Nature.com သို့ ဝင်ရောက်ကြည့်ရှုသည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။ သင်အသုံးပြုနေသော browser ဗားရှင်းတွင် CSS ပံ့ပိုးမှု အကန့်အသတ်ရှိသည်။ အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသော browser ကို အသုံးပြုရန် (သို့မဟုတ် Internet Explorer ရှိ Compatibility Mode ကို ပိတ်ရန်) အကြံပြုအပ်ပါသည်။ ထိုအတောအတွင်း၊ ဆက်လက်ပံ့ပိုးမှုရရှိစေရန်အတွက်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ဆိုက်ကို styles နှင့် JavaScript မပါဘဲ render လုပ်ပါမည်။
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) သည် အစားအစာထုတ်လုပ်မှုနှင့် မြေဆီလွှာတိုးတက်ကောင်းမွန်ရေးအတွက် အသုံးပြုသော ပဲမျိုးရင်းဝင်အပင်တစ်မျိုးဖြစ်သည်။ NLL ကို ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာ သီးနှံတစ်ခုအဖြစ် တိုးချဲ့လာခြင်းကြောင့် ပြင်းထန်သော anthracnose ရောဂါကို ဖြစ်စေသော lupine anthracnose အပါအဝင် ရောဂါဖြစ်စေသော မှိုများစွာကို ဆွဲဆောင်ခဲ့သည်။ ခုခံအားတိုးစေသော Lanr1 နှင့် AnMan အမည်ရှိ alleles နှစ်ခုကို NLL မွေးမြူရေးတွင် အသုံးပြုခဲ့သော်လည်း အခြေခံမော်လီကျူးယန္တရားများကို မသိရသေးပါ။ ဤလေ့လာမှုတွင် ဥရောပ NLL နမူနာများကို စစ်ဆေးရန် Lanr1 နှင့် AnMan markers များကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ ထိန်းချုပ်ထားသောပတ်ဝန်းကျင်တွင် ကာကွယ်ဆေးကို စမ်းသပ်ခြင်းသည် ခုခံအားရှိသော အလှူရှင်နှစ်ဦးစလုံး၏ အာနိသင်ကို အတည်ပြုခဲ့သည်။ ခုခံအားရှိသော ကိုယ်စားပြုမျိုးစိတ်များနှင့် ထိခိုက်လွယ်သော မျိုးစိတ်များတွင် မတူညီသော မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုပရိုဖိုင်ကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ Anthracnose ခုခံမှုသည် “GO:0006952 Defense Response”၊ “GO:0055114 Redox Process” နှင့် “GO:0015979 Photosynthesis” ဟူသော မျိုးရိုးဗီဇဆိုင်ရာ အသုံးအနှုန်းများ အလွန်အကျွံဖော်ပြခြင်းနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။ ထို့အပြင်၊ Lanr1(83A:476) လိုင်းသည် ထိုးသွင်းပြီးနောက် လျင်မြန်စွာ သိသာထင်ရှားသော transcriptome ပြန်လည်ပရိုဂရမ်းမင်းကို ပြသခဲ့ပြီး အခြားလိုင်းများတွင် ဤတုံ့ပြန်မှုတွင် ၄၂ နာရီခန့် နှောင့်နှေးမှုပြသခဲ့သည်။ ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများသည် TIR-NBS၊ CC-NBS-LRR နှင့် NBS-LRR မျိုးဗီဇများ၊ ရောဂါဖြစ်စဉ်တွင်ပါဝင်သော ပရိုတင်း ၁၀ မျိုး၊ lipid transfer ပရိုတင်းများ၊ endoglucan-1,3-β-glucosidase၊ glycine ကြွယ်ဝသော ဆဲလ်နံရံပရိုတင်းများနှင့် အောက်ဆီဂျင်၏ ဓာတ်ပြုလမ်းကြောင်းမှ မျိုးဗီဇများနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။ 83A:476 သို့ အစောပိုင်းတုံ့ပြန်မှုများတွင် photosynthesis နှင့်ဆက်စပ်နေသော မျိုးဗီဇများကို ဂရုတစိုက်နှိမ်နင်းခြင်းအပါအဝင် မှိုဇီဝဗေဒ၏ အပင်ကြီးထွားမှုအဆင့်တွင် အောင်မြင်စွာကာကွယ်မှုနှင့် တိုက်ဆိုင်နေပြီး effector တစ်ခုက ကိုယ်ခံအားကို လှုံ့ဆော်ပေးသည်ဟု အကြံပြုထားသည်။ Mandeloop ဓာတ်ပြုမှုသည် ಒಟ್ಟಾರೆ အလျားလိုက်ဆွဲငင်အားကဲ့သို့ပင် နှေးကွေးသွားသည်။
အရွက်ကျဉ်းလူပင် (NLL၊ Lupinus angustifolius L.) သည် အနောက်မြေထဲပင်လယ်ဒေသမှ မူလအစပြုသော ပရိုတင်းဓာတ်မြင့်မားသော ကောက်ပဲသီးနှံတစ်မျိုးဖြစ်သည်1,2။ လက်ရှိတွင် တိရစ္ဆာန်များနှင့် လူသားများအတွက် အစားအစာအဖြစ် စိုက်ပျိုးကြသည်။ ၎င်းကို သဟဇာတဖြစ်သော နိုက်ထရိုဂျင်ပြုပြင်ပေးသည့် ဘက်တီးရီးယားများက နိုက်ထရိုဂျင်ပြုပြင်ပေးခြင်းနှင့် မြေဆီလွှာဖွဲ့စည်းပုံ အလုံးစုံတိုးတက်ကောင်းမွန်လာခြင်းကြောင့် သီးနှံလည်ပတ်စနစ်များတွင် စိမ်းလန်းသော မြေဩဇာအဖြစ်လည်း သတ်မှတ်ကြသည်။ NLL သည် ပြီးခဲ့သည့်ရာစုနှစ်အတွင်း အလျင်အမြန် မွေးမြူရေးလုပ်ငန်းကို ဖြတ်သန်းခဲ့ပြီး မျိုးပွားမှုဖိအားမြင့်မားနေဆဲဖြစ်သည်3,4,5,6,7,8,9,10,11,12။ NLL ကို ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် စိုက်ပျိုးလာခြင်းနှင့်အတူ ရောဂါဖြစ်စေသော မှိုများ အဆက်မပြတ်ပေါ်ပေါက်လာခြင်းကြောင့် စိုက်ပျိုးရေးနယ်ပယ်အသစ်များကို ဖော်ဆောင်ပေးပြီး သီးနှံများကို ဖျက်ဆီးသော ရောဂါအသစ်များကို ဖြစ်ပေါ်စေခဲ့သည်။ လူပင်စိုက်ပျိုးသူများနှင့် မွေးမြူသူများအတွက် အထူးခြားဆုံးမှာ ရောဂါဖြစ်စေသော မှို Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ကြောင့်ဖြစ်သော အန်သရက်နို့စ် ပေါ်လာခြင်းဖြစ်သည်။ လူပင်စိုက်ပျိုးသူများနှင့် မွေးမြူသူများအတွက် အထူးခြားဆုံးမှာ ရောဂါဖြစ်စေသော မှို Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ကြောင့်ဖြစ်သော အန်သရက်နို့စ် ပေါ်လာခြင်းဖြစ်သည်။ Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вынваниного появление Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg၊ Feiler & Hagedorn13။ လူပင်စိုက်ပျိုးသူများနှင့် မွေးမြူသူများအတွက် အထင်ရှားဆုံးမှာ ရောဂါဖြစ်စေသော မှို Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg၊ Feiler & Hagedorn13 ကြောင့်ဖြစ်သော အန်သရက်နို့စ် ပေါ်ပေါက်လာခြင်းဖြစ်သည်။对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真真病的出现，它是由病原真真菌& Hagedorn13引起的။对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真Letrichot菌Col (Bondar)嵵 ဆံပင်။၁ Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываепам грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg၊ Feiler & Hagedorn13။ လူပင်စိုက်ပျိုးသူများနှင့် မွေးမြူသူများအတွက် အထင်ရှားဆုံးမှာ ရောဂါဖြစ်စေသော မှို Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg၊ Feiler & Hagedorn13 ကြောင့်ဖြစ်သော အန်သရက်နို့စ် ပေါ်ပေါက်လာခြင်းဖြစ်သည်။ရောဂါ၏ အစောဆုံးအစီရင်ခံစာများသည် ဘရာဇီးနှင့် အမေရိကန်ပြည်ထောင်စုမှ လာခဲ့ပြီး ၁၉၁၂ ခုနှစ်နှင့် ၁၉၂၉ ခုနှစ်တို့တွင် ပုံမှန်လက္ခဏာများ ပေါ်ပေါက်ခဲ့သည်။ သို့သော် နှစ် ၃၀ ခန့်အကြာတွင် ရောဂါပိုးကို Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz အဖြစ် သတ်မှတ်ခဲ့သည်။ & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld။ & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ၏ teleomorph။ & Sacc။ 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld။ & Sacc။ 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld။ & Sacc.၊ Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии ။ & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld သည် Targeted Morphology တွင် ရှိသည်။ & အိပ်ချ်. ရှရန်းခ်။ & အိပ်ချ်. ရှရန်းခ်။နှင့် H. Schrenk။ & H.施伦克၊ & H.施伦克၊နှင့် H. Schlenk။၂၀ ရာစုအလယ်ပိုင်းတွင် ပြုလုပ်ခဲ့သော ရောဂါအစောပိုင်း phenotyping အရ NLL နှင့် အဝါရောင် lupine (L. luteus L.) များတွင် ခံနိုင်ရည်အချို့ရှိကြောင်း ပြသခဲ့သော်လည်း စမ်းသပ်ထားသော အဖြူရောင် lupine (L. albus L.) များအားလုံးသည် အလွန်ထိခိုက်လွယ်သည်15,16။ လေ့လာမှုများအရ အန်သရက်နို့စ် ဖွံ့ဖြိုးမှုသည် မိုးရွာသွန်းမှု (လေထုစိုထိုင်းဆ) နှင့် အပူချိန် (၁၂-၂၈°C အတွင်းရှိ) တိုးလာခြင်းနှင့် ဆက်စပ်နေပြီး အပူချိန်မြင့်မားမှုတွင် ခံနိုင်ရည်ချို့ယွင်းမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်17, 18။ အမှန်စင်စစ်၊ conidia ပေါက်ရောက်ရန်နှင့် ရောဂါစတင်ရန် လိုအပ်သောအချိန်သည် စိုထိုင်းဆမြင့်မားသောအခြေအနေများတွင် ၁၂°C (၁၆ နာရီ) ထက် ၂၄°C (၄ နာရီ) တွင် လေးဆတိုတောင်းသည်19။ ထို့ကြောင့် ကမ္ဘာကြီးပူနွေးလာမှုသည် အန်သရက်နိုက်စ် ပျံ့နှံ့မှုကို ဖြစ်ပေါ်စေခဲ့သည်။ သို့သော် ဤရောဂါကို ပြင်သစ် (၁၉၈၂) နှင့် ယူကရိန်း (၁၉၈၃) တို့တွင် ခြိမ်းခြောက်မှုတစ်ခု၏ ရှေ့ပြေးနိမိတ်အဖြစ် တွေ့ရှိခဲ့ရသော်လည်း ထိုအချိန်က lupine လုပ်ငန်းမှ လျစ်လျူရှုထားပုံရသည်20,21။ နှစ်အနည်းငယ်အကြာတွင် ဤကြောက်မက်ဖွယ်ကောင်းသောရောဂါသည် ကမ္ဘာတစ်ဝှမ်းသို့ ပျံ့နှံ့သွားပြီး ဩစတြေးလျ၊ ပိုလန်နှင့် ဂျာမနီကဲ့သို့သော အဓိကလူပင်းထုတ်လုပ်သည့် နိုင်ငံများကိုလည်း ထိခိုက်ခဲ့သည်22,23,24။ ၁၉၉၀ ပြည့်လွန်နှစ်များအလယ်ပိုင်းတွင် အန်သရက်နို့စ်ရောဂါဖြစ်ပွားမှုအပြီးတွင်၊ ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်စစ်ဆေးမှုကြောင့် NLL19 နမူနာများတွင် ခံနိုင်ရည်ရှိသော အလှူရှင်များစွာကို ဖော်ထုတ်နိုင်ခဲ့သည်။ အန်သရက်နို့စ်အပေါ် NLL ခံနိုင်ရည်ကို မတူညီသော သန္ဓေတည်ပင်ရင်းမြစ်များတွင် တွေ့ရှိရသော သီးခြားထင်ရှားသည့် အယ်လီးနှစ်ခုဖြင့် ထိန်းချုပ်ထားသည်- Tanjil မျိုးကွဲရှိ Lanr1 နှင့် မျိုးကွဲရှိ Wonga နှင့် AnMan။ Mandalay ၂၅၊ ၂၆။ ဤအယ်လီးများသည် မွေးမြူရေးအစီအစဉ်များတွင် ခံနိုင်ရည်ရှိသော သန္ဓေတည်ပင်များရွေးချယ်ခြင်းကို ပံ့ပိုးပေးသည့် မော်လီကျူးအမှတ်အသားများကို ဖြည့်စွက်ပေးသည်25,26,27,28,29,30။ Lanr1 allele ပါရှိသော ခံနိုင်ရည်ရှိသော မျိုးပွားမျိုးစိတ် 83A:476 ကို ခံနိုင်ရည်ရှိသော wild line P27255 နှင့် ဖြတ်ကျော်ခဲ့ပြီး anthracnose ခံနိုင်ရည်ကို ခွဲခြားထားသော RIL လူဦးရေကို ရရှိစေခဲ့ပြီး Lanr1 locus ကို chromosome NLL-1131၊ 32၊ 33 သို့ သတ်မှတ်နိုင်စေခဲ့သည်။ genomic framework ဖြင့် flanking resistance loci မှ anthracnose သို့ linkage map markers များကို ချိန်ညှိခြင်းဖြင့် NLL သည် တူညီသော chromosome (NLL-11) ပေါ်ရှိ alleles သုံးခုလုံး၏ တည်နေရာကို ဖော်ထုတ်ခဲ့သော်လည်း တည်နေရာများကွဲပြားခဲ့သည်29,34,35။ သို့သော် RILs အရေအတွက်နည်းပါးခြင်းနှင့် markers များနှင့် သက်ဆိုင်ရာ alleles များအကြား မျိုးရိုးဗီဇအကွာအဝေးကြီးမားခြင်းကြောင့် ၎င်းတို့၏ အခြေခံမျိုးရိုးဗီဇများနှင့်ပတ်သက်၍ ယုံကြည်စိတ်ချရသော နိဂုံးချုပ်ချက်များကို မချမှတ်နိုင်ပါ။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ lupins များတွင် reverse genetics ကို အသုံးပြုခြင်းသည် ၎င်းတို့၏ regeneration potential အလွန်နည်းပါးခြင်းကြောင့် ခက်ခဲပြီး မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ခြင်းကို လေးလံစေသည်37။
83A:476 (Lanr1) နှင့် Mandelup (AnMan) ကဲ့သို့သော homozygous အခြေအနေတွင် လိုချင်သော allele ကို သယ်ဆောင်သည့် အိမ်မွေး germplasm ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုသည် သဘာဝလူဦးရေတွင် alleles များ၏ ဆန့်ကျင်ဘက်ပေါင်းစပ်မှုများ ရှိနေခြင်းကို ရင်ဆိုင်ရာတွင် anthracnose ခုခံမှုကို လေ့လာရန် တံခါးဖွင့်ပေးခဲ့သည်။ မော်လီကျူးယန္တရားများ၏ ဖြစ်နိုင်ခြေများ။ သီးခြား genotype များမှ ထုတ်လုပ်သော ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများကို နှိုင်းယှဉ်ပါ။ ဤလေ့လာမှုသည် C. lupini ကာကွယ်ဆေးထိုးခြင်းအပေါ် NLL ၏ အစောပိုင်း transcriptome တုံ့ပြန်မှုကို အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ ပထမဦးစွာ၊ Lanr1 နှင့် AnMan alleles များကို အမှတ်အသားပြုသော မော်လီကျူးအမှတ်အသားများကို အသုံးပြု၍ မျဉ်း ၂၁၅ ကြောင်းပါရှိသော ဥရောပ NLL germplasm panel ကို စစ်ဆေးခဲ့သည်။ မော်လီကျူးအမှတ်အသားများအတွက် ယခင်က ရွေးချယ်ထားသော NLL မျဉ်း ၅၀ တွင် ထိန်းချုပ်ထားသော အခြေအနေများအောက်တွင် Anthracnose phenotyping ကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ဤစမ်းသပ်မှုများအပေါ် အခြေခံ၍ anthracnose ခုခံမှုနှင့် Lanr1/AnMan allelic ဖွဲ့စည်းမှုတွင် ကွဲပြားသော မျဉ်းလေးကြောင်းကို ဖြည့်စွက်ချဉ်းကပ်မှုနှစ်ခုကို အသုံးပြု၍ differential defense gene expression profiling အတွက် ရွေးချယ်ခဲ့သည်- high-throughput RNA sequencing နှင့် real-time PCR quantification။
