Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद. तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझरच्या आवृत्तीमध्ये CSS साठी मर्यादित समर्थन आहे. सर्वोत्तम अनुभवासाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही अद्ययावत ब्राउझर वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये कॉम्पॅटिबिलिटी मोड अक्षम करा). यादरम्यान, सतत समर्थन सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही ही साइट स्टाईल्स आणि जावास्क्रिप्टशिवाय प्रस्तुत करू.
अनियंत्रित रक्तस्त्राव हे मृत्यूच्या प्रमुख कारणांपैकी एक आहे. जलद रक्तस्त्राव थांबवल्याने, युद्ध, वाहतूक अपघात आणि मृत्यू कमी करण्याच्या मोहिमांदरम्यान प्रथमोपचार म्हणून व्यक्तीचे जगणे सुनिश्चित होते. साध्या रक्तस्त्राव थांबवणाऱ्या फिल्म-फॉर्मिंग कंपोझिशन (HFFC) पासून एक सलग टप्पा म्हणून तयार केलेले नॅनोपोरस फायबर-प्रबलित कंपोझिट स्कॅफोल्ड (NFRCS) रक्तस्त्राव थांबवण्याची प्रक्रिया सुरू करू शकते आणि वाढवू शकते. NFRCS चा विकास ड्रॅगनफ्लायच्या पंखांच्या रचनेवर आधारित आहे. ड्रॅगनफ्लायच्या पंखांच्या संरचनेत आडवे आणि उभे पंख असतात आणि सूक्ष्म संरचनेची अखंडता टिकवून ठेवण्यासाठी पंखांचे पडदे एकमेकांना जोडलेले असतात. HFFC फायबरच्या पृष्ठभागावर नॅनोमीटर जाडीच्या फिल्मचा एकसमान थर चढवते आणि यादृच्छिकपणे वितरित कापसाच्या जाडीला (Ct) (विखुरलेला टप्पा) जोडून एक नॅनोपोरस रचना तयार करते. सलग आणि विखुरलेल्या टप्प्यांच्या संयोजनामुळे व्यावसायिकरित्या उपलब्ध उत्पादनांच्या तुलनेत उत्पादनाची किंमत दहा पटीने कमी होते. सुधारित NFRCS (टॅम्पन्स किंवा मनगटपट्ट्या) विविध बायोमेडिकल अनुप्रयोगांमध्ये वापरले जाऊ शकतात. इन विवो अभ्यासातून असा निष्कर्ष निघाला आहे की, विकसित केलेले Cp NFRCS लावलेल्या ठिकाणी रक्त गोठण्याच्या प्रक्रियेला चालना देते आणि वाढवते. NFRCS त्याच्या नॅनोपोरस संरचनेमुळे सूक्ष्म वातावरणात बदल घडवून आणू शकते आणि पेशीय स्तरावर कार्य करू शकते, ज्यामुळे छेदन जखमेच्या मॉडेलमध्ये जखम अधिक चांगल्या प्रकारे भरून येते.
लढाईदरम्यान, शस्त्रक्रियेदरम्यान आणि आपत्कालीन परिस्थितीत अनियंत्रित रक्तस्त्राव जखमींच्या जीवाला गंभीर धोका निर्माण करू शकतो¹. या परिस्थितींमुळे परिघीय रक्तवाहिन्यांच्या प्रतिकारशक्तीमध्ये एकूण वाढ होते, ज्यामुळे रक्तस्रावी धक्का (हेमोरॅजिक शॉक) बसतो. शस्त्रक्रियेदरम्यान आणि नंतर रक्तस्त्राव नियंत्रित करण्यासाठी योग्य उपाययोजना करणे संभाव्यतः जीवघेणे मानले जाते²,³. मोठ्या रक्तवाहिन्यांना झालेल्या नुकसानीमुळे मोठ्या प्रमाणात रक्तस्त्राव होतो, ज्यामुळे लढाईत मृत्यूचे प्रमाण ≤ ५०% आणि शस्त्रक्रियेदरम्यान ३१% असते¹. मोठ्या प्रमाणात रक्तस्त्राव झाल्यामुळे शरीराचे आकारमान कमी होते, ज्यामुळे हृदयाची कार्यक्षमता (कार्डियाक आउटपुट) कमी होते. एकूण परिघीय रक्तवाहिन्यांच्या प्रतिकारशक्तीमध्ये वाढ आणि सूक्ष्म रक्ताभिसरणातील (मायक्रोसर्क्युलेशन) प्रगतीशील बिघाडामुळे जीवन-आधारभूत अवयवांमध्ये हायपोक्सिया (ऑक्सिजनची कमतरता) होतो. जर ही स्थिती प्रभावी हस्तक्षेपाशिवाय तशीच राहिली तर रक्तस्रावी धक्का बसू शकतो¹,⁴,⁵. इतर गुंतागुंतींमध्ये हायपोथर्मिया (शरीराचे तापमान कमी होणे) आणि मेटाबोलिक ॲसिडोसिस (चयापचय आम्लता) यांची वाढ, तसेच रक्त गोठण्याच्या प्रक्रियेत अडथळा आणणारा रक्त गोठण्याचा विकार यांचा समावेश होतो. गंभीर रक्तस्रावी धक्क्यामुळे मृत्यूचा धोका अधिक असतो⁶,⁷,⁸. ग्रेड III (प्रोग्रेसिव्ह) शॉकमध्ये, शस्त्रक्रियेदरम्यान आणि शस्त्रक्रियेनंतरच्या आजारपण व मृत्यूच्या धोक्यांदरम्यान रुग्णाच्या जगण्यासाठी रक्त संक्रमण (ब्लड ट्रान्सफ्यूजन) अत्यावश्यक असते. वरील सर्व जीवघेण्या परिस्थितींवर मात करण्यासाठी, आम्ही पाण्यात विरघळणाऱ्या हेमोस्टॅटिक पॉलिमरच्या मिश्रणाचा वापर करून एक नॅनोपोरस फायबर-रीइन्फोर्स्ड कंपोझिट स्कॅफोल्ड (NFRCS) विकसित केला आहे, ज्यामध्ये पॉलिमरची किमान सांद्रता (०.५%) वापरली जाते.
फायबर रिइन्फोर्समेंटच्या वापरामुळे किफायतशीर उत्पादने विकसित केली जाऊ शकतात. यादृच्छिकपणे रचलेले फायबर हे ड्रॅगनफ्लायच्या पंखांच्या रचनेसारखे दिसतात, जे पंखांवरील आडव्या आणि उभ्या पट्ट्यांमुळे संतुलित होतात. पंखांच्या आडव्या आणि उभ्या शिरा पंखांच्या पडद्याशी जोडलेल्या असतात (आकृती १). NFRCS मध्ये अधिक चांगल्या भौतिक आणि यांत्रिक शक्तीसह एक आधार प्रणाली म्हणून प्रबलित Ct चा समावेश असतो (आकृती १). परवडणारी किंमत आणि कारागिरीमुळे, शल्यचिकित्सक शस्त्रक्रिया आणि ड्रेसिंग दरम्यान सुती धाग्याचे गेज (Ct) वापरण्यास प्राधान्य देतात. म्हणूनच, त्याचे अनेक फायदे लक्षात घेता, ज्यात > 90% क्रिस्टलाइन सेल्युलोज (हेमोस्टॅटिक क्रियाकलाप वाढविण्यात मदत करते) समाविष्ट आहे, Ct चा वापर NFRCS9,10 च्या स्केलेटल सिस्टम म्हणून केला गेला. म्हणूनच, त्याचे अनेक फायदे लक्षात घेता, ज्यात > 90% क्रिस्टलाइन सेल्युलोज (हेमोस्टॅटिक क्रियाकलाप वाढविण्यात मदत करते) समाविष्ट आहे, Ct चा वापर NFRCS9,10 च्या स्केलेटल सिस्टम म्हणून केला गेला. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > ९०% кристаллической целюлозы (участвует в гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. म्हणून, त्याच्या अनेक फायद्यांमुळे, ज्यात >90% क्रिस्टलाइन सेल्युलोज (वाढलेल्या हेमोस्टॅटिक क्रियेत सहभागी) समाविष्ट आहे, Ct चा वापर NFRCS स्केलेटल सिस्टम9,10 म्हणून केला गेला.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强止血活性）,Ct眫蔢血活性）,Ct眫10FR的骨架系统.因此,考虑到它的多重益处，包括> ९०%म्हणून, 90% पेक्षा जास्त क्रिस्टलाइन सेल्युलोज (हेमोस्टॅटिक क्रियाकलाप वाढविण्यात मदत करते) यासह त्याच्या अनेक फायद्यांमुळे, NFRCS9,10 साठी Ct चा वापर स्कॅफोल्ड म्हणून केला गेला.Ct वर वरवरचा लेप दिला गेला (नॅनो-जाड फिल्म तयार झाल्याचे दिसून आले) आणि त्याला रक्तस्त्राव थांबवणाऱ्या फिल्म-फॉर्मिंग कंपोझिशन (HFFC) द्वारे एकमेकांशी जोडले गेले. HFFC हे मॅट्रिजेलप्रमाणे कार्य करते, जे यादृच्छिकपणे ठेवलेल्या Ct ला एकत्र धरून ठेवते. विकसित केलेली रचना विखुरलेल्या अवस्थेमध्ये (प्रबलन तंतू) ताण प्रसारित करते. कमीत कमी पॉलिमर सांद्रता वापरून चांगल्या यांत्रिक शक्तीसह नॅनोसच्छिद्र संरचना मिळवणे कठीण आहे. याव्यतिरिक्त, वेगवेगळ्या बायोमेडिकल अनुप्रयोगांसाठी वेगवेगळे साचे सानुकूलित करणे सोपे नाही.
