Kea leboha ha le etetse Nature.com. Mofuta wa sebatli seo o se sebedisang o na le tshehetso e fokolang ya CSS. Bakeng sa boiphihlelo bo botle ka ho fetisisa, re kgothaletsa hore o sebedise sebatli se ntjhafaditsweng (kapa o tima Mokgwa wa ho Kopana ho Internet Explorer). Ho sa le jwalo, ho netefatsa tshehetso e tswelang pele, re tla etsa sebaka sena sa marang-rang ntle le mekgwa le JavaScript.
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) ke semela sa linaoa se sebelisetsoang tlhahiso ea lijo le ntlafatso ea mobu. Katoloso ea lefats'e ea NLL e le sejalo e hohetse li-fungus tse ngata tse bakang mafu, ho kenyeletsoa le lupine anthracnose, e bakang lefu le bolaeang la anthracnose. Li-allele tse peli, Lanr1 le AnMan, tse fanang ka khanyetso e eketsehileng, li sebelisitsoe ho ikatiseng ha NLL, empa mekhoa ea limolek'hule e ntse e sa tsejoe. Phuputsong ena, matšoao a Lanr1 le AnMan a sebelisitsoe ho hlahloba lisampole tsa NLL tsa Europe. Teko ea ente tikolohong e laoloang e tiisitse katleho ea bafani ba babeli ba hanyetsang. Ho hlahlojoa ha liphatsa tsa lefutso tse fapaneng ho entsoe mela e emelang e hanyetsang le e kotsing. Khanyetso ea anthracnose e ne e amahanngoa le ho pepeseha ho feteletseng ha mantsoe a liphatsa tsa lefutso "GO:0006952 Defense Response", "GO:0055114 Redox Process", le "GO:0015979 Photosynthesis". Ho phaella moo, mola wa Lanr1(83A:476) o bontshitse ho hlophiswa ha transcriptome ka potlako ka mora ho entwa, ha mela e meng e bontshitse tieho karabelong ena ka dihora tse ka bang 42. Dikarabelo tsa tshireletso di amana le dijini tsa TIR-NBS, CC-NBS-LRR le NBS-LRR, diprotheine tse 10 tse amehang ho pathogenesis, diprotheine tsa phetiso ya lipid, endoglucan-1,3-β-glucosidase, diprotheine tsa lebota la sele tse ruileng ka glycine, le dijini tse tswang tseleng e arabelang ya oksijene. Dikarabelo tsa pele ho 83A:476, ho kenyeletswa le ho hatellwa ka hloko ha dijini tse amanang le photosynthesis, ho tsamaellana le tshireletso e atlehileng nakong ya mohato wa kgolo ya dimela wa baeloji ya fungal, ho bontsha hore effector e baka ho itshireletsa mafung. Karabelo ya Mandeloop e diehiswa, jwalo ka ho hula ka kakaretso ho rapameng.
Lupine e nang le mahlaku a masesaane (NLL, Lupinus angustifolius L.) ke lijo-thollo tse nang le protheine e ngata tse tsoang sebakeng se ka bophirima ho Mediterranean1,2. Hona joale e lengoa e le sejalo sa lijo bakeng sa liphoofolo le batho. E boetse e nkoa e le manyolo a matala lits'ebetsong tsa potoloho ea lijalo ka lebaka la ho khomarela naetrojene ka libaktheria tse lokisang naetrojene hammoho le ntlafatso e akaretsang ea sebopeho sa mobu. NLL e fetile ts'ebetsong e potlakileng ea ho rua malapeng lekholong la lilemo le fetileng 'me e ntse e le tlas'a khatello e phahameng ea ho ikatisa3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. Ka temo e pharaletseng ea NLL, tatellano ea li-fungus tse bakang mafu e ile ea hlahisa libaka tse ncha tsa temo 'me ea baka mafu a macha a senyang lijalo. Se ikhethang ka ho fetisisa bakeng sa balemi ba lupin le bahlahisi ba lihlahla e bile ponahalo ea anthracnose, e bakoang ke fungus e bakang mafu, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Se ikhethang ka ho fetisisa bakeng sa balemi ba lupin le bahlahisi ba lihlahla e bile ponahalo ea anthracnose, e bakoang ke fungus e bakang mafu, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного патогенным грибком Colletotrichum Hagedorn13. Se tsebahalang haholo ho balemi ba lupine le bahlahisi ba dimela e bile ho hlaha ha anthracnose e bakilweng ke fungus e bakang pathogenic Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.对于羽扇豆农民和饲养者來说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真菌Colletotrichum &3 Niler &3 Fedor (Bondar lupini)引起的.对于羽扇豆农民和饲养者來说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真菌Colletotrichum lupini). Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываемого патогеным гриtricбком Feel Hagedorn13. Se khahlang haholo balemi ba lupine le bahlahisi ba lihlahla ke ho hlaha ha anthracnose e bakoang ke fungus e bakang mafu Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.Litlaleho tsa pele tsa lefu lena li tsoa Brazil le United States, 'me matšoao a tloaelehileng a hlaha ka 1912 le 1929 ka ho latellana. Leha ho le joalo, ka mor'a lilemo tse ka bang 30, kokoana-hloko ena e ile ea khethoa e le Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph ea Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ho Sebopeho se Tatelletsweng. le H. Schrenk,. le H. Schrenk,.le H. Schrenk. & H.施伦克，. & H.施伦克，.le H. Schlenk,.Phenotyping ea pele ea lefu e entsoeng bohareng ba lekholo la bo20 la lilemo e bontšitse khanyetso e itseng ho li-accession tsa NLL le lupine e mosehla (L. luteus L.), empa li-accession tsohle tse tšoeu tsa lupine (L. albus L.) tse lekiloeng li ne li le kotsing e kholo ea ho angoa ke lefu lena. Lithuto li bontšitse hore nts'etsopele ea anthracnose e amahanngoa le pula e eketsehileng (mongobo oa moea) le mocheso (o pakeng tsa 12-28°C), e leng se lebisang ho tlōlong ea khanyetso mochesong o phahameng. Ha e le hantle, nako e hlokahalang hore conidia e mele 'me lefu lena le qale, e ne e le khutšoanyane ka makhetlo a mane ho 24°C (lihora tse 4) ho feta ho 12°C (lihora tse 16) tlas'a maemo a mongobo o phahameng. Kahoo, ho futhumala ha lefatše ho tsoelang pele ho lebisitse ho ata ha anthracnose. Leha ho le joalo, lefu lena le ile la bonoa Fora (1982) le Ukraine (1983) e le sesupo sa tšokelo e tlang, empa ho bonahala indasteri ea lupine ka nako eo e ile ea hlokomolohuoa. Lilemo tse 'maloa hamorao, lefu lena le bolaeang le ile la namela lefatšeng ka bophara 'me la boela la ama linaha tse kholo tse hlahisang lupine tse kang Australia, Poland le Jeremane22,23,24. Kamora ho qhoma ha anthracnose bohareng ba bo-1990, tlhahlobo e pharaletseng e ile ea fella ka ho fumanoa ha bafani ba 'maloa ba hanyetsang lisampoleng tsa NLL19. Ho hanyetsa NLL ho anthracnose ho laoloa ke li-allele tse peli tse arohaneng tse kholo tse fumanoang mehloling e fapaneng ea germplasm: Lanr1 ho mofuta oa Tanjil le Wonga le AnMan ho mofuta oa germ. Mandalay 25, 26. Li-allele tsena li tlatsana le matšoao a limolek'hule a tšehetsang khetho ea germplasm e hanyetsang mananeong a ho ikatisa25,26,27,28,29,30. Mohala o sa haneleng oa ho ikatisa 83A:476 o jereng allele ea Lanr1 o ile oa tšeloa le mola o hlaha o kotsing P27255 ho fumana palo ea RIL e arolang khanyetso ea anthracnose, e leng se ileng sa etsa hore ho khonehe ho abela sebaka sa Lanr1 ho chromosome NLL-1131, 32, 33. Ho hokahanya matšoao a 'mapa oa khokahano ho tloha sebakeng sa khanyetso se ka thoko ho ea ho anthracnose ka moralo oa genomic, NLL e senotse sebaka sa li-allele tsohle tse tharo ho chromosome e le 'ngoe (NLL-11), empa maemong a fapaneng29,34,35. Leha ho le joalo, ka lebaka la palo e nyane ea li-RIL le sebaka se seholo sa liphatsa tsa lefutso pakeng tsa matšoao le li-allele tse tsamaellanang, ha ho na liqeto tse tšepahalang tse ka etsoang ka liphatsa tsa tsona tsa lefutso. Ka lehlakoreng le leng, tšebeliso ea liphatsa tsa lefutso tse ka morao ho li-lupin e thata ka lebaka la bokhoni ba tsona bo tlase haholo ba ho nchafatsa, e leng se etsang hore ho laola liphatsa tsa lefutso ho be boima37.
