Hatur nuhun parantos nganjang ka Nature.com. Versi browser anu anjeun anggo gaduh dukungan CSS anu terbatas. Pikeun pangalaman anu pangsaéna, kami nyarankeun anjeun nganggo browser anu diénggalan (atanapi mareuman Modeu Kompatibilitas dina Internet Explorer). Samentawis waktos, pikeun mastikeun dukungan anu terus-terusan, kami bakal ngarender situs tanpa gaya sareng JavaScript.
Perdarahan anu teu dikontrol mangrupikeun salah sahiji panyabab utama maot. Ngahontal hemostasis anu gancang mastikeun salametna subjek salaku pertolongan pertama nalika tarung, kacilakaan lalu lintas, sareng operasi ngirangan maot. Perancah komposit anu diperkuat serat nanoporous (NFRCS) anu diturunkeun tina komposisi pembentuk pilem hemostatik saderhana (HFFC) salaku fase kontinyu tiasa micu sareng ningkatkeun hemostasis. Pangwangunan NFRCS dumasar kana desain jangjang papatong. Struktur jangjang papatong diwangun ku jangjang transversal sareng longitudinal, sareng mémbran jangjang disambungkeun silih pikeun ngajaga integritas mikrostruktur. HFFC sacara seragam ngalapis permukaan serat ku pilem ketebalan nanometer sareng nyambungkeun ketebalan kapas anu disebarkeun sacara acak (Ct) (fase sumebar) pikeun ngabentuk struktur nanoporous. Kombinasi fase kontinyu sareng sumebar ngirangan biaya produk sapuluh kali dibandingkeun sareng produk anu sayogi sacara komersil. NFRCS anu dimodifikasi (tampon atanapi gelang) tiasa dianggo dina rupa-rupa aplikasi biomédis. Panilitian in vivo nyimpulkeun yén Cp NFRCS anu dimekarkeun micu sareng ningkatkeun prosés koagulasi di tempat aplikasi. NFRCS tiasa ngamodulasi lingkungan mikro sareng bertindak dina tingkat sél kusabab struktur nanopori na anu ngahasilkeun penyembuhan tatu anu langkung saé dina modél tatu éksisi.
Perdarahan anu teu dikontrol nalika perang, kaayaan intraoperatif, sareng darurat tiasa nyababkeun ancaman serius pikeun kahirupan anu tatu1. Kaayaan ieu salajengna nyababkeun paningkatan résistansi vaskular periferal sacara umum, anu nyababkeun syok hemoragik. Ukuran anu pas pikeun ngontrol perdarahan nalika sareng saatos operasi dianggap berpotensi ngancam kahirupan2,3. Karusakan pembuluh darah ageung nyababkeun kaleungitan getih anu ageung, anu nyababkeun tingkat mortalitas ≤ 50% dina perang sareng 31% nalika operasi1. Kaleungitan getih anu ageung nyababkeun panurunan volume awak, anu ngirangan output jantung. Peningkatan résistansi vaskular periferal total sareng gangguan mikrosirkulasi anu progresif nyababkeun hipoksia dina organ pendukung kahirupan. Syok hemoragik tiasa kajantenan upami kaayaan ieu terus-terusan tanpa intervensi anu efektif1,4,5. Komplikasi sanésna kalebet kamajuan hipotermia sareng asidosis métabolik, ogé gangguan koagulasi anu ngahalangan prosés koagulasi. Syok hemoragik anu parah aya hubunganana sareng résiko maot anu langkung luhur6,7,8. Dina syok tingkat III (progresif), transfusi getih penting pisan pikeun salametna pasien salami morbiditas sareng mortalitas intraoperatif sareng pasca operasi. Pikeun ngungkulan sadaya kaayaan anu ngancam kahirupan di luhur, kami parantos ngembangkeun perancah komposit anu diperkuat serat nanopori (NFRCS) anu ngamangpaatkeun konsentrasi polimér minimal (0,5%) nganggo kombinasi polimér hémostatik anu leyur dina cai.
Ku ngagunakeun tulangan serat, produk anu hemat biaya tiasa dikembangkeun. Serat anu disusun sacara acak nyarupaan struktur jangjang papatong, saimbang ku garis horizontal sareng vertikal dina jangjang. Urat transversal sareng longitudinal jangjang komunikasi sareng mémbran jangjang (Gambar 1). NFRCS diwangun ku Ct anu dikuatkeun salaku sistem perancah kalayan kakuatan fisik sareng mékanis anu langkung saé (Gambar 1). Kusabab hargana anu terjangkau sareng karajinan, ahli bedah langkung milih nganggo alat ukur benang katun (Ct) nalika operasi sareng perban. Ku kituna, kumargi seueur mangpaatna, kalebet > 90% selulosa kristalin (masihan paningkatan aktivitas hemostatik), Ct dianggo salaku sistem rangka NFRCS9,10. Ku kituna, kumargi seueur mangpaatna, kalebet > 90% selulosa kristalin (masihan paningkatan aktivitas hemostatik), Ct dianggo salaku sistem rangka NFRCS9,10. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической целлюлозы (участишполозы) гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. Ku kituna, kumargi seueur mangpaatna, kalebet >90% selulosa kristalin (anu kalibet dina ningkatna aktivitas hemostatik), Ct dianggo salaku sistem rangka NFRCS9,10.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止血活性Ｂ血活性），NF00的骨架系统。因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%Ku kituna, kumargi seueur mangpaatna, kalebet langkung ti 90% selulosa kristalin (ngabantosan ningkatkeun aktivitas hemostatik), Ct dianggo salaku perancah pikeun NFRCS9,10.Ct dilapis sacara superfisial (formasi pilem nano-kandel katingali) sareng dihubungkeun sareng komposisi pembentuk pilem hemostatik (HFFC). HFFC bertindak sapertos matrigel, ngahijikeun Ct anu ditempatkeun sacara acak. Desain anu dikembangkeun ngirimkeun setrés dina fase anu sumebar (serat penguat). Hésé pikeun kéngingkeun struktur nanopori kalayan kakuatan mékanis anu saé nganggo konsentrasi polimér minimal. Salaku tambahan, henteu gampang pikeun ngaropea cetakan anu béda pikeun aplikasi biomédis anu béda.