आकृतीमध्ये ड्रॅगनफ्लायच्या पंखांच्या रचनेवर आधारित NFRCS डिझाइनचा आरेख (A) दाखवला आहे. या प्रतिमेमध्ये ड्रॅगनफ्लायच्या पंखांच्या रचनेची तुलनात्मक उपमा (पंखांच्या छेदणाऱ्या आणि उभ्या शिरा एकमेकांशी जोडलेल्या असतात) आणि Cp NFRCS चा आडवा छेद असलेला सूक्ष्म-छायाचित्र (B) दाखवला आहे. NFRCS चे योजनाबद्ध सादरीकरण.
वरील मर्यादा दूर करण्यासाठी, HFFC चा एक सलग टप्पा म्हणून वापर करून NFRCs विकसित केले गेले. HFFC हे विविध फिल्म-फॉर्मिंग हेमोस्टॅटिक पॉलिमरपासून बनलेले आहे, ज्यामध्ये चिटोसन (मुख्य हेमोस्टॅटिक पॉलिमर म्हणून), मिथाइलसेल्युलोज (MC), हायड्रॉक्सीप्रोपाइल मिथाइलसेल्युलोज (HPMC 50 cp) आणि पॉलीविनाइल अल्कोहोल (PVA) (125 kDa) यांचा समावेश आहे, जे थ्रोम्बस निर्मितीस प्रोत्साहन देणारे सपोर्ट पॉलिमर म्हणून काम करतात. पॉलीविनाइलपायरोलिडिन K30 (PVP K30) च्या समावेशामुळे NFRCs ची आर्द्रता शोषण्याची क्षमता सुधारली. बॉन्डेड पॉलिमर ब्लेंड्समध्ये पॉलिमर क्रॉसलिंकिंग सुधारण्यासाठी पॉलीथिलीन ग्लायकोल 400 (PEG 400) चा समावेश करण्यात आला. तीन वेगवेगळ्या HFFC हेमोस्टॅटिक रचना (Cm HFFC, Ch HFFC आणि Cp HFFC), म्हणजेच MC सह चिटोसन (Cm), HPMC सह चिटोसन (Ch), आणि PVA सह चिटोसन (Cp), Ct वर लागू केल्या गेल्या. विविध इन विट्रो आणि इन व्हिवो वैशिष्ट्यीकरण अभ्यासांनी NFRCS च्या रक्तस्राव थांबवण्याच्या आणि जखम भरून काढण्याच्या क्षमतेची पुष्टी केली आहे. NFRCS द्वारे प्रदान केलेल्या संमिश्र सामग्रीचा उपयोग विशिष्ट गरजा पूर्ण करण्यासाठी विविध प्रकारच्या स्कॅफोल्डिंगला सानुकूलित करण्यासाठी केला जाऊ शकतो.
याव्यतिरिक्त, NFRCS मध्ये बदल करून त्याला पट्टी किंवा रोलच्या स्वरूपात बनवता येते, जेणेकरून पायांच्या आणि शरीराच्या इतर भागांच्या संपूर्ण जखमी भागावर ते गुंडाळता येईल. विशेषतः लढाईतील अवयवांच्या जखमांसाठी, NFRCS ची रचना अर्ध्या हातासाठी किंवा पूर्ण पायासाठी बदलता येते (पूरक आकृती S11). टिश्यू ग्लू वापरून NFRCS चा मनगटपट्टा बनवता येतो, ज्याचा उपयोग आत्मघातकी पद्धतीने झालेल्या मनगटाच्या गंभीर जखमांमधून होणारा रक्तस्राव थांबवण्यासाठी केला जाऊ शकतो. आमचे मुख्य ध्येय शक्य तितक्या कमी पॉलिमरचा वापर करून एक असे NFRCS विकसित करणे आहे, जे मोठ्या लोकसंख्येपर्यंत (दारिद्र्यरेषेखालील) पोहोचवता येईल आणि प्रथमोपचार किटमध्ये ठेवता येईल. रचनेत साधे, कार्यक्षम आणि किफायतशीर असलेले NFRCS स्थानिक समुदायांना लाभ देते आणि त्याचा जागतिक स्तरावरही प्रभाव पडू शकतो.
कायटोसॅन (आण्विक वजन ८० केडीए) आणि अमरांथ मर्क, इंडिया येथून खरेदी करण्यात आले. हायड्रॉक्सीप्रोपिल मेथिलसेल्युलोज ५० सीपी, पॉलिथिलीन ग्लायकोल ४०० आणि मेथिलसेल्युलोज लोबा केमी प्रा. एलएलसी, मुंबई येथून खरेदी करण्यात आले. पॉलिव्हिनिल अल्कोहोल (आण्विक वजन १२५ केडीए) (८७-९०% हायड्रोलाइज्ड) नॅशनल केमिकल्स, गुजरात येथून खरेदी करण्यात आले. पॉलिव्हिनिलपायरोलिडीन के३० मॉलीकेम, मुंबई येथून खरेदी करण्यात आले, तर निर्जंतुक स्वॅब्स रामाराजू सर्जरी कॉटन मिल्स लि., तामिळनाडू येथून खरेदी करण्यात आले, ज्यामध्ये वाहक म्हणून मिली क्यू पाणी (डायरेक्ट-क्यू३ जलशुद्धीकरण प्रणाली, मर्क, इंडिया) वापरण्यात आले.
NFRCS हे लायोफिलायझेशन पद्धत वापरून विकसित केले गेले¹¹,¹². सर्व HFFC रचना (तक्ता १) मेकॅनिकल स्टिरर वापरून तयार केल्या गेल्या. मेकॅनिकल स्टिररवर ८०० rpm वेगाने सतत ढवळून, पाण्यात १% ॲसेटिक ॲसिड वापरून चिटोसनचे ०.५% द्रावण तयार करा. तक्ता १ मध्ये दर्शविलेले लोडेड पॉलिमरचे अचूक वजन चिटोसनच्या द्रावणात टाकले गेले आणि एक स्वच्छ पॉलिमर द्रावण मिळेपर्यंत ढवळले गेले. परिणामी मिश्रणात तक्ता १ मध्ये दर्शविलेल्या प्रमाणात PVP K30 आणि PEG 400 टाकले गेले, आणि एक स्वच्छ चिकट पॉलिमर द्रावण मिळेपर्यंत ढवळणे सुरू ठेवले गेले. पॉलिमर मिश्रणातील अडकलेले हवेचे बुडबुडे काढून टाकण्यासाठी परिणामी पॉलिमर द्रावणाच्या बाथला ६० मिनिटांसाठी सोनिकेट केले गेले. पूरक आकृती S1(b) मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, ५ मिली HFFC ने भरलेल्या ६-वेल प्लेटच्या (मोल्ड) प्रत्येक वेलमध्ये Ct समान रीतीने वितरित केले गेले.
सीटी नेटवर्कमध्ये एचएफएफसीचे एकसमान ओले होणे आणि वितरण साधण्यासाठी सहा-वेल प्लेटला ६० मिनिटांसाठी सोनिकेट केले गेले. त्यानंतर सहा-वेल प्लेट -२०°C तापमानावर ८-१२ तासांसाठी गोठवण्यात आली. एनएफआरसीएसचे विविध फॉर्म्युलेशन्स मिळवण्यासाठी गोठवलेल्या प्लेट्सना ४८ तासांसाठी लायोफिलाइझ केले गेले. टॅम्पॉन्स किंवा दंडगोलाकार टॅम्पॉन्स यांसारखे वेगवेगळे आकार आणि संरचना, किंवा वेगवेगळ्या उपयोगांसाठी इतर कोणताही आकार तयार करण्यासाठी हीच प्रक्रिया वापरली जाते.
अचूक वजन केलेले कायटोसॅन (८० केडीए) (३%) एका चुंबकीय स्टिररचा वापर करून १% ॲसेटिक ॲसिडमध्ये विरघळवले जाते. कायटोसॅनच्या परिणामी द्रावणात १% पीईजी ४०० (PEG 400) घालून ३० मिनिटे ढवळले. परिणामी द्रावण एका चौरस किंवा आयताकृती पात्रात ओतून -८०°C तापमानावर १२ तासांसाठी गोठवले. सच्छिद्र Cs13 मिळवण्यासाठी गोठवलेल्या नमुन्यांचे ४८ तासांसाठी लायोफिलायझेशन (lyophilization) केले गेले.