Nts'etsopele ea germplasm e ruuoang lapeng e jereng allele e lakatsehang boemong ba homozygous, joalo ka 83A:476 (Lanr1) le Mandelup (AnMan), e butse monyako oa ho ithuta khanyetso ea anthracnose ha ho tobanoe le boteng ba metsoako e hanyetsanang ea li-alleles liphoofolong tse hlaha. Menyetla ea mekhoa ea limolek'hule. Bapisa likarabo tsa ts'ireletso tse hlahisoang ke li-genotype tse itseng. Phuputso ena e hlahlobile karabelo ea pele ea transcriptome ea NLL ho ente ea C. lupini. Taba ea pele, phanele ea germplasm ea Europe ea NLL e nang le mela e 215 e ile ea hlahlojoa ho sebelisoa matšoao a limolek'hule a tšoaeang li-allele tsa Lanr1 le AnMan. Phenotyping ea anthracnose e ile ea etsoa meleng e 50 ea NLL, e neng e khethiloe pele bakeng sa matšoao a limolek'hule, tlas'a maemo a laoloang. Ho latela liteko tsena, mela e mene e fapaneng khanyetso ea anthracnose le sebopeho sa allelic sa Lanr1/AnMan li ile tsa khethoa bakeng sa ho khetholla tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso tsa ts'ireletso ka mekhoa e 'meli e tlatsanang: tatellano ea RNA e phahameng le ho lekanya PCR ka nako ea sebele.
Tlhahlobo ea sete ea germplasm ea NLL (N = 215) ka matšoao a Lanr1 (Anseq3 le Anseq4) le AnMan (Anseq4) le AnMan (AnManM1) e bontšitse hore mola o le mong feela (95726, haufi le Salamanca-b) o eketsa allele ea "ho hanyetsa" bakeng sa matšoao 'ohle, ha "Boteng ba li-allele tse 'tšoenyehang'" bo fumane karolo ea matšoao 'ohle meleng e 158 (~73.5%). Mela e leshome le metso e meraro e hlahisitse li-allele tse peli tse "hanyetsang" tsa letšoao la Lanr1, 'me mela e 8 e hlahisitse li-allele tse "hanyetsang" tsa letšoao la Lanr1. Allele ea "ho hanyetsa" ea letšoao la AnMan (Table e Tlatsetsang S1). Mela e 'meli e ne e le heterozygous bakeng sa letšoao la Anseq3 le heterozygous e le 'ngoe bakeng sa letšoao la AnManM1. Mela e 42 (19.5%) e ne e e-na le mekhahlelo e fapaneng ea li-allele tsa Anseq3 le Anseq4, e bontšang khafetsa e phahameng ea ho kopana hape pakeng tsa libaka tsena tse peli. Mefuta ea li-phenotype tsa anthracnose tlas'a maemo a laoloang (Tafole e Tlatsetsang S2) e senotse phapang khanyetsong ea li-genotype tse lekiloeng, e ileng ea bonahala boima ba anthracnose. Liphapang lipakeng tsa lintlha tse tloaelehileng li ne li tloha ho 1.8 (e hanyetsang ka tekanyo) ho isa ho 6.9 (e hanyetsang) 'me liphapang tsa boima ba limela li ne li tloha ho 0.62 (e hanyetsang) ho isa ho 4.45 g (e hanyetsang). Ho bile le kamano e kholo lipakeng tsa boleng bo bonoeng liphetolelong tse peli tsa teko (0.51 bakeng sa lintlha tsa boima ba lefu, P = 0.00017 le 0.61 bakeng sa boima ba semela, P < 0.0001) hammoho le lipakeng tsa liparamente tsena tse peli (− 0.59 le − 0.77, P < 0.0001). Ho bile le kamano e kholo lipakeng tsa boleng bo bonoeng likoping tse peli tsa teko (0.51 bakeng sa lintlha tsa boima ba lefu, P = 0.00017 le 0.61 bakeng sa boima ba semela, P < 0.0001) hammoho le lipakeng tsa liparamente tsena tse peli (− 0.59 le − 0.77, P < 0.0001). Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 для баллов тяжез00, 1 = 1 = для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р < 0,0001) 0,0001). Ho fumanoe kamano e kholo lipakeng tsa boleng bo bonoeng makhetlong a mabeli a teko (0.51 bakeng sa lintlha tsa boima ba lefu, P = 0.00017 le 0.61 bakeng sa boima ba semela, P < 0.0001), hammoho le lipakeng tsa liparamente tsena tse peli (- 0.59 le -0.77, P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分為0.51，P = 0.00017，植物重量為0.61，P <0.0001）以及這两个参数之间（- 0.59 和 - 0.77，P <0.0001).在 两 次 重复 实验 中观察的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 评 分为 5 km . 0.00017 , 植物 為 為 0.61 , p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 ((((- 0.59 和- 0.59 和– 0.50 和– 0.59 和– 0.59 和– 9  – 9  – 9                                                                                                                                                    0.77, P < 0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тяжести заболевания 0,51, 10 = 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, P <0,0001. Ho bile le kamano e kholo lipakeng tsa boleng bo bonoeng habeli (lintlha tsa boima ba lefu 0.51, P = 0.00017 le boima ba semela 0.61, P < 0.0001) le pakeng tsa liparamente tsena tse peli (-0.59 le -0 .0001) 0.77, P<0.0001. ).Matšoao a tloaelehileng a bonoang limela tse kotsing a kenyelletsa ho thibana le ho sotha kutu ho tšoanang le sebopeho sa "seqha sa molisa", ho lateloa ke liso tse oval tse nang le li-sporozoite tse lamunu/pinki (Setšoantšo se Tlatsetsang sa 1). Li-gene tsa Australia tse jereng liphatsa tsa lefutso tsa Lanr1 (83A:476 le Tanjil) le AnMan (Mandelup) li hanela ka tekanyo e itekanetseng, 0.0331 le 0.0036). Mela e meng e nang le li-allele tsa Lanr1 le/kapa AnMan tse "hanelang" e bontša matšoao a lefu lena.
Hoa thahasellisa hore mela e 'maloa ea NLL e se nang allele ea letšoao le "hanelang" e senotse boemo bo phahameng ba khanyetso ea anthracnose (e ka bapisoang kapa e phahameng ho feta ea Lanr1 kapa AnMan genotypes), joalo ka Boregine (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa liparamente ka bobeli), Bojar (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa lintlha le 0.001 bakeng sa boima ba semela) le Population B-549/79b (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa lintlha le e seng ea bohlokoa bakeng sa boima). Hoa thahasellisa hore mela e 'maloa ea NLL e se nang allele ea letšoao le "hanelang" e senotse boemo bo phahameng ba khanyetso ea anthracnose (e ka bapisoang kapa e phahameng ho feta ea Lanr1 kapa AnMan genotypes), joalo ka Boregine (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa liparamente ka bobeli), Bojar (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa lintlha le 0.001 bakeng sa boima ba semela) le Population B-549/79b (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa lintlha le e seng ea bohlokoa bakeng sa boima). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокий уровень песни или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine (значение P <0,0001 для обоих параметров), Bojar (значение P0 10,0001 для массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). Hoa thahasellisa hore mela e 'maloa ea NLL e se nang allele ea letšoao le 'hanelang' e bontšitse boemo bo phahameng ba ho hanyetsa anthracnose (e bapisoang le kapa e phahameng ho feta ea Lanr1 kapa AnMan genotypes), joalo ka Boregine (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa liparamente ka bobeli), Bojar (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa tlhahlobo le 0.001 bakeng sa boima ba semela) le palo ea baahi B-549/79b (Boleng ba P < 0.0001 bakeng sa tlhahlobo 'me ha bo bohlokoa bakeng sa boima).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗性（与LanAn1基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001，植物重量為0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重量不显着）. Hoa thahasellisa hore litsamaiso tse ling tsa NLL tse se nang matšoao a "antigenic" li bontša khanyetso e phahameng e otlolohileng (e lekanang le liphatsa tsa lefutso tsa Lanr1 kapa AnMan kapa ho feta), joalo ka Boregine (liparamente ka bobeli P < 0.0001), Bojar (boleng ba P < 0.0001, boima ba semela 0.001) le mofuta oa B-549/79b (boleng ba P < 0.0001, boima ha bo bohlokoa). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», показали высокие уровни устойчанизсти выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001), Bojar (значение P <0,0001, маел001, мас001, мас001 B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). Hoa thahasellisa hore mela e meng ea NLL e se nang li-allele tsa letšoao la 'khahlano' e bontšitse maemo a holimo a khanyetso ea anthracnose (e bapisoang le kapa e phahame ho feta Lanr1 kapa AnMan genotypes), joalo ka Boregine (Boleng ba P bakeng sa liparamente ka bobeli <0.0001), Bojar (Boleng ba P <0.0001, boima ba semela 0.001) le palo ea baahi B-549/79b (Boleng ba P <0.0001, boima ha bo bohlokoa).Ketsahalo ena e fana ka maikutlo a monyetla oa mohloli o mocha oa ho hanyetsa liphatsa tsa lefutso, e hlalosang khaello ea kamano e bonoang pakeng tsa li-genotype tsa matšoao le li-phenotype tsa mafu (boleng ba P ho tloha ho ~0.42 ho isa ho ~0.98). Kahoo, teko ea Kolmogorov-Smirnov e bontšitse hore lintlha tse mabapi le ho hanyetsa anthracnose li ne li ajoa ka tloaelo bakeng sa lintlha (boleng ba P 0.25 le 0.11) le boima ba semela (boleng ba P 0.47 le 0.55), e leng se bontšang hore ke nahana hore ho ameha li-allele tse ngata ho feta Lanr1 le AnMan.