Gambar ieu nunjukkeun diagram desain NFRCS dumasar kana struktur jangjang papatong (A). Gambar ieu nunjukkeun analogi komparatif tina struktur jangjang papatong (urat jangjang anu silih potong sareng longitudinal saling nyambung) sareng fotomikrograf cross-sectional Cp NFRCS (B). Répréséntasi skematis NFRCS.
NFRC dikembangkeun nganggo HFFC salaku fase kontinyu pikeun ngungkulan watesan di luhur. HFFC diwangun ku rupa-rupa polimér hemostatik anu ngabentuk pilem kalebet kitosan (salaku polimér hemostatik utama) kalayan metilselulosa (MC), hidroksipropil metilselulosa (HPMC 50 cp) sareng polivinil alkohol (PVA)) (125 kDa) salaku polimér pendukung anu ngamajukeun formasi trombus. Panambahan polivinilpirolidin K30 (PVP K30) ningkatkeun kapasitas panyerepan Uap NFRCS. Polietilen glikol 400 (PEG 400) ditambahkeun pikeun ningkatkeun crosslinking polimér dina campuran polimér anu kabeungkeut. Tilu komposisi hemostatik HFFC anu béda (Cm HFFC, Ch HFFC sareng Cp HFFC), nyaéta kitosan sareng MC (Cm), kitosan sareng HPMC (Ch), sareng kitosan sareng PVA (Cp), diterapkeun kana Ct. Rupa-rupa studi karakterisasi in vitro sareng in vivo parantos mastikeun aktivitas hemostatik sareng penyembuhan tatu NFRCS. Bahan komposit anu ditawarkeun ku NFRCS tiasa dianggo pikeun ngaropea rupa-rupa bentuk scaffolding pikeun minuhan kabutuhan khusus.
Salian ti éta, NFRCS tiasa dirobih janten perban atanapi gulungan pikeun nutupan sakumna daérah tatu dina anggota awak handap sareng bagian awak anu sanés. Husus pikeun tatu anggota awak tempur, desain NFRCS anu dirancang tiasa dirobih janten satengah panangan atanapi suku pinuh (Gambar Tambahan S11). NFRCS tiasa didamel janten gelang nganggo lem jaringan, anu tiasa dianggo pikeun ngeureunkeun perdarahan tina tatu pigeulang bunuh diri anu parah. Tujuan utama kami nyaéta pikeun ngembangkeun NFRCS kalayan polimér sabisa-bisa anu tiasa dikirimkeun ka populasi anu ageung (di handap garis kamiskinan) sareng anu tiasa disimpen dina kotak P3K. Desain anu saderhana, efisien, sareng ekonomis, NFRCS nguntungkeun masarakat lokal sareng tiasa gaduh dampak global.
Kitosan (beurat molekul 80 kDa) sareng bayam dipésér ti Merck, India. Hidroksipropil metilselulosa 50 Cp, polietilen glikol 400 sareng metilselulosa dipésér ti Loba Chemie Pvt. LLC, Mumbai. Alkohol polivinil (beurat molekul 125 kDa) (87-90% dihidrolisis) dipésér ti National Chemicals, Gujarat. Polivinilpirolidin K30 dipésér ti Molychem, Mumbai, swab steril dipésér ti Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu, nganggo cai Milli Q (sistem purifikasi cai Direct-Q3, Merck, India) salaku pembawa.
NFRCS dikembangkeun nganggo metode liofilisasi11,12. Sadaya komposisi HFFC (Tabel 1) disiapkeun nganggo pengaduk mékanis. Siapkeun larutan kitosan 0,5% nganggo asam asetat 1% dina cai ku cara diaduk terus-terusan dina 800 rpm dina pengaduk mékanis. Beurat pasti polimér anu dieusi anu dituduhkeun dina Tabel 1 ditambahkeun kana larutan kitosan sareng diaduk dugi ka larutan polimér anu jelas diala. PVP K30 sareng PEG 400 ditambahkeun kana campuran anu dihasilkeun dina jumlah anu dituduhkeun dina Tabel 1, sareng diaduk terus dugi ka larutan polimér kentel anu jelas diala. Larutan polimér anu dihasilkeun disonikasi salami 60 menit pikeun miceun gelembung hawa anu kajebak tina campuran polimér. Sakumaha anu dipidangkeun dina Gambar Tambahan S1(b), Ct disebarkeun rata dina unggal sumur pelat 6-sumur (cetakan) anu ditambahan ku 5 ml HFFC.
Pelat genep sumur disonikasi salami 60 menit pikeun ngahontal pembasahan sareng distribusi HFFC anu seragam dina jaringan Ct. Teras bekukeun pelat genep sumur dina suhu -20°C salami 8-12 jam. Pelat bekukeun diliofilisasi salami 48 jam pikeun kéngingkeun rupa-rupa formulasi NFRCS. Prosedur anu sami dianggo pikeun ngahasilkeun bentuk sareng struktur anu béda, sapertos tampon atanapi tampon silinder, atanapi bentuk sanés pikeun aplikasi anu béda.
Kitosan (80 kDa) (3%) anu ditimbang kalawan akurat dileyurkeun dina asam asetat 1% nganggo pengaduk magnét. Kana larutan kitosan anu dihasilkeun ditambahkeun 1% PEG 400 teras diaduk salami 30 menit. Tuang larutan anu dihasilkeun kana wadah pasagi atanapi pasagi panjang teras bekukeun dina suhu -80°C salami 12 jam. Sampel anu dibekukeun diliofilisasi salami 48 jam pikeun kéngingkeun Cs13 anu berpori.
NFRCS anu dimekarkeun diuji coba nganggo spéktroskopi infra red transformasi Fourier (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Tokyo, Jepang) pikeun mastikeun kasaluyuan kimiawi kitosan sareng polimér sanés14,15. Spéktra FTIR (lébar rentang spéktral ti 400 dugi ka 4000 cm-1) tina sadaya sampel anu diuji diala ku cara ngalakukeun 32 scan.
