Nature.com-এ আসার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ। আপনি যে ব্রাউজার সংস্করণটি ব্যবহার করছেন তাতে CSS-এর সমর্থন সীমিত। সর্বোত্তম অভিজ্ঞতার জন্য, আমরা আপনাকে একটি হালনাগাদ ব্রাউজার ব্যবহার করার পরামর্শ দিচ্ছি (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে কম্প্যাটিবিলিটি মোড নিষ্ক্রিয় করুন)। আপাতত, নিরবচ্ছিন্ন সমর্থন নিশ্চিত করার জন্য, আমরা স্টাইল এবং জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই সাইটটি রেন্ডার করব।
অনিয়ন্ত্রিত রক্তক্ষরণ মৃত্যুর অন্যতম প্রধান কারণ। যুদ্ধ, সড়ক দুর্ঘটনা এবং মৃত্যু হ্রাসকরণ কার্যক্রমে প্রাথমিক চিকিৎসা হিসেবে দ্রুত রক্তপাত বন্ধ করা ব্যক্তির জীবন রক্ষা নিশ্চিত করে। একটি সাধারণ রক্তরোধক ফিল্ম-গঠনকারী উপাদান (HFFC)-কে অবিচ্ছিন্ন দশা হিসেবে ব্যবহার করে তৈরি ন্যানোপোরাস ফাইবার-রিইনফোর্সড কম্পোজিট স্ক্যাফোল্ড (NFRCS) রক্তপাত বন্ধ করার প্রক্রিয়াকে উদ্দীপ্ত ও উন্নত করতে পারে। NFRCS-এর বিকাশ ফড়িংয়ের ডানার নকশার উপর ভিত্তি করে করা হয়েছে। ফড়িংয়ের ডানার কাঠামোটি আড়াআড়ি এবং লম্বালম্বি ডানা নিয়ে গঠিত, এবং ডানার ঝিল্লিগুলো অণুকাঠামোর অখণ্ডতা বজায় রাখার জন্য একে অপরের সাথে সংযুক্ত থাকে। HFFC ন্যানোমিটার পুরুত্বের একটি ফিল্ম দিয়ে ফাইবারের পৃষ্ঠকে সমানভাবে আবৃত করে এবং এলোমেলোভাবে ছড়িয়ে থাকা তুলার পুরুত্ব (Ct) (বিচ্ছুরিত দশা)-কে সংযুক্ত করে একটি ন্যানোপোরাস কাঠামো তৈরি করে। অবিচ্ছিন্ন এবং বিচ্ছুরিত দশার এই সংমিশ্রণ বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ পণ্যের তুলনায় এর খরচ দশগুণ কমিয়ে দেয়। পরিবর্তিত NFRCS (ট্যাম্পন বা রিস্টব্যান্ড) বিভিন্ন বায়োমেডিকেল প্রয়োগে ব্যবহার করা যেতে পারে। ইন ভিভো গবেষণায় দেখা গেছে যে, উদ্ভাবিত Cp NFRCS প্রয়োগস্থলে রক্ত ​​জমাট বাঁধার প্রক্রিয়াকে উদ্দীপ্ত ও ত্বরান্বিত করে। এর ন্যানোপোরাস কাঠামোর কারণে NFRCS ক্ষুদ্র পরিবেশকে নিয়ন্ত্রণ করতে এবং কোষীয় পর্যায়ে কাজ করতে পারে, যার ফলে এক্সিশন উন্ড মডেলে ক্ষত নিরাময় আরও উন্নত হয়।
যুদ্ধ, অস্ত্রোপচারকালীন এবং জরুরি পরিস্থিতিতে অনিয়ন্ত্রিত রক্তক্ষরণ আহত ব্যক্তির জীবনের জন্য গুরুতর হুমকি সৃষ্টি করতে পারে¹। এই পরিস্থিতিগুলো পেরিফেরাল ভাস্কুলার রেজিস্ট্যান্স বা প্রান্তীয় রক্তনালীর প্রতিরোধ ক্ষমতা সামগ্রিকভাবে বাড়িয়ে দেয়, যার ফলে হেমোরেজিক শক দেখা দেয়। অস্ত্রোপচারের সময় এবং পরে রক্তক্ষরণ নিয়ন্ত্রণের জন্য উপযুক্ত ব্যবস্থা গ্রহণ করাকে সম্ভাব্য জীবন-হুমকিস্বরূপ বলে মনে করা হয়²,³। বড় রক্তনালী ক্ষতিগ্রস্ত হলে ব্যাপক রক্তক্ষরণ হয়, যার ফলে যুদ্ধে মৃত্যুহার ≤ ৫০% এবং অস্ত্রোপচারের সময় ৩১% হয়ে থাকে¹। ব্যাপক রক্তক্ষরণের ফলে শরীরের আয়তন কমে যায়, যা কার্ডিয়াক আউটপুট হ্রাস করে। মোট পেরিফেরাল ভাস্কুলার রেজিস্ট্যান্স বৃদ্ধি এবং মাইক্রোসার্কুলেশনের ক্রমাগত অবনতির ফলে জীবন রক্ষাকারী অঙ্গগুলোতে হাইপোক্সিয়া দেখা দেয়। কার্যকর হস্তক্ষেপ ছাড়া এই অবস্থা চলতে থাকলে হেমোরেজিক শক হতে পারে¹,⁴,⁵। অন্যান্য জটিলতার মধ্যে রয়েছে হাইপোথার্মিয়া এবং মেটাবলিক অ্যাসিডোসিসের অগ্রগতি, সেইসাথে রক্ত ​​জমাট বাঁধার প্রক্রিয়া ব্যাহতকারী কোয়াগুলেশন ডিসঅর্ডার। গুরুতর হেমোরেজিক শকের সাথে মৃত্যুর ঝুঁকি বেশি থাকে⁶,⁷,⁸। গ্রেড III (ক্রমবর্ধমান) শকের ক্ষেত্রে, অস্ত্রোপচারের সময় এবং অস্ত্রোপচার-পরবর্তী অসুস্থতা ও মৃত্যুহারের সময় রোগীর জীবন বাঁচানোর জন্য রক্ত ​​সঞ্চালন অপরিহার্য। উপরোক্ত সমস্ত জীবন-হুমকির পরিস্থিতি কাটিয়ে ওঠার জন্য, আমরা পানিতে দ্রবণীয় রক্তক্ষরণরোধী পলিমারের সংমিশ্রণ ব্যবহার করে ন্যূনতম পলিমার ঘনত্ব (০.৫%) সহ একটি ন্যানোপোরাস ফাইবার-রিইনফোর্সড কম্পোজিট স্ক্যাফোল্ড (NFRCS) তৈরি করেছি।
ফাইবার রিইনফোর্সমেন্টের ব্যবহারের মাধ্যমে সাশ্রয়ী পণ্য তৈরি করা যেতে পারে। এলোমেলোভাবে সাজানো ফাইবারগুলো ফড়িংয়ের ডানার কাঠামোর মতো দেখতে, যা ডানার অনুভূমিক এবং উল্লম্ব ডোরা দ্বারা ভারসাম্যপূর্ণ। ডানার অনুপ্রস্থ এবং অনুদৈর্ঘ্য শিরাগুলো ডানার ঝিল্লির সাথে সংযুক্ত থাকে (চিত্র ১)। NFRCS উন্নত ভৌত ও যান্ত্রিক শক্তি সম্পন্ন একটি কাঠামো ব্যবস্থা হিসেবে রিইনফোর্সড Ct দ্বারা গঠিত (চিত্র ১)। সাশ্রয়ী মূল্য এবং কারুকার্যের কারণে, শল্যচিকিৎসকরা অস্ত্রোপচার এবং ড্রেসিংয়ের সময় সুতির সুতার গেজ (Ct) ব্যবহার করতে পছন্দ করেন। সুতরাং, এর একাধিক সুবিধার কথা বিবেচনা করে, যার মধ্যে ৯০%-এর বেশি স্ফটিকাকার সেলুলোজ (যা রক্তক্ষরণ রোধক ক্ষমতা বৃদ্ধিতে সহায়তা করে) অন্তর্ভুক্ত, Ct-কে NFRCS9,10-এর কঙ্কালতন্ত্র হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছিল। সুতরাং, এর একাধিক সুবিধার কথা বিবেচনা করে, যার মধ্যে ৯০%-এর বেশি স্ফটিকাকার সেলুলোজ (যা রক্তক্ষরণ রোধক ক্ষমতা বৃদ্ধিতে সহায়তা করে) অন্তর্ভুক্ত, Ct-কে NFRCS9,10-এর কঙ্কালতন্ত্র হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছিল। Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической целюлозы (участвует в гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. অতএব, এর বহুবিধ সুবিধার কারণে, যার মধ্যে ৯০%-এর বেশি স্ফটিকাকার সেলুলোজ (যা রক্ত ​​জমাট বাঁধার ক্ষমতা বৃদ্ধিতে জড়িত) অন্তর্ভুক্ত, Ct-কে NFRCS কঙ্কালতন্ত্র হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছিল৯,১০।因此, 考虑到它的多重益处，包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止血活性）,Ct益蔢血活性）的骨架系统.因此,考虑到它的多重益处，包括> 90%অতএব, এর বহুবিধ সুবিধার কারণে, যার মধ্যে ৯০% এরও বেশি ক্রিস্টালাইন সেলুলোজ (যা রক্তক্ষরণ রোধের ক্ষমতা বাড়াতে সাহায্য করে) অন্তর্ভুক্ত, NFRCS9,10-এর জন্য Ct-কে একটি স্ক্যাফোল্ড হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছিল।Ct-কে উপরিতলে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল (ন্যানো-পুরু ফিল্ম তৈরি হতে দেখা গেছে) এবং একটি রক্তক্ষরণরোধী ফিল্ম-গঠনকারী উপাদানের (HFFC) সাথে আন্তঃসংযুক্ত করা হয়েছিল। HFFC একটি ম্যাট্রিজেলের মতো কাজ করে, যা এলোমেলোভাবে স্থাপিত Ct-কে একত্রে ধরে রাখে। এই উন্নত নকশাটি বিচ্ছুরিত দশার (শক্তিবর্ধক তন্তু) মধ্যে পীড়ন সঞ্চারিত করে। ন্যূনতম পলিমার ঘনত্ব ব্যবহার করে ভালো যান্ত্রিক শক্তি সম্পন্ন ন্যানোপোরাস কাঠামো তৈরি করা কঠিন। এছাড়াও, বিভিন্ন জৈবচিকিৎসা প্রয়োগের জন্য ভিন্ন ভিন্ন ছাঁচ তৈরি করা সহজ নয়।
