Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን። የሚጠቀሙበት የአሳሽ ስሪት የተወሰነ የCSS ድጋፍ አለው። ለተሻለ ተሞክሮ፣ የዘመነ አሳሽ እንዲጠቀሙ እንመክራለን (ወይም በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር ውስጥ የተኳኋኝነት ሁነታን እንዲያሰናክሉ)። ይህ በእንዲህ እንዳለ፣ ቀጣይነት ያለው ድጋፍ ለማረጋገጥ፣ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናቀርባለን።
አንጉስቲፎሊየስ ሉፒን (NLL፣ Lupinus angustifolius L.) ለምግብ ምርት እና ለአፈር መሻሻል የሚያገለግል ጥራጥሬ ተክል ነው። የNLL ዓለም አቀፍ መስፋፋት እንደ ሰብል አስከፊ የሆነውን የአንትራኖዝ በሽታን የሚያስከትሉትን ሉፒን አንትራኖዝ ጨምሮ ብዙ በሽታ አምጪ ፈንገሶችን ስቧል። ሁለት አሌሎች፣ ላንር1 እና አንማን፣ የመቋቋም አቅምን የሚጨምሩ፣ በNLL እርባታ ውስጥ ጥቅም ላይ ውለዋል፣ ነገር ግን መሰረታዊ ሞለኪውላዊ ዘዴዎች አይታወቁም። በዚህ ጥናት፣ የላንር1 እና አንማን ማርከሮች የአውሮፓን የNLL ናሙናዎችን ለማጣራት ጥቅም ላይ ውለዋል። ክትባቱን በተቆጣጠረ አካባቢ መሞከር የሁለቱንም የመቋቋም አቅም ያላቸው ለጋሾች ውጤታማነት አረጋግጧል። የልዩነት ጂን አገላለጽ መገለጫ በተወካዮች መቋቋም እና በቀላሉ ሊጎዱ በሚችሉ መስመሮች ላይ ተካሂዷል። የአንትራኖዝ መቋቋም ከጂን ኦንቶሎጂ ቃላት ከመጠን በላይ ከመግለጽ ጋር የተያያዘ ነው “GO:0006952 የመከላከያ ምላሽ”፣ “GO:0055114 Redox Process” እና “GO:0015979 ፎቶሲንተሲስ”። በተጨማሪም፣ የላንር1(83A:476) መስመር ከክትባት በኋላ በፍጥነት ጉልህ የሆነ የትራንስክሪፕቶሜ ዳግም ፕሮግራሚንግ አሳይቷል፣ ሌሎቹ መስመሮች ደግሞ በዚህ ምላሽ ላይ በ42 ሰዓታት ውስጥ መዘግየት አሳይተዋል። የመከላከያ ምላሾች ከTIR-NBS፣ CC-NBS-LRR እና NBS-LRR ጂኖች፣ በበሽታ አምጪ ተህዋሲያን ውስጥ ከተሳተፉ 10 ፕሮቲኖች፣ የሊፒድ ዝውውር ፕሮቲኖች፣ ኢንዶግሉካን-1,3-β-ግሉኮሲዳሴ፣ ግሊሲን-የበለፀገ የሴል ግድግዳ ፕሮቲኖች እና ከኦክሲጅን ምላሽ ሰጪ መንገድ ጂኖች ጋር የተያያዙ ናቸው። ለ83A:476 የመጀመሪያ ምላሾች፣ ከፎቶሲንተሲስ ጋር የተያያዙ ጂኖችን በጥንቃቄ መጨቆንን ጨምሮ፣ በፈንገስ ባዮሎጂ የእፅዋት እድገት ደረጃ ላይ ከተሳካ ጥበቃ ጋር ተገጣጠሙ፣ ይህም አንድ ተፅዕኖ ፈጣሪ የበሽታ መከላከያን እንደሚያነቃቃ ይጠቁማል። የማንዴሎፕ ምላሽ እንደ አጠቃላይ አግድም መጎተት ሁሉ ዝግ ይላል።
ጠባብ ቅጠል ያለው ሉፒን (NLL፣ Lupinus angustifolius L.) በምዕራባዊ ሜዲትራኒያን ክልል ውስጥ የሚገኝ ከፍተኛ የፕሮቲን እህል ነው። በአሁኑ ጊዜ ለእንስሳት እና ለሰዎች እንደ የምግብ ሰብል ይበቅላል። በተጨማሪም በሰብል ሽክርክሪት ስርዓቶች ውስጥ አረንጓዴ ፍግ ተደርጎ ይቆጠራል ምክንያቱም በሲምባዮቲክ ናይትሮጅን ማስተካከያ ባክቴሪያ እና በአጠቃላይ የአፈር አወቃቀር መሻሻል ምክንያት። NLL ባለፈው ክፍለ ዘመን ፈጣን የማዳቀል ሂደት አሳልፏል እና አሁንም በከፍተኛ የመራቢያ ግፊት ውስጥ ነው3,4,5,6,7,8,9,10,11,12። በስፋት በሚመረተው የNLL እርሻ፣ የበሽታ አምጪ ፈንገሶች መፈራረቅ አዳዲስ የግብርና መስኮችን ፈጥሮ አዳዲስ ሰብሎችን የሚያጠፉ በሽታዎችን አስከትሏል። ለሉፒን ገበሬዎችና አርቢዎች በጣም የሚያስደንቀው የአንትራኖዝ መልክ ሲሆን ይህም በኮሌቶትሪችም ሉፒኒ (ቦንዳር) ኒሬንበርግ፣ ፌይለር እና ሃጌዶርን13 በተባሉት በሽታ አምጪ ፈንገሶች ምክንያት ነው። ለሉፒን ገበሬዎችና አርቢዎች በጣም የሚያስደንቀው የአንትራኖዝ መልክ ሲሆን ይህም በኮሌቶትሪችም ሉፒኒ (ቦንዳር) ኒሬንበርግ፣ ፌይለር እና ሃጌዶርን13 በተባሉት በሽታ አምጪ ፈንገሶች ምክንያት ነው። Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было примечательным ኮሌቶትሪክ ሉፒኒ (ቦንደር) ኒረንበርግ፣ ፌይለር እና ሃገዶርን13. ለሉፒን ገበሬዎችና አርቢዎች በጣም የሚታወቀው በኮሌቶትሪችም ሉፒኒ (ቦንዳር) ኒሬንበርግ፣ ፌይለር እና ሃጌዶርን13 በተሰኘው በሽታ አምጪ ፈንገስ ምክንያት የተፈጠረው የአንትራኖዝ ብቅ ማለት ነው።对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真说，最引人注目的是炭疽病的出现。 Hagedorn13 引起的.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真語就病原真語說：最引人注目的是炭疽病的出现。 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина грибком Colletotrichum ሉፒኒ (ቦንደር) ኒረንበርግ፣ ፌይለር እና ሃገዶርን13. ለሉፒን ገበሬዎችና አርቢዎች በጣም የሚያስደንቀው ኮሌቶትሪችም ሉፒኒ (ቦንዳር) ኒሬንበርግ፣ ፌይለር እና ሃጌዶርን13 በሚባለው በሽታ አምጪ ፈንገስ ምክንያት የሚመጣው የአንትራኖዝ ብቅ ማለት ነው።የበሽታው የመጀመሪያ ሪፖርቶች የመጡት ከብራዚል እና ከዩናይትድ ስቴትስ ሲሆን የተለመዱ ምልክቶች በ1912 እና 1929 በቅደም ተከተል ታይተዋል። ሆኖም ግን፣ ከ30 ዓመታት ገደማ በኋላ፣ በሽታ አምጪው ኮሌቶትሪችም ግሎኢኦስፖሪዮይድስ (ፔንዝ.) ፔንዝ ተብሎ ተሰይሟል። & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.፣ телеоморф ግሎሜሬላ ሲንጉላታ (ስቶንማን) ስፓልድ። & Sacc., teleomorph of Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.፣有目的形态的 Glomerella cingulata (ስቶማን) ስፓልድ። & Sacc.፣有目的形态的 Glomerella cingulata (ስቶማን) ስፓልድ። & Sacc.፣ Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld in Targeted Morphology. እና ኤች. ሽረንክ፣. እና ኤች. ሽረንክ፣.እና ኤች. ሽረንክ። & H.施伦克፣ & H.施伦克፣እና ኤች. ሽሌንክ፣.በ20ኛው ክፍለ ዘመን አጋማሽ ላይ የተከናወነው የመጀመሪያ ደረጃ የበሽታ ፌኖታይፕ በNLL እና በቢጫ ሉፒን (L. ሉቲየስ ኤል.) ተደራሽነት ላይ የተወሰነ የመቋቋም አቅም አሳይቷል፣ ነገር ግን ሁሉም የተፈተኑ ነጭ ሉፒን (L. albus L.) ተደራሽነት በጣም የተጋለጡ ነበሩ15,16። ጥናቶች እንደሚያሳዩት የአንትራኖዝ እድገት ከዝናብ መጨመር (የአየር እርጥበት) እና የሙቀት መጠን (በ12-28°ሴ ክልል ውስጥ) ጋር የተቆራኘ ሲሆን ይህም በከፍተኛ የሙቀት መጠን የመቋቋም ጥሰት ያስከትላል17,18። እንደ እውነቱ ከሆነ፣ ኮኒዲያ እንዲበቅል እና በሽታው እንዲጀምር የሚያስፈልገው ጊዜ በከፍተኛ እርጥበት ሁኔታዎች ውስጥ ከ12°ሴ (16 ሰዓታት) በ24°ሴ (4 ሰዓታት) በአራት እጥፍ ያነሰ ነበር። ስለዚህ፣ ቀጣይነት ያለው የዓለም ሙቀት መጨመር የአንትራኖዝ ስርጭትን አስከትሏል። ሆኖም፣ በሽታው በፈረንሳይ (1982) እና በዩክሬን (1983) እንደ መጪው ስጋት ምልክት ሆኖ ታይቷል፣ ነገር ግን በወቅቱ በሉፒን ኢንዱስትሪ ችላ ተብሏል። ከጥቂት ዓመታት በኋላ፣ ይህ አውዳሚ በሽታ በዓለም ዙሪያ ተስፋፍቶ እንዲሁም እንደ አውስትራሊያ፣ ፖላንድ እና ጀርመን ያሉ ዋና ዋና የሉፒን አምራች አገሮችን ነክቷል። በ1990ዎቹ አጋማሽ ላይ የአንትራኖዝ ወረርሽኝ ከተከሰተ በኋላ፣ ሰፊ ምርመራ በNLL19 ናሙናዎች ውስጥ በርካታ የመቋቋም ችሎታ ያላቸው ለጋሾችን ለይቶ ለማወቅ አስችሏል። ለአንትራኖዝ የNLL መቋቋም በተለያዩ የጀርምፕላዝማ ምንጮች ውስጥ በሚገኙ ሁለት የተለያዩ የበላይ አሌሎች ቁጥጥር ይደረግበታል፡ ላንር1 በታንጂል ዝርያ እና ዎንጋ እና አንማን በዘር። ማንዳሌይ 25፣ 26። እነዚህ አሌሎች በመራቢያ ፕሮግራሞች ውስጥ የመቋቋም ችሎታ ያላቸውን ጀርምፕላዝሞችን መምረጥን የሚደግፉ ሞለኪውላዊ ምልክቶችን ያሟላሉ።25፣26፣27፣28፣29፣30። የላንር1 አሌልን የያዘው የመቋቋም ችሎታ ያለው የመራቢያ መስመር 83A:476 ከተጋለጠው የዱር መስመር P27255 ጋር ተሻግሯል፣ ይህም የላንር1 ቦታን ለክሮሞዞም NLL-1131፣ 32፣ 33 ለመመደብ አስችሏል። የግንኙነት ካርታ ጠቋሚዎች ከጎን ተከላካይ ሎሲ እስከ አንትራኖዝ በጂኖሚክ ማዕቀፍ መደርደር፣ NLL በተመሳሳይ ክሮሞዞም (NLL-11) ላይ ያሉትን ሦስቱንም አሌሎች ቦታ አሳይቷል፣ ነገር ግን በተለያዩ ቦታዎች29,34,35። ሆኖም፣ አነስተኛ የRILዎች ብዛት እና በማርከሮች እና በተዛማጅ አሌሎች መካከል ባለው ትልቅ የጄኔቲክ ርቀት ምክንያት፣ ስለ መሰረታዊ ጂኖቻቸው አስተማማኝ መደምደሚያዎች ሊደረጉ አይችሉም። በሌላ በኩል፣ በሉፒኖች ውስጥ የተገላቢጦሽ ጄኔቲክስን መጠቀም በጣም ዝቅተኛ የሆነ የመልሶ ማቋቋም አቅማቸው ስላለው አስቸጋሪ ነው፣ ይህም የጄኔቲክ ማዛባትን አስቸጋሪ ያደርገዋል37።
እንደ 83A:476 (Lanr1) እና Mandelup (AnMan) ባሉ ሆሞዚጎስ ሁኔታ ውስጥ የተፈለገውን አሌል የያዘ የቤት ውስጥ ጀርምፕላዝማ እድገት፣ በዱር ህዝቦች ውስጥ ተቃራኒ የሆኑ አሌሎች ጥምረት ሲኖር የአንትራኖዝ መቋቋምን ለማጥናት በር ከፍቷል። የሞለኪውላር ሜካኒዝም እድሎች። በተወሰኑ ጂኖታይፖች የተፈጠሩ የመከላከያ ምላሾችን ያወዳድሩ። ይህ ጥናት የNLL ለC. lupini ክትባት የመጀመሪያውን የትራንስክሪፕቶሜ ምላሽ ገምግሟል። በመጀመሪያ፣ 215 መስመሮችን የያዘ የአውሮፓ NLL ጀርምፕላዝማ ፓነል የላንር1 እና የአንማን አሌሎችን የሚያመለክቱ ሞለኪውላዊ ማርከሮችን በመጠቀም ተፈትኗል። ከዚያም አንትራኖዝ ፌኖታይፒንግ በ50 NLL መስመሮች ላይ ተካሂዷል፣ ቀደም ሲል ለሞለኪውላር ማርከሮች በተመረጡት፣ በተቆጣጠሩ ሁኔታዎች ስር። በእነዚህ ሙከራዎች ላይ በመመስረት፣ በአንትራኖዝ መቋቋም እና በላንር1/አንማን አሌሊክ ቅንብር ውስጥ የሚለያዩ አራት መስመሮች ሁለት ተጨማሪ አቀራረቦችን በመጠቀም ለልዩ የመከላከያ ጂን አገላለጽ መገለጫ ተመርጠዋል፡ ከፍተኛ-ግፊት RNA ቅደም ተከተል እና በእውነተኛ ጊዜ PCR መጠን።