Laju panyerepan getih (BAR) pikeun sadaya formulasi dievaluasi nganggo metode anu dijelaskeun ku Chen et al. 16 kalayan modifikasi sakedik. NFRK anu dimekarkeun tina sadaya komposisi dikeringkeun dina oven vakum dina suhu 105°C sapeuting pikeun miceun sésa pangleyur. 30 mg NFRCS (beurat sampel awal - W0) sareng 30 mg Ct (kontrol positif) disimpen dina piring anu misah anu ngandung premix 3,8% natrium sitrat. Dina interval waktos anu ditangtukeun, nyaéta 5, 10, 20, 30, 40 sareng 60 detik, NFRCS dipiceun sareng permukaanana dibersihkeun tina getih anu teu diserep ku cara nempatkeun sampel dina Ct salami 30 detik. Beurat ahir getih anu diserep ku NFRCS 16 dipertimbangkeun (W1) dina unggal titik waktos. Hitung persentase BAR nganggo rumus ieu:
Waktu pembekuan getih (BCT) ditangtukeun sakumaha anu dilaporkeun ku Wang et al. 17. Waktu anu diperyogikeun pikeun getih lengkep (getih beurit anu dicampur sareng 3,8% natrium sitrat) pikeun ngagumpal dina ayana NFRCS diitung salaku BCT tina sampel tés. Rupa-rupa komponén NFRCS (30 mg) disimpen dina botol tutup sekrup 10 ml sareng diinkubasi dina suhu 37°C. Getih (0,5 ml) ditambahkeun kana botol sareng 0,3 ml 0,2 M CaCl2 ditambahkeun pikeun ngaktipkeun koagulasi getih. Pamungkas, balikkeun botol unggal 15 detik (dugi ka 180°) dugi ka gumpalan anu pageuh kabentuk. BCT sampel diperkirakeun ku jumlah flips vails17,18. Dumasar kana BCT, dua komposisi optimal tina NFRCS Cm, Ch sareng Cp dipilih pikeun studi karakterisasi salajengna.
BCT tina komposisi Ch NFRCS sareng Cp NFRCS ditangtukeun ku cara nerapkeun metode anu dijelaskeun ku Li et al. 19. Tempatkeun 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS, sareng Cs (kontrol positif) kana cawan Petri anu misah (37 °C). Getih anu ngandung 3,8% natrium sitrat dicampur sareng 0,2 M CaCl2 dina babandingan volume 10:1 pikeun ngamimitian prosés pembekuan getih. 20 µl campuran getih beurit 0,2 M CaCl2 diterapkeun kana permukaan sampel sareng disimpen dina cawan Petri anu kosong. Kontrolna nyaéta getih anu dituang kana cawan Petri anu kosong tanpa Ct. Dina interval anu tetep 0, 3, sareng 5 menit, eureunkeun pembekuan ku cara nambihan 10 ml cai deionisasi (DI) kana sampel anu ngandung cawan tanpa ngaganggu gumpalan. Éritrosit anu teu koagulasi (éritrosit) ngalaman hémolisis dina ayana cai deionisasi sareng ngaleupaskeun hémoglobin. Hémoglobin dina titik waktu anu béda (HA(t)) diukur dina 540 nm (hémoglobin λmax) nganggo spéktrofotométer UV-Vis. Serapan absolut hémoglobin (AH(0)) dina 0 menit tina 20 µl getih dina 10 ml cai deionisasi dicandak salaku standar rujukan. Serapan hémoglobin relatif (RHA) getih anu dikoagulasi diitung tina babandingan HA(t)/HA(0) nganggo angkatan getih anu sami.
Ngagunakeun alat penganalisis tékstur (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, AS), sipat perekat NFRK kana jaringan anu ruksak ditangtukeun. Pencét piring silinder anu handapna kabuka kana jero kulit babi (tanpa lapisan lemak). Sampel (Ch NFRCS sareng Cp NFRCS) diterapkeun ngalangkungan kanula kana cetakan silinder pikeun nyiptakeun adhesi kana kulit babi. Saatos inkubasi 3 menit dina suhu kamar (RT) (25° C.), kakuatan perekat NFRCS dirékam dina laju konstan 0,5 mm/detik.
Fitur utama sealant bedah nyaéta pikeun ningkatkeun pembekuan getih bari ngirangan leungitna getih. Koagulasi tanpa rugi dina NFRCS dievaluasi nganggo metode anu diterbitkeun sateuacanna kalayan modifikasi sakedik 19. Jieun tabung mikrosentrifugasi (2 ml) (diaméter jero 10 mm) kalayan liang 8 × 5 mm2 dina hiji sisi tabung sentrifugasi (ngawakilan tatu kabuka). NFRCS dianggo pikeun nutup bubuka sareng pita dianggo pikeun ngégél ujung luar. Tambahkeun 20 µl 0,2 M CaCl2 kana tabung mikrosentrifugasi anu ngandung premix natrium sitrat 3,8%. Saatos 10 menit, tabung mikrosentrifugasi dikaluarkeun tina piring sareng paningkatan massa piring ditangtukeun kusabab aliran getih tina NFRK (n = 3). Kaleungitan getih Ch NFRCS sareng Cp NFRCS dibandingkeun sareng Cs.
Integritas baseuh NFRCS ditangtukeun dumasar kana metode anu dijelaskeun ku Mishra sareng Chaudhary21 kalayan modifikasi sakedik. Tempatkeun NFRCS dina labu Erlenmeyer 100 ml sareng 50 ml cai teras aduk salami 60 detik tanpa ngabentuk luhurna. Inspeksi visual sareng prioritas sampel pikeun integritas fisik dumasar kana pangumpulan.
Kakuatan ngiket HFFC ka Ct diulik ngagunakeun metode anu parantos diterbitkeun sateuacanna kalayan modifikasi minor. Integritas palapis permukaan ditaksir ku cara ngalaan NFRK kana gelombang akustik (stimulus éksternal) dina ayana cai milliQ (Ct). NFRCS Ch NFRCS sareng Cp NFRCS anu dimekarkeun disimpen dina gelas kimia anu dieusi cai sareng disonikasi salami 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, sareng 30 menit, masing-masing. Saatos dikeringkeun, bédana persentase antara beurat awal sareng akhir NFRCS dianggo pikeun ngitung persén leungitna bahan (HFFC). BCT in vitro langkung ngadukung kakuatan ngiket atanapi leungitna bahan permukaan. Efisiensi ngiket HFFC ka Ct nyayogikeun koagulasi getih sareng palapis elastis dina permukaan Ct22.