চিত্রটিতে ফড়িংয়ের ডানার কাঠামোর উপর ভিত্তি করে NFRCS নকশার একটি ডায়াগ্রাম দেখানো হয়েছে (A)। এই ছবিতে ফড়িংয়ের ডানার কাঠামোর একটি তুলনামূলক সাদৃশ্য (ডানার ছেদকারী এবং অনুদৈর্ঘ্য শিরাগুলো পরস্পর সংযুক্ত) এবং Cp NFRCS-এর একটি অনুপ্রস্থচ্ছেদীয় আলোক-অণুবীক্ষণিক চিত্র (B) দেখানো হয়েছে। NFRCS-এর পরিকল্পিত চিত্ররূপ।
উপরোক্ত সীমাবদ্ধতাগুলো দূর করার জন্য HFFC-কে একটি অবিচ্ছিন্ন দশা হিসেবে ব্যবহার করে NFRC তৈরি করা হয়েছিল। HFFC বিভিন্ন ফিল্ম-গঠনকারী রক্তরোধক পলিমার দ্বারা গঠিত, যার মধ্যে রয়েছে কাইটোসান (প্রধান রক্তরোধক পলিমার হিসেবে) এবং মিথাইলসেলুলোজ (MC), হাইড্রোক্সিপ্রোপাইল মিথাইলসেলুলোজ (HPMC 50 cp) ও পলিভিনাইল অ্যালকোহল (PVA) (১২৫ kDa) একটি সহায়ক পলিমার হিসেবে যা থ্রম্বাস গঠনে সহায়তা করে। পলিভিনাইলপাইরোলিডিন K30 (PVP K30) যোগ করার ফলে NFRCS-এর আর্দ্রতা শোষণ ক্ষমতা উন্নত হয়েছিল। সংযুক্ত পলিমার মিশ্রণে পলিমার ক্রসলিংকিং উন্নত করার জন্য পলিইথিলিন গ্লাইকোল ৪০০ (PEG 400) যোগ করা হয়েছিল। তিনটি ভিন্ন HFFC রক্তরোধক মিশ্রণ (Cm HFFC, Ch HFFC এবং Cp HFFC), যথা কাইটোসানের সাথে MC (Cm), কাইটোসানের সাথে HPMC (Ch), এবং কাইটোসানের সাথে PVA (Cp), Ct-তে প্রয়োগ করা হয়েছিল। বিভিন্ন ইন ভিট্রো এবং ইন ভিভো বৈশিষ্ট্য নিরূপণ গবেষণা NFRCS-এর রক্তক্ষরণ রোধক এবং ক্ষত নিরাময়কারী কার্যকারিতা নিশ্চিত করেছে। NFRCS দ্বারা প্রাপ্ত যৌগিক পদার্থ ব্যবহার করে নির্দিষ্ট চাহিদা মেটাতে বিভিন্ন ধরনের স্ক্যাফোল্ডিং তৈরি করা যেতে পারে।
এছাড়াও, শরীরের নিম্নাংশ এবং অন্যান্য অংশের সম্পূর্ণ আঘাতপ্রাপ্ত স্থান ঢাকার জন্য এনএফআরসিএস-কে ব্যান্ডেজ বা রোল হিসেবে পরিবর্তন করা যেতে পারে। বিশেষত যুদ্ধকালীন অঙ্গের আঘাতের জন্য, পরিকল্পিত এনএফআরসিএস-এর নকশাকে অর্ধেক হাত বা পুরো পায়ের জন্য পরিবর্তন করা যেতে পারে (পরিপূরক চিত্র এস১১)। টিস্যু গ্লু ব্যবহার করে এনএফআরসিএস-কে রিস্টব্যান্ডে পরিণত করা যায়, যা কব্জির গুরুতর আঘাত থেকে রক্তপাত বন্ধ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। আমাদের প্রধান লক্ষ্য হলো যতটা সম্ভব কম পলিমার ব্যবহার করে এমন একটি এনএফআরসিএস তৈরি করা, যা একটি বৃহৎ জনগোষ্ঠীর (দারিদ্র্যসীমার নিচে) কাছে পৌঁছে দেওয়া যাবে এবং যা একটি প্রাথমিক চিকিৎসার কিটে রাখা যাবে। নকশায় সহজ, কার্যকর এবং সাশ্রয়ী হওয়ায়, এনএফআরসিএস স্থানীয় সম্প্রদায়কে উপকৃত করে এবং বিশ্বব্যাপী প্রভাব ফেলতে পারে।
চিটোসান (আণবিক ওজন ৮০ কেডিএ) এবং অ্যামারান্থ ভারতের মার্ক থেকে কেনা হয়েছিল। হাইড্রোক্সিপ্রোপাইল মিথাইলসেলুলোজ ৫০ সিপি, পলিইথিলিন গ্লাইকোল ৪০০ এবং মিথাইলসেলুলোজ মুম্বাইয়ের লোবা কেমি প্রাইভেট এলএলসি থেকে কেনা হয়েছিল। পলিভিনাইল অ্যালকোহল (আণবিক ওজন ১২৫ কেডিএ) (৮৭-৯০% হাইড্রোলাইজড) গুজরাটের ন্যাশনাল কেমিক্যালস থেকে কেনা হয়েছিল। পলিভিনাইলপাইরোলিডিন কে৩০ মুম্বাইয়ের মলিকেম থেকে কেনা হয়েছিল, এবং বাহক হিসেবে মিলি কিউ ওয়াটার (ডাইরেক্ট-কিউ৩ ওয়াটার পিউরিফিকেশন সিস্টেম, মার্ক, ভারত) ব্যবহার করে জীবাণুমুক্ত সোয়াব তামিলনাড়ুর রামরাজু সার্জারি কটন মিলস লিমিটেড থেকে কেনা হয়েছিল।
লাইওফিলাইজেশন পদ্ধতি¹¹,¹² ব্যবহার করে NFRCS তৈরি করা হয়েছিল। সমস্ত HFFC কম্পোজিশন (সারণী ১) একটি যান্ত্রিক স্টিরার ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। একটি যান্ত্রিক স্টিরারে ৮০০ rpm গতিতে অবিরাম নাড়িয়ে জলে ১% অ্যাসিটিক অ্যাসিড ব্যবহার করে কাইটোসানের একটি ০.৫% দ্রবণ প্রস্তুত করুন। সারণী ১-এ নির্দেশিত লোডেড পলিমারের সঠিক ওজন কাইটোসান দ্রবণে যোগ করা হয়েছিল এবং একটি স্বচ্ছ পলিমার দ্রবণ না পাওয়া পর্যন্ত নাড়ানো হয়েছিল। প্রাপ্ত মিশ্রণে সারণী ১-এ নির্দেশিত পরিমাণে PVP K30 এবং PEG 400 যোগ করা হয়েছিল এবং একটি স্বচ্ছ সান্দ্র পলিমার দ্রবণ না পাওয়া পর্যন্ত নাড়ানো অব্যাহত রাখা হয়েছিল। পলিমার মিশ্রণ থেকে আটকে থাকা বায়ু বুদবুদ অপসারণের জন্য প্রাপ্ত পলিমার দ্রবণের বাথটি ৬০ মিনিটের জন্য সনিক করা হয়েছিল। পরিপূরক চিত্র S1(b)-তে যেমন দেখানো হয়েছে, ৫ মিলি HFFC সহ একটি ৬-ওয়েল প্লেটের (ছাঁচ) প্রতিটি ওয়েলে Ct সমানভাবে বিতরণ করা হয়েছিল।
Ct নেটওয়ার্কে HFFC-এর সুষম সিক্তকরণ ও বন্টন নিশ্চিত করার জন্য ছয়-কূপ প্লেটটিকে ৬০ মিনিট ধরে সনিক করা হয়েছিল। এরপর ছয়-কূপ প্লেটটিকে -২০°C তাপমাত্রায় ৮-১২ ঘণ্টার জন্য হিমায়িত করা হয়। NFRCS-এর বিভিন্ন ফর্মুলেশন পাওয়ার জন্য হিমায়িত প্লেটগুলোকে ৪৮ ঘণ্টা ধরে লাইওফিলাইজ করা হয়েছিল। বিভিন্ন প্রয়োগের জন্য ট্যাম্পন বা নলাকার ট্যাম্পন বা অন্য যেকোনো আকৃতির মতো ভিন্ন ভিন্ন আকার ও কাঠামো তৈরি করতে একই পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়।
সঠিকভাবে ওজন করা কাইটোসান (৮০ কেডিএ) (৩%) একটি ম্যাগনেটিক স্টিরার ব্যবহার করে ১% অ্যাসিটিক অ্যাসিডে দ্রবীভূত করা হয়। কাইটোসানের প্রাপ্ত দ্রবণে ১% পিইজি ৪০০ যোগ করে ৩০ মিনিট ধরে নাড়ানো হয়। প্রাপ্ত দ্রবণটি একটি বর্গাকার বা আয়তাকার পাত্রে ঢেলে -৮০°C তাপমাত্রায় ১২ ঘন্টার জন্য হিমায়িত করা হয়। ছিদ্রযুক্ত Cs13 পাওয়ার জন্য হিমায়িত নমুনাগুলোকে ৪৮ ঘন্টা ধরে লাইওফিলাইজ করা হয়।
অন্যান্য পলিমারের সাথে কাইটোসানের রাসায়নিক সামঞ্জস্যতা নিশ্চিত করার জন্য বিকশিত NFRCS-কে ফুরিয়ার ট্রান্সফর্ম ইনফ্রারেড স্পেকট্রোস্কোপি (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, টোকিও, জাপান) ব্যবহার করে পরীক্ষার অধীনে আনা হয়েছিল¹⁴,¹⁵। ৩২টি স্ক্যান সম্পাদন করে সমস্ত পরীক্ষিত নমুনার FTIR স্পেকট্রা (স্পেকট্রাল পরিসরের প্রস্থ ৪০০ থেকে ৪০০০ সেমি⁻¹) প্রাপ্ত করা হয়েছিল।