विकसित NFRCS ची इतर पॉलिमरसोबत चिटोसनची रासायनिक सुसंगतता तपासण्यासाठी फूरियर ट्रान्सफॉर्म इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (FTIR) (शिमाझू 8400 s FTIR, टोक्यो, जपान) वापरून प्रयोग करण्यात आले¹⁴,¹⁵. सर्व तपासलेल्या नमुन्यांचे FTIR स्पेक्ट्रा (स्पेक्ट्रल रेंजची रुंदी 400 ते 4000 cm⁻¹) 32 स्कॅन करून मिळवण्यात आले.
सर्व फॉर्म्युलेशन्ससाठी रक्त शोषण दर (BAR) चे मूल्यांकन चेन एट अल. 16 यांनी वर्णन केलेल्या पद्धतीत किरकोळ बदल करून करण्यात आले. अवशिष्ट द्रावक काढून टाकण्यासाठी सर्व रचनांचे विकसित NFRKs रात्रभर 105°C तापमानावर व्हॅक्यूम ओव्हनमध्ये वाळवले गेले. 30 मिग्रॅ NFRCS (नमुन्याचे प्रारंभिक वजन – W0) आणि 30 मिग्रॅ Ct (पॉझिटिव्ह कंट्रोल) 3.8% सोडियम सायट्रेटच्या प्रीमिक्स असलेल्या वेगवेगळ्या डिशमध्ये ठेवण्यात आले. पूर्वनिश्चित वेळेच्या अंतराने, म्हणजेच 5, 10, 20, 30, 40 आणि 60 सेकंदांनी, NFRCS काढून टाकण्यात आले आणि नमुने 30 सेकंदांसाठी Ct वर ठेवून त्यांच्या पृष्ठभागावरील न शोषलेले रक्त स्वच्छ करण्यात आले. प्रत्येक वेळी NFRCS 16 द्वारे शोषलेल्या रक्ताचे अंतिम वजन (W1) विचारात घेतले गेले. खालील सूत्र वापरून BAR टक्केवारीची गणना करा:
वांग एट अल. 17 यांनी दिलेल्या अहवालानुसार रक्त गोठण्याची वेळ (BCT) निश्चित करण्यात आली. NFRCS च्या उपस्थितीत संपूर्ण रक्त (3.8% सोडियम सायट्रेटमध्ये पूर्वमिश्रित केलेले उंदराचे रक्त) गोठण्यासाठी लागणारा वेळ हा चाचणी नमुन्याचा BCT म्हणून मोजण्यात आला. NFRCS चे विविध घटक (30 मिग्रॅ) 10 मिलीच्या स्क्रू कॅप कुप्यांमध्ये ठेवण्यात आले आणि 37°C तापमानावर उबवण्यात आले. कुपीमध्ये 0.5 मिली रक्त टाकण्यात आले आणि रक्त गोठण्याची प्रक्रिया सक्रिय करण्यासाठी 0.3 मिली 0.2 M CaCl2 टाकण्यात आले. शेवटी, घट्ट गुठळी तयार होईपर्यंत दर 15 सेकंदांनी कुपी उलटी करण्यात आली (180° पर्यंत). कुपी किती वेळा उलटली यावरून नमुन्याच्या BCT चा अंदाज लावला जातो17,18. BCT च्या आधारावर, पुढील वैशिष्ट्यीकरण अभ्यासासाठी NFRCS Cm, Ch आणि Cp मधून दोन इष्टतम रचना निवडण्यात आल्या.
Ch NFRCS आणि Cp NFRCS मिश्रणांचे BCT, ली एट अल. १९ यांनी वर्णन केलेल्या पद्धतीनुसार निर्धारित करण्यात आले. १५ x १५ मिमी² आकाराचे Ch NFRCS, Cp NFRCS, आणि Cs (पॉझिटिव्ह कंट्रोल) वेगवेगळ्या पेट्री डिशमध्ये (३७°C) ठेवा. रक्त गोठण्याची प्रक्रिया सुरू करण्यासाठी, ३.८% सोडियम सायट्रेट असलेले रक्त ०.२ M CaCl2 सोबत १०:१ या घनफळ गुणोत्तरात मिसळण्यात आले. ०.२ M CaCl2 उंदराच्या रक्ताच्या मिश्रणाचे २० µl नमुन्याच्या पृष्ठभागावर टाकण्यात आले आणि ते एका रिकाम्या पेट्री डिशमध्ये ठेवण्यात आले. कंट्रोल म्हणून, Ct शिवाय रिकाम्या पेट्री डिशमध्ये रक्त ओतण्यात आले. ०, ३, आणि ५ मिनिटांच्या निश्चित अंतराने, रक्ताच्या गुठळीला धक्का न लावता, नमुना असलेल्या डिशमध्ये १० मिली डीआयनाइज्ड (DI) पाणी घालून रक्त गोठण्याची प्रक्रिया थांबवा. डीआयनाइज्ड पाण्याच्या उपस्थितीत, न गोठलेल्या तांबड्या रक्तपेशींचे (एरिथ्रोसाइट्स) हिमोलिसिस होते आणि त्यातून हिमोग्लोबिन बाहेर पडते. वेगवेगळ्या वेळी हिमोग्लोबिन (HA(t)) हे UV-Vis स्पेक्ट्रोफोटोमीटर वापरून 540 nm (λmax हिमोग्लोबिन) वर मोजले गेले. 10 मिली निर्आयनित पाण्यात 20 µl रक्ताच्या 0 मिनिटांवरील हिमोग्लोबिनचे निरपेक्ष शोषण (AH(0)) हे संदर्भ मानक म्हणून घेतले गेले. रक्ताच्या त्याच बॅचचा वापर करून HA(t)/HA(0) या गुणोत्तरावरून गोठलेल्या रक्ताचे सापेक्ष हिमोग्लोबिन ग्रहण (RHA) मोजले गेले.
टेक्सचर ॲनालायझर (टेक्सचर प्रो सीटी व्ही१.३ बिल्ड १५, ब्रुकफील्ड, यूएसए) वापरून, खराब झालेल्या उतींना चिकटण्याच्या NFRK च्या गुणधर्मांचे निर्धारण करण्यात आले. डुकराच्या त्वचेच्या आतील बाजूस (चरबीचा थर वगळून) एक उघड्या तळाची दंडगोलाकार डिश दाबा. डुकराच्या त्वचेला चिकटपणा निर्माण करण्यासाठी नमुने (Ch NFRCS आणि Cp NFRCS) कॅन्युलाद्वारे दंडगोलाकार साच्यांमध्ये भरण्यात आले. खोलीच्या तापमानावर (RT) (२५° से.) ३ मिनिटे ठेवल्यानंतर, NFRCS ची चिकटण्याची शक्ती ०.५ मिमी/सेकंद या स्थिर गतीने नोंदवण्यात आली.
सर्जिकल सीलंटचे मुख्य वैशिष्ट्य म्हणजे रक्तस्त्राव कमी करून रक्त गोठण्याची प्रक्रिया वाढवणे. NFRCS मधील लॉसलेस कोॲग्युलेशनचे मूल्यांकन पूर्वी प्रकाशित केलेल्या पद्धतीत थोडे बदल करून केले गेले 19. एक मायक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब (2 मिली) (आतील व्यास 10 मिमी) तयार करा, ज्याच्या एका बाजूला 8 × 5 मिमी² चे छिद्र असेल (जे उघड्या जखमेचे प्रतिनिधित्व करते). छिद्र बंद करण्यासाठी NFRCS वापरले जाते आणि बाहेरील कडा सील करण्यासाठी टेप वापरला जातो. 3.8% सोडियम सायट्रेट प्रीमिक्स असलेल्या मायक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये 20 µl 0.2 M CaCl2 टाका. 10 मिनिटांनंतर, मायक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब डिशमधून काढण्यात आल्या आणि NFRK मधून रक्त बाहेर गेल्यामुळे डिशच्या वजनात झालेली वाढ निश्चित करण्यात आली (n = 3). रक्तस्त्राव Ch NFRCS आणि Cp NFRCS यांची तुलना Cs शी करण्यात आली.
मिश्रा आणि चौधरी२१ यांनी वर्णन केलेल्या पद्धतीत किरकोळ बदल करून एनएफआरसीएसची (NFRCS) ओल्या स्थितीतली अखंडता निश्चित करण्यात आली. एनएफआरसीएस १०० मिलीच्या एर्लेनमेयर फ्लास्कमध्ये ५० मिली पाण्यासोबत ठेवा आणि वरचा थर तयार होऊ न देता ६० सेकंदांसाठी फिरवा. संकलनाच्या आधारावर भौतिक अखंडतेसाठी नमुन्यांची दृश्य तपासणी आणि प्राधान्यक्रम ठरवणे.