የNLL ጀርምፕላዝማ ስብስብ በላንር1 (Anseq3 እና Anseq4) እና አንማን (Anseq4) እና አንማን (AnManM1) ማርከሮች መፈተሽ እንደሚያሳየው አንድ መስመር ብቻ (95726፣ በሳላማንካ-ቢ አቅራቢያ) ለሁሉም ማርከሮች "የመቋቋም" አሌልን የሚያጎላ ሲሆን "የ'ተጋለጡ' አሌሎች መኖር" በ158 (~73.5%) መስመሮች ውስጥ ያሉትን ሁሉንም ማርከሮች ድርሻ አግኝቷል። አስራ ሶስት መስመሮች የላንር1 ምልክት ሁለት "የመቋቋም" አሌሎችን አመርተዋል፣ እና 8 መስመሮች የላንር1 ምልክት "የመቋቋም" አሌሎችን አመርተዋል። የAnMan ምልክት "የመቋቋም" አሌል (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S1)። ሁለት መስመሮች ለአንር3 ምልክት ሄትሮዚጎስ እና ለAnManM1 ምልክት አንድ ሄትሮዚጎስ ነበሩ። 42 መስመሮች (19.5%) የአንሴክ3 እና የአንሴክ4 አሌሎች ተቃራኒ ደረጃዎችን ተሸክመዋል፣ ይህም በእነዚህ ሁለት ሎሲዎች መካከል ከፍተኛ የሆነ የመዋሃድ ድግግሞሽ መኖሩን ያሳያል። በተቆጣጠሩ ሁኔታዎች ስር የአንትራኖዝ ፊኖታይፖች (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S2) የተፈተኑት ጂኖታይፖች የመቋቋም አቅም ላይ ተለዋዋጭነትን አሳይቷል፣ ይህም በአንትራኖዝ ክብደት ላይ ተንጸባርቋል። በአማካይ ውጤቶች ላይ ያለው ልዩነት ከ1.8 (መካከለኛ መቋቋም የሚችል) እስከ 6.9 (ተላላፊ) እና የእፅዋት ክብደት ልዩነቶች ከ0.62 (ተላላፊ) እስከ 4.45 ግራም (ተላላፊ) ይደርሳሉ። በሙከራው ሁለት ድግግሞሽ (ለበሽታ ክብደት ውጤቶች 0.51፣ P = 0.00017 እና 0.61 ለእፅዋት ክብደት፣ P < 0.0001) እንዲሁም በእነዚህ ሁለት መለኪያዎች (− 0.59 እና − 0.77፣ P < 0.0001) መካከል በተስተዋሉ እሴቶች መካከል ጉልህ የሆነ ትስስር ነበር። በሙከራው ሁለት ድግግሞሽ (ለበሽታ ክብደት ውጤቶች 0.51፣ P = 0.00017 እና 0.61 ለእፅዋት ክብደት፣ P < 0.0001) እንዲሁም በእነዚህ ሁለት መለኪያዎች (− 0.59 እና − 0.77፣ P < 0.0001) መካከል ጉልህ የሆነ ትስስር ታይቷል። በቪያቬሌና ዶስቶቬርናያ ኮርሬላሺያ ሜዙዱ ዝናሽያሚ, ናብላቴዳሚሚ ቪድዩ ፖስቶቬርናያ ኮርሬልያሜንታ (0,51) ቦሌዘንኒ፣ P = 0,00017 እና 0,61 ዲሊያ ማሲ ራስቴኒያ፣ ፒ <0,0001)፣ እና ታክዚ ሜዝዱ ኤቲሚ ዱሚያ ፓራምቴራሚ (-0,50 ፣ 0,1) 0,0001). በሙከራው ሁለት ድግግሞሽ (ለበሽታ ክብደት ውጤቶች 0.51፣ P = 0.00017 እና 0.61 ለእፅዋት ክብደት፣ P < 0.0001) እንዲሁም በእነዚህ ሁለት መለኪያዎች (- 0.59 እና -0.77፣ P < 0.0001) 0.0001) መካከል ጉልህ የሆነ ትስስር ተገኝቷል።在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为0.51፣ 0.00017፣植物重量为0.61፣P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77፣ P <0.001)在 两 次重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性p = 0.00017፣ 植物 为 为 0.61፣ p <0.0001） 以及和 - 0.59 和 - 0.77 ፣ P <0.0001)። Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыmy в двух повторностях, 1. 0,00017 እና ማሴ ራስቴኒያ 0,61, P <0,0001), እና ሜዝዱ ኤቲሚ ዳቪያ ፓራሜትሚ (-0,59 እና -0,0001) 0,77, P <0,0001. በተባዙት እሴቶች (የበሽታ ክብደት ነጥብ 0.51፣ P = 0.00017 እና የእፅዋት ክብደት 0.61፣ P < 0.0001) እና በእነዚህ ሁለት መለኪያዎች (-0.59 እና -0 .0001) 0.77፣ P<0.0001 መካከል ጉልህ የሆነ ትስስር ነበር። ).በተጋለጡ ተክሎች ላይ የሚታዩት የተለመዱ ምልክቶች የ"እረኛ ቀስት" መዋቅር የሚመስል ግንድ መወጠር እና መጠምዘዝን ያካትታሉ፣ ከዚያም የብርቱካን/ሮዝ ስፖሮዞይቶች ሞላላ ቁስሎች (ተጨማሪ ምስል 1)። የላንር1 (83A:476 እና ታንጂል) እና አንማን (ማንዴሉፕ) ጂኖችን የያዙ የአውስትራሊያ አክሲዮኖች በመጠኑ የሚቋቋሙ ናቸው፣ 0.0331 እና 0.0036)። እንዲሁም "የሚቋቋሙ" ላንር1 እና/ወይም አንማን አሌሎችን የያዙ አንዳንድ መስመሮች የበሽታውን ምልክቶች ያሳያሉ።
የሚገርመው ነገር፣ ምንም አይነት “ተከላካይ” ምልክት አሌል የሌላቸው ጥቂት የNLL መስመሮች ከፍተኛ የአንትራኖዝ መቋቋም (ከላንር1 ወይም አንማን ጂኖታይፖች ጋር ሊወዳደር የሚችል ወይም ከፍ ያለ) አሳይተዋል፣ ለምሳሌ ቦሬጂን (ለሁለቱም መለኪያዎች የP እሴት < 0.0001)፣ ቦጃር (ለነጥብ የP እሴት < 0.0001 እና ለእፅዋት ክብደት 0.001) እና ፖፑሌሽን B-549/79b (ለነጥብ የP እሴት < 0.0001 እና ለክብደት አስፈላጊ ያልሆነ)። የሚገርመው ነገር፣ ምንም አይነት “ተከላካይ” ምልክት አሌል የሌላቸው ጥቂት የNLL መስመሮች ከፍተኛ የአንትራኖዝ መቋቋም (ከላንር1 ወይም አንማን ጂኖታይፖች ጋር ሊወዳደር የሚችል ወይም ከፍ ያለ) አሳይተዋል፣ ለምሳሌ ቦሬጂን (ለሁለቱም መለኪያዎች የP እሴት < 0.0001)፣ ቦጃር (ለነጥብ የP እሴት < 0.0001 እና ለእፅዋት ክብደት 0.001) እና ፖፑሌሽን B-549/79b (ለነጥብ የP እሴት < 0.0001 እና ለክብደት አስፈላጊ ያልሆነ)። Интересно, что несколько линий ኤንኤልኤል устойчивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 ወይም AnMan), таких как,00ение (1) обоих параметров), ቦጃር (значение P <0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) እና популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). የሚገርመው ነገር፣ ምንም አይነት 'ተከላካይ' ምልክት አሌል የሌላቸው በርካታ የNLL መስመሮች ለአንትራኖዝ ከፍተኛ የመቋቋም ደረጃ አሳይተዋል (ከላንር1 ወይም አንማን ጂኖታይፖች ጋር ሊወዳደር የሚችል ወይም ከዚያ በላይ)፣ ለምሳሌ ቦሬጂን (ለሁለቱም መለኪያዎች የP እሴት < 0.0001)፣ ቦጃር (ለግምገማ የP እሴት < 0.0001 እና ለእፅዋት ክብደት 0.001) እና የህዝብ ብዛት B-549/79b (ለግምገማ የP እሴት < 0.0001 እና ለክብደት ጉልህ አይደለም)።有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL基因型相当或更高），例如 ቦረጂን（两个参数的P 值< 0.0001）、 ቦጃር（P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001፣重量一） ምንም አይነት "አንቲጂኒክ" ማርከር የሌላቸው አንዳንድ የNLL ሲስተሞች ከፍተኛ አግድም መቋቋም (ከላንር1 ወይም ከአንማን ጂኖች ወይም ከዚያ በላይ ጋር እኩል) ማሳየታቸው ትኩረት የሚስብ ነው፣ ለምሳሌ ቦሬጂን (ሁለቱም መለኪያዎች P < 0.0001)፣ ቦጃር (የP እሴት < 0.0001፣ የእፅዋት ክብደት 0.001) እና የዝርያ B-549/79b (የP እሴት < 0.0001፣ ክብደት ጉልህ አይደለም)። Интересно, что некоторые ሊኒኒ ኤንኤልኤል устойчивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P диля 0000) ቦጃር (значение P <0,0001, масса растения 0,001) እና популяция B-549/79b (оценка P-значение) <0,0001, масса незначительна). የሚገርመው ነገር፣ ምንም አይነት 'የመቋቋም' ምልክት ያላቸው አንዳንድ የNLL መስመሮች ከፍተኛ የአንትራኖዝ መቋቋም (ከላንር1 ወይም ከአንማን ጂኖታይፕ ጋር ሊወዳደር የሚችል ወይም ከዚያ በላይ) አሳይተዋል፣ ለምሳሌ ቦሬጂን (ለሁለቱም መለኪያዎች የP እሴት <0.0001)፣ ቦጃር (የP-እሴት < 0.0001፣ የእፅዋት ክብደት 0.001) እና የህዝብ ብዛት B-549/79b (የP-እሴት < 0.0001፣ ክብደት ጉልህ አይደለም)።ይህ ክስተት አዲስ የጄኔቲክ የመቋቋም ምንጭ የመኖሩን እድል ይጠቁማል፣ ይህም በማርከር ጂኖታይፕስ እና በበሽታ ፊኖታይፕስ መካከል ያለውን ትስስር አለመኖር ያብራራል (ከ ~0.42 እስከ ~0.98)። ስለዚህ የኮልሞጎሮቭ-ስሚርኖቭ ምርመራ እንዳመለከተው በአንትራኖዝ መቋቋም ላይ ያለው መረጃ በተለምዶ ለነጥቦች (P-እሴቶች 0.25 እና 0.11) እና ለእፅዋት ብዛት (P-እሴቶች 0.47 እና 0.55) ተከፋፍሏል፣ ይህም ከላንር1 እና አንማን የበለጠ አሌሎች እንደሚሳተፉ ይጠቁማል።
የአንትራክኖዝ የመቋቋም ምርመራ ውጤቶች ላይ በመመስረት፣ ለትራንስክሪፕቶሜ ትንተና 4 መስመሮች ተመርጠዋል፡ 83A:476፣ ቦሬጂን፣ ማንዴሉፕ እና ፖፑሌሽን 22660። እነዚህ መስመሮች በ RNA ቅደም ተከተል በክትባት ሙከራዎች ውስጥ የአንትራክስ መቋቋምን እንደገና ተፈትነዋል፣ ይህም ከቀዳሚው ሙከራ ጋር ተመሳሳይ እስከሆኑ ድረስ። የውጤት እሴቶቹ እንደሚከተለው ነበሩ፡ ቦሬጂን (1.71 ± 1.39)፣ 83A: 476 (2.09 ± 1.38)፣ ማንዴሉፕ (3.82 ± 1.42) እና ፖፑሌሽን 22660 (6.11 ± 1.29)።
