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अनियंत्रित रक्तस्राव मृत्यु के प्रमुख कारणों में से एक है। युद्ध, यातायात दुर्घटनाओं और मृत्यु में कमी लाने वाले ऑपरेशनों के दौरान प्राथमिक उपचार के रूप में तेजी से हेमोस्टेसिस प्राप्त करना विषय के जीवित रहने को सुनिश्चित करता है। एक सरल हेमोस्टैटिक फिल्म-फॉर्मिंग संरचना (HFFC) से प्राप्त नैनोपोरस फाइबर-प्रबलित समग्र मचान (NFRCS) एक सतत चरण के रूप में हेमोस्टेसिस को ट्रिगर और बढ़ा सकता है। NFRCS का विकास ड्रैगनफ्लाई के पंख के डिजाइन पर आधारित है। ड्रैगनफ्लाई पंख संरचना में अनुप्रस्थ और अनुदैर्ध्य पंख होते हैं, और सूक्ष्म संरचना की अखंडता को बनाए रखने के लिए पंख झिल्ली एक दूसरे से जुड़ी होती हैं। HFFC समान रूप से फाइबर की सतह को नैनोमीटर मोटाई की फिल्म के साथ कोट करता है और बेतरतीब ढंग से वितरित कपास की मोटाई (Ct) (फैला हुआ चरण) को जोड़कर एक नैनोपोरस संरचना बनाता है। निरंतर और फैले हुए चरणों का संयोजन व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उत्पादों की तुलना में उत्पाद की लागत को दस गुना कम कर देता है। संशोधित NFRCS (टैम्पोन या रिस्टबैंड) का उपयोग विभिन्न प्रकार के बायोमेडिकल अनुप्रयोगों में किया जा सकता है। इन विवो अध्ययनों ने निष्कर्ष निकाला है कि विकसित सीपी एनएफआरसीएस अनुप्रयोग स्थल पर जमावट प्रक्रिया को सक्रिय करता है और बढ़ाता है। एनएफआरसीएस सूक्ष्म वातावरण को नियंत्रित कर सकता है और अपनी नैनोपोरस संरचना के कारण सेलुलर स्तर पर कार्य कर सकता है, जिसके परिणामस्वरूप एक्सिशन घाव मॉडल में बेहतर घाव भरने में मदद मिलती है।
युद्ध, ऑपरेशन के दौरान और आपातकालीन स्थितियों के दौरान अनियंत्रित रक्तस्राव घायलों के जीवन के लिए गंभीर खतरा पैदा कर सकता है1। ये स्थितियाँ परिधीय संवहनी प्रतिरोध में समग्र वृद्धि की ओर ले जाती हैं, जिससे रक्तस्रावी आघात होता है। सर्जरी के दौरान और बाद में रक्तस्राव को नियंत्रित करने के लिए उचित उपाय संभावित रूप से जीवन के लिए ख़तरा माने जाते हैं2,3. बड़ी वाहिकाओं को नुकसान होने से भारी मात्रा में रक्त की हानि होती है, जिसके परिणामस्वरूप युद्ध में मृत्यु दर ≤ 50% और सर्जरी के दौरान 31% होती है1. भारी मात्रा में रक्त की हानि से शरीर की मात्रा में कमी आती है, जिससे हृदय उत्पादन कम हो जाता है। कुल परिधीय संवहनी प्रतिरोध में वृद्धि और माइक्रोकिरकुलेशन की प्रगतिशील हानि से जीवन-सहायक अंगों में हाइपोक्सिया होता है। यदि स्थिति प्रभावी हस्तक्षेप के बिना जारी रहती है1,4,5 तो रक्तस्रावी आघात हो सकता है। अन्य जटिलताओं में हाइपोथर्मिया और चयापचय अम्लरक्तता की प्रगति, साथ ही जमावट विकार शामिल हैं जो जमावट प्रक्रिया को बाधित करते हैं। गंभीर रक्तस्रावी आघात मृत्यु के उच्च जोखिम से जुड़ा हुआ है6,7,8. ग्रेड III (प्रगतिशील) शॉक में, इंट्राऑपरेटिव और पोस्टऑपरेटिव रुग्णता और मृत्यु दर के दौरान रोगी के जीवित रहने के लिए रक्त आधान आवश्यक है। उपरोक्त सभी जीवन-धमकाने वाली स्थितियों पर काबू पाने के लिए, हमने एक नैनोपोरस फाइबर-प्रबलित समग्र मचान (NFRCS) विकसित किया है जो पानी में घुलनशील हेमोस्टेटिक पॉलिमर के संयोजन का उपयोग करके न्यूनतम बहुलक सांद्रता (0.5%) का उपयोग करता है।
फाइबर सुदृढीकरण के उपयोग से, लागत प्रभावी उत्पाद विकसित किए जा सकते हैं। बेतरतीब ढंग से व्यवस्थित फाइबर एक ड्रैगनफ़्लाई के पंख की संरचना से मिलते जुलते हैं, जो पंखों पर क्षैतिज और ऊर्ध्वाधर धारियों द्वारा संतुलित होते हैं। पंख की अनुप्रस्थ और अनुदैर्ध्य नसें पंख की झिल्ली से संचार करती हैं (चित्र 1)। NFRCS में बेहतर शारीरिक और यांत्रिक शक्ति के साथ एक मचान प्रणाली के रूप में प्रबलित Ct शामिल है (चित्र 1)। सामर्थ्य और शिल्प कौशल के कारण, सर्जन ऑपरेशन और ड्रेसिंग के दौरान कॉटन थ्रेड गेज (Ct) का उपयोग करना पसंद करते हैं। इसलिए, इसके कई लाभों पर विचार करते हुए, जिसमें 90% से अधिक क्रिस्टलीय सेल्यूलोज़ (हेमोस्टेटिक गतिविधि को बढ़ाने में सहायता करता है) शामिल है, सीटी का उपयोग एनएफआरसीएस9,10 के कंकाल तंत्र के रूप में किया गया। इसलिए, इसके कई लाभों पर विचार करते हुए, जिसमें 90% से अधिक क्रिस्टलीय सेल्यूलोज़ (हेमोस्टेटिक गतिविधि को बढ़ाने में सहायता करता है) शामिल है, सीटी का उपयोग एनएफआरसीएस9,10 के कंकाल तंत्र के रूप में किया गया। Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% क्रेडिट कार्ड гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной सेट एनएफआरसीएस9,10. इसलिए, इसके कई लाभों को देखते हुए, जिसमें > 90% क्रिस्टलीय सेल्यूलोज़ (बढ़ी हुई हेमोस्टेटिक गतिविधि में शामिल) शामिल है, सीटी का उपयोग एनएफआरसीएस कंकाल प्रणाली9,10 के रूप में किया गया था।因此, 考虑到它的多重益处, 包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止血活性）,Ct एनएफआरसीएस9,10 को डाउनलोड करें।अधिकतम लाभ, ऋण भुगतान, मूल्य निर्धारण > 90%इसलिए, इसके कई लाभों को देखते हुए, जिसमें 90% से अधिक क्रिस्टलीय सेल्यूलोज़ (हेमोस्टेटिक गतिविधि को बढ़ाने में मदद करता है) शामिल है, सीटी को एनएफआरसीएस9,10 के लिए एक मचान के रूप में इस्तेमाल किया गया था।सीटी को सतही रूप से लेपित किया गया था (नैनो-मोटी फिल्म निर्माण देखा गया था) और एक हेमोस्टैटिक फिल्म-निर्माण संरचना (HFFC) के साथ जुड़ा हुआ था। HFFC एक मैट्रिजेल की तरह काम करता है, जो बेतरतीब ढंग से रखे गए सीटी को एक साथ रखता है। विकसित डिज़ाइन फैले हुए चरण (मजबूत फाइबर) के भीतर तनाव को प्रसारित करता है। न्यूनतम बहुलक सांद्रता का उपयोग करके अच्छी यांत्रिक शक्ति के साथ नैनोपोरस संरचनाएं प्राप्त करना मुश्किल है। इसके अलावा, विभिन्न बायोमेडिकल अनुप्रयोगों के लिए अलग-अलग सांचों को अनुकूलित करना आसान नहीं है।