Lanr1 (Anseq3 နှင့် Anseq4) အမှတ်အသားများပါသည့် NLL သန္ဓေအောင်မျိုးဗီဇအစုံ (N = 215) နှင့် AnMan (Anseq4) နှင့် AnMan (AnManM1) တို့ကို စစ်ဆေးခြင်းအားဖြင့် မျဉ်းတစ်ကြောင်း (Salamanca-b အနီး 95726) သာ အမှတ်အသားအားလုံးအတွက် “ခုခံအား” allele ကို များပြားစေပြီး “'ထိခိုက်လွယ်သော' alleles များရှိနေခြင်း” သည် မျဉ်း ၁၅၈ (~73.5%) ရှိ အမှတ်အသားအားလုံး၏ အချိုးအစားကို ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့သည်။ မျဉ်း ၁၃ ကြောင်းသည် Lanr1 အမှတ်အသား၏ “ခုခံအား” allele နှစ်ခုကို ထုတ်လုပ်ခဲ့ပြီး မျဉ်း ၈ ကြောင်းသည် Lanr1 အမှတ်အသား၏ “ခုခံအား” allele ကို ထုတ်လုပ်ခဲ့သည်။ AnMan အမှတ်အသား၏ “ခုခံအား” allele (နောက်ဆက်တွဲဇယား S1)။ Anseq3 အမှတ်အသားအတွက် မျဉ်းနှစ်ကြောင်းသည် heterozygous ဖြစ်ပြီး AnManM1 အမှတ်အသားအတွက် heterozygous တစ်ခုဖြစ်သည်။ မျဉ်း ၄၂ ကြောင်း (၁၉.၅%) သည် Anseq3 နှင့် Anseq4 alleles ၏ ဆန့်ကျင်ဘက်အဆင့်များကို သယ်ဆောင်ထားပြီး ဤ loci နှစ်ခုကြားတွင် ပြန်လည်ပေါင်းစပ်မှု မြင့်မားခြင်းကို ညွှန်ပြနေသည်။ ထိန်းချုပ်ထားသော အခြေအနေများအောက်တွင် အန်သရက်နိုက်စ် phenotypes (Supplementary Table S2) သည် စမ်းသပ်ထားသော genotypes များ၏ ခံနိုင်ရည်တွင် ကွဲပြားမှုကို ဖော်ထုတ်ခဲ့ပြီး အန်သရက်နိုက်စ်၏ ပြင်းထန်မှုတွင် ထင်ဟပ်နေသည်။ ပျမ်းမျှရမှတ်များတွင် ကွာခြားချက်များသည် ၁.၈ (အသင့်အတင့် ခံနိုင်ရည်ရှိသည်) မှ ၆.၉ (ခံနိုင်ရည်ရှိသည်) အထိ ရှိပြီး အပင်အလေးချိန် ကွာခြားချက်များသည် ၀.၆၂ (ခံနိုင်ရည်ရှိသည်) မှ ၄.၄၅ ဂရမ် (ခံနိုင်ရည်ရှိသည်) အထိ ရှိသည်။ စမ်းသပ်မှု၏ ထပ်ခါတလဲလဲလုပ်ဆောင်မှုနှစ်ခုတွင် တွေ့ရှိရသောတန်ဖိုးများ (ရောဂါပြင်းထန်မှုရမှတ်များအတွက် 0.51၊ P = 0.00017 နှင့် အပင်အလေးချိန်အတွက် 0.61၊ P < 0.0001) နှင့် ဤကန့်သတ်ချက်နှစ်ခု (- 0.59 နှင့် - 0.77၊ P < 0.0001) တို့အကြားတွင် သိသာထင်ရှားသော ဆက်စပ်မှုတစ်ခုရှိခဲ့သည်။ စမ်းသပ်မှု၏ ထပ်တူပြုခြင်းနှစ်ခုတွင် တွေ့ရှိရသည့် တန်ဖိုးများ (ရောဂါပြင်းထန်မှုရမှတ်များအတွက် 0.51၊ P = 0.00017 နှင့် အပင်အလေးချိန်အတွက် 0.61၊ P < 0.0001) နှင့် ဤကန့်သတ်ချက်နှစ်ခု (- 0.59 နှင့် - 0.77၊ P < 0.0001) တို့အကြားတွင် သိသာထင်ရှားသော ဆက်စပ်မှုတစ်ခု ရှိခဲ့သည်။ Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперименталяж (0,51 болезни, P = 0,00017 и 0,61 для массы растения, P< 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 <7 и 0,019) 0,0001)။ စမ်းသပ်မှု၏ နှစ်ကြိမ်ထပ်ခါတလဲလဲလုပ်ဆောင်မှုတွင် တွေ့ရှိရသည့်တန်ဖိုးများ (ရောဂါပြင်းထန်မှုရမှတ်များအတွက် 0.51၊ P = 0.00017 နှင့် အပင်အလေးချိန်အတွက် 0.61၊ P < 0.0001) နှင့် ဤကန့်သတ်ချက်နှစ်ခု (- 0.59 နှင့် -0.77၊ P < 0.0001) 0.0001) တို့အကြားတွင် သိသာထင်ရှားသော ဆက်စပ်မှုကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为0.51，P = 0.00017，植物重量为0.61，P < 0.0001)以及这两个参数之间 (- 0.59和- 0.77，P < 0.0001)။在两次重复实验中观察的值之间存在相关性（疾病严重程度1评分为，5分为၊ p = 0.00017 ，植物为为 0.61 ， p <0.0001) 以及两个参数之间（（（（- 0.59和– 59 .– 9– 0.59和– 59– 9– 0.59 ၀.၇၇၊ P < ၀.၀၀၀၁)။ Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тяжаст 0,00017 и масса растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, P < 10,000၊ မိတ္တူတွင် တွေ့ရှိရသည့် တန်ဖိုးများ (ရောဂါပြင်းထန်မှုရမှတ် 0.51၊ P = 0.00017 နှင့် အပင်အလေးချိန် 0.61၊ P < 0.0001) နှင့် ဤကန့်သတ်ချက်နှစ်ခု (-0.59 နှင့် -0 .0001) 0.77၊ P<0.0001 အကြားတွင် သိသာထင်ရှားသော ဆက်စပ်မှုတစ်ခု ရှိခဲ့သည်။ ).ခံနိုင်ရည်မရှိသော အပင်များတွင် တွေ့ရလေ့ရှိသော ပုံမှန်လက္ခဏာများတွင် “သိုးထိန်းလေး” ဖွဲ့စည်းပုံနှင့်ဆင်တူသော ပင်စည်ကွေးခြင်းနှင့် လိမ်ခြင်းတို့ ပါဝင်ပြီး လိမ္မော်ရောင်/ပန်းရောင် sporozoites များပါရှိသော ဘဲဥပုံအနာများ ပါဝင်သည် (နောက်ဆက်တွဲပုံ ၁)။ Lanr1 (83A:476 နှင့် Tanjil) နှင့် AnMan (Mandelup) မျိုးဗီဇများ သယ်ဆောင်လာသော ဩစတြေးလျ မျိုးပွားများသည် အသင့်အတင့် ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး 0.0331 နှင့် 0.0036)။ “ခံနိုင်ရည်ရှိသော” Lanr1 နှင့်/သို့မဟုတ် AnMan alleles များကိုလည်း သယ်ဆောင်သော မျိုးစိတ်အချို့သည် ရောဂါ၏လက္ခဏာများ ပြသသည်။
စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းတာက “ခံနိုင်ရည်ရှိတဲ့” marker allele မရှိတဲ့ NLL မျဉ်းအနည်းငယ်မှာ Boregine (p value < 0.0001)၊ Bojar (ရမှတ်အတွက် P value < 0.0001 နဲ့ အပင်အလေးချိန်အတွက် 0.001) နဲ့ Population B-549/79b (ရမှတ်အတွက် P value < 0.0001 နဲ့ အလေးချိန်အတွက် အရေးမကြီးဘူး) စတဲ့ anthracnose ခံနိုင်ရည်မြင့်မားတာကို ဖော်ပြခဲ့ပါတယ် (Lanr1 သို့မဟုတ် AnMan genotypes တွေထက် နှိုင်းယှဉ်လို့ရတဲ့ ဒါမှမဟုတ် ပိုများပါတယ်)။ စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းတာက “ခံနိုင်ရည်ရှိတဲ့” marker allele မရှိတဲ့ NLL မျဉ်းအနည်းငယ်မှာ Boregine (p value < 0.0001)၊ Bojar (ရမှတ်အတွက် P value < 0.0001 နဲ့ အပင်အလေးချိန်အတွက် 0.001) နဲ့ Population B-549/79b (ရမှတ်အတွက် P value < 0.0001 နဲ့ အလေးချိန်အတွက် အရေးမကြီးဘူး) စတဲ့ anthracnose ခံနိုင်ရည်မြင့်မားတာကို ဖော်ပြခဲ့ပါတယ် (Lanr1 သို့မဟုတ် AnMan genotypes တွေထက် နှိုင်းယှဉ်လို့ရတဲ့ ဒါမှမဟုတ် ပိုများပါတယ်)။ Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали устойчивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких 1 ча00де (Boregine) обоих параметров), Bojar (значение P < 0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы)။ စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းတာက 'ခံနိုင်ရည်ရှိတဲ့' marker allele မရှိတဲ့ NLL မျဉ်းအတော်များများဟာ Boregine (p တန်ဖိုး < 0.0001)၊ Bojar (အကဲဖြတ်မှုအတွက် P တန်ဖိုး < 0.0001 နဲ့ အပင်အလေးချိန်အတွက် 0.001) နဲ့ လူဦးရေ B-549/79b (အကဲဖြတ်မှုအတွက် P တန်ဖိုး < 0.0001 နဲ့ အလေးချိန်အတွက် အရေးမကြီးပါဘူး) လိုမျိုး anthracnose ကို ခံနိုင်ရည်မြင့်မားတာကို ပြသခဲ့ပါတယ်။ (Lanr1 သို့မဟုတ် AnMan genotypes တွေနဲ့ နှိုင်းယှဉ်လို့ရတဲ့ ဒါမှမဟုတ် ပိုများတဲ့)။有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疈病抗斧Man (1与基因型相当或更高),例如Boregine(两个参数的P 值< 0.0001)၊ Bojar (P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b (得分P值< 0.0001，重量不显着) “ပဋိပစ္စည်း” အမှတ်အသားများ မရှိသော NLL စနစ်အချို့တွင် Boregine (နှစ်ခုစလုံး P < 0.0001)၊ Bojar (P တန်ဖိုး < 0.0001၊ အပင်အလေးချိန် 0.001) နှင့် မျိုးကွဲ B-549/79b (P တန်ဖိုး < 0.0001၊ အလေးချိန် အရေးမကြီးပါ) ကဲ့သို့သော မြင့်မားသော အလျားလိုက်ခံနိုင်ရည်ရှိမှုကို ပြသခြင်းမှာ စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းပါသည်။ Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», показалини высти устойчивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P < для 0пр10 оборачение P < для 0пр10 Bojar (значение P <0,0001, масса растения 0,001) и популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна)။ စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းတာက 'ခုခံမှု' အမှတ်အသား မပါရှိတဲ့ NLL မျဉ်းအချို့မှာ Boregine (p တန်ဖိုးအတွက် နှစ်ခုလုံး <0.0001)၊ Bojar (P-တန်ဖိုး < 0.0001၊ အပင်အလေးချိန် 0.001) နဲ့ လူဦးရေ B-549/79b (P-တန်ဖိုး < 0.0001၊ အလေးချိန် အရေးမကြီးပါ) လိုမျိုး အန်သရက်နို့စ် ခံနိုင်ရည် မြင့်မားတာကို ပြသခဲ့ပါတယ်။ (Lanr1 သို့မဟုတ် AnMan genotypes တွေနဲ့ နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည် သို့မဟုတ် ပိုများပါတယ်။)ဤဖြစ်စဉ်သည် ခုခံအား၏ မျိုးရိုးဗီဇရင်းမြစ်အသစ်တစ်ခု၏ ဖြစ်နိုင်ခြေကို အကြံပြုထားပြီး၊ အမှတ်အသားမျိုးရိုးဗီဇများနှင့် ရောဂါဖြစ်စဉ်များအကြား ဆက်စပ်မှုမရှိခြင်းကို တွေ့ရှိရသည် (~0.42 မှ ~0.98 အထိ P တန်ဖိုးများ) ကို ရှင်းပြသည်။ ထို့ကြောင့် Kolmogorov-Smirnov စမ်းသပ်မှုက အန်သရက်နို့စ်ခံနိုင်ရည်ရှိမှုဆိုင်ရာ ဒေတာများသည် ရမှတ်များ (P-တန်ဖိုးများ 0.25 နှင့် 0.11) နှင့် အပင်ထုထည် (P-တန်ဖိုးများ 0.47 နှင့် 0.55) အတွက် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် ပုံမှန်ဖြန့်ဝေထားကြောင်း ပြသခဲ့ပြီး၊ Lanr1 နှင့် AnMan ထက် alleles ပိုများပါဝင်သည်ဟု ကျွန်ုပ်ယူဆကြောင်း အကြံပြုထားသည်။
အန်သရက်နိုစ် ခံနိုင်ရည်ရှိမှု စစ်ဆေးခြင်း ရလဒ်များအပေါ် အခြေခံ၍ transcriptome ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် လိုင်း ၄ ခုကို ရွေးချယ်ခဲ့သည်- 83A:476၊ Boregine၊ Mandelup နှင့် Population 22660။ ယခင်စမ်းသပ်မှုနှင့် အတူတူပင်ဖြစ်ပါက ဤလိုင်းများကို RNA sequencing ဖြင့် ကာကွယ်ဆေးထိုးခြင်း စမ်းသပ်မှုများတွင် အန်သရက်နိုစ် ခံနိုင်ရည်ရှိမှုကို ပြန်လည်စမ်းသပ်ခဲ့သည်။ ရမှတ်တန်ဖိုးများမှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်- Boregin (1.71 ± 1.39)၊ 83A: 476 (2.09 ± 1.38)၊ Mandelup (3.82 ± 1.42) နှင့် population 22660 (6.11 ± 1.29)။
Illumina NovaSeq 6000 ပရိုတိုကောသည် နမူနာတစ်ခုလျှင် ပျမ်းမျှ Mread အတွဲ ၄၀.၅ တွဲ (၂၉.၇ မှ ၅၄.၄ Mreads) ရရှိခဲ့သည် (နောက်ဆက်တွဲဇယား S3)။ ရည်ညွှန်းအစီအစဉ်တွင် ချိန်ညှိမှုရမှတ်များသည် ၇၅.၅% မှ ၈၈.၆% အထိ ရှိသည်။ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ပုံတူပွားများအကြား စမ်းသပ်မျိုးကွဲများအကြား ဖတ်ရှုမှုအရေအတွက်ဒေတာ၏ ပျမ်းမျှဆက်စပ်မှုသည် ၀.၈၁၂ မှ ၀.၉၉၇ (ပျမ်းမျှ ၀.၉၅၉) အထိ ရှိသည်။ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော မျိုးဗီဇ ၃၅,၁၇၀ တွင် ၂၉၁၇ ခုသည် မည်သည့်ဖော်ပြမှုကိုမျှ မဖော်ပြဘဲ အခြားမျိုးဗီဇ ၄၇၈၅ ခုသည် မပြောပလောက်သောအဆင့်တွင် ဖော်ပြခဲ့သည် (အခြေခံပျမ်းမျှ < 5)။ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော မျိုးဗီဇ ၃၅,၁၇၀ တွင် ၂၉၁၇ ခုသည် မည်သည့်ဖော်ပြမှုကိုမျှ မဖော်ပြဘဲ အခြားမျိုးဗီဇ ၄၇၈၅ ခုသည် မပြောပလောက်သောအဆင့်တွင် ဖော်ပြခဲ့သည် (အခြေခံပျမ်းမျှ < 5)။ Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрессирова незначительном уровне (базовое среднее <5)။ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော မျိုးဗီဇ ၃၅,၁၇၀ တွင် ၂၉၁၇ ခုသည် ဖော်ပြမှုမပြသဘဲ ကျန်ရှိသော မျိုးဗီဇ ၄၇၈၅ ခုသည် မပြောပလောက်သော အဆင့်တွင် ဖော်ပြခံခဲ့ရသည် (အခြေခံပျမ်းမျှ <၅)။在分析的35,170个基因中，2917 个没有表达，其他4785个基因的表达可以忽略不计（幇因的表达可以忽略不计（幇最））၃၅,၁၇၀ Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели неэзнисьрит (базовое среднее значение <5)။ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော မျိုးဗီဇ ၃၅,၁၇၀ တွင် ၂၉၁၇ ခုကို ဖော်ပြခြင်းမရှိခဲ့ဘဲ ကျန်ရှိသော မျိုးဗီဇ ၄၇၈၅ ခုတွင် မပြောပလောက်သော ဖော်ပြမှုသာ ရှိခဲ့သည် (အခြေခံပျမ်းမျှ <5)။ထို့ကြောင့်၊ စမ်းသပ်မှုအတွင်း ဖော်ပြခဲ့သည်ဟု ယူဆရသော မျိုးဗီဇအရေအတွက် (အခြေခံပျမ်းမျှ ≥ 5) မှာ ၂၇,၄၆၈ (၇၈.၁%) ဖြစ်သည် (နောက်ဆက်တွဲဇယား S4)။