የኢሉሚና ኖቫሴክ 6000 ፕሮቶኮል በአንድ ናሙና በአማካይ 40.5 የMread ጥንዶችን (29.7 እስከ 54.4 Mreads) አስመዝግቧል (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S3)። በማጣቀሻ ቅደም ተከተል ውስጥ ያሉት የአሰላለፍ ውጤቶች ከ75.5% እስከ 88.6% ይደርሳሉ። በባዮሎጂካል ቅጂዎች መካከል በሙከራ ልዩነቶች መካከል ያለው የንባብ ቆጠራ መረጃ አማካይ ትስስር ከ0.812 እስከ 0.997 (አማካይ 0.959) ይደርሳል። ከተተነተኑት 35,170 ጂኖች ውስጥ 2917ቱ ምንም አይነት አገላለጽ አላሳዩም፣ ሌሎቹ 4785 ጂኖች ደግሞ በአነስተኛ ደረጃ (የመነሻ አማካይ < 5) ተገልጸዋል። ከተተነተኑት 35,170 ጂኖች ውስጥ 2917ቱ ምንም አይነት አገላለጽ አላሳዩም፣ ሌሎቹ 4785 ጂኖች ደግሞ በአነስተኛ ደረጃ (የመነሻ አማካይ < 5) ተገልጸዋል። እ.ኤ.አ. 35 170 ፕሮአናሊዚሮቫንጊ ገንኖቭ 2917 незначительном уровне (базовое среднее <5)። ከተተነተኑት 35,170 ጂኖች ውስጥ 2917ቱ ምንም አይነት አገላለጽ አላሳዩም፣ የተቀሩት 4785 ጂኖች ደግሞ በአነስተኛ ደረጃ (የመሠረት አማካይ <5) ተገልጸዋል።在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 5)።35,170 Иz 35 170 ፕሮአናሊዚሮቫንይ ገንኖቭ 2917 እና ኤክስፕረስሲሮቫሊስ፣ ኦስትልነስ 4785 (базовое среднее значение <5)። ከተተነተኑት 35,170 ጂኖች ውስጥ 2917ቱ አልተገለጹም እና የቀሩት 4785 ጂኖች ደግሞ ቸልተኛ አገላለጽ ነበራቸው (የመሠረት አማካኝ <5)።ስለዚህ፣ በሙከራው ወቅት የተገለጹት ጂኖች ብዛት (የመሠረት አማካይ ≥ 5) 27,468 (78.1%) ነበር (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S4)።
ከመጀመሪያው ጊዜ ጀምሮ፣ ሁሉም የNLL መስመሮች የትራንስክሪፕቶሙን እንደገና በፕሮግራም በማውጣት ለሲ. ሉፒኒ (ዝርያ Col-08) ክትባት ምላሽ ሰጥተዋል (ሠንጠረዥ 1)፣ ሆኖም ግን፣ በመስመሮቹ መካከል ጉልህ ልዩነቶች ታይተዋል። ስለዚህ፣ የመቋቋም መስመር 83A:476 (የላንር1 ጂን የያዘ) በመጀመሪያው ጊዜ (6 hpi) ላይ ጉልህ የሆነ የትራንስክሪፕቶሙን ዳግም ፕሮግራሚንግ አሳይቷል፣ በዚህ ጊዜ ከሌሎች የጊዜ ነጥቦች ጋር ሲነጻጸር የተነጠሉ ወደ ላይ እና ወደ ታች ጂኖች ቁጥር በ31-69 እጥፍ ጨምሯል። በተጨማሪም፣ ይህ ጫፍ ለአጭር ጊዜ የሚቆይ ነበር፣ ምክንያቱም የጥቂት ጂኖች ብቻ አገላለጽ በሁለተኛው ጊዜ (12 hpi) በከፍተኛ ሁኔታ ተለውጧል። የሚገርመው፣ በግራፍት ምርመራው ውስጥ ከፍተኛ የመቋቋም ደረጃ ያሳየው ቦሬጂን፣ በሙከራው ወቅት እንዲህ ያለ ግዙፍ የትራንስክሪፕሽን ዳግም ፕሮግራሚንግ አላካሄደም። ሆኖም፣ የተለያዩ የተገለጹ ጂኖች ብዛት (DEG) ለቦሬጂን እና በ12 HPI 83A:476 ተመሳሳይ ነበር። ማንዴሉፕም ሆነ የሕዝብ ብዛት 22660 በመጨረሻው ጊዜ የDEG ​​ከፍተኛ ደረጃዎችን አሳይተዋል (48 ሊትር/ሰ)፣ ይህም በመከላከያ ምላሾች ላይ አንጻራዊ መዘግየትን ያመለክታል።
83A:476 ከሌሎች መስመሮች ጋር ሲነጻጸር በ6 HPI ለሲ. ሉፒኒ ምላሽ ለመስጠት ከፍተኛ የሆነ የትራንስክሪፕቶሜ ዳግም ፕሮግራሚንግ ስለተደረገለት፣ በዚህ ጊዜ የታዩት የDEGዎች ~91% የሚሆኑት የዘር-ተኮር ነበሩ (ምስል 1)። ሆኖም፣ በቦሬጂን፣ ማንዴሉፕ እና በሕዝብ 22660 ውስጥ በቅደም ተከተል 68.5%፣ 50.9% እና 52.6% DEG በተወሰኑ ጊዜያት ውስጥ በ83A:476 ውስጥ ከተገኙት ጋር ስለተጋጨ በጥናት መስመሮች መካከል ቀደምት ምላሾች ላይ የተወሰነ መደራረብ ነበር። ሆኖም፣ እነዚህ DEGs በአሁኑ ጊዜ 83A:476ን በመጠቀም ከተገኙት ሁሉም DEGs ውስጥ ትንሽ ክፍልፋይ (0.97–1.70%) ብቻ ይሸፍናሉ። በተጨማሪም፣ በዚህ ጊዜ ከሁሉም መስመሮች የተገኙ 11 DEGs ወጥ ነበሩ (ተጨማሪ ሰንጠረዦች S4-S6)፣ የእፅዋት መከላከያ ምላሾችን የተለመዱ ክፍሎች ጨምሮ፡ የሊፒድ ዝውውር ፕሮቲን (ታንጂልጂ_32225)፣ የኢንዶግሉካን-1,3-β-ግሉኮሳይድ ኢንዛይም (ታንጂልጂ_23384)፣ እንደ SAM22 (ታንጂልጂ_31528 እና ታንጂልጂ_31531)፣ መሰረታዊ የላቴክስ ፕሮቲን (ታንጂልጂ_32352) እና ሁለት ግሊሲን የበለፀጉ መዋቅራዊ ሴል ግድግዳ ፕሮቲኖች (ታንጂልጂ_19701 እና ታንጂልጂ_19702)። እንዲሁም በ83A:476 እና ቦሬጂን በ24 HPI (ጠቅላላ 16-38% DEG) እና በማንዴሉፕ እና በፖፑሌሽን 22660 መካከል በአንፃራዊነት ከፍተኛ የሆነ መደራረብ ነበር።
በኮሌቶትሪችም ሉፒኒ (በዊርዠኒስ፣ ፖላንድ፣ 1999 ከሉፒን መስኮች የተገኘው ዝርያ Col-08) በተከተቡ ጠባብ ቅጠል ባላቸው ሉፒን (NLL) መስመሮች ውስጥ የተለያዩ የተገለጹ ጂኖችን (DEG) የሚያሳይ የቬን ዲያግራም። የተተነተኑት የNLL መስመሮች፡ 83A:476 (ተከላካይ፣ የላንር1 አሌልን የያዘ)፣ ቦሬጂን (ተከላካይ፣ የጄኔቲክ ዳራ የማይታወቅ)፣ ማንዴሉፕ (መካከለኛ መቋቋም የሚችል፣ የAnMan አሌልን የያዘ) እና የህዝብ ብዛት 22660 (በጣም ተጋላጭ) ነበሩ። ምህጻረ ቃሉ hpi ከክትባት በኋላ ለሰዓታት ይቆማል። ግራፉን ለማቃለል ዜሮ እሴቶች ተወግደዋል።
በ6 hpi ላይ ከመጠን በላይ የተገለጹ ጂኖች ስብስብ የካኖኒክ R ጂን ጎራዎች መኖራቸውን ለማረጋገጥ ተተነተነ (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S7)። ይህ ጥናት በ83A:476 ብቻ በNBS-LRR ጎራዎች የክላሲክ በሽታ መቋቋም ጂኖች የትራንስክሪፕቶሜም መነሳሳትን አሳይቷል። ይህ ስብስብ አንድ የTIR-NBS-LRR ጂን (tanjilg_05042)፣ አምስት የCC-NBS-LRR ጂኖች (tanjilg_06165፣ tanjilg_06162፣ tanjilg_22773፣ tanjilg_22640፣ እና tanjilg_16162)፣ እና አራት NBS-LR፣ Tanjilg_16162) እና አራት NBS-LRR (tanjilg_16162) እንዲሁም አራት NBS-Lrr (tanjilg_16162) እና አራት NBS-LRR (TANJILG_16162) ያካትታል። እነዚህ ሁሉ ጂኖች በተጠበቁ ቅደም ተከተሎች የተደረደሩ ቀኖናዊ ጎራዎች አሏቸው። ከNBS-LRR የጎራ ጂኖች በተጨማሪ፣ በርካታ የRLL ኪናሴዎች በ6 hpi ነቅተዋል፣ እነሱም በቦሬጂን (ታንጂልጂ_19877)፣ በማንዴሉፕ (ታንጂልጂ_07141 እና ታንጂልጂ_19877) እና በሕዝብ ብዛት 22660 (ታንጂልጂ_09014 እና ታንጂልጂ_10361) እና በ83A 27:476 ሁለት።
በሲ. ሉፒኒ (ዝርያ ኮል-08) ክትባት ምክንያት ከፍተኛ የሆነ የአገላለጽ ለውጥ ያደረጉ ጂኖች በጂን ኦንቶሎጂ (GO) የማሻሻያ ትንተና (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S8) ተካሂደዋል። በብዛት የተወከለው የባዮሎጂካል ሂደት ቃል "GO:0006952 የመከላከያ ምላሽ" ሲሆን ይህም ከ16ቱ (የጊዜ × መስመር) ጥምረቶች ውስጥ በ6ቱ ውስጥ ከፍተኛ ጠቀሜታ ያለው (የP እሴት < 0.001) ታይቷል (ምስል 2)። በብዛት የተወከለው የባዮሎጂካል ሂደት ቃል "GO:0006952 የመከላከያ ምላሽ" ሲሆን ይህም ከ16ቱ (የጊዜ × መስመር) ጥምረቶች ውስጥ በ6ቱ ውስጥ ከፍተኛ ጠቀሜታ ያለው (የP እሴት < 0.001) ታይቷል (ምስል 2)። Наиболее часто чрезмерно предስታቭለንኒም ቴርሚኖም ቢዮሎጊቺስኮጎ ፕሮፕሽንስ ቢይል «GO: 0006952 ዛሺት, появлялся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (አርሲ. 2). በብዛት የተወከለው የባዮሎጂካል ሂደት ቃል 'GO:0006952 የመከላከያ ምላሽ' ሲሆን ይህም ከ16ቱ (የጊዜ × የዘር ሐረግ) ጥምረቶች ውስጥ በ6ቱ ውስጥ ከፍተኛ ጠቀሜታ ያለው (የP እሴት < 0.001) ታይቷል (ምስል 2)።最常被过度代表的生物过程术语是“ሂድ:0006952个中，具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）。 በጣም ውክልና ያለው የባዮሎጂካል ሂደት ቃል "GO:0006952 የመከላከያ ምላሽ" ሲሆን ከ16ቱ (时间×线) ጥምረቶች ውስጥ በ6ቱ ውስጥ ይታያል፣ ከፍተኛ ጠቀሜታ ያለው (P value < 0.001) (图2)። Наиболее часто чрезмерно представленыm ተርሚኖም ባዮሎጂቺስካጎ ፐሮሽንስ ቢይል "GO: 0006952 የመከላከያ ምላሽ"፣ из 16 ኪ.ሜ. በብዛት የተወከለው የባዮሎጂካል ሂደት ቃል 'GO:0006952 የመከላከያ ምላሽ' ሲሆን ከ16 ጥምረቶች (የጊዜ × መስመር) ውስጥ በ6ቱ ከፍተኛ ጠቀሜታ (የP እሴት < 0.001) ታይቷል (ምስል 2)።ይህ ቃል በ83A ሁለት የጊዜ ነጥቦች ላይ ከመጠን በላይ ተወክሏል፡ 476 እና ቦሬጂን (6 እና 24 hpi) እና በአንድ ወቅት በማንዴሉፕ እና ፖፑሌሽን 22660 (12 እና 6 hpi) በቅደም ተከተል። ይህ የሚጠበቀው ውጤት ሲሆን ይህም የሚቋቋሙትን መስመሮች ፀረ-ፈንገስ ምላሽ ያጎላል። በተጨማሪም፣ 83A:476 ለሲ. ሉፒኒ ምላሽ የሰጠው በ"GO:0055114 redox process" በሚለው ቃል ከሚወከለው ኦክሲዴቲቭ ፍንዳታ ጋር የተያያዙ ጂኖችን በፍጥነት በማነሳሳት ሲሆን ይህም የተወሰነ የመከላከያ ምላሽን ያሳያል፣ ቦሬጂን ደግሞ ከ'GO' ቃል ጋር የተያያዙ የተወሰኑ የመከላከያ ምላሾችን አሳይቷል። :0006950 የጭንቀት ምላሽ። የህዝብ ቁጥር 22660 ሁለተኛ ደረጃ ሜታቦላይቶችን የሚያካትት አግድም የመቋቋም ምላሽን አነቃቅቷል፣ “GO:0016104 የትሪተርፔን ባዮሲንተሲስ ሂደት” እና “GO:0006722 የትሪተርፔን ሜታቦሊዝም ሂደት” (ሁለቱም ቃላት ከተመሳሳይ የጂኖች ስብስብ ጋር የተቆራኙ) የሚሉት ቃላት ከመጠን በላይ ቁጥርን አጉልቶ አሳይቷል፣ የGO ቃል ማበልጸጊያ ትንተና ውጤቶችን ከግምት ውስጥ በማስገባት፣ የማንዴልup ምላሽ መረጋጋት በቦሬጂን እና በሕዝብ ቁጥር 22660 መካከል ነበር። በተጨማሪም፣ ቀደምት ምላሽ 83A:476 (6 hpi) እና የዘገየ ምላሽ ማንዴልup እና ሕዝብ ቁጥር 22660 GO:0015979 'ፎቶሲንተሲስ' የሚለውን ቃል እና ሌሎች ተዛማጅ ባዮሎጂያዊ ሂደቶችን ያካትታሉ።