चित्र में ड्रैगनफ्लाई विंग संरचना (ए) पर आधारित एनएफआरसीएस डिज़ाइन का आरेख दिखाया गया है। यह छवि ड्रैगनफ्लाई के पंख संरचना (पंख की प्रतिच्छेदन और अनुदैर्ध्य शिराएँ आपस में जुड़ी हुई हैं) और सीपी एनएफआरसीएस (बी) के क्रॉस-सेक्शनल फोटोमाइक्रोग्राफ का तुलनात्मक सादृश्य दिखाती है। एनएफआरसीएस का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व।
उपरोक्त सीमाओं को संबोधित करने के लिए एचएफएफसी का निरंतर चरण के रूप में उपयोग करके एनएफआरसी विकसित किए गए थे। एचएफएफसी विभिन्न फिल्म बनाने वाले हेमोस्टैटिक पॉलिमर से बना है जिसमें चिटोसन (मुख्य हेमोस्टैटिक पॉलिमर के रूप में) मिथाइलसेलुलोज (एमसी), हाइड्रॉक्सीप्रोपाइल मिथाइलसेलुलोज (एचपीएमसी 50 सीपी) और पॉलीविनाइल अल्कोहल (पीवीए) (125 केडीए) एक सहायक पॉलिमर के रूप में है जो थ्रोम्बस गठन को बढ़ावा देता है। पॉलीविनाइलपाइरोलिडीन K30 (PVP K30) को मिलाने से NFRCS की नमी अवशोषण क्षमता में सुधार हुआ। पॉलीइथिलीन ग्लाइकॉल 400 (PEG 400) को बंधुआ बहुलक मिश्रणों में बहुलक क्रॉसलिंकिंग में सुधार करने के लिए जोड़ा गया था। तीन अलग-अलग एचएफएफसी हेमोस्टैटिक रचनाएं (सीएम एचएफएफसी, सीएच एचएफएफसी और सीपी एचएफएफसी विभिन्न इन विट्रो और इन विवो लक्षण वर्णन अध्ययनों ने एनएफआरसीएस की हेमोस्टैटिक और घाव भरने की गतिविधि की पुष्टि की है। एनएफआरसीएस द्वारा पेश की गई मिश्रित सामग्री का उपयोग विशिष्ट आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए मचान के विभिन्न रूपों को अनुकूलित करने के लिए किया जा सकता है।
इसके अलावा, NFRCS को निचले छोरों और शरीर के अन्य हिस्सों के पूरे चोट वाले क्षेत्र को कवर करने के लिए एक पट्टी या रोल के रूप में संशोधित किया जा सकता है। विशेष रूप से लड़ाकू अंग की चोटों के लिए, डिज़ाइन किए गए NFRCS डिज़ाइन को आधे हाथ या पूरे पैर (पूरक चित्र S11) में बदला जा सकता है। NFRCS को ऊतक गोंद के साथ एक कलाईबैंड में बनाया जा सकता है, जिसका उपयोग गंभीर आत्मघाती कलाई की चोटों से रक्तस्राव को रोकने के लिए किया जा सकता है। हमारा मुख्य लक्ष्य कम से कम पॉलिमर के साथ एक NFRCS विकसित करना है जिसे बड़ी आबादी (गरीबी रेखा से नीचे) तक पहुँचाया जा सकता है और जिसे प्राथमिक चिकित्सा किट में रखा जा सकता है। डिजाइन में सरल, कुशल और किफायती, NFRCS स्थानीय समुदायों को लाभान्वित करता है और इसका वैश्विक प्रभाव हो सकता है।
चिटोसन (आणविक भार 80 kDa) और ऐमारैंथ को मर्क, इंडिया से खरीदा गया। हाइड्रोक्सीप्रोपाइल मिथाइलसेलुलोज 50 Cp, पॉलीइथिलीन ग्लाइकॉल 400 और मिथाइलसेलुलोज को लोबा केमी प्राइवेट एलएलसी, मुंबई से खरीदा गया। पॉलीविनाइल अल्कोहल (आणविक भार 125 kDa) (87-90% हाइड्रोलाइज्ड) को नेशनल केमिकल्स, गुजरात से खरीदा गया। पॉलीविनाइलपाइरोलिडीन K30 को मॉलीकेम, मुंबई से खरीदा गया, स्टेराइल स्वैब को रामाराजू सर्जरी कॉटन मिल्स लिमिटेड, तमिलनाडु से खरीदा गया, जिसमें मिलि क्यू वाटर (डायरेक्ट-Q3 वाटर प्यूरीफिकेशन सिस्टम, मर्क, इंडिया) को कैरियर के रूप में इस्तेमाल किया गया।
एनएफआरसीएस को लाइओफिलाइजेशन विधि11,12 का उपयोग करके विकसित किया गया था। सभी एचएफएफसी रचनाएं (तालिका 1) एक यांत्रिक स्टिरर का उपयोग करके तैयार की गई थीं। यांत्रिक स्टिरर पर 800 आरपीएम पर लगातार हिलाते हुए पानी में 1% एसिटिक एसिड का उपयोग करके चिटोसन का 0.5% घोल तैयार करें। तालिका 1 में दर्शाए गए लोड किए गए पॉलिमर का सटीक वजन चिटोसन घोल में मिलाया गया और तब तक हिलाया गया जब तक कि एक स्पष्ट बहुलक घोल प्राप्त नहीं हो गया। परिणामी मिश्रण में तालिका 1 में दर्शाई गई मात्रा में पीवीपी के30 और पीईजी 400 मिलाया गया और तब तक हिलाना जारी रखा गया जब तक कि एक स्पष्ट चिपचिपा बहुलक घोल प्राप्त नहीं हो गया। बहुलक मिश्रण से फंसे हुए हवा के बुलबुले को हटाने के लिए बहुलक घोल के परिणामी स्नान को 60 मिनट के लिए ध्वनिकृत किया गया था। जैसा कि पूरक चित्र एस1(बी) में दिखाया गया है, सीटी को 5 मिली एचएफएफसी के साथ पूरक 6-वेल प्लेट (मोल्ड) के प्रत्येक वेल में समान रूप से वितरित किया गया था।
सीटी नेटवर्क में एचएफएफसी के एकसमान गीलेपन और वितरण को प्राप्त करने के लिए छह-वेल प्लेट को 60 मिनट के लिए सोनिकेट किया गया। फिर छह-वेल प्लेट को -20 डिग्री सेल्सियस पर 8-12 घंटे के लिए फ्रीज करें। एनएफआरसीएस के विभिन्न फॉर्मूलेशन प्राप्त करने के लिए फ्रीज प्लेट्स को 48 घंटे के लिए लाइओफिलाइज़ किया गया। इसी प्रक्रिया का उपयोग विभिन्न आकार और संरचनाओं, जैसे टैम्पोन या बेलनाकार टैम्पोन, या विभिन्न अनुप्रयोगों के लिए किसी अन्य आकार का उत्पादन करने के लिए किया जाता है।
सटीक रूप से तौला गया चिटोसन (80 kDa) (3%) चुंबकीय स्टिरर का उपयोग करके 1% एसिटिक एसिड में घुल जाता है। चिटोसन के परिणामी घोल में 1% PEG 400 मिलाया गया और 30 मिनट तक हिलाया गया। परिणामी घोल को एक चौकोर या आयताकार कंटेनर में डालें और 12 घंटे के लिए -80°C पर जमा दें। जमे हुए नमूनों को छिद्रपूर्ण Cs13 प्राप्त करने के लिए 48 घंटे तक लाइओफिलाइज़ किया गया।
विकसित एनएफआरसीएस को फूरियर ट्रांसफॉर्म इंफ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (एफटीआईआर) (शिमादज़ू 8400 एस एफटीआईआर, टोक्यो, जापान) का उपयोग करके प्रयोगों के अधीन किया गया ताकि अन्य पॉलिमर14,15 के साथ चिटोसन की रासायनिक अनुकूलता की पुष्टि की जा सके। सभी परीक्षण किए गए नमूनों के एफटीआईआर स्पेक्ट्रा (स्पेक्ट्रल रेंज की चौड़ाई 400 से 4000 सेमी-1) 32 स्कैन करके प्राप्त किए गए थे।
