გმადლობთ, რომ ეწვიეთ Nature.com-ს. თქვენს მიერ გამოყენებულ ბრაუზერის ვერსიას CSS-ის შეზღუდული მხარდაჭერა აქვს. საუკეთესო გამოცდილებისთვის გირჩევთ გამოიყენოთ განახლებული ბრაუზერი (ან გამორთოთ თავსებადობის რეჟიმი Internet Explorer-ში). ამასობაში, მხარდაჭერის უწყვეტი უზრუნველყოფის მიზნით, საიტს სტილებისა და JavaScript-ის გარეშე ვაჩვენებთ.
უკონტროლო სისხლდენა სიკვდილის ერთ-ერთი წამყვანი მიზეზია. სწრაფი ჰემოსტაზის მიღწევა უზრუნველყოფს სუბიექტის გადარჩენას, როგორც პირველადი დახმარების საშუალება საბრძოლო მოქმედებების, საგზაო შემთხვევების და სიკვდილიანობის შემცირების ოპერაციების დროს. ნანოფოროვანი ბოჭკოებით გამაგრებული კომპოზიტური ხარაჩო (NFRCS), რომელიც მიიღება მარტივი ჰემოსტატიკური აპკის წარმომქმნელი შემადგენლობისგან (HFFC), როგორც უწყვეტი ფაზა, შეუძლია ჰემოსტაზის ინიცირება და გაძლიერება. NFRCS-ის შემუშავება ეფუძნება ჭრიჭინას ფრთის დიზაინს. ჭრიჭინას ფრთის სტრუქტურა შედგება განივი და გრძივი ფრთებისგან, ხოლო ფრთის მემბრანები ერთმანეთთან დაკავშირებულია მიკროსტრუქტურის მთლიანობის შესანარჩუნებლად. HFFC თანაბრად ფარავს ბოჭკოს ზედაპირს ნანომეტრის სისქის აპკით და აკავშირებს შემთხვევით განაწილებულ ბამბის სისქეს (Ct) (დისპერსიული ფაზა) ნანოფოროვანი სტრუქტურის შესაქმნელად. უწყვეტი და დისპერსიული ფაზების კომბინაცია ათჯერ ამცირებს პროდუქტის ღირებულებას კომერციულად ხელმისაწვდომ პროდუქტებთან შედარებით. მოდიფიცირებული NFRCS (ტამპონები ან სამაჯურები) შეიძლება გამოყენებულ იქნას ბიოსამედიცინო სხვადასხვა გამოყენებაში. In vivo კვლევებმა დაასკვნა, რომ შემუშავებული Cp NFRCS იწვევს და აძლიერებს კოაგულაციის პროცესს გამოყენების ადგილას. NFRCS-ს შეუძლია მიკროგარემოს მოდულირება და უჯრედულ დონეზე მოქმედება მისი ნანოფოროვანი სტრუქტურის წყალობით, რაც ჭრილობის უკეთ შეხორცებას უწყობს ხელს ამოკვეთილი ჭრილობის მოდელში.
უკონტროლო სისხლდენა საბრძოლო, ინტრაოპერაციული და გადაუდებელი სიტუაციების დროს შეიძლება სერიოზული საფრთხე შეუქმნას დაჭრილების სიცოცხლეს1. ეს მდგომარეობები დამატებით იწვევს პერიფერიული სისხლძარღვოვანი წინააღმდეგობის საერთო ზრდას, რაც იწვევს ჰემორაგიულ შოკს. ოპერაციის დროს და მის შემდეგ სისხლდენის კონტროლის შესაბამისი ზომები პოტენციურად სიცოცხლისთვის საშიშად ითვლება2,3. მსხვილი სისხლძარღვების დაზიანება იწვევს სისხლის მასიურ დაკარგვას, რაც იწვევს სიკვდილიანობის მაჩვენებელს ≤ 50%-ს საბრძოლო მოქმედებებში და 31%-ს ოპერაციის დროს1. სისხლის მასიური დაკარგვა იწვევს სხეულის მოცულობის შემცირებას, რაც ამცირებს გულის გამოტყორცნას. პერიფერიული სისხლძარღვოვანი წინააღმდეგობის საერთო ზრდა და მიკროცირკულაციის პროგრესირებადი დარღვევა იწვევს ჰიპოქსიას სიცოცხლის შემანარჩუნებელ ორგანოებში. ჰემორაგიული შოკი შეიძლება განვითარდეს, თუ მდგომარეობა გაგრძელდება ეფექტური ჩარევის გარეშე1,4,5. სხვა გართულებებია ჰიპოთერმიის და მეტაბოლური აციდოზის პროგრესირება, ასევე კოაგულაციის დარღვევა, რომელიც აფერხებს კოაგულაციის პროცესს. მძიმე ჰემორაგიული შოკი ასოცირდება სიკვდილის მაღალ რისკთან6,7,8. III ხარისხის (პროგრესირებადი) შოკის დროს სისხლის გადასხმა აუცილებელია პაციენტის გადარჩენისთვის ინტრაოპერაციული და პოსტოპერაციული ავადობისა და სიკვდილიანობის დროს. ზემოთ ჩამოთვლილი ყველა სიცოცხლისთვის საშიში სიტუაციის დასაძლევად, ჩვენ შევიმუშავეთ ნანოფოროვანი ბოჭკოვანი გამაგრებული კომპოზიტური ხარაჩო (NFRCS), რომელიც იყენებს პოლიმერის მინიმალურ კონცენტრაციას (0.5%) წყალში ხსნადი ჰემოსტატიკური პოლიმერების კომბინაციის გამოყენებით.
ბოჭკოვანი გამაგრების გამოყენებით შესაძლებელია ეკონომიური პროდუქტების შემუშავება. შემთხვევით განლაგებული ბოჭკოები ჭრიჭინას ფრთის სტრუქტურას წააგავს, რომელიც დაბალანსებულია ფრთებზე ჰორიზონტალური და ვერტიკალური ზოლებით. ფრთის განივი და გრძივი ძარღვები ფრთის მემბრანასთან ურთიერთობს (სურ. 1). NFRCS შედგება გამაგრებული Ct-სგან, როგორც ხარაჩოს ​​სისტემისგან, უკეთესი ფიზიკური და მექანიკური სიმტკიცით (სურათი 1). ხელმისაწვდომობისა და ოსტატობის გამო, ქირურგები ოპერაციებისა და სახვევების დროს ბამბის ძაფის საზომი ხელსაწყოების (Ct) გამოყენებას ამჯობინებენ. ამგვარად, მისი მრავალმხრივი სარგებლის გათვალისწინებით, მათ შორის >90%-იანი კრისტალური ცელულოზა (რაც ხელს უწყობს ჰემოსტატიკური აქტივობის გაძლიერებას), Ct გამოყენებული იქნა NFRCS9,10-ის ჩონჩხის სისტემად. ამგვარად, მისი მრავალმხრივი სარგებლის გათვალისწინებით, მათ შორის >90%-იანი კრისტალური ცელულოზა (რაც ხელს უწყობს ჰემოსტატიკური აქტივობის გაძლიერებას), Ct გამოყენებული იქნა NFRCS9,10-ის ჩონჩხის სისტემად. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической целлюлозы (участвует в повышении гемостатической активности), Ct использовали в качестве скечет. ამიტომ, მისი მრავალი სარგებლის გათვალისწინებით, მათ შორის >90%-იანი კრისტალური ცელულოზა (რომელიც მონაწილეობს ჰემოსტატიკური აქტივობის გაზრდაში), Ct გამოყენებული იქნა NFRCS ჩონჩხის სისტემისთვის9,10.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止衧t被用作NFRCS9,10 的骨架系统.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%ამიტომ, მისი მრავალი სარგებლის გათვალისწინებით, მათ შორის 90%-ზე მეტი კრისტალური ცელულოზის შემცველობით (ხელს უწყობს ჰემოსტატიკური აქტივობის გაძლიერებას), Ct გამოყენებული იქნა NFRCS9,10-ის საყრდენად.Ct ზედაპირულად იყო დაფარული (დაფიქსირდა ნანო-სქელი აპკის წარმოქმნა) და ერთმანეთთან იყო დაკავშირებული ჰემოსტატიკური აპკის წარმომქმნელ კომპოზიციასთან (HFFC). HFFC მოქმედებს როგორც მატრიგელი, რომელიც შემთხვევით განლაგებულ Ct-ს ერთად აკავებს. შემუშავებული დიზაინი სტრესს გადასცემს დისპერსიულ ფაზაში (გამამაგრებელი ბოჭკოები). მინიმალური პოლიმერული კონცენტრაციების გამოყენებით რთულია კარგი მექანიკური სიმტკიცის მქონე ნანოფოროვანი სტრუქტურების მიღება. გარდა ამისა, სხვადასხვა ბიოსამედიცინო გამოყენებისთვის სხვადასხვა ყალიბის მორგება ადვილი არ არის.