በ1999 በዊርዠኒስ፣ ፖላንድ ውስጥ ከሉፒን ሜዳዎች የተገኘውን የኮል-08 ዝርያ) በአንትራክስ ሉፒን (NLL) የተከተቡ ጠባብ ቅጠል ያላቸው ሉፒን (NLL) ትራንስክሪፕቶሜም ምላሾች ወቅት በተለያዩ የተገለጹ ጂኖች ማብራሪያ ውስጥ የተመረጡት የባዮፕሮሰስ ጂን ኦንቶሎጂ ቃላት በጣም የተጋነኑ ናቸው። የተተነተኑት የNLL መስመሮች፡ 83A:476 (ተከላካይ፣ ሆሞዚጎስ ላንር1 አሌልን የያዘ)፣ ቦሬጂን (ተከላካይ፣ ያልታወቀ የጄኔቲክ ዳራ)፣ ማንዴሉፕ (መካከለኛ መቋቋም የሚችል፣ ሆሞዚጎስ አንማን አሌልን የያዘ) እና ህዝብ 22660 (ተጋላጭ) ነበሩ።
ይህ ጥናት ለአንትራኖዝ መቋቋም አስተዋጽኦ የሚያደርጉ ጂኖችን ለመለየት ያለመ በመሆኑ፣ GO “GO: 0006952 የመከላከያ ምላሾች” እና “GO: 0055114 Redox ሂደቶች” ለሚሉት ቃላት የተመደቡት ጂኖች ቢያንስ አንድ መስመር ያለው የመነሻ አማካኝ ≥ 30 ስለሆነ በቆራረጥ ተተነተኑ። × የጊዜ ነጥብ በስታቲስቲክስ ጉልህ የሆኑ የሎግ2 እሴቶችን በማጣመር (የእጥፋት ለውጥ)። እነዚህን መስፈርቶች የሚያሟሉ ጂኖች ብዛት GO:0006952 65 እና GO:0055114 524 ነበር።
83A:476 ሁለት የDEG ​​ጫፎችን በ GO:0006952 ቃል የተገለጹ ሲሆን የመጀመሪያው በ6 ጂኖች (64 ጂኖች፣ ወደላይ እና ወደታች ቁጥጥር) እና ሁለተኛው ደግሞ በ24 ጂኖች በአንድ ኢንች (15 ጂኖች፣ ወደላይ ቁጥጥር ብቻ) አሳይቷል። ቦሬጂን በተጨማሪም GO:0006952 በተመሳሳይ ጊዜ ከፍተኛ ደረጃ ላይ እንደደረሰ አሳይቷል፣ ነገር ግን ያነሰ DEG (11 እና 8) እና ቅድመ-ማግበር። ማንዴሎፕ በ12 እና 48 HPI ሁለት የGO:0006952 ጫፎችን አሳይቷል፣ ሁለቱም 12 ጂኖችን (የመጀመሪያው የሚያነቃቁ ጂኖች ያሉት እና ሁለተኛው ደግሞ የሚጨቁኑ ጂኖች ያሉት) የያዙ ሲሆን፣ በ6 HPI (13 ጂኖች) የ22660 ሕዝብ ቁጥር የጨመረው ጫፍ ደንብ የበለጠ የበላይነት ነበረው። በእነዚህ ጫፎች ውስጥ 96.4% GO:0006952 DEG ተመሳሳይ የምላሽ አይነት (ወደላይ ወይም ወደታች) እንዳላቸው ልብ ሊባል ይገባል፣ ይህም በተሳተፉት ጂኖች ብዛት ልዩነት ቢኖርም በመከላከያ ምላሾች ላይ ጉልህ የሆነ መደራረብን ያሳያል። ከ GO:0006952 ቃል ጋር የተያያዘው ትልቁ የቅደም ተከተል ቡድን የረሃብ ጭንቀት-ተዛማጅ መልእክት ፕሮቲን 22 (SAM22-like)ን ይመዘግባል፣ ይህም ከክፍል 10 በሽታ አምጪ ተዛማጅ ፕሮቲን (PR-10) ፕሮቲን ክላድ እና ከኮር ፕሮቲን ላቴክስ ጋር ተመሳሳይ (MLP-like) ፕሮቲን) ፕሮቲን (ምስል 3) ጋር የተያያዘ ነው። ሁለቱ ቡድኖች በአገላለጽ ባህሪ እና በምላሹ አቅጣጫ ይለያያሉ። የSAM22-like ፕሮቲኖችን የሚቀዱ ጂኖች በመጀመሪያዎቹ የጊዜ ነጥቦች (6 ወይም 12 hpi) ላይ ወጥ እና ጉልህ የሆነ መነሳሳት አሳይተዋል እና በአጠቃላይ በሙከራው መጨረሻ (48 hpi) ላይ ምላሽ አልሰጡም፣ MLP-like ፕሮቲኖች ደግሞ በ6 hpi. hpi. 83A:476 እና Mandelup በ48 hp/in ላይ ቅንጅት አሳይተዋል፣ ሌሎች ሁሉም ማለት ይቻላል የውሂብ ነጥቦች ምላሽ አልሰጡም። በተጨማሪም፣ የበለጠ የመቋቋም መስመሮች እነዚህን ጂኖች የበለጠ ተጋላጭ ከሆኑ ጂኖች የበለጠ የጊዜ ነጥቦች ስላሏቸው የSAM22-like ፕሮቲን ጂኖች የመግለጫ መገለጫዎች ልዩነቶች በአንትራኖዝ መቋቋም ውስጥ ያለውን ተለዋዋጭነት ተከትለዋል። ሌላ የLlR18A/B-like PR-10 ጂን ከSAM22-like ፕሮቲን ጂን ጋር በጣም ተመሳሳይ የሆነ የአገላለጽ ንድፍ አሳይቷል።
የባዮሎጂካል ሂደት ቃል ዋና ዋና ክፍሎች “GO:0006952 የመከላከያ ምላሽ” እና የላንር1 እና የአንማን አሌሎች እጩ ጂኖች አገላለጽ ቅጦች ተለይተዋል። የሎግ2 ሚዛን በተከተቡ (ኮሌቶትሪችም ሉፒኒ፣ ዝርያ ኮል-08፣ ከሉፒን መስኮች፣ ዊዜኒካ፣ ፖላንድ፣ 1999) እና በቁጥጥር (ሻም-ኢኖኩሌትድ) ተክሎች መካከል የሎግ2 እሴቶችን (የታጠፈ ለውጥ) ይወክላል። የሚከተሉት ጠባብ ቅጠል ሉፒን መስመሮች ተተነተኑ፡ 83A:476 (ተከላካይ፣ ሆሞዚጎስ ላንር1 አሌልን የያዘ)፣ ቦሬጂን (ተከላካይ፣ የጄኔቲክ ዳራ የማይታወቅ)፣ ማንዴሉፕ (መካከለኛ መቋቋም የሚችል፣ ሆሞዚጎስ አንማን አሌልን የያዘ) እና ፖፑሌሽን 22660 (ተጋልጭ)።
በተጨማሪም፣ የRNA-seq እጩ ጂኖች ላንር1 (ታንጂልጂ_05042) እና አንማን (ታንጂልጂ_12861) አገላለጽ መገለጫዎች ተገምግመዋል (ምስል 3)። የታንጂልጂ_05042 ጂን በ83A:476 ላይ ጉልህ የሆነ ምላሽ (ማግበር) በመጀመሪያው ጊዜ (6 hpi) ላይ ብቻ አሳይቷል፣ ታንጂልጂ_12861 ደግሞ በማንዴሎፕ ውስጥ በሁለት የጊዜ ነጥቦች ብቻ ጉልህ ነበር፡ 6 hpi (የመውረድ ቁጥጥር) እና 24 hpi (6 hpi)። ከ. ጋር)። የሚስተካከል) )።
በ GO:0055114 “redox process” ውስጥ በጣም የተገለጹት ጂኖች ሳይቶክሮም P450 ፕሮቲኖችን እና ፔሮክሳይዳሴን የሚቀዱ ጂኖች ነበሩ (ምስል 4)። በ6 HPI ከ83A:476 የተለዩ ናሙናዎች፣ ከፍተኛ ወይም ዝቅተኛ የሎግ2 (የእጥፋት ለውጥ) እሴቶች (ለ86.6% ጂኖች) በአጠቃላይ በተከተቡ እና በቁጥጥር ተክሎች መካከል ታይተዋል፣ ይህም የዚህ ጂኖታይፕ ለክትባት ወሲብ የሚሰጠውን ከፍተኛ ምላሽ ያጎላል። 83A:476 በጣም ጉልህ የሆነውን GO: 0055114 DEG በ6 hpi (503 ጂኖች) አሳይቷል፣ የተቀሩት መስመሮች ደግሞ በ48 hpi (ቦሬጂን፣ 31 ጂኖች፤ ማንዴሉፕ፣ 85 ጂኖች፤ እና የህዝብ ቁጥር 22660፣ 78 ጂኖች)) አሳይቷል። በአብዛኛዎቹ የ GO:0055114 ቤተሰብ ጂኖች ውስጥ፣ ለክትባት ሁለት አይነት ምላሾች (ማግበር እና መከልከል) ታይተዋል። የሚገርመው ነገር፣ እስከ 97.6% የሚሆኑት DEGs በ48 hp በማንዴሉፕ GO የሚለውን ቃል ለመለየት ተለይተዋል፡ 0055114። እነዚህ ምልከታዎች እንደሚያሳዩት፣ በጣም ትንሽ ቢሆንም (ማለትም፣ የተለወጡ የሬዶክስ ጂኖች ብዛት፣ 85 ከ503 ጋር ሲነጻጸር)፣ የማንዴሎፕ ወደ አንትራኖዝ የዘገየ የትራንስክሪፕቶሜ ምላሾች ንድፍ ከ83A:476 የመጀመሪያ ምላሽ ጋር ተመሳሳይ ነው። በቦሬጂን እና በህዝብ ቁጥር 22660፣ ይህ ውህደት በቅደም ተከተል በ51.6% እና 75.6% ዝቅተኛ ነው።
የባዮሎጂካል ሂደት “GO:0055114 Redox ሂደት” ዋና ዋና ክፍሎች የመግለፅ ቅጦች ተገልጸዋል። የLog2 ልኬት በተከተቡ (Colletoturchum lupini፣ ስቴይን Col-08፣ ከሉፒን መስኮች፣ Wizhenica፣ Poland፣ 1999) እና በቁጥጥር (ሻም-ኢኖኩሌትድ) ተክሎች መካከል በተመሳሳይ ጊዜ የሎግ2 እሴቶችን (የታጠፈ ለውጥ) ይወክላል። የሚከተሉት ጠባብ ቅጠል ሉፒን መስመሮች ተተነተኑ፡ 83A:476 (ተከላካይ፣ ሆሞዚጎስ ላንር1 አሌልን የያዘ)፣ ቦሬጂን (ተከላካይ፣ የጄኔቲክ ዳራ ያልታወቀ)፣ ማንዴሉፕ (መካከለኛ መቋቋም የሚችል፣ ሆሞዚጎስ አንማን አሌልን የያዘ) እና ፖፑሌሽን 22660 (ተጋልጭ)።
83A:476 በሲ. ሉፒኒ (ዝርያ Col-08) ክትባት ላይ የተደረገው የትራንስክሪፕቶሚክ ምላሾች እንዲሁም GO:0015979 “ፎቶሲንተሲስ” እና ሌሎች ተዛማጅ ባዮሎጂያዊ ሂደቶች (ምስል 5) ተብለው የሚጠሩትን ጂኖች የተቀናጀ ጸጥታ ማስፈንን ያካትታል። ይህ GO:0015979 DEG ስብስብ በ83A:476 በ6 hpi በከፍተኛ ሁኔታ የተጨቆኑ 105 ጂኖችን ይዟል። በዚህ ንዑስ ስብስብ ውስጥ፣ በማንዴሉፕ ውስጥ በ48 HPI እና በተመሳሳይ ጊዜ በ22660 ህዝብ ውስጥ 37 ጂኖች ዝቅ ተደርገዋል፣ ይህም ለሁለቱም ጂኖታይፖች የተለመዱ 19 DEGsን ያካትታል። ከ GO ቃል ጋር ምንም አይነት DEGs በማንኛውም ጥምረት (መስመር x ጊዜ) በከፍተኛ ሁኔታ አልተነቃቁም።
የባዮሎጂ ሂደት “GO:0015979 ፎቶሲንተሲስ” የቃላት ዋና ዋና ክፍሎች የመግለፅ ቅጦች ተገልጸዋል። የLog2 ልኬት በተከተቡ (Colletoturchum lupini፣ ስቴይን Col-08፣ ከሉፒን መስኮች፣ Wizhenica፣ Poland፣ 1999) እና በቁጥጥር (ሻም-ኢኖኩሌትድ) ተክሎች መካከል የሎግ2 እሴቶችን (የታጠፈ ለውጥ) ይወክላል። የሚከተሉት ጠባብ ቅጠል ሉፒን መስመሮች ተተነተኑ፡ 83A:476 (ተከላካይ፣ ሆሞዚጎስ ላንር1 አሌልን የያዘ)፣ ቦሬጂን (ተከላካይ፣ የጄኔቲክ ዳራ የማይታወቅ)፣ ማንዴሉፕ (መካከለኛ መቋቋም የሚችል፣ ሆሞዚጎስ አንማን አሌልን የያዘ) እና ፖፑሌሽን 22660 (ተጋልጭ)።
በተለዋዋጭ አገላለጽ ትንተና ውጤቶች እና ምናልባትም በሽታ አምጪ ፈንገሶችን ለመከላከል በሚደረጉ የመከላከያ ምላሾች ላይ በተሳተፈ፣ ይህ የሰባት ጂኖች ስብስብ የመገለጫ መገለጫዎችን በእውነተኛ ጊዜ PCR ለመለካት ተመርጧል (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S9)።