सभी योगों के लिए रक्त अवशोषण दर (BAR) का मूल्यांकन थोड़े संशोधनों के साथ Chen एट अल. 16 द्वारा वर्णित विधि का उपयोग करके किया गया था। सभी रचनाओं के विकसित NFRK को अवशिष्ट विलायक को हटाने के लिए रात भर 105 डिग्री सेल्सियस पर एक वैक्यूम ओवन में सुखाया गया था। 30 मिलीग्राम NFRCS (प्रारंभिक नमूना वजन - W0) और 30 मिलीग्राम Ct (सकारात्मक नियंत्रण) को 3.8% सोडियम साइट्रेट के प्रीमिक्स वाले अलग-अलग व्यंजनों में रखा गया था। पूर्व निर्धारित समय अंतराल पर, यानी 5, 10, 20, 30, 40 और 60 सेकंड में, NFRCS को हटा दिया गया और नमूनों को 30 सेकंड के लिए Ct पर रखकर उनकी सतहों को अवशोषित न हुए रक्त से साफ किया गया।
रक्त का थक्का जमने का समय (बीसीटी) वैंग एट अल 17 की रिपोर्ट के अनुसार निर्धारित किया गया था। एनएफआरसीएस की उपस्थिति में पूरे रक्त (3.8% सोडियम साइट्रेट के साथ पूर्व मिश्रित चूहे के रक्त) को जमने के लिए आवश्यक समय की गणना परीक्षण नमूने के बीसीटी के रूप में की गई थी। विभिन्न एनएफआरसीएस घटकों (30 मिलीग्राम) को 10 मिली स्क्रू कैप शीशियों में रखा गया था और 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया गया था। शीशी में रक्त (0.5 मिली) मिलाया गया और रक्त का थक्का जमने को सक्रिय करने के लिए 0.2 एम CaCl2 का 0.3 मिली मिलाया गया। अंत में, शीशी को हर 15 सेकंड में (180 डिग्री तक) उल्टा करें जब तक कि एक मजबूत थक्का न बन जाए। नमूने के बीसीटी का अनुमान फ्लिप वैल्स17,18 की संख्या से लगाया जाता
ली एट अल द्वारा वर्णित विधि को लागू करने के द्वारा Ch NFRCS और Cp NFRCS संरचनाओं का BCT निर्धारित किया गया था। 19। 15 x 15 मिमी2 Ch NFRCS, Cp NFRCS, और Cs (सकारात्मक नियंत्रण) को अलग पेट्री डिश (37 डिग्री सेल्सियस) में रखें। रक्त के थक्के बनने की प्रक्रिया शुरू करने के लिए 3.8% सोडियम साइट्रेट युक्त रक्त को 0.2 M CaCl2 के साथ 10:1 मात्रा अनुपात में मिलाया गया था। 0.2 M CaCl2 चूहे के रक्त के मिश्रण के 20 µl को नमूने की सतह पर लगाया गया और एक खाली पेट्री डिश में रखा गया। नियंत्रण रक्त को बिना सीटी के खाली पेट्री डिश में डाला गया था। 0, 3, और 5 मिनट के निश्चित अंतराल पर, थक्के को परेशान किए बिना डिश युक्त नमूने में 10 मिलीलीटर विआयनीकृत (डीआई) पानी डालकर थक्के बनना रोकें। असंयोजित एरिथ्रोसाइट्स (एरिथ्रोसाइट्स) विआयनीकृत जल की उपस्थिति में रक्त-अपघटन से गुजरते हैं और हीमोग्लोबिन छोड़ते हैं। अलग-अलग समय बिंदुओं पर हीमोग्लोबिन (HA(t)) को UV-Vis स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके 540 nm (λmax हीमोग्लोबिन) पर मापा गया। 10 ml विआयनीकृत जल में 20 µl रक्त के 0 मिनट में हीमोग्लोबिन (AH(0)) का पूर्ण अवशोषण संदर्भ मानक के रूप में लिया गया। जमा हुए रक्त के सापेक्ष हीमोग्लोबिन अवशोषण (RHA) की गणना HA(t)/HA(0) के अनुपात से रक्त के एक ही बैच का उपयोग करके की गई।
टेक्सचर एनालाइजर (टेक्सचर प्रो सीटी वी1.3 बिल्ड 15, ब्रुकफील्ड, यूएसए) का उपयोग करके, क्षतिग्रस्त ऊतकों पर एनएफआरके के चिपकने वाले गुणों का निर्धारण किया गया। सूअर की त्वचा के अंदर (वसा की परत के बिना) एक खुले तल वाले बेलनाकार डिश को दबाएं। नमूने (Ch NFRCS और Cp NFRCS) को सुअर की त्वचा पर आसंजन बनाने के लिए बेलनाकार सांचों में कैनुला के माध्यम से लगाया गया। कमरे के तापमान (RT) (25° C.) पर 3 मिनट के ऊष्मायन के बाद, NFRCS चिपकने वाली ताकत 0.5 मिमी/सेकंड की स्थिर दर पर दर्ज की गई।
सर्जिकल सीलेंट की मुख्य विशेषता खून की हानि को कम करते हुए खून का थक्का बनना बढ़ाना है। एनएफआरसीएस में दोषरहित जमावट का मूल्यांकन थोड़े संशोधनों के साथ पहले से प्रकाशित विधि का उपयोग करके किया गया था। एक माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब (2 मिली) (आंतरिक व्यास 10 मिमी) बनाएं जिसमें सेंट्रीफ्यूज ट्यूब के एक तरफ 8 × 5 मिमी2 का छेद हो (जो खुले घाव को दर्शाता है)। उद्घाटन को बंद करने के लिए एनएफआरसीएस का उपयोग किया जाता है और बाहरी किनारों को सील करने के लिए टेप का उपयोग किया जाता है। 3.8% सोडियम साइट्रेट प्रीमिक्स युक्त माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 0.2 एम CaCl2 के 20 µl डालें। 10 मिनट के बाद, माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब को डिश से हटा दिया गया और एनएफआरके (एन = 3) से खून के बहिर्वाह के कारण डिश के द्रव्यमान में वृद्धि निर्धारित की गई
NFRCS की गीली अखंडता को मिश्रा और चौधरी21 द्वारा वर्णित विधि के आधार पर मामूली संशोधनों के साथ निर्धारित किया गया था। NFRCS को 50 मिली पानी के साथ 100 मिली एर्लेनमेयर फ्लास्क में रखें और बिना ऊपर बने 60 सेकंड तक घुमाएँ। संग्रह के आधार पर भौतिक अखंडता के लिए नमूनों का दृश्य निरीक्षण और प्राथमिकता।
एचएफएफसी की सीटी से बंधन शक्ति का अध्ययन मामूली संशोधनों के साथ पहले से प्रकाशित विधियों का उपयोग करके किया गया था। एनएफआरके को मिलीक्यू पानी (सीटी) की उपस्थिति में ध्वनिक तरंगों (बाहरी उत्तेजना) के संपर्क में लाकर सतह कोटिंग की अखंडता का आकलन किया गया था। विकसित एनएफआरसीएस सीएच एनएफआरसीएस और सीपी एनएफआरसीएस को पानी से भरे बीकर में रखा गया और क्रमशः 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 और 30 मिनट के लिए ध्वनिकृत किया गया। सुखाने के बाद, एनएफआरसीएस के प्रारंभिक और अंतिम वजन के बीच प्रतिशत अंतर का उपयोग सामग्री के प्रतिशत नुकसान (एचएफएफसी) की गणना करने के लिए किया गया था। इन विट्रो बीसीटी ने सतह सामग्री की बंधन शक्ति या हानि का और समर्थन किया। एचएफएफसी के सीटी से बंधन की दक्षता रक्त
