Dankon pro via vizito al Nature.com. La retumilversio, kiun vi uzas, havas limigitan subtenon por CSS. Por la plej bona sperto, ni rekomendas, ke vi uzu ĝisdatigitan retumilon (aŭ malŝaltu la Kongruecan Reĝimon en Internet Explorer). Dume, por certigi daŭran subtenon, ni prezentos la retejon sen stiloj kaj JavaScript.
Nekontrolita sangado estas unu el la ĉefaj mortokaŭzoj. Atingi rapidan hemostazon certigas la supervivon de la subjekto kiel unua helpo dum batalo, trafikakcidentoj kaj operacioj por redukti morton. Nanopora fibro-plifortigita kompozita skafaldo (NFRCS) derivita de simpla hemostatika filmo-forma komponaĵo (HFFC) kiel kontinua fazo povas ekigi kaj plifortigi hemostazon. La disvolviĝo de la NFRCS baziĝas sur la dezajno de la flugilo de libelo. La strukturo de la libelflugilo konsistas el transversaj kaj longitudaj flugiloj, kaj la flugilmembranoj estas konektitaj unu al la alia por konservi la integrecon de la mikrostrukturo. HFFC unuforme kovras la surfacon de la fibro per filmo de nanometra dikeco kaj konektas la hazarde distribuitan kotonan dikecon (Ct) (disigitan fazon) por formi nanoporan strukturon. La kombinaĵo de kontinuaj kaj disigitaj fazoj reduktas la koston de la produkto dekoble kompare kun komerce haveblaj produktoj. Modifitaj NFRCS (tamponoj aŭ pojnobendoj) povas esti uzataj en diversaj biomedicinaj aplikoj. En vivaj studoj konkludis, ke la evoluigita Cp NFRCS ekigas kaj plibonigas la koaguliĝan procezon ĉe la aplika loko. NFRCS povas moduli la mikromedion kaj agi je la ĉela nivelo pro sia nanopora strukturo, rezultante en pli bona vundkuraciĝo en la modelo de fortranĉita vundo.
Nekontrolita sangado dum batalo, intraoperaciaj kaj krizaj situacioj povas prezenti gravan minacon al la vivo de la vundito1. Ĉi tiuj kondiĉoj plue kondukas al ĝenerala pliiĝo de periferia angia rezisto, kaŭzante hemoragian ŝokon. Taŭgaj mezuroj por kontroli sangadon dum kaj post kirurgio estas konsiderataj eble vivminacaj2,3. Difekto de grandaj angioj kondukas al amasa sangoperdo, rezultante en mortoprocentaĵo de ≤ 50% en batalo kaj 31% dum kirurgio1. Amasa sangoperdo kondukas al malpliiĝo de korpa volumeno, kiu reduktas la koran elĵeton. Pliiĝo de totala periferia angia rezisto kaj progresema difekto de mikrocirkulado kondukas al hipoksio en la vivsubtenaj organoj. Hemoragia ŝoko povas okazi se la kondiĉo daŭras sen efika interveno1,4,5. Aliaj komplikaĵoj inkluzivas la progreson de hipotermio kaj metabola acidozo, same kiel koagulan malsanon, kiu malhelpas la koagulan procezon. Severa hemoragia ŝoko estas asociita kun pli alta risko de morto6,7,8. Ĉe grado III (progresema) ŝoko, sangotransfuzo estas esenca por la supervivo de la paciento dum intraoperacia kaj postoperacia malsaneco kaj morteco. Por superi ĉiujn supre menciitajn vivminacajn situaciojn, ni evoluigis nanoporan fibro-plifortigitan kompozitan skafaldon (NFRCS), kiu utiligas minimuman polimeran koncentriĝon (0.5%) uzante kombinaĵon de hidrosolveblaj hemostatikaj polimeroj.
Per la uzo de fibra plifortigo, oni povas disvolvi kostefikajn produktojn. La hazarde aranĝitaj fibroj similas la strukturon de libelflugiloj, ekvilibrigitaj per la horizontalaj kaj vertikalaj strioj sur la flugiloj. La transversaj kaj longitudaj vejnoj de la flugilo komunikas kun la flugilmembrano (Fig. 1). NFRCS konsistas el plifortigita Ct kiel skafaldosistemo kun pli bona fizika kaj mekanika forto (Figuro 1). Pro la pagebleco kaj metiisteco, kirurgoj preferas uzi kotonfadenmezurilojn (Ct) dum operacioj kaj bandaĝoj. Tial, konsiderante ĝiajn multajn avantaĝojn, inkluzive de > 90% kristala celulozo (kontribuas al plibonigo de hemostata agado), Ct estis uzata kiel skeleta sistemo de NFRCS9,10. Tial, konsiderante ĝiajn multajn avantaĝojn, inkluzive de > 90% kristala celulozo (kontribuas al plibonigo de hemostata agado), Ct estis uzata kiel skeleta sistemo de NFRCS9,10. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаличцесклылы (участвует в повышении гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной скелетной сис910, Ct. Tial, konsiderante ĝiajn multajn avantaĝojn, inkluzive de >90% kristala celulozo (implikita en pliigita hemostata agado), Ct estis uzata kiel la NFRCS-skeleta sistemo9,10.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止血滴止血滴，，被用作NFRCS9,10 的骨架系统。因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%Tial, konsiderante ĝiajn multajn avantaĝojn, inkluzive de pli ol 90% kristala celulozo (helpas plifortigi hemostatan agadon), Ct estis uzata kiel bazo por NFRCS9,10.Ct estis supraĵe kovrita (nano-dika filmformado estis observita) kaj interligita kun hemostata filmo-formanta komponaĵo (HFFC). HFFC agas kiel matriĝelo, tenante hazarde metitan Ct kune. La evoluigita dezajno transdonas streĉon ene de la disigita fazo (plifortigante fibrojn). Estas malfacile akiri nanoporajn strukturojn kun bona mekanika forto uzante minimumajn polimerajn koncentriĝojn. Krome, ne estas facile adapti malsamajn ŝimojn por malsamaj biomedicinaj aplikoj.
