Nature.com'u ziyaret ettiğiniz için teşekkür ederiz.Kullanmakta olduğunuz tarayıcı sürümü sınırlı CSS desteğine sahiptir.En iyi deneyim için güncellenmiş bir tarayıcı kullanmanızı (veya Internet Explorer'da Uyumluluk Modunu devre dışı bırakmanızı) öneririz.Bu arada, sürekli destek sağlamak için siteyi stiller ve JavaScript olmadan yapacağız.
Kontrolsüz kanama, önde gelen ölüm nedenlerinden biridir.Hızlı hemostazın sağlanması, muharebe, trafik kazaları ve ölüm azaltma operasyonlarında ilk yardım olarak deneğin hayatta kalmasını sağlar.Sürekli bir faz olarak basit bir hemostatik film oluşturucu bileşimden (HFFC) türetilen nano gözenekli fiberle güçlendirilmiş kompozit yapı iskelesi (NFRCS), hemostazı tetikleyebilir ve artırabilir.NFRCS'nin gelişimi, yusufçuk kanadının tasarımına dayanmaktadır.Yusufçuk kanat yapısı enine ve boyuna kanatlardan oluşur ve mikro yapının bütünlüğünü korumak için kanat zarları birbirine bağlanır.HFFC, elyafın yüzeyini nanometre kalınlığında bir filmle eşit şekilde kaplar ve nano gözenekli bir yapı oluşturmak için rastgele dağılmış pamuk kalınlığını (Ct) (dağılmış faz) birleştirir.Sürekli ve dağınık fazların kombinasyonu, ticari olarak temin edilebilen ürünlere kıyasla ürünün maliyetini on kat azaltır.Modifiye edilmiş NFRCS (tamponlar veya bileklikler) çeşitli biyomedikal uygulamalarda kullanılabilir.İn vivo çalışmalar, geliştirilen Cp NFRCS'nin uygulama yerinde pıhtılaşma sürecini tetiklediği ve geliştirdiği sonucuna varmıştır.NFRCS, eksizyon yara modelinde daha iyi yara iyileşmesi sağlayan nano gözenekli yapısı nedeniyle mikro ortamı modüle edebilir ve hücresel düzeyde hareket edebilir.
Çatışma, operasyon sırasında ve acil durumlarda kontrolsüz kanama, yaralının yaşamı için ciddi bir tehdit oluşturabilir1.Bu koşullar ayrıca periferik vasküler dirençte genel bir artışa yol açarak hemorajik şoka yol açar.Ameliyat sırasında ve sonrasında kanamayı kontrol altına almak için uygun önlemlerin potansiyel olarak yaşamı tehdit edici olduğu kabul edilir2,3.Büyük damarların hasar görmesi, büyük kan kaybına yol açarak savaşta ≤ %50 ve ameliyat sırasında %31 ölüm oranıyla sonuçlanır1.Büyük kan kaybı, kalp debisini azaltan vücut hacminde bir azalmaya yol açar.Toplam periferik vasküler direncin artması ve mikrodolaşımın ilerleyici bir şekilde bozulması, yaşam destek organlarında hipoksiye yol açar.Durum etkili müdahale olmaksızın devam ederse hemorajik şok meydana gelebilir1,4,5.Diğer komplikasyonlar arasında hipotermi ve metabolik asidozun yanı sıra pıhtılaşma sürecini engelleyen bir pıhtılaşma bozukluğu yer alır.Şiddetli hemorajik şok, daha yüksek ölüm riski ile ilişkilidir6,7,8.Derece III (progresif) şokta, intraoperatif ve postoperatif morbidite ve mortalite sırasında hastanın hayatta kalması için kan transfüzyonu esastır.Yukarıdaki tüm yaşamı tehdit eden durumların üstesinden gelmek için, suda çözünür hemostatik polimerlerin bir kombinasyonunu kullanarak minimum polimer konsantrasyonu (%0,5) kullanan nano gözenekli fiberle güçlendirilmiş kompozit bir yapı iskelesi (NFRCS) geliştirdik.
Fiber takviye kullanımı ile uygun maliyetli ürünler geliştirilebilir.Rastgele dizilmiş lifler, kanatlardaki yatay ve dikey çizgilerle dengelenmiş bir yusufçuğun kanat yapısını andırır.Kanadın enine ve boyuna damarları, kanat zarı ile iletişim kurar (Şekil 1).NFRCS, daha iyi fiziksel ve mekanik mukavemete sahip bir iskele sistemi olarak güçlendirilmiş Ct'den oluşur (Şekil 1).Maliyeti ve işçiliği nedeniyle, cerrahlar ameliyatlar ve pansumanlar sırasında pamuk ipliği mastarları (Ct) kullanmayı tercih ederler. Bu nedenle, > %90 kristalli selüloz (hemostatik aktivitenin arttırılmasında rol oynar) dahil olmak üzere çoklu faydaları göz önüne alındığında, Ct, NFRCS'nin iskelet sistemi olarak kullanılmıştır9,10. Bu nedenle, > %90 kristalli selüloz (hemostatik aktivitenin arttırılmasında rol oynar) dahil olmak üzere çoklu faydaları göz önüne alındığında, Ct, NFRCS'nin iskelet sistemi olarak kullanılmıştır9,10. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической целлюлозы (участвуетва) в повышении гемостатической активности), Ct использовали в скелетной системы NFC9,10. Bu nedenle, >%90 kristalli selüloz (artan hemostatik aktivitede yer alır) dahil olmak üzere birçok faydası göz önüne alındığında, Ct, NFRCS iskelet sistemi9,10 olarak kullanıldı.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% ,10 的骨架系统。90%Bu nedenle, %90'ın üzerinde kristalli selüloz (hemostatik aktiviteyi artırmaya yardımcı olur) dahil birçok faydası göz önüne alındığında, Ct, NFRCS9,10 için bir yapı iskelesi olarak kullanıldı.Ct yüzeysel olarak kaplandı (nano-kalın film oluşumu gözlemlendi) ve hemostatik film oluşturucu bir bileşim (HFFC) ile birbirine bağlandı.HFFC, rastgele yerleştirilmiş Ct'yi bir arada tutan bir matrigel gibi davranır.Geliştirilen tasarım, gerilimi dağılmış faz (takviye edici lifler) içinde iletir.Minimum polimer konsantrasyonlarını kullanarak iyi mekanik dayanıma sahip nano gözenekli yapılar elde etmek zordur.Ayrıca farklı biyomedikal uygulamalar için farklı kalıpları özelleştirmek kolay değildir.
