Tankewol foar jo besite oan Nature.com. De browserferzje dy't jo brûke hat beheinde CSS-stipe. Foar de bêste ûnderfining riede wy jo oan om in bywurke browser te brûken (of kompatibiliteitsmodus yn Internet Explorer út te skeakeljen). Yn 'e tuskentiid, om trochgeande stipe te garandearjen, sille wy de side sûnder stilen en JavaScript werjaan.
Unkontroleare bloedingen binne ien fan 'e wichtichste oarsaken fan 'e dea. It berikken fan rappe hemostase soarget foar it oerlibjen fan it ûnderwerp as earste help by gefjochten, ferkearsûngemakken en operaasjes foar it ferminderjen fan deaden. Nanoporeuze fezelfersterke komposite steigers (NFRCS) ôflaat fan in ienfâldige hemostatyske filmfoarmjende gearstalling (HFFC) as in trochgeande faze kin hemostase triggerje en ferbetterje. De ûntwikkeling fan 'e NFRCS is basearre op it ûntwerp fan 'e wjuk fan 'e libel. De wjukstruktuer fan 'e libel bestiet út transversale en longitudinale wjukken, en de wjukmembranen binne mei-inoar ferbûn om de yntegriteit fan 'e mikrostruktuer te behâlden. HFFC bedekt it oerflak fan 'e fezels unifoarm mei in film fan nanometerdikte en ferbynt de willekeurich ferdielde katoendikte (Ct) (ferspraat faze) om in nanoporeuze struktuer te foarmjen. De kombinaasje fan trochgeande en ferspraat fazen ferminderet de kosten fan it produkt mei tsien kear yn ferliking mei kommersjeel beskikbere produkten. Modifisearre NFRCS (tampons of polsbannen) kinne brûkt wurde yn in ferskaat oan biomedyske tapassingen. In vivo-stúdzjes hawwe konkludearre dat de ûntwikkele Cp NFRCS it koagulaasjeproses op it plak fan tapassing triggeret en ferbetteret. NFRCS kin de mikroomjouwing modulearje en op sellulêr nivo wurkje fanwegen syn nanoporeuze struktuer, wat resulteart yn bettere wûnegenêzing yn it eksizjewûnemodel.
Unkontroleare bloedingen tidens gefjochten, intraoperative en needgefallen kinne in serieuze bedriging foarmje foar it libben fan 'e ferwûnen1. Dizze omstannichheden liede fierder ta in algemiene tanimming fan perifeare vaskulêre wjerstân, wat liedt ta hemorragyske skok. Passende maatregels om bloedingen tidens en nei operaasje te kontrolearjen wurde beskôge as potinsjeel libbensgefaarlik2,3. Skea oan grutte bloedfetten liedt ta massaal bloedferlies, wat resulteart yn in mortaliteit fan ≤ 50% yn gefjochten en 31% tidens operaasje1. Massaal bloedferlies liedt ta in ôfname fan lichemsfolume, wat de hertútfier ferminderet. In tanimming fan totale perifeare vaskulêre wjerstân en in progressive beheining fan mikrosirkulaasje liede ta hypoxia yn 'e libbensbehâldende organen. Hemorragyske skok kin foarkomme as de tastân oanhâldt sûnder effektive yntervinsje1,4,5. Oare komplikaasjes omfetsje de foarútgong fan hypotermy en metabolike asidoaze, lykas in koagulaasjesteuring dy't it koagulaasjeproses hinderet. Swiere hemorragyske skok wurdt assosjeare mei in heger risiko op dea6,7,8. Yn graad III (progressive) skok is bloedtransfúzje essensjeel foar it oerlibjen fan pasjinten tidens intraoperative en postoperative morbiditeit en mortaliteit. Om al de boppesteande libbensgefaarlike situaasjes te oerwinnen, hawwe wy in nanoporeuze fezelfersterke kompositsteiger (NFRCS) ûntwikkele dy't in minimale polymeerkonsintraasje (0,5%) brûkt mei in kombinaasje fan wetteroplosbere hemostatyske polymearen.
Mei it brûken fan fezelfersterking kinne kosten-effektive produkten ûntwikkele wurde. De willekeurich arranzjearre fezels lykje op 'e struktuer fan 'e wjuk fan in libel, yn lykwicht brocht troch de horizontale en fertikale strepen op 'e wjukken. De transversale en longitudinale ieren fan 'e wjuk kommunisearje mei it wjukmembraan (Ofbylding 1). NFRCS bestiet út fersterke Ct as in steigersysteem mei bettere fysike en meganyske sterkte (Ofbylding 1). Fanwegen de betelberens en it fakmanskip brûke sjirurgen leaver katoenen triedmeters (Ct) tidens operaasjes en ferbâns. Dêrom, sjoen de meardere foardielen, ynklusyf > 90% kristallijne cellulose (draagt ​​by oan de ferbettering fan hemostatyske aktiviteit), waard Ct brûkt as in skeletsysteem fan NFRCS9,10. Dêrom, sjoen de meardere foardielen, ynklusyf > 90% kristallijne cellulose (draagt ​​by oan de ferbettering fan hemostatyske aktiviteit), waard Ct brûkt as in skeletsysteem fan NFRCS9,10. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической целюческой целюлш гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. Dêrom, sjoen syn protte foardielen, ynklusyf >90% kristallijne cellulose (belutsen by ferhege hemostatyske aktiviteit), waard Ct brûkt as it NFRCS-skeletsysteem9,10.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%被用作NFRCS9,10 的骨架系统.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%Dêrom, sjoen syn protte foardielen, ynklusyf mear as 90% kristallijne cellulose (helpt hemostatyske aktiviteit te ferbetterjen), waard Ct brûkt as in scaffold foar NFRCS9,10.Ct waard oerflakkich bedekt (nano-dikke filmfoarming waard waarnommen) en ferbûn mei in hemostatyske filmfoarmjende gearstalling (HFFC). HFFC fungearret as in matrigel, dy't willekeurich pleatste Ct byinoar hâldt. It ûntwikkele ûntwerp bringt spanning oer binnen de fersprate faze (fersterkjende fezels). It is lestich om nanoporeuze struktueren mei goede meganyske sterkte te krijen mei minimale polymeerkonsintraasjes. Derneist is it net maklik om ferskate mallen oan te passen foar ferskate biomedyske tapassingen.