La figuro montras diagramon de la dezajno de NFRCS bazita sur la libelflugila strukturo (A). Ĉi tiu bildo montras komparan analogecon de la flugilstrukturo de libelo (la intersekcantaj kaj longitudaj vejnoj de la flugilo estas interligitaj) kaj transversan mikrofoton de Cp NFRCS (B). Skemata reprezentado de NFRCS.
NFRC-oj estis evoluigitaj uzante HFFC kiel kontinuan fazon por trakti la supre menciitajn limigojn. HFFC konsistas el diversaj filmo-formaj hemostataj polimeroj, inkluzive de kitosano (kiel la ĉefa hemostata polimero) kun metilcelulozo (MC), hidroksipropilmetilcelulozo (HPMC 50 cp) kaj polivinila alkoholo (PVA) (125 kDa) kiel subtena polimero, kiu antaŭenigas tromboformadon. La aldono de polivinilpirolidino K30 (PVP K30) plibonigis la humid-absorban kapaciton de la NFRCS-oj. Polietilena glikolo 400 (PEG 400) estis aldonita por plibonigi la krucligadon de polimeroj en ligitaj polimeraj miksaĵoj. Tri malsamaj HFFC-hemostataj konsistoj (Cm HFFC, Ch HFFC kaj Cp HFFC), nome kitosano kun MC (Cm), kitosano kun HPMC (Ch), kaj kitosano kun PVA (Cp), estis aplikitaj al Ct. Diversaj in vitro kaj in vivo karakterizadstudoj konfirmis la hemostatan kaj vundkuracan agadon de NFRCS-oj. Kompozitaj materialoj ofertitaj de NFRCS povas esti uzataj por adapti diversajn formojn de skafaldaro por plenumi specifajn bezonojn.
Krome, NFRCS-oj povas esti modifitaj kiel bandaĝo aŭ rulo por kovri la tutan vundareon de la malsupraj ekstremaĵoj kaj aliaj korpopartoj. Specife por vundoj de batalmembroj, la desegnita NFRCS-dezajno povas esti ŝanĝita al duonbrako aŭ plena kruro (Aldona Figuro S11). La NFRCS povas esti transformita en pojnobendon per hista gluo, kiu povas esti uzata por ĉesigi sangadon pro severaj suicidaj pojnovundoj. Nia ĉefa celo estas disvolvi NFRCS-on kun kiel eble plej malmulte da polimero, kiu povas esti liverita al granda loĝantaro (sub la limo de malriĉeco) kaj kiu povas esti metita en sukurkeston. Simpla, efika kaj ekonomia laŭ dezajno, NFRCS profitigas lokajn komunumojn kaj povas havi tutmondan efikon.
Kitosano (molekula pezo 80 kDa) kaj amaranto estis aĉetitaj de Merck, Barato. Hidroksipropila metilcelulozo 50 Cp, polietilena glikolo 400 kaj metilcelulozo estis aĉetitaj de Loba Chemie Pvt. LLC, Mumbajo. Polivinila alkoholo (molekula pezo 125 kDa) (87-90% hidrolizita) estis aĉetita de National Chemicals, Guĝarato. Polivinilpirolidino K30 estis aĉetita de Molychem, Mumbajo, sterilaj vatbuloj estis aĉetitaj de Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamilnado, kun Milli Q-akvo (akvopuriga sistemo Direct-Q3, Merck, Barato) kiel la portanto.
NFRCS estis evoluigita uzante liofiligan metodon11,12. Ĉiuj HFFC-konsistoj (Tabelo 1) estis preparitaj uzante mekanikan miksilon. Preparu 0.5%-an solvaĵon de kitosano uzante 1% acetatan acidon en akvo per kontinua kirlado je 800 rpm sur mekanika miksilo. La preciza pezo de la ŝarĝita polimero indikita en Tabelo 1 estis aldonita al la kitosana solvaĵo kaj kirlada ĝis klara polimera solvaĵo estis akirita. PVP K30 kaj PEG 400 estis aldonitaj al la rezulta miksaĵo en la kvantoj indikitaj en Tabelo 1, kaj la kirlado daŭris ĝis klara viskoza polimera solvaĵo estis akirita. La rezulta bano de polimera solvaĵo estis sonikita dum 60 minutoj por forigi kaptitajn aervezikojn el la polimera miksaĵo. Kiel montrite en Aldona Figuro S1(b), Ct estis egale distribuita en ĉiu puto de 6-puta plato (ŝimo) suplementita per 5 ml da HFFC.
La ses-puta plato estis sonikita dum 60 minutoj por atingi unuforman malsekigon kaj distribuon de HFFC en la Ct-reto. Poste frostigu la ses-putan platon je -20°C dum 8-12 horoj. La frostigplatoj estis liofiligitaj dum 48 horoj por akiri diversajn formulojn de NFRCS. La sama proceduro estas uzata por produkti malsamajn formojn kaj strukturojn, kiel ekzemple tamponoj aŭ cilindraj tamponoj, aŭ ajnan alian formon por malsamaj aplikoj.
Precize pesita kitosano (80 kDa) (3%) estas solvita en 1% acetata acido uzante magnetan miksilon. Al la rezulta solvaĵo de kitosano oni aldonis 1% PEG 400 kaj kirlis dum 30 minutoj. Verŝu la rezultan solvaĵon en kvadratan aŭ rektangulan ujon kaj frostigu je -80°C dum 12 horoj. Frostaj specimenoj estis liofiligitaj dum 48 horoj por akiri poran Cs13.
La evoluigita NFRCS estis submetita al eksperimentoj uzante Fourier-transforman infraruĝan spektroskopion (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Tokio, Japanio) por konfirmi la kemian kongruecon de kitosano kun aliaj polimeroj14,15. La FTIR-spektroj (larĝo de la spektra intervalo de 400 ĝis 4000 cm-1) de ĉiuj testitaj specimenoj estis akiritaj per plenumado de 32 skanadoj.