Ho latela liphetho tsa tlhahlobo ea khanyetso ea anthracnose, mela e 4 e khethiloe bakeng sa tlhahlobo ea transcriptome: 83A:476, Boregine, Mandelup, le Baahi ba 22660. Mela ena e ile ea lekoa hape bakeng sa khanyetso ea anthrax litekong tsa ente ka tatellano ea RNA, ha feela e tšoana le tekong e fetileng. Boleng ba lintlha e ne e le bo latelang: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) le baahi ba 22660 (6.11 ± 1.29).
Protokhole ya Illumina NovaSeq 6000 e fihletse karolelano ya dipara tse 40.5 tsa Mread ka sampole (29.7 ho isa ho 54.4 Mreads) (Tafole e Tlatsetsang S3). Dintlha tsa ho hokahanya tatellanong ya ditshupiso di ne di tloha ho 75.5% ho isa ho 88.6%. Karolelano ya karolelano ya data ya palo ya ho bala pakeng tsa mefuta e fapaneng ya diteko pakeng tsa dikopi tsa baeloji e ne e tloha ho 0.812 ho isa ho 0.997 (karolelano ya 0.959). Ho dijini tse 35,170 tse hlahlobilweng, tse 2917 ha di a ka tsa senola tlhahiso, mme dijini tse ding tse 4785 di hlahisitswe boemong bo sa reng letho (bohareng ba motheo <5). Ho dijini tse 35,170 tse hlahlobilweng, tse 2917 ha di a ka tsa senola tlhahiso, mme dijini tse ding tse 4785 di hlahisitswe boemong bo sa reng letho (bohareng ba motheo <5). Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрессировались на ненезнабрессии <5). Ho dijini tse 35,170 tse hlahlobilweng, tse 2917 ha di a ka tsa bontsha tlhahiso, mme dijini tse setseng tse 4785 di hlahisitswe boemong bo sa reng letho (bohareng ba motheo <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个沒有表达，其他4785 个基因的表达可以忽略不计（基本平均倉。35,170 Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессировались . Ho dijini tse 35,170 tse hlahlobilweng, tse 2917 ha di a ka tsa hlahiswa mme dijini tse setseng tse 4785 di ne di na le tlhahiso e nyane (bohareng ba motheo <5).Kahoo, palo ea liphatsa tsa lefutso tse nahanoang tse hlahisitsoeng (bohareng ba karolelano ≥ 5) nakong ea teko e ne e le 27,468 (78.1%) (Tafole e Tlatsetsang S4).
Ho tloha ntlheng ea pele, mela eohle ea NLL e arabetse ho enteng ha C. lupini (mofuta oa Col-08) ka ho hlophisa bocha transcriptome (Tafole ea 1), leha ho le joalo, ho ile ha bonoa liphapang tse kholo lipakeng tsa mela. Kahoo, mola oa khanyetso 83A:476 (o jereng gene ea Lanr1) o bontšitse ho hlophisa bocha ho hoholo ha transcriptome ntlheng ea pele (6 hpi) ka keketseho ea makhetlo a 31-69 palong ea liphatsa tsa lefutso tse arohaneng tse holimo le tse tlase ha li bapisoa le lintlha tse ling tsa nako ntlheng ena. Ho phaella moo, tlhōrō ena e bile ea nakoana, kaha polelo ea liphatsa tsa lefutso tse 'maloa feela e ile ea lula e fetohile haholo ntlheng ea bobeli (12 hpi). Hoa thahasellisa hore Boregine, eo hape e bontšitseng boemo bo phahameng ba khanyetso tekong ea graft, ha ea ka ea feta lenaneong le leholo joalo la ho hlophisa bocha nakong ea teko. Leha ho le joalo, palo ea liphatsa tsa lefutso tse hlahisitsoeng ka mokhoa o fapaneng (DEG) e ne e tšoana bakeng sa Boregine le 83A:476 ho 12 HPI. Mandelup le baahi ba 22660 ba bontšitse litlhōrō tsa DEG nakong ea ho qetela (48 l/s), e leng se bontšang tieho e itseng likarabelong tsa tšireletso.
Hobane 83A:476 e ile ea etsoa reprogramming e kholo ea transcriptome ho arabela C. lupini ho 6 HPI ha e bapisoa le mela e meng kaofela, ~91% ea li-DEG tse bonoeng nakong ena li ne li ipapisitse le leloko (Setšoantšo sa 1). Leha ho le joalo, ho bile le ho tšoana ho itseng likarabong tsa pele lipakeng tsa mela ea thuto, kaha 68.5%, 50.9%, le 52.6% DEG ho Boregine, Mandelup, le baahi ba 22660, ka ho latellana, li ne li tšoana le tse fumanoeng ho 83A:476 lintlheng tse itseng ka nako. Leha ho le joalo, li-DEG tsena li ne li ikarabella bakeng sa karoloana e nyane feela (0.97–1.70%) ea li-DEG tsohle tse fumanoeng hona joale ho sebelisoa 83A:476. Ho phaella moo, di-DEG tse 11 tse tswang meleng yohle di ne di utlwana ka nako ena (Ditafole tse Tlatsetsang S4-S6), ho kenyeletswa le dikarolo tse tlwaelehileng tsa dikarabelo tsa tshireletso ya dimela: protheine ya phetiso ya lipid (TanjilG_32225), enzyme ya endoglucan-1,3-β-glucoside (TanjilG_23384), diprotheine tse pedi tse ka bakang kgatello jwalo ka SAM22 (TanjilG_31528 le TanjilG_31531), protheine ya motheo ya latex (TanjilG_32352), le diprotheine tse pedi tse nang le glycine e ngata ka hara lebota la sele (TanjilG_19701 le TanjilG_19702). Hape ho bile le ho kopana ho hoholo ha dikarabelo tsa transcriptome pakeng tsa 83A:476 le Boregine ho 24 HPI (kakaretso ya 16-38% DEG) le pakeng tsa Mandelup le Baahi ba 22660 ho 48 HPI (kakaretso ya 14-20% DEG).
Setšoantšo sa Venn se bonts'ang palo ea liphatsa tsa lefutso tse hlahisitsoeng ka tsela e fapaneng (DEG) meleng ea lupine e nang le makhasi a masesaane (NLL) e kenngoeng ka Colletotrichum lupini (mofuta oa Col-08 o fumanoeng masimong a lupine Wierzhenice, Poland, 1999). Mela ea NLL e hlahlobiloeng e ne e le: 83A:476 (e hanyetsang, e jereng allele ea Lanr1), Boregine (e hanyetsang, semelo sa lefutso ha se tsejoe), Mandelup (e hanyetsang ka tekanyo, e jereng allele ea AnMan) le baahi ba 22660 (e kotsing haholo). Khutsufatso ea hpi e emela lihora tse ngata kamora ho entoa. Boleng ba lefela bo tlositsoe ho nolofatsa kerafo.
Sete ea liphatsa tsa lefutso tse nang le tlhahiso e feteletseng ho 6 hpi e hlahlobiloe bakeng sa boteng ba libaka tsa liphatsa tsa lefutso tsa R tse kaholimo (Tafole e Tlatsetsang S7). Phuputso ena e senotse tlhahiso ea transcriptome ea liphatsa tsa lefutso tsa khale tsa ho hanyetsa mafu tse nang le libaka tsa NBS-LRR feela ho 83A:476. Sete ena e ne e e-na le liphatsa tsa lefutso tse le 'ngoe tsa TIR-NBS-LRR (tanjilg_05042), liphatsa tsa lefutso tse hlano tsa CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, le tanjilg_16162), le NBS-LR tse 'ne, Tanjilg_16162), le NBS-LR tse 'ne (tanjilg_16162) hammoho le NBS-Lrr tse 'ne (tanjilg_16162) le NBS-LRR tse 'ne (TANJILG_16162). Lijini tsena kaofela li na le libaka tsa canonical tse hlophisitsoeng ka tatellano e bolokiloeng. Ntle le liphatsa tsa lefutso tsa NBS-LRR, li-kinase tse 'maloa tsa RLL li ile tsa kenngoa tšebetsong ka 6 hpi, e leng e le' ngoe ho Boregine (TanjilG_19877), tse peli ho Mandelup (TanjilG_07141 le TanjilG_19877) le palong ea baahi ba 22660 (TanjilG_09014 le TanjilG_10361) le tse peli ho 83A 27:476.