De figuer lit in diagram sjen fan it NFRCS-ûntwerp basearre op 'e wjukstruktuer fan in libel (A). Dizze ôfbylding lit in ferlykjende analogy sjen fan 'e wjukstruktuer fan in libel (de krusende en longitudinale ieren fan 'e wjuk binne mei-inoar ferbûn) en in dwersdoorsnede-fotomikrografy fan Cp NFRCS (B). Skematyske werjefte fan NFRCS.
NFRC's waarden ûntwikkele mei HFFC as in trochgeande faze om de boppesteande beheiningen oan te pakken. HFFC is gearstald út ferskate filmfoarmjende hemostatyske polymearen, ynklusyf chitosan (as it wichtichste hemostatyske polymeer) mei methylcellulose (MC), hydroxypropylmethylcellulose (HPMC 50 cp) en polyvinylalkohol (PVA) (125 kDa) as in stipepolymeer dat trombusfoarming befoarderet. De tafoeging fan polyvinylpyrrolidine K30 (PVP K30) ferbettere de fochtopnamekapasiteit fan 'e NFRCS. Polyethyleenglycol 400 (PEG 400) waard tafoege om de polymeerferbining yn bonded polymeermingsels te ferbetterjen. Trije ferskillende HFFC hemostatyske gearstallingen (Cm HFFC, Ch HFFC en Cp HFFC), nammentlik chitosan mei MC (Cm), chitosan mei HPMC (Ch), en chitosan mei PVA (Cp), waarden tapast op Ct. Ferskate in vitro en in vivo karakterisaasjestúdzjes hawwe de hemostatyske en wûnegenêzende aktiviteit fan NFRCS befêstige. Kompositmaterialen oanbean troch NFRCS kinne brûkt wurde om ferskate foarmen fan steigers oan te passen om te foldwaan oan spesifike behoeften.
Derneist kin NFRCS oanpast wurde as in ferbân of rol om it heule ferwûningsgebiet fan 'e legere úteinen en oare dielen fan it lichem te dekken. Spesifyk foar ferwûnings oan 'e ledematen fan 'e striid kin it ûntworpen NFRCS-ûntwerp feroare wurde nei in heale earm of folslein skonk (Oanfoljende figuer S11). De NFRCS kin makke wurde ta in polsbân mei weefsellijm, dy't brûkt wurde kin om bloedingen te stopjen fan slimme selsmoardferwûnings oan 'e pols. Us haaddoel is om in NFRCS te ûntwikkeljen mei sa min mooglik polymeer dat levere wurde kin oan in grutte befolking (ûnder de earmoedegrins) en dat yn in earste help-kit pleatst wurde kin. Ienfâldich, effisjint en ekonomysk yn ûntwerp, NFRCS komt lokale mienskippen te goede en kin in wrâldwide ynfloed hawwe.
Chitosan (molekulêr gewicht 80 kDa) en amarant waarden kocht fan Merck, Yndia. Hydroxypropylmethylcellulose 50 Cp, polyethyleenglycol 400 en methylcellulose waarden kocht fan Loba Chemie Pvt. LLC, Mumbai. Polyvinylalkohol (molekulêr gewicht 125 kDa) (87-90% hydrolysearre) waard kocht fan National Chemicals, Gujarat. Polyvinylpyrrolidine K30 waard kocht fan Molychem, Mumbai, sterile swabs waarden kocht fan Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu, mei Milli Q-wetter (Direct-Q3 wettersuveringssysteem, Merck, Yndia) as drager.
NFRCS waard ûntwikkele mei in lyofilisaasjemetoade11,12. Alle HFFC-komposysjes (Tabel 1) waarden taret mei in meganyske roerder. Tariede in 0,5% oplossing fan chitosan mei 1% jittiksoer yn wetter troch trochgeande roering by 800 rpm op in meganyske roerder. It krekte gewicht fan it laden polymeer oanjûn yn Tabel 1 waard tafoege oan 'e chitosanoplossing en roerd oant in dúdlike polymeeroplossing waard krigen. PVP K30 en PEG 400 waarden tafoege oan it resultearjende mingsel yn 'e hoemannichten oanjûn yn Tabel 1, en it roeren waard trochset oant in dúdlike viskeuze polymeeroplossing waard krigen. It resultearjende bad fan polymeeroplossing waard 60 minuten sonikearre om finzen loftbellen út it polymeermingsel te ferwiderjen. Lykas te sjen is yn oanfoljende figuer S1(b), waard Ct evenredich ferdield yn elke putsje fan in 6-putsplaat (mal) oanfolle mei 5 ml HFFC.
De plaat mei seis putten waard 60 minuten sonikearre om in unifoarme wietmeitsjen en fersprieding fan HFFC yn it Ct-netwurk te berikken. Befriest dan de plaat mei seis putten by -20 °C foar 8-12 oeren. De befriezerplaten waarden 48 oeren lyofilisearre om ferskate formulearringen fan NFRCS te krijen. Deselde proseduere wurdt brûkt om ferskate foarmen en struktueren te produsearjen, lykas tampons of silindryske tampons, of elke oare foarm foar ferskate tapassingen.
Sekuer woegen chitosan (80 kDa) (3%) wurdt oplost yn 1% jittiksoer mei in magnetyske roerder. Oan de resultearjende oplossing fan chitosan waard 1% PEG 400 tafoege en 30 minuten roerd. Giet de resultearjende oplossing yn in fjouwerkante of rjochthoekige kontener en befrieze by -80 °C foar 12 oeren. Beferzen samples waarden 48 oeren lyofilisearre om poreuze Cs13 te krijen.
De ûntwikkele NFRCS waard ûnderwurpen oan eksperiminten mei Fourier-transformaasje ynfrareadspektroskopie (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Tokio, Japan) om de gemyske kompatibiliteit fan chitosan mei oare polymearen te befêstigjen14,15. De FTIR-spektra (breedte fan it spektrale berik fan 400 oant 4000 cm-1) fan alle testmonsters waarden krigen troch it útfieren fan 32 scans.