ပထမအကြိမ်အချိန်မှစ၍ NLL မျဉ်းအားလုံးသည် C. lupini (မျိုးကွဲ Col-08) ကို transcriptome ကို ပြန်လည်ပရိုဂရမ်ရေးသားခြင်းဖြင့် တုံ့ပြန်ခဲ့သည် (ဇယား ၁)၊ သို့သော် မျဉ်းများအကြား သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်များကို တွေ့ရှိခဲ့ရသည်။ ထို့ကြောင့် Lanr1 မျိုးဗီဇကို သယ်ဆောင်ထားသော resistance မျဉ်း 83A:476 သည် ပထမအကြိမ်အချိန် (6 hpi) တွင် သိသာထင်ရှားသော transcriptome ပြန်လည်ပရိုဂရမ်ရေးသားခြင်းကို ပြသခဲ့ပြီး ဤအချိန်ရှိ အခြားအချိန်များနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော up-down မျိုးဗီဇအရေအတွက် 31-69 ဆ တိုးလာခဲ့သည်။ ထို့အပြင်၊ ဤအထွတ်အထိပ်သည် ခဏတာသာ ကြာမြင့်ခဲ့ပြီး၊ ဒုတိယအကြိမ်အချိန် (12 hpi) တွင် မျိုးဗီဇအနည်းငယ်သာ သိသိသာသာပြောင်းလဲနေခဲ့သည်။ စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းသည်မှာ graft စမ်းသပ်မှုတွင် ခုခံမှုမြင့်မားစွာပြသခဲ့သော Boregine သည် စမ်းသပ်မှုအတွင်း ဤမျှကြီးမားသော transcriptional reprogramming ကို မခံခဲ့ရပါ။ သို့သော် 12 HPI တွင် differentially expressed မျိုးဗီဇအရေအတွက် (DEG) သည် Boregine နှင့် 83A:476 အတွက် အတူတူပင်ဖြစ်သည်။ Mandelup နှင့် လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ နှစ်ခုစလုံးသည် နောက်ဆုံးအချိန်အမှတ် (၄၈ လီတာ/စက္ကန့်) တွင် DEG အမြင့်ဆုံးများကို ပြသခဲ့ပြီး ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများတွင် နှိုင်းရနှောင့်နှေးမှုကို ညွှန်ပြနေသည်။
83A:476 သည် အခြားမျိုးစိတ်အားလုံးနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက 6 HPI တွင် C. lupini ကို တုံ့ပြန်သည့်အနေဖြင့် ကြီးမားသော transcriptome reprogramming ကို ခံယူခဲ့သောကြောင့်၊ ဤအချိန်တွင် တွေ့ရှိရသည့် DEG များ၏ ~91% သည် မျိုးရိုးအလိုက်ဖြစ်သည် (ပုံ ၁)။ သို့သော်၊ လေ့လာမှုမျိုးစိတ်များအကြား အစောပိုင်းတုံ့ပြန်မှုများတွင် ထပ်တူအချို့ရှိခဲ့ပြီး Boregine၊ Mandelup နှင့် လူဦးရေ 22660 ရှိ 68.5%၊ 50.9% နှင့် 52.6% DEG များသည် အချိန်အတိုင်းအတာတစ်ခုအတွင်း 83A:476 တွင်တွေ့ရှိရသည့် DEG များနှင့် ထပ်တူကျခဲ့သည်။ သို့သော်၊ ဤ DEG များသည် 83A:476 ကို အသုံးပြု၍ လက်ရှိတွေ့ရှိရသော DEG အားလုံး၏ အနည်းငယ်သော အစိတ်အပိုင်း (0.97–1.70%) သာရှိသည်။ ထို့အပြင်၊ လိုင်းအားလုံးမှ DEG ၁၁ ခုသည် ဤအချိန်တွင် ညီညွတ်မှုရှိသည် (Supplementary Tables S4-S6)၊ အပင်ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများ၏ ဘုံအစိတ်အပိုင်းများဖြစ်သည့် lipid transfer protein (TanjilG_32225)၊ endoglucan-1,3-β-glucoside enzyme (TanjilG_23384)၊ SAM22 (TanjilG_31528 နှင့် TanjilG_31531) ကဲ့သို့သော ဖိစီးမှုဖြစ်စေသော ပရိုတိန်းနှစ်ခု၊ အခြေခံ latex ပရိုတိန်း (TanjilG_32352) နှင့် glycine ကြွယ်ဝသော ဖွဲ့စည်းပုံဆိုင်ရာ ဆဲလ်နံရံပရိုတိန်းနှစ်ခု (TanjilG_19701 နှင့် TanjilG_19702) တို့ပါဝင်သည်။ transcriptome တုံ့ပြန်မှုများတွင် 24 HPI (စုစုပေါင်း 16-38% DEG) တွင် 83A:476 နှင့် Boregine အကြားနှင့် 48 HPI (စုစုပေါင်း 14-20% DEG) တွင် Mandelup နှင့် Population 22660 အကြား transcriptome တုံ့ပြန်မှုများတွင်လည်း အတော်လေးမြင့်မားသော ထပ်တူကျမှုရှိသည်။
Colletotrichum lupini (ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Wierzhenice ရှိ lupine လယ်ကွင်းများမှရရှိသော Col-08 မျိုးကွဲ၊ ၁၉၉၉) ဖြင့် ထိုးသွင်းထားသော narrow-leaved lupine (NLL) မျဉ်းများတွင် မတူညီသော ဖော်ပြထားသော မျိုးဗီဇ (DEG) အရေအတွက်ကိုပြသသည့် Venn diagram။ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော NLL မျဉ်းများမှာ- 83A:476 (ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး Lanr1 allele သယ်ဆောင်ထားသည်)၊ Boregine (ခံနိုင်ရည်ရှိသည်၊ မျိုးရိုးဗီဇနောက်ခံမသိရ)၊ Mandelup (အတန်အသင့်ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး AnMan allele သယ်ဆောင်ထားသည်) နှင့် population 22660 (အလွန်ထိခိုက်လွယ်သည်) တို့ဖြစ်သည်။ hpi အတိုကောက်သည် ကာကွယ်ဆေးထိုးပြီးနောက် နာရီပေါင်းများစွာကြာပြီးနောက်ဖြစ်သည်။ ဂရပ်ကို ရိုးရှင်းစေရန်အတွက် သုညတန်ဖိုးများကို ဖယ်ရှားထားသည်။
6 hpi ရှိ အလွန်အကျွံဖော်ပြသော မျိုးဗီဇအစုကို canonical R မျိုးဗီဇဒိုမိန်းများ ရှိနေခြင်း ရှိမရှိ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည် (Supplementary Table S7)။ ဤလေ့လာမှုသည် 83A:476 တွင်သာ NBS-LRR ဒိုမိန်းများရှိသော ဂန္ထဝင်ရောဂါခုခံနိုင်သော မျိုးဗီဇများ၏ transcriptome induction ကို ဖော်ပြသည်။ ဤအစုတွင် TIR-NBS-LRR မျိုးဗီဇတစ်ခု (tanjilg_05042)၊ CC-NBS-LRR မျိုးဗီဇငါးခု (tanjilg_06165၊ tanjilg_06162၊ tanjilg_22773၊ tanjilg_22640 နှင့် tanjilg_16162)၊ နှင့် NBS-LR, Tanjilg_16162 လေးခု၊ နှင့် NBS-LRRE (tanjilg_16162) လေးခုအပြင် NBS-Lrr (tanjilg_16162) လေးခုနှင့် NBS-LRR (TANJILG_16162) လေးခု ပါဝင်သည်။ ဤမျိုးဗီဇအားလုံးတွင် ထိန်းသိမ်းထားသော အစီအစဥ်များတွင် စီစဉ်ထားသော canonical domain များရှိသည်။ NBS-LRR ဒိုမိန်း မျိုးဗီဇများအပြင်၊ 6 hpi တွင် RLL kinases အများအပြား အသက်ဝင်လှုပ်ရှားလာပြီး၊ ဆိုလိုသည်မှာ Boregine (TanjilG_19877) တွင် တစ်ခု၊ Mandelup (TanjilG_07141 နှင့် TanjilG_19877) တွင် နှစ်ခုနှင့် လူဦးရေ 22660 (TanjilG_09014 နှင့် TanjilG_10361) တွင် နှစ်ခုနှင့် 83A 27:476 တွင် နှစ်ခုဖြစ်သည်။
C. lupini (strain Col-08) ဖြင့် ထိုးနှံခြင်းအပေါ် တုံ့ပြန်မှုအနေဖြင့် သိသိသာသာပြောင်းလဲသွားသော မျိုးဗီဇများကို Gene Ontology (GO) enrichment analysis (Supplementary Table S8) ဖြင့် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစဉ်ဆိုင်ရာ အသုံးအနှုန်းကို အများဆုံး အလွန်အကျွံ ဖော်ပြလေ့ရှိသည်မှာ “GO:0006952 ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှု” ဖြစ်ပြီး ၎င်းသည် ၁၆ ခု (အချိန် × မျဉ်း) ပေါင်းစပ်မှုတွင် ၆ ခုတွင် မြင့်မားသော သိသာထင်ရှားမှုဖြင့် ပေါ်လာခဲ့သည် (P တန်ဖိုး < 0.001) (ပုံ ၂)။ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစဉ်ဆိုင်ရာ အသုံးအနှုန်းကို အများဆုံး အလွန်အကျွံ ဖော်ပြလေ့ရှိသည်မှာ “GO:0006952 ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှု” ဖြစ်ပြီး ၎င်းသည် ၁၆ ခု (အချိန် × မျဉ်း) ပေါင်းစပ်မှုတွင် ၆ ခုတွင် မြင့်မားသော သိသာထင်ရှားမှုဖြင့် ပေါ်လာခဲ့သည် (P တန်ဖိုး < 0.001) (ပုံ ၂)။ Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 зыйкитный появлялся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစဉ်ဆိုင်ရာ အသုံးအနှုန်းကို အများဆုံး အလွန်အကျွံ ဖော်ပြလေ့ရှိသော 'GO:0006952 defense response' ဖြစ်ပြီး၊ ၎င်းသည် ၁၆ ခု (အချိန် × မျိုးရိုး) ပေါင်းစပ်မှုများအနက် ၆ ခုတွင် မြင့်မားသော သိသာထင်ရှားမှု (P တန်ဖိုး < 0.001) ဖြင့် ပေါ်လာသည် (ပုံ ၂)။最常被过度代表的生物过程术语是“GO: 0006952 防御反应”，它出的现在16 个（时痸×琿）个中，具有高显着性（P值<0.001）（图2）။ အကိုယ်စားပြုဆုံး ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစဉ် အသုံးအနှုန်းမှာ “GO:0006952 ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှု” ဖြစ်ပြီး၊ ၎င်းသည် (时间×线) ပေါင်းစပ်မှု ၁၆ ခုအနက် ၆ ခုတွင် မြင့်မားသော သိသာထင်ရှားမှုဖြင့် ပေါ်လာသည် (P တန်ဖိုး < 0.001) (图2)။ Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был « от : 0006952 ကာကွယ်ရေးဝန်ကြီး တုံ့ပြန်မှု слоя , из 16 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစဉ်ဆိုင်ရာ အသုံးအနှုန်းကို အများဆုံး အလွန်အကျွံ ဖော်ပြလေ့ရှိသည့် 'GO:0006952 Defense Response' ဖြစ်ပြီး၊ ၎င်းသည် ပေါင်းစပ်မှု ၁၆ ခုအနက် ၆ ခု (အချိန် × မျဉ်း) တွင် သိသာထင်ရှားမှု မြင့်မားစွာ ပေါ်လာသည် (P တန်ဖိုး < 0.001) (ပုံ ၂)။ဤအသုံးအနှုန်းကို 83A: 476 နှင့် Boregine (6 နှင့် 24 hpi) တွင် အချိန်အမှတ်နှစ်ခုတွင် အလွန်အကျွံဖော်ပြခဲ့ပြီး Mandelup နှင့် Population 22660 (12 နှင့် 6 hpi အသီးသီး) တွင် အချိန်အမှတ်တစ်ခုတွင် ဖော်ပြခဲ့သည်။ ၎င်းသည် ခံနိုင်ရည်ရှိသော မျိုးစိတ်များ၏ မှိုပိုးသတ်ဆေးတုံ့ပြန်မှုကို မီးမောင်းထိုးပြသည့် မျှော်လင့်ထားသည့်ရလဒ်တစ်ခုဖြစ်သည်။ ထို့အပြင်၊ 83A:476 သည် C. lupini ကို “GO:0055114 redox လုပ်ငန်းစဉ်” ဟူသော ဝေါဟာရဖြင့် ကိုယ်စားပြုသည့် အောက်ဆီဒေးရှင်းပေါက်ကွဲမှုနှင့် ဆက်စပ်သော မျိုးဗီဇများကို လျင်မြန်စွာလှုံ့ဆော်ခြင်းဖြင့် တုံ့ပြန်ခဲ့ပြီး၊ ၎င်းသည် သီးခြားကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုကို ညွှန်ပြနေပြီး Boregine သည် 'GO' ဟူသော ဝေါဟာရနှင့် ဆက်စပ်သော သီးခြားကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများကို ဖော်ပြခဲ့သည်။ :0006950 စိတ်ဖိစီးမှုတုံ့ပြန်မှု”။ လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ သည် ဒုတိယဇီဝဖြစ်စဉ်များပါဝင်သည့် အလျားလိုက်ခုခံမှုတုံ့ပြန်မှုကို အသက်သွင်းခဲ့ပြီး၊ “GO:0016104 triterpene ဇီဝပေါင်းစပ်ဖြစ်စဉ်” နှင့် “GO:0006722 triterpene ဇီဝဖြစ်စဉ်” (နှစ်မျိုးလုံးသည် မျိုးဗီဇအစုံတစ်ခုတည်းနှင့်သက်ဆိုင်သည်) ဟူသော အသုံးအနှုန်းများ အလွန်အကျွံကို မီးမောင်းထိုးပြခဲ့ပြီး၊ GO term enrichment analysis ၏ရလဒ်များကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားလျှင် Mandelup တုံ့ပြန်မှုတည်ငြိမ်မှုသည် Boregine နှင့် လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ အကြားတွင်ရှိသည်။ ထို့အပြင်၊ အစောပိုင်းတုံ့ပြန်မှု 83A:476 (6 hpi) နှင့် နှောင့်နှေးသောတုံ့ပြန်မှု Mandelup နှင့် လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ တွင် GO:0015979 'photosynthesis' ဟူသော အသုံးအနှုန်းနှင့် အခြားဆက်စပ်ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာလုပ်ငန်းစဉ်များ ပါဝင်သည်။
anthrax lupine (၁၉၉၉ ခုနှစ်တွင် ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Wierzhenice ရှိ lupine လယ်ကွင်းများမှရရှိသော Col-08 မျိုးကွဲ) ဖြင့် ထိုးသွင်းထားသော narrow-leaved lupine (NLL) ၏ transcriptome တုံ့ပြန်မှုများအတွင်း မတူညီသော မျိုးဗီဇများ၏ annotation တွင် ရွေးချယ်ထားသော bioprocess gene ontology term များသည် အလွန်ချဲ့ကားထားခြင်းဖြစ်သည်။ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော NLL မျဉ်းများမှာ- 83A:476 (ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous Lanr1 allele သယ်ဆောင်ထားသည်)၊ Boregine (ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး မသိရသေးသော မျိုးရိုးဗီဇနောက်ခံ)၊ Mandelup (အတန်အသင့်ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous AnMan allele သယ်ဆောင်ထားသည်) နှင့် population 22660 (ခံနိုင်ရည်ရှိသည်) တို့ဖြစ်သည်။