চেন এট আল. 16 দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি সামান্য পরিবর্তন সহ ব্যবহার করে সমস্ত ফর্মুলেশনের রক্ত ​​শোষণ হার (BAR) মূল্যায়ন করা হয়েছিল। অবশিষ্ট দ্রাবক অপসারণের জন্য সমস্ত গঠনের তৈরি NFRK গুলি 105°C তাপমাত্রায় একটি ভ্যাকুয়াম ওভেনে সারারাত ধরে শুকানো হয়েছিল। 3.8% সোডিয়াম সাইট্রেটের একটি প্রিমিক্সযুক্ত পৃথক পাত্রে 30 মিলিগ্রাম NFRCS (প্রাথমিক নমুনার ওজন – W0) এবং 30 মিলিগ্রাম Ct (পজিটিভ কন্ট্রোল) রাখা হয়েছিল। পূর্বনির্ধারিত সময় ব্যবধানে, অর্থাৎ 5, 10, 20, 30, 40 এবং 60 সেকেন্ডে, NFRCS গুলি সরানো হয়েছিল এবং নমুনাগুলিকে 30 সেকেন্ডের জন্য Ct-এর উপর রেখে তাদের পৃষ্ঠ থেকে অশোষিত রক্ত ​​পরিষ্কার করা হয়েছিল। প্রতিটি সময় বিন্দুতে NFRCS 16 দ্বারা শোষিত রক্তের চূড়ান্ত ওজন (W1) হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল। নিম্নলিখিত সূত্র ব্যবহার করে BAR শতাংশ গণনা করুন:
ওয়াং এট আল. 17 দ্বারা রিপোর্ট করা পদ্ধতি অনুসারে রক্ত ​​জমাট বাঁধার সময় (BCT) নির্ধারণ করা হয়েছিল। NFRCS-এর উপস্থিতিতে সম্পূর্ণ রক্ত ​​(3.8% সোডিয়াম সাইট্রেটের সাথে আগে থেকে মিশ্রিত ইঁদুরের রক্ত) জমাট বাঁধতে যে সময় লাগে, তা পরীক্ষার নমুনার BCT হিসাবে গণনা করা হয়েছিল। বিভিন্ন NFRCS উপাদান (30 মিলিগ্রাম) 10 মিলি স্ক্রু ক্যাপ ভায়ালে রাখা হয়েছিল এবং 37°C তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করা হয়েছিল। ভায়ালে রক্ত ​​(0.5 মিলি) যোগ করা হয়েছিল এবং রক্ত ​​জমাট বাঁধা সক্রিয় করার জন্য 0.3 মিলি 0.2 M CaCl2 যোগ করা হয়েছিল। অবশেষে, একটি শক্ত জমাট না বাঁধা পর্যন্ত প্রতি 15 সেকেন্ডে ভায়ালটি উল্টানো হয়েছিল (180° পর্যন্ত)। ভায়াল উল্টানোর সংখ্যা দ্বারা নমুনার BCT অনুমান করা হয়17,18। BCT-এর উপর ভিত্তি করে, NFRCS Cm, Ch এবং Cp থেকে দুটি সর্বোত্তম সংমিশ্রণ পরবর্তী বৈশিষ্ট্য অধ্যয়নের জন্য নির্বাচন করা হয়েছিল।
লি এট আল. 19 দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি প্রয়োগ করে Ch NFRCS এবং Cp NFRCS উপাদানের BCT নির্ধারণ করা হয়েছিল। 15 x 15 mm² Ch NFRCS, Cp NFRCS, এবং Cs (পজিটিভ কন্ট্রোল) আলাদা আলাদা পেট্রি ডিশে (37 °C) রাখা হয়েছিল। রক্ত ​​জমাট বাঁধার প্রক্রিয়া শুরু করার জন্য 3.8% সোডিয়াম সাইট্রেটযুক্ত রক্তের সাথে 0.2 M CaCl₂ 10:1 আয়তন অনুপাতে মেশানো হয়েছিল। 20 µl 0.2 M CaCl₂ ইঁদুরের রক্তের মিশ্রণ নমুনার পৃষ্ঠে প্রয়োগ করা হয়েছিল এবং একটি খালি পেট্রি ডিশে রাখা হয়েছিল। কন্ট্রোল ছিল Ct ছাড়া খালি পেট্রি ডিশে ঢালা রক্ত। 0, 3, এবং 5 মিনিটের নির্দিষ্ট বিরতিতে, জমাট বাঁধা রক্তকে বিরক্ত না করে নমুনাযুক্ত ডিশে 10 ml ডিআয়োনাইজড (DI) জল যোগ করে জমাট বাঁধা বন্ধ করা হয়েছিল। জমাট না বাঁধা লোহিত রক্তকণিকা (এরিথ্রোসাইট) ডিআয়োনাইজড জলের উপস্থিতিতে হিমোলাইসিস প্রক্রিয়ার মধ্য দিয়ে যায় এবং হিমোগ্লোবিন মুক্ত করে। একটি ইউভি-ভিস স্পেকট্রোফটোমিটার ব্যবহার করে 540 nm (λmax হিমোগ্লোবিন) তরঙ্গদৈর্ঘ্যে বিভিন্ন সময়ে হিমোগ্লোবিন (HA(t)) পরিমাপ করা হয়েছিল। 10 ml ডিআয়োনাইজড জলে 20 µl রক্তের 0 মিনিটে হিমোগ্লোবিনের পরম শোষণ (AH(0)) একটি রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড হিসাবে নেওয়া হয়েছিল। একই ব্যাচের রক্ত ​​ব্যবহার করে HA(t)/HA(0) অনুপাত থেকে জমাট বাঁধা রক্তের আপেক্ষিক হিমোগ্লোবিন গ্রহণ (RHA) গণনা করা হয়েছিল।
একটি টেক্সচার অ্যানালাইজার (টেক্সচার প্রো সিটি ভি১.৩ বিল্ড ১৫, ব্রুকফিল্ড, ইউএসএ) ব্যবহার করে, ক্ষতিগ্রস্ত টিস্যুর সাথে এনএফআরকে-এর আসঞ্জন বৈশিষ্ট্য নির্ণয় করা হয়েছিল। শূকরের চামড়ার (চর্বির স্তর ছাড়া) ভেতরের দিকে একটি খোলা তলাযুক্ত নলাকার পাত্র চেপে ধরা হয়। শূকরের চামড়ার সাথে আসঞ্জন তৈরির জন্য ক্যানুলার মাধ্যমে নমুনাগুলো (সিএইচ এনএফআরসিএস এবং সিপি এনএফআরসিএস) নলাকার ছাঁচে প্রয়োগ করা হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় (আরটি) (২৫° সে.) ৩ মিনিট ইনকিউবেশনের পর, এনএফআরসিএস-এর আসঞ্জন শক্তি ০.৫ মিমি/সেকেন্ডের একটি ধ্রুবক হারে রেকর্ড করা হয়েছিল।
সার্জিক্যাল সিল্যান্টের প্রধান বৈশিষ্ট্য হলো রক্তক্ষরণ কমানোর পাশাপাশি রক্ত ​​জমাট বাঁধা বৃদ্ধি করা। NFRCS-এ ক্ষতিহীন জমাট বাঁধার বিষয়টি পূর্বে প্রকাশিত একটি পদ্ধতি ব্যবহার করে সামান্য পরিবর্তনসহ মূল্যায়ন করা হয়েছিল 19। একটি মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ টিউব (২ মিলি) (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০ মিমি) তৈরি করুন যার একপাশে একটি ৮ × ৫ মিমি² ছিদ্র থাকবে (যা একটি খোলা ক্ষতের প্রতিনিধিত্ব করে)। ছিদ্রটি বন্ধ করার জন্য NFRCS ব্যবহার করা হয় এবং বাইরের কিনারাগুলো সিল করার জন্য টেপ ব্যবহার করা হয়। ৩.৮% সোডিয়াম সাইট্রেট প্রিমিক্সযুক্ত মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ টিউবে ২০ µl ০.২ M CaCl₂ যোগ করুন। ১০ মিনিট পর, মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ টিউবগুলো ডিশ থেকে সরানো হয় এবং NFRK থেকে রক্তের বহিঃপ্রবাহের কারণে ডিশের ভরের বৃদ্ধি নির্ণয় করা হয় (n = ৩)। Ch NFRCS এবং Cp NFRCS-এর রক্তক্ষরণ Cs-এর সাথে তুলনা করা হয়েছিল।
মিশ্র এবং চৌধুরী২১ দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে, সামান্য পরিবর্তন সহ NFRCS-এর আর্দ্র অখণ্ডতা নির্ধারণ করা হয়েছিল। একটি ১০০ মিলি আর্লেনমেয়ার ফ্লাস্কে ৫০ মিলি জল সহ NFRCS রাখুন এবং উপরে কোনো স্তর তৈরি না করে ৬০ সেকেন্ড ধরে নাড়ান। সংগ্রহের উপর ভিত্তি করে ভৌত অখণ্ডতার জন্য নমুনাগুলির চাক্ষুষ পরিদর্শন এবং অগ্রাধিকার নির্ধারণ করা হয়।
পূর্বে প্রকাশিত পদ্ধতিতে সামান্য পরিবর্তন এনে Ct-এর সাথে HFFC-এর বন্ধন শক্তি নিয়ে গবেষণা করা হয়েছিল। মিলি-কিউ জল (Ct)-এর উপস্থিতিতে NFRK-কে অ্যাকোস্টিক তরঙ্গের (বাহ্যিক উদ্দীপক) সংস্পর্শে এনে পৃষ্ঠের আবরণের অখণ্ডতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। তৈরি করা NFRCS, Ch NFRCS এবং Cp NFRCS-কে জলভর্তি একটি বীকারে রেখে যথাক্রমে ১, ২, ৩, ৪, ৫, ৬, ৭, ৮, ৯, ১০ এবং ৩০ মিনিট ধরে সনিকেশন করা হয়েছিল। শুকানোর পর, NFRCS-এর প্রাথমিক ও চূড়ান্ত ওজনের শতকরা পার্থক্য ব্যবহার করে উপাদানের (HFFC) শতকরা ক্ষতি গণনা করা হয়েছিল। ইন ভিট্রো BCT বন্ধন শক্তি বা পৃষ্ঠের উপাদানের ক্ষতিকে আরও সমর্থন করেছিল। Ct-এর সাথে HFFC-এর বন্ধনের কার্যকারিতা রক্ত ​​জমাট বাঁধায় এবং Ct22-এর পৃষ্ঠে একটি স্থিতিস্থাপক আবরণ তৈরি করে।