De bloedabsorptionssnelheid (BAR) foar alle formulearringen waard evaluearre mei de metoade beskreaun troch Chen et al. 16 mei lytse oanpassingen. De ûntwikkele NFRK's fan alle komposysjes waarden oernachtich yn in fakuümoven by 105 °C droege om oerbleaune oplosmiddel te ferwiderjen. 30 mg NFRCS (begjinnende stekproefgewicht - W0) en 30 mg Ct (positive kontrôle) waarden yn aparte skûtels pleatst mei in foarmingsel fan 3,8% natriumcitraat. Op foarôf bepaalde tiidintervallen, d.w.s. 5, 10, 20, 30, 40 en 60 sekonden, waarden de NFRCS fuorthelle en har oerflakken skjinmakke fan net-absorbearre bloed troch de stekproeven 30 sekonden op Ct te pleatsen. It definitive gewicht fan bloed opnommen troch NFRCS 16 waard op elk tiidstip beskôge (W1). Berekkene it BAR-persintaazje mei de folgjende formule:
De bloedstollingstiid (BCT) waard bepaald lykas rapportearre troch Wang et al. 17. De tiid dy't nedich wie foar folslein bloed (rattebloed foarmingd mei 3,8% natriumcitraat) om te stollen yn 'e oanwêzigens fan NFRCS waard berekkene as de BCT fan it testmonster. De ferskate NFRCS-komponinten (30 mg) waarden yn skroefdopflesjes fan 10 ml pleatst en ynkubearre by 37 °C. Bloed (0,5 ml) waard tafoege oan it fleske en 0,3 ml fan 0,2 M CaCl2 waard tafoege om bloedkoagulaasje te aktivearjen. Draai it fleske úteinlik elke 15 sekonden om (oant 180 °) oant in fêste stolsel ûntstiet. De BCT fan it monster wurdt skatte troch it oantal omklapte flesjes 17,18. Op basis fan BCT waarden twa optimale gearstallingen fan NFRCS Cm, Ch en Cp selektearre foar fierdere karakterisaasjestúdzjes.
De BCT fan Ch NFRCS- en Cp NFRCS-komposysjes waard bepaald troch de metoade te ymplementearjen dy't beskreaun is troch Li et al. 19. Plak 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS, en Cs (positive kontrôle) yn aparte petriskûtels (37 °C). Bloed mei 3,8% natriumcitraat waard mingd mei 0,2 M CaCl2 yn in folumeferhâlding fan 10:1 om it bloedstollingsproses te starten. 20 µl fan 0,2 M CaCl2 rattebloedmingsel waard oanbrocht op it stekproefoerflak en yn in lege petriskûtel pleatst. De kontrôle wie bloed dat yn lege petriskûtels sûnder Ct getten waard. Stopje de stolling mei fêste yntervallen fan 0, 3 en 5 minuten troch 10 ml deionisearre (DI) wetter ta te foegjen oan it stekproef mei de skûtel sûnder de stol te fersteuren. Unkoagulearre erytrocyten (erytrozyten) ûndergeane hemolyse yn 'e oanwêzigens fan deionisearre wetter en litte hemoglobine frij. Hemoglobine op ferskate tiidpunten (HA(t)) waard metten by 540 nm (λmax hemoglobine) mei in UV-Vis spektrofotometer. De absolute opname fan hemoglobine (AH(0)) yn 0 min fan 20 µl bloed yn 10 ml deionisearre wetter waard nommen as referinsjestandert. De relative hemoglobine-opname (RHA) fan koagulearre bloed waard berekkene út de ferhâlding HA(t)/HA(0) mei deselde partij bloed.
Mei in tekstueranalysator (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, Feriene Steaten) waarden de kleefeigenskippen fan NFRK oan skansearre weefsel bepaald. Druk in silindryske skûtel mei in iepen boaiem tsjin 'e binnenkant fan 'e bargefûd (sûnder de fetlaach). Monsters (Ch NFRCS en Cp NFRCS) waarden fia in kanule yn silindryske mallen oanbrocht om adhesion oan 'e hûd fan it barge te meitsjen. Nei in ynkubaasje fan 3 minuten by keamertemperatuer (RT) (25°C) waard de NFRCS-kleefsterkte registrearre mei in konstante snelheid fan 0,5 mm/sek.
It wichtichste skaaimerk fan sjirurgyske sealants is it ferheegjen fan bloedstolling, wylst bloedferlies wurdt fermindere. Ferliesleaze koagulaasje yn NFRCS waard evaluearre mei in earder publisearre metoade mei lichte oanpassingen 19. Meitsje in mikrosentrifugebuis (2 ml) (binnendiameter 10 mm) mei in gat fan 8 × 5 mm2 oan ien kant fan 'e sintrifugebuis (dat in iepen wûne fertsjintwurdiget). NFRCS wurdt brûkt om de iepening te sluten en tape wurdt brûkt om de bûtenste rânen te fersegeljen. Foegje 20 µl fan 0,2 M CaCl2 ta oan 'e mikrosentrifugebuis mei de 3,8% natriumcitraat-premix. Nei 10 minuten waarden de mikrosentrifugebuizen út 'e skûtels helle en waard de tanimming fan 'e massa fan 'e skûtels bepaald troch de útstream fan bloed út 'e NFRK (n = 3). Bloedferlies Ch NFRCS en Cp NFRCS waarden fergelike mei Cs.
De wiete yntegriteit fan NFRCS waard bepaald op basis fan 'e metoade beskreaun troch Mishra en Chaudhary21 mei lytse oanpassingen. Plak de NFRCS yn in 100 ml Erlenmeyer-kolf mei 50 ml wetter en draai 60 sekonden sûnder in top te foarmjen. Fisuele ynspeksje en prioritearring fan samples foar fysike yntegriteit op basis fan kolleksje.