ဤလေ့လာမှုသည် အန်သရက်နို့စ် ခံနိုင်ရည်ရှိစေသော မျိုးဗီဇများကို ဖော်ထုတ်ရန် ရည်ရွယ်သောကြောင့်၊ GO “GO: 0006952 ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများ” နှင့် “GO: 0055114 Redox လုပ်ငန်းစဉ်များ” ဟူသော အသုံးအနှုန်းများအတွက် သတ်မှတ်ထားသော မျိုးဗီဇများကို အခြေခံပျမ်းမျှ ≥ 30 ဖြင့် အနည်းဆုံး မျဉ်းတစ်ကြောင်းဖြင့် ဖြတ်တောက်မှုများဖြင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ × log2 ၏ စာရင်းအင်းအရ သိသာထင်ရှားသော တန်ဖိုးများ (ခေါက်ပြောင်းလဲမှု) ပေါင်းစပ်ထားသည့် အချိန်အတွင်း အမှတ်။ ဤစံနှုန်းများနှင့် ကိုက်ညီသော မျိုးဗီဇအရေအတွက်မှာ GO:0006952 အတွက် 65 ခုနှင့် GO:0055114 အတွက် 524 ခုဖြစ်သည်။
83A:476 တွင် GO:0006952 ဟူသော အသုံးအနှုန်းဖြင့် မှတ်ချက်ပြုထားသော DEG ထိပ်နှစ်ခုကို ဖော်ပြခဲ့ပြီး ပထမတစ်ခုမှာ တစ်လက်မလျှင် မျိုးဗီဇ ၆ ခု (မျိုးဗီဇ ၆၄ ခု၊ အပေါ်အောက် ထိန်းညှိမှု) နှင့် ဒုတိယတစ်ခုမှာ တစ်လက်မလျှင် မျိုးဗီဇ ၂၄ ခု (မျိုးဗီဇ ၁၅ ခု၊ အပေါ်အောက် ထိန်းညှိမှုသာ) တွင် ရှိသည်။ Boregine ကလည်း GO:0006952 သည် တစ်ချိန်တည်းတွင် ထိပ်သို့ရောက်ရှိခဲ့သော်လည်း DEG နည်းပြီး (၁၁ နှင့် ၈) ဦးစားပေး activation ရှိကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ Mandeloop သည် GO:0006952 ၏ ၁၂ နှင့် ၄၈ HPI တွင် ထိပ်နှစ်ခုကို ပြသခဲ့ပြီး နှစ်ခုစလုံးတွင် မျိုးဗီဇ ၁၂ ခု (ပထမတစ်ခုမှာ activating မျိုးဗီဇပါရှိပြီး ဒုတိယတစ်ခုမှာ ဖိနှိပ်မျိုးဗီဇများသာပါရှိသည်) ပါရှိပြီး HPI ၆ ခု (မျိုးဗီဇ ၁၃ ခု) တွင် လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ တွင် တိုးမြင့်မှု ထိန်းညှိမှု ပိုမိုများပြားသည်။ ဤထိပ်များရှိ GO:0006952 DEG ၏ ၉၆.၄% တွင် တူညီသောတုံ့ပြန်မှုအမျိုးအစား (အပေါ် သို့မဟုတ် အောက်) ရှိကြောင်း သတိပြုသင့်ပြီး ပါဝင်ပတ်သက်သော မျိုးဗီဇအရေအတွက် ကွာခြားမှုများရှိသော်လည်း ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများတွင် သိသာထင်ရှားသော ထပ်တူကျမှုကို ညွှန်ပြသည်။ GO:0006952 ဟူသော အသုံးအနှုန်းနှင့် ဆက်စပ်နေသော အကြီးဆုံး sequence အုပ်စုသည် Starvation Stress-Associated Message Protein 22 (SAM22-like) ကို encode လုပ်ထားပြီး ၎င်းသည် class 10 pathogenesis-associated protein (PR-10) protein clade နှင့် core protein latex. similar (MLP-like) protein) protein (ပုံ ၃) နှင့် သက်ဆိုင်သည်။ အုပ်စုနှစ်စုသည် expression ၏ သဘောသဘာဝနှင့် response ၏ ဦးတည်ရာတွင် ကွဲပြားသည်။ SAM22-like protein များကို encode လုပ်သော genes များသည် အစောပိုင်းအချိန်အမှတ်များ (6 သို့မဟုတ် 12 hpi) တွင် တသမတ်တည်းနှင့် သိသာထင်ရှားသော induction ကို ပြသခဲ့ပြီး စမ်းသပ်မှုအဆုံး (48 hpi) တွင် ယေဘုယျအားဖြင့် တုံ့ပြန်မှုမရှိခဲ့ဘဲ MLP-like protein များသည် 6 hpi. hpi. 83A:476 နှင့် Mandelup 48 hp/in တွင် ညှိနှိုင်းမှုကို ပြသခဲ့ပြီး အခြား data point အားလုံးနီးပါးသည် တုံ့ပြန်မှုမရှိခဲ့ပါ။ ထို့အပြင်၊ SAM22-like protein genes များ၏ expression profile များတွင် ကွဲပြားမှုများသည် anthracnose ခံနိုင်ရည်ရှိမှုတွင် ကွဲပြားမှုကို တွေ့ရှိရပြီး ပိုမိုခံနိုင်ရည်ရှိသော line များတွင် ဤ genes များကို ပိုမိုခံနိုင်ရည်ရှိသော genes များထက် သိသိသာသာ induce လုပ်သော time point များ ပိုမိုရှိသောကြောင့်ဖြစ်သည်။ နောက်ထပ် LlR18A/B နှင့်ဆင်တူသော PR-10 မျိုးဗီဇတစ်ခုသည် SAM22 နှင့်ဆင်တူသော ပရိုတင်းမျိုးဗီဇနှင့် အလွန်ဆင်တူသော ဖော်ပြမှုပုံစံကို ပြသခဲ့သည်။
ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစဉ် အသုံးအနှုန်း “GO:0006952 Defense Response” ၏ အဓိက အစိတ်အပိုင်းများနှင့် Lanr1 နှင့် AnMan alleles များ၏ ကိုယ်စားလှယ် မျိုးဗီဇများ၏ ဖော်ပြမှုပုံစံများကို ဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ Log2 စကေးသည် တစ်ချိန်တည်းတွင် ထိုးနှံထားသော (Colletotrichum lupini၊ မျိုးကွဲ Col-08၊ lupine လယ်ကွင်းများ၊ Wizhenica၊ Poland၊ 1999 မှ ရရှိသည်) နှင့် ထိန်းချုပ်ထားသော (အတုအယောင် ထိုးနှံထားသော) အပင်များအကြား log2 တန်ဖိုးများ (ခေါက်ပြောင်းလဲမှု) ကို ကိုယ်စားပြုသည်။ အောက်ပါ narrowleaf lupine မျိုးစိတ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်- 83A:476 (ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous Lanr1 allele သယ်ဆောင်သည်)၊ Boregine (ခံနိုင်ရည်ရှိသည်၊ မျိုးရိုးဗီဇနောက်ခံ မသိရှိပါ)၊ Mandelup (အတန်အသင့် ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous AnMan allele သယ်ဆောင်သည်) နှင့် Population 22660 (ထိခိုက်လွယ်သည်)။
ထို့အပြင်၊ RNA-seq candidate genes Lanr1 (TanjilG_05042) နှင့် AnMan (TanjilG_12861) ၏ expression profile များကို အကဲဖြတ်ခဲ့သည် (ပုံ ၃)။ TanjilG_05042 gene သည် 83A:476 တွင် ပထမအကြိမ်အမှတ် (6 hpi) တွင်သာ သိသာထင်ရှားသော response (activation) ကို ပြသခဲ့ပြီး TanjilG_12861 သည် Mandeloop တွင် အချိန်အမှတ်နှစ်ခုတွင်သာ သိသာထင်ရှားခဲ့သည်- 6 hpi (down regulation) နှင့် 24 hpi (6 hpi)။ နှင့်အတူ။). ချိန်ညှိနိုင်သည်))။
GO:0055114 “redox လုပ်ငန်းစဉ်” ဟူသော အသုံးအနှုန်းတွင် အများဆုံး အလွန်အကျွံ ဖော်ပြထားသော မျိုးဗီဇများမှာ cytochrome P450 ပရိုတင်းများနှင့် peroxidase ကို encode လုပ်သော မျိုးဗီဇများဖြစ်သည် (ပုံ ၄)။ 6 HPI တွင် 83A:476 မှ ခွဲထုတ်ထားသော နမူနာများအတွက်၊ အမြင့်ဆုံး သို့မဟုတ် အနည်းဆုံး log2 (fold change) တန်ဖိုးများ (မျိုးဗီဇများ၏ 86.6% အတွက်) ကို ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော အပင်များနှင့် ထိန်းချုပ်မှုအပင်များကြားတွင် ယေဘုယျအားဖြင့် တွေ့ရှိခဲ့ရပြီး၊ ဤမျိုးဗီဇအမျိုးအစား၏ ကာကွယ်ဆေးထိုးခြင်း လိင်အပေါ် မြင့်မားသော တုံ့ပြန်မှုကို မီးမောင်းထိုးပြခဲ့သည်။ 83A:476 သည် 6 hpi (မျိုးဗီဇ 503 ခု) တွင် အရေးအကြီးဆုံး GO: 0055114 DEG ကို ပြသခဲ့ပြီး၊ ကျန်မျိုးစိတ်များမှာ 48 hpi (Boregine၊ မျိုးဗီဇ 31 ခု၊ Mandelup၊ မျိုးဗီဇ 85 ခု၊ နှင့် Population 22660၊ မျိုးဗီဇ 78 ခု) တွင် ပြသခဲ့သည်။ GO:0055114 မိသားစု၏ မျိုးဗီဇအများစုတွင် ကာကွယ်ဆေးထိုးခြင်းအပေါ် တုံ့ပြန်မှုနှစ်မျိုး (activation နှင့် inhibition) ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းတာက Mandelupe မှာ 48 hp မှာ GO: 0055114 အသုံးအနှုန်းအတွက် DEG တွေရဲ့ 97.6% အထိ ဖော်ထုတ်ထားပါတယ်။ ဒီလေ့လာတွေ့ရှိချက်တွေအရ သိသိသာသာ သေးငယ်တဲ့ စကေး (ဆိုလိုသည်မှာ မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှု redox အရေအတွက်၊ 85 နဲ့ 503) ရှိပေမယ့် mandeloup ရဲ့ anthracnose ကို နှောင့်နှေးတဲ့ transcriptome တုံ့ပြန်မှုပုံစံဟာ 83A:476 ရဲ့ အစောပိုင်းတုံ့ပြန်မှုနဲ့ ဆင်တူတယ်လို့ အကြံပြုထားပါတယ်။ Boregine နဲ့ Population 22660 မှာ ဒီပေါင်းစည်းမှုဟာ အသီးသီး 51.6% နဲ့ 75.6% မှာ နိမ့်ကျနေပါတယ်။
ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာလုပ်ငန်းစဉ် “GO:0055114 Redox လုပ်ငန်းစဉ်” ၏ အဓိကအစိတ်အပိုင်းများ၏ ဖော်ပြမှုပုံစံများကို ဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ Log2 စကေးသည် တစ်ချိန်တည်းတွင် ထိုးနှံထားသော (Colletotrichum lupini၊ မျိုးကွဲ Col-08၊ lupine လယ်ကွင်းများ၊ Wizhenica၊ ပိုလန်၊ ၁၉၉၉) နှင့် ထိန်းချုပ်ထားသော (အတုအယောင်ထိုးနှံထားသော) အပင်များအကြား log2 တန်ဖိုးများ (ခေါက်ပြောင်းလဲမှု) ကို ကိုယ်စားပြုသည်။ အောက်ပါ narrowleaf lupine မျိုးစိတ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်- 83A:476 (ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous Lanr1 allele သယ်ဆောင်သည်)၊ Boregine (ခံနိုင်ရည်ရှိသည်၊ မျိုးရိုးဗီဇနောက်ခံမသိရ)၊ Mandelup (အတန်အသင့်ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous AnMan allele သယ်ဆောင်သည်) နှင့် Population 22660 (ထိခိုက်လွယ်သည်)။
83A:476 C. lupini (မျိုးကွဲ Col-08) ဖြင့် ထိုးနှံခြင်းအပေါ် Transcriptomic တုံ့ပြန်မှုများတွင် GO:0015979 “photosynthesis” ဟူသော အသုံးအနှုန်းနှင့် အခြားဆက်စပ်ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစဉ်များကို ပေါင်းစပ်ထားသော မျိုးဗီဇများ၏ ညှိနှိုင်းတိတ်ဆိတ်ခြင်းလည်း ပါဝင်သည် (ပုံ ၅)။ ဤ GO:0015979 DEG အစုံတွင် 83A:476 တွင် 6 hpi တွင် သိသိသာသာ ဖိနှိပ်ခံထားရသော မျိုးဗီဇ ၁၀၅ ခု ပါဝင်သည်။ ဤအစုအဖွဲ့ခွဲတွင်၊ Mandelup တွင် 22660 လူဦးရေတွင် 48 HPI နှင့် တစ်ချိန်တည်းတွင် 35 မျိုးဗီဇများကိုလည်း downregulated လုပ်ခဲ့ပြီး မျိုးဗီဇနှစ်မျိုးလုံးအတွက် ဘုံဖြစ်သော DEG ၁၉ ခု ပါဝင်သည်။ GO: 0015979 ဟူသော အသုံးအနှုန်းနှင့် ဆက်စပ်သော DEG များသည် မည်သည့်ပေါင်းစပ်မှုတွင်မျှ သိသိသာသာ အသက်ဝင်ခြင်းမရှိပါ (လိုင်း x အချိန်)။
ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစဉ် “GO:0015979 အလင်းစွမ်းအင်သုံး ဓာတ်ပြုခြင်း” ဟူသော ဝေါဟာရ၏ အဓိက အစိတ်အပိုင်းများ၏ ဖော်ပြမှုပုံစံများကို ဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ Log2 စကေးသည် တစ်ချိန်တည်းတွင် ထိုးနှံထားသော (Colletotrichum lupini၊ မျိုးကွဲ Col-08၊ lupine လယ်ကွင်းများ၊ Wizhenica၊ ပိုလန်၊ ၁၉၉၉) နှင့် ထိန်းချုပ်ထားသော (အတုအယောင် ထိုးနှံထားသော) အပင်များအကြား log2 တန်ဖိုးများ (ခေါက်ပြောင်းလဲမှု) ကို ကိုယ်စားပြုသည်။ အောက်ပါ narrowleaf lupine မျိုးစိတ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်- 83A:476 (ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous Lanr1 allele သယ်ဆောင်သည်)၊ Boregine (ခံနိုင်ရည်ရှိသည်၊ မျိုးရိုးဗီဇနောက်ခံ မသိရှိပါ)၊ Mandelup (အတန်အသင့် ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous AnMan allele သယ်ဆောင်သည်) နှင့် Population 22660 (ထိခိုက်လွယ်သည်)။
ကွဲပြားသော ဖော်ပြမှု ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု ရလဒ်များနှင့် ရောဂါဖြစ်စေသော မှိုများကို ခုခံကာကွယ်သည့် တုံ့ပြန်မှုများတွင် ပါဝင်နိုင်သည်ဟု ယူဆရသည့်အပေါ် အခြေခံ၍ ဤမျိုးဗီဇခုနစ်မျိုးအစုံကို real-time PCR ဖြင့် ဖော်ပြမှုပရိုဖိုင်များကို ပမာဏသတ်မှတ်ရန် ရွေးချယ်ခဲ့သည် (Supplementary Table S9)။
