Nature.com'u ziyaret ettiğiniz için teşekkür ederiz. Kullandığınız tarayıcı sürümünün CSS desteği sınırlıdır. En iyi deneyim için, güncel bir tarayıcı kullanmanızı (veya Internet Explorer'da Uyumluluk Modunu devre dışı bırakmanızı) öneririz. Bu süre zarfında, desteğin devamlılığını sağlamak için siteyi stiller ve JavaScript olmadan görüntüleyeceğiz.
Kontrolsüz kanama, önde gelen ölüm nedenlerinden biridir. Hızlı hemostaz sağlanması, savaş, trafik kazaları ve ölüm azaltma operasyonları sırasında ilk yardım olarak kişinin hayatta kalmasını sağlar. Sürekli faz olarak basit bir hemostatik film oluşturucu kompozisyondan (HFFC) türetilen nanoporlu fiber takviyeli kompozit iskele (NFRCS), hemostazı tetikleyebilir ve artırabilir. NFRCS'nin geliştirilmesi, yusufçuk kanadının tasarımına dayanmaktadır. Yusufçuk kanadı yapısı, enine ve boyuna kanatlardan oluşur ve kanat zarları, mikro yapının bütünlüğünü korumak için birbirine bağlanır. HFFC, fiberin yüzeyini nanometre kalınlığında bir filmle homojen bir şekilde kaplar ve rastgele dağılmış pamuk kalınlığını (Ct) (dağılmış faz) birleştirerek nanoporlu bir yapı oluşturur. Sürekli ve dağılmış fazların birleşimi, ürünün maliyetini piyasada bulunan ürünlere göre on kat azaltır. Modifiye edilmiş NFRCS (tampon veya bileklik), çeşitli biyomedikal uygulamalarda kullanılabilir. İn vivo çalışmalar, geliştirilen Cp NFRCS'nin uygulama bölgesinde pıhtılaşma sürecini tetiklediğini ve güçlendirdiğini ortaya koymuştur. NFRCS, nanoporlu yapısı sayesinde mikro çevreyi düzenleyebilir ve hücresel düzeyde etki ederek eksizyon yara modelinde daha iyi yara iyileşmesine yol açabilir.
Savaş, ameliyat içi ve acil durumlarda kontrolsüz kanama, yaralıların hayatı için ciddi bir tehdit oluşturabilir¹. Bu durumlar ayrıca periferik vasküler direncin genel olarak artmasına ve hemorajik şoka yol açar. Ameliyat sırasında ve sonrasında kanamayı kontrol altına almak için uygun önlemler, potansiyel olarak yaşamı tehdit eden durumlar olarak kabul edilir²⁻³. Büyük damarların hasar görmesi, savaşta %50'nin altında ve ameliyat sırasında %31'lik bir ölüm oranına neden olan büyük kan kaybına yol açar¹. Büyük kan kaybı, vücut hacminde azalmaya ve dolayısıyla kalp debisinde düşüşe neden olur. Toplam periferik vasküler dirençte artış ve mikrosirkülasyonda ilerleyici bozulma, yaşam destek organlarında hipoksiye yol açar. Etkili müdahale olmadan durum devam ederse hemorajik şok meydana gelebilir¹⁻⁴⁻⁵. Diğer komplikasyonlar arasında hipotermi ve metabolik asidozun ilerlemesi ve pıhtılaşma sürecini engelleyen bir pıhtılaşma bozukluğu yer alır. Şiddetli hemorajik şok, daha yüksek ölüm riskiyle ilişkilidir⁶⁻⁷⁻⁸. Üçüncü derece (ilerleyici) şokta, ameliyat içi ve ameliyat sonrası morbidite ve mortalite sırasında hastanın hayatta kalması için kan transfüzyonu şarttır. Yukarıda belirtilen tüm yaşamı tehdit eden durumların üstesinden gelmek için, suda çözünebilen hemostatik polimerlerin bir kombinasyonunu kullanarak minimum polimer konsantrasyonu (%0,5) kullanan nanoporlu fiber takviyeli kompozit bir iskelet (NFRCS) geliştirdik.
Elyaf takviyesi kullanımıyla, maliyet etkin ürünler geliştirilebilir. Rastgele düzenlenmiş lifler, kanatlardaki yatay ve dikey çizgilerle dengelenmiş bir yusufçuk kanadının yapısına benzer. Kanadın enine ve boyuna damarları, kanat zarı ile iletişim kurar (Şekil 1). NFRCS, daha iyi fiziksel ve mekanik dayanıma sahip bir iskele sistemi olarak takviyeli Ct'den oluşur (Şekil 1). Uygun fiyatı ve işçiliği nedeniyle cerrahlar, ameliyatlar ve pansumanlar sırasında pamuk ipliği (Ct) kullanmayı tercih ederler. Bu nedenle, %90'dan fazla kristal selüloz içermesi (hemostatik aktivitenin artmasına katkıda bulunur) dahil olmak üzere çoklu faydaları göz önüne alındığında, Ct, NFRCS9,10'un iskelet sistemi olarak kullanılmıştır. Bu nedenle, %90'dan fazla kristal selüloz içermesi (hemostatik aktivitenin artmasına katkıda bulunur) dahil olmak üzere çoklu faydaları göz önüne alındığında, Ct, NFRCS9,10'un iskelet sistemi olarak kullanılmıştır. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% kристаллической целлюлозы (участвует в повышении гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. Bu nedenle, %90'dan fazla kristal selüloz (artmış hemostatik aktivitede rol oynar) dahil olmak üzere birçok faydası göz önüne alındığında, Ct, NFRCS iskelet sistemi olarak kullanılmıştır9,10.因此,考虑到它的多重益处,包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止血活性）,Ct NFRCS9,10'un yeni sürümü.因此,考虑到它的多重益处,包括> 90%Bu nedenle, %90'ın üzerinde kristal selüloz (hemostatik aktiviteyi artırmaya yardımcı olur) dahil olmak üzere birçok faydası göz önüne alındığında, Ct, NFRCS9,10 için bir iskelet olarak kullanılmıştır.Ct yüzeysel olarak kaplandı (nano kalınlıkta film oluşumu gözlemlendi) ve hemostatik film oluşturucu bir kompozisyon (HFFC) ile birbirine bağlandı. HFFC, rastgele yerleştirilmiş Ct'yi bir arada tutan bir matrigel gibi davranır. Geliştirilen tasarım, stresi dağılmış faz (güçlendirici lifler) içinde iletir. Minimum polimer konsantrasyonları kullanılarak iyi mekanik dayanıma sahip nanoporlu yapılar elde etmek zordur. Ayrıca, farklı biyomedikal uygulamalar için farklı kalıpları özelleştirmek kolay değildir.