বিকশিত NFRCS-এর সমসত্ত্বতা, NFRCS-এর এলোমেলোভাবে নির্বাচিত সাধারণ স্থান থেকে নেওয়া নমুনার (৩০ মিগ্রা) BCT দ্বারা নির্ধারণ করা হয়েছিল। NFRCS-এর কমপ্লায়েন্স নির্ধারণের জন্য পূর্বে উল্লিখিত BCT পদ্ধতি অনুসরণ করুন। পাঁচটি নমুনার মধ্যে নৈকট্য Ct মেশে অভিন্ন পৃষ্ঠতল আবরণ এবং HFFC জমা হওয়া নিশ্চিত করে।
কিছু পরিবর্তন সহ পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে নমিনাল ব্লাড কন্টাক্ট এরিয়া (NBCA) নির্ধারণ করা হয়েছিল। Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS এবং Cs-এর দুটি পৃষ্ঠের মধ্যে ২০ µl রক্ত ​​চেপে ধরে রক্ত ​​জমাট বাঁধানো হয়। ১ ঘণ্টা পর, স্টেন্টের দুটি অংশ আলাদা করে জমাট বাঁধা রক্তের ক্ষেত্রফল হাতে করে পরিমাপ করা হয়। তিনটি পুনরাবৃত্তির গড় মানকে NBCA NFRCS19 হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল।
বাহ্যিক পরিবেশ বা জমাট বাঁধার প্রক্রিয়া শুরু করার জন্য দায়ী আঘাতপ্রাপ্ত স্থান থেকে পানি শোষণে এনএফআরসিএস-এর কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য ডাইনামিক ভেপার সোরপশন (ডিভিএস) বিশ্লেষণ ব্যবহার করা হয়েছিল। ডিভিএস একটি অতি-সংবেদনশীল নিক্তি ব্যবহার করে ওজন পরিমাপের মাধ্যমে একটি নমুনার বাষ্প গ্রহণ ও বর্জন মূল্যায়ন বা রেকর্ড করে, যার ভর রেজোলিউশন ±০.১ µg। একটি ইলেকট্রনিক মাস ফ্লো কন্ট্রোলার দ্বারা সম্পৃক্ত এবং শুষ্ক বাহক গ্যাস মিশ্রিত করে নমুনার চারপাশে একটি আংশিক বাষ্পচাপ (আপেক্ষিক আর্দ্রতা) তৈরি করা হয়। ইউরোপীয় ফার্মাকোপিয়ার নির্দেশিকা অনুসারে, নমুনাগুলির আর্দ্রতা শোষণের শতাংশের উপর ভিত্তি করে, নমুনাগুলিকে ৪টি বিভাগে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল (০–০.০১২% w/w− আর্দ্রতা শোষণ করে না, ০.২–২% w/w সামান্য আর্দ্রতা শোষণকারী, ২–১৫% মাঝারি আর্দ্রতা শোষণকারী, এবং > ১৫% খুব আর্দ্রতা শোষণকারী)২৩। ইউরোপীয় ফার্মাকোপিয়ার নির্দেশিকা অনুসারে, নমুনাগুলির আর্দ্রতা শোষণের শতাংশের উপর ভিত্তি করে, নমুনাগুলিকে ৪টি বিভাগে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল (০–০.০১২% w/w− আর্দ্রতা শোষণ করে না, ০.২–২% w/w সামান্য আর্দ্রতা শোষণকারী, ২–১৫% মাঝারি আর্দ্রতা শোষণকারী, এবং > ১৫% খুব আর্দ্রতা শোষণকারী)২৩।ইউরোপীয় ফার্মাকোপিয়ার সুপারিশ অনুসারে, নমুনাগুলির আর্দ্রতা শোষণের শতাংশের উপর নির্ভর করে নমুনাগুলিকে ৪টি বিভাগে বিভক্ত করা হয়েছিল (০–০.০১২% w/w – আর্দ্রতা শোষণ করে না, ০.২–২% w/w – সামান্য আর্দ্রতা শোষণকারী, ২–১৫%)।% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % মাঝারিভাবে আর্দ্রতাগ্রাহী এবং > ১৫% খুব আর্দ্রতাগ্রাহী)২৩।根据欧洲药典指南,根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0.012% w/w- 湀湀典指% w/w 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23.根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 分为 分为 分为 类 %0-2吸湿 性 、 、 、 0.2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23.ইউরোপীয় ফার্মাকোপিয়ার সুপারিশ অনুসারে, নমুনা দ্বারা শোষিত আর্দ্রতার শতাংশের উপর নির্ভর করে নমুনাগুলিকে ৪টি শ্রেণিতে বিভক্ত করা হয় (ওজন অনুসারে ০-০.০১২% – আর্দ্রতা শোষণ করে না, ওজন অনুসারে ০.২-২% – সামান্য আর্দ্রতা শোষণকারী, ওজন অনুসারে ২-১৫%)।% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % মাঝারিভাবে আর্দ্রতাগ্রাহী, > ১৫% খুব আর্দ্রতাগ্রাহী) ২৩.NFCS X NFCS এবং TsN NFCS-এর আর্দ্রতা শোষণ ক্ষমতা একটি DVS TA TGA Q5000 SA অ্যানালাইজারে নির্ণয় করা হয়েছিল। এই প্রক্রিয়া চলাকালীন, রান টাইম, আপেক্ষিক আর্দ্রতা (RH), এবং ২৫°C তাপমাত্রায় রিয়েল-টাইম নমুনার ওজন সংগ্রহ করা হয়েছিল। নিম্নলিখিত সমীকরণ ব্যবহার করে সঠিক NFRCS ভর বিশ্লেষণের মাধ্যমে আর্দ্রতার পরিমাণ গণনা করা হয়:
MC হলো NFRCS-এর আর্দ্রতা। m1 – NSAID-এর শুষ্ক ওজন। m2 হলো একটি নির্দিষ্ট আপেক্ষিক আর্দ্রতায় (RH) NFRCS-এর রিয়েল-টাইম ভর।
২৫ °C তাপমাত্রায় ১০ ঘণ্টা ধরে (< ৭ × ১০–৩ টর) নমুনাগুলোকে খালি করার পর তরল নাইট্রোজেন দ্বারা একটি নাইট্রোজেন অধিশোষণ পরীক্ষার মাধ্যমে মোট পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল নির্ণয় করা হয়েছিল। ২৫ °C তাপমাত্রায় ১০ ঘণ্টা ধরে (< ৭ × ১০–৩ টর) নমুনাগুলোকে খালি করার পর তরল নাইট্রোজেন দ্বারা একটি নাইট্রোজেন অধিশোষণ পরীক্ষার মাধ্যমে মোট পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল নির্ণয় করা হয়েছিল। Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азота жидким азотом ° течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр)। নমুনাগুলিকে ২৫°C তাপমাত্রায় ১০ ঘণ্টা (< ৭ × ১০–৩ টর) ধরে খালি করার পর তরল নাইট্রোজেন ব্যবহার করে একটি নাইট্রোজেন অধিশোষণ পরীক্ষার মাধ্যমে মোট পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল নির্ণয় করা হয়েছিল।25°C 清空样品10 小时（<7 × 10-3 টর）后，使用液氮的氮吸附实验估计总表面积.25 ডিগ্রি সেলসিয়াসে Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбции азота жидким азотом посенивазованием течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр)। ২৫°C তাপমাত্রায় (< ৭ x ১০⁻³ টর) ১০ ঘণ্টা ধরে নমুনাগুলোকে খালি রাখার পর তরল নাইট্রোজেন দ্বারা নাইট্রোজেন অধিশোষণ পরীক্ষার মাধ্যমে মোট পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল নির্ণয় করা হয়েছিল।অস্ট্রিয়ার নোভা 1000e থেকে প্রাপ্ত একটি কোয়ান্টাক্রোম ব্যবহার করে RS 232 সফটওয়্যারের সাহায্যে মোট পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল, ছিদ্রের আয়তন এবং NFRCS ছিদ্রের আকার নির্ণয় করা হয়েছিল।
সম্পূর্ণ রক্ত ​​থেকে ৫% লোহিত রক্তকণিকা (RBC) প্রস্তুত করুন (লঘুকারক হিসেবে স্যালাইন ব্যবহার করে)। তারপর একটি ৯৬-ওয়েল প্লেটে HFFC-এর একটি অংশ (০.২৫ মিলি) এবং ৫% লোহিত রক্তকণিকার ভর (০.১ মিলি) স্থানান্তর করুন। মিশ্রণটিকে ৩৭°C তাপমাত্রায় ৪০ মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন। লোহিত রক্তকণিকা এবং সিরামের মিশ্রণকে পজিটিভ কন্ট্রোল এবং স্যালাইন ও লোহিত রক্তকণিকার মিশ্রণকে নেগেটিভ কন্ট্রোল হিসেবে বিবেচনা করা হয়েছিল। স্টাজিটস্কি স্কেল অনুযায়ী হেমাগ্লুটিনেশন নির্ণয় করা হয়েছিল। প্রস্তাবিত স্কেলগুলো নিম্নরূপ: + + + + ঘন দানাদার সমষ্টি; + + + বাঁকানো প্রান্তসহ মসৃণ তলযুক্ত প্যাড; + + ছেঁড়া প্রান্তসহ মসৃণ তলযুক্ত প্যাড; + মসৃণ প্যাডের প্রান্তের চারপাশে সরু লাল বলয়; – (নেগেটিভ) নিচের ওয়েলের কেন্দ্রে একটি বিচ্ছিন্ন লাল বাটন ১২।