विकसित एनएफआरसीएस की समरूपता एनएफआरसीएस के यादृच्छिक रूप से चयनित सामान्य स्थानों से लिए गए नमूनों (30 मिलीग्राम) के बीसीटी द्वारा निर्धारित की गई थी। एनएफआरसीएस अनुपालन निर्धारित करने के लिए पहले बताई गई बीसीटी प्रक्रिया का पालन करें। सभी पांच नमूनों के बीच निकटता एक समान सतह कवरेज और सीटी जाल में एचएफएफसी जमाव सुनिश्चित करती है।
नाममात्र रक्त संपर्क क्षेत्र (NBCA) को कुछ संशोधनों के साथ पहले बताए अनुसार निर्धारित किया गया था। Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS और Cs की दो सतहों के बीच 20 µl रक्त को दबाकर रक्त को जमाया गया। 1 घंटे के बाद, स्टेंट के दो हिस्सों को अलग किया गया और मैन्युअल रूप से थक्के के क्षेत्र को मापा गया। तीन पुनरावृत्तियों का औसत मूल्य NBCA NFRCS19 माना गया।
बाहरी वातावरण से या जमावट शुरू करने के लिए जिम्मेदार चोट वाली जगह से पानी को अवशोषित करने के लिए एनएफआरसीएस की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए डायनेमिक वेपर सोखना (डीवीएस) विश्लेषण का उपयोग किया गया था। डीवीएस ± 0.1 µg के द्रव्यमान संकल्प के साथ एक अति संवेदनशील संतुलन का उपयोग करके गुरुत्वाकर्षण रूप से एक नमूने में वाष्प के अवशोषण और हानि का मूल्यांकन या रिकॉर्ड करता है। संतृप्त और शुष्क वाहक गैसों को मिलाकर नमूने के चारों ओर एक इलेक्ट्रॉनिक द्रव्यमान प्रवाह नियंत्रक द्वारा एक आंशिक वाष्प दबाव (सापेक्ष आर्द्रता) उत्पन्न किया जाता है। यूरोपीय फार्माकोपिया दिशानिर्देशों के अनुसार, नमूनों द्वारा नमी अवशोषण के प्रतिशत के आधार पर, नमूनों को 4 श्रेणियों में वर्गीकृत किया गया था (0-0.012% w/w− गैर-हीग्रोस्कोपिक, 0.2-2% w/w थोड़ा हीड्रोस्कोपिक, 2-15% मध्यम रूप से हीड्रोस्कोपिक, और > 15% बहुत हीड्रोस्कोपिक)23। यूरोपीय फार्माकोपिया दिशानिर्देशों के अनुसार, नमूनों द्वारा नमी अवशोषण के प्रतिशत के आधार पर, नमूनों को 4 श्रेणियों में वर्गीकृत किया गया था (0-0.012% w/w− गैर-हीग्रोस्कोपिक, 0.2-2% w/w थोड़ा हीड्रोस्कोपिक, 2-15% मध्यम रूप से हीड्रोस्कोपिक, और > 15% बहुत हीड्रोस्कोपिक)23।यूरोपीय फार्माकोपिया की सिफारिशों के अनुसार, नमूनों द्वारा नमी अवशोषण के प्रतिशत के आधार पर, नमूनों को 4 श्रेणियों में विभाजित किया गया था (0-0.012% w/w - गैर-हीग्रोस्कोपिक, 0.2-2% w/w थोड़ा हीड्रोस्कोपिक, 2- पंद्रह%)।% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % मध्यम आर्द्रताग्राही तथा > 15% बहुत आर्द्रताग्राही)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0.012% w/w- मूल्य निर्धारण, 0.2-2% w/w मूल्य निर्धारण, 2-15 % मूल्य निर्धारण,> 15% मूल्य निर्धारण）23。0-0.012% W/w- अधिकतम मूल्य , 、 , , 0.2-2% W/w शुल्क , 2-15% लाभ ,> 15 % मूल्य निर्धारण）23。यूरोपीय फार्माकोपिया की सिफारिशों के अनुसार, नमूने द्वारा अवशोषित नमी के प्रतिशत के आधार पर नमूनों को 4 वर्गों में विभाजित किया जाता है (वजन से 0-0.012% - गैर-हीग्रोस्कोपिक, वजन से 0.2-2% थोड़ा हीड्रोस्कोपिक, वजन से 2-15%)।% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % मध्यम आर्द्रताग्राही, > 15% बहुत आर्द्रताग्राही) 23.एनएफसीएस एक्स एनएफसीएस और टीएसएन एनएफसीएस की हाइग्रोस्कोपिक दक्षता को विश्लेषक डीवीएस टीए टीजीए क्यू5000 एसए पर निर्धारित किया गया था। इस प्रक्रिया के दौरान, रन टाइम, सापेक्ष आर्द्रता (आरएच), और 25 डिग्री सेल्सियस24 पर वास्तविक समय नमूना वजन प्राप्त किया गया। नमी की मात्रा की गणना निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके सटीक एनएफआरसीएस द्रव्यमान विश्लेषण द्वारा की जाती है:
MC NFRCS आर्द्रता है। m1 - NSAIDs का सूखा वजन। m2 किसी दिए गए RH पर वास्तविक समय NFRCS द्रव्यमान है।
नमूनों को 25 °C पर 10 घंटे (< 7 × 10–3 Torr) तक खाली करने के बाद तरल नाइट्रोजन के साथ नाइट्रोजन सोखना प्रयोग का उपयोग करके कुल सतह क्षेत्र का अनुमान लगाया गया था। नमूनों को 25 °C पर 10 घंटे (< 7 × 10–3 Torr) तक खाली करने के बाद तरल नाइट्रोजन के साथ नाइट्रोजन सोखना प्रयोग का उपयोग करके कुल सतह क्षेत्र का अनुमान लगाया गया था। Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по अतिरिक्त तापमान सीमा 25 डिग्री सेल्सियस в течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). नमूनों को 25°C पर 10 घंटे (< 7 × 10–3 Torr) तक खाली करने के बाद तरल नाइट्रोजन के साथ नाइट्रोजन सोखना प्रयोग का उपयोग करके कुल सतह क्षेत्र का अनुमान लगाया गया था।25°C तापमान 10 डिग्री सेल्सियस (<7 × 10-3 Torr），使用液氮的氮吸附实验估计总表面积。)25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием एक अतिरिक्त उत्पाद के रूप में एक उपकरण प्राप्त करें образцов 10 तापमान पर 25°C (<7 × 10-3 торр). नमूनों को 25°C (< 7 x 10-3 टोर) पर 10 घंटे तक खाली रखने के बाद तरल नाइट्रोजन के साथ नाइट्रोजन अवशोषण प्रयोगों का उपयोग करके कुल सतह क्षेत्र का अनुमान लगाया गया।कुल सतह क्षेत्र, छिद्र मात्रा और एनएफआरसीएस छिद्र आकार को आरएस 232 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके नोवा 1000e, ऑस्ट्रिया से प्राप्त क्वांटाक्रोम के साथ निर्धारित किया गया।
पूरे रक्त से 5% आरबीसी (पतला करने वाले के रूप में खारा) तैयार करें। फिर HFFC (0.25 मिली) के एक अंश को 96-वेल प्लेट और 5% आरबीसी द्रव्यमान (0.1 मिली) में स्थानांतरित करें। मिश्रण को 37 डिग्री सेल्सियस पर 40 मिनट तक इनक्यूबेट करें। लाल रक्त कोशिकाओं और सीरम के मिश्रण को सकारात्मक नियंत्रण के रूप में माना जाता था, और खारा और लाल रक्त कोशिकाओं के मिश्रण को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में माना जाता था। स्टैजिट्ज़की पैमाने के अनुसार हेमग्लूटिनेशन निर्धारित किया गया था। प्रस्तावित पैमाने इस प्रकार हैं: + + + + घने दानेदार समुच्चय; + + + घुमावदार किनारों के साथ चिकने निचले पैड; + + फटे किनारों के साथ चिकने निचले पैड; + चिकने पैड के किनारों के चारों ओर संकीर्ण लाल छल्ले; - (नकारात्मक) निचले वेल के केंद्र में असतत लाल बटन 12।