ნახაზზე ნაჩვენებია NFRCS-ის დიზაინის დიაგრამა, რომელიც დაფუძნებულია ჭრიჭინას ფრთის სტრუქტურაზე (A). ეს სურათი ასახავს ჭრიჭინას ფრთის სტრუქტურის შედარებით ანალოგიას (ფრთის გადამკვეთი და გრძივი ძარღვები ერთმანეთთან არის დაკავშირებული) და Cp NFRCS-ის განივი ფოტომიკროგრაფიას (B). NFRCS-ის სქემატური წარმოდგენა.
ზემოაღნიშნული შეზღუდვების გადასაჭრელად NFFC-ები შემუშავდა HFFC-ის, როგორც უწყვეტი ფაზის გამოყენებით. HFFC შედგება სხვადასხვა აპკის წარმომქმნელი ჰემოსტატიკური პოლიმერებისგან, მათ შორის ქიტოზანისგან (როგორც მთავარი ჰემოსტატიკური პოლიმერი) მეთილცელულოზასთან (MC), ჰიდროქსიპროპილ მეთილცელულოზასთან (HPMC 50 cp) და პოლივინილის სპირტთან (PVA) (125 kDa), როგორც დამხმარე პოლიმერთან, რომელიც ხელს უწყობს თრომბის წარმოქმნას. პოლივინილპიროლიდინ K30-ის (PVP K30) დამატებამ გააუმჯობესა NFRCS-ის ტენიანობის შთანთქმის უნარი. შეკავშირებულ პოლიმერულ ნარევებში პოლიმერის ჯვარედინი შეკავშირების გასაუმჯობესებლად დაემატა პოლიეთილენგლიკოლი 400 (PEG 400). Ct-ზე გამოყენებული იქნა HFFC-ის სამი განსხვავებული ჰემოსტატიკური შემადგენლობა (Cm HFFC, Ch HFFC და Cp HFFC), კერძოდ, ქიტოზანი MC-ით (Cm), ქიტოზანი HPMC-ით (Ch) და ქიტოზანი PVA-თი (Cp). სხვადასხვა in vitro და in vivo დახასიათების კვლევებმა დაადასტურა NFRCS-ის ჰემოსტატიკური და ჭრილობების შეხორცების აქტივობა. NFRCS-ის მიერ შემოთავაზებული კომპოზიტური მასალების გამოყენება შესაძლებელია ხარაჩოების სხვადასხვა ფორმის სპეციფიკური საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად.
გარდა ამისა, NFRCS-ის მოდიფიცირება შესაძლებელია როგორც სახვევი ან რულონი, რათა დაიფაროს ქვედა კიდურების მთელი დაზიანების არე და სხეულის სხვა ნაწილები. კერძოდ, საბრძოლო კიდურების დაზიანებებისთვის, შექმნილი NFRCS-ის დიზაინი შეიძლება შეიცვალოს ნახევარი ხელის ან მთლიანი ფეხის სახით (დამატებითი სურათი S11). NFRCS-ისგან შესაძლებელია სამაჯურის დამზადება ქსოვილის წებოთი, რომლის გამოყენებაც შესაძლებელია მაჯის მძიმე სუიციდური დაზიანებების დროს სისხლდენის შესაჩერებლად. ჩვენი მთავარი მიზანია შევიმუშაოთ NFRCS, რომელიც შეიცავს რაც შეიძლება ნაკლებ პოლიმერს, რომელიც შეიძლება მიეწოდოს დიდ მოსახლეობას (სიღარიბის ზღვარს ქვემოთ) და მოთავსდეს პირველადი დახმარების ნაკრებში. მარტივი, ეფექტური და ეკონომიური დიზაინით, NFRCS სარგებელს მოუტანს ადგილობრივ თემებს და შეუძლია გლობალური გავლენა მოახდინოს.
ქიტოზანი (მოლეკულური წონა 80 kDa) და ამარანტი შეძენილი იქნა Merck-ისგან, ინდოეთი. ჰიდროქსიპროპილმეთილცელულოზა 50 Cp, პოლიეთილენგლიკოლი 400 და მეთილცელულოზა შეძენილი იქნა Loba Chemie Pvt. LLC-ისგან, მუმბაი. პოლივინილის სპირტი (მოლეკულური წონა 125 kDa) (87-90%-ით ჰიდროლიზებული) შეძენილი იქნა National Chemicals-ისგან, გუჯარათი. პოლივინილპიროლიდინი K30 შეძენილი იქნა Molychem-ისგან, მუმბაი, სტერილური ტამპონები შეძენილი იქნა Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd.-ისგან, ტამილნადუ, მატარებლით Milli Q წყლით (Direct-Q3 წყლის გამწმენდი სისტემა, Merck, ინდოეთი).
NFRCS შემუშავდა ლიოფილიზაციის მეთოდის გამოყენებით11,12. ყველა HFFC შემადგენლობა (ცხრილი 1) მომზადდა მექანიკური სარეველის გამოყენებით. მოამზადეთ ქიტოზანის 0.5%-იანი ხსნარი წყალში 1%-იანი ძმარმჟავას გამოყენებით, მექანიკურ სარეველზე 800 ბრ/წთ-ზე უწყვეტი მორევის გზით. ცხრილში 1 მითითებული დატვირთული პოლიმერის ზუსტი წონა დაემატა ქიტოზანის ხსნარს და ურიეს გამჭვირვალე პოლიმერული ხსნარის მიღებამდე. მიღებულ ნარევს დაემატა PVP K30 და PEG 400 ცხრილში 1 მითითებული რაოდენობით და მორევა გაგრძელდა გამჭვირვალე ბლანტი პოლიმერული ხსნარის მიღებამდე. მიღებული პოლიმერული ხსნარის აბაზანა 60 წუთის განმავლობაში დამუშავდა ულტრაბგერითი დამუშავებით, რათა პოლიმერული ნარევიდან მოცილებულიყო ჩარჩენილი ჰაერის ბუშტები. როგორც ნაჩვენებია დამატებით ნახაზ S1(b)-ზე, Ct თანაბრად გადანაწილდა 6-ჭაბურღილიანი ფირფიტის (ყალიბის) თითოეულ ჭაში, რომელიც დამატებული იყო 5 მლ HFFC-ით.
ექვსჭოიანი ფირფიტა ულტრაიისფერი დამუშავებით 60 წუთის განმავლობაში დამუშავდა, რათა მიღწეულიყო HFFC-ის ერთგვაროვანი დასველება და განაწილება Ct ქსელში. შემდეგ ექვსჭოიანი ფირფიტა გაყინეს -20°C-ზე 8-12 საათის განმავლობაში. გაყინული ფირფიტები ლიოფილიზებული იქნა 48 საათის განმავლობაში NFRCS-ის სხვადასხვა ფორმულირების მისაღებად. იგივე პროცედურა გამოიყენება სხვადასხვა ფორმისა და სტრუქტურის, მაგალითად, ტამპონების ან ცილინდრული ტამპონების, ან სხვადასხვა დანიშნულების სხვა ფორმის მისაღებად.
ზუსტად აწონილი ქიტოზანი (80 კდა) (3%) იხსნება 1%-იან ძმარმჟავაში მაგნიტური სარეველის გამოყენებით. მიღებულ ქიტოზანის ხსნარს ემატება 1%-იანი PEG 400 და ურიეთ 30 წუთის განმავლობაში. მიღებული ხსნარი გადაიტანება კვადრატულ ან მართკუთხა კონტეინერში და იყინება -80°C ტემპერატურაზე 12 საათის განმავლობაში. გაყინული ნიმუშები ლიოფილიზებულია 48 საათის განმავლობაში ფოროვანი Cs13-ის მისაღებად.
შემუშავებულ NFRCS-ზე ჩატარდა ექსპერიმენტები ფურიეს გარდაქმნის ინფრაწითელი სპექტროსკოპიის (FTIR) გამოყენებით (Shimadzu 8400 s FTIR, ტოკიო, იაპონია), რათა დადასტურებულიყო ქიტოზანის ქიმიური თავსებადობა სხვა პოლიმერებთან14,15. ყველა გამოცდილი ნიმუშის FTIR სპექტრები (სპექტრული დიაპაზონის სიგანე 400-დან 4000 სმ-1-მდე) მიღებული იქნა 32 სკანირების შესრულებით.