La sangosorba indico (SRA) por ĉiuj formuliĝoj estis taksita uzante la metodon priskribitan de Chen et al. 16 kun iometaj modifoj. La evoluigitaj NFRK-oj de ĉiuj komponaĵoj estis sekigitaj en vakua forno je 105 °C dumnokte por forigi restantan solvilon. 30 mg da NFRCS (komenca specimena pezo - W0) kaj 30 mg da Ct (pozitiva kontrolo) estis metitaj en apartajn pladojn enhavantajn antaŭmiksaĵon de 3,8% natria citrato. Je antaŭdifinitaj tempintervaloj, t.e. 5, 10, 20, 30, 40 kaj 60 sekundoj, la NFRCS estis forigitaj kaj iliaj surfacoj purigitaj de neabsorbita sango metante la specimenojn sur Ct dum 30 sekundoj. La fina pezo de sango absorbita de NFRCS 16 estis konsiderata (W1) ĉe ĉiu tempopunkto. Kalkulu la SRA-procenton uzante la jenan formulon:
La sangokoaguliĝa tempo (STC) estis determinita kiel raportite de Wang et al. 17. La tempo bezonata por ke tuta sango (rata sango antaŭmiksita kun 3.8% natria citrato) koaguliĝu en la ĉeesto de NFRCS estis kalkulita kiel la STC de la testprovaĵo. La diversaj NFRCS-komponantoj (30 mg) estis metitaj en 10 ml ŝraŭbkovrilajn fiolojn kaj inkubaciitaj je 37 °C. Sango (0.5 ml) estis aldonita al la fiolo kaj 0.3 ml da 0.2 M CaCl2 estis aldonita por aktivigi sangokoaguliĝon. Fine, renversu la fiolon ĉiujn 15 sekundojn (ĝis 180°) ĝis firma koagulaĵo formiĝas. La STC de la provaĵo estas taksita per la nombro da renversoj de la fioloj 17,18. Surbaze de STC, du optimumaj konsistoj el NFRCS Cm, Ch kaj Cp estis elektitaj por pliaj karakterizaj studoj.
La BCT (Blokkontrola Testo) de la konsistoj de Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis determinita per la metodo priskribita de Li et al. 19. Metu 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS, kaj Cs (pozitiva kontrolo) en apartajn Petri-pladojn (37 °C). Sango enhavanta 3.8% da natria citrato estis miksita kun 0.2 M CaCl2 en volumena proporcio de 10:1 por komenci la sangokoaguliĝan procezon. 20 µl da 0.2 M CaCl2 rata sangomiksaĵo estis aplikita al la specimensurfaco kaj metita en malplenan Petri-pladon. La kontrolo estis sango verŝita en malplenajn Petri-pladojn sen Ct. Je fiksitaj intervaloj de 0, 3, kaj 5 minutoj, haltigu koaguliĝon aldonante 10 ml da dejonigita (DI) akvo al la specimeno enhavanta la pladon sen ĝeni la koagulaĵon. Nekoagulitaj eritrocitoj spertas hemolizon en la ĉeesto de dejonigita akvo kaj liberigas hemoglobinon. Hemoglobino je malsamaj tempopunktoj (HA(t)) estis mezurita je 540 nm (λmax hemoglobino) uzante UV-Vis-spektrofotometron. La absoluta sorbado de hemoglobino (AH(0)) en 0 minutoj de 20 µl da sango en 10 ml da dejonigita akvo estis prenita kiel referenca normo. La relativa hemoglobina sorbado (RHA) de koagulita sango estis kalkulita el la proporcio HA(t)/HA(0) uzante la saman aron da sango.
Uzante teksturanalizilon (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, Usono), la alteniĝaj ecoj de NFRK al difektita histo estis determinitaj. Premu malfermfundan cilindran pladon kontraŭ la internon de la porkhaŭto (sen la grastavolo). Specimenoj (Ch NFRCS kaj Cp NFRCS) estis aplikitaj per kanulo en cilindrajn muldilojn por krei adheron al la haŭto de la porko. Post 3-minuta inkubacio je ĉambra temperaturo (RT) (25°C), la alteniĝa forto de NFRCS estis registrita je konstanta rapideco de 0.5 mm/sek.
La ĉefa trajto de kirurgiaj sigelaĵoj estas pliigi sangokoaguliĝon dum reduktado de sangoperdo. Senperda koaguliĝo en NFRCS estis taksita uzante antaŭe publikigitan metodon kun iometaj modifoj 19. Faru mikrocentrifugilan tubon (2 ml) (interna diametro 10 mm) kun 8 × 5 mm2 truo sur unu flanko de la centrifugilo (reprezentante malferman vundon). NFRCS estas uzata por fermi la malfermaĵon kaj glubendo estas uzata por sigeli la eksterajn randojn. Aldonu 20 µl da 0.2 M CaCl2 al la mikrocentrifugila tubo enhavanta la 3.8%-an natrian citratan antaŭmiksaĵon. Post 10 minutoj, la mikrocentrifugilaj tuboj estis forigitaj el la pladoj kaj la pliiĝo de la maso de la pladoj estis determinita pro la elfluo de sango el la NFRK (n = 3). Sangoperdo Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis komparitaj kun Cs.
Malseka integreco de NFRCS-oj estis determinita laŭ la metodo priskribita de Mishra kaj Chaudhary21 kun malgrandaj modifoj. Metu la NFRCS-ojn en 100 ml Erlenmeyer-flakonon kun 50 ml da akvo kaj kirlu dum 60 sekundoj sen formi pinton. Vida inspektado kaj prioritatigo de specimenoj por fizika integreco surbaze de kolekto.
La ligforto de HFFC al Ct estis studita uzante antaŭe publikigitajn metodojn kun negravaj modifoj. La integreco de la surfaca tegaĵo estis taksita per eksponado de NFRK al akustikaj ondoj (ekstera stimulo) en la ĉeesto de miliQ-akvo (Ct). La evoluigitaj NFRCS Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis metitaj en bekeron plenigitan per akvo kaj sonikitaj dum 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 kaj 30 minutoj, respektive. Post sekigado, la procenta diferenco inter la komenca kaj fina pezo de la NFRCS estis uzata por kalkuli la procentan perdon de materialo (HFFC). In vitro BCT plue subtenis la ligforton aŭ perdon de surfacaj materialoj. La efikeco de HFFC-ligado al Ct provizas sangokoaguliĝon kaj elastan tegaĵon sur la surfaco de Ct22.
