Ẹ ṣeun fún ṣíbẹ̀wò sí Nature.com. Ẹ̀yà ẹ̀rọ ìṣàwárí tí ẹ ń lò ní àtìlẹ́yìn CSS díẹ̀. Fún ìrírí tí ó dára jùlọ, a gbà yín nímọ̀ràn pé kí ẹ lo ẹ̀rọ ìṣàwárí tí a ti mú gbóná (tàbí kí ẹ mú Ìbáramu Ipò nínú Internet Explorer kúrò). Ní ​​àkókò yìí, láti rí i dájú pé a ń tẹ̀síwájú láti ṣe àtìlẹ́yìn, a ó ṣe àtìlẹ́yìn sí ojú-òpó wẹ́ẹ̀bù náà láìsí àwọn àṣà àti JavaScript.
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) jẹ́ ewéko leguminous tí a ń lò fún ìṣelọ́pọ́ oúnjẹ àti ìdàgbàsókè ilẹ̀. Ìfẹ̀sí NLL kárí ayé gẹ́gẹ́ bí èso ti fa ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn olu àkóràn, títí kan lupine anthracnose, èyí tí ó fa àrùn anthracnose tí ó burú jáì. Àwọn alleles méjì, Lanr1 àti AnMan, tí ó fúnni ní resistance tó pọ̀ sí i, ni a ti lò nínú ìbísí NLL, ṣùgbọ́n àwọn ìlànà molikula tí ó wà lábẹ́ rẹ̀ kò tíì di mímọ̀. Nínú ìwádìí yìí, a lo àwọn àmì Lanr1 àti AnMan láti ṣe àyẹ̀wò àwọn àpẹẹrẹ NLL ti Europe. Ìdánwò ti àjẹsára ní àyíká tí a ṣàkóso fi hàn pé àwọn olùfúnni tí ó le koko náà ní ipa. A ṣe àfihàn ìfarahàn jiini differential lórí àwọn ìlà tí ó le koko àti tí ó le koko. Resistance Anthracnose ní ìbáṣepọ̀ pẹ̀lú ìfarahàn púpọ̀ ti àwọn ọ̀rọ̀ ontology jiini “GO:0006952 Defense Response”, “GO:0055114 Redox Process”, àti “GO:0015979 Photosynthesis”. Ní àfikún, ìlà Lanr1(83A:476) fi àtúnṣe ìṣàtúnṣe pàtàkì hàn ní kíákíá lẹ́yìn ìfúnni ní abẹ́rẹ́, nígbà tí àwọn ìlà mìíràn fi ìdádúró hàn nínú ìdáhùn yìí ní nǹkan bí wákàtí 42. Àwọn ìdáhùn ààbò ní ìbáṣepọ̀ pẹ̀lú àwọn jínì TIR-NBS, CC-NBS-LRR àti NBS-LRR, àwọn prótíìnì 10 tí ó ní ipa nínú àrùn, àwọn prótíìnì gbigbe lipid, endoglucan-1,3-β-glucosidase, àwọn prótíìnì odi sẹ́ẹ̀lì glycine-rich, àti àwọn jínì láti ipa ọ̀nà atẹ́gùn tí ń ṣiṣẹ́. Àwọn ìdáhùn àkọ́kọ́ sí 83A:476, pẹ̀lú ìfàmọ́ra àwọn jínì tí ó níí ṣe pẹ̀lú photosynthesis, bá ààbò àṣeyọrí mu nígbà ìpele ìdàgbàsókè ewéko ti ìṣẹ̀dá oríṣiríṣi, èyí tí ó fihàn pé olùṣe kan ń fa ààbò. Ìhùwàsí Mandeloop dínkù, gẹ́gẹ́ bí ìfàmọ́ra gbogbogbòò.
Lupine oní-ewé kékeré (NLL, Lupinus angustifolius L.) jẹ́ ọkà amuaradagba gíga tí ó wá láti agbègbè ìwọ̀-oòrùn Mẹditaréníà1,2. Lọ́wọ́lọ́wọ́, a ń gbìn ín gẹ́gẹ́ bí irugbin oúnjẹ fún àwọn ẹranko àti ènìyàn. A tún kà á sí ìgbẹ́ ewéko ní àwọn ètò ìyípo èso nítorí ìdúró nitrogen nípasẹ̀ bakitéríà tí ó ń fi nitrogen ṣe àtúnṣe àti ìdàgbàsókè gbogbogbòò ti ìṣètò ilẹ̀. NLL ti ṣe ìlànà kíákíá ti gbígbẹ ní ọ̀rúndún tó kọjá, ó sì ṣì wà lábẹ́ ìfúnpọ̀ gíga3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. Pẹ̀lú gbígbìn NLL tí ó gbilẹ̀, ìtẹ̀síwájú àwọn olu tí ó ní àrùn náà mú kí àwọn ibi iṣẹ́ àgbẹ̀ tuntun dàgbàsókè, wọ́n sì fa àwọn àrùn tuntun tí ń pa irugbin run. Ohun tó yani lẹ́nu jùlọ fún àwọn àgbẹ̀ àti àwọn olùtọ́jú lupin ni ìfarahàn anthracnose, tí ó jẹ́ àrùn fungus, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13, fà. Ohun tó yani lẹ́nu jùlọ fún àwọn àgbẹ̀ àti àwọn olùtọ́jú lupin ni ìfarahàn anthracnose, tí ó jẹ́ àrùn fungus, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13, fà. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина. Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ohun tó ṣe pàtàkì jùlọ fún àwọn àgbẹ̀ àti àwọn olùtọ́jú lupine ni ìfarahàn anthracnose tí ó jẹ́ àrùn fungus Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 fà.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真说：Fender Hagedorn13 引起的.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真由病原真語常常病原真語常常常病原真語 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина. грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ohun tó yani lẹ́nu jùlọ fún àwọn àgbẹ̀ àti àwọn olùtọ́jú lupine ni ìfarahàn anthracnose tí olu àrùn Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 fà.Àwọn ìròyìn àkọ́kọ́ nípa àrùn náà wá láti Brazil àti United States, pẹ̀lú àwọn àmì àrùn tí ó wọ́pọ̀ tí ó farahàn ní ọdún 1912 àti 1929 lẹ́sẹẹsẹ. Ṣùgbọ́n, lẹ́yìn nǹkan bí ọgbọ̀n ọdún, a pe àrùn náà ní Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph ti Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的 Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的 Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld nínú Ìmọ̀-ẹ̀rọ Àfojúsùn. & H. Schrenk,. & H. Schrenk,.àti H. Schrenk. & H.施伦克,. & H.施伦克,.àti H. Schlenk,.Àyẹ̀wò àrùn àkọ́kọ́ tí a ṣe ní àárín ọ̀rúndún ogún fi hàn pé àwọn àrùn náà le koko díẹ̀ nínú NLL àti àwọn àrùn tí a fi ń yọ lupine (L. luteus L.), ṣùgbọ́n gbogbo àwọn àrùn tí a dánwò lupine funfun (L. albus L.) ló ṣeé ṣe kí ó fara hàn gidigidi15,16. Àwọn ìwádìí ti fi hàn pé ìdàgbàsókè anthracnose ní í ṣe pẹ̀lú òjò tó pọ̀ sí i (ọrinrin afẹ́fẹ́) àti ìwọ̀n otútù (ní ìwọ̀n 12-28°C), èyí tó yọrí sí ìrúfin ìdènà ní ìwọ̀n otútù tó ga jù17, 18. Ní tòótọ́, àkókò tí conidia nílò láti hù jáde àti láti bẹ̀rẹ̀ àrùn náà, kúrú ní ìlọ́po mẹ́rin ní 24°C (wákàtí 4) ju ní 12°C (wákàtí 16) lábẹ́ àwọn ipò ọ̀rinrin tó ga jù19. Nítorí náà, ìgbóná ayé tó ń lọ lọ́wọ́ ti mú kí àrùn náà tàn kálẹ̀. Síbẹ̀síbẹ̀, a rí àrùn náà ní France (1982) àti Ukraine (1983) gẹ́gẹ́ bí àmì ewu tó ń bọ̀, ṣùgbọ́n ó hàn gbangba pé ilé iṣẹ́ lupine kò fojú fo ó ní àkókò náà20,21. Ní ọdún díẹ̀ lẹ́yìn náà, àrùn apanirun yìí tàn ká gbogbo àgbáyé, ó sì tún kan àwọn orílẹ̀-èdè pàtàkì tí wọ́n ń ṣe àgbékalẹ̀ lupine bíi Australia, Poland àti Germany22,23,24. Lẹ́yìn ìbúgbàù anthracnose ní àárín ọdún 1990, ìwádìí gbígbòòrò yọrí sí dídá àwọn olùfúnni tí ó lè dènà àrùn náà mọ̀ nínú àwọn àpẹẹrẹ NLL19. Àwọn alleles méjì ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ tí a rí ní orísun germplasm ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ ló ń ṣàkóso ìdènà NLL sí anthracnose: Lanr1 nínú irú Tanjil àti Wonga àti AnMan nínú irúgbìn. Mandalay 25, 26. Àwọn alleles wọ̀nyí ń ṣe àfikún sí àwọn àmì molikula tí ó ń ṣètìlẹ́yìn fún yíyan germplasm tí ó lè dènà àrùn náà nínú àwọn ètò ìbímọ25,26,27,28,29,30. A ti fi ìlà ìbísí tí ó dúró ṣinṣin 83A:476 tí ó gbé allele Lanr1 kọjá pẹ̀lú ìlà ìgbẹ́ tí ó ṣeé farapa P27255 láti gba iye RIL tí ó ya sọ́tọ̀ fún ìdènà anthracnose, èyí tí ó mú kí ó ṣeé ṣe láti fi ibi tí Lanr1 wà fún krómósómù NLL-1131, 32, 33. Ìtòjọ àwọn àmì mápù ìsopọ̀ láti ibi tí ó dúró ṣinṣin sí anthracnose pẹ̀lú ìlànà genomic kan, NLL fi ipò gbogbo àwọn alleles mẹ́ta hàn lórí krómósómù kan náà (NLL-11), ṣùgbọ́n ní àwọn ipò ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀29,34,35. Síbẹ̀síbẹ̀, nítorí iye RILs díẹ̀ àti ìyàtọ̀ jínì tí ó pọ̀ láàárín àwọn àmì àti àwọn alleles tí ó báramu, a kò le ṣe ìpinnu tí ó ṣeé gbẹ́kẹ̀lé nípa àwọn jínì tí ó wà lábẹ́ wọn. Ní ọwọ́ kejì ẹ̀wẹ̀, lílo àwọn agenetic reverse nínú lupins ṣòro nítorí agbára ìtúnpadà wọn tí ó kéré gan-an, èyí tí ó mú kí ìṣàkóṣo jínì di ohun tí ó le koko37.
Ìdàgbàsókè germplasm tí a ṣe nílé tí ó gbé allele tí a fẹ́ ní ipò homozygous, bíi 83A:476 (Lanr1) àti Mandelup (AnMan), ti ṣí ilẹ̀kùn sílẹ̀ láti kẹ́kọ̀ọ́ nípa ìdènà anthracnose ní ojú wíwà àwọn àpapọ̀ alleles tí ó lòdì sí ara wọn nínú àwọn ènìyàn igbó. Àwọn ìṣeéṣe ti àwọn ètò molikula. Fi àwọn ìdáhùn ààbò tí a ṣe nípasẹ̀ àwọn genotypes pàtó wéra. Ìwádìí yìí ṣe àyẹ̀wò ìdáhùn transcriptome àkọ́kọ́ ti NLL sí àjẹsára C. lupini. Àkọ́kọ́, a ṣe àyẹ̀wò panẹli germplasm ti Europe kan tí ó ní àwọn ìlà 215 nípa lílo àwọn àmì molikula tí ó ṣe àmì Lanr1 àti AnMan alleles. Lẹ́yìn náà, a ṣe àpẹẹrẹ anthracnose lórí àwọn ìlà NLL 50, tí a ti yàn tẹ́lẹ̀ fún àwọn àmì molikula, lábẹ́ àwọn ipò tí a ṣàkóso. Ní ìbámu pẹ̀lú àwọn ìwádìí wọ̀nyí, a yan àwọn ìlà mẹ́rin tí ó yàtọ̀ síra nínú ìdènà anthracnose àti àkójọpọ̀ allelic Lanr1/AnMan fún àwòrán ìfihàn jínì ààbò oníyàtọ̀ nípa lílo àwọn ọ̀nà àfikún méjì: ìtẹ̀lé RNA gíga àti ìwọ̀n PCR àkókò gidi.