Şekil, yusufçuk kanadı yapısına dayalı NFRCS tasarımının bir diyagramını göstermektedir (A). Bu görüntü, yusufçuk kanadının yapısının (kanadın kesişen ve uzunlamasına damarları birbirine bağlıdır) ve Cp NFRCS'nin kesitsel bir fotomikrografının karşılaştırmalı bir benzetmesini göstermektedir (B). NFRCS'nin şematik gösterimi.
Yukarıdaki sınırlamaları gidermek için HFFC'nin sürekli faz olarak kullanıldığı NFRC'ler geliştirilmiştir. HFFC, ana hemostatik polimer olarak kitosan ile metilselüloz (MC), hidroksipropil metilselüloz (HPMC 50 cp) ve trombüs oluşumunu destekleyen bir destek polimeri olarak polivinil alkol (PVA) (125 kDa) dahil olmak üzere çeşitli film oluşturucu hemostatik polimerlerden oluşmaktadır. Polivinilpirolidin K30 (PVP K30) ilavesi, NFRC'lerin nem emme kapasitesini iyileştirmiştir. Bağlı polimer karışımlarında polimer çapraz bağlanmasını iyileştirmek için polietilen glikol 400 (PEG 400) eklenmiştir. Üç farklı HFFC hemostatik bileşimi (Cm HFFC, Ch HFFC ve Cp HFFC), yani kitosan ile MC (Cm), kitosan ile HPMC (Ch) ve kitosan ile PVA (Cp), Ct'ye uygulanmıştır. Çeşitli in vitro ve in vivo karakterizasyon çalışmaları, NFRCS'nin hemostatik ve yara iyileştirici aktivitesini doğrulamıştır. NFRCS tarafından sunulan kompozit malzemeler, belirli ihtiyaçları karşılamak üzere çeşitli iskele formlarının özelleştirilmesinde kullanılabilir.
Ayrıca, NFRCS, alt ekstremitelerin ve vücudun diğer bölgelerinin tüm yaralanma alanını kaplayacak şekilde bandaj veya rulo şeklinde de modifiye edilebilir. Özellikle savaşta meydana gelen uzuv yaralanmaları için tasarlanan NFRCS, yarım kol veya tam bacak şeklinde de değiştirilebilir (Ek Şekil S11). NFRCS, doku yapıştırıcısı ile bileklik haline getirilebilir ve bu da ciddi intihar amaçlı bilek yaralanmalarından kaynaklanan kanamayı durdurmak için kullanılabilir. Ana hedefimiz, mümkün olduğunca az polimer içeren, geniş bir nüfusa (yoksulluk sınırının altında) ulaştırılabilen ve ilk yardım çantasına yerleştirilebilen bir NFRCS geliştirmektir. Basit, verimli ve ekonomik bir tasarıma sahip olan NFRCS, yerel topluluklara fayda sağlar ve küresel bir etkiye sahip olabilir.
Kitin (moleküler ağırlık 80 kDa) ve amarant Merck, Hindistan'dan satın alındı. Hidroksipropil metilselüloz 50 Cp, polietilen glikol 400 ve metilselüloz Loba Chemie Pvt. LLC, Mumbai'den satın alındı. Polivinil alkol (moleküler ağırlık 125 kDa) (%87-90 hidrolize) National Chemicals, Gujarat'tan satın alındı. Polivinilpirolidin K30 Molychem, Mumbai'den satın alındı, steril pamuklu çubuklar Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu'dan satın alındı ​​ve taşıyıcı olarak Milli Q su (Direct-Q3 su arıtma sistemi, Merck, Hindistan) kullanıldı.
NFRCS, liyofilizasyon yöntemi kullanılarak geliştirilmiştir11,12. Tüm HFFC bileşimleri (Tablo 1), mekanik bir karıştırıcı kullanılarak hazırlanmıştır. Su içinde %1 asetik asit kullanılarak, mekanik bir karıştırıcıda 800 rpm'de sürekli karıştırma ile %0,5'lik bir kitosan çözeltisi hazırlanmıştır. Tablo 1'de belirtilen yüklü polimerin tam ağırlığı kitosan çözeltisine eklenmiş ve berrak bir polimer çözeltisi elde edilene kadar karıştırılmıştır. Elde edilen karışıma Tablo 1'de belirtilen miktarlarda PVP K30 ve PEG 400 eklenmiş ve berrak, viskoz bir polimer çözeltisi elde edilene kadar karıştırmaya devam edilmiştir. Elde edilen polimer çözeltisi banyosu, polimer karışımından hapsolmuş hava kabarcıklarını gidermek için 60 dakika boyunca ultrasonik işlemden geçirilmiştir. Ek Şekil S1(b)'de gösterildiği gibi, Ct, 5 ml HFFC ile desteklenmiş 6 kuyucuklu bir plakanın (kalıp) her bir kuyucuğuna eşit olarak dağıtılmıştır.
Altı bölmeli plaka, Ct ağında HFFC'nin homojen bir şekilde ıslanmasını ve dağılımını sağlamak için 60 dakika boyunca ultrasonik işleme tabi tutuldu. Daha sonra altı bölmeli plaka -20°C'de 8-12 saat donduruldu. Dondurulmuş plakalar, çeşitli NFRCS formülasyonları elde etmek için 48 saat boyunca liyofilize edildi. Aynı prosedür, tamponlar veya silindirik tamponlar gibi farklı şekil ve yapılar veya farklı uygulamalar için herhangi bir başka şekil üretmek için de kullanılır.
Hassas bir şekilde tartılmış kitosan (80 kDa) (%3), manyetik karıştırıcı kullanılarak %1'lik asetik asit içinde çözülür. Elde edilen kitosan çözeltisine %1'lik PEG 400 eklenir ve 30 dakika karıştırılır. Elde edilen çözelti kare veya dikdörtgen bir kaba dökülür ve -80°C'de 12 saat dondurulur. Dondurulmuş numuneler, gözenekli Cs13 elde etmek için 48 saat boyunca liyofilize edilir.
Geliştirilen NFRCS, kitosanın diğer polimerlerle kimyasal uyumluluğunu doğrulamak için Fourier dönüşümlü kızılötesi spektroskopisi (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Tokyo, Japonya) kullanılarak deneylere tabi tutuldu14,15. Test edilen tüm numunelerin FTIR spektrumları (spektral aralığın genişliği 400 ila 4000 cm-1) 32 tarama yapılarak elde edildi.