ყველა ფორმულირებისთვის სისხლში შეწოვის სიჩქარე (BAR) შეფასდა ჩენის და სხვების მიერ აღწერილი მეთოდის გამოყენებით 16 მცირედი ცვლილებებით. ყველა შემადგენლობის შემუშავებული NFRK-ები გაშრეს ვაკუუმურ ღუმელში 105°C ტემპერატურაზე მთელი ღამით ნარჩენი გამხსნელის მოსაშორებლად. 30 მგ NFRCS (ნიმუშის საწყისი წონა – W0) და 30 მგ Ct (დადებითი კონტროლი) მოათავსეს ცალკეულ ჭურჭელში, რომლებიც შეიცავდა 3.8%-იანი ნატრიუმის ციტრატის წინასწარ ნარევს. წინასწარ განსაზღვრული დროის ინტერვალებით, ანუ 5, 10, 20, 30, 40 და 60 წამის განმავლობაში, NFRCS-ები ამოიღეს და მათი ზედაპირები გაიწმინდა შეუწოვი სისხლისგან, ნიმუშების Ct-ზე 30 წამის განმავლობაში მოთავსებით. თითოეულ დროის წერტილში გათვალისწინებული იყო NFRCS 16-ის მიერ შეწოვილი სისხლის საბოლოო წონა (W1). გამოთვალეთ BAR პროცენტი შემდეგი ფორმულის გამოყენებით:
სისხლის შედედების დრო (BCT) განისაზღვრა ვანგის და სხვების მიერ მოხსენებული მონაცემების მიხედვით. 17. NFRCS-ის თანაობისას მთლიანი სისხლის (ვირთხის სისხლი წინასწარ შერეული 3.8%-იანი ნატრიუმის ციტრატით) შედედებისთვის საჭირო დრო გამოითვალა, როგორც სატესტო ნიმუშის BCT. NFRCS-ის სხვადასხვა კომპონენტი (30 მგ) მოათავსეს 10 მლ ხრახნიან თავსახურიან ფლაკონებში და ინკუბაცია მოახდინეს 37°C ტემპერატურაზე. ფლაკონს დაემატა სისხლი (0.5 მლ) და სისხლის შედედების გასააქტიურებლად დაემატა 0.3 მლ 0.2 M CaCl2. დაბოლოს, ფლაკონი ყოველ 15 წამში (180°-მდე) გადააბრუნეთ მყარი შედედების წარმოქმნამდე. ნიმუშის BCT ფასდება ფლაკონების გადაბრუნების რაოდენობით17,18. BCT-ის საფუძველზე, შემდგომი დახასიათების კვლევებისთვის შეირჩა NFRCS Cm, Ch და Cp-დან ორი ოპტიმალური შემადგენლობა.
Ch NFRCS-ის და Cp NFRCS-ის შემადგენლობის BCT განისაზღვრა ლი და სხვ. 19-ის მიერ აღწერილი მეთოდის გამოყენებით. 15 x 15 მმ2 Ch NFRCS, Cp NFRCS და Cs (დადებითი კონტროლი) მოათავსეთ ცალკეულ პეტრის ჭურჭელში (37°C). სისხლის შედედების პროცესის დასაწყებად 3.8%-იანი ნატრიუმის ციტრატის შემცველი სისხლი შეერია 0.2 M CaCl2-ს 10:1 მოცულობითი თანაფარდობით. ნიმუშის ზედაპირზე დაიტანეს 20 მლ 0.2 M CaCl2 ვირთხის სისხლის ნარევი და მოათავსეს ცარიელ პეტრის ჭურჭელში. საკონტროლო საშუალება იყო სისხლი, რომელიც ჩაასხეს ცარიელ პეტრის ჭურჭელში Ct-ის გარეშე. 0, 3 და 5 წუთის ფიქსირებული ინტერვალებით, შედედების შესაჩერებლად, ჭურჭლის შემცველ ნიმუშში დაამატეთ 10 მლ დეიონიზებული (DI) წყალი შედედების დარღვევის გარეშე. არაკოაგულირებული ერითროციტები (ერითროციტები) განიცდიან ჰემოლიზს დეიონიზებული წყლის თანაობისას და გამოყოფენ ჰემოგლობინს. სხვადასხვა დროის წერტილებში ჰემოგლობინი (HA(t)) გაიზომა 540 ნმ-ზე (λmax ჰემოგლობინი) UV-Vis სპექტროფოტომეტრის გამოყენებით. 10 მლ დეიონიზებულ წყალში 20 µლ სისხლის 0 წთ-ში ჰემოგლობინის (AH(0)) აბსოლუტური შთანთქმა აღებული იქნა როგორც საცნობარო სტანდარტი. შედედებული სისხლის ფარდობითი ჰემოგლობინის შთანთქმა (RHA) გამოითვალა HA(t)/HA(0) თანაფარდობიდან სისხლის ერთი და იგივე პარტიის გამოყენებით.
ტექსტურის ანალიზატორის (Texture Pro CT V1.3 Build 15, ბრუკფილდი, აშშ) გამოყენებით განისაზღვრა NFRK-ის დაზიანებულ ქსოვილზე ადჰეზიური თვისებები. ღორის კანის შიდა მხარეს (ცხიმის ფენის გარეშე) დააწექით ღია ძირიანი ცილინდრული ჭურჭელი. ნიმუშები (Ch NFRCS და Cp NFRCS) კანულის საშუალებით მოთავსდა ცილინდრულ ყალიბებში ღორის კანზე ადჰეზიის შესაქმნელად. ოთახის ტემპერატურაზე (RT) (25°C) 3-წუთიანი ინკუბაციის შემდეგ, NFRCS-ის ადჰეზიური სიმტკიცე დაფიქსირდა 0.5 მმ/წმ მუდმივი სიჩქარით.
ქირურგიული სილანტების მთავარი მახასიათებელია სისხლის შედედების გაზრდა და სისხლის დაკარგვის შემცირება. NFRCS-ში უდანაკარგო კოაგულაცია შეფასდა ადრე გამოქვეყნებული მეთოდის გამოყენებით მცირედი მოდიფიკაციებით 19. დაამზადეთ მიკროცენტრიფუგის მილი (2 მლ) (შიდა დიამეტრი 10 მმ) ცენტრიფუგის მილის ერთ მხარეს 8 × 5 მმ2 ნახვრეტით (რაც წარმოადგენს ღია ჭრილობას). NFRCS გამოიყენება ღიობის დასახურად, ხოლო ლენტი გამოიყენება გარეთა კიდეების დასალუქად. მიკროცენტრიფუგის მილში, რომელიც შეიცავს 3.8%-იან ნატრიუმის ციტრატის წინასწარ ნარევს, დაამატეთ 20 მკლ 0.2 M CaCl2. 10 წუთის შემდეგ, მიკროცენტრიფუგის მილები ამოიღეს ჭურჭლიდან და განისაზღვრა ჭურჭლის მასის ზრდა NFRK-დან სისხლის გადინების გამო (n = 3). სისხლის დანაკარგი Ch NFRCS და Cp NFRCS შედარებული იქნა Cs-თან.
NFRCS-ის სველი მთლიანობა განისაზღვრა მიშრას და ჩაუდჰარის21 მიერ აღწერილი მეთოდის საფუძველზე მცირედი ცვლილებებით. მოათავსეთ NFRCS 100 მლ ერლენმაიერის კოლბაში 50 მლ წყალთან ერთად და ურიეთ 60 წამის განმავლობაში თავსახურის წარმოქმნის გარეშე. ვიზუალური შემოწმება და ნიმუშების პრიორიტეტიზაცია ფიზიკური მთლიანობის მიხედვით აღების საფუძველზე.