Àyẹ̀wò àpapọ̀ NLL germplasm (N = 215) pẹ̀lú àwọn àmì Lanr1 (Anseq3 àti Anseq4) àti AnMan (Anseq4) àti AnMan (AnManM1) fihàn pé ìlà kan ṣoṣo (95726, nítòsí Salamanca-b) mú kí allele “resistance” pọ̀ sí i fún gbogbo àwọn àmì, nígbàtí “Wíwà àwọn alleles ‘resistance’” rí ìwọ̀n gbogbo àwọn àmì nínú àwọn ìlà 158 (~73.5%). Àwọn ìlà mẹ́tàlá ṣe àwọn alleles “resistance” méjì ti àmì Lanr1, àti àwọn ìlà mẹ́jọ ṣe àwọn alleles “resistance” ti àmì Lanr1. Allele “resistance” ti àmì AnMan (Àfikún Táblì S1). Àwọn ìlà méjì jẹ́ heterozygous fún àmì Anseq3 àti heterozygous kan fún àmì AnManM1. Àwọn ìlà 42 (19.5%) gbé àwọn ìpele òdìkejì ti àwọn alleles Anseq3 àti Anseq4, èyí tí ó fi hàn pé ìyípadà gíga wà láàárín àwọn loci méjì wọ̀nyí. Àwọn àpẹẹrẹ Anthracnose lábẹ́ àwọn ipò ìṣàkóso (Àtẹ S2 Àfikún) fi ìyàtọ̀ hàn nínú ìdènà àwọn genotypes tí a dán wò, èyí tí a fi hàn nínú bí anthracnose ṣe le tó. Àwọn ìyàtọ̀ nínú àwọn àmì àròpín wà láti 1.8 (tó dúró déédé) sí 6.9 (tó ṣeé dúró déédé) àti ìyàtọ̀ nínú ìwọ̀n ewéko wà láti 0.62 (tó ṣeé dúró déédé) sí 4.45 g (tó ṣeé dúró déédé). Ìbáṣepọ̀ pàtàkì wà láàárín àwọn iye tí a rí nínú àtúnṣe méjì ti ìdánwò náà (0.51 fún àwọn àmì àrùn tó le koko, P = 0.00017 àti 0.61 fún ìwọ̀n ewéko, P < 0.0001) àti láàárín àwọn pàrámítà méjì wọ̀nyí (− 0.59 àti − 0.77, P < 0.0001). Ìbáṣepọ̀ pàtàkì wà láàárín àwọn iye tí a ṣàkíyèsí nínú àtúnṣe méjì ti ìdánwò náà (0.51 fún àwọn àmì àrùn tó le koko, P = 0.00017 àti 0.61 fún ìwọ̀n ewéko, P < 0.0001) àti láàárín àwọn pàrámítà méjì wọ̀nyí (− 0.59 àti − 0.77, P < 0.0001). ВыYAVLENA DOSTVERNAIA KORREELIATION MEJDU YANKEREMI, наблюdaemыmy в двух повторностях ксперимеnta (0,51). болезни, P = 0,00017 ati 0,61 fun awọn ami aisan, P <0,0001), ati awọn ti o fẹsẹmulẹ awọn ẹya ara ẹrọ ti o pọju (-0,59 , 0, 0, 1) 0,0001). A rí ìbáṣepọ̀ pàtàkì kan láàárín àwọn iye tí a ṣàkíyèsí nínú àwọn àtúnṣe méjì ti ìdánwò náà (0.51 fún àwọn àmì àrùn líle koko, P = 0.00017 àti 0.61 fún ìwọ̀n ewéko, P < 0.0001), àti láàárín àwọn pàrámítà méjì wọ̀nyí (- 0.59 àti -0.77, P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为0.51，P. 0.00017在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性, p = 0.00017 ， 植物 为 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个和- 0.59 awọn ọdun - 0.77, P <0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми 0,00017 ati awọn ohun elo 0,61, P <0,0001), ati awọn ẹya ara ẹrọ paramita (-0,59 ati -0,0001) 0,77, P <0,0001. Ìbáṣepọ̀ pàtàkì kan wà láàárín àwọn iye tí a ṣàkíyèsí nínú ìṣẹ́po méjì (àmì ìpele àrùn 0.51, P = 0.00017 àti ìwọ̀n ewéko 0.61, P < 0.0001) àti láàrín àwọn pàrámítà méjì wọ̀nyí (-0.59 àti -0 .0001) 0.77, P<0.0001. ).Àwọn àmì tó wọ́pọ̀ tí a máa ń rí lára ​​àwọn ewéko tó lè fara pa ni kíké àti yíyí igi náà padà tó jọ ìrísí “ọwọ́ olùṣọ́ àgùntàn”, lẹ́yìn náà ni àwọn èèmọ́ oval pẹ̀lú sporozoites osan/pinki (Àfikún Àwòrán 1). Àwọn ẹ̀yà ara ilẹ̀ Australia tó gbé àwọn jínì Lanr1 (83A:476 àti Tanjil) àti AnMan (Mandelup) kò fara pa, 0.0331 àti 0.0036). Àwọn ìlà kan tó tún ní àwọn alleles Lanr1 àti/tàbí AnMan tó “lè fara pa” fi àmì àrùn náà hàn.
Lọ́nà tó yani lẹ́nu, àwọn ìlà NLL díẹ̀ tí kò ní allele àmì “tó lè fara dà” fi hàn pé wọ́n ní ìpele gíga ti resistance anthracnose (tí a lè fiwé tàbí tí ó ga ju ti Lanr1 tàbí AnMan genotypes lọ), bíi Boregine (iye P < 0.0001 fún àwọn pàrámítà méjèèjì), Bojar (iye P < 0.0001 fún àmì àti 0.001 fún ìwọ̀n ewéko) àti Population B-549/79b (iye P < 0.0001 fún àmì àti àìṣe pàtàkì fún ìwọ̀n). Lọ́nà tó yani lẹ́nu, àwọn ìlà NLL díẹ̀ tí kò ní allele àmì “tó lè fara dà” fi hàn pé wọ́n ní ìpele gíga ti resistance anthracnose (tí a lè fiwé tàbí tí ó ga ju ti Lanr1 tàbí AnMan genotypes lọ), bíi Boregine (iye P < 0.0001 fún àwọn pàrámítà méjèèjì), Bojar (iye P < 0.0001 fún àmì àti 0.001 fún ìwọ̀n ewéko) àti Population B-549/79b (iye P < 0.0001 fún àmì àti àìṣe pàtàkì fún ìwọ̀n). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо устойчивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как, з000 (заки как Boregine) обоих параметров), Bojar (значение P <0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) ati популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). Lọ́nà tó yani lẹ́nu, ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìlà NLL tí kò ní allele àmì tó lè dènà àrùn náà fi ìpele gíga hàn pé wọ́n ní ìdènà sí anthracnose (tí a lè fi wé tàbí tí ó ga ju ti Lanr1 tàbí AnMan genotypes lọ), bíi Boregine (iye P < 0.0001 fún àwọn pàrámítà méjèèjì), Bojar (iye P < 0.0001 fún ìṣàyẹ̀wò àti 0.001 fún ìwọ̀n ewéko) àti iye ènìyàn B-549/79b (iye P < 0.0001 fún ìṣàyẹ̀wò àti pé kò ṣe pàtàkì fún ìwọ̀n).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重量不找。 Ó yani lẹ́nu pé àwọn ètò NLL kan tí kò ní àmì “antigenic” fi agbára gíga hàn (tó bá àwọn jínì Lanr1 tàbí AnMan mu tàbí jù bẹ́ẹ̀ lọ), bíi Boregine (àwọn pàrámítà méjèèjì P < 0.0001), Bojar (iye P < 0.0001, ìwọ̀n ewéko 0.001) àti irú B-549/79b (iye P < 0.0001, ìwọ̀n kò ṣe pàtàkì). Интересно, что некоторые линии NLL. устойчивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P диля поб000), Bojar (значение P <0,0001, масса растения 0,001) и популяция B-549/79b (оценка P-значение) <0,0001, масса незначительна). Ó yani lẹ́nu pé àwọn ìlà NLL kan tí kò ní àmì ìdènà kankan fi àwọn ìpele gíga ti ìdènà anthracnose hàn (tí a lè fiwé tàbí tí ó ga ju Lanr1 tàbí AnMan genotypes lọ), bíi Boregine (iye P fún àwọn pàrámítà méjèèjì <0.0001), Bojar (iye P < 0.0001, ìwọ̀n igi 0.001) àti iye ènìyàn B-549/79b (iye P < 0.0001, ìwọ̀n kò ṣe pàtàkì).Ìṣẹ̀lẹ̀ yìí fi hàn pé ó ṣeé ṣe kí orísun ìdènà jínì tuntun kan wà, èyí tó ṣàlàyé àìsí ìbáṣepọ̀ láàárín àwọn genotypes àmì àti àwọn àpẹẹrẹ àrùn (àwọn iye P láti ~0.42 sí ~0.98). Nítorí náà, ìdánwò Kolmogorov-Smirnov fi hàn pé dátà lórí ìdènà anthracnose ni a sábà máa ń pín fún àwọn àmì (àwọn iye P 0.25 àti 0.11) àti ìwọ̀n ewéko (àwọn iye P 0.47 àti 0.55), èyí tó fi hàn pé I gbà pé àwọn alleles tó pọ̀ ju Lanr1 àti AnMan lọ ló ní ipa nínú rẹ̀.
Ní ìbámu pẹ̀lú àwọn àbájáde ìṣàyẹ̀wò ìdènà anthracnose, a yan àwọn ìlà mẹ́rin fún ìṣàyẹ̀wò transcriptome: 83A:476, Boregine, Mandelup, àti Population 22660. A tún dán àwọn ìlà wọ̀nyí wò fún ìdènà anthrax nínú àwọn àyẹ̀wò ìfúnnilára nípasẹ̀ ìtẹ̀léra RNA, tí ó bá jẹ́ pé wọ́n jọra gẹ́gẹ́ bí ó ti rí nínú ìdánwò tí ó ṣáájú. Àwọn ìwọ̀n àmì náà ni wọ̀nyí: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) àti population 22660 (6.11 ± 1.29).
Ìlànà Illumina NovaSeq 6000 ṣe àṣeyọrí àpapọ̀ àwọn ìpele Mread 40.5 fún àpẹẹrẹ kọ̀ọ̀kan (29.7 sí 54.4 Mreads) (Àfikún Táblì S3). Àwọn àmì ìtòlẹ́sẹẹsẹ nínú ìtọ́kasí wà láti 75.5% sí 88.6%. Ìbáṣepọ̀ àpapọ̀ ti ìkà ìwé kíkà láàrín àwọn ìyàtọ̀ ìdánwò láàrín àwọn àtúnṣe ẹ̀dá alààyè wà láti 0.812 sí 0.997 (àròpọ̀ 0.959). Nínú àwọn 35,170 jínì tí a ṣàyẹ̀wò, 2917 kò fi hàn pé a rí ìfarahàn kankan, àti pé àwọn 4785 jínì yòókù ni a fi hàn ní ìpele tí kò ṣe pàtàkì (ìpìlẹ̀ àròpín < 5). Nínú àwọn 35,170 jínì tí a ṣàyẹ̀wò, 2917 kò fi hàn pé a rí ìfarahàn kankan, àti pé àwọn 4785 jínì yòókù ni a fi hàn ní ìpele tí kò ṣe pàtàkì (ìpìlẹ̀ àròpín < 5). Иz 35 170 proanalizyrovannыh genov 2917 kii ṣe awọn ohun elo ti o ni imọran, ostalnыe 4785. незначительном уровне (базовое среднее <5). Nínú àwọn 35,170 jínì tí a ṣàyẹ̀wò, 2917 kò fi ìfarahàn hàn, àti àwọn 4785 jínì tó kù ni a fi hàn ní ìpele tí kò ṣe pàtàkì (ìpìlẹ̀ àròpín <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 5) .35,170 Иz 35 170 proanalizyrovannыh genov 2917 kii ṣe nkan elo (базовое среднее значение <5). Nínú àwọn 35,170 jínì tí a ṣàyẹ̀wò, a kò sọ 2917 jáde, àwọn 4785 jínì tó kù sì ní ìfarahàn tí kò ṣe pàtàkì (ìtumọ̀ ìpìlẹ̀ <5).Nítorí náà, iye àwọn jínì tí a kà sí èyí tí a ti sọ (ìpìlẹ̀ àròpọ̀ ≥ 5) nígbà ìdánwò náà jẹ́ 27,468 (78.1%) (Àtẹ Àfikún S4).