Liphatsa tsa lefutso tse nang le ponahalo e fetotsoeng haholo ha li arabela ho ente ea C. lupini (mofuta oa Col-08) li ile tsa hlahlojoa ka ho ntlafatsa Gene Ontology (GO) (Table e Tlatsetsang S8). Poleloana e atisang ho emeloa haholo ea ts'ebetso ea baeloji e ne e le "GO:0006952 karabelo ea ts'ireletso" e hlahileng metswakong e 6 ho e 16 (nako × mola) e nang le bohlokoa bo phahameng (boleng ba P < 0.001) (Setšoantšo sa 2). Poleloana e atisang ho emeloa haholo ea ts'ebetso ea baeloji e ne e le "GO:0006952 karabelo ea ts'ireletso" e hlahileng metswakong e 6 ho e 16 (nako × mola) e nang le bohlokoa bo phahameng (boleng ba P < 0.001) (Setšoantšo sa 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответ», который и процесса был линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Poleloana e atisang ho emeloa haholo ea ts'ebetso ea baeloji e ne e le 'GO:0006952 karabelo ea ts'ireletso', e hlahileng metswakong e 6 ho e 16 (nako × moloko) e nang le bohlokoa bo phahameng (boleng ba P < 0.001) (Setšoantšo sa 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16 个（时间中×个中，具有高显着性(P 值< 0.001)(图2). Poleloana e emelang ka ho fetisisa ea ts'ebetso ea baeloji ke "GO:0006952 karabelo ea ts'ireletso", e hlahang metswakong e 6 ho e 16 (时间×线), e nang le bohlokoa bo phahameng (boleng ba P < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был "GO: 0006952 Defense Response", который появлялся 10 × 6 линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Poleloana e atisang ho emeloa haholo ea ts'ebetso ea baeloji e ne e le 'GO:0006952 Karabelo ea Tšireletso', e hlahileng mefuteng e 6 ho tse 16 (nako × mola) ka bohlokoa bo phahameng (boleng ba P < 0.001) (Setšoantšo sa 2).Lentsoe lena le ne le emetsoe ka ho feteletseng ka linako tse peli ho 83A: 476 le Boregine (6 le 24 hpi) le ka nako e le 'ngoe ho Mandelup le Population 22660 (12 le 6 hpi, ka ho latellana). Ena ke sephetho se lebeletsoeng, se totobatsang karabelo ea antifungal ea mela e hanyetsanang. Ho phaella moo, 83A:476 e arabetse C. lupini ka ho susumetsa ka potlako liphatsa tsa lefutso tse amanang le ho phatloha ha oxidative ho emetsoeng ke lentsoe "GO:0055114 redox process", e bontšang karabelo e itseng ea tšireletso, ha Boregine e senola likarabo tse itseng tsa tšireletso, tse amanang le lentsoe 'GO'. :0006950 Karabelo ea khatello ea maikutlo”. Baahi ba 22660 ba kentse tšebetsong karabelo ea khanyetso e otlolohileng e kenyeletsang li-metabolite tsa bobeli, e totobatsang palo e feteletseng ea mantsoe a reng “GO:0016104 Ts'ebetso ea triterpene biosynthesis” le “GO:0006722 Ts'ebetso ea metabolism ea triterpene” (mantsoe ana ka bobeli ke a sehlopha se le seng sa liphatsa tsa lefutso), ha ho nahanoa ka liphetho tsa tlhahlobo ea ntlafatso ea lentsoe la GO, botsitso ba karabelo ea Mandelup bo ne bo le pakeng tsa Boregine le Baahi ba 22660. Ho phaella moo, karabelo ea pele 83A:476 (6 hpi) le karabelo e liehang Mandelup le Baahi ba 22660 li kenyelletsa lentsoe GO:0015979 'photosynthesis' le lits'ebetso tse ling tse amanang le baeloji.
Mantsoe a bioprocess gene ontology a khethiloeng tlhalosong ea liphatsa tsa lefutso tse hlahisitsoeng ka mokhoa o fapaneng nakong ea likarabo tsa transcriptome tsa lupine e nang le makhasi a masesaane (NLL) e kenngoeng ka anthrax lupine (mofuta oa Col-08 o fumanoeng masimong a lupine Wierzhenice, Poland, ka 1999) a fetelelitsoe haholo. Methati ea NLL e hlahlobiloeng e ne e le: 83A:476 (e hanyetsang, e jereng allele ea Lanr1 e tšoanang), Boregine (e hanyetsang, e sa tsejoeng ka lefutso), Mandelup (e hanyetsang ka tekanyo, e jereng allele ea AnMan e tšoanang) le baahi ba 22660 (e ka angoang habonolo).
Hobane phuputso ena e ne e ikemiseditse ho hlwaya dijini tse tlatsetsang ho hanyetsaneng ha anthracnose, dijini tse abetsweng mantswe a reng GO “GO: 0006952 Dikarabelo tsa Tshireletso” le “GO: 0055114 Ditshebetso tsa Redox” di ile tsa sekasekwa ka di-cut-off kaha meelelo ya motheo e bolela ≥ 30 ka bonyane mola o le mong. × ntlha ka nako e kopanyang boleng ba bohlokwa ba dipalopalo ba log2 (phetoho ya ho mena). Palo ya dijini tse fihlelang ditekanyetso tsena e ne e le 65 bakeng sa GO:0006952 le 524 bakeng sa GO:0055114.
83A:476 e senotse litlhōrō tse peli tsa DEG tse ngotsoeng ka lentsoe GO:0006952, la pele ho liphatsa tsa lefutso tse 6 ka intshi (liphatsa tsa lefutso tse 64, taolo ea ho nyoloha le ho theoha) le la bobeli ho liphatsa tsa lefutso tse 24 ka intshi (liphatsa tsa lefutso tse 15, taolo ea ho nyoloha feela). Boregine e boetse e bontšitse hore GO:0006952 e fihlile sehlohlolong ka nako e le 'ngoe, empa ka DEG e fokolang (11 le 8) le ts'ebetso e khethehileng. Mandeloop e bontšitse litlhōrō tse peli tsa GO:0006952 ho 12 le 48 HPI, ka bobeli li jere liphatsa tsa lefutso tse 12 (ea pele e nang le liphatsa tsa lefutso tse sebetsang, 'me ea bobeli e nang le liphatsa tsa lefutso tse hatellang feela), ha baahi ba 22660 ho 6 HPI (liphatsa tsa lefutso tse 13) ba ne ba e-na le boholo bo boholo ba taolo ea keketseho ea tlhoro. Ho lokela ho hlokomeloa hore 96.4% ea GO:0006952 DEG litlhōrōng tsena e ne e e-na le mofuta o tšoanang oa karabelo (ho ea holimo kapa tlase), e leng se bontšang ho kopana ho hoholo likarabong tsa tšireletso ho sa tsotellehe liphapang palong ea liphatsa tsa lefutso tse amehang. Sehlopha se seholo ka ho fetisisa sa tatellano e amanang le lentsoe GO:0006952 se ngola Protheine ea Molaetsa e Amanang le Tlala ea Stress-Associated Message 22 (e kang SAM22), e leng ea sehlopha sa 10 pathogenesis-associated protein (PR-10) protein clade le protheine ea mantlha ea latex. e tšoanang (e kang MLP) protein) (Setšoantšo sa 3). Lihlopha tsena tse peli li ne li fapane ka mofuta oa polelo le tataiso ea karabelo. Liphatsa tsa lefutso tse ngolang liprotheine tse kang SAM22 li bontšitse tlhahiso e tsitsitseng le ea bohlokoa linakong tsa pele tsa nako (6 kapa 12 hpi) 'me ka kakaretso li ne li sa arabele qetellong ea teko (48 hpi), ha liprotheine tse kang MLP li bontšitse tšebelisano ho 6 hpi. hpi. 83A:476 le Mandelup ho 48 hp/in, hoo e batlang e le lintlha tse ling tsohle tsa data li ne li sa arabele. Ho phaella moo, liphapang tsa liprofaele tsa polelo ea liphatsa tsa lefutso tse kang SAM22 li ile tsa latela ho bona phapang khanyetsong ea anthracnose, kaha mela e hanyetsanang haholo e ne e e-na le linako tse ngata tse susumetsang liphatsa tsena tsa lefutso haholo ho feta liphatsa tsa lefutso tse kotsing haholoanyane. Jini e 'ngoe ea PR-10 e kang LlR18A/B e bontšitse mokhoa o tšoanang haholo oa tlhahiso le jini ea protheine e kang SAM22.