Tüm formülasyonlar için kan emilim oranı (BAR), Chen ve ark. 16 tarafından tanımlanan yöntem kullanılarak, küçük değişikliklerle değerlendirildi. Tüm bileşimlerin geliştirilmiş NFRK'ları, artık çözücüyü uzaklaştırmak için 105°C'de vakumlu fırında bir gece boyunca kurutuldu. 30 mg NFRCS (başlangıç ​​numune ağırlığı – W0) ve 30 mg Ct (pozitif kontrol), %3,8 sodyum sitrat ön karışımı içeren ayrı kaplara yerleştirildi. Önceden belirlenmiş zaman aralıklarında, yani 5, 10, 20, 30, 40 ve 60 saniyede, NFRCS'ler çıkarıldı ve numuneler 30 saniye boyunca Ct üzerine yerleştirilerek yüzeyleri emilmeyen kandan temizlendi. Her zaman noktasında NFRCS 16 tarafından emilen kanın nihai ağırlığı (W1) dikkate alındı. BAR yüzdesini aşağıdaki formülü kullanarak hesaplayın:
Kan pıhtılaşma süresi (KKT), Wang ve ark. 17 tarafından bildirildiği gibi belirlendi. Tam kanın (3,8% sodyum sitrat ile önceden karıştırılmış sıçan kanı) NFRCS varlığında pıhtılaşması için gereken süre, test örneğinin KKT'si olarak hesaplandı. Çeşitli NFRCS bileşenleri (30 mg), 10 ml'lik vidalı kapaklı şişelere yerleştirildi ve 37°C'de inkübe edildi. Şişeye 0,5 ml kan eklendi ve kan pıhtılaşmasını aktive etmek için 0,3 ml 0,2 M CaCl2 eklendi. Son olarak, sert bir pıhtı oluşana kadar şişe her 15 saniyede bir (180°'ye kadar) ters çevrildi. Numunenin KKT'si, şişenin ters çevrilme sayısı ile tahmin edildi17,18. KKT'ye dayanarak, NFRCS Cm, Ch ve Cp'den iki optimal bileşim, daha ileri karakterizasyon çalışmaları için seçildi.
Ch NFRCS ve Cp NFRCS kompozisyonlarının BCT'si, Li ve ark. 19 tarafından açıklanan yöntem uygulanarak belirlendi. 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS ve Cs (pozitif kontrol) ayrı Petri kaplarına (37 °C) yerleştirildi. Kan pıhtılaşma sürecini başlatmak için %3,8 sodyum sitrat içeren kan, 10:1 hacim oranında 0,2 M CaCl2 ile karıştırıldı. 20 µl 0,2 M CaCl2 sıçan kan karışımı numune yüzeyine uygulandı ve boş bir Petri kabına yerleştirildi. Kontrol, Ct içermeyen boş Petri kaplarına dökülen kandan oluşuyordu. 0, 3 ve 5 dakikalık sabit aralıklarla, pıhtıyı bozmadan numune içeren kaba 10 ml deiyonize (DI) su eklenerek pıhtılaşma durduruldu. Pıhtılaşmamış eritrositler (eritrositler), deiyonize su varlığında hemolize uğrar ve hemoglobini serbest bırakır. Farklı zaman noktalarındaki hemoglobin (HA(t)), UV-Vis spektrofotometre kullanılarak 540 nm'de (λmax hemoglobin) ölçüldü. 10 ml deiyonize suda 20 µl kanın 0. dakikadaki mutlak hemoglobin absorbsiyonu (AH(0)) referans standart olarak alındı. Pıhtılaşmış kanın bağıl hemoglobin alımı (RHA), aynı kan örneği kullanılarak HA(t)/HA(0) oranından hesaplandı.
Doku analizörü (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, ABD) kullanılarak, NFRK'nın hasarlı dokuya yapışma özellikleri belirlendi. Açık tabanlı silindirik bir kap, domuz derisinin iç kısmına (yağ tabakası olmadan) bastırıldı. Örnekler (Ch NFRCS ve Cp NFRCS), domuz derisine yapışma sağlamak için kanül yoluyla silindirik kalıplara uygulandı. Oda sıcaklığında (25°C) 3 dakika inkübasyondan sonra, NFRCS yapışma gücü 0,5 mm/sn sabit hızda kaydedildi.
Cerrahi sızdırmazlık maddelerinin temel özelliği, kan kaybını azaltırken kan pıhtılaşmasını artırmaktır. NFRCS'de kayıpsız pıhtılaşma, daha önce yayınlanmış bir yöntem kullanılarak, küçük değişikliklerle değerlendirilmiştir¹⁹. Santrifüj tüpünün bir tarafında 8 × 5 mm²'lik bir delik (açık bir yarayı temsil eden) bulunan bir mikro santrifüj tüpü (2 ml) (iç çap 10 mm) hazırlayın. Açıklığı kapatmak için NFRCS kullanılır ve dış kenarları kapatmak için bant kullanılır. %3,8 sodyum sitrat ön karışımı içeren mikro santrifüj tüpüne 20 µl 0,2 M CaCl₂ ekleyin. 10 dakika sonra, mikro santrifüj tüpleri kaplardan çıkarıldı ve NFRK'den kan akışı nedeniyle kapların kütlesindeki artış belirlendi (n = 3). Kan kaybı Ch NFRCS ve Cp NFRCS, Cs ile karşılaştırıldı.
NFRCS'nin ıslak bütünlüğü, Mishra ve Chaudhary21 tarafından tanımlanan yönteme küçük değişiklikler yapılarak belirlendi. NFRCS'yi 50 ml su ile 100 ml'lik bir Erlenmeyer şişesine koyun ve üst kısım oluşmadan 60 saniye boyunca çalkalayın. Fiziksel bütünlük açısından numunelerin görsel olarak incelenmesi ve önceliklendirilmesi, toplama yöntemine göre yapıldı.