Láti ìgbà àkọ́kọ́, gbogbo àwọn ìlà NLL dáhùn sí ìfúnni C. lupini (ìyà Col-08) nípa ṣíṣe àtúntò transcriptome (Táblì 1), síbẹ̀síbẹ̀, a rí àwọn ìyàtọ̀ pàtàkì láàárín àwọn ìlà náà. Nítorí náà, ìlà resistance 83A:476 (tí ó ń gbé ìran Lanr1) fi àtúntò transcriptome pàtàkì hàn ní àkókò àkọ́kọ́ (6 hpi) pẹ̀lú ìbísí ìlọ́po 31-69 nínú iye àwọn ìran tí a yà sọ́tọ̀ sókè àti ìsàlẹ̀ ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn àkókò mìíràn ní àkókò yìí. Ní àfikún, òkè yìí kò pẹ́, nítorí pé ìfarahàn àwọn ìran díẹ̀ ṣì yípadà ní àkókò kejì (12 hpi). Lọ́nà tí ó yani lẹ́nu, Boregine, tí ó tún fi ìpele gíga ti resistance hàn nínú ìdánwò graft, kò ṣe àtúntò transcription tó pọ̀ tó bẹ́ẹ̀ nígbà ìdánwò náà. Síbẹ̀síbẹ̀, iye àwọn ìran tí a yà sọ́tọ̀ ní ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ (DEG) jẹ́ kan náà fún Boregine àti 83A:476 ní 12 HPI. Mandelup àti iye àwọn ènìyàn 22660 fi hàn pé àwọn DEG ga ní àkókò ìkẹyìn (48 l/s), èyí tó fi hàn pé ìdádúró díẹ̀ wà nínú àwọn ìdáhùn ààbò.
Nítorí pé 83A:476 ṣe àtúnṣe ìkọ̀wé tó pọ̀ gan-an ní ìdáhùn sí C. lupini ní 6 HPI ní ìfiwéra pẹ̀lú gbogbo àwọn ìlà mìíràn, ~91% àwọn DEG tí a ṣàkíyèsí ní àkókò yìí jẹ́ ti ìran kan náà (Àwòrán 1). Síbẹ̀síbẹ̀, ìdàpọ̀ díẹ̀ wà nínú àwọn ìdáhùn àkọ́kọ́ láàárín àwọn ìlà ìkẹ́kọ̀ọ́, bí 68.5%, 50.9%, àti 52.6% DEG ní Boregine, Mandelup, àti iye ènìyàn 22660, lẹ́sẹẹsẹ, ṣe déédé pẹ̀lú àwọn tí a rí ní 83A:476 ní àwọn àkókò kan ní àkókò kan. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn DEG wọ̀nyí jẹ́ ìpín kékeré kan (0.97–1.70%) nínú gbogbo DEG tí a rí lọ́wọ́lọ́wọ́ nípa lílo 83A:476. Ní àfikún, àwọn DEG 11 láti gbogbo ìlà náà jẹ́ èyí tí ó báramu ní àkókò yìí (Àwọn Tábìlì Àfikún S4-S6), pẹ̀lú àwọn èròjà tí ó wọ́pọ̀ nínú àwọn ìdáhùn ààbò ewéko: protein gbigbe lipid (TanjilG_32225), endoglucan-1,3-β-glucoside enzyme (TanjilG_23384), àwọn protein méjì tí a lè fi stress-inducing ṣe bíi SAM22 (TanjilG_31528 àti TanjilG_31531), amuaradagba latex basic (TanjilG_32352), àti àwọn protein méjì tí ó ní glycine-rich structure cell wall proteins (TanjilG_19701 àti TanjilG_19702). Bákan náà ni ìdàpọ̀ gíga wà nínú àwọn ìdáhùn transcriptome láàrín 83A:476 àti Boregine ní 24 HPI (àròpọ̀ 16-38% DEG) àti láàrín Mandelup àti Population 22660 ní 48 HPI (àròpọ̀ 14-20% DEG).
Àwòrán Venn tó ń fi iye àwọn jínì tó ní ìyàtọ̀ nínú ara hàn (DEG) nínú àwọn ìlà lupine (NLL) tí a fi Colletotrichum lupini (ìyà Col-08 tí a rí láti inú àwọn pápá lupine ní Wierzhenice, Poland, 1999) fún abẹ́rẹ́. Àwọn ìlà NLL tí a ṣàyẹ̀wò ni: 83A:476 (tó ní agbára, tó ní agbára Lanr1 allele), Boregine (tó ní agbára, tó ní agbára ìbílẹ̀), Mandelup (tó ní agbára díẹ̀, tó ní agbára AnMan allele) àti iye ènìyàn 22660 (tó ní agbára púpọ̀). Àkópọ̀ hpi dúró fún wákàtí díẹ̀ lẹ́yìn àjẹsára. A ti yọ ìwọ̀n òdo kúrò láti mú kí àwòrán náà rọrùn.
A ṣe àyẹ̀wò àkójọ àwọn jínì tí a ti fihàn ju ní 6 hpi fún wíwà àwọn agbègbè jínì R canonical (Àfikún Táblì S7). Ìwádìí yìí fi hàn pé àwọn ìfàsẹ́yìn transcriptome ti àwọn jínì tí ó ń dènà àrùn pẹ̀lú àwọn agbègbè NBS-LRR nìkan ní 83A:476. Àkójọ yìí ní jínì TIR-NBS-LRR kan (tanjilg_05042), àwọn jínì CC-NBS-LRR márùn-ún (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, àti tanjilg_16162), àti NBS-LR mẹ́rin, Tanjilg_16162), àti NBS-LR mẹ́rin (tanjilg_16162) àti NBS-LR mẹ́rin (tanjilg_16162) àti NBS-LRR mẹ́rin (TANJILG_16162). Gbogbo àwọn jínì wọ̀nyí ní àwọn agbègbè onímọ̀ tí a ṣètò ní àwọn ìtẹ̀léra tí a ti pa mọ́. Ní àfikún sí àwọn jínì agbègbè NBS-LRR, ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn kinases RLL ni a mú ṣiṣẹ́ ní 6 hpi, èyí ni ọ̀kan nínú Boregine (TanjilG_19877), méjì nínú Mandelup (TanjilG_07141 àti TanjilG_19877) àti nínú iye ènìyàn 22660 (TanjilG_09014 àti TanjilG_10361) àti méjì nínú 83A 27:476.
Àwọn jínì tí ìrísí wọn ti yípadà gidigidi ní ìdáhùn sí ìtọ́jú C. lupini (ìyà Col-08) ni a fi ṣe àyẹ̀wò ìdàgbàsókè Gene Ontology (GO) (Àfikún Táblì S8). Ọ̀rọ̀ tí a sábà máa ń lò fún ìlànà ìṣẹ̀dá ẹ̀dá alààyè ni “Ìdáhùn ààbò GO:0006952” èyí tí ó fara hàn nínú àpapọ̀ mẹ́fà nínú 16 (ìlà × àkókò) pẹ̀lú ìtumọ̀ gíga (iye P < 0.001) (Àwòrán 2). Ọ̀rọ̀ tí a sábà máa ń lò fún ìlànà ìṣẹ̀dá ẹ̀dá alààyè ni “Ìdáhùn ààbò GO:0006952” èyí tí ó fara hàn nínú àpapọ̀ mẹ́fà nínú 16 (ìlà × àkókò) pẹ̀lú ìtumọ̀ gíga (iye P < 0.001) (Àwòrán 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитотный» появлялся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ọ̀rọ̀ tí a sábà máa ń lò fún ìlànà ìṣẹ̀dá ẹ̀dá alààyè ni ‘Ìdáhùn ààbò GO:0006952’, èyí tí ó farahàn nínú àpapọ̀ mẹ́fà nínú 16 (ìlà ìlà àkókò ×) pẹ̀lú ìtumọ̀ gíga (iye P < 0.001) (Àwòrán 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952个中，具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）。 Ọ̀rọ̀ ìlànà ìṣẹ̀dá ẹ̀dá alààyè tó ṣe pàtàkì jùlọ ni “Ìdáhùn ààbò GO:0006952”, èyí tó farahàn nínú mẹ́fà nínú àpapọ̀ mẹ́rìndínlógún (时间×线), pẹ̀lú ìtumọ̀ gíga (iye P < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 00явявяв 6952 Idahun Idaabobo», из 16 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ọ̀rọ̀ tí a sábà máa ń lò fún ìlànà ìṣẹ̀dá ẹ̀dá alààyè ni 'GO:0006952 Defense Response', èyí tí ó fara hàn nínú àpapọ̀ mẹ́fà nínú 16 (àkókò × ìlà) pẹ̀lú ìtumọ̀ gíga (iye P < 0.001) (Àwòrán 2).Ọ̀rọ̀ yìí ní àfihàn púpọ̀ ní àkókò méjì ní 83A: 476 àti Boregine (6 àti 24 hpi) àti ní àkókò kan ní Mandelup àti Population 22660 (12 àti 6 hpi, lẹ́sẹẹsẹ). Èyí jẹ́ àbájáde tí a retí, tí ó ń ṣàfihàn ìdáhùn antifungal ti àwọn ìlà tí ó dúró ṣinṣin. Ní àfikún, 83A:476 dáhùn sí C. lupini nípa fífún àwọn jínì tí ó ní í ṣe pẹ̀lú ìbúgbàù oxidative tí a ṣojú fún nípasẹ̀ ọ̀rọ̀ náà “GO:0055114 redox process”, tí ó ń tọ́ka sí ìdáhùn ààbò pàtó kan, nígbà tí Boregine fi àwọn ìdáhùn ààbò pàtó hàn, tí ó ní í ṣe pẹ̀lú ọ̀rọ̀ náà “GO”. :0006950 Ìdáhùn Ìdààmú”. Population 22660 mu ìdáhùn ìdènà ìdúróṣinṣin tí ó ní àwọn metabolites kejì ṣiṣẹ́, ó ṣe àfihàn iye àwọn ọ̀rọ̀ tí ó pọ̀ jù “GO:0016104 Ìlànà ti biosynthesis triterpene” àti “GO:0006722 Ìlànà ti ìṣẹ̀dá triterpene” (àwọn ọ̀rọ̀ méjèèjì jẹ́ ti àpapọ̀ àwọn jiini kan náà), ní gbígbé àwọn àbájáde ìṣàyẹ̀wò ìdàgbàsókè ọ̀rọ̀ GO yẹ̀ wò, ìdúróṣinṣin ìṣẹ̀dá Mandelup wà láàrín Boregine àti Population 22660. Ní àfikún, ìhùwàpadà ìbẹ̀rẹ̀ 83A:476 (6 hpi) àti ìhùwàpadà ìdúró Mandelup àti Population 22660 ní ọ̀rọ̀ GO:0015979 'photosynthesis' àti àwọn ìlànà ìṣẹ̀dá mìíràn tí ó jọ mọ́ ọn.
Àwọn ọ̀rọ̀ ontology jínì tí a yàn nínú àtúnsọ àwọn jínì tí a fihàn ní ìyàtọ̀ nígbà tí a bá ń ṣe àtúnsọ àwọn ìdáhùn transcriptome ti lupine tí a fi anthrax lupine (ìrísí Col-08 tí a rí láti inú pápá lupine ní Wierzhenice, Poland, ní ọdún 1999) ni a ti ṣe àṣejù gidigidi. Àwọn ìlà NLL tí a ṣàyẹ̀wò ni: 83A:476 (oògùn, tí ó gbé allele Lanr1 homozygous), Boregine (oògùn, ìpìlẹ̀ ìbílẹ̀ tí a kò mọ̀), Mandelup (oògùn tí ó dúró díẹ̀, tí ó gbé allele AnMan homozygous) àti iye ènìyàn 22660 (ó ṣeé farapa).
Nítorí pé ìwádìí yìí ní èrò láti mọ àwọn jínì tí ó ń fa ìdènà anthracnose, a fi àwọn jínì tí a yàn sí àwọn ọ̀rọ̀ GO “GO: 0006952 Àwọn ìdáhùn ìgbèjà” àti “GO: 0055114 Àwọn ìlànà Redox” ṣe àyẹ̀wò pẹ̀lú àwọn ìgékúrò nítorí pé ìtumọ̀ ìpìlẹ̀ ≥ 30 pẹ̀lú ó kéré tán ìlà kan. × ojú-ìwé ní ​​àkókò tí ó so àwọn iye pàtàkì ti log2 pọ̀ (ìyípadà ìlọ́po). Iye àwọn jínì tí ó bá àwọn ìlànà wọ̀nyí mu jẹ́ 65 fún GO:0006952 àti 524 fún GO:0055114.
