Mauruuru koe mo te toro ki Nature.com. Ko te putanga pūtirotiro e whakamahia ana e koe he iti te tautoko CSS. Mo te wheako pai rawa atu, e taunaki ana matou me whakamahi koe i tetahi kaitirotiro kua whakahoutia (me monohia ranei te Aratau Hototahi ki Internet Explorer). I tenei wa, hei whakarite i te tautoko tonu, ka tukuna e matou te waahi kaore he momo me te JavaScript.
Ko te Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) he tipu remu e whakamahia ana mo te hanga kai me te whakapai i te oneone. Ko te toronga o te NLL ki te ao, he maha nga harore pathogenic, tae atu ki te lupine anthracnose, ka puta te mate anthracnose kino. E rua nga alleles, ko Lanr1 me AnMan, he nui ake te aukati, kua whakamahia i roto i te whakatipuranga NLL, engari kei te noho mohio nga tikanga ngota ngota. I roto i tenei rangahau, i whakamahia nga tohu Lanr1 me AnMan hei tirotiro i nga tauira NLL Pakeha. Ko te whakamatautau i te kano kano i roto i te taiao whakahaere i whakapumau i te kaha o nga kaikoha whakatete e rua. I mahia te tohu tohu ira rereke ki runga i nga raina whakaraerae me nga raina ngawari. Ko te parenga anthracnose i hono ki te whakahua nui o nga kupu ontology ira "GO: 0006952 Whakautu Tiaki", "GO: 0055114 Redox Process", me te "GO: 0015979 Photosynthesis". I tua atu, ko te raina Lanr1 (83A: 476) i whakaatu i te reprogramming transcriptome nui tere i muri i te werohanga, ko etahi atu rarangi i whakaatu i te roa o tenei whakautu mo te 42 haora. Ko nga urupare parepare e hono ana ki nga ira TIR-NBS, CC-NBS-LRR me NBS-LRR, 10 nga pūmua e uru ana ki te pathogenesis, nga pūmua whakawhiti lipid, te endoglucan-1,3-β-glucosidase, nga pūmua pakitara o te glycine-taonga, me nga ira mai i te ara urupare o te hāora. Ko nga whakautu moata ki te 83A:476, tae atu ki te aukati i nga ira e pa ana ki te whakaahua, i taurite ki te whakamarutanga angitu i te wa o te tipu tipu o te koiora harore, e kii ana ma te kaitao e whakaoho te mate mate. Ko te tauhohenga o Mandeloop kua puhoi, penei i te toia whakapae katoa.
Ko te lupine whaiti-rau (NLL, Lupinus angustifolius L.) he totokore pūmua teitei i ahu mai i te uru o te rohe Mediterranean1,2. I tenei wa ka whakatipuhia hei kai ma te kararehe me te tangata. Ka kiia hoki he hamuti kaakaariki i roto i nga punaha hurihanga hua na te whakatikatika hauota na te huakita whakatika hauota symbiotic me te whakapai katoa o te hanganga oneone. Kua tere te mahi a NLL ki te whakatipu whare i te rautau kua hipa, kei raro tonu i te pehanga whakatipuranga nui3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. Na te whanuitanga o te maara NLL, na te riiwhitanga o nga harore pathogenic i whakawhanake i nga kohanga ahuwhenua hou, ka puta mai nga mate whakakino hua hou. Ko te mea tino whakamiharo mo nga kaiahuwhenua lupine me nga kaiahuwhenua ko te ahua o te anthracnose, na te harore pathogenic, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ko te mea tino whakamiharo mo nga kaiahuwhenua lupine me nga kaiahuwhenua ko te ahua o te anthracnose, na te harore pathogenic, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного памогринкого памогиного люпина (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ko te mea tino rongonui ki nga kaiahuwhenua lupine me nga kaiahuwhenua ko te puta mai o te anthracnose na te harore pathogenic Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真菌 Lunenbergi Lungi Hagedorn13 引起的。对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真菌lu。 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываемогего прикмтор lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ko te mea tino miharo ki nga kaiahuwhenua me nga kaiahuwhenua lupine ko te putanga mai o te anthracnose na te harore pathogenic Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.Ko nga korero tuatahi mo te mate i ahu mai i Brazil me te United States, me nga tohu angamaheni ka puta i te tau 1912 me te 1929. Heoi, i muri tata ki te 30 tau, ka tohua te tukumate ko Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph o Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld i roto i te Morphology i Whakatauhia. & H. Schrenk,. & H. Schrenk,.me H. Schrenk. & H.施伦克，。 & H.施伦克，。me H. Schlenk, .Ko nga tohu tohu mate tuatahi i mahia i waenganui o te rau tau 20000 i whakaatu etahi atete i roto i nga whakaurunga NLL me te lupine kowhai (L. luteus L.), engari ko nga whakaurunga lupine ma (L. albus L.) i whakamatauria he tino whakaraerae15,16. Kua whakaatuhia e nga rangahau ko te whakawhanaketanga o te anthracnose e pa ana ki te piki ake o te rerenga (te hau hau) me te pāmahana (i roto i te awhe o 12-28 ° C), e arai ana ki te takahi i te aukati i te teitei o te pāmahana17, 18. Inaa, ko te wa e hiahiatia ana mo te conidia ki te tipu me te mate ki te timata, e wha nga wa poto ake i te 24 ° C i raro i te 12 haora (4 haora) te wa poto ake i te 24 ° C (12 haora) tikanga19. No reira, na te whakamahanatanga o te ao kua horapa te mate anthracnose. Heoi, i kitea te mate i Parani (1982) me Ukraine (1983) hei tohu mo te riri e tata mai ana, engari ko te ahua kaore i arohia e te umanga lupine i taua wa20,21. I etahi tau i muri mai, ka horapa tenei mate kino puta noa i te ao, ka pa hoki ki nga whenua whakaputa lupine nui penei i Ahitereiria, Poroni me Tiamana22,23,24. Whai muri i te pakarutanga o te anthracnose i waenganui o te tekau tau 1990, na te nui o nga tirotirohanga i kitea te maha o nga kaikoha atete i roto i nga tauira NLL19. Ko te parenga NLL ki te anthracnose e whakahaeretia ana e rua nga momo rereke rereke ka kitea i roto i nga puna germplasm rereke: Lanr1 i roto i te tipu Tanjil me Wonga me AnMan i roto i te maara. Mandalay 25, 26. Ko enei alleles e whakakii ana i nga tohu ngota e tautoko ana i te kowhiringa o te germplasm ātete ki nga kaupapa whakatipu25,26,27,28,29,30. Ko te raina whakatipu atete 83A:476 e mau ana i te Lanr1 allele i whiti ki te raina mohoao ngawari P27255 ki te whiwhi i te taupori RIL e wehe ana mo te aukati anthracnose, na reira i taea ai te tautapa i te waahi Lanr1 ki te chromosome NLL-1131, 32, 33. Aligners from an flanthracnose resistance. anga, NLL i whakaatu te waahi o nga alleles e toru i runga i te chromosome kotahi (NLL-11), engari he rereke nga tuunga29,34,35. Heoi, na te iti o nga RIL me te nui o te tawhitinga ira i waenga i nga tohu me nga alleles e rite ana, karekau he whakatau pono e taea te whakatau mo o raatau ira o raro. I tetahi atu taha, he uaua te whakamahi i nga ira whakamuri i roto i nga lupins na te iti rawa o te kaha ki te whakaora, na te mea he uaua te raweke ira37.
Ko te whakawhanaketanga o te germplasm kainga e mau ana i te allele e hiahiatia ana i roto i te ahua homozygous, penei i te 83A: 476 (Lanr1) me Mandelup (AnMan), kua whakatuwheratia te tatau ki te ako i te aukati anthracnose i mua i te aroaro o nga huinga whakahē o nga alleles i roto i nga taupori mohoao. Ka taea e nga tikanga ngota. Whakatauritehia nga whakautu parepare i hangaia e nga momo momo momo. I arotakehia e tenei rangahau te urupare moata o te NLL ki te werohanga C. lupini. Tuatahi, i tirotirohia he roopu germplasm NLL Pakeha kei roto nga rarangi 215 ma te whakamahi i nga tohu rapoi e tohu ana i nga alleles Lanr1 me AnMan. Ka mahia te tohu tohu Anthracnose i runga i nga rarangi 50 NLL, i tohua i mua mo nga tohu mole, i raro i nga tikanga whakahaere. I runga i enei whakamatautau, e wha nga rarangi rereke i roto i te parenga anthracnose me te Lanr1/AnMan allelic titonga i tohua mo te whakamaarama korero ira ira rereke ma te whakamahi i nga huarahi taapiri e rua: te raupapatanga RNA teitei me te ine PCR i te waa-tuuturu.