पूर्वी प्रकाशित केलेल्या पद्धतींमध्ये किरकोळ बदल करून, HFFC ची Ct शी असलेली बंधन शक्ती अभ्यासली गेली. मिलीक्यू पाण्याच्या (Ct) उपस्थितीत NFRK ला ध्वनिक लहरींच्या (बाह्य उद्दीपक) संपर्कात आणून पृष्ठभागावरील आवरणाच्या अखंडतेचे मूल्यांकन केले गेले. विकसित केलेले NFRCS, Ch NFRCS आणि Cp NFRCS यांना पाण्याने भरलेल्या बीकरमध्ये ठेवून अनुक्रमे १, २, ३, ४, ५, ६, ७, ८, ९, १० आणि ३० मिनिटांसाठी ध्वनिसंस्कारित (sonicated) केले गेले. सुकल्यानंतर, NFRCS च्या सुरुवातीच्या आणि अंतिम वजनातील टक्केवारीतील फरकाचा वापर पदार्थाच्या (HFFC) टक्केवारीतील नुकसानीची गणना करण्यासाठी केला गेला. इन विट्रो BCT ने बंधन शक्ती किंवा पृष्ठभागावरील पदार्थांच्या नुकसानीला अधिक पुष्टी दिली. HFFC च्या Ct शी असलेल्या बंधनाची कार्यक्षमता रक्त गोठण्यास आणि Ct22 च्या पृष्ठभागावर एक लवचिक आवरण तयार करण्यास मदत करते.
विकसित NFRCS ची एकजिनसीपणा, NFRCS च्या यादृच्छिकपणे निवडलेल्या सामान्य ठिकाणांवरून घेतलेल्या नमुन्यांच्या (३० मिग्रॅ) BCT द्वारे निश्चित करण्यात आला. NFRCS अनुपालन निश्चित करण्यासाठी पूर्वी नमूद केलेल्या BCT प्रक्रियेचे अनुसरण करा. पाचही नमुन्यांमधील सान्निध्य हे एकसमान पृष्ठभाग आच्छादन आणि Ct जाळीमध्ये HFFC निक्षेपण सुनिश्चित करते.
नाममात्र रक्त संपर्क क्षेत्र (NBCA) पूर्वी नमूद केल्याप्रमाणे काही सुधारणांसह निर्धारित केले गेले. Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS आणि Cs च्या दोन पृष्ठभागांमध्ये 20 µl रक्त दाबून रक्त गोठवले गेले. 1 तासानंतर, स्टेंटचे दोन भाग वेगळे केले गेले आणि रक्ताच्या गुठळीचे क्षेत्रफळ हाताने मोजले गेले. तीन पुनरावृत्तींची सरासरी किंमत NBCA NFRCS19 मानली गेली.
बाह्य वातावरणातून किंवा रक्त गोठण्यास कारणीभूत असलेल्या जखमेच्या जागेवरून पाणी शोषून घेण्याच्या NFRCS च्या प्रभावीतेचे मूल्यांकन करण्यासाठी डायनॅमिक व्हेपर सॉर्प्शन (DVS) विश्लेषणाचा वापर करण्यात आला. DVS हे ±0.1 µg च्या वस्तुमान विभेदन क्षमतेसह एका अति-संवेदनशील तराजूचा वापर करून, नमुन्यातील बाष्पाचे शोषण आणि उत्सर्जन गुरुत्वमापन पद्धतीने मोजते किंवा नोंदवते. संतृप्त आणि शुष्क वाहक वायू मिसळून, एका इलेक्ट्रॉनिक मास फ्लो कंट्रोलरद्वारे नमुन्याभोवती आंशिक बाष्प दाब (सापेक्ष आर्द्रता) निर्माण केला जातो. युरोपियन फार्माकोपियाच्या मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार, नमुन्यांनी शोषलेल्या आर्द्रतेच्या टक्केवारीच्या आधारावर, नमुन्यांचे 4 श्रेणींमध्ये वर्गीकरण केले गेले (0–0.012% w/w− आर्द्रताशोषक नसलेले, 0.2–2% w/w किंचित आर्द्रताशोषक, 2–15% मध्यम आर्द्रताशोषक, आणि > 15% खूप आर्द्रताशोषक)23. युरोपियन फार्माकोपियाच्या मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार, नमुन्यांनी शोषलेल्या आर्द्रतेच्या टक्केवारीच्या आधारावर, नमुन्यांचे 4 श्रेणींमध्ये वर्गीकरण केले गेले (0–0.012% w/w− आर्द्रताशोषक नसलेले, 0.2–2% w/w किंचित आर्द्रताशोषक, 2–15% मध्यम आर्द्रताशोषक, आणि > 15% खूप आर्द्रताशोषक)23.युरोपियन फार्माकोपियाच्या शिफारशींनुसार, नमुन्यांनी शोषलेल्या आर्द्रतेच्या टक्केवारीनुसार, नमुन्यांना 4 श्रेणींमध्ये विभागले गेले (0–0.012% w/w – आर्द्रताशोषक नसलेले, 0.2–2% w/w – किंचित आर्द्रताशोषक, 2–15% w/w).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % मध्यम आर्द्रताशोषक आणि > १५% अत्यंत आर्द्रताशोषक)२३.根据欧洲药典指南,根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0.012% w/w- 20% 湀湞典指南w/w 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23.根据 欧洲 药典 指南, 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 分为 分为 分为 分为 类 %0-w.吸湿 性 、 、 、 0.2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23.युरोपियन फार्माकोपियाच्या शिफारशींनुसार, नमुन्याने शोषलेल्या आर्द्रतेच्या टक्केवारीनुसार नमुन्यांचे 4 वर्गांमध्ये विभाजन केले जाते (वजनानुसार 0-0.012% - आर्द्रताशोषक नसलेले, वजनानुसार 0.2-2% - किंचित आर्द्रताशोषक, वजनानुसार 2-15%).% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % मध्यम आर्द्रताशोषक, > १५% अत्यंत आर्द्रताशोषक) २३.NFCS X NFCS आणि TsN NFCS यांची आर्द्रताशोषक कार्यक्षमता DVS TA TGA Q5000 SA या विश्लेषकावर निश्चित करण्यात आली. या प्रक्रियेदरम्यान, रन टाइम, सापेक्ष आर्द्रता (RH), आणि 25°C तापमानावर नमुन्याचे रिअल-टाइम वजन मिळवण्यात आले. खालील समीकरणाचा वापर करून अचूक NFRCS वस्तुमान विश्लेषणाद्वारे आर्द्रतेचे प्रमाण मोजले जाते:
MC म्हणजे NFRCS आर्द्रता. m1 – NSAIDs चे कोरडे वजन. m2 म्हणजे दिलेल्या RH वरील रिअल-टाइम NFRCS वस्तुमान.
25 °C तापमानावर 10 तास नमुने रिकामे केल्यानंतर, द्रव नायट्रोजन वापरून नायट्रोजन अधिशोषण प्रयोगाद्वारे एकूण पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ अंदाजित केले गेले (< 7 × 10–3 Torr). 25 °C तापमानावर 10 तास नमुने रिकामे केल्यानंतर, द्रव नायट्रोजन वापरून नायट्रोजन अधिशोषण प्रयोगाद्वारे एकूण पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ अंदाजित केले गेले (< 7 × 10–3 Torr). Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азота жидким азотом поверхности оценивалась течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). 25°C तापमानावर 10 तास नमुने रिकामे केल्यानंतर (< 7 × 10–3 Torr), द्रव नायट्रोजन वापरून नायट्रोजन अधिशोषण प्रयोगाद्वारे एकूण पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ अंदाजित केले गेले.25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实验估计总表面积.25°C वर Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбции азота жидким азотом посенивалась опользованием течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). 25°C तापमानावर 10 तासांसाठी नमुने रिकामे केल्यानंतर (< 7 x 10-3 टॉर), द्रव नायट्रोजन वापरून नायट्रोजन अधिशोषण प्रयोगांद्वारे एकूण पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ अंदाजित केले गेले.एकूण पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ, छिद्रांचे घनफळ आणि NFRCS छिद्रांचा आकार ऑस्ट्रियाच्या NOVA 1000e च्या क्वांटाक्रोमने RS 232 सॉफ्टवेअर वापरून निर्धारित केले गेले.
संपूर्ण रक्तापासून ५% RBCs (सलाइन विरलक म्हणून वापरून) तयार करा. नंतर HFFC चा एक भाग (०.२५ मिली) आणि ५% RBC मिश्रण (०.१ मिली) ९६-वेल प्लेटमध्ये स्थानांतरित करा. हे मिश्रण ३७°C तापमानावर ४० मिनिटांसाठी उबवा. लाल रक्तपेशी आणि सीरम यांच्या मिश्रणाला पॉझिटिव्ह कंट्रोल, तर सलाइन आणि लाल रक्तपेशी यांच्या मिश्रणाला निगेटिव्ह कंट्रोल मानले गेले. हिमॅग्लुटिनेशन स्टॅजित्स्की स्केलनुसार निर्धारित केले गेले. प्रस्तावित स्केल खालीलप्रमाणे आहेत: + + + + दाट दाणेदार समूह; + + + वक्र कडा असलेले गुळगुळीत तळाचे पॅड; + + फाटलेल्या कडा असलेले गुळगुळीत तळाचे पॅड; + गुळगुळीत पॅडच्या कडांभोवती अरुंद लाल कड्या; – (निगेटिव्ह) खालच्या वेलच्या मध्यभागी वेगळे लाल बटण १२.