Likarolo tse ka sehloohong tsa lentsoe la ts'ebetso ea baeloji "GO:0006952 Karabelo ea Tšireletso" le mekhoa ea tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso tse khethiloeng tsa li-allele tsa Lanr1 le AnMan li ile tsa khetholloa. Sekala sa Log2 se emela boleng ba log2 (phetoho ea mena) pakeng tsa limela tse entetsoeng (Colletotrichum lupini, mofuta oa Col-08, tse fumanoeng masimong a lupine, Wizhenica, Poland, 1999) le limela tsa taolo (tse entetsoeng ka sham) ka nako e le 'ngoe. Methapo e latelang ea lupine e nang le makhasi a masesaane e ile ea hlahlojoa: 83A:476 (e hanelang, e jereng allele ea Lanr1 e nang le homozygous), Boregine (e hanelang, semelo sa lefutso ha se tsejoe), Mandelup (e hanelang ka tekanyo, e jereng allele ea AnMan e nang le homozygous), le Baahi ba 22660 (e ka angoang habonolo).
Ho phaella moo, diprofaele tsa tlhahiso ya dijini tse ka sehloohong tsa RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) le AnMan (TanjilG_12861) di ile tsa lekolwa (Setshwantsho sa 3). Jini ya TanjilG_05042 e bontshitse karabelo e kgolo (ho kenngwa tshebetsong) ho 83A:476 feela ntlheng ya pele (6 hpi), ha TanjilG_12861 e ne e le bohlokwa Mandeloop feela maemong a mabedi a nako: 6 hpi (tlase taolong) le 24 hpi (6 hpi). Ka.). e ka fetolwang) ).
Lijini tse hlahisitsoeng haholo lentsoeng la GO:0055114 "ts'ebetso ea redox" e ne e le lijini tse kenyang liprotheine tsa cytochrome P450 le peroxidase (Setšoantšo sa 4). Bakeng sa lisampole tse arotsoeng ho tsoa ho 83A:476 ho 6 HPI, boleng bo phahameng kapa bo fokolang ba log2 (phetoho ea fold) ​​(bakeng sa 86.6% ea lijini) hangata li ile tsa bonoa lipakeng tsa limela tse entetsoeng le tse laoloang, tse totobatsang karabelo e phahameng ea mofuta ona oa genotype ho thobalano e enteloang. 83A:476 e bontšitse GO ea bohlokoa ka ho fetisisa: 0055114 DEG ho 6 hpi (lijini tse 503), ha mela e setseng ho 48 hpi (Boregine, lijini tse 31; Mandelup, lijini tse 85; le Population 22660, lijini tse 78)). Lijining tse ngata tsa lelapa la GO:0055114, mefuta e 'meli ea likarabo ho ente (ho e kenya tšebetsong le ho thibela) e ile ea bonoa. Hoa thahasellisa hore ho fihlela ho 97.6% ea li-DEG tse khethiloeng bakeng sa lentsoe GO: 0055114 ho Mandelupe ka 48 hp. Litlhahlobo tsena li bontša hore, ho sa tsotellehe tekanyo e nyane haholo (ke hore, palo ea liphatsa tsa lefutso tsa redox tse fetotsoeng, 85 khahlanong le 503), mokhoa oa likarabo tse liehang tsa transcriptome tsa mandeloup ho anthracnose o tšoana le karabelo ea pele ea 83A:476. Ho Boregine le Population 22660, ho kopana hona ho tlase ho 51.6% le 75.6%, ka ho latellana.
Mekhoa ea tlhahiso ea likarolo tse kholo tsa lentsoe la ts'ebetso ea baeloji "GO:0055114 Ts'ebetso ea Redox" e senotsoe. Sekala sa Log2 se emela boleng ba log2 (phetoho ea mena) pakeng tsa limela tse entetsoeng (Colletotrichum lupini, mofuta oa Col-08, tse fumanoeng masimong a lupine, Wizhenica, Poland, 1999) le limela tse laoloang (tse entetsoeng ka sham) ka nako e le 'ngoe. Methapo e latelang ea lupine e nang le makhasi a masesaane e ile ea hlahlojoa: 83A:476 (e hanelang, e jereng allele ea Lanr1 e nang le homozygous), Boregine (e hanelang, semelo sa lefutso ha se tsejoe), Mandelup (e hanelang ka tekanyo, e jereng allele ea AnMan e nang le homozygous), le Population 22660 (e ka angoang habonolo).
83A:476 Likarabelo tsa transcriptomic mabapi le ente ea C. lupini (mofuta oa Col-08) le tsona li kenyelelitse ho khutsisa ho hokahaneng ha liphatsa tsa lefutso tse amanang le lentsoe GO:0015979 "photosynthesis" le lits'ebetso tse ling tse amanang le baeloji (Setšoantšo sa 5). Sete ena ea GO:0015979 DEG e ne e na le liphatsa tsa lefutso tse 105 tse ileng tsa hatelloa haholo ho 6 hpi ho 83A:476. Karolong ena e nyenyane, liphatsa tsa lefutso tse 37 le tsona li ile tsa fokotseha ho Mandelup ho 48 HPI le 35 ka nako e le 'ngoe ho baahi ba 22660, ho kenyeletsoa le li-DEG tse 19 tse tloaelehileng ho mefuta ka bobeli ea liphatsa tsa lefutso. Ha ho li-DEG tse amanang le lentsoe GO: 0015979 tse ileng tsa kenngoa tšebetsong haholo motswakong ofe kapa ofe (mola x nako).
Mekhoa ea tlhahiso ea likarolo tse kholo tsa lentsoe la ts'ebetso ea baeloji "GO:0015979 Photosynthesis" e senotsoe. Sekala sa Log2 se emela boleng ba log2 (phetoho ea mena) pakeng tsa limela tse kenngoeng (Colletotrichum lupini, mofuta oa Col-08, tse fumanoeng masimong a lupine, Wizhenica, Poland, 1999) le limela tse laoloang (tse kenngoeng ka sham) ka nako e le 'ngoe. Methapo e latelang ea lupine e nang le makhasi a masesaane e ile ea hlahlojoa: 83A:476 (e hanelang, e jereng allele ea Lanr1 e nang le homozygous), Boregine (e hanelang, semelo sa lefutso ha se tsejoe), Mandelup (e hanelang ka tekanyo, e jereng allele ea AnMan e nang le homozygous), le Population 22660 (e ka angoang habonolo).
Ho latela liphetho tsa tlhahlobo ea polelo e fapaneng le tse ka 'nang tsa ameha likarabelong tsa tšireletso khahlanong le li-fungus tse bakang mafu, sete ena ea liphatsa tsa lefutso tse supileng e khethiloe bakeng sa ho lekanya liprofaele tsa polelo ka PCR ea nako ea sebele (Table Supplementary S9).
Jini ea protheine e ka bang teng TanjilG_10657 e ile ea hlahisoa haholo meleng eohle e ithutiloeng le linakong tse ithutoang ha e bapisoa le limela tsa taolo (tse etsisang) (Litafole tse Tlatsetsang S10, S11). Ho phaella moo, boemo ba polelo ea TanjilG_10657 bo bontšitse mokhoa o ntseng o eketseha nakong ea teko bakeng sa mela eohle. Baahi ba 22660 ba bontšitse kutlo e phahameng ka ho fetisisa ea TanjilG_10657 ho ente ka ts'ebetso ea makhetlo a 114 le boemo bo phahameng ka ho fetisisa ba tlhahiso (4.4 ± 0.4) ho 24 HPI (Setšoantšo sa 6a). Jini ea protheine ea PR10 LlR18A TanjilG_27015 le eona e bontšitse ts'ebetso meleng eohle le linakong, ka bohlokoa ba lipalo-palo lintlheng tse ngata tsa data (Setšoantšo sa 6b). Ho tšoana le TanjilG_10657, boemo bo phahameng ka ho fetisisa ba tlhahiso ea TanjilG_27015 bo bonoe ho batho ba 22660 ba entetsoeng ho 24 HPI (19.5 ± 2.4). Jini ea endochitinase ea asiti TanjilG_04706 e ile ea eketseha haholo meleng eohle le libakeng tsohle tsa nako ntle le Boregine 6 hpi (Setšoantšo sa 6c). E ile ea hlahisoa ka matla ntlheng ea pele (6 HPI) ho 83A:476 (ka makhetlo a 10.5) 'me ea eketseha ka mokhoa o itekanetseng meleng e meng (ka makhetlo a 6.6-7.5). Nakong ea teko, tlhahiso ea TanjilG_04706 e ile ea lula maemong a tšoanang ho 83A:476 le Boregine, ha Mandelup le Baahi ba 22660 e ile ea eketseha haholo, ea fihla litekanyetsong tse phahameng haholo (5.9 ± 1.5 le 6.2 ± 1.5, ka ho latellana). Jini e kang ea endoglucan-1,3-β-glucosidase TanjilG_23384 e bontšitse ts'ebetso e phahameng lintlheng tse peli tsa pele tsa nako (6 le 12 hpi) meleng eohle ntle le baahi ba 22660 (Setšoantšo sa 6d). Maemo a holimo ka ho fetisisa a polelo a amanang le TanjilG_23384 a bonoe ntlheng ea bobeli ea nako (12 hpi) ho Mandelup (2.7 ± 0.3) le 83A:476 (1.5 ± 0.1). Ho 24 HPI, polelo ea TanjilG_23384 e ne e le tlase haholo meleng eohle e ithutiloeng (ho tloha ho 0.04 ± 0.009 ho isa ho 0.44 ± 0.12).