Ko te tirotiro i te huinga o te NLL germplasm (N = 215) me nga tohu Lanr1 (Anseq3 me Anseq4) me AnMan (Anseq4) me AnMan (AnManM1) i whakaatu ko te raina kotahi anake (95726, tata ki Salamanca-b) e whakanui ana i te "whakatete" allele mo nga tohu katoa, i te mea ko te "whakaaronga katoa o nga tohu" ka kitea i roto i nga tohu katoa. 158 (~ 73.5%) raina. Tekau ma toru nga rarangi i whakaputa e rua nga tohu "atete" o te tohu Lanr1, a e 8 nga rarangi i whakaputa i nga tohu "atete" o Lanr1. tohu. Ko te "atete" allele o te tohu AnMan (Taapiri Taapiri S1). E rua nga rarangi he heterozygous mo te tohu Anseq3 me tetahi heterozygous mo te tohu AnManM1. E 42 nga rarangi (19.5%) i kawe i nga wahanga rereke o te Anseq3 me te Anseq4 alleles, e tohu ana i te auau nui o te whakakotahitanga i waenga i enei waahi e rua. Ko nga ahuatanga o te Anthracnose i raro i nga tikanga e whakahaerehia ana (Taapiri Taapiri S2) i whakaatu i te rereketanga o te parenga o nga momo ira tangata kua whakamatauria, i kitea i roto i te kaha o te anthracnose. Ko nga rereketanga i roto i nga kaute toharite i puta mai i te 1.8 (he kaha te atete) ki te 6.9 (te whakaraerae) me nga rereketanga o te taumaha o te tipu mai i te 0.62 (te ngawari) ki te 4.45 g (te aukati). He nui te hononga i waenga i nga uara i kitea i roto i nga tukurua e rua o te whakamatautau (0.51 mo nga tohu mate mate, P = 0.00017 me 0.61 mo te taumaha tipu, P <0.0001) tae atu ki waenganui i enei waahanga e rua (- 0.59 me - 0.77, P <0.000). He hononga nui i waenga i nga uara i kitea i roto i nga tukurua e rua o te whakamatautau (0.51 mo nga tohu mate kino, P = 0.00017 me 0.61 mo te taumaha tipu, P <0.0001) tae atu ki waenganui i enei tawhā e rua (-0.59 me -0.70, P <0.77, P <0.77). Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 для тля = 0,00017 и 0,61 для массы растения, P <0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р00 < 0,0). I kitea he hononga nui i waenga i nga uara i kitea i roto i nga tukurua e rua o te whakamatautau (0.51 mo nga tohu mate kino, P = 0.00017 me te 0.61 mo te taumaha tipu, P <0.0001), tae atu ki waenganui i enei tawhā e rua (- 0.59 me -0.77, P <0.0001)在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为 =0. 0.00017，植物重量为0.61，P < 0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77，P <0.0001).在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 了了 了 了 了0.51 ， p = 0.00017 ， 植物 为 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（（ 和 9–5. 0.59–0.59–0.77，P <0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тяжести ва, за 0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,00,00,00,00,000 и масса растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, P <0,0001. He nui te hononga i waenga i nga uara kua kitea i roto i te taarua (te tohu taumahatanga o te mate 0.51, P = 0.00017 me te taumaha tipu 0.61, P <0.0001) me waenga i enei tawhā e rua (-0.59 me -0 .0001) 0.77, P<0.0001 ).Ko nga tohu angamaheni ka kitea i roto i nga tipu whakaraerae ko te kinking me te korikori o te kakau he rite ki te hanganga "kopere a te hepara", whai muri mai ko nga whara porotītaha me nga sporozoites karaka/mawhero (Taupiri Fig. 1). Ko nga whakaurunga o Ahitereiria e mau ana i nga ira Lanr1 (83A:476 me Tanjil) me AnMan (Mandelup) he tino whakaahuru, 0.0331 me te 0.0036). Ko etahi o nga raina e mau ana i nga "atete" Lanr1 me / ranei AnMan alleles e whakaatu ana i nga tohu o te mate.
He mea whakamiharo, he iti nga rarangi NLL kaore he tohu tohu "atete" i whakaatu i te taumata teitei o te aukati anthracnose (he rite, teitei ake ranei mo nga momo momo Lanr1, AnMan ranei), penei i te Boregine (P uara <0.0001 mo nga tawhā e rua), Bojar (P uara <0.0001 mo te kaute me te 0.001 mo te piro me te 0.001 mo te uara P9-b) 0.0001 mo te kaute me te kore-nui mo te taumaha). He mea whakamiharo, he iti nga rarangi NLL kaore he tohu tohu "atete" i whakaatu i te taumata teitei o te aukati anthracnose (he rite, teitei ake ranei mo nga momo momo Lanr1, AnMan ranei), penei i te Boregine (P uara <0.0001 mo nga tawhā e rua), Bojar (P uara <0.0001 mo te kaute me te 0.001 mo te piro me te 0.001 mo te uara P9-b) 0.0001 mo te kaute me te kore-nui mo te taumaha). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокний уроский антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine (значение P <0,0001 для проба), Boregine (значение P <0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) me популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оимицид mассы). He mea whakamiharo, he maha nga rarangi NLL kaore he tohu tohu 'aukati' i whakaatu i te taumata teitei o te parenga ki te anthracnose (he rite ki te teitei ake ranei mo nga momo momo Lanr1, AnMan ranei), penei i te Boregine (P uara <0.0001 mo nga tawhā e rua), Bojar (P uara <0.0001 mo te aromatawai me te 0.0001 mo te taumaha o te tipu me te 0.0001 mo te 0.001b-b9) 0.0001 mō te aro mātai, ā, ehara i te mea nui mō te taumaha).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗他们中文基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重量不显。 He mea whakamiharo ko etahi o nga punaha NLL kaore he tohu "antigenic" e whakaatu ana i te aukati whakapae teitei (he rite ki nga ira Lanr1, AnMan ranei teitei ake ranei), penei i te Boregine (e rua nga tawhā P <0.0001), Bojar (P uara <0.0001, te taumaha tipu 0.001) me te riaka B-549/79b (P00). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», показали высокие уостовички антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001, P 0,001), Boregine масса растения 0,001) me te популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). He mea whakamiharo, ko etahi rarangi NLL kaore he tohu tohu 'arohe' i whakaatu i nga taumata teitei o te parenga anthracnose (ka whakatauritea ki runga ake ranei i te Lanr1 me te AnMan genotypes), penei i te Boregine (P uara mo nga tawhā e rua <0.0001), Bojar (P-uara <0.0001, te taumaha tipu 0.00-59) me te taupori. 0.0001, karekau he taumaha).Ko tenei ahuatanga e whakaatu ana te ahua o te puna ira ira hou mo te aukati, e whakamarama ana i te kore o te hononga i waenga i nga momo tohu tohu me nga tohu tohu mate (nga uara P mai i ~0.42 ki ~0.98). No reira, i whakaatuhia e te whakamatautau Kolmogorov-Smirnov ko nga raraunga mo te aukati anthracnose i tohatoha noa mo nga kaute (P-values ​​​​0.25 me 0.11) me te papatipu tipu (P-values ​​0.47 me 0.55), e kii ana ahau he nui ake nga alleles i te Lanr1 me te AnMan.
I runga i nga hua o te tirotiro i te aukati anthracnose, e 4 nga rarangi i tohua mo te tātaritanga tuhinga: 83A: 476, Boregine, Mandelup, me te Taupori 22660. I whakamatauria ano enei rarangi mo te aukati anthrax i roto i nga whakamatautau inoculation ma te raupapa RNA, mena he rite tonu ki te whakamatautau o mua. Ko nga uara kaute e whai ake nei: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) me te taupori 22660 (6.11 ± 1.29 ).
Ko te kawa Illumina NovaSeq 6000 i tutuki i te toharite o te 40.5 Mread takirua mo ia tauira (29.7 ki te 54.4 Mreads) (Ripanga taapiri S3). Ko nga tohu tirohanga i roto i te raupapa tohutoro mai i te 75.5% ki te 88.6%. Ko te honohononga toharite o nga raraunga tatau panui i waenga i nga momo whakamatautau i waenga i nga tauira koiora mai i te 0.812 ki te 0.997 (te tikanga 0.959). Mai i nga ira e 35,170 i tātarihia, 2917 karekau he korero, ko etahi atu ira e 4785 i whakaatuhia i te taumata iti (te tikanga o te turanga <5). Mai i nga ira e 35,170 i tātarihia, 2917 karekau he korero, ko etahi atu ira e 4785 i whakaatuhia i te taumata iti (te tikanga o te turanga <5). Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспресиронвались темировались (базовое среднее <5). O nga ira 35,170 i tātarihia, 2917 karekau he korero, a ko nga ira e 4785 e toe ana i whakaatuhia ki te taumata iti (te tikanga <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 个基因的表达可以忽略可以忽略不到计5）.35,170 Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, a остальные 4785 генов имели незначительнсубю среднее значение <5). O nga ira e 35,170 i tātarihia, 2917 kaore i whakaatuhia, a, ko te toenga o nga ira e 4785 he iti noa te korero (te tikanga <5).No reira, ko te maha o nga ira i whakaarohia kua whakaatuhia (te tikanga o te turanga ≥ 5) i te wa o te whakamatautau ko 27,468 (78.1%) (Ripanga taapiri S4).