HFFC-ის Ct-სთან შეკავშირების სიძლიერე შესწავლილი იქნა ადრე გამოქვეყნებული მეთოდების გამოყენებით მცირედი მოდიფიკაციებით. ზედაპირის საფარის მთლიანობა შეფასდა NFRK-ის აკუსტიკური ტალღების (გარე სტიმულის) ზემოქმედებით milliQ წყლის (Ct) თანაობისას. შემუშავებული NFRCS Ch NFRCS და Cp NFRCS მოათავსეს წყლით სავსე ჭიქაში და ჩაუტარდათ ულტრაბგერითი დამუშავება შესაბამისად 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 და 30 წუთის განმავლობაში. გაშრობის შემდეგ, NFRCS-ის საწყის და საბოლოო წონას შორის პროცენტული სხვაობა გამოყენებული იქნა მასალის დაკარგვის პროცენტული მაჩვენებლის (HFFC) გამოსათვლელად. In vitro BCT-მ დამატებით დაადასტურა შეკავშირების სიძლიერე ან ზედაპირული მასალების დაკარგვა. HFFC-ის Ct-სთან შეკავშირების ეფექტურობა უზრუნველყოფს სისხლის კოაგულაციას და ელასტიურ საფარს Ct22-ის ზედაპირზე.
შემუშავებული NFRCS-ის ერთგვაროვნება განისაზღვრა NFRCS-ის შემთხვევით შერჩეული ზოგადი ადგილებიდან აღებული ნიმუშების (30 მგ) BCT-ით. NFRCS-ის შესაბამისობის დასადგენად მიჰყევით ზემოთ ნახსენებ BCT პროცედურას. ხუთივე ნიმუშს შორის სიახლოვე უზრუნველყოფს ზედაპირის ერთგვაროვან დაფარვას და HFFC-ის დეპონირებას Ct ბადეში.
სისხლის ნომინალური კონტაქტის არე (NBCA) განისაზღვრა ადრე აღწერილი მეთოდით, გარკვეული ცვლილებებით. სისხლის კოაგულაციისთვის საჭიროა Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS და Cs ზედაპირებს შორის 20 µლ სისხლის მოთავსება. 1 საათის შემდეგ, სტენტის ორი ნაწილი გამოეყო ერთმანეთს და ხელით გაიზომა შედედების ფართობი. სამი გამეორების საშუალო მნიშვნელობად ჩაითვალა NBCA NFRCS19.
NFRCS-ის ეფექტურობის შესაფასებლად, რომელიც მიმართულია წყლის გარე გარემოდან ან კოაგულაციის დაწყებაზე პასუხისმგებელი დაზიანების ადგილიდან შთანთქმისკენ, გამოყენებული იქნა დინამიური ორთქლის სორბციის (DVS) ანალიზი. DVS აფასებს ან აღრიცხავს ნიმუშში ორთქლის შთანთქმას და დაკარგვას გრავიმეტრიულად, ულტრამგრძნობიარე ბალანსის გამოყენებით, ±0.1 მკგ მასის გარჩევადობით. ნაწილობრივი ორთქლის წნევა (ფარდობითი ტენიანობა) გენერირდება ნიმუშის გარშემო ელექტრონული მასის ნაკადის კონტროლერის მიერ გაჯერებული და მშრალი მატარებელი აირების შერევით. ევროპული ფარმაკოპეის სახელმძღვანელო პრინციპების თანახმად, ნიმუშების მიერ ტენიანობის შთანთქმის პროცენტული მაჩვენებლის მიხედვით, ნიმუშები დაიყო 4 კატეგორიად (0–0.012% w/w− არაჰიგროსკოპიული, 0.2–2% w/w ოდნავ ჰიგროსკოპიული, 2–15% ზომიერად ჰიგროსკოპიული და > 15% ძალიან ჰიგროსკოპიული)23. ევროპული ფარმაკოპეის სახელმძღვანელო პრინციპების თანახმად, ნიმუშების მიერ ტენიანობის შთანთქმის პროცენტული მაჩვენებლის მიხედვით, ნიმუშები დაიყო 4 კატეგორიად (0–0.012% w/w− არაჰიგროსკოპიული, 0.2–2% w/w ოდნავ ჰიგროსკოპიული, 2–15% ზომიერად ჰიგროსკოპიული და > 15% ძალიან ჰიგროსკოპიული)23.ევროპული ფარმაკოპეის რეკომენდაციების შესაბამისად, ნიმუშების მიერ ტენიანობის შთანთქმის პროცენტული მაჩვენებლის მიხედვით, ნიმუშები დაიყო 4 კატეგორიად (0–0.012% w/w – არაჰიგროსკოპიული, 0.2–2% w/w ოდნავ ჰიგროსკოპიული, 2–15%).% ზომიერნო გიგროსკოპიური и > 15% очень гигроскопичен)23. % ზომიერად ჰიგროსკოპიული და > 15% ძალიან ჰიგროსკოპიული)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0.012% w/w/w.非吸湿性、0.2-2% w/w 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23.根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 分为 分为 000% 0 0% 0. W/w- 吸湿 性 、 、 、 、 0.2-2% w/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15% 非常吸湿3）ევროპული ფარმაკოპეის რეკომენდაციების შესაბამისად, ნიმუშები იყოფა 4 კლასად ნიმუშის მიერ შთანთქმული ტენიანობის პროცენტული მაჩვენებლის მიხედვით (0-0.012% წონის მიხედვით - არაჰიგროსკოპიული, 0.2-2% წონის მიხედვით ოდნავ ჰიგროსკოპიული, 2-15% წონის მიხედვით).% ზომიერნო გიგროსკოპიური, > 15 % очень гигроскопичен) 23. ზომიერად ჰიგროსკოპიული %, > 15% ძალიან ჰიგროსკოპიული) 23.NFCS X NFCS-ის და TsN NFCS-ის ჰიგროსკოპიული ეფექტურობა განისაზღვრა ანალიზატორ DVS TA TGA Q5000 SA-ზე. ამ პროცესის დროს მიღებული იქნა მუშაობის დრო, ფარდობითი ტენიანობა (RH) და ნიმუშის წონა რეალურ დროში 25°C24 ტემპერატურაზე. ტენიანობა გამოითვლება NFRCS მასის ზუსტი ანალიზით შემდეგი განტოლების გამოყენებით:
MC არის NFRCS ტენიანობა. m1 – არასტეროიდული ანთების საწინააღმდეგო საშუალებების მშრალი წონა. m2 არის NFRCS მასა რეალურ დროში მოცემული ტენიანობის პირობებში.
მთლიანი ზედაპირის ფართობი შეფასდა თხევადი აზოტით აზოტის ადსორბციის ექსპერიმენტის გამოყენებით, ნიმუშების 25°C ტემპერატურაზე 10 საათის განმავლობაში დაცლის შემდეგ (< 7 × 10–3 ტორი). მთლიანი ზედაპირის ფართობი შეფასდა თხევადი აზოტით აზოტის ადსორბციის ექსპერიმენტის გამოყენებით, ნიმუშების 25°C ტემპერატურაზე 10 საათის განმავლობაში დაცლის შემდეგ (< 7 × 10–3 ტორი). ცალსახა ფასეულობების შეფასების ეფექტურობა ზედმიწევნით ზემოქმედების ქვეშ მყოფი აზოტომის შემდეგ 25 °С 10 ჩ-ზე (< 7 × 10–3 ტორ). მთლიანი ზედაპირის ფართობი შეფასდა თხევადი აზოტით აზოტის ადსორბციის ექსპერიმენტის გამოყენებით, მას შემდეგ, რაც ნიმუშები დაიცალა 25°C ტემპერატურაზე 10 საათის განმავლობაში (< 7 × 10–3 ტორი).在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实靌估计总表+25°C მაღალი სიზუსტით შეფასების შეფასება 25°C ტემპერატურაზე 10 საათის განმავლობაში (< 7 × 10-3 ცელსიუსით). მთლიანი ზედაპირის ფართობი შეფასდა თხევადი აზოტით აზოტის ადსორბციის ექსპერიმენტების გამოყენებით, მას შემდეგ, რაც ნიმუშები 10 საათის განმავლობაში დაიცალა 25°C ტემპერატურაზე (< 7 x 10-3 ტორი).მთლიანი ზედაპირის ფართობი, ფორების მოცულობა და NFRCS ფორების ზომა განისაზღვრა ავსტრიის NOVA 1000e-ს Quantachrome-ის გამოყენებით, RS 232 პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით.
