats ont montré que la taille d'échantillon requise pour chaque étape était inférieure au nombre d'échantillons effectivement prélevés.
Au cours des périodes 1, 3 et 4, avec plusieurs concentrations de glucose, l'effet de ces différentes concentrations a été analysé en comparant la variation relative entre le temps 0 et chaque temps suivant (phase 1 à 15 minutes, période 3 à 15 minutes, et période 4 à 15 secondes, puis toutes les deux minutes). Les taux de variation pour chaque période ont été comparés à l'aide du test U de Mann-Whitney, les données ne suivant pas une distribution normale selon le test de normalité de Shapiro-Wilk. Une analyse 1:1 de plusieurs groupes (cinq) ayant été réalisée lors des première, troisième et quatrième étapes (cinq au total), une correction de Bonferroni a été appliquée afin d'ajuster le seuil de signification à ≤ 0,01, sans toutefois le fixer à ≤ 0,05.
Réduction du nombre de plaquettes avec toutes les concentrations de dextrose hypertonique et augmentation du MPV dans les plaquettes PRP à une concentration de dextrose >12,5 % : le nombre de plaquettes PRP est passé d'une à cinq fois la concentration par rapport au sang total de base, en fonction de la méthode (non représentée). Réduction du nombre de plaquettes avec toutes les concentrations de dextrose hypertonique et augmentation du MPV dans les plaquettes PRP à une concentration de dextrose >12,5 % : le nombre de plaquettes PRP est passé d'une à cinq fois la concentration par rapport au sang total de base, variant selon la méthode (non représentée). L'utilisation de collecteurs de trompettes pour tous les concentrateurs hypertoniques et la mise en œuvre de MPV dans les trompettes PRP pour la concentration dextrose > 12,5% : le taux de thrombose du PRP est appliqué en 1 à 5 minutes après la séance d'entraînement avec une certaine durée de vie, selon la méthode (non показано). Diminution du nombre de plaquettes à toutes les concentrations de dextrose hypertonique et augmentation du MPV dans les plaquettes PRP à une concentration de dextrose > 12,5 % : le nombre de plaquettes PRP a augmenté de 1 à 5 fois par rapport au sang total de base, selon la méthode (non illustrée). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 À une concentration de glucose >12,5 %, la concentration élevée de glucose réduit le nombre de globules rouges, le MPV sanguin du PRP augmente : par rapport à la concentration normale, le nombre de globules rouges du PRP augmente de 1 à 5 fois celui de la concentration (non décrite). Avec des concentrations de glucose >12,5% dans toutes les concentrations de glucose hypertoniques, le MPV est alimenté par un compresseur Trombozites PRP : Les collecteurs de trompes PRP sont répartis entre 1 et 5 centres de concentration en fonction de la concentration de certains segments, dans Consultez la méthode (non officielle). À des concentrations de glucose >12,5 %, toutes les concentrations de glucose hypertensives ont diminué le nombre de plaquettes et augmenté le MPV dans les plaquettes PRP : le nombre de plaquettes PRP a augmenté de 1 à 5 fois par rapport aux concentrations de sang total de base, selon la méthode (comme décrit).La figure 1 montre que le nombre de plaquettes a diminué de près de 75 % après dilution dans l'eau et de 20 à 30 % après 15 minutes de dilution avec différentes concentrations de glucose, comparativement au PRP de base et à une dilution 1:1 ajustée au volume (1 - k1 avec correction de volume).
Le nombre de cellules dans chaque dilution est exprimé en fraction du nombre initial avant dilution.
Le volume plaquettaire moyen (VPM) a légèrement diminué lors de la production de PRP, sans modification supplémentaire des concentrations de dilution à 12,5 % dans l'eau ou le glucose (y compris les mélanges PRP-glucose à 25 %), et a augmenté de plus de 20 % après dilution dans une solution de glucose à 50 % (Fig. 2). En revanche, le volume des érythrocytes n'a montré aucune variation significative à aucune dilution autre que dans l'eau.