Mai i te wa tuatahi, i whakautu nga rarangi NLL katoa ki te werohanga o C. lupini (te riaka Col-08) na roto i te reprogramming i te transcriptome (Ripanga 1), heoi, he nui nga rereketanga i kitea i waenga i nga rarangi. Na, ko te raina aukati 83A: 476 (e mau ana i te ira Lanr1) i whakaatu i te reprogramming transcriptome nui i te wa tuatahi (6 hpi) me te pikinga 31-69-fold i roto i te maha o nga ira-ake me te whakaheke-whakaritea ki etahi atu waahi i tenei wa. I tua atu, he wa poto tenei tihi, na te mea i tino rerekee te korero o etahi ira i te wa tuarua (12 hpi). Ko te mea whakamiharo, ko Boregine, i whakaatu hoki i te taumata teitei o te aukati i roto i te whakamatautau graft, kaore i uru ki te reprogramming whakamohoatanga nui i te wa o te whakamatautau. Heoi, he rite tonu te maha o nga ira rerekee (DEG) mo Boregine me te 83A:476 i te 12 HPI. Ko te Mandelup me te taupori 22660 i whakaatu i nga tihi DEG i te wa whakamutunga (48 l/s), e tohu ana i te roanga o nga whakautu tiaki.
No te mea ko te 83A: 476 i tukuna te reprogramming nui i roto i te whakautu ki a C. lupini i te 6 HPI i whakaritea ki era atu rarangi katoa, ~ 91% o nga DEG i kitea i tenei wa he whakapapa-motuhake (Fig. 1). Heoi ano, he inaki etahi o nga whakautu moata i waenga i nga rarangi ako, i te mea ko te 68.5%, 50.9%, me te 52.6% DEG i Boregine, Mandelup, me te taupori 22660, i inaki ki era i kitea i te 83A:476 i etahi waahi o te waa. Heoi, ko enei DEG he hautanga iti noa iho (0.97–1.70%) o nga DEG katoa i kitea i tenei wa ma te whakamahi i te 83A:476. I tua atu, 11 DEGs mai i nga raina katoa i noho tahi i tenei wa (Taupiri Taapiri S4-S6), tae atu ki nga waahanga noa o nga urupare tiaki tipu: te pūmua whakawhiti lipid (TanjilG_32225), te enzyme endoglucan-1,3-β-glucoside (TanjilG_23384), e rua nga pūmua ahotea-inducible penei i te SAM22 (TanjilG13_Tanjil15) (TanjilG_32352), me nga pūmua taiepa pūtau hangahanga e rua (TanjilG_19701 me TanjilG_19702). He nui ano te inaki i nga whakautu tuhi i waenga i te 83A:476 me te Boregine i te 24 HPI (katoa 16-38% DEG) me waenganui i Mandelup me te Taupori 22660 i te 48 HPI (katoa 14-20% DEG).
Ko te hoahoa Venn e whakaatu ana i te maha o nga ira rerekee (DEG) i roto i nga raina lupine whaiti (NLL) kua werohia ki te Colletotrichum lupini (te riaka Col-08 i whiwhi mai i nga mara lupine i Wierzhenice, Poland, 1999). Ko nga rarangi NLL i wetewetehia ko: 83A:476 (atete, e mau ana i te Lanr1 allele), Boregine (atete, te papamuri ira e kore e mohiotia), Mandelup (he kaha te atete, e mau ana i te AnMan allele) me te taupori 22660 (tino whakaraerae). Ko te whakapotonga hpi e tu ana mo nga haora i muri i te werohanga. Kua tangohia nga uara kore hei whakangawari i te kauwhata.
I tātarihia te huinga o nga ira ira i te 6 hpi mo te aroaro o nga rohe ira ira R canonical (Ripanga taapiri S7). I whakaatuhia e tenei rangahau te whakaurunga o nga ira aukati mate matarohia me nga rohe NBS-LRR anake i te 83A: 476. Ko tenei huinga he ira TIR-NBS-LRR kotahi (tanjilg_05042), e rima nga ira CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, me te tanjilg_16162), me te Four NBS-LR6, Tanjilg2, me te Four NBS-LR6, Tanjilg2. (tanjilg_16162) me wha NBS-Lrr (tanjilg_16162) me wha NBS-LRR (TANJILG_16162). Katoa o enei ira he rohe kakano kua whakaritea i roto i nga raupapa kua tiakina. I tua atu i nga ira rohe NBS-LRR, he maha nga RLL kinases i whakahohehia i te 6 hpi, ara kotahi i Boregine (TanjilG_19877), e rua i Mandelup (TanjilG_07141 me TanjilG_19877) me te taupori 22660 (TanjilG_09014 me TanjilG14) me te rua 723 i roto i te 68877.
Ko nga ira me nga korero tino rerekee i roto i te urupare ki te inoculation ki te C. lupini (te riaka Col-08) i tukuna ki te Gene Ontology (GO) tātaritanga whakarangatira (Taupiri S8). Ko te kupu tukanga koiora i tino whakahuahia ko te "GO: 0006952 whakautu tiaki" i puta i roto i te 6 o te 16 (waa × raina) nga huinga me te nui o te hiranga (P uara <0.001) (Fig. 2). Ko te kupu tukanga koiora i tino whakahuahia ko te "GO: 0006952 whakautu tiaki" i puta i roto i te 6 o te 16 (waa × raina) nga huinga me te nui o te hiranga (P uara <0.001) (Fig. 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответо» 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ko te kupu tukanga koiora i te nuinga o te wa ko te 'GO: 0006952 whakautu tiaki', i puta i roto i te 6 o te 16 (wa × whakapapa) nga huinga me te hiranga nui (P uara <0.001) (Fig. 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16 个（时间）一一一上一一么一上一一上个中，具有高显着性（P ‼< 0.001）（图2）。 Ko te kupu tukanga koiora e tino tohu ana ko “GO:0006952 whakautu parepare”, ka puta i roto i te 6 o nga huinga 16 (时间×线), he nui te hiranga (P uara <0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 Defense Response», котовлыл 6 позля 6 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ko 'GO:0006952 Defence Response' ko te kupu tukanga koiora e kaha ake ana, i puta i roto i te 6 o nga huinga 16 (waa × raina) me te hiranga nui (P uara <0.001) (Fig. 2).E rua nga wa i whakaatuhia tenei kupu i te 83A: 476 me Boregine (6 me 24 hpi) me tetahi wa i Mandelup me te Taupori 22660 (12 me te 6 hpi, ia). He hua tenei e tumanakohia ana, e whakaatu ana i te whakautu antifungal o nga raina aukati. I tua atu, i whakautu a 83A: 476 ki a C. lupini na roto i te tere o te whakauru i nga ira e pa ana ki te pakaru o te oxidative e tohuhia ana e te kupu "GO: 0055114 redox process", e tohu ana i te whakautu whakamarumaru motuhake, i te wa i whakaatu a Boregine i nga whakautu whakamarumaru motuhake, e pa ana ki te kupu 'GO'. :0006950 Te whakautu taumaha.” Ko te taupori 22660 i whakahohehia te whakautu whakapae whakapae e uru ana ki nga metabolites tuarua, e whakaatu ana i te maha o nga kupu “GO:0016104 Te tukanga o te biosynthesis triterpene” me te “GO:0006722 Te tukanga o te triterpene i roto i nga metabolites” (no nga kupu e rua mo te huinga o nga hua o te tauhohenga o te ira, ko nga hua e rua o te waahanga o te tauhohenga a GO: 0016104. i waenganui i te Boregine me te Taupori 22660. I tua atu, ko te tauhohenga moata 83A:476 (6 hpi) me te hohenga whakaroa Mandelup me te Taupori 22660 ko te kupu GO:0015979 'photosynthesis' me etahi atu tukanga koiora e pa ana.
Ko nga kupu ira ontology bioprocess i tohua i roto i te tuhipoka o nga ira rerekee i te wa o nga whakautu whakawhiti o te narrow-leaved lupine (NLL) i werohia ki te anthrax lupine (Col-08 riaka i whiwhi mai i nga mara lupine i Wierzhenice, Polani, i te tau 1999). Ko nga rarangi NLL i wetewetehia ko: 83A:476 (he atete, he kawe i te homozygous Lanr1 allele), Boregine (he atete, he papamuri ira e kore e mohiotia), Mandelup (he kaha te atete, he kawe i te homozygous AnMan allele) me te taupori 22660 (he ngawari).
Na te mea ko tenei rangahau i whai ki te tautuhi i nga ira e whai waahi ana ki te aukati anthracnose, ko nga ira kua tohua ki nga kupu GO "GO: 0006952 Whakautu parepare" me te "GO: 0055114 Nga tukanga Redox" i tātarihia me te tapahi i te mea ko te tikanga ≥ 30 me te iti rawa o te raina kotahi. × tohu i roto i te wa e whakakotahi ana i nga uara tauanga nui o te roko2 (whakarereketanga). Ko te maha o nga ira e tutuki ana i enei paearu ko te 65 mo GO:0006952 me te 524 mo GO:0055114.