TanjilG_10657 ပရိုတိန်းဂျင်းသည် ထိန်းချုပ် (အတုယူထားသော) အပင်များနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက လေ့လာခဲ့သော မျဉ်းကြောင်းများနှင့် အချိန်အမှတ်အားလုံးတွင် သိသိသာသာ လှုံ့ဆော်မှုပေးခံခဲ့ရသည် (Supplementary Tables S10, S11)။ ထို့အပြင်၊ TanjilG_10657 ၏ expression profile သည် မျဉ်းကြောင်းအားလုံးအတွက် စမ်းသပ်မှုကာလအတွင်း တိုးလာသော လမ်းကြောင်းကို ပြသခဲ့သည်။ လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ သည် TanjilG_10657 ၏ 114-fold activation ဖြင့် ထိုးနှံခြင်းအပေါ် အမြင့်ဆုံး sensitivity နှင့် အမြင့်ဆုံး relative expression level (4.4 ± 0.4) ကို 24 HPI တွင် ပြသခဲ့သည် (ပုံ ၆က)။ PR10 LlR18A ပရိုတိန်းဂျင်း TanjilG_27015 သည်လည်း မျဉ်းကြောင်းများနှင့် အချိန်အမှတ်အားလုံးတွင် activation ကို ပြသခဲ့ပြီး ဒေတာအမှတ်အများစုတွင် စာရင်းအင်းဆိုင်ရာ အရေးပါမှုရှိကြောင်း ပြသခဲ့သည် (ပုံ ၆ခ)။ TanjilG_10657 နှင့်ဆင်တူသည်မှာ TanjilG_27015 ၏ အမြင့်ဆုံး relative expression အဆင့်ကို 24 HPI (19.5 ± 2.4) တွင် ထိုးနှံထားသော လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ တွင် တွေ့ရှိရသည်။ အက်ဆစ် endochitinase မျိုးဗီဇ TanjilG_04706 သည် Boregine 6 hpi (ပုံ 6c) မှလွဲ၍ လိုင်းအားလုံးနှင့် အချိန်အမှတ်အားလုံးတွင် သိသိသာသာ မြင့်တက်လာခဲ့သည်။ ၎င်းကို 83A:476 တွင် ပထမအကြိမ်အမှတ် (6 HPI) တွင် (10.5 ဆ) အားကောင်းစွာ လှုံ့ဆော်ခဲ့ပြီး အခြားလိုင်းများတွင် အသင့်အတင့် မြင့်တက်လာခဲ့သည် (6.6-7.5 ဆ)။ စမ်းသပ်မှုအတွင်း TanjilG_04706 ၏ expression သည် 83A:476 နှင့် Boregine တွင် အလားတူအဆင့်တွင် ရှိနေခဲ့ပြီး Mandelup နှင့် Population 22660 တွင် သိသိသာသာ မြင့်တက်လာခဲ့ပြီး အတော်လေး မြင့်မားသော တန်ဖိုးများ (5.9 ± 1.5 နှင့် 6.2 ± 1.5 အသီးသီး) သို့ ရောက်ရှိခဲ့သည်။ endoglucan-1,3-β-glucosidase-like gene TanjilG_23384 သည် လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ (ပုံ ၆d) မှလွဲ၍ မျဉ်းအားလုံးတွင် ပထမအချိန်အမှတ်နှစ်ခု (၆ နှင့် ၁၂ hpi) တွင် မြင့်မားသော activation ကို ပြသခဲ့သည်။ TanjilG_23384 ၏ အမြင့်ဆုံး relative expression အဆင့်များကို Mandelup (၂.၇ ± ၀.၃) နှင့် 83A:၄၇၆ (၁.၅ ± ၀.၁) တွင် ဒုတိယအချိန်အမှတ် (၁၂ hpi) တွင် တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ၂၄ HPI တွင် TanjilG_23384 expression သည် လေ့လာထားသော မျဉ်းအားလုံးတွင် အတော်လေး နိမ့်ကျနေပါသည် (၀.၀၄ ± ၀.၀၀၉ မှ ၀.၄၄ ± ၀.၁၂)။
အရေအတွက် PCR ဖြင့် ဖော်ထုတ်ထားသော ရွေးချယ်ထားသော မျိုးဗီဇများ (ag) ၏ ဖော်ပြမှုပရိုဖိုင်များ။ ၆၊ ၁၂ နှင့် ၂၄ ဂဏန်းများသည် ကာကွယ်ဆေးထိုးပြီး နာရီအနည်းငယ်အကြာတွင် ကိုယ်စားပြုသည်။ LanDExH7 နှင့် LanTUB6 မျိုးဗီဇများကို ပုံမှန်ဖြစ်စေရန် အသုံးပြုခဲ့ပြီး LanTUB6 ကို စီးရီးများအကြား ချိန်ညှိမှုအတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။ အမှားဘားများသည် ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ထပ်တူပြုမှု သုံးခုအပေါ် အခြေခံသည့် စံသွေဖည်မှုကို ကိုယ်စားပြုပြီး ၎င်းတို့တစ်ခုစီသည် နည်းပညာဆိုင်ရာ ထပ်တူပြုမှု သုံးခု၏ ပျမ်းမျှဖြစ်သည်။ ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော အပင်များ (Colletotrichum lupini၊ မျိုးကွဲ Col-08၊ ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Wierzenica ရှိ lupin လယ်ကွင်းမှ ၁၉၉၉ ခုနှစ်တွင် ရရှိခဲ့သည်) နှင့် ထိန်းချုပ်အပင်များ (အတုကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော) အကြား ဖော်ပြမှုအဆင့်များတွင် ကွာခြားချက်များ၏ စာရင်းအင်းဆိုင်ရာ အရေးပါမှုကို ဒေတာအမှတ်များ (*P တန်ဖိုး < 0.05၊ **P တန်ဖိုး ≤ 0.01၊ ***P တန်ဖိုး ≤ 0.001) အထက်တွင် ဖော်ပြထားသည်။ ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော အပင်များ (Colletotrichum lupini၊ မျိုးကွဲ Col-08၊ ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Wierzenica ရှိ lupin လယ်ကွင်းမှ ၁၉၉၉ ခုနှစ်တွင် ရရှိခဲ့သည်) နှင့် ထိန်းချုပ်အပင်များ (အတုကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော) အကြား ဖော်ပြမှုအဆင့်များတွင် ကွာခြားချက်များ၏ စာရင်းအင်းဆိုင်ရာ အရေးပါမှုကို ဒေတာအမှတ်များ (*P တန်ဖိုး < 0.05၊ **P တန်ဖိုး ≤ 0.01၊ ***P တန်ဖိုး ≤ 0.001) အထက်တွင် ဖော်ပြထားသည်။ Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, Colletotrichum lupini, штамм Col-08 с поля люпина в Верженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечхена на ди чнич* (знами отмечхена на дича*знар 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001)။ ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော အပင်များ (Colletotrichum lupini၊ မျိုးကွဲ Col-08၊ ၁၉၉၉ ခုနှစ်တွင် ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Wierzhenice ရှိ lupine လယ်ကွင်းမှ ရရှိသည်) နှင့် ထိန်းချုပ်အပင်များ (အတုအယောင်ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော) အကြား ဖော်ပြမှုအဆင့်များတွင် စာရင်းအင်းအရ သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်များကို အချက်အလက်အမှတ်များ (*P တန်ဖိုး < 0.05၊ **P-တန်ဖိုး ≤ 0.01၊ ***P-တန်ဖိုး ≤ 0.001) အထက်တွင် မှတ်သားထားပါသည်။接种 (Colletotrichum lupini၊Col-08株၊1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数据点上异<(*P 0.05၊ **P 值≤ 0.01၊ ***P 值≤ 0.001)။接种 (colletotrichum lupini၊ color-08株၊ 1999年波兰波兰wierzenica的羽扇获得)和对照（接种植植植植差异的统计学显着性标记数据点 上方*p 值 <0.05၊ **P ≤ 0.01၊ ***P ≤ 0.001)။ Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, люпина в Верженице, Польша, в 1999 г.) နှင့် контрольными (ложно инокулированными) растениями отмехтены над значение P < 0,05, ** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001)။ ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော (၁၉၉၉ ခုနှစ်တွင် ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Verzhenice ရှိ lupine လယ်ကွင်းများမှရရှိသော Colletotrichum lupini၊ မျိုးကွဲ Col-08) နှင့် ထိန်းချုပ်ထားသော (အတုအယောင်ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော) အပင်များအကြား ဖော်ပြမှုအဆင့်များတွင် စာရင်းအင်းအရ သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်များကို အချက်အလက်အမှတ်များ (*P တန်ဖိုး < 0.05 ၊ **P-တန်ဖိုး ≤ 0.01၊ ***P-တန်ဖိုး ≤ 0.001) အထက်တွင် ဖော်ပြထားသည်။ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော NLL မျဉ်းများမှာ- 83A:476 (ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous Lanr1 allele သယ်ဆောင်ထားသည်)၊ Mandelup (အတန်အသင့်ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး homozygous AnMan allele သယ်ဆောင်ထားသည်)၊ Boregine (ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး မျိုးရိုးဗီဇနောက်ခံမသိရသေး) နှင့် population 22660 (ထိခိုက်လွယ်သည်) တို့ဖြစ်သည်။
Lanr1 locus ရှိ ကိုယ်စားလှယ်လောင်း မျိုးဗီဇ TanjilG_05042 သည် RNA-seq လေ့လာမှုများမှရရှိသော ပရိုဖိုင်များနှင့် သိသိသာသာကွဲပြားသော ဖော်ပြချက်ပုံစံကို ပြသခဲ့သည် (ပုံ 6e)။ ဤမျိုးဗီဇ၏ သိသာထင်ရှားသော လှုပ်ရှားမှုကို Mandelup နှင့် ၂၂၆၆၀ လူဦးရေတွင် တွေ့ရှိခဲ့ရသည် (အသီးသီး ၃၉.၇ ဆ နှင့် ၁၁.၇ ဆအထိ)၊ ရလဒ်အနေဖြင့် ဖော်ပြချက်အဆင့် အတော်လေးမြင့်မားသည် (အသီးသီး ၁.၄ ± ၀.၁၄ နှင့် ၇.၂ ± ၁.၃ အထိ)။ 83A:476 သည် TanjilG_05042 မျိုးဗီဇ၏ ထိန်းညှိမှုအချို့ (၃.၈ ဆအထိ) မြင့်တက်လာမှုကိုလည်း ဖော်ထုတ်ခဲ့သော်လည်း၊ ရရှိလာသော ဆက်စပ်ဖော်ပြချက်အဆင့်များ (၀.၀၄၄ ± ၀.၀၀၂) သည် Mandelup နှင့် ၂၂၆၆၀ လူဦးရေတွင် တွေ့ရှိရသည်ထက် ၃၀ ဆကျော် နိမ့်ကျနေပါသည်။ qPCR မှ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော စမ်းသပ်မှုများအရ ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော (ထိန်းချုပ်မှု) မျိုးကွဲများတွင် မျိုးရိုးဗီဇများအကြား ဖော်ပြမှုအဆင့်များတွင် သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်များကို ပြသခဲ့ပြီး လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ နှင့် 83A:476 အကြားတွင်လည်းကောင်း၊ လူဦးရေ ၂၂၆၆၀ နှင့် ၂၂၆၆၀ အကြားတွင်လည်းကောင်း ၅၈ ဆ ကွာခြားချက်ရှိခဲ့သည်။ Boregine နှင့် Mandalup အကြားတွင် နှစ်ဆ ကွာခြားချက် ရရှိခဲ့သည်။
AnMan locus ရှိ ကိုယ်စားလှယ်ဂျင်း TanjilG_12861 ကို 83A:476 တွင် ကာကွယ်ဆေးထိုးပြီးနောက် တုံ့ပြန်သည့်အနေဖြင့် အသက်ဝင်စေခဲ့ပြီး Mandelup သည် ၂၂၆၆၀ လူဦးရေတွင် ကြားနေဖြစ်ပြီး Boregine တွင် လျော့နည်းသွားသည် (ပုံ ၆f)။ TanjilG_12861 ဂျင်း၏ ဆက်စပ်ဖော်ပြမှုသည် ထိုးထားသော 83A: 476 (0.14±0.01) တွင် အမြင့်ဆုံးဖြစ်သည်။ 17.4 kDa အတန်းအစား I အပူဒဏ်ခံနိုင်သော ပရိုတိန်းဂျင်း TanjilG_05080 HSP17.4 သည် လေ့လာထားသော မျိုးကွဲအားလုံးနှင့် အချိန်အမှတ်များတွင် နိမ့်ကျသော ဆက်စပ်ဖော်ပြမှုအဆင့်များကို ပြသခဲ့သည် (ပုံ ၆g)။ အမြင့်ဆုံးတန်ဖိုးကို ၂၂၆၆၀ လူဦးရေတွင် 24 HPI တွင် တွေ့ရှိခဲ့သည် (0.14 ± 0.02၊ ကာကွယ်ဆေးထိုးပြီးနောက် တုံ့ပြန်မှုတွင် ရှစ်ဆတိုးလာခြင်း)။
မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုပရိုဖိုင်များကို နှိုင်းယှဉ်ခြင်း (ပုံ ၇) သည် TanjilG_10657 နှင့် အခြားမျိုးဗီဇလေးခုဖြစ်သည့် TanjilG_27015 (r = 0.89)၊ TanjilG_05080 (r = 0.85)၊ TanjilG_05042 (r = 0.80) နှင့် TanjilG_04706 (r = 0.79) အကြား မြင့်မားသော ဆက်စပ်မှုကို ဖော်ပြသည်။ ထိုကဲ့သို့သော ရလဒ်များသည် ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများအတွင်း ဤမျိုးဗီဇများ၏ ပူးတွဲထိန်းညှိမှုကို ညွှန်ပြနိုင်သည်။ TanjilG_12861 နှင့် TanjilG_23384 မျိုးဗီဇများသည် အခြားမျိုးဗီဇများနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက Pearson ဆက်စပ်မှုကိန်းတန်ဖိုးများ နိမ့်ကျခြင်း (0.08 မှ 0.43 နှင့် -0.19 မှ 0.28 အသီးသီး) ဖြင့် ကွဲပြားသော ဖော်ပြချက်ပရိုဖိုင်များကို ပြသခဲ့သည်။
မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုပရိုဖိုင်များအကြား ဆက်စပ်မှုများကို အရေအတွက် PCR ကို အသုံးပြု၍ ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့သည်။ အောက်ပါ narrowleaf lupine မျိုးစိတ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်- 83A:476 (ခံနိုင်ရည်ရှိသော၊ homozygous Lanr1 allele သယ်ဆောင်သူ)၊ Mandelup (အတန်အသင့်ခံနိုင်ရည်ရှိသော၊ homozygous AnMan allele သယ်ဆောင်သူ)၊ Boregine (ခံနိုင်ရည်ရှိသော၊ မျိုးရိုးဗီဇနောက်ခံမသိရ) နှင့် Population 22660 (ထိခိုက်လွယ်သည်)။ အချိန်အမှတ်သုံးမှတ် (ကာကွယ်ဆေးထိုးပြီးနောက် ၆၊ ၁၂ နှင့် ၂၄ နာရီ) ကို တွက်ချက်ခဲ့ပြီး၊ ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော (၁၉၉၉ ခုနှစ်တွင် ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Wierzhenice ရှိ lupine လယ်ကွင်းများမှရရှိသော Colletotrichum lupini၊ မျိုးကွဲ Col-08) နှင့် ထိန်းချုပ်ထားသော (အတုအယောင်ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော) အပင်များ ပါဝင်သည်။ စကေးသည် Pearson ဆက်စပ်မှုကိန်း၏တန်ဖိုးကို ပြသထားသည်။