La homogeneco de la evoluigita NFRCS estis determinita per BCT-analizo de specimenoj (30 mg) prenitaj de hazarde elektitaj ĝeneralaj lokoj de la NFRCS. Sekvu la antaŭe menciitan BCT-proceduron por determini la konformecon de NFRCS. Proksimeco inter ĉiuj kvin specimenoj certigas unuforman surfacan kovron kaj HFFC-deponadon en la Ct-maŝo.
La nominala sangokontakta areo (NBCA) estis determinita kiel antaŭe raportite kun kelkaj modifoj. Koagulu la sangon per fiksado de 20 µl da sango inter la du surfacoj de Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS kaj Cs. Post 1 horo, la du partoj de la stento estis apartigitaj kaj mane mezuris la areon de la koagulaĵo. La averaĝa valoro de tri ripetoj estis konsiderata NBCA NFRCS19.
Analizo per Dinamika Vapora Sorbado (DVS) estis uzata por taksi la efikecon de NFRCS por absorbi akvon el la ekstera medio aŭ el la vundloko respondeca pri la komenco de koaguliĝo. La DVS taksas aŭ registras la vaporan sorbadon kaj perdon en specimeno gravimetrie uzante ultra-senteman pesilon kun masa distingivo de ±0.1 µg. Parta vaporpremo (relativa humideco) estas generita per elektronika masa fluoregilo ĉirkaŭ la specimeno miksante saturitajn kaj sekajn portantajn gasojn. Laŭ la gvidlinioj de la Eŭropa Farmakopeo, surbaze de la procento de humid-sorbo fare de la specimenoj, ili estis kategoriigitaj en 4 kategoriojn (0–0,012% p/p− ne-higroskopaj, 0,2–2% p/p iomete higroskopaj, 2–15% modere higroskopaj, kaj > 15% tre higroskopaj)23. Laŭ la gvidlinioj de la Eŭropa Farmakopeo, surbaze de la procento de humid-sorbo fare de la specimenoj, ili estis kategoriigitaj en 4 kategoriojn (0–0,012% p/p− ne-higroskopaj, 0,2–2% p/p iomete higroskopaj, 2–15% modere higroskopaj, kaj > 15% tre higroskopaj)23.Laŭ la rekomendoj de la Eŭropa Farmakopeo, depende de la procento de humidabsorbo fare de la specimenoj, la specimenoj estis dividitaj en 4 kategoriojn (0–0,012% p/p – ne-higroskopaj, 0,2–2% p/p iomete higroskopaj, 2–15%).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % modere higroskopaj kaj > 15% tre higroskopaj)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0.012% w/w-w-w非吸湿性、0.2-2% w/w 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23。根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 分为 分为 分为 分 0.012（-0. W/w- 吸湿 性 、 、 、 、 0.2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23〿）Laŭ la rekomendoj de la Eŭropa Farmakopeo, specimenoj estas dividitaj en 4 klasojn depende de la procento de humideco absorbita de la specimeno (0-0,012% laŭ pezo - nehigroskopa, 0,2-2% laŭ pezo - iomete higroskopa, 2-15% laŭ pezo).% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % modere higroskopa, > 15% tre higroskopa) 23.La higroskopa efikeco de NFCS X NFCS kaj TsN NFCS estis determinita per analizilo DVS TA TGA Q5000 SA. Dum ĉi tiu procezo, oni akiris la daŭron de la procezo, relativan humidecon (RH), kaj realtempan pezon de la specimeno je 25°C24. La humidenhavo estas kalkulita per preciza analizo de NFRCS-amaso uzante la jenan ekvacion:
MC estas la humideco de NFRCS. m1 – seka pezo de NSAID-oj. m2 estas la realtempa maso de NFRCS je difinita humideco.
La tuta surfacareo estis taksita per nitrogena adsorba eksperimento kun likva nitrogeno post malplenigo de la specimenoj je 25 °C dum 10 horoj (< 7 × 10–3 Torr). La tuta surfacareo estis taksita per nitrogena adsorba eksperimento kun likva nitrogeno post malplenigo de la specimenoj je 25 °C dum 10 horoj (< 7 × 10–3 Torr). Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азоток пи сомощью опорожнения образцов при 25 °С в течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). La tuta surfacareo estis taksita uzante nitrogenan adsorban eksperimenton kun likva nitrogeno post kiam la specimenoj estis malplenigitaj je 25 °C dum 10 horoj (< 7 × 10–3 Torr).在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实验估计总表面总表。在 25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбцик и бцоди Обцик азотом после опорожнения образцов в течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). La tuta surfacareo estis taksita uzante nitrogenajn adsorbajn eksperimentojn kun likva nitrogeno post kiam la specimenoj estis malplenigitaj dum 10 horoj je 25 °C (< 7 x 10-3 tor).La totala surfaca areo, porvolumeno kaj NFRCS-porgrandeco estis determinitaj per Quantachrome de NOVA 1000e, Aŭstrio uzante la programaron RS 232.
Preparu 5%-ajn eritrocitojn (salakvo kiel diluilo) el tuta sango. Poste transdonu alikvoton de HFFC (0.25 ml) al 96-puta plato kaj 5%-an eritrocitan mason (0.1 ml). Kovu la miksaĵon je 37 °C dum 40 minutoj. Miksaĵo de eritrocitoj kaj serumo estis konsiderata kiel pozitiva kontrolo, kaj miksaĵo de salakvo kaj eritrocitoj kiel negativa kontrolo. Hemaglutinado estis determinita laŭ la Stajitzky-skalo. La proponitaj skaloj estas jenaj: + + + + densaj grajnaj agregaĵoj; + + + glataj fundaj kusenetoj kun kurbaj randoj; + + glataj fundaj kusenetoj kun ŝiritaj randoj; + mallarĝaj ruĝaj ringoj ĉirkaŭ la randoj de la glataj kusenetoj; – (negativa) aparta ruĝa butono 12 en la centro de la malsupra puto.