83A:476 i whakaatu mai e rua nga tihi DEG kua tohuhia ki te kupu GO:0006952, ko te tuatahi ki te 6 ira mo ia inihi (64 nga ira, whakarunga me te whakararo ture) me te tuarua ki te 24 nga ira mo ia inihi (15 nga ira, ake ture anake). I whakaatu ano a Boregine ko GO:0006952 i eke ki runga i te wa kotahi, engari he iti ake te DEG (11 me te 8) me te whakahohenga hiahia. I whakaatuhia e Mandeloop nga tihi e rua o GO: 0006952 i te 12 me te 48 HPI, e rua e mau ana i nga ira 12 (ko te tuatahi me nga ira whakaoho, me te tuarua me nga ira aukati anake), i te mea ko te taupori 22660 i te 6 HPI (13 nga ira) he nui ake te mana o te piki piki. whakaritenga. Me tohu ko te 96.4% o GO: 0006952 DEG i roto i enei tihi he rite tonu te momo whakautu (ki runga, ki raro ranei), e tohu ana he nui te inaki i roto i nga whakautu whakamarumaru ahakoa nga rereketanga o te maha o nga ira e uru ana. Ko te roopu nui rawa atu o nga raupapa e pa ana ki te kupu GO:0006952 e whakawaehere ana i te Starvation Stress-Associated Message Protein 22 (SAM22-rite), no te akomanga 10 pathogenesis-associated protein (PR-10) clade pūmua me te latex pūmua matua. rite (MLP-rite) pūmua) pūmua (Fig. 3). He rereke nga roopu e rua i te ahua o te korero me te ahunga o te whakautu. Ko nga ira e whakawae ana i nga pūmua rite ki te SAM22 i whakaatu rite tonu te whakaurunga nui i nga wa moata (6, 12 hpi ranei) me te kore e aro ki te mutunga o te whakamatautau (48 hpi), ko nga pūmua rite MLP i whakaatu i te ruruku i te 6 hpi. hpi. 83A:476 me Mandelup i te 48 hp/in, tata katoa nga tohu raraunga kaore i aro. I tua atu, ko nga rereketanga o nga korero korero o nga ira pūmua rite SAM22 i whai i te rerekeetanga o te parenga anthracnose, i te mea he maha ake nga rarangi aatete he nui ake nga wa e whakaawe ana i enei ira i nga ira ngawari ake. Ko tetahi atu ira LlR18A/B-rite PR-10 i whakaatu he ahua tino rite ki te ira pūmua rite SAM22.
Ko nga waahanga matua o te kupu tukanga koiora "GO: 0006952 Whakautu Tiaki" me nga tauira whakahuatanga o nga ira kaitono o te Lanr1 me AnMan alleles i tautuhia. Ko te tauine Log2 e tohu ana i nga uara o te log2 (whakarereketanga) i waenga i te werohanga (Colletotrichum lupini, riaka Col-08, i riro mai i nga mara lupine, Wizhenica, Poland, 1999) me te whakahaere (sham-inoculated) tipu i te wa ano. Ko nga raina lupine narrowleaf e whai ake nei i tātarihia: 83A:476 (he atete, e mau ana i te homozygous Lanr1 allele), Boregine (atete, te papamuri ira e kore e mohiotia), Mandelup (he kaha te atete, e mau ana i te homozygous AnMan allele), me te Taupori 22660 (he ngawari).
I tua atu, ko nga korero korero o nga ira kaitono RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) me AnMan (TanjilG_12861) i aromatawaihia (Fig. 3). Ko te ira TanjilG_05042 i whakaatu i te whakautu nui (whakahohenga) i te 83A: 476 anake i te waahi tuatahi (6 hpi), i te mea he mea nui a TanjilG_12861 i Mandeloop i nga wa e rua anake: 6 hpi (whakature raro) me te 24 hpi (6 hpi). Me.). taea te whakarite)).
Ko nga ira tino kaha ake i roto i te kupu GO: 0055114 "te tukanga redox" ko nga ira e whakawae ana i nga pūmua cytochrome P450 me te peroxidase (Fig. 4). Mo nga tauira kua wehea mai i te 83A: 476 i te 6 HPI, ko nga uara morahi me te iti rawa o te log2 (whakarereketanga) (mo te 86.6% o nga ira) i kitea i waenga i nga tipu kua werohia me nga tipu whakahaere, e whakaatu ana i te whakautu nui o tenei momo momo ki te whakaraerae ira. 83A: 476 i whakaatu te GO tino nui: 0055114 DEG i te 6 hpi (503 ira), ko te toenga o nga rarangi i te 48 hpi (Boregine, 31 ira; Mandelup, 85 ira; me te Taupori 22660, 78 ira)). I te nuinga o nga ira o te whanau GO:0055114, e rua nga momo whakautu ki te werohanga (whakahohenga me te aukati) i kitea. He mea whakamiharo, tae atu ki te 97.6% o nga DEG i tautuhia mo te kupu GO: 0055114 i Mandelupe i te 48 hp Ko enei kitenga e kii ana, ahakoa te iti ake o te tauine (arā, te maha o nga ira redox mutated, 85 me te 503), he rite te tauira o te whakaroa o nga whakautu whakawhiti o te maracnoseup wawe ki te whakautu wawe. 83A:476. I roto i te Boregine me te Taupori 22660, he iti ake tenei hononga ki te 51.6% me te 75.6%, ia.
Ko nga tauira o te whakapuaki i nga waahanga matua o te wa o te tukanga koiora "GO: 0055114 Redox process" i whakaatuhia. Ko te tauine Log2 e tohu ana i nga uara o te log2 (whakarereketanga) i waenga i te werohanga (Colletotrichum lupini, riaka Col-08, i riro mai i nga mara lupine, Wizhenica, Poland, 1999) me te whakahaere (sham-inoculated) tipu i te wa ano. Ko nga raina lupine narrowleaf e whai ake nei i tātarihia: 83A:476 (he atete, e mau ana i te homozygous Lanr1 allele), Boregine (atete, te papamuri ira e kore e mohiotia), Mandelup (he kaha te atete, e mau ana i te homozygous AnMan allele), me te Taupori 22660 (he ngawari).
83A:476 Ko nga whakautu whakawhiti ki te inoculation ki te C. lupini (te riaka Col-08) i whakaurua ano hoki te whakangau ruruku o nga ira e kiia ana ki te kupu GO:0015979 "whakaahua" me etahi atu tukanga koiora e pa ana (FIG. 5). Ko tenei huinga GO:0015979 DEG he 105 nga ira i tino pehia i te 6 hpi i te 83A:476. I roto i tenei waahanga, 37 nga ira i whakahekehia i Mandelup i te 48 HPI me te 35 i te wa kotahi i roto i te taupori 22660, tae atu ki te 19 DEGs noa ki nga momo momo e rua. Karekau he DEG e pa ana ki te kupu GO: 0015979 i tino whakahohehia i roto i tetahi huinga (raina x wa).
Ko nga tauira korero o nga waahanga matua o te wa o te tukanga koiora "GO: 0015979 Photosynthesis" i whakaatuhia. Ko te tauine Log2 e tohu ana i nga uara o te log2 (whakarereketanga) i waenga i te werohanga (Colletotrichum lupini, riaka Col-08, i riro mai i nga mara lupine, Wizhenica, Poland, 1999) me te whakahaere (sham-inoculated) tipu i te wa ano. Ko nga raina lupine narrowleaf e whai ake nei i tātarihia: 83A:476 (he atete, e mau ana i te homozygous Lanr1 allele), Boregine (atete, te papamuri ira e kore e mohiotia), Mandelup (he kaha te atete, e mau ana i te homozygous AnMan allele), me te Taupori 22660 (he ngawari).
I runga i nga hua o te wetewete korero rerekee me te mea kua uru ki nga urupare whakamarumaru ki nga harore pathogenic, i kowhiria tenei huinga o nga ira e whitu mo te inenga o nga korero korero ma te PCR-wa-tui (Ripanga Taapiri S9).
Ko te ira pūmua putative TanjilG_10657 i tino whakaawehia i roto i nga rarangi ako katoa me nga waahi o te waa i whakaritea ki te whakahaere (whakarite) tipu (Taupiri Taapiri S10, S11). I tua atu, ko te whakaaturanga korero o TanjilG_10657 i whakaatu i te piki haere i roto i te waa o te whakamatautau mo nga raina katoa. Ko te taupori 22660 i whakaatu i te tino aro nui o TanjilG_10657 ki te inoculation me te 114-fold activation me te taumata korero whanaungatanga teitei (4.4 ± 0.4) i te 24 HPI (Fig. 6a). Ko te ira pūmua PR10 LlR18A TanjilG_27015 i whakaatu hoki i te whakahohenga puta noa i nga rarangi katoa me nga waahi wa, me te hiranga tatauranga i te nuinga o nga tohu raraunga (Fig. 6b). He rite ki a TanjilG_10657, ko te taumata korero whanaungatanga teitei o TanjilG_27015 i kitea i roto i te 22660 taupori kua werohia i te 24 HPI (19.5 ± 2.4). Ko te ira endochitinase waikawa TanjilG_04706 i tino whakatikatika i nga rarangi katoa me nga waahi katoa engari mo te Boregine 6 hpi (Fig. 6c). I kaha te akiaki i te wa tuatahi (6 HPI) i te 83A:476 (ma te 10.5 nga wa) me te piki haere i etahi atu rarangi (ma te 6.6-7.5 nga wa). I te wa o te whakamatautau, i noho tonu te korero a TanjilG_04706 i nga taumata rite i roto i te 83A: 476 me Boregine, i te Mandelup me te Taupori 22660 ka tino piki ake, ka eke ki nga uara teitei (5.9 ± 1.5 me 6.2 ± 1.5, ia). Ko te ira endoglucan-1,3-β-glucosidase-like TanjilG_23384 i whakaatu i te whakahoahohe nui i nga waahi tuatahi e rua (6 me te 12 hpi) i nga rarangi katoa engari ko te taupori 22660 (Fig. 6d). Ko nga taumata korero whanaungatanga teitei o TanjilG_23384 i kitea i te wa tuarua (12 hpi) i Mandelup (2.7 ± 0.3) me te 83A: 476 (1.5 ± 0.1). I te 24 HPI, he iti noa te korero a TanjilG_23384 i nga rarangi ako katoa (mai i te 0.04 ± 0.009 ki te 0.44 ± 0.12).