Şekil, yusufçuk kanat yapısına (A) dayalı NFRCS tasarımının bir diyagramını göstermektedir.Bu görüntü, bir yusufçuğun kanat yapısının karşılaştırmalı bir analojisini (kanadın kesişen ve uzunlamasına damarları birbirine bağlıdır) ve Cp NFRCS'nin (B) enine kesitsel bir fotomikrografisini göstermektedir.NFRCS'nin şematik gösterimi.
NFRC'ler, yukarıdaki sınırlamaları ele almak için sürekli bir aşama olarak HFFC kullanılarak geliştirilmiştir.HFFC, trombüs oluşumunu teşvik eden bir destek polimeri olarak metilselüloz (MC), hidroksipropil metilselüloz (HPMC 50 cp) ve polivinil alkol (PVA)) (125 kDa) ile kitosan (ana hemostatik polimer olarak) dahil olmak üzere çeşitli film oluşturucu hemostatik polimerlerden oluşur.oluşum.Polivinilpirolidin K30 (PVP K30) ilavesi, NFRCS'nin nem emme kapasitesini iyileştirdi.Bağlı polimer harmanlarında polimer çapraz bağlanmasını iyileştirmek için polietilen glikol 400 (PEG 400) eklendi.Ct'ye üç farklı HFFC hemostatik bileşimi (Cm HFFC, Ch HFFC ve Cp HFFC), yani MC'li kitosan (Cm), HPMC'li kitosan (Ch) ve PVA'lı kitosan (Cp) uygulandı.Çeşitli in vitro ve in vivo karakterizasyon çalışmaları, NFRCS'nin hemostatik ve yara iyileştirme aktivitesini doğrulamıştır.NFRCS tarafından sunulan kompozit malzemeler, belirli ihtiyaçları karşılamak için çeşitli iskele biçimlerini özelleştirmek için kullanılabilir.
Ek olarak, NFRCS, alt ekstremitelerin ve vücudun diğer bölümlerinin tüm yaralanma alanını kapsayacak şekilde bir bandaj veya rulo olarak modifiye edilebilir.Özellikle muharebe uzuv yaralanmaları için, tasarlanan NFRCS tasarımı yarım kol veya tam bacak olarak değiştirilebilir (Ek Şekil S11).NFRCS, ciddi intihar bilek yaralanmalarından kaynaklanan kanamayı durdurmak için kullanılabilen doku yapıştırıcılı bir bileklik haline getirilebilir.Ana hedefimiz, büyük bir nüfusa (yoksulluk sınırının altında) teslim edilebilecek ve bir ilk yardım çantasına yerleştirilebilecek, mümkün olduğunca az polimer içeren bir NFRCS geliştirmektir.Tasarım açısından basit, verimli ve ekonomik olan NFRCS, yerel topluluklara fayda sağlar ve küresel bir etkiye sahip olabilir.
Kitosan (molekül ağırlığı 80 kDa) ve amaranth, Merck, Hindistan'dan satın alınmıştır.Hidroksipropil metilselüloz 50 Cp, polietilen glikol 400 ve metilselüloz, Loba Chemie Pvt.LLC, Bombay.Polivinil alkol (molekül ağırlığı 125 kDa) (%87-90 hidrolize edilmiş) National Chemicals, Gujarat'tan satın alınmıştır.Polivinilpirolidin K30, Molychem, Mumbai'den satın alındı; steril çubuklar, taşıyıcı olarak Milli Q su (Direct-Q3 su arıtma sistemi, Merck, Hindistan) ile Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu'dan satın alındı.
NFRCS, bir liyofilizasyon yöntemi11,12kullanılarak geliştirilmiştir.Tüm HFFC bileşimleri (Tablo 1) mekanik bir karıştırıcı kullanılarak hazırlandı.Mekanik bir karıştırıcı üzerinde 800 rpm'de sürekli karıştırarak suda %1 asetik asit kullanarak %0,5'lik bir kitosan çözeltisi hazırlayın.Tablo l'de belirtilen yüklü polimerin tam ağırlığı kitosan solüsyonuna ilave edildi ve berrak bir polimer solüsyonu elde edilene kadar karıştırıldı.Elde edilen karışıma Tablo l'de belirtilen miktarlarda PVP K30 ve PEG 400 ilave edildi ve berrak, viskoz bir polimer çözeltisi elde edilene kadar karıştırmaya devam edildi.Nihai polimer çözeltisi banyosu, polimer karışımından hapsolmuş hava kabarcıklarını çıkarmak için 60 dakika sonike edildi.Ek Şekil S1 (b)'de gösterildiği gibi, Ct, 5 ml HFFC ile takviye edilmiş 6 oyuklu bir plakanın (kalıp) her bir oyuğuna eşit şekilde dağıtıldı.
Altı oyuklu plaka, Ct ağında HFFC'nin tekdüze ıslanmasını ve dağılımını elde etmek için 60 dakika süreyle ultrasonik banyoya tabi tutuldu.Daha sonra altı kuyulu plakayı -20°C'de 8-12 saat dondurun.Dondurma plakaları, çeşitli NFRCS formülasyonları elde etmek için 48 saat liyofilize edildi.Tamponlar veya silindirik tamponlar gibi farklı şekiller ve yapılar veya farklı uygulamalar için başka herhangi bir şekil üretmek için aynı prosedür kullanılır.
Doğru tartılmış kitosan (80 kDa) (%3) manyetik bir karıştırıcı kullanılarak %1 asetik asit içinde çözülür.Ortaya çıkan kitosan solüsyonuna %1 PEG 400 eklendi ve 30 dakika karıştırıldı.Ortaya çıkan solüsyonu kare veya dikdörtgen bir kaba dökün ve -80°C'de 12 saat dondurun.Dondurulmuş numuneler, gözenekli Cs13 elde etmek için 48 saat liyofilize edildi.
Geliştirilen NFRCS, kitosanın diğer polimerlerle kimyasal uyumluluğunu doğrulamak için Fourier dönüşümü kızılötesi spektroskopisi (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Tokyo, Japonya) kullanılarak deneylere tabi tutuldu14,15.Test edilen tüm numunelerin FTIR spektrumları (spektral aralığın genişliği 400 ila 4000 cm-1) 32 tarama yapılarak elde edildi.