আন্তর্জাতিক মান সংস্থা (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27-এর পদ্ধতি অনুসারে NFRCS-এর রক্ত ​​সামঞ্জস্যতা (hemocompatibility) অধ্যয়ন করা হয়েছিল। সিং এবং অন্যান্যদের দ্বারা বর্ণিত গ্র্যাভিমেট্রিক পদ্ধতিতে সামান্য পরিবর্তন করা হয়েছিল NFRCS-এর উপস্থিতিতে বা এর পৃষ্ঠে থ্রম্বাস গঠন মূল্যায়ন করার জন্য। ৫০০ মিলিগ্রাম Cs, Ch NFRCS এবং Cp NFRCS ৩৭°C তাপমাত্রায় ২৪ ঘন্টার জন্য ফসফেট বাফার্ড স্যালাইন (PBS)-এ ইনকিউবেট করা হয়েছিল। ২৪ ঘন্টা পর, PBS সরিয়ে ফেলা হয় এবং NFRCS-কে ৩.৮% সোডিয়াম সাইট্রেটযুক্ত ২ মিলি রক্ত ​​দিয়ে ট্রিট করা হয়। ইনকিউবেট করা নমুনাগুলিতে NFRCS-এর পৃষ্ঠে ০.০৪ মিলি ০.১ M CaCl2 যোগ করা হয়। ৪৫ মিনিট পর, রক্ত ​​জমাট বাঁধা বন্ধ করার জন্য ৫ মিলি পাতিত জল যোগ করা হয়। NFRK-এর পৃষ্ঠে জমাট বাঁধা রক্তকে ৩৬-৩৮% ফর্মালডিহাইড দ্রবণ দিয়ে ট্রিট করা হয়। ফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির করা জমাট রক্তপিণ্ডগুলো শুকানো হয়েছিল এবং ওজন করা হয়েছিল। রক্ত ​​ও নমুনা ছাড়া গ্লাস (নেগেটিভ কন্ট্রোল) এবং রক্তসহ গ্লাসের (পজিটিভ কন্ট্রোল) ওজন গণনা করে থ্রম্বোসিসের শতাংশ নির্ণয় করা হয়েছিল।
প্রাথমিক নিশ্চিতকরণের জন্য, HFFC পৃষ্ঠের আবরণ, Ct আন্তঃসংযুক্তি এবং Ct নেটওয়ার্কের ছিদ্র তৈরির ক্ষমতা বোঝার উদ্দেশ্যে নমুনাগুলোকে একটি অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের নিচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। NFRCS থেকে Ch এবং Cp-এর পাতলা অংশ একটি স্ক্যালপেল ব্লেড দিয়ে কাটা হয়েছিল। প্রাপ্ত অংশটি একটি কাচের স্লাইডের উপর রেখে, একটি কভারস্লিপ দিয়ে ঢেকে দেওয়া হয় এবং এর কিনারাগুলো আঠা দিয়ে আটকে দেওয়া হয়। প্রস্তুতকৃত স্লাইডগুলো একটি অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের নিচে পর্যবেক্ষণ করা হয় এবং বিভিন্ন বিবর্ধনে ছবি তোলা হয়।
রাইস এট আল.২৯ দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতির উপর ভিত্তি করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে Ct নেটওয়ার্কে পলিমার জমা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। ফর্মুলেশনের জন্য ব্যবহৃত HFFC কম্পোজিশনটি একটি ফ্লুরোসেন্ট ডাই (অ্যামারান্থ)-এর সাথে মেশানো হয়েছিল এবং পূর্বে উল্লিখিত পদ্ধতি অনুসারে NFRCS (Ch ও Cp) প্রস্তুত করা হয়েছিল। ফর্মুলেশনের জন্য ব্যবহৃত HFFC কম্পোজিশনটি একটি ফ্লুরোসেন্ট ডাই (অ্যামারান্থ)-এর সাথে মেশানো হয়েছিল এবং পূর্বে উল্লিখিত পদ্ধতি অনুসারে NFRCS (Ch ও Cp) প্রস্তুত করা হয়েছিল।ফর্মুলেশনের জন্য ব্যবহৃত HFFC কম্পোজিশনটি একটি ফ্লুরোসেন্ট ডাই (অ্যামারান্থ)-এর সাথে মেশানো হয়েছিল এবং পূর্বে উল্লিখিত পদ্ধতি অনুসারে NFRCS (Ch এবং Cp) প্রস্তুত করা হয়েছিল।将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法制制。将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法制制。পূর্বেই উল্লিখিত অনুযায়ী, ফর্মুলেশনে ব্যবহৃত HFFC কম্পোজিশনটিকে একটি ফ্লুরোসেন্ট ডাই (অ্যামারান্থ)-এর সাথে মেশানো হয়েছিল এবং এতে NFRCS (Ch এবং Cp) যোগ করা হয়েছিল।প্রাপ্ত নমুনাগুলো থেকে NFRK-এর পাতলা অংশ কেটে কাচের স্লাইডে রাখা হয় এবং কভার স্লিপ দিয়ে ঢেকে দেওয়া হয়। একটি সবুজ ফিল্টার (৩১০-৩৮০ nm) ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপের নিচে প্রস্তুতকৃত স্লাইডগুলো পর্যবেক্ষণ করা হয়। Ct সম্পর্ক এবং Ct নেটওয়ার্কে অতিরিক্ত পলিমার জমা হওয়া বোঝার জন্য ৪ গুণ বিবর্ধনে ছবি তোলা হয়।
NFRCS Ch এবং Cp-এর পৃষ্ঠতলের টপোগ্রাফি একটি অ্যাটমিক ফোর্স মাইক্রোস্কোপ (AFM) ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল, যেখানে একটি অতি-ধারালো TESP ক্যান্টিলিভার ট্যাপিং মোডে (৪২ N/m, ৩২০ kHz, ROC ২-৫ nm, ব্রুকার, তাইওয়ান) সংযুক্ত ছিল। পৃষ্ঠতলের অমসৃণতা রুট মিন স্কয়ার (RMS) পদ্ধতিতে একটি সফটওয়্যার (স্ক্যানিং প্রোব ইমেজ প্রসেসর) ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। পৃষ্ঠতলের একরূপতা পরীক্ষা করার জন্য বিভিন্ন NFRCS অবস্থানকে ত্রিমাত্রিক (3D) ছবিতে রেন্ডার করা হয়েছিল। একটি নির্দিষ্ট এলাকার স্কোরের স্ট্যান্ডার্ড ডেভিয়েশনকে পৃষ্ঠতলের অমসৃণতা হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়। NFRCS31-এর পৃষ্ঠতলের অমসৃণতা পরিমাপ করার জন্য RMS সমীকরণটি ব্যবহার করা হয়েছিল।
Ch NFRCS এবং Cp NFRCS-এর পৃষ্ঠতলের গঠন বোঝার জন্য FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokyo ব্যবহার করে FESEM-ভিত্তিক গবেষণা করা হয়েছিল, যা Cm NFRCS-এর চেয়ে ভালো BCT দেখিয়েছিল। FESEM গবেষণাটি Zhao et al. 32 দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে সামান্য পরিবর্তন সহ করা হয়েছিল। ২০ থেকে ৩০ মিলিগ্রাম Ch NFRCS এবং Cp NFRCS-কে ইঁদুরের রক্তের সাথে মেশানো ২০ µl ৩.৮% সোডিয়াম সাইট্রেটের সাথে আগে থেকে মেশানো হয়েছিল। রক্ত-প্রক্রিয়াজাত নমুনাগুলিতে জমাট বাঁধা শুরু করার জন্য ২০ μl ০.২ M CaCl2 যোগ করা হয়েছিল এবং নমুনাগুলিকে ১০ মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করা হয়েছিল। এছাড়াও, স্যালাইন দিয়ে ধুয়ে NFRCS পৃষ্ঠ থেকে অতিরিক্ত লোহিত রক্তকণিকা অপসারণ করা হয়েছিল।
পরবর্তী নমুনাগুলিকে ০.১% গ্লুটারালডিহাইড দিয়ে ট্রিট করা হয়েছিল এবং তারপর আর্দ্রতা দূর করার জন্য ৩৭°C তাপমাত্রার একটি হট এয়ার ওভেনে শুকানো হয়েছিল। শুকনো নমুনাগুলিকে কোটিং করা হয়েছিল এবং বিশ্লেষণ করা হয়েছিল ৩২। বিশ্লেষণের সময় প্রাপ্ত অন্যান্য চিত্রগুলি ছিল স্বতন্ত্র তুলার আঁশের পৃষ্ঠে ক্লট গঠন, Ct-এর মধ্যে পলিমার জমা, এরিথ্রোসাইটের মরফোলজি (আকৃতি), ক্লটের অখণ্ডতা এবং NFRCS-এর উপস্থিতিতে এরিথ্রোসাইটের মরফোলজি। রক্তের সাথে ইনকিউবেট করা অপরিশোধিত NFRCS এলাকা এবং Ch ও Cp দ্বারা পরিশোধিত NFRCS এলাকাগুলিকে মৌলিক আয়নের (সোডিয়াম, পটাশিয়াম, নাইট্রোজেন, ক্যালসিয়াম, ম্যাগনেসিয়াম, জিঙ্ক, কপার এবং সেলেনিয়াম) জন্য স্ক্যান করা হয়েছিল ৩৩। ক্লট গঠনের সময় মৌলিক আয়নের সঞ্চয় এবং ক্লটের সমসত্ত্বতা বোঝার জন্য পরিশোধিত এবং অপরিশোধিত নমুনার মধ্যে মৌলিক আয়নের শতাংশ তুলনা করুন।