De biningsterkte fan HFFC oan Ct waard bestudearre mei earder publisearre metoaden mei lytse oanpassingen. De yntegriteit fan 'e oerflakcoating waard beoardiele troch NFRK bleat te stellen oan akoestyske weagen (eksterne stimulus) yn 'e oanwêzigens fan milliQ wetter (Ct). De ûntwikkele NFRCS Ch NFRCS en Cp NFRCS waarden yn in beker fol mei wetter pleatst en sonikearre foar respektivelik 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 en 30 minuten. Nei it droegjen waard it persintaazje ferskil tusken it earste en definitive gewicht fan 'e NFRCS brûkt om it persintaazje ferlies fan materiaal (HFFC) te berekkenjen. In vitro BCT stipe fierder de biningsterkte of ferlies fan oerflakmaterialen. De effisjinsje fan HFFC-binding oan Ct soarget foar bloedkoagulaasje en in elastyske coating op it oerflak fan Ct22.
De homogeniteit fan 'e ûntwikkele NFRCS waard bepaald troch de BCT fan samples (30 mg) nommen fan willekeurich selektearre algemiene lokaasjes fan 'e NFRCS. Folgje de earder neamde BCT-proseduere om NFRCS-neilibjen te bepalen. De tichtebyheid tusken alle fiif samples soarget foar unifoarme oerflakdekking en HFFC-ôfsetting yn it Ct-gaas.
It nominale bloedkontaktgebiet (NBCA) waard bepaald lykas earder rapportearre mei wat oanpassingen. Koagulearje it bloed troch 20 µl bloed tusken de twa oerflakken fan Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS en Cs te klemjen. Nei 1 oere waarden de twa dielen fan 'e stent skieden en waard it gebiet fan 'e stolsel manuell metten. De gemiddelde wearde fan trije werhellingen waard beskôge as NBCA NFRCS19.
Dynamyske dampsorpsje (DVS)-analyze waard brûkt om de effektiviteit fan NFRCS te evaluearjen om wetter te absorbearjen út 'e eksterne omjouwing of fan it plak fan ferwûning dat ferantwurdlik is foar it inisjearjen fan koagulaasje. De DVS evaluearret of registrearret de dampopname en -ferlies yn in stekproef gravimetrysk mei in ultragefoelige balâns mei in massa-resolúsje fan ± 0,1 µg. In parsjele dampdruk (relative fochtigens) wurdt generearre troch in elektroanyske massastreamkontroller om it stekproef hinne troch it mingen fan verzadigde en droege dragergassen. Neffens de rjochtlinen fan 'e Jeropeeske Farmakopee waarden, basearre op it persintaazje fochtopname troch de samples, samples yn 4 kategoryen yndield (0–0,012% w/w− net-hygroskopysk, 0,2–2% w/w licht hygroskopysk, 2–15% matich hygroskopysk, en > 15% tige hygroskopysk)23. Neffens de rjochtlinen fan 'e Jeropeeske Farmakopee waarden, basearre op it persintaazje fochtopname troch de samples, samples yn 4 kategoryen yndield (0–0,012% w/w− net-hygroskopysk, 0,2–2% w/w licht hygroskopysk, 2–15% matich hygroskopysk, en > 15% tige hygroskopysk)23.Yn oerienstimming mei de oanbefellings fan 'e Jeropeeske Farmakopee waarden de samples, ôfhinklik fan it persintaazje fochtopname troch de samples, ferdield yn 4 kategoryen (0–0,012% w/w - net-hygroskopysk, 0,2–2% w/w licht hygroskopysk, 2–fyftjin%).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % matich hygroskopysk en > 15% tige hygroskopysk)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0.012% w/w/w非吸湿性、0.2-2% w/w 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23.根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 刱为 0＆为 0.0%-0.0% W/w- 吸湿 性 、 、 、 、 0.2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23㹿）Yn oerienstimming mei de oanbefellings fan 'e Jeropeeske Farmakopee wurde samples ferdield yn 4 klassen ôfhinklik fan it persintaazje focht dat troch it sample opnommen wurdt (0-0,012 gewichts% - net-hygroskopysk, 0,2-2 gewichts% licht hygroskopysk, 2-15 gewichts%.% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % matich hygroskopysk, > 15% tige hygroskopysk) 23.De hygroskopyske effisjinsje fan NFCS X NFCS en TsN NFCS waard bepaald op in analysator DVS TA TGA Q5000 SA. Tidens dit proses waarden rintiid, relative fochtigens (RH) en real-time stekproefgewicht by 25 °C24 krigen. It fochtgehalte wurdt berekkene troch krekte NFRCS-massa-analyze mei de folgjende fergeliking:
MC is NFRCS-fochtigens. m1 - droech gewicht fan NSAID's. m2 is de real-time NFRCS-massa by in bepaalde RV.
It totale oerflak waard skatte mei in stikstofadsorpsje-eksperimint mei floeibere stikstof nei it leechmeitsjen fan 'e samples by 25 °C foar 10 oeren (< 7 × 10–3 Torr). It totale oerflak waard skatte mei in stikstofadsorpsje-eksperimint mei floeibere stikstof nei it leechmeitsjen fan 'e samples by 25 °C foar 10 oeren (< 7 × 10–3 Torr). Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азота жидким азотом образцов при 25 °С в течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). It totale oerflak waard skatte mei in stikstofadsorpsje-eksperimint mei floeibere stikstof nei't de samples 10 oeren by 25 °C (< 7 × 10–3 Torr) leechmakke wiene.25°C+25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбции азота жидким азосон образцов в течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). It totale oerflak waard skatte mei help fan stikstofadsorpsje-eksperiminten mei floeibere stikstof nei't de samples 10 oeren by 25 °C (< 7 x 10-3 torr) leechmakke wiene.Totale oerflakte, poarevolume en NFRCS-poaregrutte waarden bepaald mei in Quantachrome fan NOVA 1000e, Eastenryk mei help fan RS 232-software.
Tariede 5% RBC's (saline as ferdunningsmiddel) út folslein bloed. Oerdrage dan in aliquot fan HFFC (0.25 ml) nei in 96-welle plaat en 5% RBC-massa (0.1 ml). Ynkubearje it mingsel by 37 °C foar 40 minuten. In mingsel fan reade bloedsellen en serum waard beskôge as in positive kontrôle, en in mingsel fan saline en reade bloedsellen as in negative kontrôle. Hemagglutinaasje waard bepaald neffens de Stajitzky-skaal. De foarstelde skalen binne as folget: + + + + tichte korrelige aggregaten; + + + glêde ûnderste pads mei bûgde rânen; + + glêde ûnderste pads mei skuorde rânen; + smelle reade ringen om 'e rânen fan' e glêde pads; – (negatyf) aparte reade knop 12 yn it sintrum fan 'e legere well.