HFFC'nin Ct'ye bağlanma gücü, daha önce yayınlanmış yöntemler kullanılarak, küçük değişikliklerle incelenmiştir. Yüzey kaplama bütünlüğü, NFRK'nın milliQ su (Ct) varlığında akustik dalgalara (harici uyarıcı) maruz bırakılmasıyla değerlendirilmiştir. Geliştirilen NFRCS Ch NFRCS ve Cp NFRCS, su dolu bir behere yerleştirilmiş ve sırasıyla 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ve 30 dakika boyunca sonikasyona tabi tutulmuştur. Kuruduktan sonra, NFRCS'nin başlangıç ​​ve son ağırlığı arasındaki yüzde farkı, malzeme kaybı yüzdesini (HFFC) hesaplamak için kullanılmıştır. İn vitro BCT, bağlanma gücünü veya yüzey malzemelerinin kaybını daha da desteklemiştir. HFFC'nin Ct'ye bağlanma verimliliği, kan pıhtılaşmasını ve Ct22 yüzeyinde elastik bir kaplama sağlar.
Geliştirilen NFRCS'nin homojenliği, NFRCS'nin rastgele seçilen genel bölgelerinden alınan örneklerin (30 mg) BCT'si ile belirlendi. NFRCS uyumluluğunu belirlemek için daha önce belirtilen BCT prosedürünü izleyin. Beş örneğin tümü arasındaki yakınlık, düzgün yüzey kaplaması ve Ct ağında HFFC birikimini sağlar.
Nominal kan temas alanı (NBCA), daha önce bildirildiği gibi bazı değişikliklerle belirlendi. Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS ve Cs'nin iki yüzeyi arasına 20 µl kan sıkıştırılarak kan pıhtılaştırıldı. 1 saat sonra, stentlerin iki parçası ayrıldı ve pıhtının alanı manuel olarak ölçüldü. Üç tekrarın ortalama değeri NBCA NFRCS19 olarak kabul edildi.
Dinamik Buhar Emilimi (DVS) analizi, NFRCS'nin dış ortamdan veya pıhtılaşmayı başlatan yaralanma bölgesinden su emme etkinliğini değerlendirmek için kullanıldı. DVS, ±0,1 µg kütle çözünürlüğüne sahip ultra hassas bir terazi kullanarak bir numunedeki buhar alımını ve kaybını gravimetrik olarak değerlendirir veya kaydeder. Doymuş ve kuru taşıyıcı gazların karıştırılmasıyla numune çevresinde elektronik bir kütle akış kontrolörü tarafından kısmi buhar basıncı (bağıl nem) oluşturulur. Avrupa Farmakopesi yönergelerine göre, numunelerin nem emme yüzdesine bağlı olarak, numuneler 4 kategoriye ayrılmıştır (0–0,012% a/a - higroskopik olmayan, 0,2–2% a/a hafif higroskopik, 2–15% orta derecede higroskopik ve > 15% çok higroskopik)23. Avrupa Farmakopesi yönergelerine göre, numunelerin nem emme yüzdesine bağlı olarak, numuneler 4 kategoriye ayrılmıştır (0–0,012% a/a - higroskopik olmayan, 0,2–2% a/a hafif higroskopik, 2–15% orta derecede higroskopik ve >% 15 çok higroskopik)23.Avrupa Farmakopesi'nin tavsiyelerine uygun olarak, numunelerin nem emme yüzdesine bağlı olarak, numuneler 4 kategoriye ayrılmıştır (0–0,012% a/a – higroskopik olmayan, 0,2–2% a/a hafif higroskopik, 2–15%).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % orta derecede higroskopik ve > %15 çok higroskopik)23.根据欧洲药典指南,根据样品吸收水分的百分比,样品分为4 类（0-0,012% w/w-非吸湿性、0.2-2% a/w 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23。根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 分为 类 （（0-0,012% W/w- 吸湿 性 、 、 、 、 0,2-2% W/w 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23。Avrupa Farmakopesi'nin tavsiyelerine uygun olarak, numuneler, numunenin emdiği nem yüzdesine bağlı olarak 4 sınıfa ayrılır (ağırlıkça %0-0,012 – higroskopik olmayan, ağırlıkça %0,2-2 – hafif higroskopik, ağırlıkça %2-15).% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % orta derecede higroskopik, > %15 çok higroskopik) 23.NFCS X NFCS ve TsN NFCS'nin higroskopik verimliliği, DVS TA TGA Q5000 SA analizörü kullanılarak belirlendi. Bu işlem sırasında, çalışma süresi, bağıl nem (RH) ve 25°C'de gerçek zamanlı numune ağırlığı elde edildi. Nem içeriği, aşağıdaki denklem kullanılarak doğru NFRCS kütle analizi ile hesaplandı:
MC, NFRCS nem oranını ifade eder. m1 – NSAID'lerin kuru ağırlığı. m2 ise belirli bir bağıl nemde gerçek zamanlı NFRCS kütlesidir.
Toplam yüzey alanı, numuneler 25 °C'de 10 saat boyunca (< 7 × 10–3 Torr) boşaltıldıktan sonra sıvı azot ile yapılan bir azot adsorpsiyon deneyi kullanılarak tahmin edilmiştir. Toplam yüzey alanı, numuneler 25 °C'de 10 saat boyunca (< 7 × 10–3 Torr) boşaltıldıktan sonra sıvı azot ile yapılan bir azot adsorpsiyon deneyi kullanılarak tahmin edilmiştir. Bu, bir sonraki adım için en uygun olanıdır. опорожнения образцов при 25 °С в течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). Toplam yüzey alanı, numuneler 25°C'de 10 saat boyunca (< 7 × 10–3 Torr) boşaltıldıktan sonra sıvı azot ile yapılan bir azot adsorpsiyon deneyi kullanılarak tahmin edilmiştir.在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实验估计总表面积。25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбции азота жидким азотом после опорожнения образцов в течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). Toplam yüzey alanı, numuneler 25°C'de (< 7 x 10-3 torr) 10 saat boyunca boşaltıldıktan sonra sıvı azot ile yapılan azot adsorpsiyon deneyleri kullanılarak tahmin edilmiştir.Toplam yüzey alanı, gözenek hacmi ve NFRCS gözenek boyutu, Avusturya'dan NOVA 1000e marka Quantachrome cihazı ve RS 232 yazılımı kullanılarak belirlendi.
Tam kandan %5'lik eritrositler (seyreltici olarak salin) hazırlayın. Ardından HFFC'nin (0,25 ml) bir kısmını 96 kuyucuklu bir plakaya ve %5'lik eritrosit kütlesini (0,1 ml) ekleyin. Karışımı 37°C'de 40 dakika inkübe edin. Kırmızı kan hücreleri ve serum karışımı pozitif kontrol, salin ve kırmızı kan hücreleri karışımı ise negatif kontrol olarak kabul edildi. Hemaglütinasyon, Stajitzky ölçeğine göre belirlendi. Önerilen ölçekler şu şekildedir: + + + + yoğun granüler agregatlar; + + + kavisli kenarlı düz alt pedler; + + yırtık kenarlı düz alt pedler; + düz pedlerin kenarlarında dar kırmızı halkalar; – (negatif) alt kuyucuğun ortasında belirgin kırmızı düğme 12.