Liprofaele tsa tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso tse khethiloeng (ag) li senotsoe ka PCR ea bongata. Linomoro tsa 6, 12 le 24 li emela lihora tse ngata ka mor'a ente. Liphatsa tsa lefutso tsa LanDExH7 le LanTUB6 li sebelisitsoe bakeng sa ho tloaeleha 'me LanTUB6 e sebelisitsoe bakeng sa ho lekanya lipakeng tsa letoto. Li-error bar li emela ho kheloha ho tloaelehileng ho latela likopi tse tharo tsa baeloji, tseo e 'ngoe le e 'ngoe ea tsona e leng karolelano ea likopi tse tharo tsa tekheniki. Bohlokoa ba lipalo-palo ba liphapang maemong a tlhahiso pakeng tsa limela tse entetsoeng (Colletotrichum lupini, mofuta oa Col-08, tse fumanoeng ka 1999 ho tsoa tšimong ea lupin Wierzenica, Poland) le limela tsa taolo (tse entetsoeng ka mokhoa oa boikaketsi) li tšoailoe kaholimo ho lintlha tsa data (*Boleng ba P < 0.05, **Boleng ba P ≤ 0.01, ***Boleng ba P ≤ 0.001). Bohlokoa ba lipalo-palo ba liphapang maemong a tlhahiso pakeng tsa limela tse entetsoeng (Colletotrichum lupini, mofuta oa Col-08, tse fumanoeng ka 1999 ho tsoa tšimong ea lupin Wierzenica, Poland) le limela tsa taolo (tse entetsoeng ka mokhoa oa boikaketsi) li tšoailoe kaholimo ho lintlha tsa data (*Boleng ba P < 0.05, **Boleng ba P ≤ 0.01, ***Boleng ba P ≤ 0.001). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штам Col-08, получен в 1999 в 1999 г. Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*значение P < 0,05, **значение P ≤ 0,010, *** 0,01, 0,01, 0. Liphapang tse bonahalang tsa lipalo-palo maemong a tlhahiso pakeng tsa limela tse entetsoeng (Colletotrichum lupini, mofuta oa Col-08, tse fumanoeng ka 1999 ho tsoa tšimong ea lupine Wierzhenice, Poland) le limela tsa taolo (tse entetsoeng ka sham) li hlokometsoe kaholimo ho lintlha tsa data (*Boleng ba P < 0.05, **Boleng ba P ≤ 0.01, ***Boleng ba P ≤ 0.001).接种 (Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数据点0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001).接种 （colletorichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica的 羽扇 获得） 和对照 鼈接秗 接种差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученный с полей люпи, штам песни люпи, в 1999 г.) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены над точками данных (* значение P < 0,05, ** P-значение ≤0-P 0,001). Liphapang tse bonahalang tsa lipalo-palo maemong a tlhahiso pakeng tsa limela tse entetsoeng (Colletotrichum lupini, mofuta oa Col-08, tse fumanoeng masimong a lupine Verzhenice, Poland, ka 1999) le limela tsa taolo (tse entetsoeng ka sham) li boletsoe kaholimo ho lintlha tsa data (*Boleng ba P < 0.05 , **Boleng ba P ≤ 0.01, ***Boleng ba P ≤ 0.001).Methati ea NLL e hlahlobiloeng e ne e le: 83A:476 (e hanyetsanang, e jereng allele ea Lanr1 e nang le homozygous), Mandelup (e hanyetsanang ka tekanyo, e jereng allele ea AnMan e nang le homozygous), Boregine (e hanyetsanang, e sa tsejoeng ka lefutso) le palo ea baahi 22660 (e kotsing).
Jini e ka khethoang TanjilG_05042 sebakeng sa Lanr1 e bontshitse paterone ya tlhahiso e fapaneng haholo ho tloha ho diprofaele tse fumanweng dithutong tsa RNA-seq (Setshwantsho sa 6e). Ketso e kgolo ya jini ena e bonwe ho Mandelup le palo ya batho ba 22660 (ho fihlela makgetlo a 39.7 le a 11.7, ka ho latellana), e leng se ileng sa fella ka maemo a hodimo a tlhahiso (ho fihlela ho 1.4 ± 0.14 le 7.2 ± 1.3, ka ho latellana). 83A:476 e boetse e senotse keketseho e itseng ya jini ya TanjilG_05042 (ho fihlela makgetlo a 3.8), leha ho le jwalo, maemo a ho hlahisa a amanang a fihlelletsweng (0.044 ± 0.002) a ne a le tlase ka makgetlo a fetang 30 ho feta a bonweng ho Mandelup le palo ya batho ba 22660. e hlahlobiloeng ke qPCR e bontšitse liphapang tse kholo maemong a tlhahiso lipakeng tsa li-genotypes mefuteng e entetsoeng ka mock-entoa (taolo), e fihlelang phapang ea makhetlo a 58 pakeng tsa baahi ba 22660 le 83A:476, hammoho le lipakeng tsa baahi ba 22660 le 22660. Phapang ea makhetlo a mabeli e fihletsoe pakeng tsa Boregine le Mandalup.
Jini e ka sehloohong sebakeng sa AnMan, TanjilG_12861, e ile ea kenngoa tšebetsong ka lebaka la ente ho 83A:476 le Mandelup, e ne e sa nke lehlakore ho baahi ba 22660, 'me e ile ea fokotseha ho Boregine (Setšoantšo sa 6f). Ponahalo e amanang le jini ea TanjilG_12861 e ne e le e phahameng ka ho fetisisa ho 83A e entetsoeng: 476 (0.14±0.01). Jini ea protheine ea shock ea sehlopha sa I ea 17.4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 e bontšitse maemo a tlaase a polelo e amanang le mefuta eohle e ithutiloeng le lintlha tsa nako (Setšoantšo sa 6g). Boleng bo phahameng ka ho fetisisa bo bonoe ho 24 HPI ho baahi ba 22660 (0.14±0.02, keketseho ea makhetlo a robeli karabelong ea ente).
Papiso ea liprofaele tsa tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso (Setšoantšo sa 7) e senotse kamano e phahameng pakeng tsa TanjilG_10657 le liphatsa tse ling tse 'ne: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), le TanjilG_04706 (r = 0.79). Liphetho tse joalo li ka bontša taolo e kopanetsoeng ea liphatsa tsena tsa lefutso nakong ea likarabelo tsa tšireletso. Liphatsa tsa lefutso tsa TanjilG_12861 le TanjilG_23384 li bontšitse liprofaele tse fapaneng tsa tlhahiso ka boleng bo tlase ba coefficient ea correlation ea Pearson (ho tloha ho 0.08 ho isa ho 0.43 le -0.19 ho isa ho 0.28, ka ho latellana) ha li bapisoa le liphatsa tse ling tsa lefutso.
Likamano pakeng tsa liprofaele tsa tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso li fumanoe ho sebelisoa PCR ea bongata. Methapo e latelang ea lupine e nang le makhasi a masesaane e ile ea hlahlojoa: 83A:476 (e hanyetsanang, e jereng allele ea Lanr1 e nang le homozygous), Mandelup (e hanyetsanang ka tekanyo, e jereng allele ea AnMan e nang le homozygous), Boregine (e hanyetsanang, nalane ea liphatsa tsa lefutso ha e tsejoe), le Population 22660 (e kotsing). Lintlha tse tharo tsa nako li baliloe (lihora tse 6, 12 le 24 kamora ho entoa), ho kenyeletsoa le entoa (Colletotrichum lupini, mofuta oa Col-08, e fumanoeng masimong a lupine Wierzhenice, Poland, ka 1999) le limela tsa taolo (tse nang le sham-inoculated). Sekala se bontša boleng ba coefficient ea kamano ea Pearson.