FESEM ব্যবহার করে Ct পৃষ্ঠের উপর Cp HFFC পৃষ্ঠ আবরণের পুরুত্ব নির্ণয় করা হয়েছিল। Cp NFRCS-এর প্রস্থচ্ছেদগুলি ফ্রেমওয়ার্ক থেকে কেটে স্পাটার কোটিং করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ স্পাটার কোটিং নমুনাগুলি FESEM দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং পৃষ্ঠ আবরণের পুরুত্ব পরিমাপ করা হয়েছিল 34, 35, 36।
এক্স-রে মাইক্রো-সিটি উচ্চ-রেজোলিউশনের ত্রিমাত্রিক (3D) অবিনাশী চিত্রায়ন প্রদান করে এবং আপনাকে NFRK-এর অভ্যন্তরীণ কাঠামোগত বিন্যাস অধ্যয়ন করার সুযোগ দেয়। মাইক্রো-সিটি নমুনার মধ্য দিয়ে যাওয়া একটি এক্স-রে রশ্মি ব্যবহার করে নমুনার মধ্যে এক্স-রে-র স্থানীয় রৈখিক ক্ষয় সহগ (linear attenuation coefficient) রেকর্ড করে, যা রূপগত (morphological) তথ্য পেতে সাহায্য করে। NFRCS-এর উপস্থিতিতে শোষণ দক্ষতা এবং রক্ত ​​জমাট বাঁধা বোঝার জন্য Cp NFRCS এবং রক্ত-চিকিৎসিত Cp NFRCS-এর মধ্যে Ct-এর অভ্যন্তরীণ অবস্থান মাইক্রো-সিটি দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। রক্ত-চিকিৎসিত এবং অ-চিকিৎসিত Cp NFRCS নমুনার ত্রিমাত্রিক কাঠামো মাইক্রো-সিটি (V|tome|x S240, Phoenix, Germany) ব্যবহার করে পুনর্গঠন করা হয়েছিল। VG STUDIO-MAX সফটওয়্যার সংস্করণ 2.2 ব্যবহার করে, NFRCS-এর ত্রিমাত্রিক চিত্র তৈরি করার জন্য বিভিন্ন কোণ থেকে (আদর্শগতভাবে 360° কভারেজ) বেশ কয়েকটি এক্স-রে চিত্র নেওয়া হয়েছিল। সংগৃহীত প্রক্ষেপণ ডেটা সংশ্লিষ্ট সহজ 3D ScanIP Academic সফটওয়্যার ব্যবহার করে ত্রিমাত্রিক ভলিউমেট্রিক চিত্রে পুনর্গঠন করা হয়েছিল।
এছাড়াও, জমাট বাঁধা রক্তের বিন্যাস বোঝার জন্য, রক্ত ​​জমাট বাঁধার প্রক্রিয়া শুরু করতে NFRCS-এ ২০ µl আগে থেকে মেশানো সাইট্রেটেড রক্ত ​​এবং ২০ µl ০.২ M CaCl2 যোগ করা হয়েছিল। প্রস্তুতকৃত নমুনাগুলোকে শক্ত হওয়ার জন্য রেখে দেওয়া হয়। NFRK-এর পৃষ্ঠকে ০.৫% গ্লুটারালডিহাইড দিয়ে শোধন করা হয় এবং একটি হট এয়ার ওভেনে ৩০–৪০°C তাপমাত্রায় ৩০ মিনিটের জন্য শুকানো হয়। NFRCS-এর উপর গঠিত রক্ত ​​জমাটকে স্ক্যান ও পুনর্গঠন করা হয় এবং জমাট বাঁধা রক্তের একটি ত্রিমাত্রিক (3D) চিত্র দেখা হয়।
পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতিতে সামান্য পরিবর্তন এনে Cp NFRCS (Ch NFRCS-এর তুলনায় সেরা) এর উপর অ্যান্টিব্যাকটেরিয়াল পরীক্ষা করা হয়েছিল। ইনকিউবেটরে পেট্রি ডিশে অ্যাগারের উপর জন্মানো তিনটি ভিন্ন পরীক্ষামূলক অণুজীব [S.aureus (গ্রাম-পজিটিভ ব্যাকটেরিয়া), E.coli (গ্রাম-নেগেটিভ ব্যাকটেরিয়া) এবং সাদা ক্যান্ডিডা (C.albicans)] ব্যবহার করে Cp NFRCS এবং Cp HFFC-এর অ্যান্টিব্যাকটেরিয়াল কার্যকলাপ নির্ধারণ করা হয়েছিল। অ্যাগার মাধ্যমে 10⁵-10⁶ CFU ml⁻¹ ঘনত্বে ৫০ মিলি লঘুকৃত ব্যাকটেরিয়াল কালচার সাসপেনশন সমানভাবে ইনোকুলেট করুন। মাধ্যমটি একটি পেট্রি ডিশে ঢেলে দিন এবং এটিকে জমাট বাঁধতে দিন। অ্যাগার প্লেটের পৃষ্ঠে HFFC দিয়ে পূরণ করার জন্য কূপ তৈরি করা হয়েছিল (HFFC-এর জন্য ৩টি কূপ এবং নেগেটিভ কন্ট্রোলের জন্য ১টি)। ৩টি কূপে ২০০ µl HFFC এবং ৪র্থ কূপে ২০০ µl pH ৭.৪ PBS যোগ করুন। পেট্রি ডিশের অপর পাশে, জমাট বাঁধা অ্যাগারের উপর একটি ১২ মিমি সিপি এনএফআরসিএস ডিস্ক রাখুন এবং পিবিএস (পিএইচ ৭.৪) দিয়ে আর্দ্র করুন। সিপ্রোফ্লক্সাসিন, অ্যাম্পিসিলিন এবং ফ্লুকোনাজল ট্যাবলেটকে স্ট্যাফাইলোকক্কাস অরিয়াস, এসচেরিকিয়া কোলাই এবং ক্যান্ডিডা অ্যালবিকান্সের জন্য রেফারেন্স স্ট্যান্ডার্ড হিসেবে বিবেচনা করা হয়। ইনহিবিশন জোনটি হাতে মেপে নিন এবং জোনটির একটি ডিজিটাল ছবি তুলুন।
প্রাতিষ্ঠানিক নৈতিক অনুমোদন লাভের পর, গবেষণাটি দক্ষিণ ভারতের কর্ণাটকের মণিপালে অবস্থিত কস্তুরবা মেডিকেল কলেজ অফ এডুকেশন অ্যান্ড রিসার্চ-এ পরিচালিত হয়েছিল। ইন ভিট্রো টিইজি পরীক্ষামূলক প্রোটোকলটি কস্তুরবা মেডিকেল কলেজ, মণিপাল, কর্ণাটকের প্রাতিষ্ঠানিক নীতিশাস্ত্র কমিটি (আইইসি: ৬৭৪/২০২০) দ্বারা পর্যালোচিত ও অনুমোদিত হয়েছে। হাসপাতালের ব্লাড ব্যাংক থেকে স্বেচ্ছাসেবী রক্তদাতাদের (১৮ থেকে ৫৫ বছর বয়সী) মধ্য থেকে অংশগ্রহণকারীদের নির্বাচন করা হয়েছিল। এছাড়াও, রক্তের নমুনা সংগ্রহের জন্য স্বেচ্ছাসেবকদের কাছ থেকে একটি অবহিত সম্মতিপত্র সংগ্রহ করা হয়েছিল। সোডিয়াম সাইট্রেটের সাথে পূর্বমিশ্রিত সম্পূর্ণ রক্তের উপর সিপি এইচএফএফসি ফর্মুলেশনের প্রভাব অধ্যয়নের জন্য নেটিভ টিইজি (এন-টিইজি) ব্যবহার করা হয়েছিল। পয়েন্ট-অফ-কেয়ার রিসাসিটেশনে এর ভূমিকার জন্য এন-টিইজি ব্যাপকভাবে স্বীকৃত, যা ফলাফলে চিকিৎসাগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বিলম্বের সম্ভাবনার কারণে চিকিৎসকদের জন্য সমস্যা তৈরি করে (রুটিন কোয়াগুলেশন পরীক্ষা)। সম্পূর্ণ রক্ত ​​ব্যবহার করে এন-টিইজি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। সকল অংশগ্রহণকারীর কাছ থেকে অবহিত সম্মতি এবং বিস্তারিত চিকিৎসা ইতিহাস সংগ্রহ করা হয়েছিল। এই গবেষণায় গর্ভাবস্থা/প্রসবোত্তর অবস্থা বা যকৃতের রোগের মতো রক্ত ​​জমাট বাঁধা বা রক্ত ​​জমাট বাঁধার জটিলতাযুক্ত অংশগ্রহণকারীদের অন্তর্ভুক্ত করা হয়নি। রক্ত ​​জমাট বাঁধার প্রক্রিয়াকে প্রভাবিত করে এমন ওষুধ গ্রহণকারী ব্যক্তিদেরও গবেষণা থেকে বাদ দেওয়া হয়েছিল। সমস্ত অংশগ্রহণকারীর উপর প্রমিত পদ্ধতি অনুসারে মৌলিক পরীক্ষাগার পরীক্ষা (হিমোগ্লোবিন, প্রোথ্রম্বিন টাইম, অ্যাক্টিভেটেড থ্রম্বোপ্লাস্টিন এবং প্লেটলেট সংখ্যা) করা হয়েছিল। এন-টিইজি রক্ত ​​জমাটের সান্দ্র স্থিতিস্থাপকতা, জমাটের প্রাথমিক গঠন, কণার মিথস্ক্রিয়া, জমাটের দৃঢ়তা এবং জমাটের ভাঙন নির্ধারণ করে। এন-টিইজি বিশ্লেষণ বিভিন্ন কোষীয় উপাদান এবং প্লাজমার সম্মিলিত প্রভাব সম্পর্কে লেখচিত্রীয় এবং সংখ্যাসূচক তথ্য প্রদান করে। সিপি এইচএফএফসি-এর দুটি ভিন্ন আয়তনে (১০ µl এবং ৫০ µl) এন-টিইজি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ, ১০ μl সিপি এইচএফএফসি-এর সাথে সাইট্রিক অ্যাসিডসহ ১ ml সম্পূর্ণ রক্ত ​​যোগ করা হয়েছিল। ২০ µl ০.২ M CaCl2 যুক্ত TEG ডিশে ১ ml (Cp HFFC + সাইট্রেটেড রক্ত) এবং ৩৪০ µl মিশ্র রক্ত ​​যোগ করা হয়। এরপর, Cp HFFC41-এর উপস্থিতিতে রক্তের নমুনার ৩০%-এর R, K, আলফা অ্যাঙ্গেল, MA, G, CI, TPI, EPL, LY পরিমাপ করার জন্য TEG ডিশগুলো TEG® 5000, US-এ লোড করা হয়।