NFRCS'nin hem uyumluluğu, Uluslararası Standardizasyon Örgütü (ISO) yöntemine (ISO10993-4, 1999)26,27 göre incelenmiştir. Singh ve ark. tarafından tanımlanan gravimetrik yöntemde, NFRCS'nin varlığında veya yüzeyinde trombüs oluşumunu değerlendirmek için küçük değişiklikler yapılmıştır. 500 mg Cs, Ch NFRCS ve Cp NFRCS, fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 37°C'de 24 saat inkübe edilmiştir. 24 saat sonra PBS uzaklaştırılmış ve NFRCS, %3,8 sodyum sitrat içeren 2 ml kan ile muamele edilmiştir. İnkübe edilmiş örneklere NFRCS yüzeyine 0,04 ml 0,1 M CaCl2 eklenmiştir. 45 dakika sonra pıhtılaşmayı durdurmak için 5 ml damıtılmış su eklenmiştir. NFRK yüzeyindeki pıhtılaşmış kan, %36-38 formaldehit çözeltisi ile muamele edilmiştir. Formaldehit ile sabitlenmiş pıhtılar kurutuldu ve tartıldı. Tromboz yüzdesi, kan ve örnek içermeyen bardağın (negatif kontrol) ve kan içeren bardağın (pozitif kontrol) ağırlıkları hesaplanarak tahmin edildi.
İlk doğrulama olarak, HFFC yüzey kaplamasının, Ct ara bağlantılarının ve Ct ağının gözenek oluşturma yeteneğini anlamak için örnekler optik mikroskop altında incelendi. NFRCS'den Ch ve Cp'nin ince kesitleri neşter bıçağıyla kesildi. Elde edilen kesit bir cam slayt üzerine yerleştirildi, bir örtücü camla kapatıldı ve kenarları yapıştırıcı ile sabitlendi. Hazırlanan slaytlar optik mikroskop altında incelendi ve farklı büyütmelerde fotoğraflar çekildi.
Ct ağlarındaki polimer birikimi, Rice ve diğerleri tarafından açıklanan yönteme dayalı floresan mikroskopi kullanılarak görselleştirildi.29 Formülasyonda kullanılan HFFC bileşimi, floresan bir boya (amaranth) ile karıştırıldı ve NFRCS (Ch & Cp) daha önce belirtilen yönteme göre hazırlandı. Formülasyonda kullanılan HFFC bileşimi, floresan bir boya (amaranth) ile karıştırıldı ve NFRCS (Ch & Cp) daha önce belirtilen yönteme göre hazırlandı.Formülasyon için kullanılan HFFC bileşimi, floresan bir boya (amarant) ile karıştırıldı ve daha önce belirtilen yönteme göre NFRCS (Ch ve Cp) elde edildi.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法制备NFRCS（Ch & Kp）。将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法制备NFRCS（Ch & Kp）。Formülasyonda kullanılan HFFC bileşimi, daha önce belirtildiği gibi, floresan bir boya (Amaranth) ile karıştırıldı ve NFRCS (Ch ve Cp) aldı.Elde edilen örneklerden NFRK'nın ince kesitleri alındı, cam slaytlara yerleştirildi ve lamelle kapatıldı. Hazırlanan slaytlar, yeşil filtre (310-380 nm) kullanılarak floresan mikroskop altında incelendi. Ct ilişkilerini ve Ct ağındaki fazla polimer birikimini anlamak için görüntüler 4x büyütme ile alındı.
NFRCS Ch ve Cp'nin yüzey topografisi, ultra keskin TESP kantileverli bir atomik kuvvet mikroskobu (AFM) kullanılarak, dokunma modunda belirlendi: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Tayvan. Yüzey pürüzlülüğü, yazılım (Scanning Probe Image Processor) kullanılarak kök ortalama kare (RMS) ile belirlendi. Yüzey homojenliğini kontrol etmek için çeşitli NFRCS konumları 3 boyutlu görüntülerde işlendi. Belirli bir alan için puanın standart sapması, yüzey pürüzlülüğü olarak tanımlandı. RMS denklemi, NFRCS31'in yüzey pürüzlülüğünü ölçmek için kullanıldı.
Ch NFRCS ve Cp NFRCS'nin yüzey morfolojisini anlamak için FESEM (SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokyo) kullanılarak FESEM tabanlı çalışmalar yapıldı; bu çalışmalar, Cm NFRCS'den daha iyi BCT gösterdi. FESEM çalışması, Zhao ve ark. 32 tarafından tanımlanan yönteme göre, küçük değişikliklerle gerçekleştirildi. 20 ila 30 mg Ch NFRCS ve Cp NFRCS, sıçan kanıyla önceden karıştırılmış 20 µl %3,8 sodyum sitrat ile önceden karıştırıldı. Pıhtılaşmayı başlatmak için kanla işlem görmüş örneklere 20 µl 0,2 M CaCl2 eklendi ve örnekler oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edildi. Ayrıca, fazla eritrositler NFRCS yüzeyinden tuzlu su ile durulama yoluyla uzaklaştırıldı.
Sonraki örnekler %0,1 glutaraldehit ile işlendi ve ardından nemi gidermek için 37°C'de sıcak hava fırınında kurutuldu. Kurutulmuş örnekler kaplandı ve analiz edildi 32. Analiz sırasında elde edilen diğer görüntüler, tek tek pamuk liflerinin yüzeyinde pıhtı oluşumu, Ct arasında polimer birikimi, eritrosit morfolojisi (şekli), pıhtı bütünlüğü ve NFRCS varlığında eritrosit morfolojisiydi. Kan ile inkübe edilen işlenmemiş NFRCS alanları ve Ch ve Cp ile işlenmiş NFRCS alanları, elementel iyonlar (sodyum, potasyum, azot, kalsiyum, magnezyum, çinko, bakır ve selenyum) açısından tarandı 33. Pıhtı oluşumu sırasında elementel iyon birikimini ve pıhtı homojenliğini anlamak için işlenmiş ve işlenmemiş örnekler arasındaki elementel iyon yüzdeleri karşılaştırıldı.