La hemokongrueco de NFRCS-oj estis studita laŭ la metodo de la Internacia Organizo por Normigado (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27. La gravimetria metodo priskribita de Singh et al. Malgrandaj modifoj estis faritaj por taksi tromboformadon en la ĉeesto de aŭ sur la surfaco de NFRCS. 500 mg da Cs, Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis kovitaj en fosfato-bufrita salakvo (PBS) dum 24 horoj je 37°C. Post 24 horoj, PBS estis forigita kaj NFRCS estis traktita per 2 ml da sango enhavanta 3.8% da natria citrato. Sur la surfaco de la NFRCS, aldonu 0.04 ml da 0.1 M CaCl2 al la kovitaj specimenoj. Post 45 minutoj, 5 ml da distilita akvo estis aldonita por ĉesigi koaguliĝon. Koagulita sango sur la surfaco de NFRK estis traktita per 36-38% formaldehida solvaĵo. La koagulaĵoj fiksitaj per formaldehido estis sekigitaj kaj pesitaj. La procento de trombozo estis taksita per kalkulado de la pezo de la glaso sen sango kaj specimeno (negativa kontrolo) kaj la glaso kun sango (pozitiva kontrolo).
Kiel komenca konfirmo, la specimenoj estis bildigitaj sub optika mikroskopo por kompreni la kapablon de la HFFC-surfaca tegaĵo, la interkonektita Ct, kaj la Ct-reto formi porojn. Maldikaj sekcioj de Ch kaj Cp el NFRCS estis pritonditaj per skalpela klingo. La rezulta sekcio estis metita sur vitran glitplaton, kovritan per kovrovitro, kaj la randoj estis fiksitaj per gluo. La preparitaj glitplatoj estis rigarditaj sub optika mikroskopo kaj fotoj estis prenitaj je malsamaj pligrandigoj.
Polimera deponado en Ct-retoj estis bildigita per fluoreska mikroskopio bazita sur la metodo priskribita de Rice et al.29. La HFFC-konsisto uzita por la formuliĝo estis miksita kun fluoreska tinkturfarbo (amaranto), kaj NFRCS-oj (Ch & Cp) estis preparitaj laŭ la metodo menciita antaŭe. La HFFC-konsisto uzita por la formuliĝo estis miksita kun fluoreska tinkturfarbo (amaranto), kaj NFRCS-oj (Ch & Cp) estis preparitaj laŭ la metodo menciita antaŭe.La HFFC-konsisto uzita por formuliĝo estis miksita kun fluoreska tinkturfarbo (amaranto) kaj NFRCS (Ch kaj Cp) estis akirita laŭ la antaŭe menciita metodo.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶法到的斶法CNFhRCS） Cp）。将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的斶法到的斶法CNFhRCS） Cp）。La HFFC-konsisto uzita en la formuliĝo estis miksita kun fluoreska tinkturfarbo (Amaranto) kaj ricevis NFRCS (Ch kaj Cp), kiel menciite antaŭe.Maldikaj sekcioj de NFRK estis tranĉitaj el la akiritaj specimenoj, metitaj sur vitrolamenojn, kaj kovritaj per kovrovitroj. Observu la preparitajn lamenojn sub fluoreska mikroskopo uzante verdan filtrilon (310-380 nm). Bildoj estis prenitaj je 4-obla pligrandigo por kompreni la Ct-rilatojn kaj troan polimeran deponadon en la Ct-reto.
La surfaca topografio de NFRCS Ch kaj Cp estis determinita per atomforta mikroskopo (AFM) kun ultra-akra TESP-kantilevro en frapeta reĝimo: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Tajvano. La surfaca malglateco estis determinita per kvadrata averaĝa valoro (RMS) uzante programaron (Scanning Probe Image Processor). Diversaj NFRCS-lokoj estis bildigitaj sur 3D-bildoj por kontroli surfacan homogenecon. La norma devio de la poentaro por difinita areo estas difinita kiel la surfaca malglateco. La RMS-ekvacio estis uzata por kvantigi la surfacan malglatecon de NFRCS31.
Studoj bazitaj sur FESEM estis faritaj uzante FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokio, por kompreni la surfacan morfologion de Ch NFRCS kaj Cp NFRCS, kiuj montris pli bonan BCT ol Cm NFRCS. La FESEM-studo estis farita laŭ la metodo priskribita de Zhao et al. 32 kun negravaj modifoj. 20 ĝis 30 mg da Ch NFRCS kaj Cp NFRCS estis antaŭmiksitaj kun 20 µl da 3,8%-a natria citrato antaŭmiksita kun rata sango. 20 μl da 0,2 M CaCl2 estis aldonitaj al la sangotraktitaj specimenoj por komenci koaguliĝon kaj la specimenoj estis kovitaj je ĉambra temperaturo dum 10 minutoj. Krome, troaj eritrocitoj estis forigitaj de la surfaco de NFRCS per lavado kun salakvo.
Postaj specimenoj estis traktitaj per 0.1% glutaraldehido kaj poste sekigitaj en varmaera forno je 37°C por forigi humidon. La sekigitaj specimenoj estis kovritaj kaj analizitaj32. Aliaj bildoj akiritaj dum la analizo estis koagulaĵformado sur la surfaco de individuaj kotonfibroj, polimera deponado inter Ct, eritrocita morfologio (formo), koagulaĵintegreco, kaj eritrocita morfologio en la ĉeesto de NFRCS-oj. Neutraktitaj NFRCS-areoj kaj Ch kaj Cp traktitaj NFRCS-areoj inkubitaj kun sango estis skanitaj por elementaj jonoj (natrio, kalio, nitrogeno, kalcio, magnezio, zinko, kupro kaj seleno)33. Komparu la procentojn de elementaj jonoj inter traktitaj kaj netraktitaj specimenoj por kompreni la amasiĝon de elementaj jonoj dum koagulaĵformado kaj la homogenecon de la koagulaĵo.
La dikeco de la Cp HFFC-surfaca tegaĵo sur la Ct-surfaco estis determinita per FESEM. La transversaj sekcoj de Cp NFRCS estis tranĉitaj el la kadro kaj ŝprucitaj. La rezultantaj ŝprucitaj tegaĵaj specimenoj estis observitaj per FESEM kaj la dikeco de la surfaca tegaĵo estis mezurita 34, 35, 36.