Ko nga whakaaturanga korero o nga ira kua tohua (ag) ka whakaatuhia e te PCR ine. Ko nga nama 6, 12 me te 24 e tohu ana i nga haora i muri i te werohanga. I whakamahia nga ira LanDExH7 me LanTUB6 mo te whakatikatika me te LanTUB6 i whakamahia mo te whakatikatika i waenga-raupapa. Ko nga pae hapa e tohu ana i te rerekee paerewa i runga i nga tauira koiora e toru, ko ia te toharite o nga tauira hangarau e toru. Ko te hiranga tatauranga o nga rereketanga i roto i nga taumata korero i waenga i te werohanga (Colletotrichum lupini, strain Col-08, i whiwhi i te 1999 mai i te mara lupine i Wierzenica, Poland) me te whakahaere (whakawai-inoculated) tipu kua tohua i runga ake i nga tohu raraunga (* P uara <0.05, ** P uara ≤ 0.01, *** P 0.01, *** P 0.01, *** P 0.01). Ko te hiranga tatauranga o nga rereketanga i roto i nga taumata korero i waenga i te werohanga (Colletotrichum lupini, strain Col-08, i whiwhi i te 1999 mai i te mara lupine i Wierzenica, Poland) me te whakahaere (whakawai-inoculated) tipu kua tohua i runga ake i nga tohu raraunga (* P uara <0.05, ** P uara ≤ 0.01, *** P 0.01, *** P 0.01, *** P 0.01). Статистическая значимость различий в уровнях экспреспосии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, получен л. 1999 г. в Верженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена отмечена точками данных (*знач0наных (*знач0нание P. 0,01, ***значение P ≤ 0,001). Ko nga rereketanga nui o te tatauranga i roto i nga taumata korero i waenga i te werohanga (Colletotrichum lupini, riaka Col-08, i riro mai i te 1999 mai i te mara lupine i Wierzhenice, Poland) me nga tipu whakahaere (sham-inoculated) kei runga ake i nga tohu raraunga (*P uara <0.05, **P-uara ≤ 0.01, ≤ 0.01, ***P-0).接种（Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数上我為0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照 （接秉 （接秉水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученпли спол. Верженице, Польша, в 1999 г.) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены над точками (* данных инокулированными) P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). Ko nga rereketanga nui o te tatauranga i roto i nga taumata korero i waenga i te werohanga (Colletotrichum lupini, riaka Col-08, i whiwhi mai i nga mara lupine i Verzhenice, Poland, i te tau 1999) me nga tipu whakahaere (sham-inoculated) kei runga ake i nga tohu raraunga (*P uara <0.05 , **P-value ≤ 0.01, ≤0-1).Ko nga rarangi NLL i tātarihia ko: 83A: 476 (atete, e mau ana i te homozygous Lanr1 allele), Mandelup (ahua whakaahuru, e mau ana i te homozygous AnMan allele), Boregine (atete, te papamuri ira e kore e mohiotia) me te taupori 22660 (whakaraerae).
Ko te ira kaitono a TanjilG_05042 i te waahi o Lanr1 i whakaatu he ahua rereke rereke mai i nga korero i puta mai i nga rangahau RNA-seq (Fig. 6e). I kitea te nui o te whakahohenga o tenei ira i Mandelup me te taupori 22660 (tae atu ki te 39.7 me te 11.7 nga wa, ka puta mai he ahua teitei o nga taumata korero (tae atu ki te 1.4 ± 0.14 me te 7.2 ± 1.3, ia). 83A: 476 i whakaatu ano hoki i etahi whakatikatika o te ira TanjilG_05042 (tae atu ki te 3.8-fold), heoi, ko nga taumata whakahuatanga whanaungatanga i tutuki (0.044 ± 0.002) he neke atu i te 30-tiki te iti ake i era i kitea i Mandelup me te taupori 22660. i tātarihia e te qPCR i whakaatu i nga rereketanga nui i roto i nga taumata korero i waenga i nga momo momo ira i roto i nga momo kano kano (whakahaere), tae atu ki te rereketanga 58 i waenga i nga taupori 22660 me te 83A: 476, tae atu ki nga taupori 22660 me 22660. I tutuki te rereketanga e rua i waenga i a Boregine me Mandalup.
Ko te ira kaitono i te waahi o AnMan, TanjilG_12861, i whakahohehia hei whakautu ki te werohanga i te 83A: 476 me Mandelup, he koretake i roto i te taupori 22660, ka whakahekehia i Boregine (Fig. 6f). Ko te korero whanaunga o te ira TanjilG_12861 te mea teitei rawa atu i te 83A kua werohia: 476 (0.14±0.01). Ko te karaehe 17.4 kDa I te ira pūmua wiri werawera TanjilG_05080 HSP17.4 i whakaatu i te iti iho o nga taumata whakahuatanga whanaungatanga i roto i nga reanga katoa me nga wa i akohia (Fig. 6g). Ko te uara teitei i kitea i te 24 HPI i roto i te taupori 22660 (0.14 ± 0.02, he pikinga e waru ki te whakautu ki te werohanga).
Ko te whakatairitetanga o nga whakaaturanga korero ira (Fig. 7) i kitea he hononga nui i waenga i a TanjilG_10657 me etahi atu ira e wha: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), me TanjilG6_9 (R = 0.80). Ko enei hua ka tohu pea i te whakahaere-tahi o enei ira i te wa e whakautu ana te parepare. Ko nga ira o TanjilG_12861 me TanjilG_23384 i whakaatu i nga korero korero rereke me te iti ake o nga uara o te whakarea whakareatanga o Pearson (mai i te 0.08 ki te 0.43 me te -0.19 ki te 0.28) ka whakaritea ki etahi atu ira.
I kitea nga hononga i waenga i nga whakaaturanga korero ira ma te whakamahi i te PCR ine. Ko nga raina lupine narrowleaf e whai ake nei i tātarihia: 83A:476 (he ātete, e mau ana i te homozygous Lanr1 allele), Mandelup (he kaha te atete, e mau ana i te homozygous AnMan allele), Boregine (te aukati, te papamuri ira kaore i te mohiotia), me te Taupori 22660 (whakaraerae). E toru nga wa i tatauhia (6, 12 me te 24 haora i muri i te werohanga), tae atu ki te werohanga (Colletotrichum lupini, riaka Col-08, i riro mai i nga mara lupine i Wierzhenice, Poland, i te tau 1999) me te whakahaere (sham-inoculated) tipu. Ko te tauine e whakaatu ana i te uara o te tauritenga o Pearson.
I runga i nga raraunga i riro mai i te 6 horsepower mo ia inihi, i mahia te WGCNA i runga i te 9981 DEG i tautuhia ma te whakataurite i nga tipu kua werohia me te whakahaere ki te aro ki nga urupare whakamarumaru moata (Ripanga Tāpiri S12). E rua tekau ma rua nga momo ira (nga kapopuu) i kitea me nga korero korero (he pai, he kino ranei) i waenga i nga momo momo ira me nga momo momo whakamatautau. I te toharite, kei te heke haere nga taumata whakaputanga ira i runga i te raupapa 83A:476 > Mandelup > Boregine > Taupori 22660 (i nga momo rereke e rua, engari he kaha ake tenei ahuatanga i roto i nga tipu whakahaere). I te toharite, kei te heke haere nga taumata whakaputanga ira i runga i te raupapa 83A:476 > Mandelup > Boregine > Taupori 22660 (i nga momo rereke e rua, engari he kaha ake tenei ahuatanga i roto i nga tipu whakahaere). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 (i roto i te обоих вариантах, обнтакон, белет сильнее у контрольных растений). I te toharite, ka heke nga taumata whakaputanga ira i roto i te raupapa 83A:476 > Mandelup > Boregine > Taupori 22660 (i roto i nga momo rereke e rua, engari, he kaha ake tenei ahuatanga ki nga tipu whakahaere).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Taupori 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）。平均 而 言 ， 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> taupori 22660 的 顺序 下降 （， 在 种 中 ， 在 种 中植物 中 更） . . . . . . . . . . . . . . . . . . В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Taupori 22660 контрольных растений). I te toharite, kua heke nga taumata whakaputa ira i roto i te raupapa 83A:476 > Mandelup > Boregine > Taupori 22660 (engari, i roto i nga momo rereke e rua, he kaha ake tenei ahuatanga i roto i nga tipu whakahaere).Ko te kano kano i hua ake ai te whakatikatika o te whakaputanga ira, ina koa i roto i nga waahanga 18, 19, 14, 6 me 1 (i roto i te raupapatanga hekenga o te paanga), nga ture kino (hei tauira, nga waahanga 9 me te 20) me nga paanga koretake ranei (hei tauira 11, 22, 8 me 13). Ko te tātaritanga whakarangatira mo te kupu GO (Ripanga Taapiri S13) i whakaatu "GO: 0006952 Nga whakautu parepare" mo te kōwae kua werohia (18) me te tino whakahohenga, tae atu ki nga ira i tātarihia e te qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 me Tanjilny5G), me nga whakaahua ma te nuinga o nga whakaahua. kōwae (9). Ko te kaiwhakatairanga 18 (Fig. 8) i tohuhia ko te TanjilG_26536 te ira e whakawaehere ana i te PR-10-rite LlR18B pūmua, me te kōwae 9 concentrator i tohuhia ko te ira TanjilG_28955 te whakawaehere i te pūmua PsbQ photosystem II. I kitea he ira aukati anthracnose kaitono Lanr1, TanjilG_05042, i roto i te kōwae 22 (Fig. 9) me te hono ki nga kupu "GO: 0044260 Cellular macromolecular metabolic process" me "GO: 0006355 Transcriptional regulation, DNA templating" e mau ana i te TanjilG_01212 hub. ka whakawaeheretia e te ira te tauwehe whakawhiti ahotea wera A-4a (HSFA4a).