De hemokompatibiliteit fan NFRCS waard bestudearre neffens de metoade fan 'e Ynternasjonale Organisaasje foar Standardisaasje (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27. De gravimetryske metoade beskreaun troch Singh et al. Lytse oanpassingen waarden makke om trombusfoarming te beoardieljen yn 'e oanwêzigens fan of op it oerflak fan NFRCS. 500 mg Cs, Ch NFRCS en Cp NFRCS waarden 24 oeren by 37°C ynkubearre yn fosfaatbufferde sâltwetter (PBS). Nei 24 oeren waard PBS fuorthelle en waard NFRCS behannele mei 2 ml bloed mei 3,8% natriumcitraat. Foegje 0,04 ml 0,1 M CaCl2 ta oan 'e ynkubearre samples op it oerflak fan 'e NFRCS. Nei 45 minuten waard 5 ml destillearre wetter tafoege om de koagulaasje te stopjen. Koagulearre bloed op it oerflak fan NFRK waard behannele mei in 36-38% formaldehyde-oplossing. De mei formaldehyde fêstmakke klonten waarden droege en woegen. It persintaazje trombose waard skatte troch it berekkenjen fan it gewicht fan it glês sûnder bloed en stekproef (negative kontrôle) en it glês mei bloed (positive kontrôle).
As in earste befêstiging waarden de samples fisualisearre ûnder in optyske mikroskoop om it fermogen fan 'e HFFC-oerflakcoating, Ct dat mei-inoar ferbûn is, en Ct-netwurk te begripen om poaren te foarmjen. Tinne seksjes fan Ch en Cp fan NFRCS waarden mei in skalpelmes ôfsnien. De resultearjende seksje waard op in glêzen objektglas pleatst, bedekt mei in dekglaasje, en de rânen waarden mei lym fêstmakke. De taretmakke objektglass waarden besjoen ûnder in optyske mikroskoop en foto's waarden makke mei ferskillende fergruttings.
Polymeerôfsetting yn Ct-netwurken waard visualisearre mei help fan fluoreszinsjemikroskopie basearre op de metoade beskreaun troch Rice et al.29. De HFFC-komposysje dy't brûkt waard foar de formulearring waard mingd mei in fluorescerende kleurstof (amarant), en NFRCS (Ch & Cp) waarden taret neffens de earder neamde metoade. De HFFC-komposysje dy't brûkt waard foar de formulearring waard mingd mei in fluorescerende kleurstof (amarant), en NFRCS (Ch & Cp) waarden taret neffens de earder neamde metoade.De HFFC-komposysje dy't brûkt waard foar formulearring waard mingd mei in fluorescerende kleurstof (amarant) en NFRCS (Ch en Cp) waard krigen neffens de earder neamde metoade.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方提到的方戇 &NFR Cp).将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方提到的方戇 &NFR Cp).De HFFC-komposysje dy't yn 'e formulearring brûkt waard, waard mingd mei in fluorescerende kleurstof (Amaranth) en krige NFRCS (Ch en Cp), lykas earder neamd.Tinne seksjes fan NFRK waarden útsnien út 'e krigen samples, op glêzen objektglaasjes pleatst en bedekt mei dekglaasjes. Besjoch de taretmakke objektglaasjes ûnder in fluoreszinte mikroskoop mei in grien filter (310-380 nm). Ofbyldings waarden makke mei 4x fergrutting om Ct-relaasjes en oermjittige polymeerôfsetting yn it Ct-netwurk te begripen.
De oerflaktopografy fan NFRCS Ch en Cp waard bepaald mei in atoomkrêftmikroskoop (AFM) mei in ultraskerpe TESP-kantilever yn tapmodus: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Taiwan. De oerflakteruwheid waard bepaald troch root mean square (RMS) mei software (Scanning Probe Image Processor). Ferskate NFRCS-lokaasjes waarden werjûn op 3D-ôfbyldings om te kontrolearjen op oerflakuniformiteit. De standertôfwiking fan 'e skoare foar in bepaald gebiet wurdt definiearre as de oerflakteruwheid. De RMS-fergeliking waard brûkt om de oerflakteruwheid fan NFRCS31 te kwantifisearjen.
FESEM-basearre stúdzjes waarden útfierd mei FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokio, om de oerflakmorfology fan Ch NFRCS en Cp NFRCS te begripen, dy't bettere BCT lieten sjen as Cm NFRCS. De FESEM-stúdzje waard útfierd neffens de metoade beskreaun troch Zhao et al. 32 mei lytse oanpassingen. NFRCS 20 oant 30 mg Ch NFRCS en Cp NFRCS waarden foarôf mingd mei 20 µl fan 3,8% natriumcitraat foarôf mingd mei rattebloed. 20 μl fan 0,2 M CaCl2 waard tafoege oan 'e mei bloed behannele samples om koagulaasje te begjinnen en de samples waarden 10 minuten by keamertemperatuer ynkubearre. Derneist waarden oerstallige erytrocyten fan it NFRCS-oerflak fuorthelle troch te spieljen mei sâltwetter.
Folgjende samples waarden behannele mei 0,1% glutaraldehyde en doe droege yn in hjitteluchtoven by 37 °C om focht te ferwiderjen. De droege samples waarden bedekt en analysearre 32. Oare ôfbyldings dy't tidens de analyze waarden krigen, wiene klontefoarming op it oerflak fan yndividuele katoenen fezels, polymeerôfsetting tusken Ct, erytrocytmorfology (foarm), klonte-yntegriteit, en erytrocytmorfology yn 'e oanwêzigens fan NFRCS. Unbehannele NFRCS-gebieten en Ch- en Cp-behannele NFRCS-gebieten dy't mei bloed ynkubearre wiene, waarden scanne op elemintêre ioanen (natrium, kalium, stikstof, kalsium, magnesium, sink, koper en selenium) 33. Fergelykje elemintêre ioanpersintaazjes tusken behannele en net-behannele samples om elemintêre ioanakkumulaasje tidens klontefoarming en klonthomogeniteit te begripen.