आंतरराष्ट्रीय मानकीकरण संस्थेच्या (ISO) पद्धतीनुसार (ISO10993-4, 1999)26,27 NFRCS च्या रक्तसुसंगततेचा अभ्यास करण्यात आला. सिंग आणि इतरांनी वर्णन केलेल्या गुरुत्वमापन पद्धतीचा वापर करण्यात आला. NFRCS च्या उपस्थितीत किंवा पृष्ठभागावर थ्रोम्बस निर्मितीचे मूल्यांकन करण्यासाठी किरकोळ बदल करण्यात आले. 500 मिग्रॅ Cs, Ch NFRCS आणि Cp NFRCS यांना फॉस्फेट बफर्ड सलाइन (PBS) मध्ये 37°C तापमानावर 24 तास उबवण्यात आले. 24 तासांनंतर, PBS काढून टाकण्यात आले आणि NFRCS वर 3.8% सोडियम सायट्रेट असलेल्या 2 मिली रक्ताने प्रक्रिया करण्यात आली. NFRCS च्या पृष्ठभागावर, उबवलेल्या नमुन्यांमध्ये 0.04 मिली 0.1 M CaCl2 टाका. 45 मिनिटांनंतर, रक्त गोठण्याची प्रक्रिया थांबवण्यासाठी 5 मिली डिस्टिल्ड वॉटर टाकण्यात आले. NFRK च्या पृष्ठभागावरील गोठलेल्या रक्तावर 36-38% फॉर्मल्डिहाइड द्रावणाने प्रक्रिया करण्यात आली. फॉर्मल्डिहाइडने स्थिर केलेल्या रक्ताच्या गुठळ्या वाळवून त्यांचे वजन करण्यात आले. रक्त आणि नमुना नसलेल्या ग्लासचे (निगेटिव्ह कंट्रोल) आणि रक्त असलेल्या ग्लासचे (पॉझिटिव्ह कंट्रोल) वजन मोजून थ्रोम्बोसिसच्या टक्केवारीचा अंदाज लावण्यात आला.
प्राथमिक पुष्टीकरण म्हणून, HFFC पृष्ठभागावरील लेप, Ct इंटरकनेक्टेड आणि Ct नेटवर्कची छिद्रे तयार करण्याची क्षमता समजून घेण्यासाठी नमुने ऑप्टिकल मायक्रोस्कोपखाली पाहिले गेले. NFRCS मधील Ch आणि Cp चे पातळ काप स्कॅल्पेल ब्लेडने कापण्यात आले. तयार झालेला काप एका काचेच्या स्लाईडवर ठेवण्यात आला, त्यावर कव्हरस्लिप ठेवण्यात आली आणि त्याच्या कडा गोंदाने चिकटवण्यात आल्या. तयार केलेल्या स्लाईड्स ऑप्टिकल मायक्रोस्कोपखाली पाहण्यात आल्या आणि वेगवेगळ्या आवर्धनांवर छायाचित्रे घेण्यात आली.
राईस एट अल. 29 यांनी वर्णन केलेल्या पद्धतीवर आधारित फ्लुरोसेन्स मायक्रोस्कोपी वापरून Ct नेटवर्कमध्ये पॉलिमर निक्षेपण दृश्यमान केले गेले. फॉर्म्युलेशनसाठी वापरण्यात येणारे HFFC मिश्रण एका प्रतिदीप्त रंगद्रव्या (राजगिरा) सोबत मिसळण्यात आले आणि NFRCS (Ch आणि Cp) पूर्वी नमूद केलेल्या पद्धतीनुसार तयार करण्यात आले. फॉर्म्युलेशनसाठी वापरण्यात येणारे HFFC मिश्रण एका प्रतिदीप्त रंगद्रव्या (राजगिरा) सोबत मिसळण्यात आले आणि NFRCS (Ch आणि Cp) पूर्वी नमूद केलेल्या पद्धतीनुसार तयार करण्यात आले.फॉर्म्युलेशनसाठी वापरण्यात येणारे HFFC मिश्रण एका प्रतिदीप्त रंगद्रव्या (राजगिरा) सोबत मिसळण्यात आले आणि पूर्वी नमूद केलेल्या पद्धतीनुसार NFRCS (Ch आणि Cp) मिळवण्यात आले.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法制制。将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方法制制。फॉर्म्युलेशनमध्ये वापरलेल्या HFFC कंपोझिशनला एका फ्लोरोसेंट डाय (अमरंथ) सोबत मिसळण्यात आले आणि आधी सांगितल्याप्रमाणे NFRCS (Ch आणि Cp) मिळवण्यात आले.मिळवलेल्या नमुन्यांमधून NFRK चे पातळ थर कापून, काचेच्या स्लाईड्सवर ठेवले आणि कव्हर स्लिप्सने झाकले. तयार केलेल्या स्लाईड्सचे निरीक्षण हिरव्या फिल्टरचा (३१०-३८० एनएम) वापर करून फ्लोरोसेंट मायक्रोस्कोपखाली केले. Ct संबंध आणि Ct नेटवर्कमधील अतिरिक्त पॉलिमर निक्षेपण समजून घेण्यासाठी ४x मॅग्निफिकेशनवर प्रतिमा घेतल्या गेल्या.
NFRCS Ch आणि Cp च्या पृष्ठभागाची रचना (surface topography) टॅपिंग मोडमधील अल्ट्रा-शार्प TESP कॅन्टिलीव्हर असलेल्या ॲटोमिक फोर्स मायक्रोस्कोप (AFM) चा वापर करून निश्चित करण्यात आली: ४२ N/m, ३२० kHz, ROC २-५ nm, ब्रुकर, तैवान. पृष्ठभागाची खडबडपणा (surface roughness) 'स्कॅनिंग प्रोब इमेज प्रोसेसर' या सॉफ्टवेअरचा वापर करून रूट मीन स्क्वेअर (RMS) पद्धतीने निश्चित करण्यात आला. पृष्ठभागाची एकसमानता तपासण्यासाठी विविध NFRCS स्थाने ३D प्रतिमांवर प्रस्तुत (render) करण्यात आली. दिलेल्या क्षेत्रासाठीच्या गुणांकाचे प्रमाणित विचलन (standard deviation) हे पृष्ठभागाची खडबडपणा म्हणून परिभाषित केले जाते. NFRCS31 च्या पृष्ठभागाच्या खडबडपणाचे प्रमाण निश्चित करण्यासाठी RMS समीकरणाचा वापर करण्यात आला.
Ch NFRCS आणि Cp NFRCS यांच्या पृष्ठभागाची रचना समजून घेण्यासाठी FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokyo वापरून FESEM-आधारित अभ्यास करण्यात आले, ज्यांनी Cm NFRCS पेक्षा चांगले BCT दर्शवले. हा FESEM अभ्यास झाओ एट अल. ३२ यांनी वर्णन केलेल्या पद्धतीनुसार किरकोळ बदलांसह करण्यात आला. २० ते ३० मिग्रॅ NFRCS, Ch NFRCS आणि Cp NFRCS हे उंदराच्या रक्तात मिसळलेल्या ३.८% सोडियम सायट्रेटच्या २० µl मध्ये पूर्वमिश्रित करण्यात आले. रक्त गोठण्याची प्रक्रिया सुरू करण्यासाठी रक्ताने प्रक्रिया केलेल्या नमुन्यांमध्ये ०.२ M CaCl2 चे २० μl टाकण्यात आले आणि नमुने खोलीच्या तापमानावर १० मिनिटांसाठी ठेवण्यात आले. याव्यतिरिक्त, सलाईनने धुवून NFRCS च्या पृष्ठभागावरील अतिरिक्त तांबड्या रक्तपेशी काढून टाकण्यात आल्या.
नंतरच्या नमुन्यांवर ०.१% ग्लुटाराल्डिहाइडने प्रक्रिया करण्यात आली आणि नंतर त्यातील ओलावा काढून टाकण्यासाठी त्यांना ३७°C तापमानावर हॉट एअर ओव्हनमध्ये वाळवण्यात आले. वाळवलेल्या नमुन्यांवर लेप लावून त्यांचे विश्लेषण करण्यात आले ३२. विश्लेषणादरम्यान मिळालेल्या इतर प्रतिमांमध्ये कापसाच्या प्रत्येक तंतूच्या पृष्ठभागावर गुठळी तयार होणे, Ct मध्ये पॉलिमरचे निक्षेपण, तांबड्या रक्तपेशींची आकारिकी (आकार), गुठळीची अखंडता आणि NFRCS च्या उपस्थितीत तांबड्या रक्तपेशींची आकारिकी यांचा समावेश होता. उपचार न केलेले NFRCS क्षेत्र आणि रक्तासोबत इनक्यूबेट केलेल्या Ch व Cp उपचारित NFRCS क्षेत्रांचे मूलद्रव्यीय आयनांसाठी (सोडियम, पोटॅशियम, नायट्रोजन, कॅल्शियम, मॅग्नेशियम, झिंक, तांबे आणि सेलेनियम) स्कॅन करण्यात आले ३३. गुठळी तयार होण्याच्या प्रक्रियेदरम्यान मूलद्रव्यीय आयनांचे संचयन आणि गुठळीची एकरूपता समजून घेण्यासाठी उपचारित आणि उपचार न केलेल्या नमुन्यांमधील मूलद्रव्यीय आयनांच्या टक्केवारीची तुलना करा.