Homogenitas NFRCS anu dimekarkeun ditangtukeun ku BCT sampel (30 mg) anu dicandak tina lokasi umum NFRCS anu dipilih sacara acak. Turutan prosedur BCT anu parantos disebatkeun sateuacanna pikeun nangtukeun patuh kana NFRCS. Jarak antara lima sampel mastikeun panutupan permukaan anu seragam sareng déposisi HFFC dina bolong Ct.
Area kontak getih nominal (NBCA) ditangtukeun sapertos anu dilaporkeun sateuacanna kalayan sababaraha modifikasi. Koagulasi getih ku cara ngajepit 20 µl getih antara dua permukaan Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS sareng Cs. Saatos 1 jam, dua bagian stent dipisahkeun sareng diukur sacara manual area gumpalan. Nilai rata-rata tilu pangulangan dianggap NBCA NFRCS19.
Analisis Dynamic Vapor Sorption (DVS) dianggo pikeun meunteun efektivitas NFRCS pikeun nyerep cai tina lingkungan éksternal atanapi tina situs tatu anu tanggung jawab pikeun ngamimitian koagulasi. DVS meunteun atanapi ngarékam serapan sareng leungitna uap dina sampel sacara gravimetri nganggo kasaimbangan ultra-sénsitip kalayan résolusi massa ±0,1 µg. Tekanan uap parsial (kalembaban relatif) dihasilkeun ku pangontrol aliran massa éléktronik di sakitar sampel ku cara nyampur gas pembawa jenuh sareng garing. Numutkeun pedoman Farmakope Éropa, dumasar kana persentase panyerepan Uap ku sampel, sampel dikategorikeun kana 4 kategori (0–0,012% w/w− non-higroskopis, 0,2–2% w/w rada higroskopis, 2–15% sedeng higroskopis, sareng > 15% higroskopis pisan)23. Numutkeun pedoman Farmakope Éropa, dumasar kana persentase panyerepan Uap ku sampel, sampel dikategorikeun kana 4 kategori (0–0,012% w/w− non-higroskopis, 0,2–2% w/w rada higroskopis, 2–15% sedeng higroskopis, sareng > 15% higroskopis pisan)23.Saluyu sareng rekomendasi Farmakope Éropa, gumantung kana persentase panyerepan Uap ku sampel, sampel dibagi kana 4 kategori (0–0,012% w/w – non-higroskopis, 0,2–2% w/w rada higroskopis, 2–15%).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % sedeng higroskopis sareng > 15% higroskopis pisan)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0.012% w/w- 湁% 【【、 w/w 轻微吸湿性,2-15 % 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23.根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 分为 分为 分为 分为 分为 w.（ 类 2（ 0/w 1吸湿 性 、 、 、 、 0.2-2% W/w 轻微 , 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23.Saluyu sareng rekomendasi Farmakope Éropa, sampel dibagi kana 4 kelas gumantung kana persentase Uap anu diserep ku sampel (0-0,012% beurat - non-higroskopis, 0,2-2% beurat rada higroskopis, 2-15% beurat).% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % higroskopis sedeng, > 15% higroskopis pisan) 23.Efisiensi higroskopis NFCS X NFCS sareng TsN NFCS ditangtukeun dina analiser DVS TA TGA Q5000 SA. Salila prosés ieu, waktos ngajalankeun, kalembaban relatif (RH), sareng beurat sampel waktos nyata dina 25°C24 diala. Kandungan Uap cai diitung ku analisis massa NFRCS anu akurat nganggo persamaan ieu:
MC nyaéta kalembaban NFRCS. m1 – beurat garing NSAID. m2 nyaéta massa NFRCS real-time dina RH anu dipasihkeun.
Lega total permukaan diperkirakeun nganggo ékspérimén adsorpsi nitrogén nganggo nitrogén cair saatos ngosongkeun sampel dina suhu 25 °C salami 10 jam (< 7 × 10–3 Torr). Lega total permukaan diperkirakeun nganggo ékspérimén adsorpsi nitrogén nganggo nitrogén cair saatos ngosongkeun sampel dina suhu 25 °C salami 10 jam (< 7 × 10–3 Torr). Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азота жидким азотом после опорожнраци ° 5 течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). Lega total permukaan diperkirakeun ngagunakeun ékspérimén adsorpsi nitrogén nganggo nitrogén cair saatos sampel dikosongkeun dina suhu 25°C salami 10 jam (< 7 × 10–3 Torr).在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实验估计总表面积。25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбции азота жидким азотом пороблера течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). Lega total permukaan diperkirakeun ngagunakeun ékspérimén adsorpsi nitrogén nganggo nitrogén cair saatos sampel dikosongkeun salami 10 jam dina suhu 25°C (< 7 x 10-3 torr).Lega total permukaan, volume pori, sareng ukuran pori NFRCS ditangtukeun nganggo Quantachrome ti NOVA 1000e, Austria nganggo parangkat lunak RS 232.
Siapkeun 5% RBC (salin salaku pangencerna) tina getih lengkep. Teras pindahkeun sajumlah HFFC (0,25 ml) kana piring 96-sumur sareng massa RBC 5% (0,1 ml). Inkubasi campuran dina suhu 37°C salami 40 menit. Campuran sél getih beureum sareng sérum dianggap salaku kontrol positif, sareng campuran salin sareng sél getih beureum salaku kontrol négatif. Hémaglutinasi ditangtukeun numutkeun skala Stajitzky. Skala anu diusulkeun nyaéta sapertos kieu: + + + + agregat granular padet; + + + bantalan handap anu lemes kalayan ujung anu melengkung; + + bantalan handap anu lemes kalayan ujung anu soék; + cincin beureum sempit di sakitar ujung bantalan lemes; – (négatif) tombol beureum diskrit 12 di tengah sumur handap.