Ho latela data e fumanoeng ka matla a 6 horsepower ka intshi, WGCNA e entsoe ho 9981 DEG e hlwailweng ka ho bapisa dimela tse entetsweng le tse laolwang ho tsepamisa maikutlo dikarabelong tsa pele tsa tshireletso (Tafole e Tlatsetsang S12). Di-module tse mashome a mabedi a metso e mmedi tsa dijini (dihlopha) di fumanwe di na le diprofaele tsa tlhahiso tse amanang (tse ntle kapa tse mpe) pakeng tsa di-genotype le mefuta e fapaneng ya diteko. Ka karolelano, maemo a tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso a ne a theoha ka tatellano ea 83A:476 > Mandelup > Boregine > Baahi ba 22660 (leha ho le joalo, ka mefuta ena ka bobeli, mokhoa ona o ne o le matla ho limela tse laolang). Ka karolelano, maemo a tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso a ne a theoha ka tatellano ea 83A:476 > Mandelup > Boregine > Baahi ba 22660 (leha ho le joalo, ka mefuta ena ka bobeli, mokhoa ona o ne o le matla ho limela tse laolang). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 Mandelup > Boregine > Population 22660 (в обоих вариантах, однако, эта тенден) контрольных растений). Ka karolelano, maemo a tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso a fokotsehile ka tatellano ea 83A:476 > Mandelup > Boregine > Baahi ba 22660 (leha ho le joalo, ka mefuta ena ka bobeli, mokhoa ona o ne o le matla ho limela tse laolang).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，這种趋势在对照植物中更强）.平均 而 言 , 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> baahi 22660 的顺序 下降 （，在 种 中 中 在 种 中 中 ， ............................ В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 Mandelup > Boregine > Population 22660 (однако в обоих вариантах эта тенденция сина тенденция контрольных растений). Ka karolelano, maemo a tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso a fokotsehile letotong la 83A:476 > Mandelup > Boregine > Baahi ba 22660 (leha ho le joalo, mefuteng ena ka bobeli, mokhoa ona o ne o le matla ho limela tse laolang).Ho enta ho bakile keketseho ya tlhahiso ya dijini, haholoholo dimmojuleng tsa 18, 19, 14, 6 le 1 (ka tatellano e theohang ya phello), taolo e mpe (mohlala, dimmojuleng tsa 9 le 20) kapa ka ditlamorao tse sa nke lehlakore (mohlala, dimmojuleng tsa 11, 22, 8 le 13). Tlhahlobo ya ntlafatso ya nako ya GO (Tafole e Tlatsetsang S13) e senotse “GO: 0006952 Dikarabelo tsa Tshireletso” bakeng sa mojuleng o kentsweng ka ente (18) ka ts'ebetso e phahameng ka ho fetisisa, ho kenyeletswa le dijini tse hlahlobilweng ke qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 le TanjilG_27015), hammoho le dimmojuleng tse ngata tsa photosynthesis tse hatelletsoeng haholo (9). Moqolo wa 18 o ile wa hlwauwa e le jini ya TanjilG_26536 e ngotsweng protheine ya LlR18B e kang PR-10, mme moqolo wa 9 o ile wa hlwauwa e le jini ya TanjilG_28955 e ngotsweng protheine ya photosystem II PsbQ. Jini ya ho hanyetsa anthracnose e ka bang teng Lanr1, TanjilG_05042, e fumanwe ho moqolo wa 22 (Setshwantsho sa 9) mme e amana le mantswe a reng “GO:0044260 Ditshebetso tsa metabolism ya macromolecular ya sele” le “GO:0006355 Taolo ya ho ngolwa ha DNA, ho etsa ditemplate tsa DNA” e jereng hub ya TanjilG_01212. jini e ngotswe ke factor ya transcription ya kgatello ya mocheso A-4a (HSFA4a).
Tlhahlobo ea marang-rang a boima ba tlhahiso-leseling ea liphatsa tsa lefutso tsa li-module tse nang le mantsoe a mangata a ts'ebetso ea baeloji "GO: 0006952 Likarabelo tsa Tšireletso". Ho hokahana ho nolofalitsoe ho totobatsa liphatsa tsa lefutso tse 'ne tse hlahlobiloeng ke qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 le TanjilG_27015).
Tlhahlobo ea marang-rang a boima ba tlhahiso-leseling ea liphatsa tsa lefutso ea mojule e nang le lentsoe le emetsoeng ka ho feteletseng la ts'ebetso ea baeloji "GO: 0006355: Taolo ea ho ngoloa ha mongolo, ho etsa template ea DNA" le ho jara gene ea ho hanyetsa anthracnose e ka khethoang Lanr1 TanjilG_05042. Ho hokahana ho nolofalitsoe ho arola gene ea TanjilG_05042 le gene ea TanjilG_01212 e bohareng.
Tlhahlobo ea khanyetso ea anthracnose e bokelletsoeng Australia e bontšitse hore boholo ba mefuta ea pele e lokollotsoeng e ne e le kotsing; Kalya, Coromup le Mandelup li hlalositsoe e le tse hanyetsang ka mokhoa o itekanetseng, ha Wonga, Tanjil le 83A:476 li hlalositsoe e le tse hanyetsang haholo26,27,31. li ne li e-na le allele e tšoanang ea khanyetso, e khethiloeng Lanr1, 'me Coromup le Mandelup li ne li e-na le allele e fapaneng, e khethiloeng AnMan10, 26, 39, ha Kalya e fetile allele e fapaneng. , Lanr2. Tlhahlobo ea khanyetso ea anthracnose Jeremane e ile ea fella ka ho khetholloa ha mola o hanyetsang Bo7212 o nang le allele e khethiloeng ntle le Lanr1, e khethiloeng LanrBo36.
Phuputso ea rona e senotse makhetlo a tlase haholo (hoo e ka bang 6%) a allele ea Lanr1 ho germplasm e lekiloeng. Tlhokomeliso ena e tsamaellana le liphetho tsa ho hlahloba germplasm ea Europe Bochabela ho sebelisoa matšoao a Anseq3 le Anseq4, a bontšitseng hore allele ea Lanr1 e teng meleng e 'meli feela ea Belarus. Sena se bontša hore allele ea Lanr1 ha e so sebelisoe haholo ke mananeo a lehae a ho ikatisa, ho fapana le Australia, moo e leng e 'ngoe ea li-allele tsa bohlokoa bakeng sa ho ikatisa ka thuso ea matšoao. Sena se ka bakoa ke boemo bo tlase ba khanyetso bo fanoang ke allele ea Lanr1 maemong a tšimo ea Europe ha ho bapisoa le tlaleho ea Australia. Ho phaella moo, lithuto tsa anthracnose libakeng tse nang le pula e ngata Australia li bontšitse hore likarabelo tsa khanyetso tse tsamaisoang ke allele ea Lanr1 li kanna tsa se sebetse maemong a leholimo a khothalletsang kholo le nts'etsopele e potlakileng ea pathogen19,42. Ha e le hantle, thutong ea hona joale, matšoao a mang a anthracnose le 'ona a bonoe ho li-genotype tse jereng allele ea Lanr1, a bontšang hore khanyetso e ka nyamela tlas'a maemo a matle bakeng sa nts'etsopele ea C. lupini. Ho phaella moo, ditlhaloso tse fosahetseng tse ntle tsa boteng ba matshwao a Anseq3 le Anseq4, a ka bang 1 cM ho tloha sebakeng sa Lanr1, di ka etsahala 28,30,43.
Phuputso ea rona e bontšitse hore 83A:476, e jereng allele ea Lanr1, e arabetse ho ente ea C. lupini ka ho hlophisa bocha transcriptome ka tekanyo e kholo nakong ea pele e hlahlobiloeng (6 hpi), ha Mandelup, e jereng allele ea AnMan, likarabo tsa transcriptomic li ile tsa bonoa hamorao haholo. (ho tloha ho 24 ho isa ho 48 hp). Liphetoho tsena tsa nako likarabelong tsa tšireletso li amahanngoa le liphapang matšoao a lefu, li totobatsa bohlokoa ba ho lemoha kokoana-hloko ea pele bakeng sa karabelo e atlehileng ho hanyetsa. Ho tšoaetsa lisele tsa limela, li-spores tsa anthrax li tlameha ho feta mekhahlelong e 'maloa ea nts'etsopele holim'a moamoheli, ho kenyeletsoa ho mela, karohano ea sele, le ho thehoa ha appressorium. Karolo ke sebopeho se tšoaetsang se khomarelang holim'a moamoheli 'me se nolofalletsa ho kenella liseleng tsa moamoheli. Kahoo, li-spores tsa C. gloeosporioides ka har'a qotso ea pea li bontšitse karohano ea pele ea nucleus kamora metsotso e 75-90 ea ho ikatisa, ho thehoa ha tube ea kokoana-hloko kamora metsotso e 90-120, le ho thibeloa kamora lihora tse 4 45. Mango C. gloeosporioides e bontshitse ho mela ha conidial ho feta 40% kamora dihora tse 3 tsa ho ikatisa le ho thehwa ha di-apressor tse ka bang 20% ​​kamora dihora tse 4. Jini ya CAP20 e amanang le virulence ya C. gloeosporioides e bontshitse tshebetso ya transcriptional ho conidia e etsang epiphyte kamora dihora tse 3.5 tsa ho ikatisa ka hara boka ba boka ba avocado ka bongata bo phahameng ba protheine ya CAP20 kamora dihora tse 4 le metsotso e 46. Ka ho tshwanang, mosebetsi wa dijini tsa melanin biosynthesis ho C. trifolii o ile wa hlohlelletswa nakong ya ho ikatisa ha dihora tse 2 ho latelwa ke ho thehwa ha appressorium kamora hora e le 1. Diphuputso tsa dinama tse nyane tsa makhasi di bontshitse hore fragole tse kentsweng ka C. acutatum di na le kgatello ya pele ka 8 hpi, ha ditamati tse kentsweng ka C. coccodes di na le kgatello ya pele ka 4 hpi48,49. haholoholo e tsamaellana le nako ya tshebetso ya tshwaetso ya Colletotrichum spp. Likarabelo tse potlakileng tsa tshireletso ho 83A:476 li bontša ho kenella ha liphatsa tsa lefutso tsa ho hanyetsa limela le ho itšireletsa mafung ho bakoang ke effector-triggered integration (ETI) moleng ona, ha likarabelo tse liehang tsa Mandelup li tšehetsa khopolo-taba ea micro-associated molecular pattern-triggered integration (MTI) 50. Likarabelo tsa pele ho 83A: 476 le Mandelup. Ho kopana ho sa fellang pakeng tsa liphatsa tsa lefutso tse laoloang holimo kapa tse theohileng karabelong e liehang le hona ho tšehetsa khopolo ena, kaha ETI hangata e nkoa e le karabelo ea MTI e potlakileng le e ntlafalitsoeng e fellang ka lefu la sele le hlophisitsoeng sebakeng sa tšoaetso, e tsejoang e le anaphylactic shock 51,52.