Ct पृष्ठभागावरील Cp HFFC पृष्ठभागाच्या लेपनाची जाडी FESEM वापरून निश्चित करण्यात आली. Cp NFRCS चे आडवे भाग फ्रेमवर्कमधून कापून स्पटर कोट केले गेले. परिणामी स्पटर कोटिंग नमुन्यांचे FESEM द्वारे निरीक्षण केले गेले आणि पृष्ठभागाच्या लेपनाची जाडी मोजली गेली 34, 35, 36.
एक्स-रे मायक्रो-सीटी उच्च-रिझोल्यूशन 3D नॉन-डिस्ट्रक्टिव्ह इमेजिंग प्रदान करते आणि तुम्हाला NFRK च्या अंतर्गत संरचनात्मक मांडणीचा अभ्यास करण्यास अनुमती देते. मायक्रो-सीटी नमुन्यामधून जाणाऱ्या एक्स-रे बीमचा वापर करून नमुन्यातील एक्स-रेच्या स्थानिक रेखीय क्षीणता गुणांकाची नोंद करते, ज्यामुळे आकारशास्त्रीय माहिती मिळविण्यात मदत होते. NFRCS37,38,39 च्या उपस्थितीत शोषण कार्यक्षमता आणि रक्त गोठण्याची प्रक्रिया समजून घेण्यासाठी Cp NFRCS आणि रक्त-उपचारित Cp NFRCS मधील Ct चे अंतर्गत स्थान मायक्रो-सीटीद्वारे तपासले गेले. रक्त-उपचारित आणि उपचार न केलेल्या Cp NFRCS नमुन्यांच्या 3D संरचना मायक्रो-सीटी (V|tome|x S240, फिनिक्स, जर्मनी) वापरून पुनर्रचित केल्या गेल्या. VG STUDIO-MAX सॉफ्टवेअर आवृत्ती 2.2 वापरून, NFRCS साठी 3D प्रतिमा विकसित करण्यासाठी वेगवेगळ्या कोनांमधून (आदर्शपणे 360° कव्हरेज) अनेक एक्स-रे प्रतिमा घेतल्या गेल्या. गोळा केलेला प्रोजेक्शन डेटा संबंधित सिंपल 3D ScanIP Academic सॉफ्टवेअर वापरून 3D व्हॉल्यूमेट्रिक प्रतिमांमध्ये पुनर्रचित केला गेला.
याव्यतिरिक्त, रक्ताच्या गुठळीचे वितरण समजून घेण्यासाठी, रक्त गोठण्याची प्रक्रिया सुरू करण्याकरिता NFRCS मध्ये २० µl पूर्वमिश्रित सायट्रेटेड रक्त आणि २० µl ०.२ M CaCl2 टाकण्यात आले. तयार केलेले नमुने कडक होण्यासाठी ठेवण्यात आले. NFRK पृष्ठभागावर ०.५% ग्लुटाराल्डिहाइडने प्रक्रिया करून, ते ३०-४०°C तापमानावर ३० मिनिटांसाठी हॉट एअर ओव्हनमध्ये वाळवण्यात आले. NFRCS वर तयार झालेल्या रक्ताच्या गुठळीला स्कॅन करून, तिची पुनर्रचना करण्यात आली आणि रक्ताच्या गुठळीची एक त्रिमितीय (3D) प्रतिमा दृश्यमान करण्यात आली.
पूर्वी वर्णन केलेल्या पद्धतीत किरकोळ बदल करून Cp NFRCS (Ch NFRCS शी सर्वोत्तम तुलना करता येईल) वर जीवाणूविरोधी चाचण्या करण्यात आल्या. इनक्यूबेटरमध्ये पेट्री डिशमधील अगरवर वाढणाऱ्या तीन वेगवेगळ्या चाचणी सूक्ष्मजीवांचा [एस.ऑरियस (ग्रॅम-पॉझिटिव्ह बॅक्टेरिया), ई.कोलाय (ग्रॅम-निगेटिव्ह बॅक्टेरिया) आणि व्हाईट कॅन्डिडा (सी.अल्बिकन्स)] वापर करून Cp NFRCS आणि Cp HFFC ची जीवाणूविरोधी क्रियाशीलता निश्चित करण्यात आली. अगर माध्यमावर 10⁵-10⁶ CFU ml⁻¹ या सांद्रतेचे 50 मिली विरल केलेले जीवाणू संवर्धन निलंबन एकसमानपणे टाका. हे माध्यम पेट्री डिशमध्ये ओता आणि ते घट्ट होऊ द्या. HFFC भरण्यासाठी अगर प्लेटच्या पृष्ठभागावर खड्डे (वेल्स) तयार करण्यात आले (HFFC साठी ३ खड्डे आणि निगेटिव्ह कंट्रोलसाठी १). ३ खड्ड्यांमध्ये २०० µl HFFC आणि चौथ्या खड्ड्यात २०० µl pH 7.4 PBS टाका. पेट्री डिशच्या दुसऱ्या बाजूला, घट्ट झालेल्या अगारवर १२ मिमी Cp NFRCS डिस्क ठेवा आणि PBS (pH ७.४) ने ओलावा. सिप्रोफ्लोक्सासिन, अ‍ॅम्पिसिलिन आणि फ्लुकोनाझोल गोळ्या स्टॅफिलोकोकस ऑरियस, एशेरिकिया कोलाय आणि कॅन्डिडा अल्बिकन्ससाठी संदर्भ मानक मानल्या जातात. प्रतिबंध क्षेत्राचे हाताने मोजमाप करा आणि प्रतिबंध क्षेत्राचे डिजिटल छायाचित्र घ्या.
संस्थात्मक नैतिक मंजुरी मिळाल्यानंतर, हा अभ्यास दक्षिण भारतातील कर्नाटक राज्यातील मणिपाल येथील कस्तुरबा मेडिकल कॉलेज ऑफ एज्युकेशन अँड रिसर्चमध्ये आयोजित करण्यात आला. इन विट्रो टीईजी प्रायोगिक प्रोटोकॉलचे कस्तुरबा मेडिकल कॉलेज, मणिपाल, कर्नाटक येथील संस्थात्मक नीती समितीने पुनरावलोकन करून त्याला मंजुरी दिली आहे (IEC: 674/2020). रुग्णालयाच्या रक्तपेढीतील स्वयंसेवी रक्तदात्यांमधून (वय १८ ते ५५) विषय निवडले गेले. याव्यतिरिक्त, रक्ताचे नमुने गोळा करण्यासाठी स्वयंसेवकांकडून माहितीपूर्ण संमतीपत्र घेण्यात आले. सोडियम सायट्रेटमध्ये पूर्वमिश्रित केलेल्या संपूर्ण रक्तावर Cp HFFC फॉर्म्युलेशनचा परिणाम अभ्यासण्यासाठी नेटिव्ह टीईजी (N-TEG) ​​वापरण्यात आले. N-TEG हे पॉइंट-ऑफ-केअर पुनरुज्जीवनातील भूमिकेसाठी मोठ्या प्रमाणावर ओळखले जाते, ज्यामुळे परिणामांमध्ये (नियमित रक्त गोठण्याच्या चाचण्या) वैद्यकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण विलंबाच्या शक्यतेमुळे चिकित्सकांसाठी समस्या निर्माण होतात. N-TEG विश्लेषण संपूर्ण रक्ताचा वापर करून केले गेले. सर्व सहभागींकडून माहितीपूर्ण संमती आणि सविस्तर वैद्यकीय इतिहास घेण्यात आला. या अभ्यासात गर्भधारणा/प्रसूतीनंतरची स्थिती किंवा यकृताचे आजार यांसारख्या रक्तस्राव थांबण्याच्या किंवा रक्ताच्या गुठळ्या होण्यासंबंधीच्या गुंतागुंती असलेल्या सहभागींचा समावेश नव्हता. रक्त गोठण्याच्या प्रक्रियेवर परिणाम करणारी औषधे घेणाऱ्या व्यक्तींनाही अभ्यासातून वगळण्यात आले होते. सर्व सहभागींवर प्रमाणित कार्यपद्धतीनुसार मूलभूत प्रयोगशाळा चाचण्या (हिमोग्लोबिन, प्रोथ्रोम्बिन टाइम, ॲक्टिव्हेटेड थ्रोम्बोप्लास्टिन आणि प्लेटलेटची संख्या) करण्यात आल्या. एन-टीईजी (N-TEG) ​​रक्ताच्या गुठळीची व्हिस्कोइलास्टिसिटी, गुठळीची सुरुवातीची रचना, कणांमधील आंतरक्रिया, गुठळीचे बळकटीकरण आणि गुठळीचे विघटन निश्चित करते. एन-टीईजी विश्लेषण अनेक पेशीय घटक आणि प्लाझ्मा यांच्या एकत्रित परिणामांबद्दल आलेखात्मक आणि संख्यात्मक माहिती प्रदान करते. एन-टीईजी विश्लेषण सीपी एचएफएफसीच्या (Cp HFFC) दोन वेगवेगळ्या प्रमाणांवर (१० µl आणि ५० µl) करण्यात आले. परिणामी, १० μl सीपी एचएफएफसीमध्ये सायट्रिक ॲसिडसह १ ml संपूर्ण रक्त मिसळण्यात आले. २० µl ०.२ M CaCl2 असलेल्या TEG डिशमध्ये १ ml (Cp HFFC + सायट्रेटेड रक्त), ३४० µl मिश्रित रक्त घाला. त्यानंतर, Cp HFFC41 च्या उपस्थितीत ३०% रक्ताचे नमुने R, K, अल्फा अँगल, MA, G, CI, TPI, EPL, LY मोजण्यासाठी TEG® 5000, US मध्ये लोड करण्यात आले.