Le volume moyen de cellules dans chaque dilution est exprimé en pourcentage du volume initial avant dilution.
Une réduction similaire, mais moins marquée, du nombre de plaquettes et une augmentation du CVR ont été observées dans les BC exposées à 50 % de glucose (pour une formulation à 25 % de glucose). Le tableau 2 compare le nombre et le volume cellulaires dans le sang total dilué dans du dextrose à 50 % avec les données de phase 1 du PRP dilué dans du dextrose à 50 %. Les variations du nombre de globules rouges et du VGM des globules rouges n'étaient pas significatives et n'ont pas fait l'objet de notre étude.
SD = écart type, MD = différence moyenne entre les groupes, SE = écart type de la différence moyenne, GR = érythrocytes, PLT = plaquettes, PRP = plasma riche en plaquettes, BO = sang total
Après l'ajout de D50W au sang total, la perte plaquettaire corrigée par dilution était de 7,7 % (310 ± 73 vs 286 ± 96), contre 17,8 % pour la dilution du PRP dans D50W (664 ± 348 vs 544 ± 277). Le VPM du sang total a augmenté de 16,8 % (de 10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6), tandis que celui du PRP a augmenté de 26 % (9,2 ± 0,8 vs 11,6 ± 0,7). Bien que les différences moyennes dans la réduction du nombre de plaquettes et l'augmentation du MPV aient été significativement plus importantes avec le PRP, les changements dans la réduction du nombre de plaquettes dans le WB étaient presque significatifs (310 ± 73 à 286 ± 96 (-7,7 %) ; p = 0,06) et l'augmentation du MPV était significative (10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Bien que les différences moyennes dans la réduction du nombre de plaquettes et l'augmentation du MPV aient été significativement plus importantes avec le PRP, les changements dans la réduction du nombre de plaquettes dans le WB étaient presque significatifs (310 ± 73 à 286 ± 96 (-7,7 %) ; p = 0,06) et l'augmentation du MPV était significative (10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Bien que les différences moyennes dans la réduction du nombre de plaquettes et l'augmentation du CVR aient été significativement plus importantes avec le PRP, les changements dans la diminution du nombre de plaquettes dans le WB étaient presque significatifs (310 ± 73 à 286 ± 96 (-7,7 %) ; p = 0,06).увеличение MPV было значительным (de 10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). l'augmentation du MPV était significative (de 10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Système PRP pour véhicules MPV et systèmes MPV, pour WB 310 ± 73 ± 286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06） et MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。La diminution du nombre de plaquettes dans le sang total était presque significative (de 310 ± 73 à 286 ± 96 (-7,7 %) ; p = 0,06), bien que le PRP ait présenté des différences moyennes significativement plus importantes en termes de diminution du nombre de plaquettes et d'augmentation du VPM. L'augmentation du VPM était par ailleurs significative.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 à 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Une concentration finale de glucose de 20 % était nécessaire pour observer une variation significative du VPM, mais cette variation était plus marquée à une concentration finale de 25 %. La perte plaquettaire s'est stabilisée après la baisse initiale. Nous avons constaté une diminution initiale importante du CVR, qui s'est toutefois rapidement rétabli à une concentration finale de glucose de 25 %, valeur significativement supérieure à celles observées aux concentrations finales de glucose de 20 % et 15 % (Fig. 3 et à gauche du Tableau 3 ; cases grisées). Les valeurs p ≤ α (avec correction de Bonferroni de 0,01) sont indiquées. On a également observé une chute initiale importante du nombre de plaquettes (PLT) durant la phase initiale (0-15 s), suivie d'une stabilisation (de 15 s à 30 min ; à gauche du Tableau 4).
L'ajout de glucose à différentes concentrations au sang total a entraîné une diminution initiale rapide du volume plaquettaire moyen (VPM), suivie d'une récupération de plus de 20 % proportionnelle à la concentration. La légende indique la concentration de glucose après dilution. Les expériences D15, D20 et D25 ont été réalisées avec une dilution de 1:1. Les expériences D21 et D41 ont été réalisées avec une dilution de 1:5.