Hémokompatibilitas NFRCS diulik dumasar kana metode Organisasi Internasional pikeun Standardisasi (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27. Métode gravimetrik anu dijelaskeun ku Singh et al. Modifikasi minor dilakukeun pikeun meunteun formasi trombus nalika aya atanapi dina permukaan NFRCS. 500 mg Cs, Ch NFRCS sareng Cp NFRCS diinkubasi dina larutan saline buffer fosfat (PBS) salami 24 jam dina suhu 37°C. Saatos 24 jam, PBS dipiceun sareng NFRCS dirawat ku 2 ml getih anu ngandung 3,8% natrium sitrat. Dina permukaan NFRCS, tambahkeun 0,04 ml 0,1 M CaCl2 kana sampel anu diinkubasi. Saatos 45 menit, 5 ml cai sulingan ditambahkeun pikeun ngeureunkeun koagulasi. Getih anu dikoagulasi dina permukaan NFRK dirawat ku larutan formaldehida 36-38%. Gumpalan anu difiksasi ku formaldehida dikeringkeun sareng ditimbang. Persentase trombosis dikira-kira ku cara ngitung beurat gelas tanpa getih sareng sampel (kontrol négatif) sareng gelas anu aya getihna (kontrol positif).
Salaku konfirmasi awal, sampel-sampel éta divisualisasikeun dina mikroskop optik pikeun ngartos kamampuan palapis permukaan HFFC, Ct anu saling nyambung, sareng jaringan Ct pikeun ngabentuk pori-pori. Bagian ipis Ch sareng Cp tina NFRCS dipangkas ku bilah scalpel. Bagian anu dihasilkeun disimpen dina slide kaca, ditutup ku coverslip, sareng ujung-ujungna dipasangkeun ku lem. Slide anu disiapkeun ditingali dina mikroskop optik sareng poto dicandak dina pembesaran anu béda-béda.
Déposisi polimér dina jaringan Ct divisualisasikeun nganggo mikroskop fluoresensi dumasar kana metode anu dijelaskeun ku Rice et al.29. Komposisi HFFC anu dianggo pikeun formulasi ieu dicampur sareng pewarna fluoresensi (bayam), sareng NFRCS (Ch & Cp) disiapkeun numutkeun metode anu disebatkeun sateuacanna. Komposisi HFFC anu dianggo pikeun formulasi ieu dicampur sareng pewarna fluoresensi (bayam), sareng NFRCS (Ch & Cp) disiapkeun numutkeun metode anu disebatkeun sateuacanna.Komposisi HFFC anu dianggo pikeun formulasi dicampur sareng pewarna fluoresensi (bayam) teras NFRCS (Ch sareng Cp) diala numutkeun metode anu parantos disebatkeun sateuacanna.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法到的方法制制制天Ch。将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法到的方法制制制天Ch。Komposisi HFFC anu dianggo dina formulasi ieu dicampur sareng pewarna fluoresensi (Amaranth) sareng nampi NFRCS (Ch sareng Cp), sapertos anu parantos disebatkeun sateuacanna.Bagian ipis NFRK dipotong tina sampel anu diala, disimpen dina slide kaca, teras ditutup ku cover slip. Titénan slide anu disiapkeun dina mikroskop fluoresensi nganggo filter héjo (310-380 nm). Gambar dicandak dina pembesaran 4x pikeun ngartos hubungan Ct sareng déposisi polimér anu kaleuleuwihi dina jaringan Ct.
Topografi permukaan NFRCS Ch sareng Cp ditangtukeun nganggo mikroskop gaya atom (AFM) kalayan kantilever TESP anu seukeut pisan dina modeu tapping: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Taiwan. Kasar permukaan ditangtukeun ku root mean square (RMS) nganggo parangkat lunak (Scanning Probe Image Processor). Rupa-rupa lokasi NFRCS dirender dina gambar 3D pikeun mariksa keseragaman permukaan. Simpangan baku skor pikeun daérah anu ditangtukeun dihartikeun salaku kasar permukaan. Persamaan RMS dianggo pikeun ngitung kasar permukaan NFRCS31.
Panilitian dumasar FESEM dilaksanakeun nganggo FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokyo, pikeun ngartos morfologi permukaan Ch NFRCS sareng Cp NFRCS, anu nunjukkeun BCT anu langkung saé tibatan Cm NFRCS. Panilitian FESEM dilaksanakeun numutkeun metode anu dijelaskeun ku Zhao et al. 32 kalayan modifikasi sakedik. NFRCS 20 dugi ka 30 mg Ch NFRCS sareng Cp NFRCS dicampur sateuacanna sareng 20 µl 3,8% natrium sitrat anu dicampur sateuacanna sareng getih beurit. 20 μl 0,2 M CaCl2 ditambahkeun kana sampel anu dirawat getih pikeun ngamimitian koagulasi sareng sampel diinkubasi dina suhu kamar salami 10 menit. Salaku tambahan, kaleuwihan éritrosit dipiceun tina permukaan NFRCS ku cara dibilas ku saline.
Sampel salajengna dirawat ku glutaraldehida 0,1% teras dikeringkeun dina oven hawa panas dina suhu 37°C pikeun miceun Uap. Sampel anu garing dilapis sareng dianalisis 32. Gambar sanés anu diala nalika analisis nyaéta formasi gumpalan dina permukaan serat kapas individu, déposisi polimér antara Ct, morfologi (bentuk) éritrosit, integritas gumpalan, sareng morfologi éritrosit dina ayana NFRCS. Daérah NFRCS anu henteu diolah sareng daérah NFRCS anu diolah Ch sareng Cp anu diinkubasi ku getih di-scan pikeun ion unsur (natrium, kalium, nitrogén, kalsium, magnésium, séng, tambaga sareng selenium) 33. Bandingkeun perséntase ion unsur antara sampel anu diolah sareng anu henteu diolah pikeun ngartos akumulasi ion unsur nalika formasi gumpalan sareng homogenitas gumpalan.