တစ်လက်မလျှင် မြင်းကောင်ရေ ၆ ကောင်အားဖြင့် ရရှိသော အချက်အလက်များအပေါ် အခြေခံ၍ WGCNA ကို 9981 DEG တွင် အစောပိုင်း ကာကွယ်ရေး တုံ့ပြန်မှုများကို အာရုံစိုက်ရန် ကာကွယ်ဆေးထိုးထားသော အပင်များနှင့် ထိန်းချုပ်မှု အပင်များကို နှိုင်းယှဉ်ခြင်းဖြင့် ဖော်ထုတ်ခဲ့သည် (နောက်ဆက်တွဲ ဇယား S12)။ မျိုးဗီဇအမျိုးအစားများနှင့် စမ်းသပ်မှု မျိုးကွဲများအကြား ဆက်စပ် (အပြုသဘော သို့မဟုတ် အနုတ်လက္ခဏာ) ဖော်ပြမှုပရိုဖိုင်များရှိသော မျိုးဗီဇမော်ဂျူး ၂၂ ခု (အစုအဝေးများ) ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ပျမ်းမျှအားဖြင့်၊ မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုအဆင့်များသည် 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 အစီအစဉ်အတိုင်း ဆင်းလာပါသည် (သို့သော် မျိုးကွဲနှစ်ခုလုံးတွင် ဤလမ်းကြောင်းသည် ထိန်းချုပ်အပင်များတွင် ပိုမိုအားကောင်းသည်)။ ပျမ်းမျှအားဖြင့်၊ မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုအဆင့်များသည် 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 အစီအစဉ်အတိုင်း ဆင်းလာပါသည် (သို့သော် မျိုးကွဲနှစ်ခုလုံးတွင် ဤလမ်းကြောင်းသည် ထိန်းချုပ်အပင်များတွင် ပိုမိုအားကောင်းသည်)။ В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > လူဦးရေ 22660 ( в обоих вариантах , о днет вариантах , о днет вариантах была сильнее у контрольных растений)။ ပျမ်းမျှအားဖြင့်၊ မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုအဆင့်များသည် 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 အစီအစဉ်တွင် ကျဆင်းသွားသည် (သို့သော် မျိုးကွဲနှစ်ခုလုံးတွင် ဤလမ်းကြောင်းသည် ထိန်းချုပ်အပင်များတွင် ပိုမိုအားကောင်းသည်)။平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > လူဦးရေ 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）။平均而言，基因水平按按 83a: 476> mandelup> boregine> လူဦးရေ 22660 的顺序下降（，在种丙翧，在种中，在种中，中 更) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > လူဦးရေ 22660 (однако в обоих вариант ах сильнее у контрольных растений)။ ပျမ်းမျှအားဖြင့်၊ မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုအဆင့်များသည် စီးရီး 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 တွင် ကျဆင်းသွားသည် (သို့သော်၊ မျိုးကွဲနှစ်ခုလုံးတွင် ဤလမ်းကြောင်းသည် ထိန်းချုပ်အပင်များတွင် ပိုမိုအားကောင်းသည်)။ကာကွယ်ဆေးထိုးခြင်းသည် မျိုးဗီဇဖော်ပြမှု မြင့်တက်လာစေပြီး အထူးသဖြင့် module 18၊ 19၊ 14၊ 6 နှင့် 1 (အကျိုးသက်ရောက်မှု အစီအစဉ်အတိုင်း)၊ အနုတ်လက္ခဏာ ထိန်းညှိမှု (ဥပမာ module 9 နှင့် 20) သို့မဟုတ် ကြားနေအကျိုးသက်ရောက်မှုများ (ဥပမာ module 11၊ 22၊ 8 နှင့် 13) တွင် ဖြစ်ပေါ်ခဲ့သည်။ GO term enrichment analysis (Supplementary Table S13) တွင် qPCR (TanjilG_04706၊ TanjilG_23384၊ TanjilG_10657 နှင့် TanjilG_27015) မှ အမြင့်ဆုံး activation ရှိသော ထိုးသွင်းထားသော module (18) အတွက် “GO: 0006952 Protective responses” ကို ဖော်ပြခဲ့ပြီး၊ ၎င်းတွင် qPCR (TanjilG_04706၊ TanjilG_23384၊ TanjilG_10657 နှင့် TanjilG_27015) မှ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော မျိုးဗီဇများအပြင် Inoculate မှ အဖိနှိပ်ခံရဆုံး photosynthesis module အများအပြား (9) ပါဝင်သည်။ Module 18 concentrator (ပုံ ၈) ကို PR-10-like LlR18B ပရိုတိန်းကို encode လုပ်သည့် TanjilG_26536 gene အဖြစ် ခွဲခြားသတ်မှတ်ခဲ့ပြီး module 9 concentrator ကို photosystem II PsbQ ပရိုတိန်းကို encode လုပ်သည့် TanjilG_28955 gene အဖြစ် ခွဲခြားသတ်မှတ်ခဲ့သည်။ anthracnose ခုခံနိုင်စွမ်းရှိသော gene Lanr1၊ TanjilG_05042 ကို module 22 (ပုံ ၉) တွင် တွေ့ရှိခဲ့ပြီး၊ TanjilG_01212 hub ကို သယ်ဆောင်သည့် “GO:0044260 Cellular macromolecular metabolic processes” နှင့် “GO:0006355 Transcriptional regulation, DNA templating” ဟူသော အသုံးအနှုန်းများနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။ gene သည် heat stress transcription factor A-4a (HSFA4a) ကို encode လုပ်သည်။
အလွန်အကျွံကိုယ်စားပြုမှုရှိသော ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာလုပ်ငန်းစဉ်ဆိုင်ရာအသုံးအနှုန်းများ “GO: 0006952 ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများ” ပါ၀င်သည့် မော်ဂျူးများ၏ မျိုးဗီဇပူးတွဲဖော်ပြမှု၏ အလေးချိန်ကွန်ရက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု။ qPCR (TanjilG_04706၊ TanjilG_23384၊ TanjilG_10657 နှင့် TanjilG_27015) မှ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော မျိုးဗီဇလေးခုကို မီးမောင်းထိုးပြရန် Ligation ကို ရိုးရှင်းအောင်ပြုလုပ်ခဲ့သည်။
အလွန်အကျွံကိုယ်စားပြုမှုရှိသော ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာလုပ်ငန်းစဉ်အသုံးအနှုန်း “GO: 0006355: Transcriptional regulation, DNA templating” နှင့် အန်သရက်နို့စ်ခံနိုင်ရည်ရှိသော မျိုးဗီဇ Lanr1 TanjilG_05042 ကို သယ်ဆောင်ထားသော မော်ဂျူးတစ်ခု၏ မျိုးဗီဇပူးတွဲဖော်ပြမှု၏ အလေးချိန်ကွန်ရက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု။ TanjilG_05042 မျိုးဗီဇနှင့် ဗဟို TanjilG_01212 မျိုးဗီဇကို ခွဲထုတ်ရန် ချည်နှောင်မှုကို ရိုးရှင်းအောင်ပြုလုပ်ခဲ့သည်။
ဩစတြေးလျတွင် စုဆောင်းထားသော အန်သရက်နို့စ် ခံနိုင်ရည်ရှိမှု စစ်ဆေးမှုအရ အစောပိုင်းထုတ်လွှတ်ခဲ့သော မျိုးကွဲအများစုသည် ထိခိုက်လွယ်ကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ Kalya၊ Coromup နှင့် Mandelup တို့ကို အလယ်အလတ်ခံနိုင်ရည်ရှိသည်ဟု ဖော်ပြထားပြီး Wonga၊ Tanjil နှင့် 83A:476 တို့ကို အလွန်အမင်းခံနိုင်ရည်ရှိသည်ဟု ဖော်ပြထားပြီး 26,27,31။ တူညီသော ခံနိုင်ရည်ရှိသော allele ရှိပြီး Lanr1 အဖြစ် သတ်မှတ်ကာ Coromup နှင့် Mandelup တို့တွင် AnMan10, 26, 39 အဖြစ် သတ်မှတ်ကာ မတူညီသော allele ရှိပြီး Kalya တွင် မတူညီသော allele ကို လက်ဆင့်ကမ်းခဲ့သည်။ , Lanr2။ ဂျာမနီတွင် အန်သရက်နို့စ် ခံနိုင်ရည်ရှိမှုကို စစ်ဆေးခြင်းဖြင့် Lanr1 မဟုတ်သော အခြား allele တစ်ခုနှင့် ခံနိုင်ရည်ရှိသော Bo7212 မျိုးကွဲကို ဖော်ထုတ်နိုင်ခဲ့ပြီး LanrBo36 အဖြစ် သတ်မှတ်ခဲ့သည်။
ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုတွင် စမ်းသပ်ထားသော germplasm တွင် Lanr1 allele ၏ အလွန်နည်းပါးသောကြိမ်နှုန်း (၆%) ကို ဖော်ထုတ်တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ဤလေ့လာတွေ့ရှိချက်သည် Anseq3 နှင့် Anseq4 markers များကို အသုံးပြု၍ အရှေ့ဥရောပ germplasm ကို စစ်ဆေးခြင်း၏ရလဒ်များနှင့် ကိုက်ညီပြီး Lanr1 allele သည် ဘီလာရုစ်မျိုးစိတ်နှစ်ခုတွင်သာ ရှိနေကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ ၎င်းသည် marker-assisted breeding အတွက် အဓိက alleles များထဲမှ တစ်ခုဖြစ်သည့် သြစတြေးလျနှင့်မတူဘဲ Lanr1 allele ကို ဒေသခံမွေးမြူရေးအစီအစဉ်များတွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် အသုံးမပြုသေးကြောင်း အကြံပြုထားသည်။ ၎င်းသည် သြစတြေးလျအစီရင်ခံစာနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက ဥရောပလယ်ကွင်းအခြေအနေများတွင် Lanr1 allele မှ ပံ့ပိုးပေးသော ခုခံမှုအဆင့် နိမ့်ကျခြင်းကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်။ ထို့အပြင် သြစတြေးလျရှိ မိုးရွာသွန်းမှုမြင့်မားသောဒေသများတွင် anthracnose လေ့လာမှုများအရ Lanr1 allele မှ ကြားဝင်ဆောင်ရွက်ပေးသော ခုခံမှုတုံ့ပြန်မှုများသည် ရောဂါပိုး၏ ကြီးထွားမှုနှင့် အလျင်အမြန်ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုကို အထောက်အကူပြုသည့် ရာသီဥတုအခြေအနေများတွင် ထိရောက်မှုမရှိနိုင်ကြောင်း ပြသခဲ့သည်19,42။ အမှန်မှာ၊ လက်ရှိလေ့လာမှုတွင် Lanr1 allele သယ်ဆောင်သော genotypes များတွင် anthracnose ၏လက္ခဏာအချို့ကိုလည်း တွေ့ရှိခဲ့ပြီး၊ C. lupini ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုအတွက် အကောင်းဆုံးအခြေအနေများတွင် ခုခံမှုပျောက်ကွယ်သွားနိုင်ကြောင်း အကြံပြုထားသည်။ ထို့အပြင်၊ Lanr1 locus မှ ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 1 cM အကွာတွင်ရှိသော Anseq3 နှင့် Anseq4 markers များရှိနေခြင်း၏ မှားယွင်းသော အပြုသဘောဆောင်သော အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုချက်များသည် 28, 30, 43 ဖြစ်နိုင်သည်။
ကျွန်ုပ်တို့၏ လေ့လာမှုအရ Lanr1 allele သယ်ဆောင်ထားသော 83A:476 သည် C. lupini ထိုးနှံမှုကို ပထမဆုံး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော အချိန်အမှတ် (6 hpi) တွင် ကြီးမားသော transcriptome reprogramming ဖြင့် တုံ့ပြန်ခဲ့ပြီး Mandelup တွင် AnMan allele သယ်ဆောင်ထားသော transcriptomic တုံ့ပြန်မှုများကို နောက်ပိုင်းတွင် တွေ့ရှိခဲ့ရပါသည် (24 မှ ​​48 hp)။ ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများတွင် ဤအချိန်ကာလအလိုက် ကွဲပြားမှုများသည် ရောဂါလက္ခဏာများတွင် ကွဲပြားမှုများနှင့် ဆက်စပ်နေပြီး ခုခံအားကို အောင်မြင်စွာ တုံ့ပြန်ရန်အတွက် ရောဂါပိုးကို အစောပိုင်း မှတ်မိခြင်း၏ အရေးပါမှုကို မီးမောင်းထိုးပြသည်။ အပင်တစ်ရှူးကို ကူးစက်ရန်အတွက် anthrax spores များသည် host မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် အပင်ပေါက်ခြင်း၊ ဆဲလ်ကွဲခြင်းနှင့် appressorium ဖွဲ့စည်းခြင်းအပါအဝင် ဖွံ့ဖြိုးမှုအဆင့်များစွာကို ဖြတ်သန်းရမည်ဖြစ်သည်။ appendage သည် host ၏ မျက်နှာပြင်တွင် တွယ်ကပ်ပြီး host တစ်ရှူးများထဲသို့ ထိုးဖောက်ဝင်ရောက်မှုကို လွယ်ကူချောမွေ့စေသော ကူးစက်တတ်သောဖွဲ့စည်းပုံတစ်ခုဖြစ်သည်။ ထို့ကြောင့် ပဲထုတ်ယူမှုတွင်ပါဝင်သော C. gloeosporioides ၏ spores များသည် incubation ၏ 75-90 မိနစ်အကြာတွင် nucleus ၏ ပထမဆုံးကွဲခြင်း၊ 90-120 မိနစ်အကြာတွင် germ tube ဖွဲ့စည်းခြင်းနှင့် 4 နာရီ 45 အကြာတွင် နှိမ်နင်းခြင်းကို ပြသခဲ့သည်။ မန်ဂို C. gloeosporioides သည် ပေါက်ရောက်မှု ၃ နာရီအကြာတွင် conidial အပင်ပေါက်မှု ၄၀% ကျော်နှင့် ၄ နာရီအကြာတွင် appresors ၂၀% ခန့် ဖြစ်ပေါ်မှုကို ပြသခဲ့သည်။ C. gloeosporioides ၏ အဆိပ်သင့်မှုနှင့်ဆက်စပ်သော CAP20 မျိုးဗီဇသည် CAP20 ပရိုတင်း မြင့်မားစွာပါဝင်သည့် ထောပတ်သီးမျက်နှာပြင်ဖယောင်းတွင် ၄ နာရီ ၄၆ မိနစ်အကြာတွင် ၃.၅ နာရီကြာ ပေါက်ရောက်ပြီးနောက် epiphyte-forming conidia တွင် transcriptional activity ကို ပြသခဲ့သည်။ အလားတူပင်၊ C. trifolii ရှိ melanin biosynthesis မျိုးဗီဇများ၏ လှုပ်ရှားမှုကို ၂ နာရီကြာ ပေါက်ရောက်မှုအတွင်း ဖြစ်ပေါ်စေခဲ့ပြီး ၁ နာရီအကြာတွင် appressorium ဖွဲ့စည်းမှုဖြင့် ဖြစ်ပေါ်ခဲ့သည်။ အရွက်တစ်ရှူးများကို လေ့လာမှုများအရ C. acutatum ဖြင့် ထိုးသွင်းထားသော စတော်ဘယ်ရီသီးများသည် 8 hpi တွင် ပထမဆုံးနှိမ်နင်းမှုရှိပြီး C. coccodes ဖြင့် ထိုးသွင်းထားသော ခရမ်းချဉ်သီးများသည် 4 hpi48,49 တွင် ပထမဆုံးနှိမ်နင်းမှုရှိကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ Colletotrichum spp. ကူးစက်ရောဂါဖြစ်စဉ်၏ အချိန်အတိုင်းအတာနှင့် အများအားဖြင့် ကိုက်ညီပါသည်။ 83A:476 ကို လျင်မြန်စွာ ခုခံကာကွယ်မှု တုံ့ပြန်မှုများက ဤမျိုးရိုးတွင် အပင်ခုခံမှုနှင့် effector-triggered immunity (ETI) မျိုးဗီဇများ ပါဝင်ပတ်သက်မှုကို အကြံပြုထားပြီး၊ Mandelup ၏ နှောင့်နှေးတုံ့ပြန်မှုများသည် micro-associated molecular pattern-triggered immunity (MTI) hypothesis 50 ကို ထောက်ခံပါသည်။ 83A: 476 နှင့် Mandelup ကို အစောပိုင်းတုံ့ပြန်မှုများ။ နှောင့်နှေးတုံ့ပြန်မှုတွင် အပေါ် သို့မဟုတ် အောက်သို့ ထိန်းညှိထားသော မျိုးဗီဇများအကြား တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းထပ်နေခြင်းသည်လည်း ဤသဘောတရားကို ထောက်ခံပါသည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် ETI ကို anaphylactic shock ဟုလူသိများသော ကူးစက်သည့်နေရာ၌ programmed cell death တွင် အထွတ်အထိပ်ရောက်သည့် အရှိန်မြှင့်ပြီး မြှင့်တင်ထားသော MTI တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုအဖြစ် မကြာခဏ ယူဆလေ့ရှိပြီး 51,52 ဖြစ်သည်။