83A:476 fi àwọn òkè DEG méjì tí a kọ orúkọ wọn sí GO:0006952 hàn, èkíní ní àwọn jínì 6 fún inṣi kan (ìlànà jínì 64, ìlànà òkè àti ìsàlẹ̀) àti èkejì ní àwọn jínì 24 fún inṣi kan (ìlànà jínì 15, ìlànà òkè nìkan). Boregine tún fi hàn pé GO:0006952 dé òkè ní àkókò kan náà, ṣùgbọ́n pẹ̀lú DEG díẹ̀ (11 àti 8) àti ìṣiṣẹ́ àyànfẹ́. Mandeloop fi àwọn òkè GO méjì hàn ní HPI 12 àti 48, àwọn méjèèjì ní àwọn jínì 12 (èkíní pẹ̀lú àwọn jínì tí ń ṣiṣẹ́, àti èkejì pẹ̀lú àwọn jínì tí ń dínkù nìkan), nígbà tí iye ènìyàn 22660 ní HPI 6 (jìnì 13) ní agbára ìdàgbàsókè. ìlànà. Ó yẹ kí a kíyèsí pé 96.4% ti GO:0006952 DEG nínú àwọn òkè wọ̀nyí ní irú ìdáhùn kan náà (sókè tàbí sísàlẹ̀), èyí tí ó fi hàn pé ìdàpọ̀ pàtàkì wà nínú àwọn ìdáhùn ààbò láìka ìyàtọ̀ nínú iye àwọn jínì tí ó wà nínú rẹ̀ sí. Àwùjọ tó tóbi jùlọ nínú àwọn ìtẹ̀léra tó níí ṣe pẹ̀lú ọ̀rọ̀ GO:0006952 ló ń ṣàfihàn Virvation Stress-Associated Message Protein 22 (SAM22-like), èyí tó jẹ́ ti protein clade class 10 pathogenesis-associated protein (PR-10) àti core protein latex. similar (MLP-like) protein) (Àwòrán 3). Àwọn ẹgbẹ́ méjèèjì yàtọ̀ síra ní ìrísí ìfarahàn àti ìtọ́sọ́nà ìdáhùn. Àwọn genes tí ó ń ṣàfihàn àwọn protein bíi SAM22 fi ìfàsẹ́yìn tó dúró ṣinṣin àti tó ṣe pàtàkì hàn ní ìbẹ̀rẹ̀ àkókò (6 tàbí 12 hpi) wọ́n sì sábà máa ń dáhùn ní ìparí ìdánwò náà (48 hpi), nígbà tí àwọn proteins tí ó jọ MLP fi ìṣọ̀kan hàn ní 6 hpi. hpi. 83A:476 àti Mandelup ní 48 hp/in, ó fẹ́rẹ̀ẹ́ jẹ́ pé gbogbo àwọn data mìíràn kò dáhùn. Ní àfikún, àwọn ìyàtọ̀ nínú àwọn proteal ìfarahàn ti SAM22-like protein genes tẹ̀lé ìyàtọ̀ tí a rí nínú resistance anthracnose, nítorí pé àwọn ìlà tí ó le koko jù ní àwọn àkókò àkókò púpọ̀ tí ó ń fa àwọn genes wọ̀nyí ní pàtàkì ju àwọn genes tí ó le koko jù lọ. Ìran PR-10 mìíràn tí ó jọ LlR18A/B fi ìrísí ìfarahàn tí ó jọra hàn sí ìran PR-10 tí ó jọ SAM22.
A ṣàwárí àwọn ẹ̀yà pàtàkì ti ọ̀rọ̀ ìlànà ìṣẹ̀dá-ara “GO:0006952 Ìdáhùn Ìgbèjà” àti àwọn àpẹẹrẹ ìfarahàn àwọn ìrísí àwọn ìrísí àwọn alleles Lanr1 àti AnMan. Ìwọ̀n Log2 dúró fún àwọn ìwọ̀n log2 (ìyípadà ìlọ́po) láàrín àwọn ohun tí a ti fún ní abẹ́rẹ́ (Colletotrichum lupini, irú Col-08, tí a rí láti inú àwọn pápá lupine, Wizhenica, Poland, 1999) àti àwọn ewéko ìṣàkóso (sham-inoculated) ní àkókò kan náà. A ṣe àyẹ̀wò àwọn ìlà lupine tí ó wà ní ìlà yìí: 83A:476 (o le fara dà, tí ó gbé allele Lanr1 homozygous), Boregine (o le fara dà, tí a kò mọ̀ nípa ìpìlẹ̀ ìṣẹ̀dá), Mandelup (o le fara dà díẹ̀, tí ó gbé allele AnMan homozygous), àti Population 22660 (o le fara dà).
Ní àfikún, a ṣe àyẹ̀wò àwọn ìfihàn ìfarahàn àwọn jínì Lanr1 (TanjilG_05042) àti AnMan (TanjilG_12861) (Àwòrán 3). Jínì TanjilG_05042 fi ìdáhùn pàtàkì hàn (ìmúṣiṣẹ́) ní 83A:476 ní àkókò àkọ́kọ́ (6 hpi), nígbàtí TanjilG_12861 ṣe pàtàkì ní Mandeloop ní àkókò méjì nìkan: 6 hpi (ìlànà ìsàlẹ̀) àti 24 hpi (6 hpi). Pẹ̀lú.). tí a lè ṣàtúnṣe) ).
Àwọn jínì tí a ti sọ̀rọ̀ nípa wọn jù nínú ọ̀rọ̀ náà GO:0055114 “ìlànà redox” ni àwọn jínì tí ó ń ṣàfihàn àwọn prótíìnì cytochrome P450 àti peroxidase (Àwòrán 4). Fún àwọn àpẹẹrẹ tí a yà sọ́tọ̀ láti 83A:476 ní 6 HPI, a sábà máa ń rí àwọn iye log2 tí ó pọ̀jù tàbí tí ó kéré jùlọ (fún 86.6% àwọn jínì) láàárín àwọn ewéko tí a ti fún ní ìtọ́jú àti àwọn tí a ń ṣàkóso, èyí tí ó ń fi hàn pé ìhùwàsí gíga ti jínì yìí sí ìtọ́jú ìbálòpọ̀ ni ó pọ̀jù. 83A:476 fi GO tí ó ṣe pàtàkì jùlọ hàn: 0055114 DEG ní 6 hpi (503 jínì), nígbà tí àwọn ìlà yòókù ní 48 hpi (Boregine, 31 jínì; Mandelup, 85 jínì; àti Population 22660, 78 jínì)). Nínú ọ̀pọ̀lọpọ̀ jínì ti ìdílé GO:0055114, a rí oríṣi ìdáhùn méjì sí ìtọ́jú àjẹsára (ìmúṣiṣẹ́ àti ìdènà). Ó yani lẹ́nu pé, tó 97.6% àwọn DEG tí a dámọ̀ fún ọ̀rọ̀ GO: 0055114 ní Mandelupe ní 48 hp. Àwọn àkíyèsí wọ̀nyí fihàn pé, láìka ìwọ̀n tí ó kéré sí i (ìyẹn ni, iye àwọn jínì redox tí a yí padà, 85 sí 503), àpẹẹrẹ àwọn ìdáhùn transcriptome tí ó pẹ́ tí mandeloup sí anthracnose jọra sí ìdáhùn àkọ́kọ́ ti 83A:476. Nínú Boregine àti Population 22660, ìṣọ̀kan yìí kéré sí ní 51.6% àti 75.6%, ní ìtẹ̀léra.
A ṣe àfihàn àwọn ìlànà ìfìhàn àwọn ẹ̀yà pàtàkì ti ọ̀rọ̀ ìlànà ìbílẹ̀ “GO:0055114 Redox process”. Ìwọ̀n Log2 dúró fún àwọn ìwọ̀n log2 (ìyípadà ìlọ́po) láàrín àwọn ohun tí a ti fún ní abẹ́rẹ́ (Colletotrichum lupini, irú Col-08, tí a rí láti inú àwọn pápá lupine, Wizhenica, Poland, 1999) àti àwọn ewéko tí a ti ṣàkóso (sham-inoculated) ní àkókò kan náà. A ṣe àyẹ̀wò àwọn ìlà lupine tí ó wà ní ìlà yìí: 83A:476 (o le fara dà, tí ó gbé allele Lanr1 homozygous), Boregine (o le fara dà, tí a kò mọ̀ nípa ìpìlẹ̀ ìran), Mandelup (o le fara dà díẹ̀, tí ó gbé allele AnMan homozygous), àti Population 22660 (o le fara dà).
83A:476 Àwọn ìdáhùn transcriptomic sí ìfúnni ní ìfúnni pẹ̀lú C. lupini (ìyà Col-08) tún ní ìdákẹ́jẹ́ẹ́ ìṣọ̀kan ti àwọn jínì tí a sọ pé ó jẹ́ “photosynthesis” GO:0015979 àti àwọn ìlànà ìbílẹ̀ mìíràn tí ó jọra (Àwòrán 5). Àkójọ GO:0015979 DEG yìí ní àwọn jínì 105 tí a tẹ̀ mọ́lẹ̀ ní 6 hpi ní 83A:476. Nínú àkójọ yìí, a tún dín àwọn jínì 37 kù ní Mandelup ní 48 HPI àti 35 ní àkókò kan náà nínú àwọn ènìyàn 22660, pẹ̀lú 19 DEG tí ó wọ́pọ̀ sí àwọn jínì méjèèjì. Kò sí DEG tí ó níí ṣe pẹ̀lú ọ̀rọ̀ GO: 0015979 tí a mú ṣiṣẹ́ ní pàtàkì nínú àpapọ̀ èyíkéyìí (ìlà x àkókò).
A ṣe àfihàn àwọn ìlànà ìfìhàn àwọn ẹ̀yà pàtàkì ti ọ̀rọ̀ ìlànà ìṣẹ̀dá-ara “GO:0015979 Photosynthesis”. Ìwọ̀n Log2 dúró fún àwọn ìwọ̀n log2 (ìyípadà ìlọ́po) láàrín àwọn ohun tí a ti fún ní abẹ́rẹ́ (Colletotrichum lupini, irú Col-08, tí a rí láti inú àwọn pápá lupine, Wizhenica, Poland, 1999) àti àwọn ewéko tí a ti ṣàkóso (sham-inoculated) ní àkókò kan náà. A ṣe àyẹ̀wò àwọn ìlà lupine tí ó wà ní ìlà yìí: 83A:476 (o le fara dà, tí ó gbé allele Lanr1 homozygous), Boregine (o le fara dà, tí a kò mọ̀ nípa ìpìlẹ̀ ìran), Mandelup (o le fara dà díẹ̀, tí ó gbé allele AnMan homozygous), àti Population 22660 (o le fara dà).
Ní ìbámu pẹ̀lú àwọn àbájáde ìṣàyẹ̀wò ìṣàfihàn ìyàtọ̀ àti àwọn tí ó ṣeéṣe kí ó ní ipa nínú àwọn ìdáhùn ààbò lòdì sí àwọn olú àrùn, a yan àkójọ àwọn jínì méje yìí fún ìwọ̀n àwọn ìṣàfihàn ìṣàfihàn nípasẹ̀ PCR àkókò gidi (Àfikún Táblì S9).