Tüm formülasyonlar için kan emme oranı (BAR), Chen ve diğerleri tarafından açıklanan yöntem kullanılarak değerlendirildi.16 küçük değişikliklerle.Tüm bileşimlerin geliştirilmiş NFRK'leri, artık solventi uzaklaştırmak için bir vakumlu fırında 105°C'de gece boyunca kurutuldu.30 mg NFRCS (başlangıç ​​numune ağırlığı – W0) ve 30 mg Ct (pozitif kontrol), %3.8 sodyum sitrat ön karışımı içeren ayrı kaplara yerleştirildi.Önceden belirlenen zaman aralıklarında, yani 5, 10, 20, 30, 40 ve 60 saniye, NFRCS çıkarıldı ve numuneler 30 saniye Ct üzerinde tutularak emilmemiş kan yüzeylerinden temizlendi.NFRCS 16 tarafından emilen kanın nihai ağırlığı, her zaman noktasında (W1) olarak kabul edildi.Aşağıdaki formülü kullanarak BAR yüzdesini hesaplayın:
Kan pıhtılaşma süresi (BCT), Wang ve ark.17.Tam kanın (%3.8 sodyum sitrat ile önceden karıştırılmış sıçan kanı) NFRCS varlığında pıhtılaşması için gereken süre, test örneğinin BCT'si olarak hesaplandı.Çeşitli NFRCS bileşenleri (30 mg), 10 ml'lik vidalı kapaklı şişelere yerleştirildi ve 37°C'de inkübe edildi.Şişeye kan (0.5 mi) ilave edildi ve kan pıhtılaşmasını etkinleştirmek için 0.3 ml 0.2 M CaCl2 ilave edildi.Son olarak, sert bir pıhtı oluşana kadar şişeyi her 15 saniyede bir (180°'ye kadar) ters çevirin.Numunenin BCT'si, 17,18'in tersine çevirme sayısına göre tahmin edilir.BCT'ye dayalı olarak, daha ileri karakterizasyon çalışmaları için NFRCS Cm, Ch ve Cp'den iki optimal bileşim seçildi.
Ch NFRCS ve Cp NFRCS bileşimlerinin BCT'si, Li ve diğ.19.Ayrı Petri kutularına (37 °C) 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS ve Cs (pozitif kontrol) yerleştirin.%3,8 sodyum sitrat içeren kan, 0,2 M CaCl2 ile 10:1 hacim oranında karıştırılarak kanın pıhtılaşma süreci başlatıldı.Örnek yüzeyine 20 µl 0,2 M CaCl2 sıçan kanı karışımı uygulandı ve boş bir Petri kabına yerleştirildi.Kontrol, Ct'siz boş Petri kaplarına dökülen kandı.0, 3 ve 5 dakikalık sabit aralıklarla, pıhtıyı bozmadan kabı içeren numuneye 10 ml deiyonize (DI) su ekleyerek pıhtılaşmayı durdurun.Pıhtılaşmamış eritrositler (eritrositler), deiyonize su varlığında hemolize uğrar ve hemoglobini serbest bırakır.Farklı zaman noktalarında (HA(t)) hemoglobin, bir UV-Vis spektrofotometre kullanılarak 540 nm'de (λmaks hemoglobin) ölçülmüştür.10 ml deiyonize su içinde 20 µl kanın 0 dakikada mutlak hemoglobin absorpsiyonu (AH(0)) referans standart olarak alınmıştır.Pıhtılaşmış kanın bağıl hemoglobin alımı (RHA), aynı kan partisi kullanılarak HA(t)/HA(0) oranından hesaplandı.
Bir doku analiz cihazı (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, ABD) kullanılarak, NFRK'nın hasarlı dokuya yapışma özellikleri belirlendi.Domuz derisinin iç kısmına (yağ tabakası olmadan) açık tabanlı silindirik bir tabak bastırın.Örnekler (Ch NFRCS ve Cp NFRCS), domuzun derisine yapışma oluşturmak için kanül yoluyla silindirik kalıplara uygulandı.Oda sıcaklığında (RT) (25°C) 3 dakikalık bir inkübasyondan sonra, NFRCS yapışkan gücü 0.5 mm/sn'lik sabit bir oranda kaydedildi.
Cerrahi örtücülerin temel özelliği kan kaybını azaltırken kanın pıhtılaşmasını arttırmasıdır.NFRCS'de kayıpsız pıhtılaşma, hafif değişiklikler 19 ile daha önce yayınlanmış bir yöntem kullanılarak değerlendirildi.Santrifüj tüpünün bir tarafında 8 × 5 mm2'lik bir delik bulunan (açık bir yarayı temsil eden) bir mikrosantrifüj tüpü (2 ml) (iç çapı 10 mm) yapın.Açıklığı kapatmak için NFRCS kullanılır ve dış kenarları kapatmak için bant kullanılır.%3,8 sodyum sitrat ön karışımını içeren mikrosantrifüj tüpüne 20 µl 0,2 M CaCl2 ekleyin.10 dakika sonra mikrosantrifüj tüpleri tabaklardan çıkarıldı ve NFRK'dan kan çıkışına bağlı olarak tabakların kütlesindeki artış belirlendi (n=3).Kan kaybı Ch NFRCS ve Cp NFRCS, Cs ile karşılaştırıldı.
NFRCS'nin ıslak bütünlüğü, küçük değişikliklerle Mishra ve Chaudhary21 tarafından açıklanan yönteme göre belirlendi.NFRCS'yi 50 ml su ile 100 ml'lik bir Erlenmeyer şişesine yerleştirin ve tepe oluşturmadan 60 saniye karıştırın.Toplama temelinde fiziksel bütünlük için numunelerin görsel muayenesi ve önceliklendirilmesi.
HFFC'nin Ct'ye bağlanma gücü, küçük değişikliklerle daha önce yayınlanmış yöntemler kullanılarak incelenmiştir.Yüzey kaplama bütünlüğü, NFRK'yı milliQ su (Ct) varlığında akustik dalgalara (dış uyaran) maruz bırakarak değerlendirildi.Geliştirilen NFRCS Ch NFRCS ve Cp NFRCS, su ile doldurulmuş bir behere yerleştirildi ve sırasıyla 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ve 30 dakika sonike edildi.Kurutmadan sonra, malzeme kaybı yüzdesini (HFFC) hesaplamak için NFRCS'nin başlangıç ​​ve son ağırlığı arasındaki yüzde farkı kullanıldı.In vitro BCT ayrıca yüzey malzemelerinin bağlanma kuvvetini veya kaybını destekledi.HFFC'nin Ct'ye bağlanmasının etkinliği, kanın pıhtılaşmasını ve Ct22'nin yüzeyinde elastik bir kaplama sağlar.