အလွန်အကျွံကိုယ်စားပြုမှုရှိသော Gene Ontology GO:0006952 “Defense Response” ဟူသော အသုံးအနှုန်းနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးဗီဇအများစုမှာ stress-induced fasting message 22 protein (SAM22 နှင့်ဆင်တူသည်) ၏ homologue ၁၁ ခုနှင့် အဓိက latex protein-likes (MLPs) ခုနစ်ခုဖြစ်သည်။ -like proteins 31, 34, 43 နှင့် 423 တို့သည် sequence ဆင်တူမှုကို ပြသခဲ့သည်။ SAM22 နှင့်ဆင်တူသော မျိုးဗီဇများသည် ပိုမိုကြာရှည်ခံသော သိသာထင်ရှားသော activation ကို ပြသခဲ့ပြီး anthracnose ခံနိုင်ရည်အဆင့် မြင့်တက်လာသည်ကို ပြသခဲ့သည် (83A:476 နှင့် Boregine)။ သို့သော် MLP နှင့်ဆင်တူသော မျိုးဗီဇများသည် candidate resistance allele (83A:476/Lanr1 at 6 hpi နှင့် Mandelup/AnMan at 24 hpi) သယ်ဆောင်သည့် မျဉ်းများတွင်သာ downregulated လုပ်ခဲ့သည်။ ဖော်ထုတ်ထားသော SAM22 နှင့်ဆင်တူသော homologues အားလုံးသည် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 105 kb ကျယ်ဝန်းသော gene cluster မှ ဆင်းသက်လာပြီး MLP နှင့်ဆင်တူသော မျိုးဗီဇများသည် genome ၏ သီးခြားဒေသများမှ ဆင်းသက်လာကြောင်း သတိပြုသင့်သည်။ Diaporthetoxica ထိုးဆေးကို NLL ခံနိုင်ရည်ရှိမှုဆိုင်ရာ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုတွင်လည်း ထိုကဲ့သို့သော SAM22 နှင့်ဆင်တူသော မျိုးဗီဇများ၏ ညှိနှိုင်းလှုံ့ဆော်မှုကို တွေ့ရှိခဲ့ပြီး၊ ၎င်းတို့သည် ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှု၏ အလျားလိုက်အစိတ်အပိုင်းများတွင် ပါဝင်ပတ်သက်နေကြောင်း အကြံပြုထားသည်။ ဒဏ်ရာ သို့မဟုတ် salicylic acid၊ မှိုပိုးများ လှုံ့ဆော်ပေးသည့်အရာများ သို့မဟုတ် ဟိုက်ဒရိုဂျင်ပါအောက်ဆိုဒ်ဖြင့် ကုသမှုအပေါ် SAM22 နှင့်ဆင်တူသော မျိုးဗီဇများ၏ အပြုသဘောဆောင်သော တုံ့ပြန်မှုဆိုင်ရာ အစီရင်ခံစာများဖြင့်လည်း ဤနိဂုံးချုပ်ချက်ကို ထောက်ခံပါသည်။
MLP နှင့်ဆင်တူသော မျိုးဗီဇများသည် အပင်မျိုးစိတ်များစွာတွင် ဘက်တီးရီးယား၊ ဗိုင်းရပ်စ်နှင့် ရောဂါဖြစ်စေသော မှိုကူးစက်မှုများ အပါအဝင် abiotic နှင့် biotic ဖိစီးမှုအမျိုးမျိုးကို တုံ့ပြန်ကြောင်း ပြသထားသည်55။ အပင်များနှင့် ရောဂါပိုးများအကြား အချို့သော အပြန်အလှန် ဆက်သွယ်မှုများအပေါ် တုံ့ပြန်မှု၏ ဦးတည်ချက်များသည် ပြင်းထန်စွာ တိုးလာခြင်း (ဆိုလိုသည်မှာ Verticillium dahliae ကျရောက်ခြင်းအတွင်း) မှ သိသိသာသာ လျော့ကျခြင်း (ဆိုလိုသည်မှာ ပန်းသီးပင်တွင် Alternaria spp. ကျရောက်ပြီးနောက်)56,57 အထိ ရှိသည်။ F. niger ကူးစက်မှုမှ ထောပတ်သီး၏ ခုခံအားစနစ်အတွင်းနှင့် ပန်းသီးပင် Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola နှင့် Alternaria alternata တို့သည် ပန်းသီးရောဂါပိုးများဖြစ်သည်58,59။ ထို့အပြင်၊ MLP-like 423 မျိုးဗီဇကို အလွန်အကျွံဖော်ပြသော ပန်းသီး calli များသည် ခုခံမှုနှင့်ဆက်စပ်သော မျိုးဗီဇများ၏ ဖော်ပြမှု နည်းပါးပြီး မှိုကူးစက်မှုကို ပိုမိုထိခိုက်လွယ်သည်59။ Fusarium oxysporum f ပြီးနောက်၊ MLP-like 423 မျိုးဗီဇသည် ခံနိုင်ရည်ရှိသော ပဲပင်ပေါက်များတွင်လည်း နှိမ်နင်းခံခဲ့ရသည်။ cn. ပဲကူးစက်မှု 60။
ကျွန်ုပ်တို့၏ RNA-seq လေ့လာမှုတွင် ဖော်ထုတ်ထားသော PR-10 မိသားစုဝင် အခြားအဖွဲ့ဝင်များမှာ မြင့်တက်လာမှုကို တုံ့ပြန်သည့် LlR18A နှင့် LlR18B မျိုးဗီဇများအပြင် lipid transfer protein DIR1 အတွက် မြင့်တက်လာသော (မျိုးဗီဇ ၁ ခု) သို့မဟုတ် ကျဆင်းသွားသော (မျိုးဗီဇ ၃ ခု) မျိုးဗီဇတို့ဖြစ်သည်။ ထို့အပြင်၊ WGCNA သည် ကာကွယ်ဆေးထိုးခြင်းကို အလွန်ထိခိုက်လွယ်ပြီး အကာအကွယ်ပေးသည့် တုံ့ပြန်မှုမျိုးဗီဇများစွာကို သယ်ဆောင်သည့် ဤ module တွင် hub အဖြစ် LlR18B မျိုးဗီဇကို အလေးပေးဖော်ပြသည်။ LlR18A နှင့် LlR18B မျိုးဗီဇများကို အဝါရောင် lupine အရွက်များတွင် ရောဂါဖြစ်စေသော ဘက်တီးရီးယားများကို တုံ့ပြန်သည့်အနေဖြင့် နှင့် D. toxica ထိုးပြီးနောက် NLL ပင်စည်များတွင် လှုံ့ဆော်ပေးခဲ့ပြီး ဤမျိုးဗီဇများ၏ ဆန် homologue၊ RSOsPR10 ကို jasmonic acid signaling pathway53,61, 62 တွင် ပါဝင်သည်ဟု ယူဆရသော မှိုကူးစက်မှုကြောင့် လျင်မြန်စွာ လှုံ့ဆော်ပေးခဲ့သည်။ DIR1 မျိုးဗီဇသည် systemic acquired resistance (SAR) စတင်ခြင်းအတွက် လိုအပ်သော nonspecific lipid transport protein များကို encode လုပ်သည်။ အကာအကွယ်ပေးသည့် တုံ့ပြန်မှုများ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်လာသည်နှင့်အမျှ DIR1 ပရိုတိန်းကို ရောဂါကူးစက်မှု၏ အဓိကနေရာမှ phloem မှတစ်ဆင့် ဝေးလံသော ကိုယ်တွင်းအင်္ဂါများတွင် SAR ကို ဖြစ်ပေါ်စေပါသည်။ စိတ်ဝင်စားစရာကောင်းသည်မှာ TanjilG_02313 DIR1 မျိုးဗီဇကို လိုင်း ၈၄A:၄၇၆ နှင့် Population ၂၂၆၆၀ တွင် ပထမဆုံးအကြိမ်တွင် သိသိသာသာ လှုံ့ဆော်ပေးခဲ့သော်လည်း အန်သရက်နို့စ် ခုခံမှုသည် လိုင်း ၈၄A:၄၇၆ တွင်သာ အောင်မြင်စွာ ဖွံ့ဖြိုးလာခဲ့သည်။ ကျန်ရှိသော homologue သုံးခုသည် 83A:၄၇၆ လိုင်းတွင် 6 hpi တွင်သာ ထိုးနှံခြင်းကို တုံ့ပြန်ခဲ့ပြီး ဤတုံ့ပြန်မှုသည် အောက်သို့ ဦးတည်သွားသောကြောင့် ၎င်းသည် NLL တွင် DIR1 မျိုးဗီဇ၏ လုပ်ဆောင်ချက်အချို့ လျော့နည်းသွားခြင်းကို ညွှန်ပြနေနိုင်သည်။
ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုတွင် “GO:0055114 Redox လုပ်ငန်းစဉ်” ဟုခေါ်သော ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာလုပ်ငန်းစဉ်နှင့် ကိုက်ညီသော အသုံးအများဆုံးအစိတ်အပိုင်းများမှာ cytochrome P450 ပရိုတိန်း၊ peroxidase၊ linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase နှင့် 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase တို့ဖြစ်သည်။ ထို့အပြင်၊ ကျွန်ုပ်တို့၏ WGCNA သည် HSFA4a homologue ကို Lanr1 resistance gene candidate TanjilG_05042 ကဲ့သို့သော မော်ဂျူးများကို သယ်ဆောင်သည့် hub အဖြစ် သတ်မှတ်သည်။ HSFA4a သည် အပင်များတွင် nuclear transcription ၏ redox-dependent regulation ၏ အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။
Cytochrome P450 ပရိုတင်းများသည် မူလနှင့် ဒုတိယဇီဝဖြစ်စဉ်တွင် NADPH နှင့်/သို့မဟုတ် O2-dependent hydroxylation ဓာတ်ပြုမှုများကို အရှိန်မြှင့်ပေးသည့် oxidoreductases များဖြစ်ပြီး၊ xenobiotics များ၏ ဇီဝဖြစ်စဉ်အပြင် ဟော်မုန်းများ၊ fatty acids များ၊ sterols များ၊ ဆဲလ်နံရံအစိတ်အပိုင်းများ၊ biopolymers များနှင့် အကာအကွယ်ပေးသောဒြပ်ပေါင်းများ၏ biosynthesis အပါအဝင် 69 တို့ပါဝင်သည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ လေ့လာမှုတစ်ခုတွင်၊ အပင် cytochrome P450 လုပ်ဆောင်ချက်တွင် ကွဲပြားမှုသည် -10.6 log2 (fold change) မှ 5.7 သို့ လျော့ကျခဲ့ပြီး၊ အထက်သို့ပြန်လည်ပြင်ဆင်မှုကို ထင်ဟပ်စေသည်။ . ထိုကဲ့သို့သော ပရိုတင်း superfamily ကြီးတစ်ခုတွင် NLL ဂျင်းများ၏ ယူဆရသော ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ဆောင်ချက်ကို ရှင်းလင်းရန် RNA-seq အချက်အလက်များကိုသာ အသုံးပြုခြင်းသည် အလွန်ခန့်မှန်းချက်ဖြစ်လိမ့်မည်။ သို့သော်၊ cytochrome P450 ဂျင်းအချို့သည် ဓာတ်မတည့်မှုတုံ့ပြန်မှုများအပါအဝင် ရောဂါဖြစ်စေသော မှို သို့မဟုတ် ဘက်တီးရီးယားများကို ခံနိုင်ရည်ရှိမှုနှင့် ဆက်စပ်နေကြောင်း သတိပြုသင့်သည်69,70,71။
အတန်းအစား III ပါအောက်ဆီဒေ့စ်များသည် အပင်ကြီးထွားဖွံ့ဖြိုးမှုကာလအတွင်း ဇီဝဖြစ်စဉ်လုပ်ငန်းစဉ်အမျိုးမျိုးတွင်ပါဝင်သော ဘက်စုံသုံးအပင်အင်ဇိုင်းများဖြစ်ပြီး ဆားငန်မှု၊ မိုးခေါင်မှု၊ အလင်းရောင်ပြင်းထန်မှုနှင့် ရောဂါပိုးများတိုက်ခိုက်မှုကဲ့သို့သော ပတ်ဝန်းကျင်ဆိုင်ရာဖိစီးမှုများကို တုံ့ပြန်သည့်အနေဖြင့်72 ဖြစ်သည်။ ပါအောက်ဆီဒေ့စ်များသည် Stylosanthes humilis နှင့် C. gloeosporioides၊ Lens culinaris နှင့် C. truncatum၊ Phaseolus vulgaris နှင့် C. lindemuthianum၊ Cucumis sativus နှင့် C. lagenarium73,74,75,76 အပါအဝင် အပင်မျိုးစိတ်များစွာနှင့် အပြန်အလှန်ဆက်သွယ်မှုတွင် ပါဝင်ပါသည်။ မှိုသည် အပင်တစ်ရှူးများထဲသို့ မဝင်ရောက်မီ တုံ့ပြန်မှုမှာ အလွန်မြန်ဆန်ပြီး တစ်ခါတစ်ရံ 4 HPI တွင်ပင်73 တွင်ပင် တုံ့ပြန်ပါသည်။ ပါအောက်ဆီဒေ့စ် မျိုးဗီဇသည် D. toxica NLL ထိုးသွင်းခြင်းကိုလည်း တုံ့ပြန်ပါသည်။ အောက်ဆီဒေ့စ်ပေါက်ကွဲမှုကို ထိန်းညှိခြင်း သို့မဟုတ် အောက်ဆီဒေ့စ်ဖိစီးမှုကို ဖယ်ရှားခြင်းအတွက် ၎င်းတို့၏ပုံမှန်လုပ်ဆောင်ချက်များအပြင် ပါအောက်ဆီဒေ့စ်များသည် သတ်မှတ်ထားသောဒြပ်ပေါင်းများ၏ lignification၊ subunit သို့မဟုတ် cross-linking အတွင်း ဆဲလ်နံရံအားဖြည့်ခြင်းအပေါ် အခြေခံ၍ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာအတားအဆီးများဖန်တီးခြင်းဖြင့် ရောဂါပိုးများကြီးထွားမှုကို အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေနိုင်သည်။ ဤလုပ်ဆောင်ချက်ကို silico တွင် 83A:476 ခံနိုင်ရည်ရှိသော မျဉ်းတွင် ကျွန်ုပ်တို့၏ လေ့လာမှုတွင် 6 HPI တွင် သိသိသာသာ မြင့်တက်လာသော်လည်း မတုံ့ပြန်သော အခြားမျိုးကွဲများနှင့် အချိန်အချက်များတွင် မဖြစ်ပွားသည့် lignin-forming anion peroxidase ကို encode လုပ်ထားသော TanjilG_03329 gene နှင့် ဆက်စပ်နိုင်သည်။
linoleic acid ရဲ့ 9S-/13S-lipoxygenase ဟာ lipid biosynthesis ရဲ့ oxidative pathway မှာ ပထမခြေလှမ်းဖြစ်ပါတယ်78။ ဒီလမ်းကြောင်းရဲ့ ထုတ်ကုန်တွေဟာ callose နဲ့ pectin အနည်အနှစ်တွေဖွဲ့စည်းခြင်းအားဖြင့် ဆဲလ်နံရံတွေကို ခိုင်မာစေခြင်းနဲ့ reactive oxygen species တွေထုတ်လုပ်ခြင်းအားဖြင့် oxidative stress ကို ထိန်းညှိပေးခြင်းအပါအဝင် အပင်ကာကွယ်ရေးမှာ လုပ်ဆောင်ချက်များစွာရှိပါတယ်။79,80,81,82,83။ လက်ရှိလေ့လာမှုမှာ linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase ရဲ့ expression ဟာ strains အားလုံးမှာ ပြောင်းလဲခဲ့ပေမယ့်၊ ထိခိုက်လွယ်တဲ့ population 22660 မှာ upregulation ဟာ မတူညီတဲ့အချိန်တွေမှာ လွှမ်းမိုးနေပြီး၊ resistant Lanr1 နဲ့ AnMan allele သယ်ဆောင်ထားတဲ့ strains တွေမှာ ဒီ genotype တွေကြားက protective anthrax reaction တွေမှာ oxylipin layer ရဲ့ diversification ကို အလေးပေးပါတယ်။
1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) homologue သည် lupine ဖြင့် ထိုးသွင်းသောအခါ (ဂျင်း ၉ မျိုး) သိသိသာသာ မြင့်တက်လာသည် သို့မဟုတ် လျော့ကျလာသည် (ဂျင်း ၂ မျိုး)။ ခြွင်းချက်နှစ်ခုမှလွဲ၍ ဤတုံ့ပြန်မှုအားလုံးသည် 6 hp တွင် 83A:476 တွင် ဖြစ်ပွားခဲ့သည်။ ACO ပရိုတင်းများမှ ကြားဝင်ဆောင်ရွက်ပေးသော အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုသည် အီသလင်းထုတ်လုပ်မှုတွင် နှုန်းကန့်သတ်အဆင့်ဖြစ်ပြီး ထို့ကြောင့် အလွန်အမင်း ထိန်းညှိထားသည်84။ အီသလင်းသည် အပင်ဖွံ့ဖြိုးမှုနှင့် abiotic နှင့် biotic stress အခြေအနေများအပေါ် တုံ့ပြန်မှုကို ထိန်းညှိရာတွင် အခန်းကဏ္ဍအမျိုးမျိုးမှ ပါဝင်သည့် အပင်ဟော်မုန်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ ACO ကူးယူမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေခြင်းနှင့် အီသလင်းအချက်ပြလမ်းကြောင်းကို အသက်ဝင်စေခြင်းသည် reactive oxygen species နှင့် phytoalexins များထုတ်လုပ်မှုကို ထိန်းညှိခြင်းဖြင့် hemibiotrophic မှို oryzae oryzae ကို ဆန်၏ ခံနိုင်ရည်ကို မြှင့်တင်ရာတွင် ပါဝင်သည်။ ဤလေ့လာမှုတွင်ဖော်ပြထားသော 83A:476 လိုင်းတွင် ACO homologues များသိသိသာသာမြင့်တက်လာခြင်းနောက်ခံတွင် M. oryzae နှင့် C. lupini88,89 အကြားတွင်တွေ့ရှိရသော အလွန်ဆင်တူသောအရွက်ကူးစက်မှုလုပ်ငန်းစဉ်သည် မော်လီကျူးလမ်းကြောင်းများတွင် အချက်ပြမှုဗဟိုအဆင့်တစ်ခုဖြစ်သည့် NLL anthracnose Ethylene ကိုခံနိုင်ရည်ရှိခြင်းဖြစ်နိုင်ခြေကို ပြောင်းလဲစေသည်။