एनएफआरसीएस की हेमोकंपैटिबिलिटी का अध्ययन अंतर्राष्ट्रीय मानकीकरण संगठन (आईएसओ) (आईएसओ10993-4, 1999)26,27 की विधि के अनुसार किया गया था। सिंह एट अल द्वारा वर्णित ग्रेविमेट्रिक विधि। एनएफआरसीएस की उपस्थिति में या उसकी सतह पर थ्रोम्बस गठन का आकलन करने के लिए मामूली संशोधन किए गए थे। 500 मिलीग्राम सीएस, सीएच एनएफआरसीएस और सीपी एनएफआरसीएस को फॉस्फेट बफर सलाइन (पीबीएस) में 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया था। 24 घंटे के बाद, पीबीएस को हटा दिया गया और एनएफआरसीएस को 3.8% सोडियम साइट्रेट युक्त 2 मिली रक्त से उपचारित किया गया। एनएफआरसीएस की सतह पर, इनक्यूबेट किए गए नमूनों में 0.1 एम CaCl2 की 0.04 मिली मिलाएं एनएफआरके की सतह पर जमे हुए रक्त को 36-38% फॉर्मेल्डिहाइड घोल से उपचारित किया गया। फॉर्मेल्डिहाइड से जमे हुए थक्कों को सुखाया गया और उनका वजन किया गया। रक्त और नमूने के बिना गिलास (नकारात्मक नियंत्रण) और रक्त के साथ गिलास (सकारात्मक नियंत्रण) के वजन की गणना करके घनास्त्रता के प्रतिशत का अनुमान लगाया गया था।
प्रारंभिक पुष्टि के रूप में, नमूनों को ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत देखा गया ताकि HFFC सतह कोटिंग, Ct इंटरकनेक्टेड और Ct नेटवर्क की छिद्र बनाने की क्षमता को समझा जा सके। NFRCS से Ch और Cp के पतले हिस्सों को स्केलपेल ब्लेड से काटा गया। परिणामी भाग को एक ग्लास स्लाइड पर रखा गया, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया गया, और किनारों को गोंद के साथ तय किया गया। तैयार स्लाइडों को एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत देखा गया और विभिन्न आवर्धन पर तस्वीरें ली गईं।
सीटी नेटवर्क में पॉलिमर जमाव को राइस एट अल.29 द्वारा वर्णित विधि के आधार पर फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके देखा गया था। निर्माण के लिए प्रयुक्त एचएफएफसी संरचना को फ्लोरोसेंट डाई (ऐमारैंथ) के साथ मिश्रित किया गया, तथा एनएफआरसीएस (सीएच एवं सीपी) को पहले बताई गई विधि के अनुसार तैयार किया गया। निर्माण के लिए प्रयुक्त एचएफएफसी संरचना को फ्लोरोसेंट डाई (ऐमारैंथ) के साथ मिश्रित किया गया, तथा एनएफआरसीएस (सीएच एवं सीपी) को पहले बताई गई विधि के अनुसार तैयार किया गया।निर्माण के लिए प्रयुक्त एचएफएफसी संरचना को फ्लोरोसेंट डाई (ऐमारैंथ) के साथ मिश्रित किया गया तथा एनएफआरसीएस (सीएच और सीपी) को पूर्व वर्णित विधि के अनुसार प्राप्त किया गया।HFFC के लिए एक नया विकल्प NFRCS (Ch &) का उपयोग करना है। सीपी）。HFFC के लिए एक नया विकल्प NFRCS (Ch &) का उपयोग करना है। सीपी）。सूत्रीकरण में प्रयुक्त एचएफएफसी संरचना को फ्लोरोसेंट डाई (ऐमारैंथ) के साथ मिश्रित किया गया तथा एनएफआरसीएस (सीएच और सीपी) प्राप्त किया गया, जैसा कि पहले बताया गया है।प्राप्त नमूनों से NFRK के पतले हिस्से काटे गए, उन्हें कांच की स्लाइडों पर रखा गया और कवर स्लिप्स से ढक दिया गया। तैयार स्लाइडों को हरे रंग के फिल्टर (310-380 एनएम) का उपयोग करके फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के नीचे देखें। सीटी नेटवर्क में सीटी संबंधों और अतिरिक्त पॉलिमर जमाव को समझने के लिए 4x आवर्धन पर चित्र लिए गए।
NFRCS Ch और Cp की सतह स्थलाकृति को टैपिंग मोड में अल्ट्रा-शार्प TESP कैंटिलीवर के साथ एक परमाणु बल माइक्रोस्कोप (AFM) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, ब्रुकर, ताइवान। सॉफ़्टवेयर (स्कैनिंग प्रोब इमेज प्रोसेसर) का उपयोग करके रूट मीन स्क्वायर (RMS) द्वारा सतह खुरदरापन निर्धारित किया गया था। सतह की एकरूपता की जाँच करने के लिए विभिन्न NFRCS स्थानों को 3D छवियों पर प्रस्तुत किया गया था। किसी दिए गए क्षेत्र के लिए स्कोर के मानक विचलन को सतह खुरदरापन के रूप में परिभाषित किया गया है। NFRCS31 की सतह खुरदरापन को मापने के लिए RMS समीकरण का उपयोग किया गया था।
Ch NFRCS और Cp NFRCS की सतही आकृति विज्ञान को समझने के लिए FESEM, SU8000, HI-0876-0003, हिताची, टोक्यो का उपयोग करके FESEM-आधारित अध्ययन किए गए, जिसमें Cm NFRCS की तुलना में बेहतर BCT दिखाया गया। FESEM अध्ययन झाओ एट अल द्वारा वर्णित विधि के अनुसार मामूली संशोधनों के साथ किया गया था। 20 से 30 मिलीग्राम NFRCS Ch NFRCS और सीपी NFRCS को चूहे के खून में पहले से मिश्रित 3.8% सोडियम साइट्रेट के 20 µl के साथ मिलाया गया था। जमावट शुरू करने के लिए रक्त-उपचारित नमूनों में 0.2 M CaCl2 के 20 μl को जोड़ा गया था और नमूनों को कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया था।
बाद के नमूनों को 0.1% ग्लूटाराल्डिहाइड के साथ उपचारित किया गया और फिर नमी को हटाने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर गर्म हवा के ओवन में सुखाया गया। सूखे नमूनों को लेपित किया गया और उनका विश्लेषण किया गया 32। विश्लेषण के दौरान प्राप्त अन्य छवियां व्यक्तिगत कपास फाइबर की सतह पर थक्का गठन, सीटी के बीच बहुलक जमाव, एरिथ्रोसाइट आकृति विज्ञान (आकार), थक्का अखंडता और एनएफआरसीएस की उपस्थिति में एरिथ्रोसाइट आकृति विज्ञान थीं। अनुपचारित एनएफआरसीएस क्षेत्रों और रक्त के साथ संवर्धित सीएच और सीपी उपचारित एनएफआरसीएस क्षेत्रों को मौलिक आयनों (सोडियम, पोटेशियम, नाइट्रोजन, कैल्शियम, मैग्नीशियम, जस्ता, तांबा और सेलेनियम) के लिए स्कैन किया गया था 33। थक्का निर्माण और थक्का समरूपता के दौरान मौलिक आयन संचय को समझने के लिए उपचारित और अनुपचारित नमूनों के बीच मौलिक आयन प्रतिशत की तुलना करें।