Kandel palapis permukaan Cp HFFC dina permukaan Ct ditangtukeun nganggo FESEM. Penampang Cp NFRCS dipotong tina rangka sareng dilapis ku sputter. Sampel palapis sputter anu dihasilkeun dititénan ku FESEM sareng kandel palapis permukaan diukur 34, 35, 36.
Mikro-CT sinar-X nyayogikeun pencitraan non-destruktif 3D résolusi luhur sareng ngamungkinkeun anjeun pikeun nalungtik susunan struktural internal NFRK. Mikro-CT nganggo sinar-X anu nembus sampel pikeun ngarékam koéfisién atenuasi linier lokal sinar-X dina sampel, anu ngabantosan kéngingkeun inpormasi morfologis. Lokasi internal Ct dina Cp NFRCS sareng Cp NFRCS anu dirawat getih ditalungtik ku mikro-CT pikeun ngartos efisiensi panyerepan sareng pembekuan getih dina ayana NFRCS37,38,39. Struktur 3D sampel Cp NFRCS anu dirawat getih sareng henteu dirawat direkonstruksi nganggo mikro-CT (V|tome|x S240, Phoenix, Jerman). Nganggo parangkat lunak VG STUDIO-MAX vérsi 2.2, sababaraha gambar sinar-X dicandak tina sudut anu béda (idealna cakupan 360°) pikeun ngembangkeun gambar 3D pikeun NFRCS. Data proyéksi anu dikumpulkeun direkonstruksi kana gambar volumetrik 3D nganggo parangkat lunak 3D ScanIP Academic anu saderhana.
Salian ti éta, pikeun ngartos distribusi gumpalan getih, 20 µl getih sitrat anu tos dicampur sareng 20 µl 0,2 M CaCl2 ditambahkeun kana NFRCS pikeun ngamimitian pembekuan getih. Sampel anu disiapkeun diantos dugi ka mengeras. Beungeut NFRK dirawat ku 0,5% glutaraldehida sareng dikeringkeun dina oven hawa panas dina suhu 30–40°C salami 30 menit. Gumpalan getih anu kabentuk dina NFRCS di-scan, direkonstruksi, sareng gambar 3D gumpalan getih divisualisasikeun.
Uji antibakteri dilakukeun dina Cp NFRCS (pangsaéna dibandingkeun sareng Ch NFRCS) nganggo metode anu parantos dijelaskeun sateuacanna kalayan modifikasi sakedik. Aktivitas antibakteri Cp NFRCS sareng Cp HFFC ditangtukeun nganggo tilu mikroorganisme uji anu béda [S.aureus (baktéri gram-positip), E.coli (baktéri gram-négatip) sareng Candida bodas (C.albicans)] anu tumbuh dina agar dina cawan Petri dina inkubator. Inokulasi sacara seragam 50 ml suspénsi kultur baktéri anu diéncérkeun dina konsentrasi 105-106 CFU ml-1 kana média agar. Tuang média kana cawan Petri sareng antepkeun pikeun ngabeku. Sumur dijieun dina permukaan piring agar pikeun dieusi ku HFFC (3 sumur pikeun HFFC sareng 1 pikeun kontrol négatif). Tambahkeun 200 µl HFFC kana 3 sumur sareng 200 µl pH 7,4 PBS kana sumur ka-4. Di sisi séjén cawan petri, tempatkeun cakram Cp NFRCS 12 mm dina agar anu geus padet teras baseuhan ku PBS (pH 7.4). Tablet Ciprofloxacin, ampicillin sareng fluconazole dianggap standar rujukan pikeun Staphylococcus aureus, Escherichia coli sareng Candida albicans. Ukur zona inhibisi sacara manual sareng candak gambar digital tina zona inhibisi.
Saatos persetujuan étika institusional, panilitian ieu dilaksanakeun di Kasturba Medical College of Education and Research di Manipal, Karnataka, di India kidul. Protokol ékspériméntal TEG in vitro parantos diulas sareng disatujuan ku Komite Étika Institusional Kasturba Medical College, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020). Subjék direkrut ti donor getih sukarelawan (umur 18 dugi ka 55) ti bank getih rumah sakit. Salian ti éta, formulir idin anu diinformasikeun diala ti para sukarelawan pikeun ngumpulkeun sampel getih. TEG asli (N-TEG) ​​​​dianggo pikeun nalungtik pangaruh formulasi Cp HFFC kana getih lengkep anu dicampur sareng natrium sitrat. N-TEG sacara lega dikenal pikeun peranna dina resusitasi di tempat perawatan, anu nyiptakeun masalah pikeun dokter kusabab poténsi reureuh klinis anu signifikan dina hasil (tés koagulasi rutin). Analisis N-TEG dilaksanakeun nganggo getih lengkep. Idin anu diinformasikeun sareng riwayat médis anu lengkep diala ti sadaya pamilon. Panilitian ieu henteu ngalebetkeun pamilon anu ngagaduhan komplikasi hemostatik atanapi trombotik sapertos kakandungan/postpartum atanapi panyakit ati. Subjék anu nginum obat anu mangaruhan kaskade koagulasi ogé dikaluarkeun tina panilitian. Tés laboratorium dasar (hémoglobin, waktos protrombin, tromboplastin anu diaktipkeun sareng jumlah trombosit) dilakukeun ka sadaya pamilon numutkeun prosedur standar. N-TEG nangtukeun viskoelastisitas gumpalan getih, struktur gumpalan awal, interaksi partikel, penguatan gumpalan, sareng lisis gumpalan. Analisis N-TEG nyayogikeun data grafis sareng numerik ngeunaan pangaruh koléktif sababaraha unsur sélular sareng plasma. Analisis N-TEG dilakukeun dina dua volume Cp HFFC anu béda (10 µl sareng 50 µl). Hasilna, 1 ml getih lengkep sareng asam sitrat ditambahkeun kana 10 μl Cp HFFC. Tambahkeun 1 ml (Cp HFFC + getih sitrat), 340 µl getih campuran kana 20 µl 0,2 M CaCl2 anu ngandung piring TEG. Saatos éta, piringan TEG dimuat kana TEG® 5000, US pikeun ngukur R, K, sudut alfa, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% sampel getih kalayan ayana Cp HFFC41.