Te wetewete whatunga taumaha o te whakapuaki-a-ira-a-ira o nga waahanga me nga kupu tukanga koiora kua tino whakaahuahia "GO: 0006952 Nga whakautu Tiaki". I whakangwarihia te hononga ki te whakaatu i nga ira e wha i tātarihia e te qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 me TanjilG_27015).
Te wetewete i te whatunga taumahatanga o te whakaputanga-a-ira ira o tetahi kōwae me te kupu tukanga koiora nui rawa atu “GO: 0006355: Whakaritenga whakawhiti, te tauira DNA” me te kawe i te ira atete kaitono anthracnose Lanr1 TanjilG_05042. I whakangwarihia te hononga ki te wehe i te ira TanjilG_05042 me te ira o TanjilG_01212 te puku.
Ko te whakamaarama aatete anthracnose i kohia i Ahitereiria i whakaatu ko te nuinga o nga maara i tukuna i mua i te wa ka pangia; Ko Kalya, Coromup me Mandelup kua whakaahuahia he ahua atete, ko Wonga, Tanjil me 83A: 476 kua kiia he tino atete26,27,31. he rite tonu te torere parenga, ko Lanr1 te ingoa, a ko Coromup me Mandelup he rereke rereke, ko AnMan10, 26, 39 te ingoa, i te wa i tukuna e Kalya tetahi momo rereke. , Lanr2. Ko te tirotiro mo te parenga anthracnose i Tiamana i tohuhia he raina aukati Bo7212 me tetahi tohu tohu i tua atu i te Lanr1, kua tohua ko LanrBo36.
I whakaatuhia e ta maatau rangahau he iti rawa te waa (mo te 6%) o te allele Lanr1 i roto i te germplasm whakamatauria. Ko tenei tirohanga e rite ana ki nga hua o te tirotiro i te germplasm o te Rawhiti o Europe ma te whakamahi i nga tohu Anseq3 me Anseq4, i whakaatu ko te Lanr1 allele kei roto i nga raina Belarusian e rua anake. Ko te tohu tenei ko te Lanr1 allele kaore ano kia whakamahia whanuitia e nga kaupapa whakatipu a-rohe, kaore i rite ki Ahitereiria, ko reira tetahi o nga tohu matua mo te whakatipuranga awhina-tohu. Ko tenei pea na te iti ake o te aukati e whakaratohia ana e te Lanr1 allele i roto i nga ahuatanga o te mara a te Pakeha i whakaritea ki te ripoata a Ahitereiria. I tua atu, ko nga rangahau mo te anthracnose i roto i nga waahi ua nui i Ahitereiria kua whakaatu ko nga urupare aukati i takawaengahia e te Lanr1 allele kaore pea e whai hua ki nga ahuatanga o te rangi e pai ana ki te tipu me te whanaketanga tere o te pathogen19,42. Ko te mea pono, i roto i te rangahau o tenei wa, i kitea ano etahi tohu o te anthracnose i roto i nga momo momo e mau ana i te Lanr1 allele, e kii ana ka ngaro te parenga i raro i nga tikanga tino pai mo te whanaketanga o C. lupini. I tua atu, ko nga whakamaoritanga pai teka mo te aroaro o nga tohu Anseq3 me Anseq4, e tata ana ki te 1 cM mai i te waahi o Lanr1, ka taea te 28,30,43.
I whakaatuhia e ta maatau rangahau ko te 83A: 476, e mau ana i te Lanr1 allele, i whakautu ki te C. lupini inoculation me te reprogramming transcriptome nui i te wa tuatahi i tātarihia (6 hpi), i te wa i Mandelup, e mau ana i te AnMan allele, i kitea nga urupare transcriptomic i muri mai. (mai i te 24 ki te 48 hp). Ko enei rereketanga o te waahi i roto i nga urupare tiaki e pa ana ki nga rereketanga o nga tohu mate, e whakaatu ana i te hiranga o te mohiotanga o te pathogen mo te whakautu angitu ki te aukati. Hei whakakino i te kiko o te tipu, me haere nga pua anthrax ki nga wahanga whanaketanga maha i runga i te mata o te kaihautu, tae atu ki te whakatipu, te wehenga pūtau, me te hanganga o te appressorium. Ko te taapiri he hanganga mate e piri ana ki te mata o te kaihautu me te whakauru ki roto i nga kopa o te ope. Na, ko nga puaa o C. gloeosporioides i roto i te tangohanga pea i whakaatu i te wehenga tuatahi o te karihi i muri i nga meneti 75-90 o te heki, te hanga o te ngongo iroriki i muri i te 90-120 meneti, me te whakakore i muri i nga haora 4 45. Ko te Mango C. gloeosporioides i whakaatu neke atu i te 40% te germination conidial i muri i te 3 haora o te incubation me te 20% te hanganga o nga apppressors i muri i te 4 haora. Ko te ira CAP20 e pa ana ki te kino o C. gloeosporioides i whakaatu i te mahi whakawhiti i roto i te conidia epiphyte-forming i muri i te 3.5 h incubation i roto i te wax mata awhekātō me te nui o te kukū o te pūmua CAP20 i muri i te 4 h 46 min. Waihoki, ko te mahi a te melanin biosynthesis ira i roto i te C. trifolii i whakaawehia i roto i te 2-haora heki i muri i te hanganga o te appressorium i muri i te 1 haora. Ko nga rangahau mo nga kopa rau kua kitea ko nga rōpere kua werohia ki te C. acutatum ka pehia tuatahi ki te 8 hpi, ko nga tōmato kua werohia ki te C. coccodes ka pehia tuatahi ki te 4 hpi48,49. he rite tonu ki te tauine wa o Colletotrichum spp. tukanga hopuhopu. Ko nga urupare whakamaarama tere ki te 83A:476 e whakaatu ana i te whai waahi o te atete tipu me nga ira ira-a-te-whakaoho (ETI) i roto i tenei rarangi, i te mea ko nga whakautu whakaroa a Mandelup e tautoko ana i te moroiti-hononga molecular pattern-triggered immunity (MTI) hypothesis 50. Nga whakautu wawe ki te 83A me Mandelup: 476 Ko te inaki wahanga i waenganui i nga ira kua whakaritea ki runga, ki raro ranei i roto i te whakautu whakaroa e tautoko ana i tenei ariā, i te mea he maha nga wa e kiia ana ko te ETI he urupare MTI tere me te whakarei ake ka mutu i roto i te mate o te pūtau kua whakamaheretia i te waahi o te mate, e kiia ana ko te ru anaphylactic 51,52.
Ko te nuinga o nga ira e kii ana ki te kupu tino nui ko Gene Ontology GO:0006952 "Whakautu Whakautu" ko nga homologues 11 o te karere nohopuku i te ahotea 22 pūmua (he rite ki te SAM22) me nga mea nui e whitu o te latex protein-likes (MLPs). -rite pūmua 31, 34, 43 me 423 i whakaatu i te riterite raupapa. Ko nga ira rite-SAM22 i whakaatu i te whakahoahoatanga nui ka roa ake, e whakaatu ana i te piki haere o te aukati anthracnose (83A:476 me Boregine). Heoi ano, i whakahekehia nga ira rite MLP anake i roto i nga raina e mau ana i te allele parenga kaitono (83A: 476/Lanr1 i te 6 hpi me te Mandelup/AnMan i te 24 hpi). Me tohu ko nga homologues-rite SAM22 katoa i tautuhia i ahu mai i te kahui ira e tata ana ki te 105 kb, ko nga ira rite MLP i ahu mai i nga rohe motuhake o te genome. I kitea ano te whakahoahoatanga o nga momo ira penei i te SAM22 i roto i ta maatau rangahau o mua mo te aukati NLL ki te werohanga Diaporthetoxica, e kii ana kei te uru ratou ki nga waahanga whakapae o te whakautu parepare. Ka tautokohia ano tenei whakatau e nga purongo mo te whakautu pai o nga ira-rite-SAM22 ki te whara, ki te maimoatanga ranei me te waikawa salicylic, nga kaiwhakangungu harore, te hauwai peroxide ranei.