Le tableau 4 présente l'évolution du nombre de plaquettes après dilution dans une solution de glucose hypertonique. Nous avons observé une relation dose-dépendante entre la diminution immédiate du nombre de plaquettes à la dilution 1:1 et à la dilution 1:5. En comparant les dilutions 1:1 (considérées comme un seul groupe) aux dilutions 1:5, le groupe 1:1 a présenté une diminution immédiate du nombre de plaquettes moins importante que le groupe 1:5 (66 ± 48 000, soit 23 %) que le groupe 1:5 (99 ± 69 000, soit 37 %), p = 0,014. Après une diminution initiale lors de la première mesure, le nombre de plaquettes, exprimé en pourcentage de la glycémie, s'est stabilisé (figure 4).
L'ajout de sang total à une solution de glucose dans un rapport 1:1 entraîne une diminution du nombre de plaquettes d'environ 25 %. Cependant, avec un rapport de 1:5, la diminution est beaucoup plus importante, d'environ 50 %.
Une solution de glucose à 41 % a augmenté le VPM plus rapidement et de façon plus marquée qu'une solution à 25 % ou à 21 %. Les résultats relatifs au VPM sont présentés dans la figure 3. Pour toutes les autres dilutions, aucune diminution initiale immédiate du VPM n'a été observée après l'ajout de 50 % de glucose. Avec une solution de glucose à 25 % (concentration de glucose de 20,8 % à la dilution finale), la variation du VPM était comparable à celle observée avec une solution à 20 % de glucose à une dilution de 1:1 (figure 3). Bien que les variations du VPM aient été initialement plus importantes à la concentration mixte de 41 % qu'à celle de 25 %, la différence de VPM entre 41 % et 25 % après 16 minutes n'était plus significative (tableau 3, à droite). Il est également intéressant de noter que la solution de glucose à 25 % a augmenté le VPM plus efficacement qu'à 20,8 %.
Cette étude in vitro a partiellement confirmé notre hypothèse. Elle a montré une lyse plaquettaire partielle potentielle par mélange de dextrose, une adaptation rapide des plaquettes à une hypertonicité extrême et une augmentation significative du MPV en réponse à des concentrations de dextrose hypertonique > 25 %. Elle a montré une lyse plaquettaire partielle potentielle par mélange de dextrose, une adaptation rapide des plaquettes à une hypertonicité extrême et une augmentation significative du MPV en réponse à des concentrations de dextrose hypertonique > 25 %. Lors de la recherche d'une lisienne de thrombose potentielle, elle s'adapte aux thromboses du corps sexuel L'hypertonie et la puissance maximale du MPV sont supérieures à 25 %. Elle a montré une lyse plaquettaire partielle potentielle avec le dextrose, une adaptation plaquettaire rapide à une hypertonicité extrême et une augmentation significative du MPV en réponse à des niveaux de dextrose hypertonique >25%.以及响应> 25 % pour les véhicules MPV.以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。 。 。 。 。 En raison de la possibilité d'une élimination des thromboses avec du glucose, l'adaptation des trompes à l'extrémisme est possible. L'hypertonie et la production locale de MPV sont supérieures à 25 %. Elle montre une lyse plaquettaire partielle potentielle par des mélanges de glucose, une adaptation plaquettaire rapide à une hypertonicité extrême et une augmentation significative du MPV en réponse à un glucose hypertonique >25%.L'augmentation initiale était maximale à une exposition au glucose de 41,6 %, mais l'augmentation du MPV approchait une exposition au glucose de 25 % environ 20 minutes après l'exposition.
La concentration plaquettaire est influencée par le glucose. Nous avons observé une diminution du nombre de plaquettes à toutes les dilutions de glucose. La chute brutale du nombre de plaquettes dans la dilution H₂O (0 %) de la série PRP pourrait être liée à une lyse osmotique. Il pourrait également s'agir d'un artefact dû à l'agrégation plaquettaire, ce qui contraste avec l'absence de variation du VPM à cette dilution. Ce résultat suggère que certaines plaquettes sont très sensibles à l'hypoosmolarité.