Ct yüzeyindeki Cp HFFC yüzey kaplamasının kalınlığı FESEM kullanılarak belirlendi. Cp NFRCS'nin kesitleri çerçeveden kesildi ve püskürtme kaplama yapıldı. Elde edilen püskürtme kaplama örnekleri FESEM ile incelendi ve yüzey kaplamasının kalınlığı ölçüldü 34 , 35 , 36 .
X-ışını mikro-BT, yüksek çözünürlüklü 3 boyutlu tahribatsız görüntüleme sağlar ve NFRK'nın iç yapısal düzenini incelemenize olanak tanır. Mikro-BT, numuneden geçen bir X-ışını demeti kullanarak numunedeki X-ışınlarının yerel doğrusal zayıflama katsayısını kaydeder ve bu da morfolojik bilgi elde etmeye yardımcı olur. Cp NFRCS ve kanla işlem görmüş Cp NFRCS'deki Ct'nin iç konumu, NFRCS37,38,39 varlığında emilim verimliliğini ve kan pıhtılaşmasını anlamak için mikro-BT ile incelenmiştir. Kanla işlem görmüş ve işlem görmemiş Cp NFRCS numunelerinin 3 boyutlu yapıları, mikro-BT (V|tome|x S240, Phoenix, Almanya) kullanılarak yeniden oluşturulmuştur. VG STUDIO-MAX yazılımı sürüm 2.2 kullanılarak, NFRCS için 3 boyutlu görüntüler geliştirmek üzere farklı açılardan (ideal olarak 360° kapsama) çeşitli X-ışını görüntüleri alınmıştır. Toplanan projeksiyon verileri, ilgili basit 3 boyutlu ScanIP Academic yazılımı kullanılarak 3 boyutlu hacimsel görüntülere yeniden oluşturulmuştur.
Ayrıca, pıhtının dağılımını anlamak için, kan pıhtılaşmasını başlatmak amacıyla NFRCS'ye 20 µl önceden karıştırılmış sitratlı kan ve 20 µl 0,2 M CaCl2 eklendi. Hazırlanan numuneler sertleşmeye bırakıldı. NFRK yüzeyi %0,5 glutaraldehit ile işlendi ve 30-40°C'de 30 dakika boyunca sıcak hava fırınında kurutuldu. NFRCS üzerinde oluşan kan pıhtısı tarandı, yeniden yapılandırıldı ve kan pıhtısının 3 boyutlu görüntüsü elde edildi.
Cp NFRCS (Ch NFRCS ile en iyi karşılaştırma) üzerinde antibakteriyel testler, daha önce açıklanan yönteme küçük değişiklikler yapılarak gerçekleştirildi. Cp NFRCS ve Cp HFFC'nin antibakteriyel aktivitesi, inkübatörde Petri kaplarında agar üzerinde büyüyen üç farklı test mikroorganizması [S.aureus (gram-pozitif bakteri), E.coli (gram-negatif bakteri) ve beyaz Candida (C.albicans)] kullanılarak belirlendi. Seyreltilmiş bakteri kültür süspansiyonunun 50 ml'si, 105-106 CFU ml-1 konsantrasyonunda agar ortamına eşit şekilde aşılandı. Ortam bir Petri kabına döküldü ve katılaşması beklendi. Agar plakasının yüzeyine HFFC ile doldurulacak kuyucuklar açıldı (HFFC için 3 kuyucuk ve negatif kontrol için 1 kuyucuk). 3 kuyucuğa 200 µl HFFC ve 4. kuyucuğa 200 µl pH 7,4 PBS eklendi. Petri kabının diğer tarafına, katılaşmış agar üzerine 12 mm'lik bir Cp NFRCS diski yerleştirin ve PBS (pH 7,4) ile nemlendirin. Siprofloksasin, ampisilin ve flukonazol tabletleri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli ve Candida albicans için referans standartlar olarak kabul edilir. İnhibisyon bölgesini elle ölçün ve inhibisyon bölgesinin dijital görüntüsünü alın.
Kurumsal etik onayının ardından, çalışma Hindistan'ın güneyindeki Karnataka eyaletinin Manipal şehrinde bulunan Kasturba Tıp Eğitim ve Araştırma Koleji'nde yürütüldü. İn vitro TEG deney protokolü, Kasturba Tıp Koleji Kurumsal Etik Kurulu (IEC: 674/2020) tarafından incelenmiş ve onaylanmıştır. Denekler, hastane kan bankasından gönüllü kan bağışçılarından (18-55 yaş arası) seçilmiştir. Ayrıca, kan örneklerinin toplanması için gönüllülerden bilgilendirilmiş onam formu alınmıştır. Cp HFFC formülasyonunun sodyum sitrat ile önceden karıştırılmış tam kan üzerindeki etkisini incelemek için doğal TEG (N-TEG) ​​kullanılmıştır. N-TEG, özellikle acil servislerde canlandırma uygulamalarında yaygın olarak kullanılmaktadır; bu durum, sonuçlarda klinik olarak önemli gecikmelere (rutin pıhtılaşma testleri) yol açma potansiyeli nedeniyle klinisyenler için sorun yaratmaktadır. N-TEG analizi tam kan kullanılarak yapılmıştır. Tüm katılımcılardan bilgilendirilmiş onam ve ayrıntılı tıbbi öykü alınmıştır. Çalışmaya gebelik/doğum sonrası veya karaciğer hastalığı gibi hemostatik veya trombotik komplikasyonları olan katılımcılar dahil edilmemiştir. Pıhtılaşma kaskadını etkileyen ilaçlar kullanan denekler de çalışmadan dışlanmıştır. Tüm katılımcılara standart prosedürlere göre temel laboratuvar testleri (hemoglobin, protrombin zamanı, aktif tromboplastin ve trombosit sayısı) yapılmıştır. N-TEG, kan pıhtısının viskoelastisitesini, başlangıç ​​pıhtı yapısını, partikül etkileşimini, pıhtı güçlenmesini ve pıhtı lizisini belirler. N-TEG analizi, çeşitli hücresel elementlerin ve plazmanın toplu etkileri hakkında grafiksel ve sayısal veriler sağlar. N-TEG analizi, iki farklı hacimde Cp HFFC (10 µl ve 50 µl) üzerinde gerçekleştirilmiştir. Sonuç olarak, 1 ml sitrik asitli tam kan, 10 µl Cp HFFC'ye eklenmiştir. 1 ml (Cp HFFC + sitratlı kan), 340 µl karışık kan, 20 µl 0,2 M CaCl2 içeren TEG kabına eklenmiştir. Daha sonra, TEG kapları, Cp HFFC41 varlığında kan örneklerinin %30'unun R, K, alfa açısı, MA, G, CI, TPI, EPL, LY değerlerini ölçmek için TEG® 5000, ABD cihazına yerleştirildi.