Protokol panilitian in vivo parantos ditinjau sareng disatujuan ku Komite Étika Sato Institusional (IAEC), Sakola Kedokteran Kasturba, Institut Pendidikan Tinggi Manipal, Manipal (IAEC/KMC/69/2020). Sadaya ékspérimén sato dilaksanakeun saluyu sareng rekomendasi Komite pikeun Kontrol sareng Pangawasan Ékspérimén Sato (CPCSEA). Sadaya panilitian NFRCS in vivo (2 × 2 cm2) dilaksanakeun dina beurit Wistar bikang (beuratna 200 dugi ka 250 g). Sadaya sato diaklimatisasi dina suhu 24-26°C, sato-sato éta ngagaduhan aksés bébas kana tuangeun standar sareng cai ad libitum. Sadaya sato dibagi sacara acak kana kelompok anu béda, unggal kelompok diwangun ku tilu sato. Sadaya panilitian dilaksanakeun saluyu sareng Studi Sato: Laporan Ékspérimén In Vivo 43. Sateuacan panilitian, sasatoan dibius ku cara administrasi intraperitoneal (ip) campuran 20-50 mg ketamin (per 1 kg beurat awak) sareng 2-10 mg xylazine (per 1 kg beurat awak). Saatos panilitian, volume perdarahan diitung ku cara meunteun bédana antara beurat awal sareng ahir sampel, nilai rata-rata anu diala tina tilu tés dicandak salaku volume perdarahan sampel.
Modél amputasi buntut beurit diimplementasikeun pikeun ngartos poténsi NFRCS pikeun ngamodulasi perdarahan dina trauma, tarung, atanapi kacilakaan lalu lintas (modél tatu). Potong 50% buntut ku bilah scalpel sareng tempatkeun dina hawa salami 15 detik pikeun mastikeun perdarahan normal. Salaku tambahan, sampel tés disimpen dina buntut beurit ku cara nerapkeun tekanan (Ct, Cs, Ch NFRCS sareng Cp NFRCS). Perdarahan sareng PCT dilaporkeun pikeun spésimén tés (n ​​= 3)17,45.
Éféktivitas kontrol tekanan NFRCS dina tarung ditalungtik dina modél arteri femoral superfisial. Arteri femoral diungkabkeun, ditusuk ku trocar 24G, teras dikaluarkeun getih dina 15 detik. Saatos perdarahan anu teu dikontrol katingali, spésimén tés disimpen dina tempat tusukan kalayan tekanan anu diterapkeun. Langsung saatos aplikasi sampel tés, waktos pembekuan dicatet sareng efisiensi hemostatik dititénan salami 5 menit salajengna. Prosedur anu sami diulang nganggo Cs sareng Ct46.
Dowling et al. 47 ngajukeun modél tatu ati pikeun meunteun poténsi hemostatik bahan hemostatik dina kontéks perdarahan intraoperatif. BCT dirékam pikeun sampel Ct (kontrol négatif), kerangka Cs (kontrol positif), sampel Ch NFRCS, sareng sampel Cp NFRCS. Véna cava suprahepatik beurit diekspos ku ngalakukeun laparotomi median. Saatos éta, bagian distal lobus kénca dipotong nganggo gunting. Jieun sayatan dina ati nganggo bilah scalpel sareng antepkeun ngaluarkeun getih salami sababaraha detik. Sampel tés Ch NFRCS sareng Cp NFRCS anu ditimbang sacara akurat disimpen dina permukaan anu ruksak tanpa tekanan positif sareng BCT dirékam. Kelompok kontrol (Ct) teras nerapkeun tekanan dituturkeun ku Cs 30 s47 tanpa megatkeun tatu.
Uji penyembuhan tatu in vivo dilakukeun nganggo modél tatu éksisi pikeun meunteun sipat penyembuhan tatu tina NFRCS berbasis polimér anu dimekarkeun. Modél tatu éksisi dipilih sareng dilakukeun numutkeun metode anu diterbitkeun sateuacanna kalayan modifikasi minor19,32,48. Sadaya sato dibius sapertos anu dijelaskeun sateuacanna. Anggo punch biopsi (12 mm) pikeun ngadamel sayatan bunderan anu jero dina kulit tonggong. Situs tatu anu disiapkeun dibalut ku Cs (kontrol positif), Ct (ngakuan yén kapas ngaganggu penyembuhan), Ch NFRCS sareng Cp NFRCS (kelompok ékspérimén) sareng kontrol négatip tanpa perlakuan naon waé. Dina unggal dinten panilitian, daérah tatu diukur dina sadaya beurit. Anggo kaméra digital pikeun nyandak gambar daérah tatu sareng nganggo perban énggal. Persentase panutupan tatu diukur ku rumus ieu:
Dumasar kana persentase panutupan tatu dina dinten ka-12 panilitian, kulit beurit tina kelompok anu pangsaéna dipotong ((Cp NFRCS) sareng kelompok kontrol) teras dikaji ku pewarnaan H&E sareng pewarnaan trikrom Masson. Dumasar kana persentase panutupan tatu dina dinten ka-12 panilitian, kulit beurit tina kelompok anu pangsaéna dipotong ((Cp NFRCS) sareng kelompok kontrol) teras dikaji ku pewarnaan H&E sareng pewarnaan trikrom Masson.Dumasar kana perséntase panutupan tatu dina dinten ka-12 panilitian, kulit beurit tina kelompok pangsaéna ((Cp NFRCS) sareng kelompok kontrol) dipotong sareng dipariksa ku cara diwarnaan ku hematoxylin-eosin sareng trikrom Masson.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Masson三色染色研究。根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和眳组）Tikus dina grup pangsaéna ((Cp NFRCS) sareng grup kontrol) dipotong pikeun pewarnaan hematoxylin-eosin sareng pewarnaan trikrom Masson dumasar kana persén panutupan tatu dina dinten ka-12 panilitian.Prosedur pewarnaan anu dilaksanakeun dilaksanakeun dumasar kana metode anu parantos dijelaskeun sateuacanna49,50. Sacara singget, saatos fiksasi dina formalin 10%, sampel didehidrasi nganggo sarangkaian alkohol anu dinilai. Anggo mikrotom pikeun kéngingkeun bagian ipis (tebal 5 µm) tina jaringan anu dipotong. Bagian serial ipis kontrol sareng Cp NFRCS dirawat ku hematoxylin sareng eosin pikeun nalungtik parobahan histopatologis. Pewarnaan trikrom Masson dianggo pikeun ngadeteksi formasi fibril kolagen. Hasil anu diala di diajar sacara lolong ku ahli patologi.