Geliştirilen NFRCS'nin homojenliği, NFRCS'nin rastgele seçilen genel konumlarından alınan numunelerin (30 mg) BCT'si ile belirlendi.NFRCS uyumluluğunu belirlemek için daha önce belirtilen BCT prosedürünü izleyin.Beş numunenin tümü arasındaki yakınlık, Ct ağında düzgün yüzey kaplaması ve HFFC birikimi sağlar.
Nominal kan temas alanı (NBCA), bazı değişikliklerle daha önce bildirildiği gibi belirlendi.Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS ve Cs'nin iki yüzeyi arasına 20 µl kan sıkıştırarak kanı pıhtılaştırın.1 saat sonra stentin iki parçası ayrıldı ve pıhtının alanı manuel olarak ölçüldü.Üç tekrarın ortalama değeri NBCA NFRCS19 olarak kabul edildi.
Dinamik Buhar Emme (DVS) analizi, NFRCS'nin dış ortamdan veya pıhtılaşmayı başlatmaktan sorumlu yaralanma bölgesinden su emme etkinliğini değerlendirmek için kullanıldı.DVS, kütle çözünürlüğü ±0,1 µg olan ultra hassas bir terazi kullanarak bir numunedeki buhar alımını ve kaybını gravimetrik olarak değerlendirir veya kaydeder.Bir kısmi buhar basıncı (bağıl nem), doymuş ve kuru taşıyıcı gazların karıştırılmasıyla numunenin etrafında bir elektronik kütle akış kontrolörü tarafından üretilir. Avrupa Farmakopesi yönergelerine göre, numunelerin nem alma yüzdesine dayalı olarak numuneler 4 kategoriye ayrıldı (%0–0,012 a/a - higroskopik olmayan, %0,2–2 a/a hafif higroskopik, %2–15 orta derecede higroskopik ve > %15 çok higroskopik)23. Avrupa Farmakopesi yönergelerine göre, numunelerin nem alma yüzdesine dayalı olarak, numuneler 4 kategoriye ayrılmıştır (%0–0,012 a/a - higroskopik olmayan, %0,2–2 a/a hafif higroskopik, %2–15 orta derecede higroskopik ve > %15 çok higroskopik)23.Avrupa Farmakopesi tavsiyelerine uygun olarak, numuneler tarafından nem absorpsiyon yüzdesine bağlı olarak numuneler 4 kategoriye ayrıldı (%0–0,012 w/w – higroskopik olmayan, %0,2–2 w/w hafif higroskopik, %2–15).% умеренно гигроскопичен ve > %15 очень гигроскопичен)23. % orta derecede higroskopik ve > %15 çok higroskopik)23.%0-0.012 w/w- 非吸湿性, %0.2-2 w/w轻微吸湿性、2-15 % 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23。W/W- 吸湿 性 、 、 、 、 %0,2-2 W/wAvrupa Farmakopesi tavsiyelerine uygun olarak numuneler, emdiği nem yüzdesine göre 4 sınıfa ayrılır (ağırlıkça %0-0,012 – higroskopik olmayan, ağırlıkça %0,2-2 hafif higroskopik, ağırlıkça %2-15).% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % orta derecede higroskopik, > %15 çok higroskopik) 23.NFCS X NFCS ve TsN NFCS'nin higroskopik etkinliği, bir DVS TA TGA Q5000 SA analiz cihazında belirlendi.Bu işlem sırasında çalışma süresi, bağıl nem (RH) ve 25°C24'te gerçek zamanlı numune ağırlığı elde edildi.Nem içeriği, aşağıdaki denklem kullanılarak doğru NFRCS kütle analizi ile hesaplanır:
MC, NFRCS nemidir.m1 – NSAID'lerin kuru ağırlığı.m2, belirli bir bağıl nemde gerçek zamanlı NFRCS kütlesidir.
Toplam yüzey alanı, numuneleri 25 °C'de 10 saat (< 7 x 10–3 Torr) boşalttıktan sonra sıvı nitrojenle bir nitrojen adsorpsiyon deneyi kullanılarak tahmin edildi. Toplam yüzey alanı, numuneleri 25 °C'de 10 saat (< 7 x 10–3 Torr) boşalttıktan sonra sıvı nitrojenle bir nitrojen adsorpsiyon deneyi kullanılarak tahmin edildi. Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азота жидким азотом после опорожн ения образцов при 25 °С в течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). Toplam yüzey alanı, numuneler 25°C'de 10 saat (< 7 x 10–3 Torr) boşaltıldıktan sonra sıvı nitrojenle bir nitrojen adsorpsiyon deneyi kullanılarak tahmin edildi.在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实验估计总表面积。25°C Общая площадь поверхности оценивалась с спользованием экспериментов по адсорбции азота жидким азотом после опо 25°C'de (< 7 × 10-3 üc) 10 sıcaklıkta ısıtılır. Toplam yüzey alanı, numuneler 25°C'de (< 7 x 10-3 torr) 10 saat boşaltıldıktan sonra sıvı nitrojenle nitrojen adsorpsiyon deneyleri kullanılarak tahmin edildi.Toplam yüzey alanı, gözenek hacmi ve NFRCS gözenek boyutu, RS 232 yazılımı kullanılarak NOVA 1000e, Avusturya'dan bir Quantachrome ile belirlendi.
Tam kandan %5 RBC (seyreltici olarak salin) hazırlayın.Daha sonra bir HFFC (0.25 mi) miktarını 96 oyuklu bir plakaya ve %5 RBC kütlesine (0.1 mi) aktarın.Karışımı 37°C'de 40 dakika inkübe edin.Kırmızı kan hücreleri ve serum karışımı pozitif kontrol olarak, salin ve kırmızı kan hücreleri karışımı ise negatif kontrol olarak kabul edildi.Hemaglutinasyon, Stajitzky ölçeğine göre belirlendi.Önerilen ölçekler aşağıdaki gibidir: + + + + yoğun taneli agregalar;+ + + kavisli kenarlara sahip düz alt pedler;+ + kenarları yırtılmış düz alt pedler;+ pürüzsüz pedlerin kenarlarında dar kırmızı halkalar;– (negatif) alt kuyunun ortasındaki ayrık kırmızı düğme 12.