მთლიანი სისხლიდან მოამზადეთ 5%-იანი ერითროციტები (ფიზიოლოგიური ხსნარი, როგორც გამხსნელი). შემდეგ გადაიტანეთ HFFC-ის ალიკვოტი (0.25 მლ) 96-ჭეჭიან ფირფიტაზე და 5%-იანი ერითროციტების მასა (0.1 მლ). ნარევი ინკუბირებულია 37°C-ზე 40 წუთის განმავლობაში. სისხლის წითელი უჯრედებისა და შრატის ნარევი განხილული იყო დადებით კონტროლად, ხოლო ფიზიოლოგიური ხსნარისა და სისხლის წითელი უჯრედების ნარევი - უარყოფით კონტროლად. ჰემაგლუტინაცია განისაზღვრა სტაიცკის შკალის მიხედვით. შემოთავაზებული შკალებია: + + + + მკვრივი მარცვლოვანი აგრეგატები; + + + გლუვი ქვედა ბალიშები მოხრილი კიდეებით; + + გლუვი ქვედა ბალიშები დახეული კიდეებით; + ვიწრო წითელი რგოლები გლუვი ბალიშების კიდეების გარშემო; – (უარყოფითი) ცალკეული წითელი ღილაკი 12 ქვედა ჭის ცენტრში.
NFRCS-ის ჰემოთავსებადობა შესწავლილი იქნა სტანდარტიზაციის საერთაშორისო ორგანიზაციის (ISO) მეთოდის მიხედვით (ISO10993-4, 1999)26,27. სინგჰის და სხვების მიერ აღწერილი გრავიმეტრიული მეთოდი. მცირე მოდიფიკაციები განხორციელდა თრომბის წარმოქმნის შესაფასებლად NFRCS-ის თანაარსებობისას ან მის ზედაპირზე. 500 მგ Cs, Ch NFRCS და Cp NFRCS ინკუბირებული იქნა ფოსფატ-ბუფერულ ფიზიოლოგიურ ხსნარში (PBS) 24 საათის განმავლობაში 37°C ტემპერატურაზე. 24 საათის შემდეგ, PBS ამოიღეს და NFRCS დამუშავდა 2 მლ სისხლით, რომელიც შეიცავდა 3.8% ნატრიუმის ციტრატს. NFRCS-ის ზედაპირზე ინკუბირებულ ნიმუშებს დაუმატეთ 0.04 მლ 0.1 M CaCl2. 45 წუთის შემდეგ, კოაგულაციის შესაჩერებლად დაემატა 5 მლ გამოხდილი წყალი. NFRK-ის ზედაპირზე კოაგულირებული სისხლი დამუშავდა 36-38%-იანი ფორმალდეჰიდის ხსნარით. ფორმალდეჰიდით დაფიქსირებული კოლტები გაშრეს და აიწონეს. თრომბოზის პროცენტული მაჩვენებელი შეფასდა სისხლის გარეშე ჭიქისა და ნიმუშის (უარყოფითი კონტროლი) და სისხლიანი ჭიქის (დადებითი კონტროლი) წონის გამოთვლით.
საწყისი დადასტურების მიზნით, ნიმუშები ვიზუალიზებული იქნა ოპტიკური მიკროსკოპით, რათა გაგებულიყო HFFC ზედაპირის საფარის, Ct ურთიერთდაკავშირებული კავშირისა და Ct ქსელის ფორების წარმოქმნის უნარი. NFRCS-დან Ch და Cp თხელი მონაკვეთები მოიჭრა სკალპელის პირით. მიღებული მონაკვეთი მოათავსეს მინის სლაიდზე, დაიფარეს საფარით და კიდეები დააფიქსირეს წებოთი. მომზადებული სლაიდები დაათვალიერეს ოპტიკური მიკროსკოპით და გადაიღეს ფოტოები სხვადასხვა გადიდებით.
Ct ქსელებში პოლიმერის დეპონირება ვიზუალიზებული იქნა ფლუორესცენტული მიკროსკოპიის გამოყენებით, რაისის და სხვების მიერ აღწერილი მეთოდის საფუძველზე.29. ფორმულირებისთვის გამოყენებული HFFC შემადგენლობა შერეული იყო ფლუორესცენტურ საღებავთან (ამარანტი) და NFRCS (Ch და Cp) მომზადდა ადრე ნახსენები მეთოდის მიხედვით. ფორმულირებისთვის გამოყენებული HFFC შემადგენლობა შერეული იყო ფლუორესცენტურ საღებავთან (ამარანტი) და NFRCS (Ch და Cp) მომზადდა ადრე ნახსენები მეთოდის მიხედვით.ფორმულირებისთვის გამოყენებული HFFC შემადგენლობა შეერია ფლუორესცენტურ საღებავს (ამარანტი) და NFRCS (Ch და Cp) მიღებულ იქნა ადრე ნახსენები მეთოდის მიხედვით.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的戶方Cp).将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的戶方Cp).როგორც ადრე აღვნიშნეთ, ფორმულაში გამოყენებული HFFC შემადგენლობა შეერია ფლუორესცენტურ საღებავს (ამარანტი) და მიიღო NFRCS (Ch და Cp).მიღებული ნიმუშებიდან NFRK-ის თხელი მონაკვეთები ამოჭრეს, შუშის სლაიდებზე მოათავსეს და საფარით დაიფარეს. მომზადებულ სლაიდებს ფლუორესცენტული მიკროსკოპით მწვანე ფილტრის (310-380 ნმ) გამოყენებით დააკვირდით. სურათები გადაღებულია 4-ჯერადი გადიდებით, რათა გაგებულიყოთ Ct ურთიერთობები და Ct ქსელში პოლიმერის ჭარბი დეპონირება.
NFRCS Ch-ისა და Cp-ის ზედაპირის ტოპოგრაფია განისაზღვრა ატომური ძალის მიკროსკოპის (AFM) გამოყენებით ულტრამკვეთრი TESP კონსოლით შეხების რეჟიმში: 42 ნ/მ, 320 კჰც, ROC 2-5 ნმ, ბრუკერი, ტაივანი. ზედაპირის უხეშობა განისაზღვრა საშუალო კვადრატული ფესვის (RMS) მეთოდით პროგრამული უზრუნველყოფის (Scanning Probe Image Processor) გამოყენებით. ზედაპირის ერთგვაროვნების შესამოწმებლად 3D სურათებზე იქნა რენდერირებული NFRCS-ის სხვადასხვა მდებარეობა. მოცემული ფართობის ქულის სტანდარტული გადახრა განისაზღვრება, როგორც ზედაპირის უხეშობა. RMS განტოლება გამოყენებული იქნა NFRCS31-ის ზედაპირის უხეშობის რაოდენობრივი განსაზღვრისთვის.
FESEM-ზე დაფუძნებული კვლევები ჩატარდა FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokyo, Ch NFRCS-ის და Cp NFRCS-ის ზედაპირული მორფოლოგიის გასაგებად, რომელმაც აჩვენა უკეთესი BCT, ვიდრე Cm NFRCS-მა. FESEM კვლევა ჩატარდა ჟაოს და სხვების მიერ აღწერილი მეთოდის მიხედვით. 32 მცირედი ცვლილებებით. NFRCS-ის 20-დან 30 მგ-მდე Ch NFRCS და Cp NFRCS წინასწარ იყო შერეული 20 მკლ 3.8%-იან ნატრიუმის ციტრატთან, რომელიც წინასწარ იყო შერეული ვირთხის სისხლთან. კოაგულაციის დასაწყებად სისხლით დამუშავებულ ნიმუშებს დაემატა 20 მკლ 0.2 M CaCl2 და ნიმუშები ინკუბირებული იქნა ოთახის ტემპერატურაზე 10 წუთის განმავლობაში. გარდა ამისა, ზედმეტი ერითროციტები ამოღებულ იქნა NFRCS-ის ზედაპირიდან ფიზიოლოგიური ხსნარით გამორეცხვით.
შემდგომი ნიმუშები დამუშავდა 0.1%-იანი გლუტარალდეჰიდით და შემდეგ გაშრა ცხელი ჰაერის ღუმელში 37°C ტემპერატურაზე ტენის მოსაშორებლად. გამხმარი ნიმუშები დაიფარა და გაანალიზდა 32. ანალიზის დროს მიღებული სხვა სურათები იყო ცალკეული ბამბის ბოჭკოების ზედაპირზე შედედების წარმოქმნა, პოლიმერის დეპონირება Ct-ს შორის, ერითროციტების მორფოლოგია (ფორმა), შედედების მთლიანობა და ერითროციტების მორფოლოგია NFRCS-ის თანაარსებობისას. დაუმუშავებელი NFRCS არეები და Ch და Cp დამუშავებული NFRCS არეები, რომლებიც ინკუბირებული იყო სისხლთან, დასკანირებული იქნა ელემენტარული იონების (ნატრიუმი, კალიუმი, აზოტი, კალციუმი, მაგნიუმი, თუთია, სპილენძი და სელენი)33 არსებობაზე. შეადარეთ ელემენტარული იონების პროცენტული მაჩვენებლები დამუშავებულ და დაუმუშავებელ ნიმუშებს შორის, რათა გაიგოთ ელემენტარული იონების დაგროვება შედედების წარმოქმნის დროს და შედედების ერთგვაროვნება.