De dikte fan 'e Cp HFFC-oerflakcoating op it Ct-oerflak waard bepaald mei FESEM. De dwerstrochsneden fan Cp NFRCS waarden út it ramt snien en mei in sputtercoating behannele. De resultearjende sputtercoatingmonsters waarden waarnommen mei FESEM en de dikte fan 'e oerflakcoating waard metten 34, 35, 36.
Röntgenmikro-CT leveret 3D net-destruktive ôfbylding mei hege resolúsje en lit jo de ynterne strukturele opset fan NFRK bestudearje. Mikro-CT brûkt in röntgenstriel dy't troch it stekproef giet om de lokale lineêre ferswakkingskoëffisjint fan 'e röntgenstralen yn it stekproef op te nimmen, wat helpt om morfologyske ynformaasje te krijen. De ynterne lokaasje fan Ct yn Cp NFRCS en bloedbehannele Cp NFRCS waard ûndersocht mei mikro-CT om de absorpsje-effisjinsje en bloedstolling te begripen yn 'e oanwêzigens fan NFRCS37,38,39. De 3D-struktueren fan bloedbehannele en ûnbehannele Cp NFRCS-samples waarden rekonstruearre mei mikro-CT (V|tome|x S240, Phoenix, Dútslân). Mei help fan VG STUDIO-MAX software ferzje 2.2 waarden ferskate röntgenôfbyldings nommen út ferskate hoeken (ideaal 360° dekking) om 3D-ôfbyldings foar NFRCS te ûntwikkeljen. De sammele projeksjegegevens waarden rekonstruearre yn 3D volumetryske ôfbyldings mei de oerienkommende ienfâldige 3D ScanIP Academic software.
Derneist, om de ferdieling fan 'e klont te begripen, waarden 20 µl foarmingd sitrearre bloed en 20 µl fan 0.2 M CaCl2 tafoege oan 'e NFRCS om bloedstolling te begjinnen. De taretmakke samples wurde litten om te ferhurdzjen. It NFRK-oerflak waard behannele mei 0.5% glutaraldehyde en droege yn in hjitteluchtoven by 30-40 °C foar 30 minuten. De bloedklont dy't op 'e NFRCS foarme waard, waard scanne, rekonstruearre, en in 3D-ôfbylding fan 'e bloedklont waard visualisearre.
Antibakteriële assays waarden útfierd op Cp NFRCS (it bêste te fergelykjen mei Ch NFRCS) mei de earder beskreaune metoade mei lytse oanpassingen. De antibakteriële aktiviteit fan Cp NFRCS en Cp HFFC waard bepaald mei trije ferskillende testmikroorganismen [S.aureus (gram-positive baktearjes), E.coli (gram-negative baktearjes) en wite Candida (C.albicans)] dy't groeiden op agar yn petriskûtels yn in ynkubator. Ynokulearje 50 ml fan 'e ferdunde baktearjekultuersuspensje unifoarm by in konsintraasje fan 105-106 CFU ml-1 op it agarmedium. Giet it medium yn in petriskûtel en lit it stollje. Putten waarden makke op it oerflak fan 'e agarplaat om te foljen mei HFFC (3 putten foar HFFC en 1 foar negative kontrôle). Foegje 200 µl HFFC ta oan 3 putten en 200 µl pH 7.4 PBS oan 'e 4e putte. Oan 'e oare kant fan 'e petriskûtel, pleats in 12 mm Cp NFRCS-skiif op 'e ferhurde agar en meitsje dizze fochtich mei PBS (pH 7.4). Ciprofloxacine, ampicilline en fluconazoltabletten wurde beskôge as referinsjestanderts foar Staphylococcus aureus, Escherichia coli en Candida albicans. Mjit de sône fan ynhibysje mei de hân en nim in digitale ôfbylding fan 'e sône fan ynhibysje.
Nei ynstitúsjonele etyske goedkarring waard de stúdzje útfierd oan it Kasturba Medical College of Education and Research yn Manipal, Karnataka, yn súdlik Yndia. It in vitro TEG eksperimintele protokol is hifke en goedkard troch de Ynstitúsjonele Etyske Kommisje fan Kasturba Medical College, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020). Underwerpen waarden rekrutearre út frijwillige bloeddonors (fan 18 oant 55 jier) fan 'e bloedbank fan it sikehûs. Derneist waard in ynformearre tastimmingsformulier krigen fan 'e frijwilligers foar it sammeljen fan bloedmonsters. Native TEG (N-TEG) ​​waard brûkt om it effekt fan 'e Cp HFFC-formulering te bestudearjen op folslein bloed dat foarôf mingd wie mei natriumcitraat. N-TEG wurdt breed erkend foar syn rol yn reanimaasje op it punt fan soarch, wat problemen feroarsaket foar klinisy fanwegen de mooglikheid fan klinysk signifikante fertraging yn resultaten (routine koagulaasjetests). N-TEG-analyze waard útfierd mei folslein bloed. Ynformearre tastimming en detaillearre medyske skiednis waarden krigen fan alle dielnimmers. De stúdzje omfette gjin dielnimmers mei hemostatyske of trombotyske komplikaasjes lykas swangerskip/postpartum of leversykte. Underwerpen dy't medisinen namen dy't ynfloed hawwe op 'e koagulaasjekaskade waarden ek útsletten fan 'e stúdzje. Basis laboratoariumtests (hemoglobine, protrombinetiid, aktivearre tromboplastine en bloedplaatjestelling) waarden útfierd op alle dielnimmers neffens standertprosedueres. N-TEG bepaalt bloedklontviskoelastisiteit, earste klontstruktuer, dieltsje-ynteraksje, klontfersterking en klontlyse. De N-TEG-analyze leveret grafyske en numerike gegevens oer de kollektive effekten fan ferskate sellulêre eleminten en plasma. N-TEG-analyze waard útfierd op twa ferskillende folumes fan Cp HFFC (10 µl en 50 µl). As resultaat waard 1 ml folslein bloed mei sitroensoer tafoege oan 10 μl fan Cp HFFC. Foegje 1 ml (Cp HFFC + sitrearre bloed), 340 µl mingd bloed ta oan 20 µl 0,2 M CaCl2 mei TEG-skûtel. Dêrnei waarden TEG-skûtels yn TEG® 5000, US laden om R, K, alfahoek, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% fan bloedmonsters te mjitten yn 'e oanwêzigens fan Cp HFFC41.