Ko nga ira-a-MLP kua whakaatuhia ki te urupare ki nga momo taumahatanga abiotic me te koiora, tae atu ki nga mate harore huakita, huaketo me te pathogenic i roto i nga momo tipu maha55. Ko nga tohutohu mo te urupare ki etahi tauwhitinga i waenga i nga tipu me nga tukumate mai i te tino piki haere (arā, i te wa e pangia ana te miro ki te Verticillium dahliae) ki te tino heke (arā, i muri i te mate o te aporo me te Alternaria spp.)56,57. Kua kitea te hekenga nui o te ira MLP-rite 423 i te wa e parea ana te awhekātō ki te mate F. niger me te wa e pangia ana te aporo Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola and Alternaria alternata are apple pathotypes58,59. I tua atu, he iti ake te whakahuatanga o te ira aporo-aporo ki te ira MLP-rite 423, a he kaha ake te whakaraerae ki te mate harore59. Whai muri i te Fusarium oxysporum f, i pehia ano te ira MLP-rite 423 i roto i te germplasma piana noa. cn. Te mate pīni 60.
Ko etahi atu mema o te whanau PR-10 i tautuhia i roto i ta maatau rangahau RNA-seq ko nga ira LlR18A me te LlR18B hei whakautu ki te whakatikatika, me te ira (1 ira) kua whakahekehia ranei (3 ira) mo te lipid whakawhiti protein DIR1. . I tua atu, ka whakanuia e WGCNA te ira LlR18B hei tari i roto i tenei waahanga, he tino whakaraerae ki te werohanga me te kawe i etahi ira whakautu whakamarumaru. Ko nga ira LlR18A me te LlR18B i uru ki roto i nga rau lupine kowhai hei whakautu ki nga huakita pathogenic, me nga kakau NLL i muri i te werohanga D. toxica, i te mea ko te homologue raihi o enei ira, RSOsPR10, i tere terehia e te mate harore pea i uru ki roto i te jasmonic acid signaling pathway53, te arai tohu tohu DIR16, waikawa jasmonic. nga pūmua kawe lipid kore motuhake e hiahiatia ana mo te tiimata o te aukati i riro mai i te punaha (SAR). Na te whakawhanaketanga o nga tauhohenga whakamarumaru, ka haria te pūmua DIR1 mai i te arotahi o te mate i roto i te phloem ki te kukume SAR i roto i nga whekau tawhiti. Ko te mea whakamiharo, ko te ira TanjilG_02313 DIR1 i tino whakaawehia i te wa tuatahi i nga rarangi 84A:476 me te Taupori 22660, engari he pai te whakawhanaketanga o te aukati anthracnose i te rarangi 84A:476 anake. Ka tohu pea tenei i etahi mahi iti o te ira DIR1 i roto i te NLL, i te mea ko nga toenga e toru o nga homologues i whakautu ki te werohanga i roto noa i te raina 83A:476 i te 6 hpi, a ko tenei whakautu i ahu whakararo.
I roto i ta maatau rangahau, ko nga waahanga e pa ana ki te tukanga koiora e kiia nei ko "GO: 0055114 Redox process" ko te pūmua cytochrome P450, te peroxidase, te waikawa linoleic 9S-/13S-lipoxygenase, me te 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase. I tua atu, ka tautuhia e to matou WGCNA te homologue HSFA4a hei tari e mau ana i nga waahanga penei i te kaitono ira aukati Lanr1 TanjilG_05042. Ko te HSFA4a tetahi waahanga o te ture e whakawhirinaki ana ki te redox o te tuhi karihi i roto i nga tipu.
Ko nga pūmua Cytochrome P450 he oxidoreductases e whakakorikori ana i te NADPH me/ranei i nga tauhohenga hydroxylation e whakawhirinaki ana ki te O2 i roto i te tuatahi me te tuarua o te whakawhitinga, tae atu ki te whakawhitinga o te xenobiotics, me nga homoni, nga waikawa ngako, nga sterols, nga waahanga pakitara o te pakitara, biopolymers, me te biosynthesis o nga pūhui tiaki 69. I roto i to maatau I roto i te rangahau P450d, ko te whakaheke i te mahi a te tipu. -10.6 log2 (whakarereketanga) ki te 5.7 na te maha o nga homologues kua whakarereketia (37) me nga rereketanga o nga tauira whakautu i waenga i nga ira motuhake, e whakaatu ana i te whakahounga whakarunga. . Ko te whakamahi i nga raraunga RNA-seq anake hei whakamarama i te mahi koiora putative o nga ira NLL i roto i taua whanau nui o te pūmua ka tino whakaaro. Engari, he mea tika kia mohio ko etahi ira cytochrome P450 e hono ana ki te kaha ake o te aukati ki nga harore pathogenic, huakita ranei, tae atu ki te koha ki nga tauhohenga mate mate69,70,71.
Ko te Class III peroxidases he maha nga enzyme tipu e uru ana ki roto i te tini o nga tikanga metabolic i te wa o te tipu me te whanaketanga o te tipu, tae atu ki te urupare ki nga taumahatanga o te taiao penei i te tote, te tauraki, te kaha o te marama, me te whakaeke pathogen72. Ko nga peroxidases kei roto i te taunekeneke o etahi momo tipu me Anthracis, tae atu ki a Stylosanthes humilis me C. gloeosporioides, Lens culinaris me C. truncatum, Phaseolus vulgaris me C. lindemuthianum, Cucumis sativus me C. lagenarium73,74,75,76. He tere rawa te whakautu, i etahi wa i te 4 HPI, i mua i te kuhu o te harore ki te kiko o te tipu73. I whakautu ano te ira peroxidase ki te D. toxica NLL inoculation. I tua atu i a raatau mahi angamaheni ki te whakahaere i te pakaru o te oxidative, te whakakore ranei i te ahotea oxidative, ka taea e te peroxidases te whakararu i te tipu tukumate na roto i te hanga arai tinana i runga i te whakapakari i te pakitara o te pūtau i te wa o te whakakoi, te waahanga iti, te hono-whakawhitinga ranei o nga puhui motuhake. Ko tenei mahi ka taea te kii i roto i te silico ki te ira TanjilG_03329 e whakawaehere ana i te putative lignin-forming anion peroxidase i tino whakatikatikahia i roto i ta maatau ako i te 83A: 476 raina aukati i te 6 HPI, engari kaore i roto i etahi atu riipene me nga waahi kaore i whakautu.
Ko te 9S-/13S-lipoxygenase o te waikawa linoleic te taahiraa tuatahi i roto i te ara oxidative o te koiora lipid78. He maha nga mahi a nga hua o tenei ara ki te whakamarumaru i nga tipu, tae atu ki te whakapakari i te pakitara o te pūtau na roto i te hanganga o nga putunga callose me te pectin, me te whakarite i te ahotea oxidative na roto i te hanga momo hāora tauhohe79,80,81,82,83. I roto i te rangahau o naianei, i whakarereketia te whakahuatanga o te waikawa linoleic 9S-/13S-lipoxygenase i roto i nga taumahatanga katoa, engari i roto i te taupori whakaraerae 22660, i kaha ake te whakatikatika i nga waa rereke, i nga riipene e mau ana i te Lanr1 me te AnMan allele, ka whakanui i te rereketanga o enei paparanga oxylipinx i waenga i nga tauhohenga tiaki o te oxylipinx.
Ko te homologue 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) i tino whakatikahia (9 ira) i whakahekehia ranei (2 ira) i te wa e werohia ana ki te lupine. E rua nga rereke, ko enei whakautu katoa i puta i te 6 hp. i 83A:476. Ko te tauhohenga enzymatic i takawaengahia e nga pūmua ACO ko te mahi whakaiti tere i roto i te hanga ethylene, na reira ka tino whakaritea84. Ko te Ethylene he taiaki tipu he maha nga mahi ki te whakahaere i te whanaketanga o te tipu me te urupare ki nga ahuatanga ahotea abiotic me te koiora. Ko te whakaurunga o te tuhi ACO me te whakahohe i te ara tohu ethylene e whai waahi ana ki te whakanui ake i te parenga o te raihi ki te hemibiotrophic fungus oryzae oryzae ma te whakahaere i te hanga o nga momo hāora tauhohe me nga phytoalexins. He rite tonu te tukanga mate rau i kitea i waenga i a M. oryzae me C. lupini88,89, i runga i te papamuri o te whakatikatika nui o nga homologues ACO i roto i te rarangi 83A:476 i korerotia i roto i tenei rangahau, ka huri i te kaha ki te tuku parenga ki te NLL anthracnose Ethylene he tohu matua i roto i nga huarahi rapoi.