Cp HFFC ზედაპირული საფარის სისქე Ct ზედაპირზე განისაზღვრა FESEM-ის გამოყენებით. Cp NFRCS-ის განივი კვეთები ამოჭრეს ჩარჩოდან და დაიფარა გაფრქვევით. მიღებული გაფრქვევით საფარის ნიმუშები დაკვირვებულ იქნა FESEM-ის გამოყენებით და გაიზომა ზედაპირული საფარის სისქე 34, 35, 36.
რენტგენის მიკროკომპიუტერული ტომოგრაფია უზრუნველყოფს მაღალი გარჩევადობის 3D არადესტრუქციულ გამოსახულებას და საშუალებას გაძლევთ შეისწავლოთ NFRK-ის შიდა სტრუქტურული განლაგება. მიკროკომპიუტერული ტომოგრაფია იყენებს ნიმუშში გამავალ რენტგენის სხივს ნიმუშში რენტგენის სხივების ადგილობრივი წრფივი შესუსტების კოეფიციენტის ჩასაწერად, რაც ხელს უწყობს მორფოლოგიური ინფორმაციის მიღებას. Cp NFRCS-სა და სისხლით დამუშავებულ Cp NFRCS-ში Ct-ის შიდა მდებარეობა შემოწმდა მიკროკომპიუტერული ტომოგრაფიით, რათა გაგებულიყო შეწოვის ეფექტურობა და სისხლის შედედება NFRCS37,38,39-ის თანაარსებობისას. სისხლით დამუშავებული და დაუმუშავებელი Cp NFRCS ნიმუშების 3D სტრუქტურები რეკონსტრუირებული იქნა მიკროკომპიუტერული ტომოგრაფიის გამოყენებით (V|tome|x S240, ფენიქსი, გერმანია). VG STUDIO-MAX პროგრამული უზრუნველყოფის 2.2 ვერსიის გამოყენებით, NFRCS-ისთვის 3D სურათების შესაქმნელად გადაღებულია რამდენიმე რენტგენის გამოსახულება სხვადასხვა კუთხიდან (იდეალურად 360° დაფარვით). შეგროვებული პროექციის მონაცემები რეკონსტრუირებული იქნა 3D მოცულობით გამოსახულებებად შესაბამისი მარტივი 3D ScanIP Academic პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით.
გარდა ამისა, კოლტის განაწილების გასაგებად, სისხლის შედედების დასაწყებად NFRCS-ს დაემატა წინასწარ შერეული ციტრატირებული სისხლი 20 მკლ და 0.2 M CaCl2-ის 20 მკლ. მომზადებული ნიმუშები გასამყარებლად დარჩა. NFRK ზედაპირი დამუშავდა 0.5%-იანი გლუტარალდეჰიდით და გაშრა ცხელი ჰაერის ღუმელში 30–40°C ტემპერატურაზე 30 წუთის განმავლობაში. NFRCS-ზე წარმოქმნილი სისხლის კოლტი დასკანირებული, რეკონსტრუირებული და ვიზუალიზებული იქნა სისხლის კოლტის 3D გამოსახულება.
ანტიბაქტერიული ანალიზები ჩატარდა Cp NFRCS-ზე (Ch NFRCS-თან შედარებით საუკეთესოა) ადრე აღწერილი მეთოდის გამოყენებით მცირედი ცვლილებებით. Cp NFRCS-ის და Cp HFFC-ის ანტიბაქტერიული აქტივობა განისაზღვრა სამი განსხვავებული სატესტო მიკროორგანიზმის [S.aureus (გრამდადებითი ბაქტერია), E.coli (გრამუარყოფითი ბაქტერია) და თეთრი Candida (C.albicans)] გამოყენებით, რომლებიც იზრდება აგარზე პეტრის ფინჯნებში ინკუბატორში. აგარის გარემოში თანაბრად ჩაასხით 50 მლ განზავებული ბაქტერიული კულტურის სუსპენზია 105-106 CFU ml-1 კონცენტრაციით. ჩაასხით გარემო პეტრის ფინჯნში და მიეცით მას გამყარების საშუალება. აგარის ფირფიტის ზედაპირზე გაკეთდა ღარები HFFC-ით შესავსებად (3 ღარი HFFC-სთვის და 1 უარყოფითი კონტროლისთვის). 3 ღარს დაუმატეთ 200 µლ HFFC და მე-4 ღარს 200 µლ pH 7.4 PBS. პეტრის თეფშის მეორე მხარეს, გამყარებულ აგარზე მოათავსეთ 12 მმ Cp NFRCS დისკი და დაასველეთ PBS-ით (pH 7.4). ციპროფლოქსაცინის, ამპიცილინის და ფლუკონაზოლის ტაბლეტები ითვლება Staphylococcus aureus-ის, Escherichia coli-ს და Candida albicans-ის საცნობარო სტანდარტად. ხელით გაზომეთ ინჰიბირების ზონა და გადაიღეთ ინჰიბირების ზონის ციფრული გამოსახულება.
ინსტიტუციური ეთიკური დამტკიცების შემდეგ, კვლევა ჩატარდა კასტურბას სამედიცინო განათლებისა და კვლევის კოლეჯში, მანიპალში, კარნატაკას შტატში, სამხრეთ ინდოეთში. in vitro TEG ექსპერიმენტული პროტოკოლი გადახედილი და დამტკიცებულია კასტურბას სამედიცინო კოლეჯის ინსტიტუციური ეთიკის კომიტეტის მიერ, მანიპალში, კარნატაკას შტატში (IEC: 674/2020). სუბიექტები შეირჩნენ საავადმყოფოს სისხლის ბანკიდან მოხალისე სისხლის დონორებისგან (18-დან 55 წლამდე ასაკის). გარდა ამისა, მოხალისეებისგან მიღებული იქნა ინფორმირებული თანხმობის ფორმა სისხლის ნიმუშების შეგროვებისთვის. ნატიური TEG (N-TEG) ​​​​გამოიყენეს Cp HFFC ფორმულირების ნატრიუმის ციტრატთან წინასწარ შერეულ მთლიან სისხლზე ზემოქმედების შესასწავლად. N-TEG ფართოდ არის აღიარებული მისი როლით რეანიმაციაში, რაც პრობლემებს უქმნის კლინიცისტებს შედეგების კლინიკურად მნიშვნელოვანი დაგვიანების პოტენციალის გამო (რუტინული კოაგულაციის ტესტები). N-TEG ანალიზი ჩატარდა მთლიან სისხლზე. ყველა მონაწილისგან მიღებული იქნა ინფორმირებული თანხმობა და დეტალური სამედიცინო ისტორია. კვლევაში არ შედიოდნენ მონაწილეები ჰემოსტატიკური ან თრომბოზული გართულებებით, როგორიცაა ორსულობა/მშობიარობის შემდგომი პერიოდი ან ღვიძლის დაავადება. კვლევიდან ასევე გამოირიცხნენ სუბიექტები, რომლებიც იღებდნენ კოაგულაციის კასკადზე მოქმედ მედიკამენტებს. ყველა მონაწილეს ჩაუტარდა ძირითადი ლაბორატორიული ტესტები (ჰემოგლობინი, პროთრომბინის დრო, გააქტიურებული თრომბოპლასტინი და თრომბოციტების რაოდენობა) სტანდარტული პროცედურების შესაბამისად. N-TEG განსაზღვრავს სისხლის შედედების ვისკოელასტიურობას, შედედების საწყის სტრუქტურას, ნაწილაკების ურთიერთქმედებას, შედედების გაძლიერებას და შედედების ლიზისს. N-TEG ანალიზი იძლევა გრაფიკულ და რიცხობრივ მონაცემებს რამდენიმე უჯრედული ელემენტისა და პლაზმის კოლექტიური ეფექტების შესახებ. N-TEG ანალიზი ჩატარდა Cp HFFC-ის ორ სხვადასხვა მოცულობაზე (10 µl და 50 µl). შედეგად, 1 მლ სისხლი ლიმონმჟავით დაემატა 10 μl Cp HFFC-ს. 1 მლ (Cp HFFC + ციტრატირებული სისხლი), 340 µl შერეული სისხლი დაუმატეთ 20 µl 0.2 M CaCl2 შემცველ TEG ჭურჭელს. ამის შემდეგ, TEG თეფშები ჩაიტვირთა TEG® 5000, US-ში, რათა გაზომილიყო R, K, ალფა კუთხე, MA, G, CI, TPI, EPL, LY სისხლის ნიმუშების 30% Cp HFFC41-ის თანაობისას.