ইন ভিভো গবেষণা প্রোটোকলটি কস্তুরবা স্কুল অফ মেডিসিন, মণিপাল ইনস্টিটিউট অফ হায়ার এডুকেশন, মণিপাল-এর ইনস্টিটিউশনাল অ্যানিম্যাল এথিক্স কমিটি (IAEC) দ্বারা পর্যালোচনা ও অনুমোদিত হয়েছিল (IAEC/KMC/69/2020)। সমস্ত প্রাণী পরীক্ষা-নিরীক্ষা কমিটি ফর দ্য কন্ট্রোল অ্যান্ড সুপারভিশন অফ অ্যানিম্যাল এক্সপেরিমেন্টেশন (CPCSEA)-এর সুপারিশ অনুসারে করা হয়েছিল। সমস্ত ইন ভিভো NFRCS গবেষণা (২ × ২ সেমি²) স্ত্রী উইস্টার ইঁদুরের (ওজন ২০০ থেকে ২৫০ গ্রাম) উপর করা হয়েছিল। সমস্ত প্রাণীকে ২৪-২৬° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় অভ্যস্ত করা হয়েছিল এবং তাদের ইচ্ছামতো সাধারণ খাবার ও জল গ্রহণের সুযোগ ছিল। সমস্ত প্রাণীকে এলোমেলোভাবে বিভিন্ন দলে ভাগ করা হয়েছিল, প্রতিটি দলে তিনটি করে প্রাণী ছিল। সমস্ত গবেষণা 'অ্যানিমেল স্টাডিজ: রিপোর্ট অফ ইন ভিভো এক্সপেরিমেন্টস ৪৩'-এর সাথে সঙ্গতি রেখে করা হয়েছিল। গবেষণার আগে, প্রাণীগুলোকে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল (ip) পথে প্রতি কেজি দৈহিক ওজনের জন্য ২০-৫০ মিলিগ্রাম কেটামিন এবং ২-১০ মিলিগ্রাম জাইলাজিনের মিশ্রণ প্রয়োগ করে অবেদন দেওয়া হয়েছিল। গবেষণার পরে, নমুনাগুলোর প্রাথমিক ও চূড়ান্ত ওজনের পার্থক্য মূল্যায়ন করে রক্তক্ষরণের পরিমাণ গণনা করা হয়েছিল; তিনটি পরীক্ষা থেকে প্রাপ্ত গড় মানটিকেই নমুনাটির রক্তক্ষরণের পরিমাণ হিসেবে ধরা হয়েছিল।
ট্রমা, যুদ্ধ বা সড়ক দুর্ঘটনার (আঘাতের মডেল) ক্ষেত্রে রক্তপাত নিয়ন্ত্রণে NFRCS-এর কার্যকারিতা বোঝার জন্য ইঁদুরের লেজ কর্তন মডেলটি প্রয়োগ করা হয়েছিল। একটি স্ক্যালপেল ব্লেড দিয়ে লেজের ৫০% কেটে ১৫ সেকেন্ডের জন্য বাতাসে রেখে স্বাভাবিক রক্তপাত নিশ্চিত করা হয়। এছাড়াও, চাপ প্রয়োগ করে ইঁদুরের লেজে পরীক্ষার নমুনাগুলো (Ct, Cs, Ch NFRCS এবং Cp NFRCS) স্থাপন করা হয়। পরীক্ষার নমুনাগুলোর (n = 3)¹⁷,⁴⁵ জন্য রক্তপাত এবং PCT রিপোর্ট করা হয়।
যুদ্ধক্ষেত্রে এনএফআরসিএস (NFRCS) চাপ নিয়ন্ত্রণের কার্যকারিতা সুপারফিশিয়াল ফিমোরাল আর্টারির একটি মডেলে পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফিমোরাল আর্টারি উন্মুক্ত করে একটি ২৪জি (24G) ট্রোকার দিয়ে ছিদ্র করা হয় এবং ১৫ সেকেন্ডের মধ্যে রক্তক্ষরণ ঘটানো হয়। অনিয়ন্ত্রিত রক্তপাত দেখা গেলে, ছিদ্রের স্থানে চাপ প্রয়োগ করে পরীক্ষার নমুনাটি স্থাপন করা হয়। পরীক্ষার নমুনাটি প্রয়োগ করার সাথে সাথেই রক্ত ​​জমাট বাঁধার সময় রেকর্ড করা হয় এবং পরবর্তী ৫ মিনিটের জন্য রক্তক্ষরণ বন্ধ করার কার্যকারিতা পর্যবেক্ষণ করা হয়। একই পদ্ধতি সিএস (Cs) এবং সিটি৪৬ (Ct46) দিয়ে পুনরাবৃত্তি করা হয়েছিল।
ডাউলিং এবং অন্যান্যরা 47 অস্ত্রোপচারের সময় রক্তপাতের প্রেক্ষাপটে রক্তরোধক উপকরণগুলির রক্তক্ষরণ-রোধক ক্ষমতা মূল্যায়ন করার জন্য একটি লিভারের আঘাতের মডেল প্রস্তাব করেছিলেন। Ct নমুনা (নেগেটিভ কন্ট্রোল), Cs ফ্রেমওয়ার্ক (পজিটিভ কন্ট্রোল), Ch NFRCS নমুনা এবং Cp NFRCS নমুনার জন্য BCT রেকর্ড করা হয়েছিল। একটি মিডিয়ান ল্যাপারোটমি করে ইঁদুরের সুপ্রাহেপাটিক ভেনা কাভা উন্মুক্ত করা হয়েছিল। এরপর, কাঁচি দিয়ে বাম লোবের দূরবর্তী অংশ কেটে ফেলা হয়েছিল। একটি স্ক্যালপেল ব্লেড দিয়ে লিভারে একটি ছেদ তৈরি করে কয়েক সেকেন্ডের জন্য রক্তপাত হতে দেওয়া হয়েছিল। সঠিকভাবে ওজন করা Ch NFRCS এবং Cp NFRCS পরীক্ষার নমুনাগুলি কোনো পজিটিভ চাপ ছাড়াই ক্ষতিগ্রস্ত পৃষ্ঠে স্থাপন করা হয়েছিল এবং BCT রেকর্ড করা হয়েছিল। এরপর কন্ট্রোল গ্রুপ (Ct) আঘাত না ভেঙে প্রথমে চাপ প্রয়োগ করে এবং তারপরে Cs 30 s47 প্রয়োগ করে।
বিকশিত পলিমার-ভিত্তিক এনএফআরসিএস-এর ক্ষত নিরাময় বৈশিষ্ট্য মূল্যায়ন করার জন্য একটি এক্সিসনাল ক্ষত মডেল ব্যবহার করে ইন ভিভো ক্ষত নিরাময় পরীক্ষা করা হয়েছিল। পূর্বে প্রকাশিত পদ্ধতি অনুসারে সামান্য পরিবর্তনসহ এক্সিসনাল ক্ষতের মডেল নির্বাচন ও সম্পাদন করা হয়েছিল¹⁹,³²,⁴⁸। পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে সমস্ত প্রাণীকে অ্যানেস্থেসিয়া দেওয়া হয়েছিল। পিঠের ত্বকে একটি বৃত্তাকার গভীর ছেদ তৈরি করতে একটি বায়োপসি পাঞ্চ (১২ মিমি) ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রস্তুত ক্ষতস্থানগুলিতে Cs (পজিটিভ কন্ট্রোল), Ct (এই বিবেচনায় যে তুলার প্যাড নিরাময়ে বাধা দেয়), Ch NFRCS এবং Cp NFRCS (পরীক্ষামূলক গ্রুপ) দিয়ে ড্রেসিং করা হয়েছিল এবং কোনো রকম চিকিৎসা ছাড়াই একটি নেগেটিভ কন্ট্রোল রাখা হয়েছিল। গবেষণার প্রতিটি দিনে, সমস্ত ইঁদুরের ক্ষতের ক্ষেত্রফল পরিমাপ করা হয়েছিল। একটি ডিজিটাল ক্যামেরা ব্যবহার করে ক্ষতস্থানের ছবি তোলা হয়েছিল এবং একটি নতুন ড্রেসিং লাগানো হয়েছিল। ক্ষত বন্ধ হওয়ার শতাংশ নিম্নলিখিত সূত্র দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল:
গবেষণার দ্বাদশ দিনে ক্ষত নিরাময়ের শতাংশের উপর ভিত্তি করে, সেরা দলের (Cp NFRCS এবং নিয়ন্ত্রণ দল) ইঁদুরের ত্বক কেটে নিয়ে H&E স্টেইনিং এবং ম্যাসন'স ট্রাইক্রোম স্টেইনিং দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। গবেষণার দ্বাদশ দিনে ক্ষত নিরাময়ের শতাংশের উপর ভিত্তি করে, সেরা দলের (Cp NFRCS এবং নিয়ন্ত্রণ দল) ইঁদুরের ত্বক কেটে নিয়ে H&E স্টেইনিং এবং ম্যাসন'স ট্রাইক্রোম স্টেইনিং দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল।গবেষণার দ্বাদশ দিনে ক্ষত নিরাময়ের শতাংশের উপর ভিত্তি করে, সেরা দলের (Cp NFRCS এবং নিয়ন্ত্রণ দল) ইঁদুরগুলির ত্বক কেটে নিয়ে হেমাটোক্সিলিন-ইওসিন এবং ম্যাসন'স ট্রাইক্রোম দিয়ে রঞ্জিত করে পরীক্ষা করা হয়েছিল।根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Masson三色染色研究।根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和眳组）গবেষণার ১২তম দিনে ক্ষত নিরাময়ের শতাংশের উপর ভিত্তি করে সেরা গ্রুপের (Cp NFRCS এবং কন্ট্রোল গ্রুপ) ইঁদুরগুলোর রক্ত ​​হেমাটোক্সিলিন-ইওসিন স্টেইনিং এবং ম্যাসন'স ট্রাইক্রোম স্টেইনিং-এর জন্য কেটে বের করা হয়েছিল।প্রয়োগকৃত স্টেইনিং পদ্ধতিটি পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি⁴⁹,⁵⁰ অনুসারে সম্পন্ন করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, ১০% ফরমালিনে ফিক্সেশনের পর, নমুনাগুলোকে ক্রমান্বয়ে বিভিন্ন মাত্রার অ্যালকোহল ব্যবহার করে ডিহাইড্রেশন করা হয়েছিল। কর্তিত টিস্যুর পাতলা সেকশন (৫ µm পুরু) পাওয়ার জন্য একটি মাইক্রোটোম ব্যবহার করা হয়েছিল। হিস্টোপ্যাথলজিক্যাল পরিবর্তন অধ্যয়নের জন্য কন্ট্রোল এবং Cp NFRCS-এর পাতলা ধারাবাহিক সেকশনগুলোকে হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন দিয়ে ট্রিট করা হয়েছিল। কোলাজেন ফাইব্রিলের গঠন শনাক্ত করার জন্য ম্যাসন'স ট্রাইক্রোম স্টেইন ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রাপ্ত ফলাফলগুলো প্যাথলজিস্টদের দ্বারা ব্লাইন্ডলি অধ্যয়ন করা হয়েছিল।