NFRCS'nin hemouyumluluğu, Uluslararası Standardizasyon Örgütü'nün (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27 yöntemine göre incelenmiştir.Singh ve diğerleri tarafından açıklanan gravimetrik yöntem.NFRCS'nin varlığında veya yüzeyinde trombüs oluşumunu değerlendirmek için küçük değişiklikler yapıldı.500 mg Cs, Ch NFRCS ve Cp NFRCS, 37°C'de 24 saat fosfat tamponlu salin (PBS) içinde inkübe edildi.24 saat sonra, PBS çıkarıldı ve NFRCS, %3.8 sodyum sitrat içeren 2 ml kanla işleme tabi tutuldu.NFRCS yüzeyinde, inkübe edilen numunelere 0,04 ml 0,1 M CaCl2 ekleyin.45 dakika sonra pıhtılaşmayı durdurmak için 5 ml distile su eklendi.NFRK yüzeyindeki pıhtılaşmış kan, %36-38 formaldehit solüsyonu ile muamele edildi.Formaldehit ile sabitlenen pıhtılar kurutuldu ve tartıldı.Tromboz yüzdesi, kan ve numune içermeyen camın (negatif kontrol) ve kanlı camın (pozitif kontrol) ağırlığı hesaplanarak tahmin edildi.
İlk doğrulama olarak, HFFC yüzey kaplamasının, birbirine bağlı Ct'nin ve Ct ağının gözenek oluşturma yeteneğini anlamak için numuneler bir optik mikroskop altında görselleştirildi.NFRCS'den Ch ve Cp'nin ince kesitleri, bir neşter bıçağıyla kesildi.Ortaya çıkan kesit cam lam üzerine yerleştirildi, lamel ile kapatıldı ve kenarları yapıştırıcı ile sabitlendi.Hazırlanan lamlar optik mikroskop altında incelendi ve farklı büyütmelerde fotoğrafları çekildi.
Ct ağlarındaki polimer birikimi, Rice ve arkadaşları tarafından açıklanan yönteme dayalı olarak floresan mikroskobu kullanılarak görselleştirildi. Formülasyon için kullanılan HFFC bileşimi, bir flüoresan boya (amaranth) ile karıştırıldı ve daha önce belirtilen yönteme göre NFRCS (Ch & Cp) hazırlandı. Formülasyon için kullanılan HFFC bileşimi, bir flüoresan boya (amaranth) ile karıştırıldı ve daha önce belirtilen yönteme göre NFRCS (Ch & Cp) hazırlandı.Formülasyon için kullanılan HFFC bileşimi, bir floresan boya (amaranth) ile karıştırıldı ve daha önce bahsedilen yönteme göre NFRCS (Ch ve Cp) elde edildi.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法制备NFRCS（Ch & Cp）.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法制备NFRCS（Ch & Cp）.Formülasyonda kullanılan HFFC bileşimi, bir flüoresan boya (Amaranth) ile karıştırıldı ve daha önce bahsedildiği gibi NFRCS (Ch ve Cp) aldı.Elde edilen örneklerden NFRK'nın ince kesitleri kesildi, cam slaytlara yerleştirildi ve lamellerle kapatıldı.Hazırlanan slaytları, yeşil bir filtre (310-380 nm) kullanarak floresan mikroskop altında gözlemleyin.Ct ilişkilerini ve Ct ağındaki aşırı polimer birikimini anlamak için görüntüler 4x büyütmede alınmıştır.
NFRCS Ch ve Cp'nin yüzey topografyası, kılavuz çekme modunda ultra keskin TESP konsollu bir atomik kuvvet mikroskobu (AFM) kullanılarak belirlendi: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Tayvan.Yüzey pürüzlülüğü, yazılım (Scanning Probe Image Processor) kullanılarak ortalama karekök (RMS) ile belirlendi.Yüzey homojenliğini kontrol etmek için 3D görüntülerde çeşitli NFRCS konumları oluşturuldu.Belirli bir alan için puanın standart sapması, yüzey pürüzlülüğü olarak tanımlanır.RMS denklemi, NFRCS31'in yüzey pürüzlülüğünü ölçmek için kullanıldı.
Cm NFRCS'den daha iyi BCT gösteren Ch NFRCS ve Cp NFRCS'nin yüzey morfolojisini anlamak için FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokyo kullanılarak FESEM tabanlı çalışmalar yapıldı.FESEM çalışması, Zhao ve diğerleri tarafından açıklanan yönteme göre yapıldı.Küçük değişikliklerle 32.NFRCS 20 ila 30 mg Ch NFRCS ve Cp NFRCS, sıçan kanıyla önceden karıştırılmış 20 ul %3.8 sodyum sitrat ile önceden karıştırılmıştır.Kanla işlem görmüş örneklere 20 µl 0,2 M CaCl2 ilave edilerek koagülasyon başlatıldı ve örnekler oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edildi.Ek olarak, fazla eritrositler, salinle durulanarak NFRCS yüzeyinden çıkarıldı.
Müteakip numuneler %0.1 glutaraldehit ile işlendi ve daha sonra nemi çıkarmak için 37°C'de sıcak hava fırınında kurutuldu.Kurutulmuş örnekler kaplandı ve 32 analiz edildi.Analiz sırasında elde edilen diğer görüntüler, tek tek pamuk liflerinin yüzeyinde pıhtı oluşumu, Ct arasında polimer birikimi, eritrosit morfolojisi (şekli), pıhtı bütünlüğü ve NFRCS varlığında eritrosit morfolojisidir.İşlenmemiş NFRCS alanları ve kanla inkübe edilen Ch ve Cp ile işlenmiş NFRCS alanları, elemental iyonlar (sodyum, potasyum, nitrojen, kalsiyum, magnezyum, çinko, bakır ve selenyum)33 için tarandı.Pıhtı oluşumu ve pıhtı homojenliği sırasında elementel iyon birikimini anlamak için işlenmiş ve işlenmemiş numuneler arasındaki elemental iyon yüzdelerini karşılaştırın.