İn vivo çalışma protokolü, Manipal Yüksek Öğrenim Enstitüsü, Kasturba Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Etiği Komitesi (IAEC) tarafından incelenmiş ve onaylanmıştır (IAEC/KMC/69/2020). Tüm hayvan deneyleri, Hayvan Deneylerinin Kontrolü ve Denetimi Komitesi (CPCSEA) tavsiyelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm in vivo NFRCS çalışmaları (2 × 2 cm2), dişi Wistar sıçanları (200-250 g ağırlığında) üzerinde yapılmıştır. Tüm hayvanlar 24-26°C sıcaklıkta alıştırılmış, standart yem ve suya serbestçe erişimleri sağlanmıştır. Tüm hayvanlar rastgele farklı gruplara ayrılmış, her grup üç hayvandan oluşmuştur. Tüm çalışmalar, Hayvan Çalışmaları: İn Vivo Deney Raporu 43'e uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Çalışmadan önce hayvanlar, vücut ağırlığının her 1 kg'ı için 20-50 mg ketamin ve 2-10 mg ksilazin karışımının intraperitoneal (ip) yolla uygulanmasıyla anestezi altına alındı. Çalışmadan sonra, örneklerin başlangıç ​​ve son ağırlıkları arasındaki fark değerlendirilerek kanama hacmi hesaplandı; üç testten elde edilen ortalama değer, örneğin kanama hacmi olarak kabul edildi.
Travma, savaş veya trafik kazası (yaralanma modeli) durumlarında kanamayı düzenleme potansiyelini anlamak için sıçan kuyruğu amputasyon modeli uygulandı. Normal kanamayı sağlamak için kuyruğun %50'si neşter bıçağıyla kesildi ve 15 saniye boyunca havada bekletildi. Ayrıca, test örnekleri basınç uygulanarak sıçanın kuyruğuna yerleştirildi (Ct, Cs, Ch NFRCS ve Cp NFRCS). Test örnekleri için kanama ve PCT değerleri rapor edildi (n=3)17,45.
Savaş ortamında NFRCS basınç kontrolünün etkinliği, yüzeysel femoral arter modeli üzerinde araştırıldı. Femoral arter açığa çıkarıldı, 24G trokar ile delindi ve 15 saniye içinde kanama sağlandı. Kontrolsüz kanama gözlemlendikten sonra, test örneği basınç uygulanarak delme bölgesine yerleştirildi. Test örneğinin uygulanmasından hemen sonra pıhtılaşma süresi kaydedildi ve sonraki 5 dakika boyunca hemostatik etkinlik gözlemlendi. Aynı işlem Cs ve Ct46 ile tekrarlandı.
Dowling ve ark. 47, intraoperatif kanama bağlamında hemostatik malzemelerin hemostatik potansiyelini değerlendirmek için bir karaciğer hasarı modeli önerdi. BCT, Ct örnekleri (negatif kontrol), Cs çerçevesi (pozitif kontrol), Ch NFRCS örnekleri ve Cp NFRCS örnekleri için kaydedildi. Sıçanın suprahepatik vena kavası, median laparotomi yapılarak açığa çıkarıldı. Daha sonra, sol lobun distal kısmı makasla kesildi. Karaciğerde neşter bıçağıyla bir kesi yapıldı ve birkaç saniye kanamaya bırakıldı. Hassas bir şekilde tartılmış Ch NFRCS ve Cp NFRCS test örnekleri, herhangi bir pozitif basınç uygulanmadan hasarlı yüzeye yerleştirildi ve BCT kaydedildi. Kontrol grubu (Ct) daha sonra basınç uyguladı, ardından Cs 30 s47 hasarı kırmadan uygulandı.
Geliştirilen polimer bazlı NFRCS'lerin yara iyileştirme özelliklerini değerlendirmek için eksizyonel yara modeli kullanılarak in vivo yara iyileşme deneyleri yapıldı. Eksizyonel yara modelleri, daha önce yayınlanmış yöntemlere göre küçük değişikliklerle seçildi ve uygulandı19,32,48. Tüm hayvanlar daha önce açıklandığı gibi anestezi altına alındı. Sırt derisinde dairesel derin bir kesi yapmak için bir biyopsi zımbası (12 mm) kullanıldı. Hazırlanan yara bölgeleri Cs (pozitif kontrol), Ct (pamuk pedlerin iyileşmeyi engellediğini kabul ederek), Ch NFRCS ve Cp NFRCS (deney grubu) ve herhangi bir tedavi uygulanmayan negatif kontrol ile pansuman edildi. Çalışmanın her gününde, tüm sıçanlarda yara alanı ölçüldü. Yara alanının fotoğrafını çekmek için dijital bir kamera kullanıldı ve yeni bir pansuman uygulandı. Yara kapanma yüzdesi aşağıdaki formülle ölçüldü:
Çalışmanın 12. günündeki yara kapanma yüzdesine göre, en iyi grubun ((Cp NFRCS) ve kontrol grubunun) sıçan derisi kesilerek H&E boyama ve Masson trikrom boyama yöntemleriyle incelendi. Çalışmanın 12. günündeki yara kapanma yüzdesine göre, en iyi grubun ((Cp NFRCS) ve kontrol grubunun) sıçan derisi kesilerek H&E boyama ve Masson trikrom boyama yöntemleriyle incelendi.Çalışmanın 12. günündeki yara kapanma yüzdesine göre, en iyi gruptaki ((Cp NFRCS) ve kontrol grubu) sıçanların derileri kesilerek hematoksilin-eozin ve Masson trikrom boyama yöntemleriyle incelendi.根据研究第12天的伤口闭合百分比,切除最佳组((Cp NFRCS) ile H&E'nin ortak çalışması ve Masson'un ortak çalışması.根据研究第12天的伤口闭合百分比,切除最佳组((Cp NFRCS) ve H&E'nin diğer bilgileri)En iyi gruptaki ((Cp NFRCS) ve kontrol gruplarındaki) sıçanlar, çalışmanın 12. gününde yara kapanma yüzdesine göre hematoksilin-eozin boyama ve Masson trikrom boyama için çıkarıldı.Uygulanan boyama prosedürü, daha önce açıklanan yöntemlere göre gerçekleştirildi49,50. Kısaca, %10 formalin içinde fiksasyondan sonra, örnekler kademeli alkol serisi kullanılarak dehidrate edildi. Kesilen dokunun ince kesitlerini (5 µm kalınlığında) elde etmek için bir mikrotom kullanıldı. Kontrollerin ve Cp NFRCS'nin ince seri kesitleri, histopatolojik değişiklikleri incelemek için hematoksilin ve eozin ile işlendi. Kollajen fibrillerinin oluşumunu tespit etmek için Masson'un trikrom boyası kullanıldı. Elde edilen sonuçlar patologlar tarafından kör olarak incelendi.