Rentgen-mikro-CT provizas alt-rezolucian 3D ne-destruktan bildigon kaj permesas al vi studi la internan strukturan aranĝon de NFRK. Mikro-CT uzas rentgen-faskon tra la specimeno por registri la lokan linearan atenuiĝan koeficienton de la rentgen-radioj en la specimeno, kio helpas akiri morfologiajn informojn. La interna lokigo de Ct en Cp NFRCS kaj sang-traktitaj Cp NFRCS estis ekzamenita per mikro-CT por kompreni la sorban efikecon kaj sangokoaguliĝon en la ĉeesto de NFRCS37,38,39. La 3D strukturoj de sang-traktitaj kaj netraktitaj Cp NFRCS-specimenoj estis rekonstruitaj uzante mikro-CT (V|tome|x S240, Fenikso, Germanio). Uzante la programaron VG STUDIO-MAX versio 2.2, pluraj rentgen-bildoj estis prenitaj el malsamaj anguloj (ideale 360° kovro) por evoluigi 3D bildojn por NFRCS. La kolektitaj projekciaj datumoj estis rekonstruitaj en 3D volumetrajn bildojn uzante la respondan simplan programaron 3D ScanIP Academic.
Krome, por kompreni la distribuon de la koagulaĵo, 20 µl da antaŭmiksita citrata sango kaj 20 µl da 0.2 M CaCl2 estis aldonitaj al la NFRK-sistemo por komenci sangokoaguliĝon. La preparitaj specimenoj estas lasitaj malmoliĝi. La NFRK-surfaco estis traktita per 0.5% glutaraldehido kaj sekigita en varmaera forno je 30–40°C dum 30 minutoj. La sangokoagulaĵo formita sur la NFRK-sistemo estis skanita, rekonstruita, kaj 3D-bildo de la sangokoagulaĵo estis bildigita.
Antibakteriaj testoj estis faritaj sur Cp NFRCS (plej bone kompareblaj kun Ch NFRCS) uzante la antaŭe priskribitan metodon kun malgrandaj modifoj. La antibakteria aktiveco de Cp NFRCS kaj Cp HFFC estis determinita uzante tri malsamajn testajn mikroorganismojn [S.aureus (gram-pozitivaj bakterioj), E.coli (gram-negativaj bakterioj) kaj blanka Candida (C.albicans)] kreskantaj sur agaragaro en Petri-pladoj en inkubatoro. Unuforme inokulu 50 ml da la diluita bakteria kultursuspendo je koncentriĝo de 10⁵-10⁶ CFU-ml-1 sur la agaragaran medion. Verŝu la medion en Petri-pladon kaj lasu ĝin solidiĝi. Putoj estis faritaj sur la surfaco de la agaragara plato por plenigi per HFFC (3 putoj por HFFC kaj 1 por negativa kontrolo). Aldonu 200 µl da HFFC al 3 putoj kaj 200 µl da pH 7.4 PBS al la 4-a puto. Sur la alia flanko de la petri-plado, metu 12 mm Cp NFRCS-diskon sur la solidigitan agaragaron kaj malsekigu ĝin per PBS (pH 7.4). Ciprofloksacino, ampicilino kaj flukonazolo-tabletoj estas konsiderataj referencaj normoj por Staphylococcus aureus, Escherichia coli kaj Candida albicans. Mezuru la inhibician zonon permane kaj prenu ciferecan bildon de la inhibicia zono.
Post institucia etika aprobo, la studo estis farita ĉe la Kasturba Medicina Kolegio pri Edukado kaj Esplorado en Manipal, Karnatako, en suda Barato. La eksperimenta protokolo *in vitro* TEG estis reviziita kaj aprobita de la Institucia Etika Komitato de la Kasturba Medicina Kolegio, Manipal, Karnatako (IEC: 674/2020). La partoprenantoj estis rekrutitaj el volontulaj sangodonantoj (en aĝo de 18 ĝis 55 jaroj) de la hospitala sangobanko. Krome, informita konsentformularo estis akirita de la volontuloj por la kolektado de sangospecimenoj. Indiĝena TEG (N-TEG) ​​estis uzata por studi la efikon de la Cp HFFC-formulo sur tutan sangon antaŭmiksitan kun natria citrato. N-TEG estas vaste agnoskita pro sia rolo en revivigo ĉe la prizorgopunkto, kiu kreas problemojn por klinikistoj pro la ebleco de klinike signifa prokrasto en rezultoj (rutinaj koagulaj testoj). N-TEG-analizo estis farita uzante tutan sangon. Informita konsento kaj detala medicina anamnezo estis akiritaj de ĉiuj partoprenantoj. La studo ne inkluzivis partoprenantojn kun hemostataj aŭ trombozaj komplikaĵoj kiel gravedeco/postnaska aŭ hepata malsano. Subjektoj prenantaj medikamentojn, kiuj influas la koaguladan kaskadon, ankaŭ estis ekskluditaj de la studo. Bazaj laboratoriotestoj (hemoglobino, protrombina tempo, aktivigita tromboplastino kaj trombocita nombro) estis faritaj ĉe ĉiuj partoprenantoj laŭ normaj proceduroj. N-TEG determinas la viskoelastecon de la sangokoagulaĵo, komencan koagulaĵstrukturon, partiklan interagadon, koagulaĵfortigon kaj koagulaĵlizon. La N-TEG-analizo provizas grafikajn kaj nombrajn datumojn pri la kolektivaj efikoj de pluraj ĉelaj elementoj kaj plasmo. N-TEG-analizo estis farita sur du malsamaj volumoj de Cp HFFC (10 µl kaj 50 µl). Rezulte, 1 ml da tuta sango kun citrata acido estis aldonita al 10 μl da Cp HFFC. Aldonu 1 ml (Cp HFFC + citrata sango), 340 µl da miksita sango al 20 µl da 0.2 M CaCl2 enhavanta TEG-pladon. Poste, TEG-pladoj estis ŝarĝitaj en TEG® 5000, usonan sistemon por mezuri R, K, alfa-angulon, MA, G, CI, TPI, EPL, LY en 30% de sangospecimenoj en la ĉeesto de Cp HFFC41.