It in vivo-stúdzjeprotokol waard beoardiele en goedkard troch de Institutional Animal Ethics Committee (IAEC), Kasturba School of Medicine, Manipal Institute of Higher Education, Manipal (IAEC/KMC/69/2020). Alle bisteproeven waarden útfierd yn oerienstimming mei de oanbefellings fan 'e Committee for the Control and Supervision of Animal Experimentation (CPCSEA). Alle in vivo NFRCS-stúdzjes (2 × 2 cm2) waarden útfierd op froulike Wistar-rotten (mei in gewicht fan 200 oant 250 g). Alle bisten waarden akklimatisearre by in temperatuer fan 24-26 °C, de bisten hiene frije tagong ta standert iten en wetter ad libitum. Alle bisten waarden willekeurich ferdield yn ferskillende groepen, elke groep bestie út trije bisten. Alle stúdzjes waarden útfierd yn oerienstimming mei Animal Studies: Report of In Vivo Experiments 43. Foar de stúdzje waarden de bisten anesthesisearre troch intraperitoneale (ip) administraasje fan in mingsel fan 20-50 mg ketamine (per 1 kg lichemsgewicht) en 2-10 mg xylazine (per 1 kg lichemsgewicht). Nei de stúdzje waard it bloedvolume berekkene troch it ferskil te evaluearjen tusken it begjin- en eingewicht fan 'e samples, wêrby't de gemiddelde wearde dy't út 'e trije testen helle waard, nommen waard as it bloedvolume fan it sample.
It rattesturt-amputaasjemodel waard ymplementearre om it potinsjeel fan NFRCS te begripen om bloedingen te modulearjen by trauma, gefjocht of ferkearsûngelokken (ferwûningsmodel). Snij 50% fan 'e sturt ôf mei in skalpelmes en pleats it 15 sekonden yn 'e loft om normale bloedingen te garandearjen. Derneist waarden testmonsters op 'e sturt fan in rat pleatst troch druk út te oefenjen (Ct, Cs, Ch NFRCS en Cp NFRCS). Bloeding en PCT waarden rapportearre foar testmonsters (n = 3)17,45.
De effektiviteit fan NFRCS-drukkontrôle yn 'e striid waard ûndersocht op in model fan 'e oerflakkige femorale arterie. De femorale arterie wurdt bleatlein, trochstutsen mei in 24G trocar, en binnen 15 sekonden bloedde. Nei't ûnkontrolearre bloedjen waarnommen is, wurdt it testmonster op 'e trochstuikingsplak pleatst mei druk tapast. Direkt nei it oanbringen fan it testmonster waard de stollingstiid registrearre en waard hemostatyske effisjinsje waarnommen foar de folgjende 5 minuten. Deselde proseduere waard werhelle mei Cs en Ct46.
Dowling et al. 47 stelden in leverblessueremodel foar om it hemostatyske potinsjeel fan hemostatyske materialen te beoardieljen yn 'e kontekst fan intraoperative bloedingen. BCT waard opnommen foar Ct-monsters (negative kontrôle), Cs-raamwurk (positive kontrôle), Ch NFRCS-monsters, en Cp NFRCS-monsters. De suprahepatyske vena cava fan 'e rat waard bleatlein troch in mediane laparotomie út te fieren. Dêrnei waard it distale diel fan 'e linker lob mei in skjirre útsnien. Meitsje in ynsnijing yn 'e lever mei in skalpelmes en lit it in pear sekonden bliede. Sekuer woegen Ch NFRCS- en Cp NFRCS-testmonsters waarden sûnder positive druk op it beskeadige oerflak pleatst en BCT waard opnommen. De kontrôlegroep (Ct) paste doe druk ta folge troch Cs 30 s47 sûnder de blessuere te brekken.
In vivo wûnehelingsassays waarden útfierd mei in eksysjoneel wûnemodel om de wûnehelingseigenskippen fan 'e ûntwikkele polymeer-basearre NFRCS'en te evaluearjen. Modellen fan eksysjonele wûnen waarden selektearre en útfierd neffens earder publisearre metoaden mei lytse oanpassingen19,32,48. Alle bisten waarden anaesthesisearre lykas earder beskreaun. Brûk in biopsiespons (12 mm) om in sirkelfoarmige djippe ynsnijing yn 'e hûd fan' e rêch te meitsjen. Tariede wûneplakken waarden ferbûn mei Cs (positive kontrôle), Ct (erkennend dat wattenskiven it genêzen bemuoie), Ch NFRCS en Cp NFRCS (eksperimentele groep) en in negative kontrôle sûnder behanneling. Op elke dei fan 'e stúdzje waard it gebiet fan' e wûne by alle rotten metten. Brûk in digitale kamera om in foto te meitsjen fan it wûnegebiet en set in nij ferbân oan. It persintaazje wûnesluting waard metten mei de folgjende formule:
Op basis fan it persintaazje wûnesluting op 'e 12e dei fan 'e stúdzje, waard de rattehûd fan 'e bêste groep útsnien ((Cp NFRCS) en de kontrôlegroep) en bestudearre troch H&E-kleuring en Masson's trichrome-kleuring. Op basis fan it persintaazje wûnesluting op 'e 12e dei fan 'e stúdzje, waard de rattehûd fan 'e bêste groep útsnien ((Cp NFRCS) en de kontrôlegroep) en bestudearre troch H&E-kleuring en Masson's trichrome-kleuring.Op basis fan it persintaazje wûnesluting op 'e 12e dei fan 'e stúdzje, waard de hûd fan 'e rotten fan 'e bêste groep ((Cp NFRCS) en de kontrôlegroep) útsnien en ûndersocht troch kleuring mei hematoxyline-eosine en Masson's trichrome.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Masson三色染色研究。根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和眳组）Rotten yn 'e bêste groep ((Cp NFRCS) en kontrôlegroepen) waarden útsnien foar hematoxyline-eosine-kleuring en Masson's trichrome-kleuring basearre op persintaazje wûnesluting op dei 12 fan 'e stúdzje.De ymplementearre kleuringsproseduere waard útfierd neffens earder beskreaune metoaden49,50. Koartsein, nei fiksaasje yn 10% formaline, waarden de samples dehydratisearre mei in searje gradearre alkoholen. Brûk in mikrotoom om tinne seksjes (5 µm dik) fan it útsniene weefsel te krijen. Tinne seriële seksjes fan kontrôles en Cp NFRCS waarden behannele mei hematoxyline en eosine om histopatologyske feroarings te bestudearjen. Masson's trichrome-kleuring waard brûkt om de foarming fan kollageenfibrillen te detektearjen. De krigen resultaten waarden blyn bestudearre troch pathologen.