In vivo კვლევის პროტოკოლი გადახედული და დამტკიცებული იქნა ცხოველთა ინსტიტუციური ეთიკის კომიტეტის (IAEC) მიერ, კასტურბას სამედიცინო სკოლა, მანიპალის უმაღლესი განათლების ინსტიტუტი, მანიპალი (IAEC/KMC/69/2020). ყველა ცხოველზე ჩატარებული ექსპერიმენტი ჩატარდა ცხოველებზე ექსპერიმენტების კონტროლისა და ზედამხედველობის კომიტეტის (CPCSEA) რეკომენდაციების შესაბამისად. ყველა in vivo NFRCS კვლევა (2 × 2 სმ2) ჩატარდა მდედრ ვისტარის ვირთხებზე (წონით 200-დან 250 გ-მდე). ყველა ცხოველი აკლიმატიზებული იყო 24-26°C ტემპერატურაზე, ცხოველებს ჰქონდათ სტანდარტული საკვებისა და წყლის თავისუფალი წვდომა. ყველა ცხოველი შემთხვევითობის პრინციპით დაიყო სხვადასხვა ჯგუფად, თითოეული ჯგუფი სამი ცხოველისგან შედგებოდა. ყველა კვლევა ჩატარდა ცხოველებზე ჩატარებული კვლევების ანგარიშის 43 შესაბამისად. კვლევის დაწყებამდე ცხოველებს ანესთეზია ჩაუტარდათ ინტრაპერიტონეალურად (ip) 20-50 მგ კეტამინის (სხეულის წონის 1 კგ-ზე) და 2-10 მგ ქსილაზინის (სხეულის წონის 1 კგ-ზე) ნარევის შეყვანით. კვლევის შემდეგ, სისხლდენის მოცულობა გამოითვალა ნიმუშების საწყის და საბოლოო წონას შორის სხვაობის შეფასებით, სამი ტესტიდან მიღებული საშუალო მნიშვნელობა აღებული იქნა ნიმუშის სისხლდენის მოცულობად.
ვირთხის კუდის ამპუტაციის მოდელი დანერგილი იქნა NFRCS-ის პოტენციალის გასაგებად ტრავმის, საბრძოლო მოქმედებების ან საგზაო შემთხვევების დროს სისხლდენის მოდულირების კუთხით (ტრავმის მოდელი). ნორმალური სისხლდენის უზრუნველსაყოფად, კუდის 50% სკალპელის პირით მოაჭერით და 15 წამის განმავლობაში ჰაერში მოათავსეთ. გარდა ამისა, სატესტო ნიმუშები ვირთხის კუდზე მოათავსეს ზეწოლის გამოყენებით (Ct, Cs, Ch NFRCS და Cp NFRCS). სატესტო ნიმუშებში დაფიქსირდა სისხლდენა და PCT (n = 3)17,45.
NFRCS წნევის კონტროლის ეფექტურობა საბრძოლო ბრძოლებში გამოკვლეული იქნა ზედაპირული ბარძაყის არტერიის მოდელზე. ბარძაყის არტერია გამოიკვეთა, პუნქცირებულია 24G ტროაკარით და 15 წამის განმავლობაში სისხლდენა ხდება. უკონტროლო სისხლდენის დაფიქსირების შემდეგ, სატესტო ნიმუში თავსდება პუნქციის ადგილას წნევის გამოყენებით. სატესტო ნიმუშის დატანისთანავე ფიქსირდება შედედების დრო და ჰემოსტაზური ეფექტურობა დაკვირვებულია შემდეგი 5 წუთის განმავლობაში. იგივე პროცედურა განმეორდა Cs-ით და Ct46-ით.
დაულინგმა და სხვებმა 47-მა შემოგვთავაზეს ღვიძლის დაზიანების მოდელი, რათა შეფასებულიყო ჰემოსტატიკური მასალების ჰემოსტატიკური პოტენციალი ინტრაოპერაციული სისხლდენის კონტექსტში. BCT ჩაიწერა Ct ნიმუშებისთვის (უარყოფითი კონტროლი), Cs ჩარჩოსთვის (დადებითი კონტროლი), Ch NFRCS ნიმუშებისთვის და Cp NFRCS ნიმუშებისთვის. ვირთხის სუპრაჰეპატური ღრუ ვენა გამოიკვეთა შუა ლაპაროტომიის ჩატარებით. ამის შემდეგ, მაკრატლით ამოჭრეს მარცხენა წილის დისტალური ნაწილი. ღვიძლში გააკეთეს ჭრილობა სკალპელის პირით და რამდენიმე წამის განმავლობაში მიეცით სისხლდენა. ზუსტად აწონილი Ch NFRCS და Cp NFRCS სატესტო ნიმუშები მოათავსეს დაზიანებულ ზედაპირზე დადებითი წნევის გარეშე და ჩაიწერა BCT. შემდეგ საკონტროლო ჯგუფმა (Ct) მოახდინა ზეწოლა, შემდეგ კი Cs 30 s47 დაზიანების დაზიანების გარეშე.
შემუშავებული პოლიმერზე დაფუძნებული NFRCS-ების ჭრილობის შეხორცების თვისებების შესაფასებლად, ჭრილობის შეხორცების in vivo ანალიზები ჩატარდა ამოკვეთილი ჭრილობის მოდელის გამოყენებით. ამოკვეთილი ჭრილობების მოდელები შეირჩა და ჩატარდა ადრე გამოქვეყნებული მეთოდების მიხედვით, მცირე მოდიფიკაციებით19,32,48. ყველა ცხოველს ჩაუტარდა ანესთეზია, როგორც ადრე იყო აღწერილი. ზურგის კანზე წრიული ღრმა ჭრილობის გასაკეთებლად გამოიყენეთ ბიოფსიის პუნჩი (12 მმ). მომზადებული ჭრილობის ადგილები დამუშავებული იყო Cs (დადებითი კონტროლი), Ct (იმის გათვალისწინებით, რომ ბამბის დისკები ხელს უშლის შეხორცებას), Ch NFRCS და Cp NFRCS (ექსპერიმენტული ჯგუფი) და უარყოფითი კონტროლით, ყოველგვარი მკურნალობის გარეშე. კვლევის თითოეულ დღეს, ყველა ვირთხაში გაიზომა ჭრილობის ფართობი. ციფრული კამერის გამოყენებით გადაიღეს ჭრილობის სურათი და დაიდეს ახალი სახვევი. ჭრილობის დახურვის პროცენტი გაიზომა შემდეგი ფორმულით:
კვლევის მე-12 დღეს ჭრილობის დახურვის პროცენტული მაჩვენებლის მიხედვით, საუკეთესო ჯგუფის ვირთხის კანი ამოკვეთეს ((Cp NFRCS) და საკონტროლო ჯგუფი) და შეისწავლეს H&E შეღებვით და მასონის ტრიქრომული შეღებვით. კვლევის მე-12 დღეს ჭრილობის დახურვის პროცენტული მაჩვენებლის მიხედვით, საუკეთესო ჯგუფის ვირთხის კანი ამოკვეთეს ((Cp NFRCS) და საკონტროლო ჯგუფი) და შეისწავლეს H&E შეღებვით და მასონის ტრიქრომული შეღებვით.კვლევის მე-12 დღეს ჭრილობის დახურვის პროცენტული მაჩვენებლის მიხედვით, საუკეთესო ჯგუფის ((Cp NFRCS) და საკონტროლო ჯგუფის) ვირთხების კანი ამოკვეთეს და გამოიკვლიეს ჰემატოქსილინ-ეოზინით და მასონის ტრიქრომით შეღებვით.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Masson三色染色研究。根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和眳组）საუკეთესო ჯგუფის ((Cp NFRCS) და საკონტროლო ჯგუფები) ვირთხებს ამოკვეთეს ჰემატოქსილინ-ეოზინის შეღებვისა და მასონის ტრიქრომული შეღებვისთვის, კვლევის მე-12 დღეს ჭრილობის დახურვის პროცენტული მაჩვენებლის მიხედვით.შეღებვის პროცედურა განხორციელდა ადრე აღწერილი მეთოდების მიხედვით49,50. მოკლედ, 10%-იან ფორმალინში ფიქსაციის შემდეგ, ნიმუშები გაუწყლოდა სხვადასხვა სპირტების სერიის გამოყენებით. მიკროტომის გამოყენებით მიიღე ამოკვეთილი ქსოვილის თხელი მონაკვეთები (5 µm სისქის). საკონტროლო უჯრედების თხელი სერიული მონაკვეთები და Cp NFRCS დამუშავებული იქნა ჰემატოქსილინით და ეოზინით ჰისტოპათოლოგიური ცვლილებების შესასწავლად. კოლაგენის ფიბრილების წარმოქმნის დასადგენად გამოყენებული იქნა მასონის ტრიქრომული შეღებვა. მიღებული შედეგები პათოლოგებმა ბრმად შეისწავლეს.