Cp NFRCS নমুনাগুলির স্থায়িত্ব 12 মাস ধরে কক্ষ তাপমাত্রায় (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) অধ্যয়ন করা হয়েছিল51। Cp NFRCS (পৃষ্ঠের বিবর্ণতা এবং অণুজীবের বৃদ্ধি) দৃশ্যত পরিদর্শন করা হয়েছিল এবং উপকরণ এবং পদ্ধতি বিভাগে বর্ণিত উপরের পদ্ধতি অনুসারে ভাঁজ ক্ষয় প্রতিরোধ ক্ষমতা এবং BCT পরীক্ষা করা হয়েছিল।
১৫×১৫ বর্গ সেন্টিমিটার আকারের Cp NFRCS প্রস্তুত করার মাধ্যমে এর পরিমাপযোগ্যতা এবং পুনরুৎপাদনযোগ্যতা পরীক্ষা করা হয়েছিল। এছাড়াও, বিভিন্ন Cp NFRCS ভগ্নাংশ থেকে ৩০ মিলিগ্রামের নমুনা (n = ৫) কেটে নেওয়া হয়েছিল এবং পদ্ধতি বিভাগে পূর্বে বর্ণিত উপায়ে পরীক্ষিত নমুনাগুলির BCT মূল্যায়ন করা হয়েছিল।
আমরা বিভিন্ন জৈবচিকিৎসাগত প্রয়োগের জন্য Cp NFRCS উপাদান ব্যবহার করে নানা আকৃতি ও কাঠামো তৈরি করার চেষ্টা করেছি। এই ধরনের আকৃতি বা বিন্যাসের মধ্যে রয়েছে নাক দিয়ে রক্ত ​​পড়া ও দাঁতের চিকিৎসার জন্য শঙ্কু আকৃতির সোয়াব এবং যোনিপথের রক্তপাতের জন্য নলাকার সোয়াব।
সমস্ত ডেটা সেট গড় ± আদর্শ বিচ্যুতি হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছে এবং Prism 5.03 (GraphPad, San Diego, CA, USA) ব্যবহার করে ANOVA দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছে, যার পরে বনফেরোনির একাধিক তুলনা পরীক্ষা করা হয়েছে (*p<0.05)।
মানব গবেষণায় সম্পাদিত সমস্ত পদ্ধতি ইনস্টিটিউট এবং ন্যাশনাল রিসার্চ কাউন্সিলের মানদণ্ড, সেইসাথে ১৯৬৪ সালের হেলসিঙ্কি ঘোষণাপত্র ও এর পরবর্তী সংশোধনীসমূহ, অথবা অনুরূপ নৈতিক মানদণ্ড অনুসারে ছিল। সকল অংশগ্রহণকারীকে গবেষণার বৈশিষ্ট্য এবং এর স্বেচ্ছামূলক প্রকৃতি সম্পর্কে অবহিত করা হয়েছিল। একবার সংগ্রহ করা হলে অংশগ্রহণকারীর তথ্য গোপনীয় থাকে। ইন ভিট্রো টিইজি পরীক্ষামূলক প্রোটোকলটি কস্তুরবা মেডিকেল কলেজ, মানিপাল, কর্ণাটকের প্রাতিষ্ঠানিক নীতিশাস্ত্র কমিটি (আইইসি: ৬৭৪/২০২০) দ্বারা পর্যালোচনা ও অনুমোদিত হয়েছে। রক্তের নমুনা সংগ্রহের জন্য স্বেচ্ছাসেবকরা অবহিত সম্মতিপত্রে স্বাক্ষর করেছেন।
প্রাণী গবেষণায় সম্পাদিত সমস্ত পদ্ধতি কস্তুবা ফ্যাকাল্টি অফ মেডিসিন, মণিপাল ইনস্টিটিউট অফ হায়ার এডুকেশন, মণিপাল (IAEC/KMC/69/2020)-এর নির্দেশিকা অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল। পরিকল্পিত সমস্ত প্রাণী পরীক্ষা-নিরীক্ষা কমিটি ফর দ্য কন্ট্রোল অ্যান্ড সুপারভিশন অফ অ্যানিমেল এক্সপেরিমেন্টেশন (CPCSEA)-এর নির্দেশিকা অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল। সমস্ত লেখক ARRIVE নির্দেশিকা অনুসরণ করেন।
সমস্ত NFRCS-এর FTIR স্পেকট্রা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং চিত্র 2A-তে দেখানো কাইটোসান স্পেকট্রামের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। কাইটোসানের (রেকর্ডকৃত) বৈশিষ্ট্যসূচক স্পেকট্রাল পিকগুলি হলো: 3437 cm⁻¹ (OH এবং NH স্ট্রেচিং, ওভারল্যাপ), 2945 এবং 2897 cm⁻¹ (CH স্ট্রেচিং), 1660 cm⁻¹ (NH₂ স্ট্রেইন), 1589 cm⁻¹ (N–H বেন্ডিং), 1157 cm⁻¹ (ব্রিজ স্ট্রেচ O-), 1067 cm⁻¹ (স্ট্রেচ C–O, সেকেন্ডারি হাইড্রোক্সিল), 993 cm⁻¹ (স্ট্রেচ CO, Bo-OH)। পরিপূরক সারণি S1-এ কাইটোসান (রিপোর্টার), বিশুদ্ধ কাইটোসান, Cm, Ch, এবং Cp-এর জন্য FTIR NFRCS শোষণ স্পেকট্রামের মান দেখানো হয়েছে। সমস্ত NFRCS (Cm, Ch এবং Cp)-এর FTIR বর্ণালীতে বিশুদ্ধ কাইটোসানের মতোই একই বৈশিষ্ট্যপূর্ণ শোষণ ব্যান্ড দেখা গেছে, যেখানে কোনো উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন ছিল না (চিত্র ২ক)। FTIR ফলাফল NFRCS তৈরিতে ব্যবহৃত পলিমারগুলোর মধ্যে কোনো রাসায়নিক বা ভৌত মিথস্ক্রিয়ার অনুপস্থিতি নিশ্চিত করেছে, যা নির্দেশ করে যে ব্যবহৃত পলিমারগুলো নিষ্ক্রিয়।
Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS এবং Cs-এর ইন ভিট্রো বৈশিষ্ট্য নিরূপণ। (A) সংকোচনের অধীনে কাইটোসান এবং Cm NFRCS, Ch NFRCS ও Cp NFRCS-এর মিশ্রণের সম্মিলিত FTIR বর্ণালী উপস্থাপন করে। (B) ক) NFRCS Cm, Ch, Cp, এবং Cg-এর সম্পূর্ণ রক্ত ​​শোষণের হার (n = 3); Ct নমুনাগুলি উচ্চতর BAR দেখিয়েছে কারণ তুলার সোয়াবের শোষণ দক্ষতা বেশি; খ) রক্ত ​​শোষণের পরের রক্ত। শোষিত নমুনার চিত্র। পরীক্ষা নমুনা C-এর BCT-এর গ্রাফিক্যাল উপস্থাপনা (Cp NFRCS-এর BCT ছিল সর্বোত্তম (১৫ সেকেন্ড, n = 3))। C, D, E, এবং G-তে প্রাপ্ত উপাত্ত গড় ± আদর্শ বিচ্যুতি (SD) হিসেবে দেখানো হয়েছে, এবং এরর বারগুলো আদর্শ বিচ্যুতি (SD) নির্দেশ করে, ***p < 0.0001। C, D, E, এবং G-তে প্রাপ্ত উপাত্ত গড় ± আদর্শ বিচ্যুতি (SD) হিসেবে দেখানো হয়েছে, এবং এরর বারগুলো আদর্শ বিচ্যুতি (SD) নির্দেশ করে, ***p < 0.0001। Данные в C, D, E и G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей представляют стандавляют, стандартное отклонение <0,0001। C, D, E, এবং G-তে প্রাপ্ত উপাত্ত গড় ± আদর্শ বিচ্যুতি হিসেবে উপস্থাপন করা হয়েছে, এবং ত্রুটি দণ্ডগুলো আদর্শ বিচ্যুতি নির্দেশ করে, ***p<0.0001। C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD,误差线代表SD,***p <0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD,误差线代表SD,***p <0.0001. C, D, E и G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрешностей представляют стандоляют <০,০০০১। C, D, E, এবং G-তে প্রাপ্ত উপাত্ত গড় ± আদর্শ বিচ্যুতি হিসেবে দেখানো হয়েছে, ত্রুটি দণ্ডগুলো আদর্শ বিচ্যুতি নির্দেশ করে, ***p<0.0001।