Ct yüzeyindeki Cp HFFC yüzey kaplamasının kalınlığı FESEM kullanılarak belirlendi.Cp NFRCS'nin enine kesitleri çerçeveden kesildi ve püskürterek kaplandı.Elde edilen püskürtmeli kaplama örnekleri FESEM ile gözlemlendi ve yüzey kaplamasının kalınlığı 34, 35, 36 ölçüldü.
X-ray micro-CT, yüksek çözünürlüklü 3D tahribatsız görüntüleme sağlar ve NFRK'nin dahili yapısal düzenlemesini incelemenize olanak tanır.Micro-CT, numunedeki X-ışınlarının yerel lineer zayıflama katsayısını kaydetmek için numuneden geçen bir X-ışını demeti kullanır ve bu da morfolojik bilgilerin elde edilmesine yardımcı olur.Cp NFRCS'de ve kanla işlenmiş Cp NFRCS'de Ct'nin dahili konumu, NFRCS37,38,39 varlığında absorpsiyon etkinliğini ve kan pıhtılaşmasını anlamak için mikro-CT ile incelenmiştir.Kanla işleme tabi tutulmuş ve işlenmemiş Cp NFRCS örneklerinin 3 boyutlu yapıları, mikro CT (V|tome|x S240, Phoenix, Almanya) kullanılarak yeniden oluşturuldu.VG STUDIO-MAX yazılımı sürüm 2.2 kullanılarak, NFRCS için 3D görüntüler geliştirmek üzere farklı açılardan (ideal olarak 360° kapsama alanı) birkaç X-ışını görüntüsü alınmıştır.Toplanan projeksiyon verileri, karşılık gelen basit 3D ScanIP Academic yazılımı kullanılarak 3D hacimsel görüntüler halinde yeniden yapılandırıldı.
Ek olarak, pıhtı dağılımını anlamak için, kanın pıhtılaşmasını başlatmak üzere NFRCS'ye 20 µl önceden karıştırılmış sitratlı kan ve 20 µl 0.2 M CaCl2 eklendi.Hazırlanan numuneler sertleşmeye bırakılır.NFRK yüzeyi %0,5 glutaraldehit ile işlendi ve 30-40°C'de 30 dakika sıcak hava fırınında kurutuldu.NFRCS'de oluşan kan pıhtısı tarandı, yeniden oluşturuldu ve kan pıhtısının 3 boyutlu görüntüsü görselleştirildi.
Antibakteriyel tahliller, küçük değişikliklerle daha önce açıklanan yöntem kullanılarak Cp NFRCS'de (Ch NFRCS'ye kıyasla en iyisi) yapıldı.Cp NFRCS ve Cp HFFC'nin antibakteriyel aktivitesi, bir inkübatörde Petri kaplarında agar üzerinde büyüyen üç farklı test mikroorganizması [S.aureus (gram-pozitif bakteri), E.coli (gram-negatif bakteri) ve beyaz Candida (C.albicans)] kullanılarak belirlendi.Agar ortamına 105-106 CFU ml-1 konsantrasyonunda 50 ml seyreltilmiş bakteri kültürü süspansiyonunu eşit şekilde inoküle edin.Ortamı bir Petri kabına dökün ve katılaşmasına izin verin.HFFC ile doldurmak için agar plakasının yüzeyinde oyuklar açıldı (HFFC için 3 oyuk ve negatif kontrol için 1 oyuk).3 kuyuya 200 µl HFFC ve 4. kuyuya 200 µl pH 7.4 PBS ekleyin.Petri kabının diğer tarafında, katılaşmış agar üzerine 12 mm'lik bir Cp NFRCS diski yerleştirin ve PBS (pH 7.4) ile nemlendirin.Siprofloksasin, ampisilin ve flukonazol tabletleri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli ve Candida albicans için referans standartlar olarak kabul edilir.İnhibisyon bölgesini manuel olarak ölçün ve inhibisyon bölgesinin dijital görüntüsünü alın.
Kurumsal etik onayının ardından çalışma, güney Hindistan'da Karnataka, Manipal'deki Kasturba Tıp Eğitim ve Araştırma Koleji'nde gerçekleştirildi.İn vitro TEG deney protokolü, Kasturba Medical College, Manipal, Karnataka Kurumsal Etik Kurulu tarafından incelendi ve onaylandı (IEC: 674/2020).Denekler, hastane kan bankasından gönüllü kan bağışçılarından (18 ila 55 yaş arası) alındı.Ayrıca kan örneklerinin alınması için gönüllülerden aydınlatılmış onam formu alındı.Cp HFFC formülasyonunun sodyum sitrat ile önceden karıştırılmış tam kan üzerindeki etkisini incelemek için doğal TEG (N-TEG) ​​kullanıldı.N-TEG, sonuçlarda (rutin pıhtılaşma testleri) klinik olarak önemli gecikme potansiyeli nedeniyle klinisyenler için sorun yaratan bakım noktası resüsitasyonundaki rolüyle geniş çapta tanınmaktadır.Tam kan kullanılarak N-TEG analizi yapıldı.Tüm katılımcılardan bilgilendirilmiş onam ve ayrıntılı tıbbi öykü alındı.Çalışmaya gebelik/doğum sonrası veya karaciğer hastalığı gibi hemostatik veya trombotik komplikasyonları olan katılımcılar dahil edilmemiştir.Pıhtılaşma kaskadını etkileyen ilaçları alan denekler de çalışmadan çıkarıldı.Tüm katılımcılara standart prosedürlere göre temel laboratuvar testleri (hemoglobin, protrombin zamanı, aktif tromboplastin ve trombosit sayısı) uygulandı.N-TEG, kan pıhtısı viskoelastikliğini, ilk pıhtı yapısını, parçacık etkileşimini, pıhtı kuvvetlendirmesini ve pıhtı erimesini belirler.N-TEG analizi, çeşitli hücresel elementlerin ve plazmanın toplu etkileri hakkında grafiksel ve sayısal veriler sağlar.N-TEG analizi, iki farklı hacimde Cp HFFC (10 ul ve 50 ul) üzerinde yapıldı.Sonuç olarak, 10 ul Cp HFFC'ye sitrik asitli 1 ml tam kan eklendi.20 µl 0.2 M CaCl2 içeren TEG kabına 1 ml (Cp HFFC + sitratlı kan), 340 µl karışık kan ekleyin.Daha sonra, Cp HFFC41 varlığında kan numunelerinin %30'unu R, K, alfa açısı, MA, G, CI, TPI, EPL, LY ölçmek için TEG tabakları TEG® 5000, US'ye yüklendi.