Dans toutes les dilutions de glucose à 1:1, la quantité de plaquettes a diminué de 20 à 30 %, même avec la solution D5W (hypotonique à 252 mOsm), ce qui pourrait indiquer un effet non osmotique spécifique du glucose, puisque le nombre de plaquettes et le volume plaquettaire moyen (VPM) sont restés inchangés après un triplement de la concentration de glucose, de D5W à D25W. En fait, les concentrations plaquettaires ont eu tendance à augmenter légèrement avec l'augmentation de l'osmolarité.
La diminution du nombre de plaquettes entre les dilutions 1:1 et 1:5 indique que l'effet de dissolution dépend des concentrations initiale et finale de glucose. S'il ne dépendait que de la concentration initiale, on observerait une différence de réduction plaquettaire entre les dilutions 1:1. Or, ce n'est pas le cas. Si l'effet de lyse ne dépendait que de la concentration finale de glucose, on ne s'attendrait pas à une différence significative entre une dilution à 20 % (1:1) et une dilution à 20,8 % (1:5). Et pourtant, nous l'avons constatée.
En cas de perte de plaquettes due à la lyse plaquettaire, un lysat partiel se forme, libérant ainsi des cytokines et des facteurs de croissance dans le milieu extracellulaire. Plusieurs études ont démontré que le lysat plaquettaire est presque aussi efficace que le PRP comme solution de prolifération [11]. Le PRP lui-même s'est révélé être une solution efficace pour le traitement de la prolifération [12-14].
Les plaquettes inactives circulent sous forme de disque renforcé par plusieurs structures internes. Lors de leur activation, elles adoptent une forme plus sphérique ou amiboïde, ce qui entraîne une augmentation de volume. Cette augmentation de volume nécessite une augmentation de la surface membranaire, résultant de l'extrusion du système tubulaire ouvert (STO) et de l'ajout de granules exocytiques à la membrane. Il reste à déterminer si l'augmentation du volume plaquettaire moyen (VPM) induite par une solution hypertonique de glucose implique l'un ou l'autre de ces mécanismes, voire les deux. Dans le cas du second, une augmentation du VPM indiquerait une dégranulation.
Cette étude a montré que l'exposition à des concentrations élevées de glucose sur le PRP ou les plaquettes de sang total entraînait une augmentation du MPV en 15 minutes avec une concentration de glucose de 25 % et 41,6 %, respectivement.
L'augmentation du volume plaquettaire moyen (VPM) pourrait être due à la dilatation des enchevêtrements de microtubules environnants en réponse à un influx de calcium. Liu et al. ont montré que le glucose induit un influx de calcium via le canal TRPC6 plaquettaire [6]. Notre hypothèse est que le glucose induit la relaxation des enchevêtrements de microtubules, entraînant une augmentation du VPM et une sensibilisation et/ou une activation plaquettaire. Cependant, nos résultats suggèrent que cette explication est partielle. Lors de nos tests, aucune concentration inférieure à 25 % de glucose n'a induit d'augmentation du VPM. N'ayant pas testé l'exposition à des concentrations de glucose comprises entre 12,5 % et 25 %, les résultats de la phase 1 suggèrent l'existence d'un seuil, dans cette plage de concentrations, induisant une augmentation du VPM. Des tests complémentaires, menés aux phases 3 et 4, ont montré que ce seuil semble se situer entre 20 % et 25 % de glucose, mais le mécanisme sous-jacent reste inconnu.
Nous avons également observé une diminution d'environ 9 % du VPM après centrifugation. Il n'est pas clair si cette diminution est due à la présence de plaquettes plus grandes et plus denses piégées dans la couche d'érythrocytes du culot de centrifugation. Cette observation pourrait être importante pour les cliniciens, car elle pourrait indiquer que les plaquettes du PRP constituent un sous-ensemble plus petit et moins dense des plaquettes du sang total.