လက်ရှိလေ့လာမှုတွင်၊ 83A:476 တွင် 6 hpi နှင့် Mandeloop နှင့် လူဦးရေ 22660 တွင် 48 hpi တွင် အလင်းစွမ်းအင်သုံး ဓာတ်ပြုမှုနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးဗီဇများစွာကို ကြီးမားသော နှိမ်နင်းမှုကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ဤပြောင်းလဲမှုများ၏ အတိုင်းအတာနှင့် တိုးတက်မှုသည် အဆင့်နှင့် အချိုးကျသည်။ ဤစမ်းသပ်မှုတွင် အန်သရက်နို့စ် ခံနိုင်ရည်ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ မကြာသေးမီက၊ ရောဂါဖြစ်စေသော ဘက်တီးရီးယားများနှင့် မှိုများအပါအဝင် အပင်နှင့် ရောဂါပိုး အပြန်အလှန် ဆက်သွယ်မှုပုံစံများစွာတွင် အလင်းစွမ်းအင်သုံး ဓာတ်ပြုမှုနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးဗီဇမှတ်တမ်းများကို ပြင်းထန်စွာနှင့် အစောပိုင်း နှိမ်နင်းမှုကို အစီရင်ခံခဲ့သည်။ ရောဂါပိုးကူးစက်မှုကို တုံ့ပြန်သည့်အနေဖြင့် အလင်းစွမ်းအင်သုံး ဓာတ်ပြုမှုနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးဗီဇများ၏ ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာ နှိမ်နင်းမှု (အချို့သော အပြန်အလှန် ဆက်သွယ်မှုများတွင် 2 HPI မှ) နှင့် ဓာတ်ပြုနိုင်သော အောက်ဆီဂျင်မျိုးစိတ်များ ဖြန့်ကျက်မှုနှင့် salicylic acid လမ်းကြောင်းနှင့် ၎င်းတို့၏ အပြန်အလှန် ဆက်သွယ်မှုအပေါ် အခြေခံ၍ အပင်များ၏ ကိုယ်ခံအားကို လှုံ့ဆော်ပေးနိုင်သည်။ 90,94
အဆုံးသတ်အနေနဲ့၊ အခံနိုင်ရည်အရှိဆုံး မျိုးရိုး (83A:476) အတွက် အဆိုပြုထားတဲ့ ကာကွယ်ရေး တုံ့ပြန်မှု ယန္တရားတွေမှာ R မျိုးရိုးဗီဇ (TIR-NBS-LRR TanjilG_05042 ဖြစ်နိုင်တယ်) မှ ရောဂါပိုးများကို လျင်မြန်စွာ မှတ်မိခြင်းနှင့် ဓာတ်မတည့်မှု တုံ့ပြန်မှုကြောင့် ဖြစ်ပေါ်တဲ့ salicylic acid နဲ့ ethylene အချက်ပြမှု၊ ပြီးရင် long-range SAR လုပ်ဆောင်ချက်ကို DIR-1 ပရိုတင်းက ပံ့ပိုးပေးပါတယ်။ C. lupini ကူးစက်မှုအတွက် biotrophic ကာလဟာ အလွန်တိုတောင်းပြီး (ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် ၂ ရက်)၊ ပြီးရင် necrotic growth95 ဖြစ်တယ်ဆိုတာ သတိပြုသင့်ပါတယ်။ ဒီအဆင့်တွေကြားက အကူးအပြောင်းဟာ host plants တွေမှာ hypersensitivity reactions တွေအတွက် အစပျိုးမှုတွေအဖြစ် လုပ်ဆောင်တဲ့ ethylene-inducible proteins တွေရဲ့ necrosis နဲ့ expression နဲ့ ဆက်စပ်နေနိုင်ပါတယ်။ ဒါကြောင့် biotrophic အဆင့်မှာ C. lupini ကို အောင်မြင်စွာ ဖမ်းယူနိုင်တဲ့ အချိန်ဘောင်ဟာ အလွန်ကျဉ်းမြောင်းပါတယ်။ 6 hpi မှာ 83A:476 မှာ တွေ့ရှိရတဲ့ redox နဲ့ photosynthesis နဲ့ ဆက်စပ်နေတဲ့ မျိုးရိုးဗီဇတွေကို ပြန်လည်ပရိုဂရမ်ရေးသားခြင်းဟာ မှို hyphae ရဲ့ တိုးတက်မှုနဲ့ ကိုက်ညီပြီး biotrophic အဆင့်မှာ အောင်မြင်တဲ့ အကာအကွယ် တုံ့ပြန်မှု ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုကို ကြေငြာပါတယ်။ Mandelup နှင့် ၂၂၆၆၀ လူဦးရေ၏ transcriptomic တုံ့ပြန်မှုများသည် မှိုသေကြီးထွားမှုသို့ မပြောင်းလဲမီ မှိုကိုဖမ်းယူရန် အလွန်နှောင့်နှေးနိုင်သော်လည်း၊ PR-10 ပရိုတိန်း၏ မြန်ဆန်သော ထိန်းညှိမှုသည် အလျားလိုက်ခုခံမှုကို မြှင့်တင်ပေးသောကြောင့် Mandelup သည် ၂၂၆၆၀ လူဦးရေထက် ပိုမိုထိရောက်နိုင်ပါသည်။
ETI သည် canonical R gene မှ မောင်းနှင်ပြီး ပဲပင်များတွင် anthracnose ဒဏ်ခံနိုင်ရည်ရှိခြင်း၏ ဘုံယန္တရားတစ်ခုဖြစ်ပုံရသည်။ ထို့ကြောင့် ပဲမျိုးရင်း Medicago truncatula မော်ဒယ်တွင် anthracnose ဒဏ်ခံနိုင်ရည်ကို TIR-NBS-LRR97 အပင် R gene အတန်းအစားဝင် RCT1 gene မှ ပေးစွမ်းသည်။ ဤ gene သည် alfalfa တွင် broad-spectrum anthracnose ဒဏ်ခံနိုင်ရည်ရှိစေသော ပင်များကိုလည်း ပေးစွမ်းသည်။ ပဲပင် (P. vulgaris) တွင် anthracnose ဒဏ်ခံနိုင်ရည်ရှိသော gene ပေါင်း နှစ်ဒါဇင်ကျော်ကို ယနေ့အထိ ဖော်ထုတ်တွေ့ရှိထားသည်။ ဤ gene အချို့ကို canonical R gene များမရှိသော ဒေသများတွင် တွေ့ရှိရသော်လည်း အခြား gene အများအပြားမှာ TIR-NBS-LRRs99 အပါအဝင် NBS-LRR gene cluster ပါရှိသော ခရိုမိုဆုမ်းများ၏ အစွန်းများတွင် တည်ရှိသည်။ genome-wide SSR လေ့လာမှုသည် NBS-LRR gene သည် ပဲပင်တွင် anthracnose ဒဏ်ခံနိုင်ရည်နှင့် ဆက်စပ်မှုကို အတည်ပြုခဲ့သည်။ white lupine 101 ရှိ အဓိက anthracnose ဒဏ်ခံနိုင်ရည်ရှိသော locus ပါရှိသော genomic ဒေသတွင်လည်း canonical R gene ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။
ကျွန်ုပ်တို့၏ လုပ်ဆောင်ချက်က အပင်ကူးစက်ခံရခြင်း၏ အစောပိုင်းအဆင့်တွင် (ဖြစ်နိုင်လျှင် 12 hpi ထက်နောက်မကျစေဘဲ) ချက်ချင်းခုခံမှုတုံ့ပြန်မှုသည် အရွက်ကျဉ်းလူပင်ကို ရောဂါဖြစ်စေသော မှို Collelotrichum lupini ကြောင့်ဖြစ်သော အန်သရက်နို့စ်မှ ထိရောက်စွာ ကာကွယ်ပေးကြောင်း ပြသထားသည်။ မြင့်မားသော throughput sequencing ကို အသုံးပြု၍ Lanr1 နှင့် AnMan ခုခံမှုဂျင်းများမှ ကြားဝင်ဆောင်ရွက်ပေးသော NLL အပင်များတွင် အန်သရက်နို့စ်ခုခံမှုဂျင်းများ၏ ကွဲပြားသောဖော်ပြချက်ပရိုဖိုင်များကို ကျွန်ုပ်တို့ သရုပ်ပြခဲ့သည်။ အောင်မြင်သောကာကွယ်ရေးတွင် အပင်သည် ရောဂါဖြစ်စေသောရောဂါနှင့် ပထမဆုံးထိတွေ့ပြီး နာရီပိုင်းအတွင်း အောက်ဆီဒင့်လျှော့ချခြင်း၊ အလင်းစွမ်းအင်သုံးခြင်းနှင့် ရောဂါဖြစ်စဉ်များတွင်ပါဝင်သော ပရိုတင်းများအတွက် မျိုးဗီဇများကို ဂရုတစိုက်ဒီဇိုင်းထုတ်ခြင်း ပါဝင်သည်။ အလားတူကာကွယ်မှုတုံ့ပြန်မှုများသည် အချိန်နှောင့်နှေးသော်လည်း အပင်များကို ရောဂါများမှကာကွယ်ရာတွင် ထိရောက်မှုနည်းပါးသည်။ Lanr1 မျိုးဗီဇမှ ကြားဝင်ဆောင်ရွက်ပေးသော အန်သရက်စ်ခုခံမှုသည် R မျိုးဗီဇ (effector-triggered immunity) ၏ ပုံမှန်မြန်ဆန်သောတုံ့ပြန်မှုနှင့် ဆင်တူပြီး AnMan မျိုးဗီဇသည် အလျားလိုက်တုံ့ပြန်မှု (အဏုဇီဝနှင့်ဆက်စပ်သော မော်လီကျူးပုံစံမှ လှုံ့ဆော်ပေးသော ခုခံအား) ကို ပေးစွမ်းနိုင်ဖွယ်ရှိပြီး အလယ်အလတ်အဆင့် ရေရှည်တည်တံ့မှုကို ပေးစွမ်းသည်။
အန်သရက်နို့စ် အမှတ်အသားများကို စစ်ဆေးရန် အသုံးပြုသော NLL လိုင်း ၂၁၅ လိုင်းတွင် မျိုးကွဲ ၇၄ မျိုး၊ မျိုးစပ်ခြင်း သို့မဟုတ် မျိုးပွားခြင်းဖြင့် ရရှိသော လိုင်း ၆၀၊ မျိုးဗီဇပြောင်းလဲမှု ၅ ခုနှင့် သဘာဝ သို့မဟုတ် မူရင်း germplasms ၇၆ ခု ပါဝင်သည်။ လိုင်းများသည် နိုင်ငံပေါင်း ၁၇ နိုင်ငံမှ လာခြင်းဖြစ်ပြီး အဓိကအားဖြင့် ပိုလန် (58)၊ စပိန် (47)၊ ဂျာမနီ (27)၊ ဩစတြေးလျ (26)၊ ရုရှား (19)၊ ဘီလာရုစ် (7)၊ အီတလီ (5) နှင့် နိုင်ငံပေါင်း ၁၀ နိုင်ငံမှ အခြားလိုင်းများမှ ဖြစ်သည်။ အစုံတွင် reference resistant လိုင်းများလည်း ပါဝင်သည်- 83A:476၊ Tanjil၊ Lanr1 allele သယ်ဆောင်သော Wonga နှင့် AnMan allele သယ်ဆောင်သော Mandelup။ လိုင်းများကို ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Wiatrowo ရှိ Poznań Plant Breeding Ltd. မှ ထိန်းသိမ်းထားသော European Lupine Genetic Resource Database မှ ရရှိခဲ့သည် (Supplementary Table S1)။
ထိန်းချုပ်ထားသော အခြေအနေများအောက်တွင် (နေ့ခင်းဘက်တွင် အလင်းရောင်ကာလ ၁၆ နာရီ၊ အပူချိန် ၂၅°C နှင့် ညဘက်တွင် ၁၈°C) စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ပုံတူနှစ်ခုကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ DNA ကို လုပ်ထုံးလုပ်နည်းအရ DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) ကို အသုံးပြု၍ သုံးပတ်သားအရွက်များမှ ခွဲထုတ်ခဲ့သည်။ သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော DNA ၏ အရည်အသွေးနှင့် ပါဝင်မှုကို spectrophotometric နည်းလမ်းများ (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ဖြင့် အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ အန်သရက်နို့စ်ခံနိုင်ရည်ရှိသော မျိုးဗီဇ AnMan (cv. Mandelup မှဆင်းသက်လာ) ကို အမှတ်အသားပြုသည့် AnManM1 အမှတ်အသားနှင့် မျိုးဗီဇ Lanr1 (cv. Tanjil မှဆင်းသက်လာ) ဘေးတွင်ရှိသော Anseq3 နှင့် Anseq4 အမှတ်အသားများကို ၁၁,၂၆,၂၈ တွင် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ ခံနိုင်ရည်ရှိသော allele အတွက် Homozygotes များကို “၁″၊ ထိခိုက်လွယ်သော – “၀″ နှင့် heterozygotes – ၀.၅ အဖြစ် အမှတ်ပေးခဲ့သည်။
AnManM1၊ AnSeq3 နှင့် AnSeq4 အမှတ်အသားများအတွက် စစ်ဆေးခြင်းရလဒ်များနှင့် နောက်ဆုံးနောက်ဆက်တွဲစမ်းသပ်မှုများအတွက် မျိုးစေ့များရရှိနိုင်မှုအပေါ်အခြေခံ၍ အန်သရက်နို့စ်ခံနိုင်ရည်ရှိသော phenotyping အတွက် NLL လိုင်း ၅၀ ကို ရွေးချယ်ခဲ့သည်။ နေ့ဘက်တွင် ၂၂°C နှင့် ညဘက်တွင် ၁၉°C အပူချိန်အပိုင်းအခြားရှိသော ၁၄ နာရီကြာ အလင်းရောင်ကာလရှိသော ကွန်ပျူတာထိန်းချုပ်ထားသော ဖန်လုံအိမ်တွင် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို နှစ်ကြိမ်ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ မျိုးစေ့အခွံမာလွန်းခြင်းကြောင့် မျိုးစေ့အိပ်စက်ခြင်းကို ကာကွယ်ရန်နှင့် အပင်ပေါက်နှုန်းတူညီစေရန် မျိုးစေ့များကို ကြဲချခြင်းမပြုမီ (သန္ဓေသား၏ တစ်ဖက်ခြမ်းရှိ မျိုးစေ့အခွံကို ချွန်ထက်သောဓားဖြင့် ဖြတ်တောက်ခြင်း) ကုတ်ခြစ်သည်။ အပင်များကို ပိုးမွှားကင်းစင်သောမြေ (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland) ဖြင့် အိုးများ (11 × 11 × 21 cm) တွင် စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ ၁၉၉၉ ခုနှစ်တွင် ပိုလန်နိုင်ငံ၊ Verzhenitsa (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E) ရှိ လယ်ကွင်းတစ်ခုတွင် စိုက်ပျိုးထားသော အရွက်ကျဉ်း lupine အပင်များ၏ ပင်စည်များမှ စိုက်ပျိုးထားသော Colletotrichum lupini Col-08 မျိုးကွဲဖြင့် မျိုးစေ့ထည့်သွင်းခြင်းကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ နေရာတစ်ခုယူပါ။ ပေါင်းပင်ပေါက်စေရန်အတွက် 20°C ရှိ SNA အလတ်စားတွင် အနက်ရောင်မီးအောက်တွင် ၂၁ ရက်ကြာ စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ စိုက်ပျိုးပြီး လေးပတ်အကြာတွင် အပင်များသည် အရွက် ၄-၆ ရွက်အဆင့်သို့ ရောက်ရှိသောအခါ၊ တစ်မီလီလီတာလျှင် conidia 0.5 x 106 ပါဝင်မှုဖြင့် conidia ရည်စိမ်ဆေးဖြင့် ပက်ဖျန်းခဲ့သည်။ မျိုးစေ့ထည့်သွင်းပြီးနောက်၊ conidia အပင်ပေါက်ရန်နှင့် ရောဂါပိုးကူးစက်မှုဖြစ်စဉ်ကို အထောက်အကူပြုရန် အပင်များကို 98% ခန့်နှင့် အပူချိန် 25°C တွင် ၂၄ နာရီကြာ မှောင်မိုက်သောနေရာတွင် ထားခဲ့သည်။ ထို့နောက် အပင်များကို နေ့ခင်းဘက် 22°C/ညဘက် 19°C နှင့် စိုထိုင်းဆ 70% တွင် ၁၄ နာရီကြာ အလင်းရောင်အောက်တွင် စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ ရောဂါရမှတ်ကို ကူးစက်ပြီး ၂၂ ရက်အကြာတွင် ပြုလုပ်ခဲ့ပြီး ပင်စည်နှင့် အရွက်များတွင် အနာများရှိနေခြင်း သို့မဟုတ် မရှိခြင်းပေါ် မူတည်၍ 0 (ခုခံအား) မှ 9 (အလွန်ထိခိုက်လွယ်သည်) အထိ ရှိသည်။ ထို့အပြင်၊ အမှတ်ပေးပြီးနောက် အပင်များ၏ အလေးချိန်ကို တိုင်းတာခဲ့သည်။ အမှတ်အသား မျိုးရိုးဗီဇပုံစံများနှင့် ရောဂါပုံစံများအကြား ဆက်နွယ်မှုကို အမှတ်နှစ်ဆင့် ဆက်စပ်မှု (အန်သရက်နို့စ် ခံနိုင်ရည်ရှိသော ပုံစံကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် မျဉ်းကြောင်းအစုံတွင် မတူညီသော အမှတ်အသားများ မရှိခြင်း) အဖြစ် တွက်ချက်ခဲ့သည်။