Cp NFRCS ნიმუშების სტაბილურობა შესწავლილი იქნა ოთახის ტემპერატურაზე (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) 12 თვის განმავლობაში51. Cp NFRCS (ზედაპირის ფერის შეცვლა და მიკრობული ზრდა) ვიზუალურად შემოწმდა და შემოწმდა ნაკეცისადმი მდგრადობასა და BCT-ზე, მასალებისა და მეთოდების განყოფილებაში აღწერილი ზემოთ აღწერილი მეთოდების შესაბამისად.
Cp NFRCS-ის მასშტაბირება და რეპროდუცირებადობა შემოწმდა 15×15 სმ2 ზომის Cp NFRCS-ის მომზადებით. გარდა ამისა, 30 მგ ნიმუშები (n = 5) ამოიღეს სხვადასხვა Cp NFRCS ფრაქციიდან და შესწავლილი ნიმუშების BCT შეფასდა მეთოდების განყოფილებაში ადრე აღწერილი მეთოდის მიხედვით.
ჩვენ ვცადეთ Cp NFRCS კომპოზიციების გამოყენებით სხვადასხვა ფორმისა და სტრუქტურის შემუშავება სხვადასხვა ბიოსამედიცინო გამოყენებისთვის. ასეთი ფორმები ან კონფიგურაციები მოიცავს კონუსურ ტამპონებს ცხვირიდან სისხლდენის, სტომატოლოგიური პროცედურების დროს და ცილინდრულ ტამპონებს ვაგინალური სისხლდენისთვის.
ყველა მონაცემთა ნაკრები გამოხატულია საშუალო ± სტანდარტული გადახრით და გაანალიზდა ANOVA-ს მეთოდით Prism 5.03-ის გამოყენებით (GraphPad, სან დიეგო, კალიფორნია, აშშ), რასაც მოჰყვა ბონფერონის მრავალჯერადი შედარების ტესტი (*p<0.05).
ადამიანებზე ჩატარებული კვლევების ყველა პროცედურა შეესაბამებოდა ინსტიტუტისა და ეროვნული კვლევითი საბჭოს სტანდარტებს, ასევე 1964 წლის ჰელსინკის დეკლარაციას და მის შემდგომ შესწორებებს, ან მსგავს ეთიკურ სტანდარტებს. ყველა მონაწილე ინფორმირებული იყო კვლევის თავისებურებებისა და მისი ნებაყოფლობითი ხასიათის შესახებ. მონაწილეთა მონაცემები შეგროვების შემდეგ კონფიდენციალური რჩება. in vitro TEG ექსპერიმენტული პროტოკოლი გადახედული და დამტკიცებულია კასტურბას სამედიცინო კოლეჯის, მანიპალის, კარნატაკას ინსტიტუციური ეთიკის კომიტეტის მიერ (IEC: 674/2020). მოხალისეებმა ხელი მოაწერეს ინფორმირებულ თანხმობას სისხლის ნიმუშების შეგროვების შესახებ.
ცხოველებზე ჩატარებული კვლევების ყველა პროცედურა ჩატარდა კასტუბას მედიცინის ფაკულტეტის, მანიპალის უმაღლესი განათლების ინსტიტუტის (IAEC/KMC/69/2020) შესაბამისად. ცხოველებზე ჩატარებული ყველა ექსპერიმენტი ჩატარდა ცხოველებზე ექსპერიმენტების კონტროლისა და ზედამხედველობის კომიტეტის (CPCSEA) მითითებების შესაბამისად. ყველა ავტორი იცავს ARRIVE-ის მითითებებს.
ყველა NFRCS-ის FTIR სპექტრები გაანალიზდა და შედარდა ნახაზ 2A-ზე ნაჩვენებ ქიტოზანის სპექტრთან. ქიტოზანის დამახასიათებელი სპექტრული პიკები (ჩაწერილი) 3437 სმ-1-ზე (OH და NH გაჭიმვა, გადაფარვა), 2945 და 2897 სმ-1-ზე (CH გაჭიმვა), 1660 სმ-1-ზე (NH2 დეფორმაცია), 1589 სმ-1-ზე (N–H მოხრა ), 1157 სმ-1-ზე (ხიდის გაჭიმვა O-), 1067 სმ-1-ზე (გაჭიმვა C–O, მეორადი ჰიდროქსილი), 993 სმ-1-ზე (გაჭიმვა CO2, Bo-OH) 52.53.54. დამატებითი ცხრილი S1 აჩვენებს FTIR NFRCS შთანთქმის სპექტრის მნიშვნელობებს ქიტოზანისთვის (რეპორტიორი), სუფთა ქიტოზანისთვის, Cm, Ch და Cp. ყველა NFRCS-ის (Cm, Ch და Cp) FTIR სპექტრმა აჩვენა იგივე დამახასიათებელი შთანთქმის ზოლები, როგორც სუფთა ქიტოზანის შემთხვევაში, მნიშვნელოვანი ცვლილებების გარეშე (სურ. 2A). FTIR შედეგებმა დაადასტურა NFRCS-ის შესაქმნელად გამოყენებულ პოლიმერებს შორის ქიმიური ან ფიზიკური ურთიერთქმედების არარსებობა, რაც მიუთითებს, რომ გამოყენებული პოლიმერები ინერტულია.
Cm NFRCS-ის, Ch NFRCS-ის, Cp NFRCS-ის და Cs-ის in vitro დახასიათება. (A) წარმოადგენს ქიტოზანის და Cm NFRCS-ის, Ch NFRCS-ის და Cp NFRCS-ის შემადგენლობის კომბინირებულ FTIR სპექტრებს შეკუმშვის ქვეშ. (B) ა) NFRCS-ის Cm, Ch, Cp და Cg-ის მთლიანი სისხლის შთანთქმის სიჩქარე (n = 3); Ct ნიმუშებმა აჩვენა უფრო მაღალი BAR, რადგან ბამბის ტამპონს აქვს უფრო მაღალი შთანთქმის ეფექტურობა; ბ) სისხლი სისხლის შთანთქმის შემდეგ. შთანთქმილი ნიმუშის ილუსტრაცია. C სატესტო ნიმუშის BCT-ის გრაფიკული წარმოდგენა (Cp NFRCS-ს ჰქონდა საუკეთესო BCT (15 წმ, n = 3)). C, D, E და G ცხრილებში მონაცემები ნაჩვენები იყო საშუალო ± სტანდარტული გადახრით, ხოლო შეცდომის ზოლები წარმოადგენს სტანდარტული გადახრით, ***p < 0.0001. C, D, E და G ცხრილებში მონაცემები ნაჩვენები იყო საშუალო ± სტანდარტული გადახრით, ხოლო შეცდომის ზოლები წარმოადგენს სტანდარტული გადახრით, ***p < 0.0001. Данные в C, D, E და G შემოთავაზებულია, როგორც среднее ± სტანდარტული отклонение, а გეგმის არასწორი ცნებები, ***p <0,0001. C, D, E და G განყოფილებებში მონაცემები წარმოდგენილია საშუალო ± სტანდარტული გადახრის სახით, ხოლო შეცდომის სვეტები წარმოადგენს სტანდარტულ გადახრას, ***p<0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p <0.0001。 C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p <0.0001。 Данные в C, D, E და G, როგორც среднее значение ± стандартное отклонение, გეგმა погрешноей представляют стандартное отклонение, ***p <0,0001. C, D, E და G განყოფილებებში მონაცემები ნაჩვენებია საშუალო ± სტანდარტული გადახრის სახით, შეცდომის სვეტები წარმოადგენს სტანდარტულ გადახრას, ***p <0.0001.