የተቀመጠው የፕሮቲን ጂን ታንጂልጂ_10657 ከቁጥጥር (አስመስሎ) ተክሎች ጋር ሲነጻጸር በሁሉም የተጠኑ መስመሮች እና የጊዜ ነጥቦች ላይ በከፍተኛ ሁኔታ ተነሳስቶ ነበር (ተጨማሪ ሰንጠረዦች S10፣ S11)። በተጨማሪም፣ የታንጂልጂ_10657 የአገላለጽ መገለጫ በሙከራው ሂደት ውስጥ ለሁሉም መስመሮች እየጨመረ የመጣ አዝማሚያ አሳይቷል። የህዝብ ቁጥር 22660 በ114 እጥፍ ማግበር እና በ24 HPI (ምስል 6a) ከፍተኛውን አንጻራዊ የአገላለጽ ደረጃ (4.4 ± 0.4) ለክትባት ያለውን ከፍተኛ ስሜታዊነት አሳይቷል (ምስል 6a)። የPR10 LlR18A ፕሮቲን ጂን ታንጂልጂ_27015 በሁሉም መስመሮች እና የጊዜ ነጥቦች ላይ ማግበርን አሳይቷል፣ በአብዛኛዎቹ የውሂብ ነጥቦች ላይ ስታቲስቲካዊ ጠቀሜታ አለው (ምስል 6ለ)። ከታንጂልጂ_10657 ጋር ተመሳሳይ በሆነ መልኩ፣ በ22660 የተከተቡ ሰዎች ውስጥ ከፍተኛው የታንጂልጂ_27015 አንጻራዊ የአገላለጽ ደረጃ በ24 HPI (19.5 ± 2.4) ታይቷል። የአሲድ ኢንዶቺቲናዝ ጂን ታንጂልጂ_04706 በሁሉም መስመሮች እና በሁሉም ጊዜ ነጥቦች በከፍተኛ ሁኔታ ተሻሽሏል ከቦሬጂን 6 hpi በስተቀር (ምስል 6c)። በመጀመሪያው ጊዜ (6 HPI) በ83A:476 (በ10.5 ጊዜ) በከፍተኛ ሁኔታ ተነሳስቶ በሌሎች መስመሮች (በ6.6-7.5 ጊዜ) በመጠኑ ጨምሯል። በሙከራው ወቅት፣ የታንጂልጂ_04706 አገላለጽ በ83A:476 እና በቦሬጂን በተመሳሳይ ደረጃዎች ቀጥሏል፣ በማንዴሉፕ እና በፖፑሌሽን 22660 ደግሞ በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል፣ በአንጻራዊነት ከፍተኛ እሴቶችን (በቅደም ተከተል 5.9 ± 1.5 እና 6.2 ± 1.5) ደርሷል። የኢንዶግሉካን-1,3-β-ግሉኮሲዳሴ-መሰል ጂን ታንጂልጂ_23384 በመጀመሪያዎቹ ሁለት የጊዜ ነጥቦች (6 እና 12 hpi) በሁሉም መስመሮች ከፍተኛ እንቅስቃሴ አሳይቷል (ምስል 6d)። በማንዴሉፕ (2.7 ± 0.3) እና 83A:476 (1.5 ± 0.1) ውስጥ በሁለተኛው የጊዜ ነጥብ (12 hpi) ላይ የታንጂልጂ_23384 ከፍተኛ አንጻራዊ የመግለፅ ደረጃዎች ታይተዋል። በ24 HPI፣ የታንጂልጂ_23384 አገላለጽ በሁሉም የተጠኑ መስመሮች (ከ0.04 ± 0.009 እስከ 0.44 ± 0.12) በአንጻራዊ ሁኔታ ዝቅተኛ ነበር።
የተመረጡ ጂኖች (ag) አገላለጽ መገለጫዎች በቁጥር PCR ተገልጸዋል። ቁጥሮች 6፣ 12 እና 24 ክትባት ከተደረገ በኋላ ሰዓታትን ይወክላሉ። የLanDExH7 እና LanTUB6 ጂኖች ለመደበኛነት ጥቅም ላይ ውለዋል፣ እና LanTUB6 ደግሞ ለኢንተር-ተከታታይ መለኪያ ጥቅም ላይ ውሏል። የስህተት አሞሌዎች በሦስት ባዮሎጂካል ቅጂዎች ላይ የተመሰረቱትን መደበኛ መዛባት ይወክላሉ፣ እያንዳንዳቸውም የሶስት ቴክኒካዊ ቅጂዎች አማካይ ናቸው። በተከተቡት (ኮሌቶትሪችም ሉፒኒ፣ ዝርያ ኮል-08፣ በ1999 በዊርዜኒካ፣ ፖላንድ ከሚገኘው ሉፒን መስክ የተገኘው) እና በቁጥጥር (ሞክ-ኢንኩሌተር) ተክሎች መካከል ያለው የአገላለጽ ደረጃዎች ልዩነቶች ስታትስቲካዊ ጠቀሜታ ከውሂብ ነጥቦች በላይ ምልክት ተደርጎባቸዋል (*የP እሴት < 0.05፣ **የP እሴት ≤ 0.01፣ ***የP እሴት ≤ 0.001)። በተከተቡት (ኮሌቶትሪችም ሉፒኒ፣ ዝርያ ኮል-08፣ በ1999 በዊርዜኒካ፣ ፖላንድ ከሚገኘው ሉፒን መስክ የተገኘው) እና በቁጥጥር (ሞክ-ኢንኩሌተር) ተክሎች መካከል ያለው የአገላለጽ ደረጃዎች ልዩነቶች ስታትስቲካዊ ጠቀሜታ ከውሂብ ነጥቦች በላይ ምልክት ተደርጎባቸዋል (*የP እሴት < 0.05፣ **የP እሴት ≤ 0.01፣ ***የP እሴት ≤ 0.001)። ስታቲስቲችስካያ ዛናቺሞስት ራዝሊቺ ዩሮቪንያህ ኤክስፕረስሲ ሜጄዱ እናኩሊሮቫንኒሚ (Colletotrichum Lupini, Shatamm Col-08,9) поля люпина в Верженице, Польша) እና контрольным 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001)። በክትባት በተከተቡ (ኮሌቶትሪችም ሉፒኒ፣ ዝርያ ኮል-08፣ በ1999 በዊርዠኒስ፣ ፖላንድ ከሚገኝ ሉፒን መስክ የተገኘው) እና በቁጥጥር (ሻም-የተከተቡ) ተክሎች መካከል ባለው የአገላለጽ ደረጃ ላይ በስታቲስቲክስ ጉልህ ልዩነቶች ከውሂብ ነጥቦች በላይ ተገልጸዋል (*P እሴት < 0.05፣ **P-value ≤ 0.01፣ ***P-value ≤ 0.001)።接种 (Colletotrichum ሉፒኒ፣ ኮል-08株，1999年从波兰 Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数捴子？ 0.05፣ ** ፒ 值≤ 0.01፣ ***P 值≤ 0.001)።接种 （colletotrichum lupini፣ color-08 株፣ 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). ስታቲስቲችስኪ ዝናቺሚ ራዝሊቺያ ዩሮቪንያህ ኤክስፕረስሲ ሜጄዱ ኢንኩሊሮቫንኒሚ (Colletotrichum Lupini, Shem Col-08, psypy) люпина в Верженице, Польша, в 1999 ዓ.ም.) значение P <0,05, ** P-значение ≤ 0,01, *** P-значение ≤ 0,001). በክትባት በተከተቡ (ኮሌቶትሪችም ሉፒኒ፣ ዝርያ ኮል-08፣ በ1999 በቬርዠኒስ፣ ፖላንድ ውስጥ ከሉፒን መስኮች የተገኘው) እና በቁጥጥር (ሻም-የተከተቡ) ተክሎች መካከል ባለው የአገላለጽ ደረጃ ላይ በስታቲስቲክስ ጉልህ ልዩነቶች ከውሂብ ነጥቦች በላይ ተገልጸዋል (*P እሴት < 0.05፣ **P-value ≤ 0.01፣ ***P-value ≤ 0.001)።የተተነተኑት የNLL መስመሮች፡ 83A:476 (ተከላካይ፣ ሆሞዚጎስ ላንር1 አሌልን የያዘ)፣ ማንዴሉፕ (መካከለኛ የመቋቋም ችሎታ ያለው፣ ሆሞዚጎስ አንማን አሌልን የያዘ)፣ ቦሬጂን (ተከላካይ፣ ያልታወቀ የጄኔቲክ ዳራ) እና ህዝብ 22660 (ተጋልጭ) ነበሩ።
በላንር1 ቦታ ላይ የሚገኘው የእጩ ጂን ታንጂልጂ_05042 ከRNA-seq ጥናቶች ከተገኙት መገለጫዎች በእጅጉ የተለየ የአገላለጽ ንድፍ አሳይቷል (ምስል 6e)። የዚህ ጂን ጉልህ የሆነ ማግበር በማንዴሉፕ እና በ22660 ህዝብ (እስከ 39.7 እና 11.7 ጊዜ በቅደም ተከተል) ታይቷል፣ ይህም በአንጻራዊ ሁኔታ ከፍተኛ የአገላለጽ ደረጃዎችን አስከትሏል (እስከ 1.4 ± 0.14 እና 7.2 ± 1.3 በቅደም ተከተል)። 83A:476 በተጨማሪም የታንጂልጂ_05042 ጂን (እስከ 3.8 እጥፍ) መጨመሩን አሳይቷል፣ ሆኖም ግን፣ የተገኙት አንጻራዊ የአገላለጽ ደረጃዎች (0.044 ± 0.002) በማንዴሉፕ እና በ22660 ህዝብ ላይ ከታዩት በ30 እጥፍ ያነሱ ነበሩ። በ qPCR የተተነተነው በሞክ-ክትባት (ቁጥጥር) ልዩነቶች ውስጥ ባሉ ጂኖታይፖች መካከል ባለው የአገላለጽ ደረጃ ላይ ጉልህ ልዩነቶችን አሳይቷል፣ ይህም በሕዝቦች 22660 እና 83A:476 እንዲሁም በሕዝብ 22660 እና 22660 መካከል ባለው የ58 እጥፍ ልዩነት ላይ ደርሷል። በቦሬጂን እና በማንዳልፕ መካከል የሁለት እጥፍ ልዩነት ተገኝቷል።
በAnMan locus ላይ የሚገኘው እጩ ጂን ታንጂልጂ_12861፣ በ83A:476 እና ማንዴሉፕ ክትባት ምላሽ ምክንያት ገቢር ሆኗል፣ በ22660 ህዝብ ውስጥ ገለልተኛ ነበር፣ እና በቦሬጂን ውስጥ ዝቅተኛ ቁጥጥር ተደርጎበታል (ምስል 6f)። የታንጂልጂ_12861 ጂን አንጻራዊ አገላለጽ በተከተቡ 83A: 476 (0.14±0.01) ውስጥ ከፍተኛው ነበር። 17.4 kDa ክፍል I የሙቀት ድንጋጤ ፕሮቲን ጂን ታንጂልጂ_05080 HSP17.4 በሁሉም የተጠኑ ዝርያዎች እና የጊዜ ነጥቦች ዝቅተኛ አንጻራዊ አገላለጽ ደረጃዎችን አሳይቷል (ምስል 6ግ)። ከፍተኛው እሴት በ22660 ህዝብ ውስጥ በ24 HPI ታይቷል (0.14 ± 0.02፣ ይህም ለክትባት ምላሽ በስምንት እጥፍ ጨምሯል)።
የጂን አገላለጽ መገለጫዎችን ማወዳደር (ምስል 7) በታንጂልጂ_10657 እና በአራት ሌሎች ጂኖች መካከል ከፍተኛ ትስስር እንዳለ አሳይቷል፤ እነሱም፡- ታንጂልጂ_27015 (r = 0.89)፣ ታንጂልጂ_05080 (r = 0.85)፣ ታንጂልጂ_05042 (r = 0.80) እና ታንጂልጂ_04706 (r = 0.79)። እንደዚህ ያሉ ውጤቶች በመከላከያ ምላሾች ወቅት የእነዚህ ጂኖች የጋራ ቁጥጥርን ሊያመለክቱ ይችላሉ። የታንጂልጂ_12861 እና ታንጂልጂ_23384 ጂኖች ከሌሎች ጂኖች ጋር ሲነፃፀሩ ዝቅተኛ የፒርሰን ተዛማጅነት ኮፊሸንት እሴቶች ያላቸው የተለያዩ የአገላለጽ መገለጫዎችን አሳይተዋል (ከ0.08 እስከ 0.43 እና -0.19 እስከ 0.28 በቅደም ተከተል)።
በጂን አገላለጽ መገለጫዎች መካከል ያለው ትስስር በቁጥር PCR በመጠቀም ተገኝቷል። የሚከተሉት ጠባብ ቅጠል ሉፒን መስመሮች ተተነተኑ፡ 83A:476 (ተከላካይ፣ ሆሞዚጎስ ላንር1 አሌልን የያዘ)፣ ማንዴሉፕ (መካከለኛ ተከላካይ፣ ሆሞዚጎስ አንማን አሌልን የያዘ)፣ ቦሬጂን (ተከላካይ፣ የጄኔቲክ ዳራ የማይታወቅ) እና ፖፑሌሽን 22660 (ተቀባይነት ያለው)። ሶስት የጊዜ ነጥቦች (ከተከተቡ በኋላ 6፣ 12 እና 24 ሰዓታት)፣ የተከተቡ (ኮሌቶትሪችም ሉፒኒ፣ ዝርያ ኮል-08፣ በ1999 በዊርዠኒስ፣ ፖላንድ ውስጥ ከሉፒን መስኮች የተገኘውን) እና የቁጥጥር (ሻም-የተከተቡ) ተክሎችን ጨምሮ ተሰሉ። ልኬቱ የፒርሰን ኮኔክሽን ኮፊሸንት እሴትን ያሳያል።