Cp NFRCS numunelerinin stabilitesi, oda sıcaklığında (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) 12 ay boyunca incelenmiştir51. Cp NFRCS (yüzey renk değişimi ve mikrobiyal büyüme), Malzeme ve Yöntemler bölümünde belirtilen yukarıdaki yöntemlere göre görsel olarak incelenmiş ve katlanma aşınma direnci ve BCT açısından test edilmiştir.
Cp NFRCS'nin ölçeklenebilirliği ve tekrarlanabilirliği, 15×15 cm2 boyutunda Cp NFRCS hazırlanarak incelenmiştir. Ayrıca, çeşitli Cp NFRCS fraksiyonlarından 30 mg'lık örnekler (n = 5) alınmış ve incelenen örneklerin BCT'si, Yöntemler bölümünde daha önce açıklandığı gibi değerlendirilmiştir.
Çeşitli biyomedikal uygulamalar için Cp NFRCS bileşimlerini kullanarak çeşitli şekil ve yapılar geliştirmeye çalıştık. Bu şekil veya konfigürasyonlar arasında burun kanamaları, diş işlemleri için konik pamuklu çubuklar ve vajinal kanama için silindirik pamuklu çubuklar bulunmaktadır.
Tüm veri setleri ortalama ± standart sapma olarak ifade edildi ve Prism 5.03 (GraphPad, San Diego, CA, ABD) kullanılarak ANOVA ile analiz edildi, ardından Bonferroni çoklu karşılaştırma testi uygulandı (*p<0.05).
İnsan çalışmalarında gerçekleştirilen tüm prosedürler, Enstitü ve Ulusal Araştırma Konseyi standartlarına, 1964 Helsinki Bildirgesi ve sonraki değişikliklerine veya benzer etik standartlara uygun olarak yapılmıştır. Tüm katılımcılar, çalışmanın özellikleri ve gönüllülük esasına dayalı yapısı hakkında bilgilendirilmiştir. Katılımcı verileri toplandıktan sonra gizli kalır. İn vitro TEG deney protokolü, Kasturba Tıp Fakültesi, Manipal, Karnataka Kurumsal Etik Kurulu tarafından incelenmiş ve onaylanmıştır (IEC: 674/2020). Gönüllüler, kan örneklerinin toplanması için bilgilendirilmiş onam formunu imzalamışlardır.
Hayvan çalışmalarında gerçekleştirilen tüm prosedürler, Manipal Yüksek Öğrenim Enstitüsü, Kastuba Tıp Fakültesi (IAEC/KMC/69/2020) yönergelerine uygun olarak yürütülmüştür. Tasarlanan tüm hayvan deneyleri, Hayvan Deneylerinin Kontrolü ve Denetimi Komitesi (CPCSEA) yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm yazarlar ARRIVE yönergelerine uymaktadır.
Tüm NFRCS'lerin FTIR spektrumları analiz edildi ve Şekil 2A'da gösterilen kitosan spektrumu ile karşılaştırıldı. Kitosan'ın karakteristik spektral pikleri (kaydedilen) 3437 cm-1'de (OH ve NH gerilmesi, örtüşme), 2945 ve 2897 cm-1'de (CH gerilmesi), 1660 cm-1'de (NH2 gerilmesi), 1589 cm-1'de (N–H bükülmesi), 1157 cm-1'de (köprü gerilmesi O-), 1067 cm-1'de (gerilme C–O, ikincil hidroksil), 993 cm-1'de (gerilme CO, Bo-OH) 52.53.54'tedir. Ek Tablo S1, kitosan (raporlayıcı), saf kitosan, Cm, Ch ve Cp için FTIR NFRCS absorpsiyon spektrum değerlerini göstermektedir. Tüm NFRCS'lerin (Cm, Ch ve Cp) FTIR spektrumları, saf kitosan ile aynı karakteristik soğ soğurma bantlarını önemli bir değişiklik olmaksızın gösterdi (Şekil 2A). FTIR sonuçları, NFRCS'leri geliştirmek için kullanılan polimerler arasında kimyasal veya fiziksel etkileşimlerin olmadığını doğruladı ve kullanılan polimerlerin inert olduğunu gösterdi.
Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS ve Cs'nin in vitro karakterizasyonu. (A) Sıkıştırma altında kitosan ve Cm NFRCS, Ch NFRCS ve Cp NFRCS bileşimlerinin birleştirilmiş FTIR spektrumlarını temsil eder. (B) a) NFRCS Cm, Ch, Cp ve Cg'nin tam kan emilim oranı (n = 3); Ct örnekleri, pamuklu çubuğun daha yüksek emilim verimliliğine sahip olması nedeniyle daha yüksek bir BAR gösterdi; b) Kan emiliminden sonraki kan. Emilen örneğin gösterimi. Test örneği C'nin BCT'sinin grafiksel gösterimi (Cp NFRCS en iyi BCT'ye sahipti (15 s, n = 3)). C, D, E ve G'deki veriler ortalama ± standart sapma olarak gösterilmiştir ve hata çubukları standart sapmayı temsil etmektedir, ***p < 0.0001. C, D, E ve G'deki veriler ortalama ± standart sapma olarak gösterilmiştir ve hata çubukları standart sapmayı temsil etmektedir, ***p < 0.0001. C, D, E ve G'deki değişiklikler, aynı zamanda ± стандартное отклонение, а планки погрешностей представляют стандартное отклонение, ***p <0,0001. C, D, E ve G'deki veriler ortalama ± standart sapma olarak sunulmuştur ve hata çubukları standart sapmayı temsil etmektedir, ***p<0.0001. C、D、E veG 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0,0001。 C、D、E veG 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0,0001。 C, D, E ve G'de değişiklik yapmak, aynı zamanda daha iyi bir seçim yapmak için, daha sonra önceden planlanmış bir şekilde yapılmasına izin verir. стандартное отклонение, ***p <0,0001. C, D, E ve G'deki veriler ortalama ± standart sapma olarak gösterilmiştir, hata çubukları standart sapmayı temsil eder, ***p<0.0001.