सीटी सतह पर सीपी एचएफएफसी सतह कोटिंग की मोटाई को एफईएसईएम का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। सीपी एनएफआरसीएस के क्रॉस सेक्शन को फ्रेमवर्क से काटा गया और स्पटर कोटिंग की गई। परिणामी स्पटर कोटिंग के नमूनों को एफईएसईएम द्वारा देखा गया और सतह कोटिंग की मोटाई को मापा गया 34, 35, 36।
एक्स-रे माइक्रो-सीटी उच्च-रिज़ॉल्यूशन 3डी गैर-विनाशकारी इमेजिंग प्रदान करता है और आपको एनएफआरके की आंतरिक संरचनात्मक व्यवस्था का अध्ययन करने की अनुमति देता है। माइक्रो-सीटी नमूने में एक्स-रे के स्थानीय रैखिक क्षीणन गुणांक को रिकॉर्ड करने के लिए नमूने से गुजरने वाली एक्स-रे बीम का उपयोग करता है, जो रूपात्मक जानकारी प्राप्त करने में मदद करता है। सीपी एनएफआरसीएस और रक्त-उपचारित सीपी एनएफआरसीएस में सीटी के आंतरिक स्थान की जांच माइक्रो-सीटी द्वारा की गई ताकि एनएफआरसीएस37,38,39 की उपस्थिति में अवशोषण दक्षता और रक्त के थक्के को समझा जा सके। रक्त-उपचारित और अनुपचारित सीपी एनएफआरसीएस नमूनों की 3डी संरचनाओं को माइक्रो-सीटी (वी|टोम|एक्स एस240, फीनिक्स, जर्मनी) का उपयोग करके पुनर्निर्मित किया गया। वीजी स्टूडियो-मैक्स सॉफ्टवेयर संस्करण 2.2 का उपयोग करके, एनएफआरसीएस के लिए 3डी छवियों को विकसित करने के लिए विभिन्न कोणों (आदर्श रूप से 360 डिग्री कवरेज) से कई एक्स-रे छवियां ली गईं। एकत्रित प्रक्षेपण डेटा को संबंधित सरल 3D स्कैनआईपी एकेडमिक सॉफ्टवेयर का उपयोग करके 3D वॉल्यूमेट्रिक छवियों में पुनर्निर्मित किया गया।
इसके अलावा, थक्के के वितरण को समझने के लिए, रक्त का थक्का जमने की प्रक्रिया शुरू करने के लिए NFRCS में 20 µl प्रीमिक्स्ड साइट्रेटेड रक्त और 20 µl 0.2 M CaCl2 मिलाया गया। तैयार नमूनों को सख्त होने के लिए छोड़ दिया जाता है। NFRK सतह को 0.5% ग्लूटाराल्डिहाइड से उपचारित किया गया और 30 मिनट के लिए 30-40 डिग्री सेल्सियस पर गर्म हवा के ओवन में सुखाया गया। NFRCS पर बने रक्त के थक्के को स्कैन किया गया, उसका पुनर्निर्माण किया गया और रक्त के थक्के की 3D छवि को देखा गया।
मामूली संशोधनों के साथ पहले वर्णित विधि का उपयोग करके सीपी एनएफआरसीएस (सीएच एनएफआरसीएस की तुलना में सर्वोत्तम) पर जीवाणुरोधी परख किए गए थे। इनक्यूबेटर में पेट्री डिश में अगर पर बढ़ रहे तीन अलग-अलग परीक्षण सूक्ष्मजीवों [एस.ऑरियस (ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया), ई.कोली (ग्राम नेगेटिव बैक्टीरिया) और सफेद कैंडिडा (सी.एल्बिकेंस)] का उपयोग करके सीपी एनएफआरसीएस और सीपी एचएफएफसी की जीवाणुरोधी गतिविधि निर्धारित की गई थी। अगर माध्यम पर 105-106 सीएफयू एमएल-1 की सांद्रता में पतला जीवाणु संस्कृति निलंबन के 50 मिलीलीटर को समान रूप से टीका लगाया। माध्यम को पेट्री डिश में डालें और इसे जमने दें। एचएफएफसी (एचएफएफसी के लिए 3 कुएं और नकारात्मक नियंत्रण के लिए 1) से भरने के लिए अगर प्लेट की सतह पर कुएं बनाए गए थे। पेट्री डिश के दूसरी तरफ, ठोस अगर पर 12 मिमी सीपी एनएफआरसीएस डिस्क रखें और पीबीएस (पीएच 7.4) के साथ नम करें। सिप्रोफ्लोक्सासिन, एम्पीसिलीन और फ्लुकोनाज़ोल की गोलियाँ स्टैफिलोकोकस ऑरियस, एस्चेरिचिया कोली और कैंडिडा एल्बिकेंस के लिए संदर्भ मानक मानी जाती हैं। अवरोध के क्षेत्र को मैन्युअल रूप से मापें और अवरोध के क्षेत्र की एक डिजिटल छवि लें।
संस्थागत नैतिक अनुमोदन के बाद, अध्ययन दक्षिण भारत में कर्नाटक के मणिपाल में कस्तूरबा मेडिकल कॉलेज ऑफ एजुकेशन एंड रिसर्च में आयोजित किया गया था। इन विट्रो टीईजी प्रायोगिक प्रोटोकॉल की समीक्षा और अनुमोदन कस्तूरबा मेडिकल कॉलेज, मणिपाल, कर्नाटक (आईईसी: 674/2020) की संस्थागत नैतिकता समिति द्वारा किया गया है। विषयों को अस्पताल के ब्लड बैंक से स्वयंसेवक रक्त दाताओं (18 से 55 वर्ष की आयु) से भर्ती किया गया था। इसके अलावा, रक्त के नमूनों के संग्रह के लिए स्वयंसेवकों से एक सूचित सहमति फॉर्म प्राप्त किया गया था। सोडियम साइट्रेट के साथ पहले से मिश्रित पूरे रक्त पर सीपी एचएफएफसी फॉर्मूलेशन के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए मूल टीईजी (एन-टीईजी) का उपयोग किया गया था। एन-टीईजी को पॉइंट-ऑफ-केयर पुनर्जीवन में अपनी भूमिका के लिए व्यापक रूप से मान्यता प्राप्त है अध्ययन में गर्भावस्था/प्रसवोत्तर या यकृत रोग जैसी हेमोस्टेटिक या थ्रोम्बोटिक जटिलताओं वाले प्रतिभागियों को शामिल नहीं किया गया था। जमावट कैस्केड को प्रभावित करने वाली दवाएं लेने वाले विषयों को भी अध्ययन से बाहर रखा गया था। मानक प्रक्रियाओं के अनुसार सभी प्रतिभागियों पर बुनियादी प्रयोगशाला परीक्षण (हीमोग्लोबिन, प्रोथ्रोम्बिन समय, सक्रिय थ्रोम्बोप्लास्टिन और प्लेटलेट काउंट) किए गए थे। एन-टीईजी रक्त के थक्के की विस्कोलेस्टिसिटी, शुरुआती थक्का संरचना, कण संपर्क, थक्का मजबूत करने और थक्का विखंडन का निर्धारण करता है। एन-टीईजी विश्लेषण कई सेलुलर तत्वों और प्लाज्मा के सामूहिक प्रभावों पर ग्राफिकल और संख्यात्मक डेटा प्रदान करता है। एन-टीईजी विश्लेषण सीपी एचएफएफसी (10 µl और 50 µl) के दो अलग-अलग संस्करणों पर किया गया था। 1 मिली (सीपी एचएफएफसी + साइट्रेटेड रक्त), 340 µl मिश्रित रक्त को 20 µl 0.2 M CaCl2 युक्त TEG डिश में मिलाएं। इसके बाद, TEG डिश को TEG® 5000, US में लोड किया गया ताकि Cp HFFC41 की उपस्थिति में R, K, अल्फा एंगल, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% रक्त नमूनों को मापा जा सके।