Stabilitas sampel Cp NFRCS dititénan dina suhu kamar (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) salami 12 bulan51. Cp NFRCS (perubahan warna permukaan sareng kamekaran mikroba) dipariksa sacara visual sareng diuji pikeun résistansi maké lipatan sareng BCT numutkeun metode di luhur anu dijelaskeun dina bagian Bahan sareng Métode.
Skalabilitas sareng réproduksibilitas Cp NFRCS ditalungtik ku cara nyiapkeun Cp NFRCS kalayan ukuran 15 × 15 cm2. Salian ti éta, 30 mg sampel (n = 5) dipotong tina rupa-rupa fraksi Cp NFRCS sareng BCT tina sampel anu ditalungtik dievaluasi sapertos anu dijelaskeun sateuacanna dina bagian Métode.
Kami parantos nyobian ngembangkeun rupa-rupa bentuk sareng struktur nganggo komposisi Cp NFRCS pikeun rupa-rupa aplikasi biomédis. Bentuk atanapi konfigurasi sapertos kitu kalebet swab kerucut pikeun mimisan, prosedur dental, sareng swab silinder pikeun perdarahan heunceut.
Sadaya set data dikedalkeun salaku rata-rata ± simpangan baku sareng dianalisis ku ANOVA nganggo Prism 5.03 (GraphPad, San Diego, CA, USA) dituturkeun ku uji babandingan ganda Bonferroni (*p<0.05).
Sadaya prosedur anu dilakukeun dina panilitian manusa saluyu sareng standar Institut sareng Déwan Panalungtikan Nasional, ogé Déklarasi Helsinki 1964 sareng amandemen salajengna, atanapi standar étika anu sami. Sadaya pamilon dibéjaan ngeunaan fitur panilitian sareng sifat sukarela na. Data pamilon tetep rahasia saatos dikumpulkeun. Protokol ékspérimén TEG in vitro parantos diulas sareng disatujuan ku Komite Étika Institusional Kasturba Medical College, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020). Sukarelawan nandatanganan idin anu diinformasikeun pikeun ngumpulkeun sampel getih.
Sadaya prosedur anu dilakukeun dina panilitian sato dilaksanakeun saluyu sareng Fakultas Kedokteran Kastuba, Institut Pendidikan Tinggi Manipal, Manipal (IAEC/KMC/69/2020). Sadaya ékspérimén sato anu dirancang dilaksanakeun saluyu sareng pedoman Komite pikeun Kontrol sareng Pangawasan Ékspérimén Sato (CPCSEA). Sadaya panulis nuturkeun pedoman ARRIVE.
Spéktra FTIR sadaya NFRCS dianalisis sareng dibandingkeun sareng spéktrum kitosan anu dipidangkeun dina Gambar 2A. Puncak spéktral karakteristik kitosan (kacatet) dina 3437 cm-1 (peregangan OH sareng NH, tumpang tindih), 2945 sareng 2897 cm-1 (peregangan CH), 1660 cm-1 (galur NH2), 1589 cm-1 (bengkokan N–H), 1157 cm-1 (peregangan sasak O-), 1067 cm-1 (peregangan C–O, hidroksil sekundér), 993 cm-1 (peregangan CO, Bo-OH) 52.53.54. Tabel Tambahan S1 nunjukkeun nilai spéktrum serapan FTIR NFRCS pikeun kitosan (reporter), kitosan murni, Cm, Ch, sareng Cp. Spéktra FTIR sadaya NFRCS (Cm, Ch sareng Cp) nunjukkeun pita serapan karakteristik anu sami sareng kitosan murni tanpa aya parobahan anu signifikan (Gambar 2A). Hasil FTIR mastikeun henteuna interaksi kimiawi atanapi fisik antara polimér anu dianggo pikeun ngembangkeun NFRCS, nunjukkeun yén polimér anu dianggo téh inert.
Karakterisasi in vitro Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS sareng Cs. (A) ngagambarkeun spéktra FTIR gabungan tina komposisi kitosan sareng Cm NFRCS, Ch NFRCS sareng Cp NFRCS dina kaayaan komprési. (B) a) Laju serapan getih lengkep NFRCS Cm, Ch, Cp, sareng Cg (n = 3); Sampel Ct nunjukkeun BAR anu langkung luhur sabab kapas gaduh efisiensi serapan anu langkung luhur; b) Getih saatos serapan getih Ilustrasi sampel anu diserep. Répréséntasi grafis tina BCT sampel tés C (Cp NFRCS gaduh BCT anu pangsaéna (15 s, n = 3)). Data dina C, D, E, sareng G dipidangkeun salaku rata-rata ± SD, sareng bilah kasalahan ngagambarkeun SD, ***p < 0,0001. Data dina C, D, E, sareng G dipidangkeun salaku rata-rata ± SD, sareng bilah kasalahan ngagambarkeun SD, ***p < 0,0001. Данные в C, D, E и G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей представляют сталнот, *** <0.0001. Data dina C, D, E, sareng G dipidangkeun salaku rata-rata ± simpangan baku, sareng bilah kasalahan ngagambarkeun simpangan baku, ***p<0.0001. C, D, E 和 G 中的数据显示为平均会± SD，误差线代表SD，***p <0.0001. C, D, E 和 G 中的数据显示为平均会± SD，误差线代表SD，***p <0.0001. Данные в C, D, E и G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрешностей представляют старнди, *** <0.0001. Data dina C, D, E, sareng G dipidangkeun salaku rata-rata ± simpangan baku, bilah kasalahan ngagambarkeun simpangan baku, ***p<0.0001.