İn vivo çalışma protokolü, Kasturba Tıp Fakültesi, Manipal Yüksek Öğretim Enstitüsü, Manipal (IAEC/KMC/69/2020), Kurumsal Hayvan Etik Komitesi (IAEC) tarafından gözden geçirildi ve onaylandı.Tüm hayvan deneyleri, Hayvan Deneylerinin Kontrolü ve Denetlenmesi Komitesi'nin (CPCSEA) tavsiyelerine uygun olarak yapıldı.Tüm in vivo NFRCS çalışmaları (2 x 2 cm2), dişi Wistar fareleri (200 ila 250 g ağırlığında) üzerinde gerçekleştirilmiştir.Tüm hayvanlar, 24-26°C'lik bir sıcaklıkta iklime alıştırıldı, hayvanlar, ad libitum standart yiyecek ve suya serbest erişime sahipti.Tüm hayvanlar rastgele farklı gruplara ayrıldı, her grup üç hayvandan oluşuyordu.Tüm çalışmalar Animal Studies: Report of In Vivo Experiments 43'e uygun olarak yapılmıştır.Çalışmadan önce hayvanlara, 20-50 mg ketamin (1 kg vücut ağırlığı başına) ve 2-10 mg ksilazin (1 kg vücut ağırlığı başına) karışımının intraperitoneal (ip) uygulamasıyla anestezi uygulandı.Çalışma sonrasında numunelerin başlangıç ​​ve son ağırlıkları arasındaki fark değerlendirilerek kanama hacmi hesaplandı, üç testten elde edilen ortalama değer numunenin kanama hacmi olarak alındı.
Sıçan kuyruğu amputasyonu modeli, NFRCS'nin travma, savaş veya trafik kazasında (yaralanma modeli) kanamayı modüle etme potansiyelini anlamak için uygulandı.Normal kanamayı sağlamak için bir neşter bıçağıyla kuyruğun %50'sini kesin ve 15 saniye boyunca havada tutun.Ayrıca test örnekleri basınç uygulanarak (Ct, Cs, Ch NFRCS ve Cp NFRCS) bir sıçanın kuyruğuna yerleştirildi.Test numuneleri için kanama ve PCT rapor edildi (n ​​= 3)17,45.
Savaşta NFRCS basınç kontrolünün etkinliği, yüzeysel bir femoral arter modeli üzerinde araştırıldı.Femoral arter ortaya çıkar, 24G trokar ile delinir ve 15 saniye içinde kanadı.Kontrolsüz kanama gözlemlendikten sonra, test numunesi basınç uygulanarak delme yerine yerleştirilir.Test örneğinin uygulanmasından hemen sonra pıhtılaşma süresi kaydedildi ve sonraki 5 dakika boyunca hemostatik etkinlik gözlendi.Aynı prosedür Cs ve Ct46 ile tekrarlandı.
Dowling ve ark.47 intraoperatif kanama bağlamında hemostatik malzemelerin hemostatik potansiyelini değerlendirmek için bir karaciğer hasarı modeli önerdi.Ct numuneleri (negatif kontrol), Cs çerçevesi (pozitif kontrol), Ch NFRCS numuneleri ve Cp NFRCS numuneleri için BCT kaydedilmiştir.Median laparotomi yapılarak sıçanın suprahepatik vena kavası açığa çıkarıldı.Daha sonra sol lobun distal kısmı makasla kesildi.Bir neşter bıçağıyla karaciğerde bir kesi yapın ve birkaç saniye kanamasına izin verin.Doğru tartılmış Ch NFRCS ve Cp NFRCS test numuneleri herhangi bir pozitif basınç olmaksızın hasarlı yüzeye yerleştirildi ve BCT kaydedildi.Kontrol grubu (Ct) daha sonra yaralanmayı kırmadan Cs 30 s47 ardından basınç uyguladı.
Geliştirilen polimer bazlı NFRCS'lerin yara iyileştirme özelliklerini değerlendirmek için eksizyonel bir yara modeli kullanılarak in vivo yara iyileştirme deneyleri yapıldı.Eksizyonel yara modelleri, küçük değişiklikler19,32,48 ile daha önce yayınlanmış yöntemlere göre seçildi ve uygulandı.Tüm hayvanlara daha önce tarif edildiği gibi anestezi uygulandı.Sırt derisinde dairesel derin bir kesi yapmak için bir biyopsi zımbası (12 mm) kullanın.Hazırlanan yara bölgeleri Cs (pozitif kontrol), Ct (pamuk pedlerin iyileşmeyi engellediği kabul edilerek), Ch NFRCS ve Cp NFRCS (deney grubu) ve herhangi bir tedavi uygulanmadan bir negatif kontrol ile pansuman yapılmıştır.Çalışmanın her gününde, tüm sıçanlarda yaranın alanı ölçüldü.Yara bölgesinin fotoğrafını çekmek için bir dijital kamera kullanın ve yeni bir pansuman yapın.Yara kapanma yüzdesi aşağıdaki formülle ölçüldü:
Çalışmanın 12. gününde yara kapanma yüzdesine göre en iyi grubun ((Cp NFRCS) ve kontrol grubu) sıçan derisi eksize edildi ve H& E boyama ve Masson's trikrom boyama ile incelendi. Çalışmanın 12. gününde yara kapanma yüzdesine göre en iyi grubun ((Cp NFRCS) ve kontrol grubu) sıçan derisi eksize edildi ve H& E boyama ve Masson's trikrom boyama ile incelendi.Çalışmanın 12. gününde yara kapanma yüzdesine göre en iyi gruptaki ((Cp NFRCS) ve kontrol grubu) sıçanların derisi eksize edilerek hematoksilen-eozin ve Masson trikrom ile boyanarak incelendi.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Mas son 三色染色研究.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和眳组）En iyi gruptaki ((Cp NFRCS) ve kontrol grupları) sıçanlar, çalışmanın 12. gününde yara kapanma yüzdesine dayalı olarak hematoksilen-eozin boyaması ve Masson'un trikrom boyaması için eksize edildi.Uygulanan boyama prosedürü daha önce tarif edilen yöntemlere49,50göre gerçekleştirilmiştir.Kısaca, %10 formalinde fiksasyondan sonra numuneler bir dizi dereceli alkol kullanılarak dehidre edildi.Eksize edilen dokunun ince kesitlerini (5 µm kalınlığında) elde etmek için bir mikrotom kullanın.Kontrollerin ve Cp NFRCS'nin ince seri kesitleri, histopatolojik değişiklikleri incelemek için hematoksilin ve eozin ile tedavi edildi.Kollajen fibrillerinin oluşumunu tespit etmek için Masson'un trikrom boyası kullanıldı.Elde edilen sonuçlar patologlar tarafından körü körüne incelendi.