इन विवो अध्ययन प्रोटोकॉल की समीक्षा की गई और संस्थागत पशु आचार समिति (IAEC), कस्तूरबा स्कूल ऑफ मेडिसिन, मणिपाल इंस्टीट्यूट ऑफ हायर एजुकेशन, मणिपाल (IAEC/KMC/69/2020) द्वारा अनुमोदित किया गया। सभी पशु प्रयोग पशु प्रयोग नियंत्रण और पर्यवेक्षण समिति (CPCSEA) की सिफारिशों के अनुसार किए गए थे। सभी इन विवो NFRCS अध्ययन (2 × 2 सेमी2) मादा विस्टार चूहों (200 से 250 ग्राम वजन) पर किए गए थे। सभी जानवरों को 24-26 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अनुकूलित किया गया था, जानवरों को मानक भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच थी। सभी जानवरों को यादृच्छिक रूप से अलग-अलग समूहों में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में तीन जानवर शामिल थे अध्ययन से पहले, जानवरों को 20-50 मिलीग्राम केटामाइन (प्रति 1 किलोग्राम शरीर के वजन) और 2-10 मिलीग्राम ज़ाइलाज़िन (प्रति 1 किलोग्राम शरीर के वजन) के मिश्रण के इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) प्रशासन द्वारा बेहोश कर दिया गया था। अध्ययन के बाद, नमूनों के प्रारंभिक और अंतिम वजन के बीच अंतर का मूल्यांकन करके रक्तस्राव की मात्रा की गणना की गई, तीन परीक्षणों से प्राप्त औसत मूल्य को नमूने की रक्तस्राव मात्रा के रूप में लिया गया।
चूहे की पूंछ के विच्छेदन मॉडल को आघात, युद्ध या यातायात दुर्घटना (चोट मॉडल) में रक्तस्राव को नियंत्रित करने के लिए NFRCS की क्षमता को समझने के लिए लागू किया गया था। पूंछ के 50% हिस्से को स्केलपेल ब्लेड से काटें और सामान्य रक्तस्राव सुनिश्चित करने के लिए 15 सेकंड के लिए हवा में रखें। इसके अलावा, दबाव डालकर चूहे की पूंछ पर परीक्षण नमूने रखे गए (Ct, Cs, Ch NFRCS और Cp NFRCS)। परीक्षण नमूनों (n = 3)17,45 के लिए रक्तस्राव और PCT की रिपोर्ट की गई।
युद्ध में NFRCS दबाव नियंत्रण की प्रभावशीलता की जांच सतही ऊरु धमनी के एक मॉडल पर की गई थी। ऊरु धमनी को उजागर किया जाता है, 24G ट्रोकार से छिद्रित किया जाता है, और 15 सेकंड के भीतर रक्तस्राव होता है। अनियंत्रित रक्तस्राव देखे जाने के बाद, परीक्षण नमूने को दबाव के साथ छिद्रित स्थान पर रखा जाता है। परीक्षण नमूने के आवेदन के तुरंत बाद, थक्के का समय दर्ज किया गया और अगले 5 मिनट के लिए हेमोस्टेटिक दक्षता देखी गई। Cs और Ct46 के साथ भी यही प्रक्रिया दोहराई गई।
डॉवलिंग एट अल. 47 ने इंट्राऑपरेटिव रक्तस्राव के संदर्भ में हेमोस्टैटिक सामग्रियों की हेमोस्टैटिक क्षमता का आकलन करने के लिए एक यकृत चोट मॉडल का प्रस्ताव दिया। सीटी नमूने (नकारात्मक नियंत्रण), सीएस फ्रेमवर्क (सकारात्मक नियंत्रण), सीएच एनएफआरसीएस नमूने और सीपी एनएफआरसीएस नमूनों के लिए बीसीटी दर्ज किया गया था। चूहे के सुप्राहेपेटिक वेना कावा को एक मध्य लैपरोटॉमी करके उजागर किया गया था। उसके बाद, बाएं लोब के दूरस्थ भाग को कैंची से काट दिया गया था। एक स्केलपेल ब्लेड के साथ यकृत में एक चीरा लगाएं और इसे कुछ सेकंड के लिए खून बहने दें। सटीक रूप से तौले गए Ch NFRCS और Cp NFRCS परीक्षण नमूनों को बिना किसी सकारात्मक दबाव के क्षतिग्रस्त सतह पर रखा गया और बीसीटी दर्ज किया गया।
विकसित पॉलीमर-आधारित NFRCS के घाव भरने के गुणों का मूल्यांकन करने के लिए एक एक्सिसनल घाव मॉडल का उपयोग करके इन विवो घाव भरने के परीक्षण किए गए। एक्सिसनल घावों के मॉडल का चयन किया गया और मामूली संशोधनों के साथ पहले से प्रकाशित विधियों के अनुसार प्रदर्शन किया गया19,32,48। सभी जानवरों को पहले बताए अनुसार बेहोश कर दिया गया था। पीठ की त्वचा में एक गोलाकार गहरा चीरा बनाने के लिए बायोप्सी पंच (12 मिमी) का उपयोग करें। तैयार घाव स्थलों को Cs (सकारात्मक नियंत्रण), Ct (यह पहचानते हुए कि कपास पैड उपचार में बाधा डालते हैं), Ch NFRCS और Cp NFRCS (प्रायोगिक समूह) और बिना किसी उपचार के एक नकारात्मक नियंत्रण के साथ तैयार किया गया था। अध्ययन के प्रत्येक दिन, सभी चूहों में घाव का क्षेत्र मापा गया था। घाव क्षेत्र की तस्वीर लेने और एक नई ड्रेसिंग लगाने के लिए एक डिजिटल कैमरे का उपयोग करें। घाव बंद होने का प्रतिशत निम्न सूत्र द्वारा मापा गया था:
अध्ययन के 12वें दिन घाव बंद होने के प्रतिशत के आधार पर, सर्वश्रेष्ठ समूह ((सीपी एनएफआरसीएस) और नियंत्रण समूह) की चूहे की त्वचा को निकाला गया और एच एंड ई अभिरंजन और मैसन के ट्राइक्रोम अभिरंजन द्वारा अध्ययन किया गया। अध्ययन के 12वें दिन घाव बंद होने के प्रतिशत के आधार पर, सर्वश्रेष्ठ समूह ((सीपी एनएफआरसीएस) और नियंत्रण समूह) की चूहे की त्वचा को निकाला गया और एच एंड ई अभिरंजन और मैसन के ट्राइक्रोम अभिरंजन द्वारा अध्ययन किया गया।अध्ययन के 12वें दिन घाव बंद होने के प्रतिशत के आधार पर, सर्वश्रेष्ठ समूह ((सीपी एनएफआरसीएस) और नियंत्रण समूह) के चूहों की त्वचा को निकाला गया और हेमेटोक्सिलिन-इओसिन और मैसन के ट्राइक्रोम के साथ रंग कर जांच की गई।12 साल की उम्र में 12 साल की उम्र में 12 साल की हो चुकी है, 12 साल की हो चुकी है एनएफआरसीएस) और अधिक पढ़ें12 साल की उम्र में 12 साल की उम्र में 12 साल की हो चुकी है, 12 साल की हो चुकी है एनएफआरसीएस) और अधिक पढ़ेंअध्ययन के 12वें दिन सर्वोत्तम समूह ((सीपी एनएफआरसीएस) और नियंत्रण समूह) के चूहों को हेमेटोक्सिलिन-इओसिन अभिरंजन और मैसन के ट्राइक्रोम अभिरंजन के लिए घाव बंद होने के प्रतिशत के आधार पर निकाला गया।कार्यान्वित धुंधलापन प्रक्रिया पहले वर्णित विधियों49,50 के अनुसार की गई थी। संक्षेप में, 10% फॉर्मेलिन में स्थिरीकरण के बाद, नमूनों को ग्रेडेड अल्कोहल की एक श्रृंखला का उपयोग करके निर्जलित किया गया था। निकाले गए ऊतक के पतले खंड (5 µm मोटे) प्राप्त करने के लिए एक माइक्रोटोम का उपयोग करें। हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों का अध्ययन करने के लिए नियंत्रण और Cp NFRCS के पतले सीरियल सेक्शन को हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन के साथ इलाज किया गया था। कोलेजन फाइब्रिल के गठन का पता लगाने के लिए मैसन के ट्राइक्रोम दाग का उपयोग किया गया था। प्राप्त परिणामों का पैथोलॉजिस्ट द्वारा आँख बंद करके अध्ययन किया गया।