Jíìnì prótíìnì TanjilG_10657 tí a fi pamọ́ jẹ́ ohun tí a fa ní pàtàkì nínú gbogbo àwọn ìlà àti àkókò tí a kẹ́kọ̀ọ́ ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ewéko ìṣàkóso (àfikún) (Àwọn Tábìlì S10, S11). Ní ​​àfikún, ìfihàn ìfihàn ti TanjilG_10657 fi ìtẹ̀síwájú tí ń pọ̀ sí i hàn ní gbogbo àkókò ìdánwò náà fún gbogbo ìlà. Iye ènìyàn 22660 fi ìfaradà tí ó ga jùlọ ti TanjilG_10657 hàn sí ìfúnni ní ìlọ́po 114 àti ìpele ìfihàn tí ó ga jùlọ (4.4 ± 0.4) ní 24 HPI (Àwòrán 6a). Jíìnì prótíìnì PR10 LlR18A TanjilG_27015 tún fi ìfúnni hàn ní gbogbo ìlà àti àkókò, pẹ̀lú ìtumọ̀ ìṣirò ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn ibi ìwádìí (Àwòrán 6b). Gẹ́gẹ́ bí TanjilG_10657, a rí ìpele ìfarahàn tó ga jùlọ ti TanjilG_27015 nínú iye àwọn ènìyàn 22660 tí a fún ní abẹ́rẹ́ ní 24 HPI (19.5 ± 2.4). Jíìnì endochitinase acid TanjilG_04706 ga sí i ní gbogbo ìlà àti ní gbogbo àkókò àyàfi Boregine 6 hpi (Àwòrán 6c). Ó fa ìfàsẹ́yìn gidigidi ní àkókò àkọ́kọ́ (6 HPI) ní 83A:476 (nípa ìgbà 10.5) ó sì pọ̀ sí i ní ìwọ̀n díẹ̀ ní àwọn ìlà mìíràn (nípa ìgbà 6.6-7.5). Nígbà ìdánwò náà, ìfarahàn TanjilG_04706 dúró ní ìwọ̀n kan náà ní 83A:476 àti Boregine, nígbà tí ní Mandelup àti Population 22660 ó pọ̀ sí i ní pàtàkì, ó dé àwọn ìwọ̀n gíga díẹ̀ (5.9 ± 1.5 àti 6.2 ± 1.5, ní ìtẹ̀léra). Ìran TanjilG_23384 tí ó jọ endoglucan-1,3-β-glucosidase fi ìṣiṣẹ́ gíga hàn ní àwọn àkókò méjì àkọ́kọ́ (6 àti 12 hpi) ní gbogbo àwọn ìlà àyàfi iye ènìyàn 22660 (Àwòrán 6d). A ṣe àkíyèsí àwọn ìpele ìfarahàn ìbáṣepọ̀ tí ó ga jùlọ ti TanjilG_23384 ní àkókò kejì (12 hpi) ní Mandelup (2.7 ± 0.3) àti 83A:476 (1.5 ± 0.1). Ní ​​24 HPI, ìfarahàn TanjilG_23384 kéré ní gbogbo àwọn ìlà tí a kẹ́kọ̀ọ́ (láti 0.04 ± 0.009 sí 0.44 ± 0.12).
Àwọn ìrísí ìfarahàn àwọn jínì tí a yàn (ag) tí a fi hàn nípasẹ̀ PCR oníwọ̀n. Àwọn nọ́mbà 6, 12 àti 24 dúró fún wákàtí lẹ́yìn àjẹsára. A lo àwọn jínì LanDExH7 àti LanTUB6 fún ìṣètò déédéé àti a lo LanTUB6 fún ìṣètò àárín-ẹ̀ka. Àwọn ọ̀pá àṣìṣe dúró fún ìyàtọ̀ boṣewa tí a gbé karí àwọn ìrísí ẹ̀dá mẹ́ta, èyí tí ọ̀kọ̀ọ̀kan wọn jẹ́ àròpín àwọn ìrísí ìmọ̀-ẹ̀rọ mẹ́ta. Àmì ìṣirò nípa ìyàtọ̀ nínú ìpele ìfarahàn láàárín àwọn ohun tí a fún ní abẹ́rẹ́ (Colletotrichum lupini, irú Col-08, tí a rí ní ọdún 1999 láti inú pápá lupin ní Wierzenica, Poland) àti àwọn ohun ọ̀gbìn ìṣàkóso (mock-inoculated) ni a fi àmì sí lókè àwọn ibi ìwádìí (*P value < 0.05, **P value ≤ 0.01, ***P value ≤ 0.001). Àmì ìṣirò nípa ìyàtọ̀ nínú ìpele ìfarahàn láàárín àwọn ohun tí a fún ní abẹ́rẹ́ (Colletotrichum lupini, irú Col-08, tí a rí ní ọdún 1999 láti inú pápá lupin ní Wierzenica, Poland) àti àwọn ohun ọ̀gbìn ìṣàkóso (mock-inoculated) ni a fi àmì sí lókè àwọn ibi ìwádìí (*P value < 0.05, **P value ≤ 0.01, ***P value ≤ 0.001). Статическая значимость различий в уровнях эkspressi mezhdu atinkulyrovannыmy (Colletotrichum lupini, шtamm Col-01пуный 9. поля люпина в Верженице, Польша) и контрольными 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001). Àwọn ìyàtọ̀ pàtàkì tí a lè rí nínú ìṣirò ni a ṣe àkíyèsí nínú ìpele ìfarahàn láàrín àwọn ohun ọ̀gbìn tí a ti fún ní abẹ́rẹ́ (Colletotrichum lupini, irú Col-08, tí a rí ní ọdún 1999 láti inú pápá lupine kan ní Wierzhenice, Poland) àti àwọn ohun ọ̀gbìn tí a ti ṣàkóso (sham-inoculated) ni a ṣe àkíyèsí lókè àwọn ibi ìwádìí (*P value < 0.05, **P-value ≤ 0.01, ***P-value ≤ 0.001).接种 (Colletotrichum lupini, Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数捉记在数据疊在数据疊在数据疊在数据疊在数据疊在数据点丹的） 0.05, ** P 值≤ 0.01, *** P 值≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得）水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Стистически значимыe razlychyya в urovnyah эkspressi mezhdu atinkulyrovannymy (Colletotrichum lupini, schemm Col-08, pо люпина в Верженице, Польша, в 1999 г.) и контрольныmy значение P <0,05, ** P-значение ≤ 0,01, *** P-значение ≤ 0,001). Àwọn ìyàtọ̀ pàtàkì tí a lè rí nínú ìṣirò nínú ìpele ìfarahàn láàrín àwọn ohun ọ̀gbìn tí a ti fún ní abẹ́rẹ́ (Colletotrichum lupini, irú Col-08, tí a rí láti inú àwọn pápá lupine ní Verzhenice, Poland, ní ọdún 1999) àti àwọn ohun ọ̀gbìn tí a ti ṣàkóso (sham-inoculated) ni a ṣe àkíyèsí lókè àwọn ibi ìwádìí (*P value < 0.05 , **P-value ≤ 0.01, ***P-value ≤ 0.001).Àwọn ìlà NLL tí a ṣàyẹ̀wò ni: 83A:476 (tó le fara dà, tó gbé allele Lanr1 homozygous), Mandelup (tó le fara dà díẹ̀, tó gbé allele AnMan homozygous), Boregine (tó le fara dà, tó jẹ́ pé a kò mọ̀ nípa ìran) àti iye ènìyàn 22660 (tó le fara dà).
Jíìnì TanjilG_05042 tó jẹ́ olùdíje ní ibi tí Lanr1 wà fi àpẹẹrẹ ìṣàfihàn tó yàtọ̀ sí àwọn ìṣàfihàn tí a rí láti inú àwọn ìwádìí RNA-seq (Àwòrán 6e). A rí ìṣiṣẹ́ pàtàkì ti jíìnì yìí nínú Mandelup àti àwọn ènìyàn 22660 (tó tó ìgbà 39.7 àti 11.7, lẹ́sẹẹsẹ), èyí tó yọrí sí ìpele ìṣàfihàn gíga (tó tó 1.4 ± 0.14 àti 7.2 ± 1.3, lẹ́sẹẹsẹ). 83A:476 tún fi hàn pé ìdàgbàsókè díẹ̀ nínú jíìnì TanjilG_05042 (tó tó ìgbà 3.8), síbẹ̀síbẹ̀, àwọn ìpele ìṣàfihàn ìbátan tí a ṣe (0.044 ± 0.002) kéré ju ìlọ́po 30 lọ ju àwọn tí a rí ní Mandelup àti àwọn ènìyàn 22660 lọ. Àwọn tí a ṣàyẹ̀wò nípasẹ̀ qPCR fi ìyàtọ̀ pàtàkì hàn nínú àwọn ìpele ìfarahàn láàrín àwọn genotypes nínú àwọn ìyàtọ̀ ìṣàkóṣo tí a fi àjẹsára ṣe, tí ó dé ìyàtọ̀ ìlọ́po 58 láàrín àwọn ènìyàn 22660 àti 83A:476, àti láàrín àwọn ènìyàn 22660 àti 22660. Ìyàtọ̀ ìlọ́po méjì ni a ṣe láàrín Boregine àti Mandalup.
Jiini oludije ni agbegbe AnMan, TanjilG_12861, ni a mu ṣiṣẹ ni idahun si ajesara ni 83A:476 ati Mandelup, ko ni alailegbe ninu olugbe 22660, a si dinku ni Boregine (Fig. 6f). Ifihan ibatan ti jiini TanjilG_12861 jẹ eyiti o ga julọ ninu abere 83A ti a ti fun ni abẹrẹ: 476 (0.14±0.01). Jiini amuaradagba mọnamọna ooru kilasi I ti 17.4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 fihan awọn ipele ikosile ibatan ti o kere julọ ni gbogbo awọn igara ti a ṣe iwadi ati awọn aaye akoko (Fig. 6g). Iye ti o ga julọ ni a ṣe akiyesi ni 24 HPI ninu olugbe 22660 (0.14 ± 0.02, ilosoke igba mẹjọ ni idahun si ajesara).
Ìfiwéra àwọn ìrísí ìfarahàn ìran (Àwòrán 7) fi hàn pé ìbáṣepọ̀ gíga wà láàárín TanjilG_10657 àti àwọn ìrísí mẹ́rin mìíràn: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), àti TanjilG_04706 (r = 0.79). Irú àwọn àbájáde bẹ́ẹ̀ lè fi hàn pé àwọn ìrísí wọ̀nyí jọra nígbà tí wọ́n bá ń dáhùn sí àwọn ìgbèjà ara wọn. Àwọn ìrísí TanjilG_12861 àti TanjilG_23384 fi àwọn ìrísí ìfarahàn tí ó yàtọ̀ hàn pẹ̀lú àwọn ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn Pearson tí ó kéré síi (láti 0.08 sí 0.43 àti -0.19 sí 0.28, lẹ́sẹẹsẹ) ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ìrísí mìíràn.
A ṣe àwárí ìbáṣepọ̀ láàárín àwọn ìrísí ìfarahàn jínì nípa lílo PCR oníwọ̀n. A ṣe àyẹ̀wò àwọn ìlà lupine onígun mẹ́rin wọ̀nyí: 83A:476 (ojútùú, ó gbé allele Lanr1 homozygous), Mandelup (ojútùú díẹ̀, ó gbé allele AnMan homozygous), Boregine (ojútùú, a kò mọ ìpìlẹ̀ jínì), àti Population 22660 (ojútùú). A ṣírò àwọn àkókò mẹ́ta (wákàtí 6, 12 àti 24 lẹ́yìn ìtọ́jú), títí kan ìtọ́jú (Colletotrichum lupini, irú Col-08, tí a rí láti inú àwọn pápá lupine ní Wierzhenice, Poland, ní ọdún 1999) àti àwọn ewéko ìṣàkóso (sham-inoculated). Ìwọ̀n náà fi ìníyelórí Pearson correlation coefficient hàn.