Cp NFRCS örneklerinin stabilitesi, 12 ay boyunca oda sıcaklığında (25°C ± 2°C/%60 RH ± %5) incelenmiştir51.Cp NFRCS (yüzey renk değişikliği ve mikrobiyal büyüme), Malzemeler ve Yöntemler bölümünde belirtilen yukarıdaki yöntemlere göre kat aşınma direnci ve BCT için görsel olarak incelendi ve test edildi.
Cp NFRCS'nin ölçeklenebilirliği ve tekrar üretilebilirliği, 15x15 cm2 boyutunda Cp NFRCS hazırlanarak incelenmiştir.Ek olarak, çeşitli Cp NFRCS fraksiyonlarından 30 mg numune (n = 5) çıkarıldı ve çalışılan numunelerin BCT'si, Yöntemler bölümünde daha önce açıklandığı gibi değerlendirildi.
Çeşitli biyomedikal uygulamalar için Cp NFRCS bileşimlerini kullanarak çeşitli şekiller ve yapılar geliştirmeye çalıştık.Bu tür şekiller veya konfigürasyonlar, burun kanamaları için konik temizleme bezlerini, diş prosedürleri ve vajinal kanama için silindirik temizleme bezlerini içerir.
Tüm veri setleri ortalama ± standart sapma olarak ifade edildi ve Prism 5.03 (GraphPad, San Diego, CA, ABD) kullanılarak ANOVA ve ardından Bonferroni'nin çoklu karşılaştırma testi (*p<0.05) ile analiz edildi.
İnsan çalışmalarında gerçekleştirilen tüm prosedürler, Enstitü ve Ulusal Araştırma Konseyi standartlarına ve ayrıca 1964 Helsinki Bildirgesi ve sonraki değişikliklerine veya benzer etik standartlara uygundur.Tüm katılımcılara çalışmanın özellikleri ve gönüllülük esası hakkında bilgi verilmiştir.Katılımcı verileri toplandıktan sonra gizli kalır.İn vitro TEG deney protokolü, Kasturba Medical College, Manipal, Karnataka Kurumsal Etik Kurulu tarafından incelendi ve onaylandı (IEC: 674/2020).Gönüllüler kan örnekleri toplamak için bilgilendirilmiş onam imzaladılar.
Hayvan çalışmalarında gerçekleştirilen tüm prosedürler, Kastuba Tıp Fakültesi, Manipal Yüksek Öğretim Enstitüsü, Manipal'e (IAEC/KMC/69/2020) uygun olarak gerçekleştirilmiştir.Tasarlanan tüm hayvan deneyleri, Hayvan Deneylerini Kontrol ve Denetleme Komitesi'nin (CPCSEA) yönergelerine uygun olarak yapılmıştır.Tüm yazarlar ARRIVE kurallarına uyar.
Tüm NFRCS'lerin FTIR spektrumları analiz edildi ve Şekil 2A'da gösterilen kitosan spektrumu ile karşılaştırıldı.Kitosanın karakteristik spektral pikleri (kaydedilmiş) 3437 cm-1 (OH ve NH esnemesi, örtüşme), 2945 ve 2897 cm-1 (CH esnemesi), 1660 cm-1 (NH2 suşu), 1589 cm-1 (K-H bükülmesi), 1157 cm-1 (köprü esnemesi O-), 1067 cm-1 (esneme C–O, ikincil hidroksil), 993 cm -1 (germe CO, Bo-OH) 52.53.54.Ek Tablo S1, kitosan (raportör), saf kitosan, Cm, Ch ve Cp için FTIR NFRCS absorpsiyon spektrumu değerlerini gösterir.Tüm NFRC'lerin (Cm, Ch ve Cp) FTIR spektrumları, herhangi bir önemli değişiklik olmaksızın saf kitosan ile aynı karakteristik absorpsiyon bantlarını gösterdi (Şekil 2A).FTIR sonuçları, NFRCS'yi geliştirmek için kullanılan polimerler arasında kimyasal veya fiziksel etkileşimlerin olmadığını doğrulayarak, kullanılan polimerlerin inert olduğunu gösterdi.
Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS ve Cs'nin in vitro karakterizasyonu.(A), sıkıştırma altında kitosan ve Cm NFRCS, Ch NFRCS ve Cp NFRCS bileşimlerinin birleştirilmiş FTIR spektrumlarını temsil eder.(B) a) NFRCS Cm, Ch, Cp ve Cg'nin tam kan alım oranı (n = 3);Ct numuneleri daha yüksek bir BAR gösterdi çünkü pamuklu çubuk daha yüksek bir emme verimliliğine sahiptir;b) Kan emildikten sonra kan Absorbe edilen numunenin çizimi.Test numunesi C'nin BCT'sinin grafik gösterimi (Cp NFRCS en iyi BCT'ye sahipti (15 s, n = 3)). C, D, E ve G'deki veriler ortalama ± SD olarak gösterildi ve hata çubukları SD'yi temsil ediyor, ***p < 0.0001. C, D, E ve G'deki veriler ortalama ± SD olarak gösterildi ve hata çubukları SD'yi temsil ediyor, ***p < 0.0001. C, D, E ve G'deki değerler ± standart ayarlara göre değişir, ancak aşağıdakilere ek olarak, aşağıdakiler için de geçerlidir: клонение, ***p <0,0001. C, D, E ve G'deki veriler ortalama ± standart sapma olarak sunulur ve hata çubukları standart sapmayı temsil eder, ***p<0,0001. C, D, E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001。 C, D, E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001。 C, D, E ve G'deki değerler, aşağıdakileri içerir: ± стандартное отклонение, планки погрешностей представляют стандарт отклонение, ***p <0,0001. C, D, E ve G'deki veriler ortalama ± standart sapma olarak gösterilir, hata çubukları standart sapmayı temsil eder, ***p<0,0001.