इन व्हिवो अभ्यास प्रोटोकॉलचे पुनरावलोकन करण्यात आले आणि त्याला संस्थात्मक प्राणी नीती समिती (IAEC), कस्तुरबा स्कूल ऑफ मेडिसिन, मणिपाल इन्स्टिट्यूट ऑफ हायर एज्युकेशन, मणिपाल (IAEC/KMC/69/2020) यांनी मान्यता दिली. सर्व प्राणी प्रयोग प्राणी प्रयोग नियंत्रण आणि पर्यवेक्षण समिती (CPCSEA) च्या शिफारशींनुसार करण्यात आले. सर्व इन व्हिवो NFRCS अभ्यास (2 × 2 cm2) मादी विस्टार उंदरांवर (वजन 200 ते 250 ग्रॅम) करण्यात आले. सर्व प्राण्यांना 24-26°C तापमानात अनुकूलित करण्यात आले, प्राण्यांना मानक अन्न आणि पाणी मुक्तपणे उपलब्ध होते. सर्व प्राण्यांना वेगवेगळ्या गटांमध्ये यादृच्छिकपणे विभागले गेले, प्रत्येक गटात तीन प्राणी होते. सर्व अभ्यास 'ॲनिमल स्टडीज: रिपोर्ट ऑफ इन व्हिवो एक्सपेरिमेंट्स 43' नुसार करण्यात आले. अभ्यासापूर्वी, प्राण्यांना इंट्रापेरिटोनियल (ip) मार्गाने २०-५० मिग्रॅ केटामाइन (प्रति १ किलो शारीरिक वजन) आणि २-१० मिग्रॅ झायलाझिन (प्रति १ किलो शारीरिक वजन) यांचे मिश्रण देऊन भूल देण्यात आली. अभ्यासानंतर, नमुन्यांच्या सुरुवातीच्या आणि अंतिम वजनातील फरकाचे मूल्यांकन करून रक्तस्त्रावाचे प्रमाण मोजण्यात आले आणि तीन चाचण्यांमधून मिळालेली सरासरी किंमत नमुन्याचे रक्तस्त्रावाचे प्रमाण म्हणून विचारात घेण्यात आली.
आघात, युद्ध किंवा वाहतूक अपघात (दुखापतीचे मॉडेल) यांमध्ये रक्तस्त्राव नियंत्रित करण्याची NFRCS ची क्षमता समजून घेण्यासाठी उंदराच्या शेपटीच्या विच्छेदन मॉडेलचा वापर करण्यात आला. स्कॅल्पेल ब्लेडने शेपटीचा ५०% भाग कापून सामान्य रक्तस्त्राव होत असल्याची खात्री करण्यासाठी १५ सेकंदांसाठी हवेत ठेवण्यात आला. याव्यतिरिक्त, चाचणी नमुने (Ct, Cs, Ch NFRCS आणि Cp NFRCS) दाब देऊन उंदराच्या शेपटीवर ठेवण्यात आले. चाचणी नमुन्यांसाठी (n = 3) रक्तस्त्राव आणि PCT नोंदवण्यात आले¹⁷,⁴⁵.
लढाईदरम्यान NFRCS दाब नियंत्रणाची परिणामकारकता सुपरफिशियल फेमोरल आर्टरीच्या मॉडेलवर तपासण्यात आली. फेमोरल आर्टरी उघडी करून, तिला 24G ट्रोकारने टोचले जाते आणि १५ सेकंदांच्या आत रक्तस्त्राव केला जातो. अनियंत्रित रक्तस्त्राव दिसून आल्यानंतर, चाचणी नमुना टोचलेल्या जागी ठेवून त्यावर दाब दिला जातो. चाचणी नमुना ठेवल्यानंतर लगेचच, रक्त गोठण्याचा वेळ नोंदवला गेला आणि पुढील ५ मिनिटांसाठी रक्तस्त्राव थांबवण्याच्या कार्यक्षमतेचे निरीक्षण केले गेले. हीच प्रक्रिया Cs आणि Ct46 सोबत पुन्हा करण्यात आली.
डॉलिंग आणि सहकाऱ्यांनी (४७) शस्त्रक्रियेदरम्यान होणाऱ्या रक्तस्रावाच्या संदर्भात रक्तस्त्राव थांबवणाऱ्या सामग्रीच्या रक्तस्त्राव थांबवण्याच्या क्षमतेचे मूल्यांकन करण्यासाठी यकृताच्या दुखापतीचे एक मॉडेल प्रस्तावित केले. Ct नमुने (नकारात्मक नियंत्रण), Cs फ्रेमवर्क (सकारात्मक नियंत्रण), Ch NFRCS नमुने आणि Cp NFRCS नमुन्यांसाठी BCT नोंदवण्यात आले. मध्यवर्ती लॅपरोटॉमी करून उंदराची सुप्राहेपॅटिक व्हेना कावा उघडी करण्यात आली. त्यानंतर, डाव्या लोबचा दूरचा भाग कात्रीने कापून काढण्यात आला. स्कॅल्पेल ब्लेडने यकृतावर एक छेद करून काही सेकंदांसाठी रक्तस्त्राव होऊ दिला. अचूक वजनाचे Ch NFRCS आणि Cp NFRCS चाचणी नमुने कोणताही सकारात्मक दाब न देता खराब झालेल्या पृष्ठभागावर ठेवण्यात आले आणि BCT नोंदवण्यात आले. त्यानंतर नियंत्रण गटावर (Ct) दाब दिला गेला आणि त्यानंतर दुखापत न मोडता Cs ३० सेकंदांसाठी (४७) वापरण्यात आले.
विकसित पॉलिमर-आधारित NFRCS च्या जखम भरण्याच्या गुणधर्मांचे मूल्यांकन करण्यासाठी, छेदन जखम मॉडेलचा वापर करून इन विवो जखम भरण्याच्या चाचण्या करण्यात आल्या. छेदन जखमांचे मॉडेल निवडले गेले आणि पूर्वी प्रकाशित केलेल्या पद्धतींनुसार किरकोळ बदलांसह तयार केले गेले¹⁹,³²,⁴⁸. पूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे सर्व प्राण्यांना भूल देण्यात आली. पाठीच्या त्वचेवर गोलाकार खोल छेद घेण्यासाठी बायोप्सी पंच (१२ मिमी) वापरा. ​​तयार केलेल्या जखमेच्या जागी Cs (पॉझिटिव्ह कंट्रोल), Ct (कॉटन पॅड जखम भरण्याच्या प्रक्रियेत अडथळा आणतात हे लक्षात घेऊन), Ch NFRCS आणि Cp NFRCS (प्रायोगिक गट) आणि कोणताही उपचार न केलेला निगेटिव्ह कंट्रोल असे ड्रेसिंग केले गेले. अभ्यासाच्या प्रत्येक दिवशी, सर्व उंदरांच्या जखमेचे क्षेत्रफळ मोजले गेले. जखमेच्या भागाचा फोटो घेण्यासाठी डिजिटल कॅमेरा वापरा आणि त्यावर नवीन ड्रेसिंग लावा. जखम बंद होण्याची टक्केवारी खालील सूत्राने मोजली गेली:
अभ्यासाच्या 12 व्या दिवशी जखम भरण्याच्या टक्केवारीच्या आधारावर, सर्वोत्तम गटातील ((Cp NFRCS) आणि नियंत्रण गट) उंदराची त्वचा काढून H&E स्टैनिंग आणि मॅसनच्या ट्रायक्रोम स्टैनिंगद्वारे अभ्यासली गेली. अभ्यासाच्या 12 व्या दिवशी जखम भरण्याच्या टक्केवारीच्या आधारावर, सर्वोत्तम गटातील ((Cp NFRCS) आणि नियंत्रण गट) उंदराची त्वचा काढून H&E स्टैनिंग आणि मॅसनच्या ट्रायक्रोम स्टैनिंगद्वारे अभ्यासली गेली.अभ्यासाच्या 12 व्या दिवशी जखम भरण्याच्या टक्केवारीच्या आधारावर, सर्वोत्तम गटातील ((Cp NFRCS) आणि नियंत्रण गट) उंदरांची त्वचा कापून काढण्यात आली आणि हेमेटोक्सिलिन-इओसिन आणि मॅसनच्या ट्रायक्रोमने रंगवून तपासण्यात आली.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Masson三色染色研究.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和眳组）अभ्यासाच्या १२ व्या दिवशी जखम भरण्याच्या टक्केवारीच्या आधारावर, सर्वोत्तम गटातील ((Cp NFRCS) आणि नियंत्रण गट) उंदरांचे हेमेटोक्सिलिन-इओसिन स्टेनिंग आणि मॅसनच्या ट्रायक्रोम स्टेनिंगसाठी तुकडे करण्यात आले.वापरलेली रंगाई प्रक्रिया पूर्वी वर्णन केलेल्या पद्धतींनुसार⁴⁹,⁵⁰ पार पाडण्यात आली. थोडक्यात, १०% फॉर्मेलिनमध्ये स्थिरीकरण केल्यानंतर, श्रेणीबद्ध अल्कोहोलच्या मालिकेचा वापर करून नमुने निर्जलित करण्यात आले. कापलेल्या ऊतींचे पातळ छेद (५ µm जाडीचे) मिळवण्यासाठी मायक्रोटोमचा वापर करण्यात आला. हिस्टोपॅथॉलॉजिकल बदलांचा अभ्यास करण्यासाठी नियंत्रक आणि Cp NFRCS च्या पातळ अनुक्रमिक छेदांवर हेमॅटॉक्सिलिन आणि इओसिनने प्रक्रिया करण्यात आली. कोलेजन तंतूंची निर्मिती शोधण्यासाठी मॅसनच्या ट्रायक्रोम रंगाचा वापर करण्यात आला. मिळालेल्या परिणामांचा अभ्यास पॅथॉलॉजिस्टद्वारे अंधपणे करण्यात आला.