सीपी एनएफआरसीएस नमूनों की स्थिरता का अध्ययन कमरे के तापमान (25 डिग्री सेल्सियस ± 2 डिग्री सेल्सियस/60% आरएच ± 5%) पर 12 महीने तक किया गया51। सीपी एनएफआरसीएस (सतह मलिनकिरण और सूक्ष्मजीव वृद्धि) का दृश्य निरीक्षण किया गया और सामग्री और विधि अनुभाग में उल्लिखित उपरोक्त विधियों के अनुसार फोल्ड वियर प्रतिरोध और बीसीटी के लिए परीक्षण किया गया।
15×15 सेमी2 के आकार के साथ सीपी एनएफआरसीएस तैयार करके सीपी एनएफआरसीएस की मापनीयता और पुनरुत्पादकता की जांच की गई। इसके अलावा, 30 मिलीग्राम नमूने (एन = 5) विभिन्न सीपी एनएफआरसीएस अंशों से निकाले गए और अध्ययन किए गए नमूनों के बीसीटी का मूल्यांकन किया गया जैसा कि पहले विधियों के खंड में वर्णित है।
हमने विभिन्न बायोमेडिकल अनुप्रयोगों के लिए Cp NFRCS रचनाओं का उपयोग करके विभिन्न आकार और संरचनाएँ विकसित करने का प्रयास किया है। ऐसे आकार या विन्यास में नाक से खून बहने, दंत प्रक्रियाओं के लिए शंक्वाकार स्वाब और योनि से खून बहने के लिए बेलनाकार स्वाब शामिल हैं।
सभी डेटा सेट को माध्य ± मानक विचलन के रूप में व्यक्त किया गया है और प्रिज्म 5.03 (ग्राफपैड, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके एनोवा द्वारा विश्लेषण किया गया है, इसके बाद बोनफेरोनी के बहु तुलना परीक्षण (*p<0.05) का उपयोग किया गया है।
मानव अध्ययनों में की गई सभी प्रक्रियाएं संस्थान और राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद के मानकों के अनुसार थीं, साथ ही हेलसिंकी 1964 की घोषणा और उसके बाद के संशोधनों, या इसी तरह के नैतिक मानकों के अनुसार थीं। सभी प्रतिभागियों को अध्ययन की विशेषताओं और इसकी स्वैच्छिक प्रकृति के बारे में बताया गया। प्रतिभागियों का डेटा एकत्र होने के बाद गोपनीय रहता है। इन विट्रो TEG प्रायोगिक प्रोटोकॉल की समीक्षा की गई है और कस्तूरबा मेडिकल कॉलेज, मणिपाल, कर्नाटक की संस्थागत नैतिकता समिति (IEC: 674/2020) द्वारा अनुमोदित किया गया है। स्वयंसेवकों ने रक्त के नमूने एकत्र करने के लिए सूचित सहमति पर हस्ताक्षर किए।
पशु अध्ययनों में की गई सभी प्रक्रियाएं कस्तूबा फैकल्टी ऑफ मेडिसिन, मणिपाल इंस्टीट्यूट ऑफ हायर एजुकेशन, मणिपाल (IAEC/KMC/69/2020) के अनुसार की गईं। डिज़ाइन किए गए सभी पशु प्रयोग पशु प्रयोग नियंत्रण और पर्यवेक्षण समिति (CPCSEA) के दिशानिर्देशों के अनुसार किए गए थे। सभी लेखक ARRIVE दिशानिर्देशों का पालन करते हैं।
सभी NFRCS के FTIR स्पेक्ट्रा का विश्लेषण किया गया और चित्रा 2A में दिखाए गए चिटोसन स्पेक्ट्रम के साथ तुलना की गई। 3437 सेमी -1 (OH और NH स्ट्रेचिंग, ओवरलैप), 2945 और 2897 सेमी -1 (CH स्ट्रेचिंग), 1660 सेमी -1 (NH2 स्ट्रेन), 1589 सेमी -1 (N–H झुकने) पर चिटोसन की विशेषता स्पेक्ट्रल चोटियाँ (रिकॉर्ड की गईं) ), 1157 सेमी -1 (पुल खिंचाव O-), 1067 सेमी -1 (खिंचाव C–O, द्वितीयक हाइड्रॉक्सिल), 993 सेमी -1 (खिंचाव CO, Bo-OH) 52.53.54। पूरक तालिका S1 चिटोसन (रिपोर्टर), शुद्ध चिटोसन, Cm, Ch, और Cp के लिए FTIR NFRCS अवशोषण स्पेक्ट्रम मान दिखाती है। सभी एनएफआरसीएस (सीएम, सीएच और सीपी) के एफटीआईआर स्पेक्ट्रा ने बिना किसी महत्वपूर्ण बदलाव के शुद्ध चिटोसन के समान ही विशिष्ट अवशोषण बैंड दिखाए (चित्र 2ए)। एफटीआईआर परिणामों ने एनएफआरसीएस विकसित करने के लिए उपयोग किए गए पॉलिमर के बीच रासायनिक या भौतिक अंतःक्रियाओं की अनुपस्थिति की पुष्टि की, जो दर्शाता है कि उपयोग किए गए पॉलिमर निष्क्रिय हैं।
Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS और Cs का इन विट्रो अभिलक्षणन। (A) संपीड़न के तहत चिटोसन और Cm NFRCS, Ch NFRCS और Cp NFRCS की रचनाओं के संयुक्त FTIR स्पेक्ट्रा को दर्शाता है। (B) a) NFRCS Cm, Ch, Cp और Cg की संपूर्ण रक्त अवशोषण दर (n = 3); Ct नमूनों ने उच्च BAR दिखाया क्योंकि कपास झाड़ू की अवशोषण क्षमता अधिक होती है; b) रक्त अवशोषण के बाद अवशोषित नमूने का चित्रण। परीक्षण नमूने C के BCT का चित्रमय प्रतिनिधित्व (Cp NFRCS का BCT सबसे अच्छा था (15 सेकंड, n = 3))। सी, डी, ई, और जी में डेटा को माध्य ± एसडी के रूप में दिखाया गया था, और त्रुटि बार एसडी, ***p < 0.0001 को दर्शाते हैं। सी, डी, ई, और जी में डेटा को माध्य ± एसडी के रूप में दिखाया गया था, और त्रुटि बार एसडी, ***p < 0.0001 को दर्शाते हैं। सी, डी, ई और जी पर क्लिक करें планки погрешностей представляют стандартное отклонение, ***p <0,0001. सी, डी, ई, और जी में डेटा माध्य ± मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत किया गया है, और त्रुटि बार मानक विचलन, ***p<0.0001 को दर्शाते हैं। C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD, 误差线代表SD,***p < 0.0001。 C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD, 误差线代表SD,***p < 0.0001。 सी, डी, ई और जी पर अंतिम चरण ± स्टैटिन का उपयोग करना отклонение, планки погрешностей представляют стандартное отклонение, ***पी <0,0001. C, D, E, और G में डेटा को माध्य ± मानक विचलन के रूप में दिखाया गया है, त्रुटि बार मानक विचलन को दर्शाते हैं, ***p<0.0001।