I roto i te rangahau o naianei, i kitea te aukati nui o nga ira maha e pa ana ki te photosynthesis i te 6 hpi i te 83A:476 me te 48 hpi i Mandeloop me te taupori 22660. Ko te whānuitanga me te ahunga whakamua o enei huringa ka rite ki te taumata. I kitea te aukati anthracnose i tenei whakamatautau. Ina tata nei, kua purongohia te kaha me te moata o te aukati i nga tuhinga e pa ana ki te photosynthesis i roto i nga tauira maha o nga taunekeneke tipu-patogen, tae atu ki nga huakita pathogenic me te harore. Ko te tere (mai i te 2 HPI i roto i etahi taunekeneke) me te whakakore i nga ira o te ao e pa ana ki te photosynthesis hei whakautu ki te mate ka taea te whakaoho i te mate o te tipu i runga i te tohatoha o nga momo hāora urupare me o raatau taunekeneke ki te ara o te waikawa salicylic hei takawaenga i nga tauhohenga mate 90,94.
Hei whakamutunga, ko nga tikanga whakautu arai i whakaarohia mo te whakapapa tino kaha (83A:476) ko te whakamohiotanga tere o te tukumate e te ira R (tenei pea ko TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) me te waikawa salicylic me te tohu ethylene, ka whai muri i te whakaturanga SAR tawhiti. Ko te mahi e tautokohia ana e te DIR-1 pūmua. Me tohu ko te wa biotrophic mo te mate C. lupini he tino poto (tata ki te 2 ra), ka whai i te tipu necrotic95. Ko te whakawhitinga i waenga i enei waahanga ka pa atu ki te necrosis me te whakaputanga o nga pūmua ethylene-inducible e mahi ana hei whakaoho mo nga tauhohenga hypersensitivity i roto i nga tipu manaaki. Na reira, ko te waahi mo te hopu angitu o C. lupini i te waahi biotrophic he tino whaiti. Ko te whakahoahoatanga o nga ira e hono ana ki te redox me te photosynthesis i kitea i te 83A: 476 i te 6 hpi e rite ana ki te ahunga whakamua o te hyphae harore me te whakaatu i te whanaketanga o te urupare tiaki angitu i te wahanga biotrophic. Ko nga whakautu whakawhiti a Mandelup me te taupori 22660 ka roa pea ki te hopu i te harore i mua i te huri ki te tipu necrotic, engari, ka kaha ake pea a Mandelup i te taupori 22660 na te mea ko te ture tere o te PR-10 pūmua e whakatairanga ana i te aukati whakapae.
Ko te ETI, i peia e te ira R canonical, ko te ahua he tikanga noa mo te aukati i te pini ki te anthracnose. No reira, i roto i te tauira legume Medicago truncatula, ko te aukati ki te anthracnose ka whakawhiwhia e te ira RCT1, he mema o te TIR-NBS-LRR97 tipu R ira karaehe. Ka whakawhiwhia ano hoki e tenei ira te parenga anthracnose whanui i roto i te alfalfa ina whakawhitia ki nga tipu whakaraerae. I roto i te pini noa (P. vulgaris), neke atu i te rua tekau ma rua nga ira aukati anthracnose kua kitea ki tenei ra. Ko etahi o enei ira ka kitea ki nga rohe karekau he ira R canonical, engari he maha atu kei nga tapa o nga chromosomes e mau ana i te huinga ira NBS-LRR, tae atu ki te TIR-NBS-LRRs99. I whakapumautia ano e te rangahau SSR-nui-a-ira te hononga o te ira NBS-LRR me te aukati anthracnose i roto i te pini noa. I kitea ano te ira R canonical i roto i te rohe ira tangata e mau ana i te waahi aukati anthracnose nui i roto i te lupine ma 101.
Ko ta maatau mahi e whakaatu ana ko te tauhohenga atete tonu, kua whakahohehia i te timatanga o te mate o te tipu (kaore i muri ake i te 12 hpi), he pai te tiaki i te lupine whaiti-rau mai i te anthracnose na te harore pathogenic Collelotrichum lupini. Ma te whakamahi i te raupapa whakaputanga teitei, i whakaatuhia e matou nga whakaaturanga korero rereke o nga ira aukati anthracnose i roto i nga tipu NLL i takawaenga e nga ira aukati Lanr1 me AnMan. Ko te wawao angitu ko te ata hoahoa i nga ira mo nga pūmua e uru ana ki te redox, photosynthesis, me te pathogenesis i roto i nga haora o te whakapanga tuatahi o te tipu ki te tukumate. Ko nga tauhohenga whakamarumaru rite, engari kua roa te wa, he iti ake te whai hua ki te tiaki i nga tipu mai i nga mate. Ko te parenga anthrax i takawaenga e te ira Lanr1 he rite ki te urupare tere angamaheni o te ira R (te aukati-whakaoho i te mate), ko te ira AnMan te nuinga o te tuku urupare whakapae (te aukati i puta mai i te tauira ngota moroiti-hononga), e whakarato ana i te taumata o te oranga tonutanga.
Ko nga rarangi 215 NLL i whakamahia ki te tirotiro mo nga tohu anthracnose e 74 nga maara, 60 nga raina i whiwhi ma te whakawhiti me te whakatipu, e 5 nga mutants, me te 76 nga germplasms mohoao, taketake ranei. I ahu mai nga raina i nga whenua 17, ko te nuinga mai i Poroni (58), Spain (47), Tiamana (27), Ahitereiria (26), Russia (19), Belarus (7), Itari (5) me etahi atu rarangi. mai i nga whenua 10. Kei roto hoki i te huinga nga rarangi tohu tohu: 83A: 476, Tanjil, Wonga e mau ana i te Lanr1 allele, me Mandelup e mau ana i te AnMan allele. I whiwhihia nga raina mai i te Paarangi Rarangi Rauemi Ira Lupine a te Pakeha e tiakina ana e Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Poland (Ripanga Taapiri S1).
I tipu nga tipu i raro i nga tikanga whakahaere (photoperiod 16 haora, te pāmahana 25°C i te awatea me te 18°C ​​​​i te po). E rua nga tauira koiora i tātarihia. I wehea te DNA mai i nga rau e toru wiki te pakeke ma te whakamahi i te DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) e ai ki te kawa. Ko te kounga me te kukū o te DNA taratahi i aromatawaihia e nga tikanga spectrophotometric (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Ko te tohu AnManM1 e tohu ana i te ira aukati anthracnose AnMan (i takea mai i cv. Mandelup) me nga tohu Anseq3 me Anseq4 kei te taha o te ira Lanr1 (i takea mai i cv. Tanjil) i tātarihia 11,26,28. Ko nga Homozygotes mo te allele atete i tohua hei "1", he ngawari - he "0", me te heterozygotes - he 0.5.
I runga i nga hua o te tirotiro mo nga tohu AnManM1, AnSeq3 me AnSeq4 me te waatea o nga kakano mo nga whakamatautau whai muri whakamutunga, 50 nga rarangi NLL i tohua mo te tohu tohu mate anthracnose. I mahia te tātaritanga i roto i te kati kōtuhi e whakahaeretia ana e te rorohiko me te 14 haora te wa whakaahua me te awhe pāmahana 22°C i te awatea me te 19°C i te po. Ka rakurakuhia nga kakano (ka tapahia te koti kakano i tera taha o te embryo me te mata koi) i mua i te rui kia kore ai e moe te kakano na te mea he uaua rawa te koti kakano me te whakarite kia rite te whakatipuranga. I whakatipuhia nga tipu ki roto i nga kohua (11 × 11 × 21 cm) me te oneone parakore (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland). I mahia te inoculation me te Colletotrichum lupini Col-08 riaka, i tupu i te tau 1999 mai i nga kakau o nga tipu lupine whaiti-rau i tupu ki te mara i Verzhenitsa, Greater Poland (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E ). Tikina he rohe. I whakatipuhia nga momo wehe i roto i te reo SNA i te 20° C. i raro i te marama pango mo te 21 ra hei whakapoapoa. E wha wiki i muri i te rui, ka tae nga tipu ki te waahi rau 4-6, ka mahia te werohanga ma te rehu me te aukati o te conidia i te kukū o te 0.5 x 106 conidia mo ia ml. I muri i te werohanga, ka noho nga tipu ki roto i te pouri mo te 24 haora i te haumākū tata ki te 98% me te mahana o te 25 ° C kia pai ai te tipu o te conidia me te tukanga mate. Ka tipuhia nga tipu i raro i te 14 haora i te wa poto i te 22°C te ra/19°C te po me te 70% haumuku. I mahia te tatauranga mate i te 22 ra i muri i te werohanga me te awhe mai i te 0 (immune) ki te 9 (tino whakaraerae) i runga i te ahua o te korenga ranei o nga whiu necrotic i runga i nga kakau me nga rau. I tua atu, i muri i te tohu, ka inehia te taumaha o nga tipu. Ko nga hononga i waenga i nga tohu tohu tohu me nga tohu tohu mate i tatauhia hei tohu tohu-rua-raupapa (kaore he tohu heterozygous i roto i te huinga o nga rarangi mo te tātaritanga o te tohu tohu mate anthracnose).