በአንድ ኢንች 6 የፈረስ ጉልበት ባለው መረጃ ላይ በመመስረት፣ WGCNA የተከተቡ እና የቁጥጥር ተክሎችን በማነፃፀር በ9981 DEG ላይ ተከናውኗል፤ ይህም ቀደምት የመከላከያ ምላሾች ላይ እንዲያተኩሩ በማድረግ ነው (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S12)። ሃያ ሁለት የጂን ሞጁሎች (ክላስተሮች) በጂኖታይፕ እና በሙከራ ልዩነቶች መካከል ተዛማጅ (አዎንታዊ ወይም አሉታዊ) የአገላለጽ መገለጫዎች አሏቸው። በአማካይ፣ የጂን አገላለጽ ደረጃዎች በቅደም ተከተል 83A:476 > Mandelup > Boregine > የህዝብ ብዛት 22660 (ሆኖም ግን፣ በሁለቱም ልዩነቶች ይህ አዝማሚያ በቁጥጥር ተክሎች ውስጥ የበለጠ ጠንካራ ነበር)። በአማካይ፣ የጂን አገላለጽ ደረጃዎች በቅደም ተከተል 83A:476 > Mandelup > Boregine > የህዝብ ብዛት 22660 (ሆኖም ግን፣ በሁለቱም ልዩነቶች ይህ አዝማሚያ በቁጥጥር ተክሎች ውስጥ የበለጠ ጠንካራ ነበር)። В сrednem urovny эkspressi gonov сниzhalys в PORYADKE 83A:476 > ማንደልፕ > ቦረጂን > የሕዝብ ብዛት 22660 была сильнее у контрольных растений). በአማካይ፣ የጂን አገላለጽ ደረጃዎች በ83A:476 > Mandelup > Boregine > የህዝብ ብዛት 22660 ቅደም ተከተል ቀንሰዋል (ሆኖም ግን፣ በሁለቱም ልዩነቶች፣ ይህ አዝማሚያ በቁጥጥር ተክሎች ውስጥ የበለጠ ጠንካራ ነበር)።平均而言，基因表达水平按83A:476 > ማንደልፕ > ቦረጂን > የህዝብ ብዛት 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）。平均 而言፣ 基因 水平 按 按 83a: 476> ማንደልፕ> ቦረጂን> የህዝብ ብዛት 22660 ምሳሌ . . . . . . . . В сrednem urovny эkspressi gonov snyzhalis в Ryadu 83A: 476 > ማንደልፕ > ቦረጂን > የሕዝብ ብዛት 22660 сильнее у контрольных растений). በአማካይ፣ የጂን አገላለጽ መጠን በተከታታይ 83A:476 > Mandelup > Boregine > የህዝብ ብዛት 22660 ቀንሷል (ይሁን እንጂ፣ በሁለቱም ልዩነቶች፣ ይህ አዝማሚያ በቁጥጥር ተክሎች ውስጥ የበለጠ ጠንካራ ነበር)።ክትባት በተለይም በሞጁሎች 18፣ 19፣ 14፣ 6 እና 1 (በሚወርድበት የውጤት ቅደም ተከተል)፣ አሉታዊ ቁጥጥር (ለምሳሌ ሞጁሎች 9 እና 20) ወይም ገለልተኛ ተፅእኖዎች (ለምሳሌ ሞጁሎች 11፣ 22፣ 8 እና 13) የጂን አገላለጽ መጨመርን አስከትሏል። የGO ቃል ማበልጸጊያ ትንተና (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S13) ከፍተኛ ማግበር ላለው የተከተበው ሞጁል (18) “GO: 0006952 የመከላከያ ምላሾች” አሳይቷል፣ ይህም በ qPCR (ታንጂልጂ_04706፣ ታንጂልጂ_23384፣ ታንጂልጂ_10657 እና ታንጂልጂ_27015) የተተነተኑ ጂኖችን ጨምሮ፣ እንዲሁም ብዙ በጣም የተጨቆኑ የፎቶሲንተሲስ ሞጁሎችን (9) ጨምሮ። የሞጁል 18 ማጎሪያ (ምስል 8) የPR-10-መሰል LlR18B ፕሮቲንን የሚቀርጸው የታንጂልጂ_26536 ጂን ሆኖ ተለይቷል፣ እና የሞጁል 9 ማጎሪያ የፎቶሲስተም II PsbQ ፕሮቲንን የሚቀርጸው የታንጂልጂ_28955 ጂን ሆኖ ተለይቷል። አንድ እጩ የአንትራኖዝ መቋቋም ጂን Lanr1፣ TanjilG_05042፣ በሞጁል 22 (ምስል 9) ውስጥ ተገኝቷል እና ከ"GO:0044260 ሴሉላር ማክሮሞለኪውላር ሜታቦሊክ ሂደቶች" እና "GO:0006355 የትራንስክሽናል ደንብ፣ የዲኤንኤ ቴምፕላቲንግ" ከሚሉት ቃላት ጋር የተቆራኘ ነው። ጂን የሙቀት ውጥረት ግልባጭ ፋክተር A-4a (HSFA4a)ን ይገልፃል።
ከመጠን በላይ የተወከሉ ባዮሎጂያዊ ሂደቶችን በመጠቀም የሞጁሎች የጂን የጋራ አገላለጽ የክብደት ኔትወርክ ትንተና “GO: 0006952 የመከላከያ ምላሾች”። በ qPCR (TanjilG_04706፣ TanjilG_23384፣ TanjilG_10657 እና TanjilG_27015) የተተነተኑትን አራት ጂኖች ለማጉላት ሊጌሽን ቀለል ተደርጎለታል።
ከመጠን በላይ የተወከለ ባዮሎጂያዊ ሂደት ቃል ያለው የሞጁል የጂን አብሮ አገላለጽ የክብደት ኔትወርክ ትንተና “GO: 0006355: የትራንስክሪፕሽን ደንብ፣ የዲኤንኤ ቴምፕሊቲንግ” እና እጩ አንትራኖዝ መቋቋም ጂን የያዘ Lanr1 TanjilG_05042። የታንጂልG_05042 ጂን እና ማዕከላዊውን የታንጂልG_01212 ጂን ለመለየት ጅማሬው ቀለል ተደርጓል።
በአውስትራሊያ የተሰበሰበው የአንትራኖዝ የመቋቋም ምርመራ እንደሚያሳየው አብዛኛዎቹ ቀደምት የተለቀቁ ዝርያዎች በቀላሉ የሚጎዱ ነበሩ፤ ካልያ፣ ኮሮሙፕ እና ማንዴሉፕ በመጠኑ የሚቋቋሙ እንደሆኑ ተገልጸዋል፣ ዎንጋ፣ ታንጂል እና 83A:476 ደግሞ በጣም የሚቋቋሙ 26,27,31 እንደሆኑ ተገልጸዋል። ተመሳሳይ የመቋቋም አሌል ነበራቸው፣ ላንር1 ተብሎ የተሰየመ፣ እና ኮሮሙፕ እና ማንዴሉፕ ደግሞ AnMan10፣ 26, 39 ተብሎ የተሰየመ፣ ካልያ ደግሞ በተለየ አሌል ላይ አስተላልፏል።፣ ላንር2። በጀርመን የአንትራኖዝ መቋቋምን ለማጣራት የተደረገው ምርመራ ከላንር1 ውጪ ሌላ እጩ አሌል ያለው Bo7212ን የመቋቋም መስመር እንዲለይ አድርጓል፣ ይህም ላንርቦ36 ተብሎ የተሰየመ ነው።
ጥናታችን በተፈተነው ጀርምፕላዝማ ውስጥ በጣም ዝቅተኛ ድግግሞሽ (6%) የላንር1 አሌል እንዳለ አሳይቷል። ይህ ምልከታ የምስራቅ አውሮፓ ጀርምፕላዝምን በመጠቀም Anseq3 እና Anseq4 ማርከሮችን በመጠቀም የማጣራት ውጤት ጋር የሚጣጣም ሲሆን ይህም የላንር1 አሌል በሁለት የቤላሩስ መስመሮች ብቻ እንደሚገኝ ያሳያል። ይህ የሚያሳየው የላንር1 አሌል እስካሁን በአካባቢው የመራቢያ ፕሮግራሞች በስፋት ጥቅም ላይ ያልዋለ መሆኑን ነው፣ እዚያም በአውስትራሊያ ውስጥ እንደታየው፣ ለማርክ-የታገዘ እርባታ ቁልፍ አሌሎች አንዱ ነው። ይህ ሊሆን የሚችለው በአውሮፓ የመስክ ሁኔታዎች ውስጥ የላንር1 አሌል ከአውስትራሊያ ሪፖርት ጋር ሲነጻጸር የሚሰጠው ዝቅተኛ የመቋቋም ደረጃ ምክንያት ሊሆን ይችላል። በተጨማሪም፣ በአውስትራሊያ ውስጥ ከፍተኛ ዝናብ ባለባቸው አካባቢዎች የአንትራኖዝ ጥናቶች እንደሚያሳዩት በላንር1 አሌል የሚመራው የመቋቋም ምላሽ የበሽታ አምጪ ተህዋሲያን እድገትን እና ፈጣን እድገትን በሚደግፉ የአየር ሁኔታ ሁኔታዎች ውጤታማ ላይሆን ይችላል። እንደ እውነቱ ከሆነ፣ በአሁኑ ጥናት፣ አንዳንድ የአንትራኖዝ ምልክቶች የላንር1 አሌልን በሚይዙ ጂኖታይፖች ውስጥም ታይተዋል፣ ይህም ለሲ. ሉፒኒ እድገት ተስማሚ በሆኑ ሁኔታዎች ውስጥ ሊጠፋ እንደሚችል ይጠቁማል። በተጨማሪም፣ ከላንር1 አካባቢ በግምት 1 ሴሜ የሆኑ የአንሴክ3 እና የአንሴክ4 ማርከሮች መኖርን በተመለከተ የተሳሳቱ አዎንታዊ ትርጓሜዎች 28,30,43 ሊሆኑ ይችላሉ።
ጥናታችን እንዳመለከተው 83A:476፣ የላንር1 አሌልን የያዘው፣ ለመጀመሪያ ጊዜ በተተነተነው የጊዜ ነጥብ (6 hpi) ላይ ለሲ. ሉፒኒ ክትባት በትልቅ ደረጃ ትራንስክሪፕመንት ሪፕሮግራም ምላሽ ሰጥቷል፣ በማንዴሉፕ ደግሞ የAnMan አሌልን የያዘው፣ ትራንስክሪፕቶሚክ ምላሾች ከብዙ ጊዜ በኋላ ታይተዋል። (ከ24 እስከ 48 hp)። እነዚህ የመከላከያ ምላሾች ጊዜያዊ ልዩነቶች ከበሽታ ምልክቶች ልዩነቶች ጋር የተቆራኙ ናቸው፣ ይህም ለተቃውሞ ስኬታማ ምላሽ ቀደምት በሽታ አምጪ ተህዋሲያን ለይቶ ማወቅ አስፈላጊነትን ያጎላል። የእፅዋትን ሕብረ ሕዋስ ለመበከል፣ የአንትራክስ ስፖሮች በአስተናጋጁ ወለል ላይ በርካታ የእድገት ደረጃዎችን ማለፍ አለባቸው፣ ይህም ማብቀልን፣ የሕዋስ ክፍፍልን እና የአፕሬሶሪየም መፈጠርን ጨምሮ። አፕንዳጅ ከአስተናጋጁ ወለል ጋር የሚጣበቅ እና ወደ አስተናጋጁ ሕብረ ሕዋሳት ዘልቆ መግባትን የሚያመቻች ተላላፊ መዋቅር ነው። ስለዚህ፣ በአተር ማውጣት ውስጥ የC. ግሎኦስፖሪዮይድ ስፖሮች የኒውክሊየሱን የመጀመሪያ ክፍፍል ከ75-90 ደቂቃዎች በኋላ፣ ከ90-120 ደቂቃዎች በኋላ የጀርም ቱቦ መፈጠር እና ከ4 ሰዓታት በኋላ መጨቆን አሳይተዋል። የማንጎ ሲ. ግሎኦስፖሪዮይድስ ከ3 ሰዓታት በኋላ ከተተከለ በኋላ ከ40% በላይ የኮኒያል ቡቃያ እና ከ4 ሰዓታት በኋላ ወደ 20% የሚጠጉ አፕሬሶሮች መፈጠር አሳይቷል። ከቫይረስ ጋር የተያያዘው የሲ. ግሎኦስፖሪዮይድስ ጂን ከ4 ሰዓታት ከ46 ደቂቃዎች በኋላ ከፍተኛ የCAP20 ፕሮቲን ክምችት ባለው የአቮካዶ ወለል ሰም ውስጥ ለ3.5 ሰዓታት ከተተከለ በኋላ በኤፒፊዚት በሚፈጥረው ኮኒዲያ ውስጥ የትራንስክሪፕሽን እንቅስቃሴ አሳይቷል። በተመሳሳይ፣ በሲ. ትሪፎሊ ውስጥ የሜላኒን ባዮሲንተሲስ ጂኖች እንቅስቃሴ የተፈጠረው በ2 ሰዓት የመተከል ጊዜ ሲሆን ከዚያም ከ1 ሰዓት በኋላ አፕሬሶሪየም ሲፈጠር ነው። የቅጠል ሕብረ ሕዋሳት ጥናቶች እንደሚያሳዩት በሲ. አኩታተም የተተከሉ እንጆሪዎች በ8 hpi የመጀመሪያ መጨቆን እንዳላቸው፣ በሲ. ኮኮዶች የተተከሉ ቲማቲም ደግሞ በ4 hpi48,49 የመጀመሪያ መጨቆን እንዳላቸው ያሳያሉ። በአብዛኛው ከኮሌቶትሪቹም spp. ተላላፊ ሂደት የጊዜ ልኬት ጋር የሚጣጣም ነው። ለ83A:476 ፈጣን የመከላከያ ምላሾች በዚህ መስመር ውስጥ የእፅዋት መቋቋም እና ተፅዕኖ ፈጣሪ የበሽታ መከላከያ (ETI) ጂኖች ተሳትፎን ያመለክታሉ፣ የማንዴሉፕ የዘገዩ ምላሾች ደግሞ ማይክሮ-ተያያዥ ሞለኪውላዊ ንድፍ-ተነሳሽነት የበሽታ መከላከያ (MTI) መላምት 50ን ይደግፋሉ። ለ83A: 476 እና ለማንዴሉፕ የመጀመሪያ ምላሾች። በዘገየ ምላሽ ውስጥ ወደላይ ወይም ወደታች ቁጥጥር በሚደረግባቸው ጂኖች መካከል ያለው ከፊል መደራረብ ይህንን ጽንሰ-ሀሳብ ይደግፋል፣ ምክንያቱም ETI ብዙውን ጊዜ የተፋጠነ እና የተሻሻለ የኤምቲአይ ምላሽ እንደሆነ ተደርጎ ስለሚቆጠር፣ ይህም አናፊላቲክ ድንጋጤ 51,52 በመባል የሚታወቀው ኢንፌክሽን በተከሰተበት ቦታ ላይ የፕሮግራም ሴል ሞት ያስከትላል።