Láti inú ìwádìí tí a rí ní agbára ẹṣin 6 fún inṣi kan, a ṣe WGCNA lórí 9981 DEG tí a dá mọ̀ nípa fífi àwọn ohun èlò tí a ti fún ní abẹ́rẹ́ àti ìṣàkóso wéra láti dojúkọ àwọn ìdáhùn ìgbèjà ní ìbẹ̀rẹ̀ (Àfikún Táblì S12). A rí àwọn modulu jínì méjìlélógún (àwọn ìṣùpọ̀) pẹ̀lú àwọn ìrísí ìfarahàn tí ó ní ìbáṣepọ̀ (rere tàbí odi) láàrín àwọn genotypes àti àwọn ìyàtọ̀ ìwádìí. Ní àròpín, ìpele ìfarahàn jínì ń dínkù ní ìtòlẹ́sẹẹsẹ 83A:476 > Mandelup > Boregine > Iye ènìyàn 22660 (ṣùgbọ́n, ní àwọn oríṣi méjèèjì, àṣà yìí lágbára sí i ní àwọn ilé iṣẹ́ ìṣàkóso). Ní àròpín, ìpele ìfarahàn jínì ń dínkù ní ìtòlẹ́sẹẹsẹ 83A:476 > Mandelup > Boregine > Iye ènìyàn 22660 (ṣùgbọ́n, ní àwọn oríṣi méjèèjì, àṣà yìí lágbára sí i ní àwọn ilé iṣẹ́ ìṣàkóso). В среднем уровни эkspressi геnov снижались в порядke 83A: 476 > Mandelup > Boregine > Olugbe 22660 была сильнее у контрольных растений). Ní àròpín, ìpele ìfarahàn jínì dínkù ní ìtòlẹ́sẹẹsẹ 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 (nínú àwọn oríṣi méjèèjì, síbẹ̀síbẹ̀, àṣà yìí lágbára sí i ní àwọn ilé iṣẹ́ ìṣàkóso).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Olugbe 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）。平均 而 ， 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> olugbe 22660 的 顺序中更） . . . . . . . . В среднем уровни генов снижались в ряdu 83A: 476 > Mandelup > Boregine > Olugbe 22660 сильнее у контрольных растений). Ní àròpín, ìpele ìfarahàn jínì dínkù nínú ìtẹ̀léra 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 (síbẹ̀síbẹ̀, nínú àwọn onírúurú méjèèjì, àṣà yìí lágbára sí i nínú àwọn ohun èlò ìṣàkóso).Àjẹ́sára yọrí sí ìdàgbàsókè ìfarahàn jínì, pàápàá jùlọ nínú àwọn modulu 18, 19, 14, 6 àti 1 (ní ìtẹ̀lé ìtẹ̀lé ipa tí ó ń lọ sílẹ̀), ìlànà odi (fún àpẹẹrẹ àwọn modulu 9 àti 20) tàbí pẹ̀lú àwọn ipa aláìlágbára (fún àpẹẹrẹ àwọn modulu 11, 22, 8 àti 13). Ìṣàyẹ̀wò ìdàgbàsókè ọ̀rọ̀ GO (Àfikún Táblì S13) fi hàn pé “GO: 0006952 Àwọn ìdáhùn ààbò” fún module tí a ti fún ní abẹ́rẹ́ (18) pẹ̀lú ìṣiṣẹ́ tí ó pọ̀ jùlọ, títí kan àwọn jiini tí a ṣàyẹ̀wò nípasẹ̀ qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 àti TanjilG_27015), àti ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn modulu photosynthesis tí a ti dínkù jùlọ (9). A ṣe idanimọ Módù 18 concentrator (Àwòrán 8) gẹ́gẹ́ bí ìràn TanjilG_26536 tí ó ń ṣàfihàn prótínì LlR18B bíi PR-10, àti pé a ṣe idanimọ módù 9 concentrator gẹ́gẹ́ bí ìràn TanjilG_28955 tí ó ń ṣàfihàn prótínì photosystem II PsbQ. A rí ìràn anthracnose resistance gene Lanr1, TanjilG_05042, nínú módù 22 (Àwòrán 9) ó sì ní í ṣe pẹ̀lú àwọn ọ̀rọ̀ náà “GO:0044260 Cellular macromolecular metabolic processes” àti “GO:0006355 Transcriptional regulatory, DNA templating” tí ó ń gbé TanjilG_01212 hub. ìràn náà ń ṣàfihàn háàpù transcription factor A-4a (HSFA4a).
Ìṣàyẹ̀wò nẹ́tíwọ́ọ̀kì tí a wọ̀n lórí ìfìhàn jínì ti àwọn módùlù pẹ̀lú àwọn ọ̀rọ̀ ìlànà ìṣẹ̀dá tí ó pọ̀ jù “GO: 0006952 Defense Response”. A mú kí lígésation rọrùn láti fi àwọn jínì mẹ́rin tí qPCR ṣàyẹ̀wò hàn (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 àti TanjilG_27015).
Ìṣàyẹ̀wò nẹ́tíwọ́ọ̀kì oníwọ̀n ti ìfìhàn àpapọ̀ jínì ti mọ́ọ̀dù kan pẹ̀lú ọ̀rọ̀ ìlànà ìṣẹ̀dá ẹ̀dá alààyè tí ó pọ̀ jù “GO: 0006355: Ìlànà ìkọ̀wé, ìṣàpẹẹrẹ DNA” àti gbígbé jínì ìdènà anthracnose kan tí ó yẹ Lanr1 TanjilG_05042. A mú kí ìdènà rọrùn láti ya jínì TanjilG_05042 àti jínì TanjilG_01212 àárín.
Àyẹ̀wò ìdènà anthracnose tí a kó jọ ní Australia fihàn pé ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn irúgbìn tí a ti tú jáde ní ìṣáájú ló ṣeé farapa; Kalya, Coromup àti Mandelup ni a ti ṣàpèjúwe gẹ́gẹ́ bí àwọn tí wọ́n ní ìdènà díẹ̀, nígbà tí Wonga, Tanjil àti 83A:476 ni àwọn tí wọ́n ní ìdènà gíga26,27,31. ní àwọn allele ìdènà kan náà, tí a pè ní Lanr1, àti Coromup àti Mandelup ní àwọn allele mìíràn, tí a pè ní AnMan10, 26, 39, nígbà tí Kalya kọjá àwọn allele mìíràn. , Lanr2. Àyẹ̀wò fún ìdènà anthracnose ní Germany yọrí sí dídá ìlà ìdènà Bo7212 mọ̀ pẹ̀lú allele mìíràn yàtọ̀ sí Lanr1, tí a pè ní LanrBo36.
Ìwádìí wa fi hàn pé ìpele Lanr1 tó kéré gan-an (tó tó 6%) nínú germplasm tí a dán wò. Àkíyèsí yìí bá àwọn àbájáde ìṣàyẹ̀wò germplasm ìlà oòrùn Yúróòpù nípa lílo àmì Anseq3 àti Anseq4 mu, èyí tó fi hàn pé germásì Lanr1 wà ní ìlà Belarus méjì péré. Èyí fi hàn pé germásì ìbímọ àgbègbè kò tíì lò Lanr1 dáadáa, láìdàbí ti Australia, níbi tí ó ti jẹ́ ọ̀kan lára ​​àwọn germásì pàtàkì fún ìbímọ tí a fi àmì ṣe ìrànlọ́wọ́. Èyí lè jẹ́ nítorí ìpele ìdènà tí germásì Lanr1 pèsè ní àwọn ipò pápá Yúróòpù ní ìfiwéra pẹ̀lú ìròyìn Australia. Ní àfikún, àwọn ìwádìí nípa ermásì ní àwọn agbègbè òjò gíga ní Australia ti fi hàn pé àwọn ìdáhùn ìdènà tí ermásì Lanr1 ṣe ìrànlọ́wọ́ lè má ṣiṣẹ́ dáadáa ní àwọn ipò ojú ọjọ́ tí ó ṣe ojúrere fún ìdàgbàsókè àti ìdàgbàsókè kíákíá ti germásì19,42. Ní gidi, nínú ìwádìí yìí, a tún rí àwọn àmì ermásì anthracnose kan nínú àwọn genotypes tí ó gbé germásì Lanr1, èyí tí ó fihàn pé ìdènà lè parẹ́ lábẹ́ àwọn ipò tí ó dára jùlọ fún ìdàgbàsókè C. lupini. Ní àfikún, àwọn ìtumọ̀ rere èké nípa wíwà àwọn àmì Anseq3 àti Anseq4, èyí tí ó tó nǹkan bí 1 cM láti ibi tí Lanr1 wà, ṣeé ṣe 28,30,43.
Ìwádìí wa fihàn pé 83A:476, tí ó gbé allele Lanr1, dáhùn sí ìfúnni C. lupini pẹ̀lú àtúntò transcriptome ńlá ní àkókò àkọ́kọ́ tí a ṣàyẹ̀wò (6 hpi), nígbà tí ó wà ní Mandelup, tí ó gbé allele AnMan, a ṣe àkíyèsí àwọn ìdáhùn transcriptomic nígbà pípẹ́ lẹ́yìn náà. (láti 24 sí 48 hp). Àwọn ìyàtọ̀ ìgbà díẹ̀ nínú àwọn ìdáhùn ààbò wọ̀nyí ní í ṣe pẹ̀lú àwọn ìyàtọ̀ nínú àwọn àmì àrùn, tí ó ń tẹnu mọ́ pàtàkì ìdámọ̀ àwọn àkóràn ní ìbẹ̀rẹ̀ fún ìdáhùn àṣeyọrí sí ìdènà. Láti kó àrùn sí àsopọ ewéko, àwọn spores anthrax gbọ́dọ̀ la ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìpele ìdàgbàsókè lórí ojú ilé ogun, títí bí ìbísí, pípín sẹ́ẹ̀lì, àti ìṣẹ̀dá appressorium. Ohun tí a fi kún un jẹ́ ètò àkóràn tí ó so mọ́ ojú ilé ogun tí ó sì ń mú kí ó rọrùn láti wọ inú àwọn àsopọ ilé ogun. Nítorí náà, àwọn spores ti C. gloeosporioides nínú ìyọkúrò ewa fi ìpín àkọ́kọ́ ti nucleus hàn lẹ́yìn ìṣẹ́jú 75-90 ti ìbísí, ìṣẹ̀dá tube germ lẹ́yìn ìṣẹ́jú 90-120, àti ìdènà lẹ́yìn wákàtí 4 45. Àwọn Mango C. gloeosporioides fi hàn pé ìbísí conidial ju 40% lọ lẹ́yìn wákàtí mẹ́ta tí wọ́n ti fi sínú omi àti bí ìṣẹ̀dá abressors tó tó 20% lẹ́yìn wákàtí mẹ́rin. Ìran CAP20 ti C. gloeosporioides tó ní í ṣe pẹ̀lú virulence fi ìṣiṣẹ́ transcriptional hàn nínú epiphyte-forming conidia lẹ́yìn wákàtí 3.5 tí wọ́n fi sínú omi ìdọ̀tí avocado pẹ̀lú ìfọ́pọ̀ gíga ti protein CAP20 lẹ́yìn wákàtí mẹ́rin àti ìṣẹ́jú mẹ́rìndínlógójì. Bákan náà, ìṣiṣẹ́ àwọn genes biosynthesis melanin nínú C. trifolii wáyé nígbà tí wọ́n fi sínú omi ìdọ̀tí fún wákàtí méjì, lẹ́yìn náà ni wọ́n fi sínú omi ìdọ̀tí lẹ́yìn wákàtí kan. Àwọn ìwádìí lórí àwọn àsopọ̀ ewé ti fihàn pé àwọn strawberries tí wọ́n fi C. acutatum fún ní ìdènà àkọ́kọ́ ní 8 hpi, nígbà tí àwọn tòmátì tí wọ́n fi C. coccodes fún ní ìdènà àkọ́kọ́ ní 4 hpi48,49. èyí tó bá àkókò tí Colletotrichum spp. infectious process mu. Àwọn ìdáhùn ààbò kíákíá sí 83A:476 dámọ̀ràn pé àwọn ìdènà ewéko àti àwọn jínì ìdènà tí ó ń fa ìdènà (ETI) wà nínú ìlà yìí, nígbàtí àwọn ìdáhùn tí ó dúró ti Mandelup ṣe àtìlẹ́yìn fún àbájáde ìdènà tí ó ní ìsopọ̀ mọ́ ara molecular pattern-triggered immunity (MTI) micro-associated 50. Àwọn ìdáhùn àkọ́kọ́ sí 83A: 476 àti Mandelup. Ìfaradà díẹ̀ láàárín àwọn jínì tí a gbé sókè tàbí tí a sọ̀kalẹ̀ nínú ìdáhùn tí ó pẹ́ tún ṣe àtìlẹ́yìn fún èrò yìí, nítorí pé a sábà máa ń kà ETI sí ìdáhùn MTI tí ó yára àti tí ó mú kí ó parí sí ikú sẹ́ẹ̀lì tí a ti ṣètò ní ibi tí àkóràn náà ti ṣẹlẹ̀, tí a mọ̀ sí ìkọlù anaphylactic 51,52.
Ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn jínì tí a sọ pé wọ́n jẹ́ mọ́ ọ̀rọ̀ tí a fi àkójọpọ̀ rẹ̀ pọ̀ jù Gene Ontology GO:0006952 “Ìdáhùn Ìgbèjà” ni àwọn àkójọpọ̀ 11 ti ìfàájì tí ó fa wahala 22 protein (tí ó jọ SAM22) àti àwọn prótíìnì méje tí ó jọ latex (MLPs). 31, 34, 43 àti 423 fi ìfarajọra hàn. Àwọn jínì bíi SAM22 fi ìṣiṣẹ́ pàtàkì hàn tí ó pẹ́ títí, tí ó fi àwọn ìpele ìdènà anthracnose tí ó pọ̀ sí i hàn (83A:476 àti Boregine). Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn jínì bíi MLP ni a dínkù ní àwọn ìlà tí ó ní allele ìdènà olùdíje (83A:476/Lanr1 ní 6 hpi àti Mandelup/AnMan ní 24 hpi). Ó yẹ kí a kíyèsí pé gbogbo àwọn àkójọpọ̀ SAM22 tí a dá mọ̀ wá láti inú ìṣùpọ̀ jínì kan tí ó gùn tó 105 kb, nígbà tí àwọn jínì bíi MLP wá láti àwọn agbègbè ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ ti jínì náà. A tún rí ìṣiṣẹ́ àwọn jínì bíi SAM22 nínú ìwádìí wa tẹ́lẹ̀ nípa ìdènà NLL sí ìfúnni Diaportetoxica, èyí tó fihàn pé wọ́n ní ipa nínú àwọn ẹ̀yà ara ìdábòbò tí ó wà ní ìpele ìdúró. Ìròyìn nípa ìdáhùn rere ti àwọn jínì bíi SAM22 sí ìpalára tàbí ìtọ́jú pẹ̀lú salicylic acid, àwọn ohun tí ń fa àrùn fún ìfúnni, tàbí hydrogen peroxide.