La protokolo de la studo *in vivo* estis reviziita kaj aprobita de la Institucia Komitato pri Besta Etiko (IAEC), Kasturba Lernejo de Medicino, Manipal Instituto de Alteduko, Manipal (IAEC/KMC/69/2020). Ĉiuj bestaj eksperimentoj estis faritaj laŭ la rekomendoj de la Komitato por la Kontrolo kaj Superrigardo de Besta Eksperimentado (CPCSEA). Ĉiuj *in vivo* NFRCS-studoj (2 × 2 cm2) estis faritaj sur inaj Wistar-ratoj (pezantaj 200 ĝis 250 g). Ĉiuj bestoj estis alklimatigitaj je temperaturo de 24-26 °C, kaj la bestoj havis liberan aliron al norma manĝaĵo kaj akvo laŭbezone. Ĉiuj bestoj estis hazarde dividitaj en malsamajn grupojn, ĉiu grupo konsistis el tri bestoj. Ĉiuj studoj estis faritaj laŭ *Bestostudoj: Raporto de *In Vivo* Eksperimentoj 43. Antaŭ la studo, la bestoj estis narkotitaj per intraperitonea (ip) dono de miksaĵo de 20-50 mg da ketamino (po 1 kg da korpopezo) kaj 2-10 mg da ksilazino (po 1 kg da korpopezo). Post la studo, la sangada volumeno estis kalkulita per taksado de la diferenco inter la komenca kaj fina pezo de la specimenoj, la averaĝa valoro akirita de la tri testoj estis prenita kiel la sangada volumeno de la specimeno.
La modelo de amputo de rata vosto estis efektivigita por kompreni la potencialon de NFRCS (ne-frekvencaj vostaj kronikaj sistemoj) por moduli sangadon en traŭmato, batalo aŭ trafikakcidento (vundomodelo). Fortranĉu 50% de la vosto per skalpela klingo kaj metu ĝin en aeron dum 15 sekundoj por certigi normalan sangadon. Krome, testaj specimenoj estis metitaj sur la voston de rato per premo (Ct, Cs, Ch NFRCS kaj Cp NFRCS). Sangado kaj PCT (procenta kronika tomografio) estis raportitaj por testaj specimenoj (n = 3)17,45.
La efikeco de NFRCS-premkontrolo en batalo estis esplorita sur modelo de la supraĵa femura arterio. La femura arterio estas malkovrita, trapikita per 24G-trokaro, kaj sangita ene de 15 sekundoj. Post kiam nekontrolita sangado estas observata, la testa specimeno estas metita ĉe la trapikloko kun premo aplikata. Tuj post apliko de la testa specimeno, la koaguliĝtempo estis registrita kaj hemostatika efikeco estis observita dum la sekvaj 5 minutoj. La sama proceduro estis ripetita kun Cs kaj Ct46.
Dowling kaj aliaj [47] proponis hepatan lezomodelon por taksi la hemostatan potencialon de hemostataj materialoj en la kunteksto de intraoperacia sangado. BCT (kontrola traserĉo de hepato) estis registrita por Ct-specimenoj (negativa kontrolo), Cs-kadro (pozitiva kontrolo), Ch NFRCS-specimenoj, kaj Cp NFRCS-specimenoj. La suprahepata vena kavo de la rato estis eksponita per mediana laparotomio. Post tio, la distala parto de la maldekstra lobo estis eltranĉita per tondilo. Faru incizon en la hepato per skalpela klingo kaj lasu ĝin sangi dum kelkaj sekundoj. Precize pesitaj Ch NFRCS- kaj Cp NFRCS-testspecimenoj estis metitaj sur la difektitan surfacon sen ia pozitiva premo kaj BCT estis registrita. La kontrolgrupo (Ct) tiam aplikis premon sekvitan de Cs 30s47 sen rompi la vundon.
En vivaj vundkuraciĝaj provoj estis faritaj uzante fortranĉan vundmodelon por taksi la vundkuracajn ecojn de la evoluigitaj polimer-bazitaj NFRCS-oj. Modeloj de fortranĉaj vundoj estis elektitaj kaj faritaj laŭ antaŭe publikigitaj metodoj kun negravaj modifoj19,32,48. Ĉiuj bestoj estis anestezitaj kiel antaŭe priskribite. Uzu biopsian stampilon (12 mm) por fari cirklan profundan incizon en la haŭto de la dorso. Preparitaj vundlokoj estis bandaĝitaj per Cs (pozitiva kontrolo), Ct (rekonante, ke vatdiskoj malhelpas resaniĝon), Ch NFRCS kaj Cp NFRCS (eksperimenta grupo) kaj negativa kontrolo sen ia ajn traktado. En ĉiu tago de la studo, la areo de la vundo estis mezurita en ĉiuj ratoj. Uzu ciferecan fotilon por foti la vundareon kaj surmetu novan bandaĝon. La procento de vundfermo estis mezurita per la jena formulo:
Surbaze de la procento de vundfermiĝo je la 12-a tago de la studo, la rata haŭto de la plej bona grupo estis fortranĉita ((Cp NFRCS) kaj la kontrolgrupo) kaj studita per H&E-kolorigo kaj Masson-trikroma kolorigo. Surbaze de la procento de vundfermiĝo je la 12-a tago de la studo, la rata haŭto de la plej bona grupo estis fortranĉita ((Cp NFRCS) kaj la kontrolgrupo) kaj studita per H&E-kolorigo kaj Masson-trikroma kolorigo.Surbaze de la procento de vundfermiĝo en la 12-a tago de la studo, la haŭto de la ratoj de la plej bona grupo ((Cp NFRCS) kaj la kontrolgrupo) estis eltranĉita kaj ekzamenita per tinkturado per hematoksilino-eozino kaj trikromo de Masson.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Masson三色染色研究。根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和眳组）Ratoj en la plej bona grupo ((Cp NFRCS) kaj kontrolgrupoj) estis ektranĉitaj por hematoksilino-eozina kolorado kaj trikroma kolorado de Masson bazita sur la procento de vundfermo je la 12-a tago de la studo.La efektivigita tinkturproceduro estis efektivigita laŭ antaŭe priskribitaj metodoj49,50. Mallonge, post fiksado en 10% formalino, la specimenoj estis senakvigitaj uzante serion da gradigitaj alkoholoj. Uzu mikrotomon por akiri maldikajn sekciojn (5 µm dikajn) de la eltranĉita histo. Maldikaj seriaj sekcioj de kontroloj kaj Cp NFRCS-oj estis traktitaj per hematoksilino kaj eozino por studi histopatologiajn ŝanĝojn. Trikroma tinkturo de Masson estis uzata por detekti la formadon de kolagenaj fibretoj. La akiritaj rezultoj estis blinde studitaj de patologiistoj.