ከጂን ኦንቶሎጂ GO:0006952 “የመከላከያ ምላሽ” ከሚለው ቃል ጋር በተያያዘ የተገለጹት አብዛኛዎቹ ጂኖች ውጥረትን ያስከተለውን የጾም መልእክት 22 ፕሮቲን (ከ SAM22 ጋር ተመሳሳይ) እና ሰባት ዋና ዋና የላቴክስ ፕሮቲን መሰል (MLPs) - መሰል ፕሮቲኖች 31፣ 34፣ 43 እና 423 - ተከታታይ ተመሳሳይነት አሳይተዋል። የ SAM22- መሰል ጂኖች ረዘም ላለ ጊዜ የሚቆይ ጉልህ የሆነ ማነቃቂያ አሳይተዋል፣ ይህም የአንትራኖዝ መቋቋም ደረጃዎችን ጨምሯል (83A:476 እና Boregine)። ሆኖም፣ የMLP- መሰል ጂኖች የተቀነሰው የእጩን የመቋቋም አሌል (83A:476/Lanr1 በ6 hpi እና ማንዴሉፕ/AnMan በ24 hpi) በሚይዙ መስመሮች ብቻ ነው። ሁሉም የተለዩ SAM22- መሰል ሆሞሎጎች የሚመነጩት በግምት 105 kb ከሚሸፍን የጂን ክላስተር ሲሆን፣ MLP- መሰል ጂኖች የሚመነጩት ደግሞ ከተለያዩ የጂኖም ክልሎች ነው። እንደዚህ ያሉ የSAM22 መሰል ጂኖች የተቀናጀ እንቅስቃሴ በቀደመው የዲያፖርቴቶክሲካ ክትባትን የመቋቋም NLLን በተመለከተ ባደረግነው ጥናት ላይም ተገኝቷል፣ ይህም በመከላከያ ምላሽ አግድም ክፍሎች ውስጥ እንደሚሳተፉ ይጠቁማል። ይህ መደምደሚያ የSAM22 መሰል ጂኖች ለጉዳት ወይም ለሳሊሲሊክ አሲድ፣ ለፈንገስ ኢንዳክተሮች ወይም ለሃይድሮጂን ፐርኦክሳይድ ሕክምና አዎንታዊ ምላሽ እንዳላቸው በሚገልጹ ሪፖርቶችም ተደግፏል።
የኤምኤልፒ መሰል ጂኖች በብዙ የእፅዋት ዝርያዎች ውስጥ የባክቴሪያ፣ የቫይረስ እና የበሽታ አምጪ የፈንገስ ኢንፌክሽኖችን ጨምሮ ለተለያዩ አቢዮቲክ እና ባዮቲክ ጭንቀቶች ምላሽ እንደሚሰጡ ታይቷል55። በእፅዋት እና በበሽታ አምጪ ተህዋሲያን መካከል ለተወሰኑ ግንኙነቶች የምላሽ አቅጣጫዎች ከጠንካራ ጭማሪ (ማለትም በጥጥ Verticillium dahliae በሚወረርበት ጊዜ) እስከ በከፍተኛ ሁኔታ መቀነስ (ማለትም፣ የፖም ዛፍ በአልተርናሪያ spp. ከተበከለ በኋላ)56,57። የኤምኤልፒ መሰል 423 ጂን ጉልህ የሆነ ቅነሳ ለአቮካዶ መከላከያዎች ታይቷል ለኤፍ. ኒጀር ኢንፌክሽን እና የፖም ዛፍ ኢንፌክሽን ወቅት Botryosphaeria berengeria f. cn. piricola እና Alternaria alternata የፖም ፓቶታይፖች ናቸው58,59። በተጨማሪም፣ የኤምኤልፒ መሰል 423 ጂን ከመጠን በላይ የሚገልጸው የፖም ካሊ ከመጠን በላይ የመቋቋም ተያያዥ ጂኖች ዝቅተኛ አገላለጽ ነበረው እና ለፈንገስ ኢንፌክሽን የበለጠ ተጋላጭ ነበሩ59። ከፉሳሪየም ኦክሲፖረም f በኋላ፣ የኤምኤልፒ መሰል 423 ጂን በተቋቋሚ የጋራ የባቄላ ጀርምፕላዝም ውስጥም ተጨናንቋል። cn. የባቄላ ኢንፌክሽን 60።
በRNA-seq ጥናታችን ውስጥ የተለዩት ሌሎች የPR-10 ቤተሰብ አባላት ለከፍተኛ ቁጥጥር ምላሽ የሚሰጡ የLlR18A እና LlR18B ጂኖች እንዲሁም ለሊፒድ ዝውውር ፕሮቲን DIR1 የተቀመጠው የተሻሻለ (1 ጂን) ወይም የተቀነሰ (3 ጂኖች) ጂን ነበሩ። በተጨማሪም፣ WGCNA በዚህ ሞጁል ውስጥ የLlR18B ጂንን እንደ ማዕከል አድርጎ ያጎላል፣ ይህም ለክትባት በጣም የተጋለጠ እና በርካታ የመከላከያ ምላሽ ጂኖችን የያዘ ነው። የLlR18A እና LlR18B ጂኖች በቢጫ ሉፒን ቅጠሎች ውስጥ ለተዛማጅ ባክቴሪያዎች ምላሽ እንዲሁም በD. toxica ክትባት በኋላ በNLL ግንዶች ውስጥ ተፈጥረዋል፣ የእነዚህ ጂኖች የሩዝ ተመሳሳይነት፣ RSOsPR10፣ በፍጥነት በጃስሞኒክ አሲድ ምልክት ማድረጊያ መንገድ53,61, 62 ውስጥ በተሳተፈ የፈንገስ ኢንፌክሽን ምክንያት በፍጥነት ተፈጥሯል። DIR1 ጂን ለስርዓታዊ ግኝት መቋቋም (SAR) ጅምር የሚያስፈልጉትን ልዩ ያልሆኑ የሊፕቲድ ትራንስፖርት ፕሮቲኖችን ይመዘግባል። የመከላከያ ግብረመልሶችን በማዳበር፣ የDIR1 ፕሮቲን ከኢንፌክሽን ትኩረት በፍሎኤም በኩል ወደ ሩቅ የአካል ክፍሎች ውስጥ SAR እንዲፈጠር ይደረጋል። የሚገርመው ነገር፣ የታንጂልጂ_02313 DIR1 ጂን በመጀመሪያ ጊዜ በ84A:476 እና በፖፑሌሽን 22660 መስመሮች ላይ በከፍተኛ ሁኔታ ተፈጥሯል፣ ነገር ግን የአንትራክኖዝ መቋቋም በተሳካ ሁኔታ በመስመር 84A:476 ብቻ አድጓል። ይህ በNLL ውስጥ የDIR1 ጂን ከፊል ተግባርን ሊያመለክት ይችላል፣ ምክንያቱም የቀሩት ሶስት ተመሳሳይ ግብረመልሶች ለክትባት ምላሽ የሰጡት በ6 hpi በ83A:476 መስመር ላይ ብቻ ስለሆነ እና ይህ ምላሽ ወደ ታች አቅጣጫ ተላልፏል።
በጥናታችን ውስጥ፣ “GO:0055114 Redox process” የሚባሉት ከባዮሎጂካል ሂደት ጋር የሚዛመዱ በጣም የተለመዱት ክፍሎች ሳይቶክሮም P450 ፕሮቲን፣ ፔሮክሳይዴዝ፣ ሊኖሌይክ አሲድ 9S-/13S-lipoxygenase እና 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase ነበሩ። በተጨማሪም፣ የእኛ WGCNA HSFA4a ሆሞሎግ እንደ Lanr1 resistance gene candidate TanjilG_05042 ያሉ ማዕከል የሚይዙ ሞጁሎችን አድርጎ ይገልጸዋል። HSFA4a በእፅዋት ውስጥ የኑክሌር ግልባጭ ሬዶክስ-ጥገኛ ደንብ አካል ነው።
የሳይቶክሮም P450 ፕሮቲኖች በዋና እና ሁለተኛ ደረጃ ሜታቦሊዝም ውስጥ NADPH እና/ወይም O2-ጥገኛ የሃይድሮክሲሌሽን ግብረመልሶችን የሚያነቃቁ ኦክሲዶሬዳክቴሶች ናቸው፣ ይህም የዜኖባዮቲክስ ሜታቦሊዝምን፣ እንዲሁም ሆርሞኖችን፣ የሰባ አሲዶችን፣ ስቴሮሎችን፣ የሴል ግድግዳ ክፍሎችን፣ ባዮፖሊመሮችን እና የመከላከያ ውህዶችን ባዮሲንተሲስን ጨምሮ 69. በእኛ ጥናት ውስጥ፣ በእፅዋት ሳይቶክሮም P450 ተግባር ውስጥ ያለው ተለዋዋጭነት ከ -10.6 ሎግ2 (የእጥፍ ለውጥ) ወደ 5.7 ቀንሷል ምክንያቱም ብዙ ቁጥር ያላቸው የተለወጡ ሆሞሎጎች (37) እና በተወሰኑ ጂኖች መካከል ባለው የምላሽ ቅጦች ልዩነቶች ምክንያት ወደ ላይ የሚደረግ ክለሳ የሚያንፀባርቅ ነው። በእንደዚህ ባለ ትልቅ የፕሮቲን ሱፐርፋሚሊ ውስጥ የNLL ጂኖችን ተጨባጭ ባዮሎጂያዊ ተግባር ለማብራራት የRNA-seq ውሂብን ብቻ መጠቀም በጣም ግምታዊ ይሆናል። ሆኖም፣ አንዳንድ የሳይቶክሮም P450 ጂኖች ለበሽታ አምጪ ፈንገሶች ወይም ባክቴሪያዎች የመቋቋም አቅም መጨመር ጋር የተቆራኙ መሆናቸውን ልብ ሊባል ይገባል፣ ይህም ለአለርጂ ምላሾች አስተዋጽኦ ያደርጋል69,70,71።
ክፍል III ፐርኦክሳይድሳዎች በእፅዋት እድገትና ልማት ወቅት በተለያዩ የሜታቦሊክ ሂደቶች ውስጥ እንዲሁም እንደ ጨዋማነት፣ ድርቅ፣ ከፍተኛ የብርሃን ጥንካሬ እና የበሽታ አምጪ ተህዋሲያን ጥቃት ላሉ የአካባቢ ጭንቀቶች ምላሽ ለመስጠት 72 ናቸው። ፐርኦክሳይድሳዎች ከአንትራሲስ ጋር በርካታ የእፅዋት ዝርያዎችን መስተጋብር ውስጥ ይሳተፋሉ፣ ከእነዚህም ውስጥ ስቴሎሳንቴስ ሁሚሊስ እና ሲ. ግሎኢኦስፖሪዮይዶች፣ ሌንስ ኩሊናሪስ እና ሲ. ትሩንካተም፣ ፌዝኦለስ ቭልጋሪስ እና ሲ. ሊንዴሙቲያነም፣ ኩኩሚስ ሳቲቨስ እና ሲ. ላጌናሪየም73,74,75,76 ይገኙበታል። ፈንገሱ ወደ እፅዋቱ ቲሹ ውስጥ ከመግባቱ በፊት ምላሹ በጣም ፈጣን ነው፣ አንዳንድ ጊዜ በ4 HPI እንኳን። የፔሮኦክሳይድ ጂን ለዲ. ቶክሲካ ኤንኤልኤል ክትባት ምላሽ ሰጥቷል። ኦክሲዳሴሽን ፍንዳታን ለመቆጣጠር ወይም ኦክሲዳሴሽን ውጥረትን ለማስወገድ ከተለመዱት ተግባሮቻቸው በተጨማሪ፣ ፐርኦክሳይድሳሶች በተዘበራረቀበት፣ በንዑስ ክፍል ወይም በተወሰኑ ውህዶች መካከል በሚደረግ የሴል ግድግዳ ማጠናከሪያ ላይ የተመሰረቱ አካላዊ እንቅፋቶችን በመፍጠር የበሽታ አምጪ እድገትን ሊያስተጓጉሉ ይችላሉ። ይህ ተግባር በሲሊኮ ውስጥ በታንጂልጂ_03329 ጂን ውስጥ ሊገለጽ የሚችለው በ6 HPI ላይ በ83A:476 የመቋቋም መስመር ላይ በተደረገ ጥናት በከፍተኛ ሁኔታ የተሻሻለ ሊግኒን የሚፈጥር አኒዮን ፐርኦክሳይድ የሚመስል ጂን በመቅዳት ነው፣ ነገር ግን ምላሽ ያልሰጡ ሌሎች ዝርያዎች እና የጊዜ ነጥቦች ላይ አይደለም።
የሊኖሌይክ አሲድ 9S-/13S-lipoxygenase በሊፒድ ባዮሲንተሲስ ኦክሲዴቲቭ መንገድ ውስጥ የመጀመሪያው እርምጃ ነው። የዚህ መንገድ ምርቶች በእፅዋት መከላከያ ውስጥ በርካታ ተግባራት አሏቸው፣ ይህም የካሎዝ እና የፔክቲን ክምችቶችን በመፍጠር የሴል ግድግዳ ማጠናከሪያ እና ምላሽ ሰጪ የኦክስጅን ዝርያዎችን በማምረት የኦክሳይድ ውጥረትን መቆጣጠርን ጨምሮ79,80,81,82,83። በዚህ ጥናት ውስጥ፣ የሊኖሌይክ አሲድ 9S-/13S-lipoxygenase አገላለጽ በሁሉም ዝርያዎች ውስጥ ተለውጧል፣ ነገር ግን ተጋላጭ በሆነው ህዝብ 22660 ውስጥ፣ በተለያዩ የጊዜ ነጥቦች ላይ ጭማሪ ታይቷል፣ ተከላካይ ላንር1 እና አንማን አሌል በሚይዙ ዝርያዎች ውስጥ፣ በእነዚህ ጂኖታይፖች መካከል ባለው የመከላከያ አንትራክስ ግብረመልሶች ውስጥ የኦክሲሊፒን ንብርብር ልዩነትን ያጎላል።
የ1-አሚኖሳይክሎፕሮፔን-1-ካርቦክሲሌት ኦክሲዳዝ (ACO) ተመሳሳይነት በሉፒን ሲከተብ በከፍተኛ ሁኔታ ተሻሽሏል (9 ጂኖች) ወይም ተቀነሰ (2 ጂኖች)። በሁለት ልዩ ሁኔታዎች፣ እነዚህ ሁሉ ምላሾች የተከሰቱት በ6 hp በ83A:476 ነው። በACO ፕሮቲኖች የሚመራው የኢንዛይማቲክ ምላሽ በኤቲሊን ምርት ውስጥ የፍጥነት ገደብ ያለው ደረጃ ሲሆን ስለዚህ በከፍተኛ ሁኔታ ቁጥጥር ይደረግበታል84። ኤቲሊን የእፅዋትን እድገት እና ለአቢዮቲክ እና ባዮቲክ የጭንቀት ሁኔታዎች ምላሽን በመቆጣጠር የተለያዩ ሚናዎችን የሚጫወት የእፅዋት ሆርሞን ነው። የACO ግልባጭ እና የኢቲሊን ምልክት ማድረጊያ መንገድ ማግበር የሩዝ ለሄሚባዮትሮፊክ ፈንገስ ኦሪዛ ኦሪዛኢ የመቋቋም አቅምን በመጨመር የሪአክቲቭ ኦክሲጅን ዝርያዎችን እና ፋይቶአሌክሲኖችን ማምረት በመቆጣጠር ይሳተፋል። በዚህ ጥናት ውስጥ በተጠቀሰው የ83A:476 መስመር ውስጥ የACO ሆሞሎጎች ጉልህ የሆነ ጭማሪ ከተከሰተ በኋላ በM. oryzae እና C. lupini88,89 መካከል የተገኘ በጣም ተመሳሳይ የሆነ የቅጠል ኢንፌክሽን ሂደት፣ በNLL አንትራኖዝ ላይ የመቋቋም እድልን ኤቲሊን በሞለኪውላር መንገዶች ውስጥ ምልክት የሚያደርግ ማዕከላዊ እርምጃን ይለውጣል።