Dans une étude précédente, nous avons démontré que la préparation de PRP par des méthodes manuelles est peu coûteuse [8]. Si le glucose sensibilise les plaquettes tissulaires ou le PRP, les rendant plus susceptibles à l'activation, ou si le PRP est produit avec des propriétés de lysat partiel, cela pourrait améliorer la régénération et réduire le besoin de thérapie. Par conséquent, l'association de PRP et de glucose hautement concentré pourrait s'avérer plus rentable que le PRP ou le glucose seuls.
Notre étude présente plusieurs limites. Premièrement, nous avons utilisé du PRP obtenu par différentes méthodes, ce qui peut engendrer des résultats contradictoires. Deuxièmement, nous n'avons pas pu réaliser d'analyse biochimique de nos échantillons afin de déterminer avec précision si une activation plaquettaire s'était produite. Nous aurions souhaité mesurer la P-sélectine, le facteur plaquettaire 4, les agrégats monocytaires plaquettaires ou d'autres marqueurs d'activation plaquettaire pour mieux comprendre le degré ou la présence de dégranulation des granules alpha, mais cela dépasse le cadre de cette étude. Troisièmement, nous n'avons pas pu confirmer par microscopie électronique ou d'autres méthodes que l'augmentation du VPM des plaquettes exposées au glucose était due à son effet sur les enchevêtrements de microtubules.
Les mélanges de sang total (ST) ou de plasma riche en plaquettes (PRP) avec 25 % de glucose ont augmenté le volume plaquettaire moyen (VPM), signalant le début de l'activation plaquettaire, bien que cette étude n'ait pas démontré de progression de l'agrégation ou de la dégranulation. Le mélange hypertonique de glucose a entraîné une perte de plaquettes, possiblement due à un effet lytique. Une activation ou une lyse plaquettaire partielle peut induire une régénération tissulaire après injection de plaquettes. Les conséquences cliniques potentielles de ces modifications restent incertaines. Des études complémentaires ont permis de mesurer plus précisément l'activation ou la lyse et ont évalué les différents effets cliniques des mélanges hypertoniques de glucose avec du ST ou du PRP.
La thérapie proliférative par le glucose est une thérapie régénérative simple et peu coûteuse, en plein essor et faisant l'objet de nombreuses recherches cliniques. Cette étude suggère un mécanisme physiologique qui, s'il est confirmé, pourrait nous aider à comprendre une partie du mécanisme régénérateur de cette thérapie.
Informatique biomédicale et de la santé à l'École de médecine de l'Université du Missouri à Kansas City, Kansas City, États-Unis
Sujets humains : Tous les participants à cette étude ont donné ou non leur consentement. La Société internationale de médecine cellulaire a délivré l’approbation ICMS-2017-003. Le protocole suivant a été approuvé pour utilisation ultérieure par le Comité d’éthique de la recherche de la Société internationale de médecine cellulaire : Titre : Calcul du rendement du plasma riche en plaquettes (PRP) en fonction du nombre de plaquettes initial (numération formule sanguine). Sujets animaux : Tous les auteurs confirment qu’aucun animal ni tissu n’a été utilisé dans cette étude. Conflits d’intérêts : Conformément au formulaire de déclaration uniforme de l’ICMJE, tous les auteurs déclarent ce qui suit : Informations relatives aux paiements/services : Tous les auteurs déclarent n’avoir reçu aucun soutien financier d’un organisme quelconque pour les travaux soumis. Relations financières : Tous les auteurs déclarent n’avoir, au cours des trois dernières années, aucune relation financière avec un organisme susceptible d’être intéressé par les travaux soumis. Autres relations : Tous les auteurs déclarent n’avoir aucune autre relation ou activité susceptible d’influencer les travaux soumis.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 mai 2022) Effet du glucose sur le nombre et le volume des plaquettes : implications pour la médecine régénérative. Cure 14(5) : e25081. doi : 10.7759/cureus.25081
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