La stabileco de Cp NFRCS-specimenoj estis studita je ĉambra temperaturo (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) dum 12 monatoj51. Cp NFRCS (surfaca miskoloriĝo kaj mikroba kresko) estis vide inspektita kaj testita pri falda eluziĝrezisto kaj BCT laŭ la supre menciitaj metodoj skizitaj en la sekcio Materialoj kaj Metodoj.
La skalebleco kaj reproduktebleco de Cp NFRCS estis ekzamenitaj per preparado de Cp NFRCS kun grandeco de 15×15 cm2. Krome, 30 mg specimenoj (n = 5) estis eltranĉitaj el diversaj Cp NFRCS-frakcioj kaj la BCT de la studitaj specimenoj estis taksita kiel priskribite antaŭe en la sekcio Metodoj.
Ni provis disvolvi diversajn formojn kaj strukturojn uzante Cp NFRCS-komponaĵojn por diversaj biomedicinaj aplikoj. Tiaj formoj aŭ konfiguracioj inkluzivas konusajn vatbulojn por nazosangadoj, dentaj proceduroj, kaj cilindrajn vatbulojn por vagina sangado.
Ĉiuj datumaroj estas esprimitaj kiel meznombro ± norma devio kaj estis analizitaj per ANOVA uzante Prism 5.03 (GraphPad, San-Diego, Kalifornio, Usono) sekvata de la testo de multoblaj komparoj de Bonferroni (*p<0.05).
Ĉiuj proceduroj faritaj en homaj studoj estis laŭ la normoj de la Instituto kaj la Nacia Esplorkonsilio, same kiel la Deklaracio de Helsinko de 1964 kaj ĝiaj postaj amendoj, aŭ similaj etikaj normoj. Ĉiuj partoprenantoj estis informitaj pri la trajtoj de la studo kaj ĝia libervola naturo. La datumoj de partoprenantoj restas konfidencaj post kolektado. La eksperimenta protokolo *in vitro* TEG estis reviziita kaj aprobita de la Institucia Etikkomitato de la Medicina Kolegio Kasturba, Manipal, Karnatako (IEC: 674/2020). Volontuloj subskribis informitan konsenton por kolekti sangospecimenojn.
Ĉiuj proceduroj faritaj en bestaj studoj estis efektivigitaj laŭ la gvidlinioj de la Kastuba Fakultato de Medicino, Manipal Instituto de Alteduko, Manipal (IAEC/KMC/69/2020). Ĉiuj desegnitaj bestaj eksperimentoj estis faritaj laŭ la gvidlinioj de la Komitato por la Kontrolo kaj Superrigardo de Besta Eksperimentado (CPCSEA). Ĉiuj aŭtoroj sekvas la gvidliniojn de ARRIVE.
La FTIR-spektroj de ĉiuj NFRCS-oj estis analizitaj kaj komparitaj kun la kitosana spektro montrita en Figuro 2A. Karakterizaj spektraj pintoj de kitosano (registritaj) je 3437 cm⁻¹ (OH kaj NH streĉado, interkovro), 2945 kaj 2897 cm⁻¹ (CH streĉado), 1660 cm⁻¹ (NH2 streĉo), 1589 cm⁻¹ (N–H fleksado), 1157 cm⁻¹ (ponta streĉado O-), 1067 cm⁻¹ (streĉado C–O, sekundara hidroksilo), 993 cm⁻¹ (streĉado CO, Bo-OH) 52,53,54. Aldona Tabelo S1 montras la FTIR-NFRC-absorbajn spektrajn valorojn por kitosano (raportisto), pura kitosano, Cm, Ch, kaj Cp. La FTIR-spektroj de ĉiuj NFRCS-oj (Cm, Ch kaj Cp) montris la samajn karakterizajn absorbajn bendojn kiel pura kitosano sen iuj signifaj ŝanĝoj (Fig. 2A). La rezultoj de FTIR konfirmis la foreston de kemiaj aŭ fizikaj interagoj inter la polimeroj uzitaj por evoluigi la NFRCS, indikante ke la uzitaj polimeroj estas inertaj.
En vitro karakterizado de Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS kaj Cs. (A) reprezentas la kombinitajn FTIR-spektrojn de la komponaĵoj de kitosano kaj Cm NFRCS, Ch NFRCS kaj Cp NFRCS sub kunpremo. (B) a) Tutsanga sorbrapideco de NFRCS Cm, Ch, Cp, kaj Cg (n = 3); La Ct-specimenoj montris pli altan BAR ĉar la kotona vatbulo havas pli altan sorban efikecon; b) Sango post sangabsorbo Ilustraĵo de la sorbita specimeno. Grafika prezento de la BCT de testspecimeno C (Cp NFRCS havis la plej bonan BCT (15 s, n = 3)). Datumoj en C, D, E, kaj G estis montritaj kiel meznombro ± SD, kaj la erarstangoj reprezentas SD, ***p < 0,0001. Datumoj en C, D, E, kaj G estis montritaj kiel meznombro ± SD, kaj la erarstangoj reprezentas SD, ***p < 0,0001. Данные в C, D, E и G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешноставлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей прешностей прешностей отклонение, ***p <0,0001. Datumoj en C, D, E, kaj G estas prezentitaj kiel meznombro ± norma devio, kaj erarstangoj reprezentas norman devion, ***p<0,0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001。 C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001。 Данные в C, D, E и G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрештностестес стандартное отклонение, ***p <0,0001. Datumoj en C, D, E, kaj G estas montritaj kiel meznombro ± norma devio, erarstangoj reprezentas norman devion, ***p<0,0001.