Cp NFRCS नमुन्यांची स्थिरता खोलीच्या तापमानावर (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) 12 महिन्यांसाठी अभ्यासली गेली51. Cp NFRCS (पृष्ठभागावरील रंग बदलणे आणि सूक्ष्मजीवांची वाढ) ची दृष्य तपासणी केली गेली आणि 'साहित्य आणि पद्धती' विभागात वर्णन केलेल्या वरील पद्धतींनुसार फोल्ड वेअर रेझिस्टन्स आणि BCT साठी चाचणी केली गेली.
१५×१५ सेमी² आकाराचे Cp NFRCS तयार करून त्याची स्केलेबिलिटी आणि रिप्रॉड्यूसिबिलिटी तपासण्यात आली. याव्यतिरिक्त, विविध Cp NFRCS फ्रॅक्शन्समधून ३० मिग्रॅचे नमुने (n = ५) कापून काढण्यात आले आणि पद्धती विभागात पूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे अभ्यासलेल्या नमुन्यांच्या BCT चे मूल्यांकन करण्यात आले.
आम्ही विविध बायोमेडिकल उपयोगांसाठी Cp NFRCS मिश्रणांचा वापर करून विविध आकार आणि रचना विकसित करण्याचा प्रयत्न केला आहे. अशा आकारांमध्ये किंवा संरचनेत नाकातून रक्त येणे आणि दातांच्या उपचारांसाठी शंकूच्या आकाराचे स्वॅब, तसेच योनीमार्गातील रक्तस्रावासाठी दंडगोलाकार स्वॅब यांचा समावेश आहे.
सर्व डेटा संच सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केले आहेत आणि Prism 5.03 (GraphPad, सॅन दिएगो, CA, USA) वापरून ANOVA द्वारे त्यांचे विश्लेषण केले गेले, त्यानंतर बोनफेरोनीची एकाधिक तुलना चाचणी (*p<0.05) केली गेली.
मानवी अभ्यासात पार पाडलेल्या सर्व प्रक्रिया संस्थेच्या आणि राष्ट्रीय संशोधन परिषदेच्या मानकांनुसार, तसेच हेलसिंकी घोषणापत्र १९६४ आणि त्यातील त्यानंतरच्या सुधारणांनुसार, किंवा तत्सम नैतिक मानकांनुसार होत्या. सर्व सहभागींना अभ्यासाची वैशिष्ट्ये आणि त्याचे ऐच्छिक स्वरूप याबद्दल माहिती देण्यात आली होती. सहभागींचा डेटा एकदा गोळा केल्यावर गोपनीय ठेवला जातो. इन विट्रो टीईजी प्रायोगिक प्रोटोकॉलचे कस्तुरबा मेडिकल कॉलेज, मणिपाल, कर्नाटक येथील संस्थात्मक नीती समितीने पुनरावलोकन करून त्याला मान्यता दिली आहे (आयईसी: ६७४/२०२०). स्वयंसेवकांनी रक्ताचे नमुने गोळा करण्यासाठी माहितीपूर्ण संमतीपत्रावर स्वाक्षरी केली.
प्राण्यांवरील अभ्यासात केलेल्या सर्व प्रक्रिया कस्तुबा फॅकल्टी ऑफ मेडिसिन, मणिपाल इन्स्टिट्यूट ऑफ हायर एज्युकेशन, मणिपाल (IAEC/KMC/69/2020) च्या नियमांनुसार पार पाडण्यात आल्या. नियोजित केलेले सर्व प्राण्यांवरील प्रयोग, प्राणी प्रयोग नियंत्रण आणि पर्यवेक्षण समिती (CPCSEA) च्या मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार आयोजित करण्यात आले होते. सर्व लेखक ARRIVE मार्गदर्शक तत्त्वांचे पालन करतात.
सर्व NFRCS च्या FTIR स्पेक्ट्राचे विश्लेषण केले गेले आणि आकृती 2A मध्ये दर्शविलेल्या चिटोसन स्पेक्ट्रमशी त्यांची तुलना केली गेली. चिटोसनची वैशिष्ट्यपूर्ण स्पेक्ट्रल शिखरे (नोंदवलेली) 3437 cm-1 (OH आणि NH स्ट्रेचिंग, ओव्हरलॅप), 2945 आणि 2897 cm-1 (CH स्ट्रेचिंग), 1660 cm-1 (NH2 स्ट्रेन), 1589 cm-1 (N–H बेंडिंग), 1157 cm-1 (ब्रिज स्ट्रेच O-), 1067 cm-1 (स्ट्रेच C–O, सेकंडरी हायड्रॉक्सिल), 993 cm-1 (स्ट्रेच CO, Bo-OH) येथे आहेत. 52.53.54. पूरक सारणी S1 मध्ये चिटोसन (रिपोर्टर), शुद्ध चिटोसन, Cm, Ch, आणि Cp साठी FTIR NFRCS शोषण स्पेक्ट्रम मूल्ये दर्शविली आहेत. सर्व NFRCS (Cm, Ch आणि Cp) च्या FTIR स्पेक्ट्रामध्ये, कोणत्याही लक्षणीय बदलांशिवाय शुद्ध चिटोसनप्रमाणेच वैशिष्ट्यपूर्ण शोषण पट्ट्या दिसून आल्या (आकृती २अ). FTIR परिणामांनी NFRCS विकसित करण्यासाठी वापरलेल्या पॉलिमरमध्ये रासायनिक किंवा भौतिक आंतरक्रिया नसल्याची पुष्टी केली, जे दर्शवते की वापरलेले पॉलिमर निष्क्रिय आहेत.
Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS आणि Cs यांचे इन विट्रो वैशिष्ट्यीकरण. (A) दाब दिल्यावर चिटोसान आणि Cm NFRCS, Ch NFRCS व Cp NFRCS यांच्या मिश्रणाचे एकत्रित FTIR स्पेक्ट्रा दर्शवते. (B) a) NFRCS Cm, Ch, Cp, आणि Cg यांचा संपूर्ण रक्तातील शोषण दर (n = 3); Ct नमुन्यांनी जास्त BAR दर्शवला कारण कापसाच्या बोळ्याची शोषण कार्यक्षमता जास्त असते; b) रक्त शोषल्यानंतरचे रक्त. शोषलेल्या नमुन्याचे चित्रण. चाचणी नमुना C च्या BCT चे आलेखी सादरीकरण (Cp NFRCS चा BCT सर्वोत्तम होता (15 s, n = 3)). C, D, E, आणि G मधील डेटा सरासरी ± SD म्हणून दर्शविला गेला आहे, आणि एरर बार SD दर्शवतात, ***p < 0.0001. C, D, E, आणि G मधील डेटा सरासरी ± SD म्हणून दर्शविला गेला आहे, आणि एरर बार SD दर्शवतात, ***p < 0.0001. Данные в C, D, E и G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей представляют представляют стандавляют стандартное. <0,0001. C, D, E, आणि G मधील डेटा सरासरी ± मानक विचलन म्हणून सादर केला आहे, आणि एरर बार मानक विचलन दर्शवतात, ***p<0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD,误差线代表SD,***p <0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD,误差线代表SD,***p <0.0001. Данные в C, D, E и G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрешностей представляют стандоляют <0,0001. C, D, E, आणि G मधील डेटा सरासरी ± मानक विचलन म्हणून दर्शविला आहे, एरर बार मानक विचलन दर्शवतात, ***p<0.0001.