በዚህ ጥናት፣ ከፎቶሲንተሲስ ጋር የተያያዙ ብዙ ጂኖች መጠነ ሰፊ መጨቆን በ83A:476 6 hpi እና በማንዴሎፕ እና በ22660 ህዝብ ውስጥ በ48 hpi ታይቷል። የእነዚህ ለውጦች ስፋት እና እድገት ከደረጃው ጋር ተመጣጣኝ ነው። በዚህ ሙከራ ውስጥ የአንትራኖዝ መቋቋም ታይቷል። በቅርቡ፣ ከፎቶሲንተሲስ ጋር የተያያዙ ግልባጮችን ጠንካራ እና ቀደምት ጭቆና በበርካታ የእፅዋት-በሽታ አምጪ ግንኙነቶች ሞዴሎች ውስጥ ሪፖርት ተደርጓል፣ ይህም በሽታ አምጪ ባክቴሪያዎችን እና ፈንገሶችን ጨምሮ። ፈጣን (በአንዳንድ መስተጋብሮች ከ2 HPI) እና ለኢንፌክሽን ምላሽ ከፎቶሲንተሲስ ጋር የተያያዙ ጂኖችን ዓለም አቀፍ መጨቆን የእፅዋትን የበሽታ መከላከያ ሊያነቃቃ ይችላል፣ ይህም ምላሽ ሰጪ የኦክስጅን ዝርያዎችን በማሰማራት እና ከሳሊሲሊክ አሲድ መንገድ ጋር ባላቸው መስተጋብር ላይ በመመስረት የአለርጂ ምላሾችን ለማስታረቅ 90,94።
ለማጠቃለል ያህል፣ በጣም ተከላካይ ለሆነው የዘር ሐረግ (83A:476) የታቀዱት የመከላከያ ምላሽ ዘዴዎች በR ጂን (ምናልባትም TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) ፈጣን የበሽታ አምጪ በሽታዎችን መለየት እና በአለርጂ ምላሽ-መካከለኛ ሳሊሲሊክ አሲድ እና ኤቲሊን ምልክት ማድረጊያን ያካትታሉ፣ ከዚያም የረጅም ጊዜ የSAR መቋቋምን ያካትታሉ። እርምጃው በDIR-1 ፕሮቲን የተደገፈ ነው። ለC. lupini ኢንፌክሽን የባዮትሮፊክ ጊዜ በጣም አጭር (በግምት 2 ቀናት) መሆኑን ልብ ሊባል ይገባል፣ ከዚያም የኒክሮቲክ እድገት95 ይከተላል። በእነዚህ ደረጃዎች መካከል ያለው ሽግግር ከኒክሮሲስ እና በአስተናጋጅ እፅዋት ውስጥ የከፍተኛ ንክኪነት ምላሾችን እንደ ቀስቃሽ ሆነው ከሚያገለግሉት ኤቲሊን-ኢንዱሲቲቭ ፕሮቲኖች አገላለጽ ጋር ሊዛመድ ይችላል። ስለዚህ፣ በባዮትሮፊክ ደረጃ ላይ የሲ. lupiniን በተሳካ ሁኔታ ለመያዝ የጊዜ መስኮት በጣም ጠባብ ነው። በ6 hpi ውስጥ በ83A:476 ውስጥ ከታዩት ከሬዶክስ እና ፎቶሲንተሲስ ጋር የተያያዙ ጂኖች እንደገና ፕሮግራም ማድረግ ከፈንገስ ሃይፋ እድገት ጋር የሚጣጣም ሲሆን በባዮትሮፊክ ደረጃ ላይ የተሳካ የመከላከያ ምላሽ እድገትን ያሳያል። የማንዴሉፕ እና የ22660 ህዝብ የትራንስክሪፕቶሚክ ምላሾች ወደ ኒውክሮቲክ እድገት ከመቀየርዎ በፊት ፈንገሱን ለመያዝ በጣም ሊዘገዩ ይችላሉ፣ ሆኖም ግን፣ ማንዴሉፕ ከ22660 ህዝብ የበለጠ ውጤታማ ሊሆን ይችላል ምክንያቱም በአንጻራዊነት ፈጣን የPR-10 ፕሮቲን ቁጥጥር አግድም መቋቋምን ያበረታታል።
በቀኖኒካል አር ጂን የሚመራው ETI፣ የባቄላ ለአንትራኖዝ መቋቋም የተለመደ ዘዴ ይመስላል። ስለዚህ፣ በሞዴል ጥራጥሬ Medicago ትሩንካቱላ ውስጥ፣ የአንትራኖዝ መቋቋም የሚሰጠው የ TIR-NBS-LRR97 ተክል R ጂን ክፍል አባል በሆነው RCT1 ጂን ነው። ይህ ጂን እንዲሁም በአልፋልፋ ውስጥ ሰፊ ስፔክትረም አንትራኖዝ መቋቋምን ወደ ተጋላጭ እፅዋት ሲተላለፍ ይሰጣል። በጋራ ባቄላ (P. vulgaris) ውስጥ፣ እስከዛሬ ድረስ ከሁለት ደርዘን በላይ የአንትራኖዝ መቋቋም ጂኖች ተለይተዋል። ከእነዚህ ጂኖች ውስጥ አንዳንዶቹ ምንም አይነት ቀኖናዊ R ጂኖች በሌሉባቸው ክልሎች ውስጥ ይገኛሉ፣ ነገር ግን ሌሎች ብዙዎች TIR-NBS-LRR ጂን ክላስተርን ጨምሮ የ NBS-LRR ጂን ክላስተርን በያዙ ክሮሞሶሞች ጠርዝ ላይ ይገኛሉ። በጂኖም-አቀፍ SSR ጥናት የ NBS-LRR ጂን በጋራ ባቄላ ውስጥ ከአንትራኖዝ መቋቋም ጋር ያለውን ግንኙነት አረጋግጧል። ቀኖናዊው የR ጂን በነጭ ሉፒን 101 ውስጥ ዋናውን የአንትራኖዝ መቋቋም ሎከስ በያዘው ጂኖሚክ ክልል ውስጥም ተገኝቷል።
ስራችን እንደሚያሳየው በእፅዋት ኢንፌክሽን የመጀመሪያ ደረጃ (በተለይም ከ12 hpi ባልበለጠ ጊዜ) የሚነቃ ፈጣን የመቋቋም ምላሽ ጠባብ ቅጠል ያለው ሉፒንን ከበሽታ አምጪ ፈንገስ ኮሌሎትሪቹም ሉፒኒ ከሚመጣው አንትራኖዝ ውጤታማ በሆነ መንገድ ይከላከላል። ከፍተኛ የውጤት ቅደም ተከተል በመጠቀም፣ በላንር1 እና አንማን የመቋቋም ጂኖች በሚተላለፉ የNLL እፅዋት ውስጥ የአንትራኖዝ የመቋቋም ጂኖች ልዩነት መገለጫ አሳይተናል። ስኬታማ መከላከያ ተክሉ ከበሽታ አምጪ ጋር ለመጀመሪያ ጊዜ ከተገናኘ በኋላ በጥቂት ሰዓታት ውስጥ በሬዶክስ፣ ፎቶሲንተሲስ እና በበሽታ አምጪ ተህዋሲያን ውስጥ ለሚሳተፉ ፕሮቲኖች ጂኖችን በጥንቃቄ መንደፍን ያካትታል። ተመሳሳይ የመከላከያ ግብረመልሶች፣ ግን በጊዜ የዘገዩ፣ እፅዋትን ከበሽታዎች ለመጠበቅ በጣም ውጤታማ አይደሉም። በላንር1 ጂን የሚመራው የአንትራክስ መቋቋም የR ጂን (ተፈፃሚ-የተፈጠረ የበሽታ መከላከያ) የተለመደ ፈጣን ምላሽ ይመስላል፣ የአንማን ጂን ደግሞ አግድም ምላሽ ይሰጣል (በማይክሮቤ-ተያያዥ ሞለኪውላዊ ንድፍ የሚቀሰቀስ የበሽታ መከላከያ)፣ መካከለኛ የዘላቂነት ደረጃን ይሰጣል።
የአንትራኖዝ ምልክቶችን ለማጣራት የሚያገለግሉት 215 የNLL መስመሮች 74 ዝርያዎችን፣ በማቋረጥ ወይም በማዳቀል የተገኙ 60 መስመሮችን፣ 5 ሚውቴሽን እና 76 የዱር ወይም ኦሪጅናል ጀርምፕላዝሞችን ያካትታሉ። መስመሮቹ ከ17 አገሮች የመጡ ሲሆን በዋናነት ከፖላንድ (58)፣ ከስፔን (47)፣ ከጀርመን (27)፣ ከአውስትራሊያ (26)፣ ከሩሲያ (19)፣ ከቤላሩስ (7)፣ ከጣሊያን (5) እና ከሌሎች መስመሮች የመጡ ናቸው። ስብስቡ የማጣቀሻ መቋቋም የሚችሉ መስመሮችን ያካትታል፡ 83A:476፣ ታንጂል፣ የላንር1 አሌልን የያዘ ዎንጋ እና የAnMan አሌልን የያዘ ማንዴሉፕ። መስመሮቹ የተገኙት በፖዝናን ፕላንት ብሬዲንግ ሊሚትድ፣ ዊያትሮው፣ ፖላንድ (ተጨማሪ ሰንጠረዥ S1) ከሚጠበቀው የአውሮፓ ሉፒን ጄኔቲክ ሪሶርስ ዳታቤዝ ነው።
ተክሎች በተቆጣጠሩ ሁኔታዎች (የፎቶ ጊዜ 16 ሰዓታት፣ በቀን ውስጥ የሙቀት መጠን 25°ሴ እና በሌሊት 18°ሴ) ተበቅለዋል። ሁለት ባዮሎጂካል ቅጂዎች ተተነተኑ። ዲኤንኤ ከሶስት ሳምንት ዕድሜ ካላቸው ቅጠሎች በፕሮቶኮሉ መሠረት በDNeasy Plant Mini Kit (Qiagen፣ Hilden፣ Germany) ተለይቷል። የተገለለው ዲኤንኤ ጥራት እና ክምችት በስፔክትሮፎቶሜትሪክ ዘዴዎች ተገምግሟል (NanoDrop 2000፤ Thermo Fisher Scientific፣ Waltham፣ MA፣ USA)። የአንትራኖዝ መቋቋም ጂን AnMan (ከ cv. Mandelup የተገኘ) ምልክት የሚያደርገው AnManM1 ምልክት እና Lanr1 (ከ cv. Tanjil የተገኘ) ጂን ጎን ያሉት Anseq3 እና Anseq4 ምልክቶች በ 11,26,28 ተተነተኑ። ለተቋቋሚው አሌል ሆሞዚጎቶች እንደ “1″”፣ በቀላሉ የሚጋለጥ - እንደ “0″”፣ እና ሄትሮዚጎቶች - እንደ 0.5 ተመድበዋል።
የAnManM1፣ AnSeq3 እና AnSeq4 ማርከሮችን በማጣራት ውጤቶች እና ለመጨረሻ የክትትል ሙከራዎች ዘሮች መገኘት ላይ በመመስረት፣ 50 የNLL መስመሮች ለአንትራኖዝ መቋቋም ፌኖታይፒንግ ተመርጠዋል። ትንታኔው የተከናወነው በኮምፒውተር ቁጥጥር ስር ባለ ግሪን ሃውስ ውስጥ በቀን 22°ሴ እና በሌሊት 19°ሴ የሙቀት ክልል ውስጥ ባለ 14 ሰዓት የፎቶፔሪዮይድ ባለው ግሪን ሃውስ ውስጥ ነው። የዘር ሽፋኑ በጣም ጠንካራ ስለሆነ እና ወጥ የሆነ ቡቃያ እንዲኖር የዘር እንቅልፍ እንዳይኖር ለመከላከል ዘሮች ከመትከልዎ በፊት ይቧጫሉ (በሽሉ ተቃራኒው ጎን ላይ ያለውን የዘር ሽፋን በሹል ምላጭ ይቆርጣሉ)። ተክሎች በቆሸሸ አፈር (11 × 11 × 21 ሴ.ሜ) ውስጥ ይበቅላሉ (TS-1 REC 085 Medium Basic፣ Klasmann-Deilmann Polska፣ Warsaw፣ Poland)። ክትባቱ የተካሄደው በ1999 በቬርዠኒሳ፣ ታላቋ ፖላንድ (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E) ውስጥ በሚበቅሉ ጠባብ ቅጠል ያላቸው የሉፒን ተክሎች ግንድ በኮሌቶትሪቹም ሉፒኒ ኮል-08 ዝርያ ነው። ቦታ ያግኙ። እነዚህ ተገልላዎች በ20° ሴ በጥቁር ብርሃን ስር ለ21 ቀናት በኤስኤንኤ መካከለኛ ውስጥ ተከልለው ስፖሮሌሽን እንዲፈጠር ተደርጓል። ከተዘሩ ከአራት ሳምንታት በኋላ፣ ተክሎቹ 4-6 የቅጠል ደረጃ ላይ ሲደርሱ፣ ክትባቱ የተካሄደው በ0.5 x 106 ኮኒዲያ በአንድ ሚሊ ሊትር ክምችት ባለው የኮኒዲያ እገዳ በመርጨት ነው። ክትባቱ ከተከተቡ በኋላ፣ ተክሎቹ ለ24 ሰዓታት በጨለማ ውስጥ ለ98% እርጥበት እና ለ25°ሴ የሙቀት መጠን ተጠብቀው የኮኒዲያን እድገት እና የኢንፌክሽን ሂደትን ለማመቻቸት ተችሏል። ከዚያም ተክሎቹ በ14 ሰዓት የፎቶ ጊዜ ውስጥ በ22°ሴ/በ19°ሴ ምሽት እና በ70% እርጥበት ስር ይበቅላሉ። የበሽታው ውጤት ከተከተቡ በኋላ ከ22 ቀናት በኋላ የተደረገ ሲሆን በግንዶችና በቅጠሎች ላይ የኔክሮቲክ ቁስሎች መኖር ወይም አለመኖር ላይ በመመስረት ከ0 (በሽታ የመከላከል አቅም) እስከ 9 (በጣም ተጋላጭ) ይደርሳል። በተጨማሪም፣ ከተመዘነ በኋላ የእፅዋቱ ክብደት ተለክቷል። በማርከር ጂኖታይፕስ እና በበሽታ ፊኖታይፕስ መካከል ያለው ግንኙነት እንደ ነጥብ ሁለት ቅደም ተከተል ትስስር (የአንትራኖዝ የመቋቋም ፌኖታይፕ ለመተንተን በመስመሮች ስብስብ ውስጥ ሄትሮዚጎስ ማርከሮች አለመኖር) ተሰልቷል።