Àwọn jíìnì bíi MLP ni a ti fihàn pé wọ́n ń dáhùn sí onírúurú ìdààmú abiotic àti biotic, títí bí àkóràn bakitéríà, fáírọ́ọ̀sì àti àkóràn nínú ọ̀pọ̀lọpọ̀ irú ewéko55. Ìtọ́sọ́nà ìdáhùn sí àwọn ìbáṣepọ̀ kan láàrín àwọn ewéko àti àwọn àkóràn wà láti ìbísí gidigidi (ìyẹn, nígbà tí a bá ń kó owú pẹ̀lú Verticillium dahliae) sí ìdínkù gidigidi (ìyẹn, lẹ́yìn àkóràn igi apple pẹ̀lú Alternaria spp.)56,57. A ti rí ìdínkù pàtàkì ti jíìnì bíi MLP 423 nígbà tí a bá ń dáàbò bo avocado sí àkóràn F. niger àti nígbà tí a bá ń kó àkóràn igi apple Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola àti Alternaria alternata jẹ́ àrùn apple 58,59. Ní àfikún, apple calli tí ó ń fi ìṣàfihàn ju MLP 423 lọ ní ìfarahàn díẹ̀ ti àwọn jíìnì tí ó níí ṣe pẹ̀lú resistance tí ó sì ṣeé farapa sí àkóràn fungal 59. Lẹ́yìn Fusarium oxysporum f, a tún dín jíìnì bíi MLP 423 kù nínú germ bean common resistive. cn. Infection Bean 60.
Àwọn ọmọ ẹgbẹ́ ìdílé PR-10 mìíràn tí a dá mọ̀ nínú ìwádìí RNA-seq wa ni àwọn jínì LlR18A àti LlR18B ní ìdáhùn sí ìdàgbàsókè, àti jínì tí a gbé sókè (jínì kan) tàbí tí a dínkù (jínì mẹ́ta) fún amuaradagba gbigbe lipid DIR1. Ní àfikún, WGCNA ṣe àfihàn jínì LlR18B gẹ́gẹ́ bí ibùdó nínú module yìí, èyí tí ó ṣeé ṣe kí a gbà fún àjẹ́sára gidigidi tí ó sì ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn jínì tí ó ń dá ààbò. Àwọn jínì LlR18A àti LlR18B ni a fa sínú ewé lupine aláwọ̀ ewé ní ​​ìdáhùn sí àwọn bakitéríà tí ó ń fa àrùn, àti nínú àwọn ètè NLL lẹ́yìn ìfúnni ní D. toxica, nígbà tí ìdàpọ̀ ìrẹsì ti àwọn jínì wọ̀nyí, RSOsPR10, yára fa nípasẹ̀ àkóràn olu tí ó ṣeéṣe kí ó ní ipa ọ̀nà ìfàmọ́ra jasmonic acid53,61, 62. Jínnì DIR1 ṣe àkójọ àwọn prótíìnì gbigbe lipid tí kò ṣe pàtàkì tí a nílò fún ìbẹ̀rẹ̀ resistance tí a gbà láti ara ètò (SAR). Pẹ̀lú ìdàgbàsókè àwọn ìṣesí ààbò, a gbé amuaradagba DIR1 láti ibi tí àkóràn ti ń tàn kálẹ̀ nípasẹ̀ phloem láti fa SAR nínú àwọn ẹ̀yà ara jíjìnnà. Lóòótọ́, a fa ìran TanjilG_02313 DIR1 ní pàtàkì ní àkókò àkọ́kọ́ ní ìlà 84A:476 àti Population 22660, ṣùgbọ́n resistance anthracnose dàgbàsókè ní àṣeyọrí ní ìlà 84A:476 nìkan. Èyí lè fi hàn pé ìran DIR1 kò ṣiṣẹ́ dáadáa nínú NLL, nítorí pé àwọn ẹ̀yà mẹ́ta tó kù dáhùn sí ìfúnni ní ìfúnni ní ìsàlẹ̀ nìkan ní ìlà 83A:476 ní 6 hpi, a sì darí ìdáhùn yìí sí ìsàlẹ̀.
Nínú ìwádìí wa, àwọn èròjà tí ó wọ́pọ̀ jùlọ tí ó bá ìlànà ìṣẹ̀dá ẹ̀dá mu tí a pè ní “GO:0055114 Redox process” ni cytochrome P450 protein, peroxidase, linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase, àti 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase mu. Ní àfikún, WGCNA wa ṣàlàyé HSFA4a homologue gẹ́gẹ́ bí hobu tí ó ń gbé àwọn modulu bíi Lanr1 resistance gene candidate TanjilG_05042. HSFA4a jẹ́ apá kan nínú ìlànà redox-dependent ti ìkọ̀wé nuclear nínú àwọn ohun ọ̀gbìn.
Àwọn prótéènì Cytochrome P450 jẹ́ àwọn oxidoreductases tí ó ń ṣe ìṣirò àwọn ìṣesí hydroxylation NADPH àti/tàbí O2 tí ó sinmi lórí ìṣiṣẹ́ ara ní àkọ́kọ́ àti ìkejì, títí kan ìṣesí ara àwọn xenobiotics, àti àwọn homonu, àwọn fatty acids, sterols, àwọn èròjà odi sẹ́ẹ̀lì, àwọn biopolymers, àti bíosynthesis ti àwọn agbo ogun ààbò 69. Nínú ìwádìí wa, ìyàtọ̀ nínú iṣẹ́ cytochrome P450 ewéko ti dínkù láti -10.6 log2 (ìyípadà ìlọ́po) sí 5.7 nítorí ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn homologues tí ó yípadà (37) àti àwọn ìyàtọ̀ nínú àwọn ìlànà ìdáhùn láàrín àwọn jiini pàtó, tí ó ń ṣàfihàn àtúnṣe òkè. Lílo dátà RNA-seq nìkan láti ṣàlàyé iṣẹ́ ìṣẹ̀dá ti àwọn jiini NLL nínú irú ìdílé ńlá amuaradagba bẹ́ẹ̀ yóò jẹ́ àbájáde gíga. Síbẹ̀síbẹ̀, ó ṣe pàtàkì láti kíyèsí pé àwọn jiini cytochrome P450 kan ní í ṣe pẹ̀lú ìdènà sí àwọn fungus tàbí bakitéríà tí ó ń fa àrùn, pẹ̀lú àfikún sí àwọn ìṣesí ara 69,70,71.
Àwọn peroxidases Class III jẹ́ àwọn enzymes ewéko oníṣẹ́-púpọ̀ tí ó ní ipa nínú onírúurú iṣẹ́-ṣíṣe-ara nígbà ìdàgbàsókè àti ìdàgbàsókè ewéko, àti ní ìdáhùn sí àwọn ìdààmú àyíká bíi iyọ̀, ọ̀dá, agbára ìmọ́lẹ̀ gíga, àti ìkọlù àkóràn-ẹ̀jẹ̀72. Àwọn peroxidases ní ipa nínú ìbáṣepọ̀ àwọn irú ewéko púpọ̀ pẹ̀lú Anthracis, títí bí Stylosanthes humilis àti C. gloeosporioides, Lens culinaris àti C. truncatum, Phaseolus vulgaris àti C. lindemuthianum, Cucumis sativus àti C. lagenarium73,74,75,76. Ìdáhùn náà yára gan-an, nígbà míìrán ní 4 HPI, kí fungus tó wọ inú àsopọ ewéko73. Jiini peroxidase náà tún dáhùn sí ìfúnpọ̀ D. toxica NLL. Ní àfikún sí àwọn iṣẹ́ wọn láti ṣàkóso ìbúgbàù oxidative tàbí láti mú ìdààmú oxidative kúrò, àwọn peroxidases lè dí ìdàgbàsókè àkóràn lọ́wọ́ nípa ṣíṣẹ̀dá àwọn ìdènà ti ara tí ó da lórí ìfúnpọ̀ ògiri sẹ́ẹ̀lì nígbà ìfọkànsí, subunit tàbí ìsopọ̀pọ̀ àwọn agbo kan pàtó. Iṣẹ́ yìí ni a lè fi hàn nínú silico sí jínì TanjilG_03329 tí ó ń ṣàfihàn anion peroxidase tí ó ń ṣẹ̀dá lignin tí a gbé kalẹ̀ tí a gbé ga ní pàtàkì nínú ìwádìí wa nínú ìlà ìdènà 83A:476 ní 6 HPI, ṣùgbọ́n kìí ṣe nínú àwọn ìpele àti àkókò mìíràn tí kò dáhùn.
9S-/13S-lipoxygenase ti linoleic acid ni igbesẹ akọkọ ninu ipa ọna oxidative ti biosynthesis lipid78. Awọn ọja ti ipa ọna yii ni ọpọlọpọ awọn iṣẹ ni aabo ọgbin, pẹlu agbara odi sẹẹli nipasẹ dida awọn idogo callose ati pectin, ati iṣakoso wahala oxidative nipasẹ iṣelọpọ ti awọn ẹya atẹgun reactive79,80,81,82,83. Ninu iwadi yii, ifihan ti linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase ni a yipada ni gbogbo awọn iru, ṣugbọn ninu awọn olugbe ti o ni ifaragba 22660, ilosoke bori ni awọn aaye akoko oriṣiriṣi, lakoko ti ninu awọn iru ti o ni Lanr1 ti o ni resistance ati allele AnMan, o tẹnumọ iyatọ ti fẹlẹfẹlẹ oxylipin ninu awọn iṣe anthrax aabo laarin awọn genotypes wọnyi.
A ṣe àtúnṣe sí àdàpọ̀ 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) pẹ̀lú ìṣọ̀kan (àwọn jínì 9) tàbí kí a dín wọn kù (àwọn jínì 2) nígbà tí a fi lupine fún wọn. Pẹ̀lú àwọn méjì, gbogbo àwọn ìdáhùn wọ̀nyí wáyé ní 6 hp. ní 83A:476. Ìṣẹ̀dá enzymatic tí àwọn protein ACO ń ṣe àtúnṣe ni ìgbésẹ̀ ìdínkù ìwọ̀n nínú ìṣẹ̀dá ethylene, nítorí náà, a ń ṣe àtúnṣe rẹ̀ lọ́nà gíga84. Ethylene jẹ́ homonu ewéko tí ó ń kópa nínú ṣíṣàkóso ìdàgbàsókè ewéko àti ìdáhùn sí àwọn ipò ìdààmú abiotic àti biotic. Ṣíṣe àtúnṣe ACO àti ṣíṣiṣẹ́ ipa ọ̀nà àmì ethylene ní ipa nínú mímú kí ìdènà ìrẹsì pọ̀ sí i sí hemibiotrophic fungus oryzae oryzae nípa ṣíṣàkóso ìṣẹ̀dá àwọn ẹ̀yà atẹ́gùn tí ń ṣe àtúnṣe àti phytoalexins. Ilana àkóràn ewé tó jọra gan-an tí a rí láàárín M. oryzae àti C. lupini88,89, ní ìpìlẹ̀ ìgbéga pàtàkì ti àwọn homologues ACO nínú ìlà 83A:476 tí a ròyìn nínú ìwádìí yìí, yí ìṣeéṣe láti fún anthracnose NLL ní ìdènà Ethylene padà gẹ́gẹ́ bí ìgbésẹ̀ pàtàkì nínú àwọn ipa ọ̀nà molikula.