De stabiliteit fan Cp NFRCS-monsters waard bestudearre by keamertemperatuer (25 °C ± 2 °C / 60% RH ± 5%) foar 12 moannen51. Cp NFRCS (oerflakferkleuring en mikrobiële groei) waard fisueel ynspektearre en hifke op foldwearstabiliteit en BCT neffens de boppesteande metoaden beskreaun yn 'e seksje Materialen en Metoaden.
De skalberens en reprodusearberens fan Cp NFRCS waard ûndersocht troch it tarieden fan Cp NFRCS mei in grutte fan 15 × 15 cm2. Derneist waarden 30 mg samples (n = 5) út ferskate Cp NFRCS-fraksjes helle en waard de BCT fan 'e bestudearre samples evaluearre lykas earder beskreaun yn 'e seksje Metoaden.
Wy hawwe besocht ferskate foarmen en struktueren te ûntwikkeljen mei Cp NFRCS-komposysjes foar ferskate biomedyske tapassingen. Sokke foarmen of konfiguraasjes omfetsje konyske swabs foar noasbloedingen, toskedokterprosedueres en silindryske swabs foar faginale bloedingen.
Alle datasets wurde útdrukt as gemiddelde ± standertôfwiking en waarden analysearre troch ANOVA mei Prism 5.03 (GraphPad, San Diego, CA, Feriene Steaten) folge troch Bonferroni's meardere fergelikingstest (*p <0.05).
Alle prosedueres útfierd yn minsklike stúdzjes wiene yn oerienstimming mei de noarmen fan it Ynstitút en de Nasjonale Undersyksried, lykas de Ferklearring fan Helsinki 1964 en de lettere amendeminten dêrfan, of ferlykbere etyske noarmen. Alle dielnimmers waarden ynformearre oer de skaaimerken fan 'e stúdzje en it frijwillige karakter dêrfan. Dielnimmersgegevens bliuwe fertroulik nei it sammeljen. It in vitro TEG-eksperimentele protokol is hifke en goedkard troch de Ynstitúsjonele Etyske Kommisje fan Kasturba Medical College, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020). Frijwilligers hawwe ynformearre tastimming tekene om bloedmonsters te sammeljen.
Alle prosedueres útfierd yn bistestúdzjes waarden útfierd yn oerienstimming mei de Kastuba Fakulteit fan Genêskunde, Manipal Ynstitút foar Heger Underwiis, Manipal (IAEC/KMC/69/2020). Alle ûntworpen bisteksperiminten waarden útfierd yn oerienstimming mei de rjochtlinen fan 'e Kommisje foar de Kontrôle en Tafersjoch op Dierproeven (CPCSEA). Alle auteurs folgje de ARRIVE-rjochtlinen.
De FTIR-spektra fan alle NFRCS waarden analysearre en fergelike mei it chitosan-spektrum werjûn yn figuer 2A. Karakteristike spektrale pieken fan chitosan (registrearre) by 3437 cm-1 (OH- en NH-útrekking, oerlaap), 2945 en 2897 cm-1 (CH-útrekking), 1660 cm-1 (NH2-stamme), 1589 cm-1 (N-H-bûging), 1157 cm-1 (brêge-útrekking O-), 1067 cm-1 (útrekking C-O, sekundêre hydroxyl), 993 cm-1 (útrekking CO, Bo-OH) 52.53.54. Oanfoljende tabel S1 toant de FTIR NFRCS-absorpsjespektrumwearden foar chitosan (reporter), suvere chitosan, Cm, Ch, en Cp. De FTIR-spektra fan alle NFRCS (Cm, Ch en Cp) lieten deselde karakteristike absorpsjebannen sjen as suvere chitosan sûnder wichtige feroarings (figuer 2A). De FTIR-resultaten befêstigen de ôfwêzigens fan gemyske of fysike ynteraksjes tusken de polymearen dy't brûkt waarden om de NFRCS te ûntwikkeljen, wat oanjout dat de brûkte polymearen inert binne.
In vitro karakterisaasje fan Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS en Cs. (A) fertsjintwurdiget de kombineare FTIR-spektra fan 'e gearstallingen fan chitosan en Cm NFRCS, Ch NFRCS en Cp NFRCS ûnder kompresje. (B) a) Opnamesnelheid fan folbloed fan NFRCS Cm, Ch, Cp en Cg (n = 3); De Ct-monsters lieten in hegere BAR sjen, om't it wattenstaafje in hegere absorpsje-effisjinsje hat; b) Bloed nei bloedabsorpsje Yllustraasje fan it opnommen monster. Grafyske werjefte fan 'e BCT fan testmonster C (Cp NFRCS hie de bêste BCT (15 s, n = 3)). Gegevens yn C, D, E, en G waarden werjûn as gemiddelde ± SD, en de flaterbalken fertsjintwurdigje SD, ***p < 0.0001. Gegevens yn C, D, E, en G waarden werjûn as gemiddelde ± SD, en de flaterbalken fertsjintwurdigje SD, ***p < 0.0001. Данные в C, D, E en G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей представляюю отклонение, ***p <0,0001. Gegevens yn C, D, E, en G wurde presintearre as gemiddelde ± standertôfwiking, en flaterbalken fertsjintwurdigje standertôfwiking, ***p <0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001. Данные в C, D, E en G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрешностей предредставля отклонение, ***p <0,0001. Gegevens yn C, D, E, en G wurde werjûn as gemiddelde ± standertôfwiking, flaterbalken fertsjintwurdigje standertôfwiking, ***p <0.0001.