Nínú ìwádìí yìí, a rí ìdíwọ́ ńlá ti ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn jínì tí ó níí ṣe pẹ̀lú photosynthesis ní 6 hpi nínú 83A:476 àti ní 48 hpi nínú Mandeloop àti iye ènìyàn 22660. Ìwọ̀n àti ìlọsíwájú àwọn àyípadà wọ̀nyí jẹ́ ìwọ̀n tí ó bá ìpele náà mu. A rí ìdènà anthracnose nínú ìwádìí yìí. Láìpẹ́ yìí, a ti ròyìn ìfàsẹ́yìn líle àti ìbẹ̀rẹ̀ ti àwọn àkọsílẹ̀ tí ó níí ṣe pẹ̀lú photosynthesis ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ àpẹẹrẹ ti ìbáṣepọ̀ pẹ̀lú ewéko-àrùn, pẹ̀lú àwọn bakitéríà àti elu tí ó níí ṣe pẹ̀lú àrùn. Ìyára (láti inú 2 HPI nínú àwọn ìbáṣepọ̀ kan) àti ìfàsẹ́yìn kárí ayé ti àwọn jínì tí ó níí ṣe pẹ̀lú photosynthesis ní ìdáhùn sí àkóràn lè fa ààbò ohun ọ̀gbìn tí ó dá lórí ìgbékalẹ̀ àwọn ẹ̀yà atẹ́gùn tí ń ṣe àtúnṣe àti ìbáṣepọ̀ wọn pẹ̀lú ipa ọ̀nà salicylic acid láti ṣe àtúnṣe àwọn ìṣesí àléjì 90,94.
Ní ìparí, àwọn ọ̀nà ìgbèjà tí a dámọ̀ràn fún ìlà tí ó le koko jùlọ (83A:476) ní ìdámọ̀ àrùn kíákíá nípasẹ̀ ìran R (tí ó ṣeéṣe kí ó jẹ́ TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) àti salicylic acid àti ethylene tí ó ń ṣe àkóso ìfèsìpadà, lẹ́yìn náà ni a fi DIR-1 ṣe àtìlẹ́yìn fún ìgbésẹ̀ SAR gígùn. Ó yẹ kí a kíyèsí pé àkókò biotrophic fún àkóràn C. lupini kúrú gan-an (tó tó ọjọ́ méjì), lẹ́yìn náà ni ìdàgbàsókè necrotic95. Ìyípadà láàrín àwọn ìpele wọ̀nyí lè ní í ṣe pẹ̀lú necrosis àti ìfìhàn àwọn protein ethylene-inducible tí ó ń ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí ohun tí ó ń fa ìfèsìpadà ìmọ̀lára nínú àwọn ohun ọ̀gbìn tí ó gbàlejò. Nítorí náà, àkókò àkókò fún gbígbà C. lupini ní ìpele biotrophic kéré gan-an. Àtúntò àwọn jiini tí ó ní í ṣe pẹ̀lú redox àti photosynthesis tí a ṣe àkíyèsí ní 83A:476 ní 6 hpi bá ìtẹ̀síwájú ti hyphae fungal mu, ó sì ń ṣe àfihàn ìdàgbàsókè ìdáhùn ààbò àṣeyọrí ní ìpele biotrophic. Àwọn ìdáhùn transcriptomic ti Mandelup àti àwọn ènìyàn 22660 lè pẹ́ jù láti mú olu náà kí ó tó yípadà sí ìdàgbàsókè necrotic, síbẹ̀síbẹ̀, Mandelup lè múná dóko ju àwọn ènìyàn 22660 lọ nítorí pé ìṣètò kíákíá ti amuaradagba PR-10 ń mú kí resistance petele pọ̀ sí i.
ETI, tí a ń darí láti inú ìjìnlẹ̀ R canonical, dà bí ẹni pé ó jẹ́ ọ̀nà tí ó wọ́pọ̀ fún ìdènà ewa sí anthracnose. Nítorí náà, nínú àpẹẹrẹ legume Medicago truncatula, ìdènà sí anthracnose ni a ń fún ní láti inú ìjìnlẹ̀ RCT1, ọmọ ẹgbẹ́ ìjìnlẹ̀ R igi TIR-NBS-LRR97. Ìjìnlẹ̀ yìí tún ń fún ni ìdènà anthracnose tó gbòòrò nínú alfalfa nígbà tí a bá gbé e sí àwọn ewéko tó lè farapa. Nínú ìjìnlẹ̀ ewa (P. vulgaris), a ti ṣàwárí àwọn ìjìnlẹ̀ anthracnose tó ju méjìlá lọ títí di òní. A rí àwọn ìjìnlẹ̀ wọ̀nyí ní àwọn agbègbè tí kò ní ìjìnlẹ̀ R canonical kankan, síbẹ̀ ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn mìíràn wà ní etí àwọn krómósómù tí ó gbé ìjìnlẹ̀ NBS-LRR, títí kan TIR-NBS-LRRs99. Ìwádìí SSR gbogbo-ẹ̀dá náà tún jẹ́rìí sí ìbáṣepọ̀ ti ìjìnlẹ̀ NBS-LRR pẹ̀lú ìdènà anthracnose nínú ìjìnlẹ̀ ewa gbogbo. A tún rí ìran R tí ó wà ní agbègbè genomic tí ó ní ibi ìdènà anthracnose pàtàkì nínú funfun lupine 101.
Iṣẹ́ wa fihàn pé ìfaradà ìfaradà lẹ́sẹ̀kẹsẹ̀, tí a ń ṣiṣẹ́ ní ìpele ìbẹ̀rẹ̀ àkóràn ewéko (ó dára kí ó má ​​pẹ́ ju 12 hpi lọ), ń dáàbò bo lupine oní-ewé kékeré kúrò lọ́wọ́ anthracnose tí olu àkóràn Collelotrichum lupini fà. Nípa lílo ìtẹ̀léra gíga nínú ìgbésẹ̀, a fi àwọn ìrísí ìfarahàn ìyàtọ̀ ti àwọn jiini ìfaradà anthracnose hàn nínú àwọn ewéko NLL tí àwọn jiini ìfaradà Lanr1 àti AnMan ń ṣe àtìlẹ́yìn rẹ̀. Ìgbèjà àṣeyọrí kan ní ṣíṣe àgbékalẹ̀ àwọn jiini fún àwọn amuaradagba tí ó ní ipa nínú redox, photosynthesis, àti pathogenesis láàrín wákàtí díẹ̀ lẹ́yìn tí ewéko náà bá kọ́kọ́ fara kan àkóràn. Àwọn ìfaradà ààbò tí ó jọra, ṣùgbọ́n tí ó pẹ́ ní àkókò, kò ṣiṣẹ́ dáadáa rárá ní dídáàbò bo àwọn ewéko kúrò lọ́wọ́ àwọn àrùn. Ìfaradà Anthrax tí ìran Lanr1 ń ṣe àtìlẹ́yìn jọ ìdáhùn kíákíá ti ìran R (ìfaradà ìfaradà tí ó ń fa effector), nígbà tí ìran AnMan ṣeé ṣe kí ó pèsè ìdáhùn petele (ìfaradà tí àpẹẹrẹ molikula tí ó níí ṣe pẹ̀lú microbe ń fà), tí ó ń pèsè ìpele ìdúróṣinṣin díẹ̀.
Àwọn ìlà NLL 215 tí a lò láti fi ṣe àyẹ̀wò àwọn àmì anthracnose ni àwọn irúgbìn 74, àwọn ìlà 60 tí a rí nípasẹ̀ ìkọjá tàbí ìbímọ, àwọn mutant 5, àti àwọn germplasms ìgbẹ́ tàbí ti àtilẹ̀wá 76. Àwọn ìlà náà wá láti orílẹ̀-èdè 17, pàápàá jùlọ láti Poland (58), Spain (47), Germany (27), Australia (26), Russia (19), Belarus (7), Italy (5) àti àwọn ìlà mìíràn. Láti orílẹ̀-èdè 10. Àkójọpọ̀ náà tún ní àwọn ìlà tí ó lè dènà ìtọ́kasí: 83A:476, Tanjil, Wonga tí ó gbé allele Lanr1, àti Mandelup tí ó gbé allele AnMan. A gba àwọn ìlà náà láti inú Ibi Ìpamọ́ Orísun Ẹ̀dá ti European Lupine tí Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Poland ń tọ́jú (Àfikún Táblì S1).
A gbìn àwọn ewéko lábẹ́ àwọn ipò tí a ṣàkóso (photoperiod 16 wákàtí, iwọ̀n otútù 25°C ní ọ̀sán àti 18°C ​​ní alẹ́). A ṣe àyẹ̀wò àwọn àtúnṣe ẹ̀dá méjì. A ya DNA kúrò nínú àwọn ewé ọ̀sẹ̀ mẹ́ta nípa lílo DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) gẹ́gẹ́ bí ìlànà náà. A ṣe àyẹ̀wò dídára àti ìṣọ̀kan DNA tí a yà sọ́tọ̀ nípa lílo àwọn ọ̀nà spectrophotometric (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). A ṣe àyẹ̀wò àmì AnManM1 tí ó ń ṣàfihàn ìran anthracnose resistance gene AnMan (tí a yọ láti cv. Mandelup) àti àwọn àmì Anseq3 àti Anseq4 tí ó wà ní ẹ̀gbẹ́ ìran Lanr1 (tí a yọ láti cv. Tanjil) ní 11,26,28. A gba àmì Homozygotes fún allele tí ó dúró ní ìṣọ̀kan gẹ́gẹ́ bí “1″, tí ó ṣeé farapa – gẹ́gẹ́ bí “0″, àti heterozygotes – gẹ́gẹ́ bí 0.5.
Ní ìbámu pẹ̀lú àbájáde ìṣàyẹ̀wò àwọn àmì AnManM1, AnSeq3 àti AnSeq4 àti wíwà àwọn irúgbìn fún àwọn àyẹ̀wò ìkẹ́yìn, a yan àwọn ìlà NLL 50 fún ìrísí resistance anthracnose. A ṣe àyẹ̀wò náà ní ẹ̀ẹ̀kan nínú ilé ìgbóná tí kọ̀mpútà ń ṣàkóso pẹ̀lú àkókò photoperiode wákàtí 14 pẹ̀lú ìwọ̀n otútù 22°C ní ọ̀sán àti 19°C ní alẹ́. A máa ń gé irúgbìn (gé àwọ̀ irugbin ní apá kejì ọmọ inú oyun pẹ̀lú abẹ́ mímú) kí a tó gbìn ín láti dènà ìrọ̀lẹ́ irúgbìn nítorí pé àwọ̀ irugbin náà le jù àti láti rí i dájú pé ó gbóná déédé. A gbìn àwọn igi nínú ìkòkò (11 × 11 × 21 cm) pẹ̀lú ilẹ̀ tí kò ní ìdọ̀tí (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland). Wọ́n lo irú Colletotrichum lupini Col-08, tí wọ́n gbìn ní ọdún 1999 láti inú igi lupine tó ní ewé díẹ̀ tí wọ́n gbìn ní oko kan ní Verzhenitsa, Greater Poland (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E). Gba agbègbè kan. Wọ́n gbin àwọn ohun tí a yà sọ́tọ̀ náà sí àárín SNA ní 20° C lábẹ́ ìmọ́lẹ̀ dúdú fún ọjọ́ 21 láti fa ìdàgbàsókè. Ọ̀sẹ̀ mẹ́rin lẹ́yìn gbígbìn, nígbà tí àwọn ohun ọ̀gbìn náà bá ti dé ìpele ewé 4-6, wọ́n ṣe ìdàgbàsókè náà nípa fífún conidia ní ìdàpọ̀ conidia 0.5 x 106 conidia fún milimita kan. Lẹ́yìn ìdàgbàsókè náà, wọ́n fi àwọn ohun ọ̀gbìn náà sí òkùnkùn fún wákàtí 24 ní ọ̀rinrin tó tó 98% àti ìwọ̀n otútù 25°C láti mú kí ìdàgbàsókè conidia àti ìtọ́jú àkóràn rọrùn. Lẹ́yìn náà, a gbìn àwọn ewéko náà lábẹ́ ìpele ìgbóná 22°C ní ọ̀sán/19°C ní òru àti ọ̀rinrin 70%. A ṣe àmì àrùn náà ní ọjọ́ 22 lẹ́yìn ìtọ́jú, ó sì wà láti 0 (aláìlera) sí 9 (tó ṣeé farapa gidigidi) ní ìbámu pẹ̀lú wíwà tàbí àìsí àwọn ọgbẹ́ necrotic lórí igi àti ewé. Ní àfikún, lẹ́yìn ìforúkọsílẹ̀, a wọn ìwọ̀n àwọn ewéko náà. A ṣírò ìbáṣepọ̀ láàárín àwọn genotypes àmì àti àwọn phenotypes àrùn gẹ́gẹ́ bí ìbáṣepọ̀ ìlà méjì (àìsí àwọn àmì heterozygous nínú àwọn ìlà fún ìwádìí ti phenotype resistance anthracnose).