Bongata ba liphatsa tsa lefutso tse amanang le lentsoe le emetsoeng haholo la Gene Ontology GO:0006952 "Karabelo ea Tšireletso" ke li-homologue tse 11 tsa protheine ea molaetsa oa ho itima lijo e bakoang ke khatello ea maikutlo 22 (e tšoanang le SAM22) le liprotheine tse supileng tse kholo tsa latex tse kang liprotheine (MLPs). Liprotheine tse kang li-31, 34, 43 le 423 li bontšitse ho tšoana ha tatellano. Li-gene tse kang li-SAM22 li bontšitse ts'ebetso e kholo e ileng ea nka nako e telele, e bontšang maemo a eketsehileng a khanyetso ea anthracnose (83A:476 le Boregine). Leha ho le joalo, liphatsa tsa lefutso tse kang li-MLP li ile tsa fokotsoa feela meleng e jereng allele ea khanyetso e khethiloeng (83A:476/Lanr1 ho 6 hpi le Mandelup/AnMan ho 24 hpi). Ho lokela ho hlokomeloa hore li-homologue tsohle tse khethiloeng tse kang li-SAM22 li simoloha sehlopheng sa liphatsa tsa lefutso se ka bang 105 kb, ha liphatsa tsa lefutso tse kang li-MLP li simoloha libakeng tse arohaneng tsa genome. Ho kenngwa tshebetsong ha dijini tse jwalo tse kang SAM22 ho ile ha boela ha fumanwa thutong ya rona ya pele ya ho hanyetsa NLL ho ente ya Diaporthetoxica, e leng se bontshang hore di ameha dikarolong tse otlolohileng tsa karabelo ya tshireletso. Qeto ena e boetse e tshehetswa ke ditlaleho tsa karabelo e ntle ya dijini tse kang SAM22 kotsing kapa kalafo ka salicylic acid, di-fungus inducers, kapa hydrogen peroxide.
Liphatsa tsa lefutso tse kang MLP li bontšitsoe li arabela likhatellong tse fapaneng tsa abiotic le biotic, ho kenyeletsoa tšoaetso ea fungal ea baktheria, vaerase le pathogenic mefuteng e mengata ea limela55. Litaelo tsa karabelo likamanong tse itseng lipakeng tsa limela le likokoana-hloko li ne li tloha ho eketseha ka matla (ke hore, nakong ea ho tšoaetsoa ke k'hothone ka Verticillium dahliae) ho isa ho fokotseha haholo (ke hore, kamora ho tšoaetsoa ha sefate sa apole ka Alternaria spp.)56,57. Ho fokotseha ho hoholo ha liphatsa tsa lefutso tse kang MLP tse kang 423 ho bonoe nakong ea ts'ireletso ea avocado ho tšoaetso ea F. niger le nakong ea tšoaetso ea sefate sa apole Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola le Alternaria alternata ke li-pathotype tsa apole58,59. Ho phaella moo, apple calli e hlahisang liphatsa tsa lefutso tse kang MLP tse kang 423 ka bongata e ne e e-na le tlhahiso e tlase ea liphatsa tsa lefutso tse amanang le khanyetso 'me e ne e le kotsing e kholo ea tšoaetso ea fungus59. Kamora Fusarium oxysporum f, liphatsa tsa lefutso tse kang MLP tse kang 423 le tsona li ile tsa hatelloa ho germplasm ea linaoa tse tloaelehileng tse hanyetsanang. cn. tšoaetso ea linaoa 60.
Litho tse ling tsa lelapa la PR-10 tse hlwailweng thutong ea rona ea RNA-seq e ne e le liphatsa tsa lefutso tsa LlR18A le LlR18B ho arabela keketsehong ea keketseho, hammoho le liphatsa tsa lefutso tse phahamisitsoeng (gene e le 'ngoe) kapa tse fokolisitsoeng (liphatsa tsa lefutso tse 3) bakeng sa protheine ea phetisetso ea lipid DIR1. . Ho phaella moo, WGCNA e totobatsa liphatsa tsa lefutso tsa LlR18B e le setsi mojuleng ona, o kotsing e kholo ea ho entoa 'me o na le liphatsa tsa lefutso tse 'maloa tsa karabelo e sireletsang. Liphatsa tsa lefutso tsa LlR18A le LlR18B li ile tsa hlahisoa makhasi a lupine a mosehla ho arabela libaktheria tse bakang pathogenic, hammoho le likutung tsa NLL kamora ho entoa ha D. toxica, ha homologue ea raese ea liphatsa tsena tsa lefutso, RSOsPR10, e ile ea bakoa ka potlako ke tšoaetso ea fungal e amehang tseleng ea lipontšo tsa jasmonic acid53,61, 62. Liphatsa tsa lefutso tsa DIR1 li kenyelletsa liprotheine tse sa tobang tsa ho tsamaisa lipid tse hlokahalang bakeng sa ho qala ha khanyetso e fumanoeng ea systemic (SAR). Ka ntshetsopele ya dikarabelo tsa tshireletso, protheine ya DIR1 e fetiswa ho tloha moo tshwaetso e shebaneng le yona ka hara phloem ho ya kenya SAR dithong tse hole. Hoa thahasellisa hore jini ya TanjilG_02313 DIR1 e ile ya hlahiswa haholo ntlheng ya pele meleng ya 84A:476 le Population 22660, empa khanyetso ya anthracnose e ntlafetse ka katleho feela moleng wa 84A:476. Sena se ka bontsha tshebetso e nyane ya jini ya DIR1 ho NLL, kaha dihomologue tse tharo tse setseng di ile tsa arabela ho entelwe feela moleng wa 83A:476 ho 6 hpi, mme karabelo ena e ile ya lebiswa tlase.
Thutong ea rona, likarolo tse tloaelehileng tse tsamaellanang le ts'ebetso ea baeloji e bitsoang "GO:0055114 Redox process" e ne e le protheine ea cytochrome P450, peroxidase, linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase, le 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase. Ho phaella moo, WGCNA ea rona e hlalosa homologue ea HSFA4a e le li-module tse jereng hub tse kang mokhethoa oa liphatsa tsa lefutso oa Lanr1 resistance TanjilG_05042. HSFA4a ke karolo ea taolo e itšetlehileng ka redox ea phetolelo ea nyutlelie limela.
Liprotheine tsa Cytochrome P450 ke li-oxidoreductase tse susumetsang NADPH le/kapa liketso tsa hydroxylation tse itšetlehileng ka O2 metabolism ea mantlha le ea bobeli, ho kenyeletsoa le metabolism ea xenobiotics, hammoho le lihormone, mafura a acid, li-sterol, likarolo tsa lebota la sele, li-biopolymers, le biosynthesis ea metsoako e sireletsang 69. Thutong ea rona, ho fapana ha mosebetsi oa cytochrome P450 ea semela ho fokotsehile ho tloha ho -10.6 log2 (phetoho ea ho mena) ho ea ho 5.7 ka lebaka la palo e kholo ea li-homologues tse fetotsoeng (37) le liphapang tsa mekhoa ea karabelo lipakeng tsa liphatsa tsa lefutso tse itseng, tse bonts'ang phetoho e phahameng. . Ho sebelisa data ea RNA-seq feela ho hlakisa mosebetsi oa baeloji o belaelloang oa liphatsa tsa lefutso tsa NLL lelapeng le leholo la protheine e ka ba ho inahanela haholo. Leha ho le joalo, hoa bohlokoa ho hlokomela hore liphatsa tse ling tsa lefutso tsa cytochrome P450 li amahanngoa le ho hanyetsa ho eketsehileng ha li-fungus kapa libaktheria tse bakang pathogenic, ho kenyeletsoa le monehelo oa likarabo tsa allergy69,70,71.
Li-peroxidase tsa Sehlopha sa III ke li-enzyme tsa limela tse sebetsang ka bongata tse amehang mekhoeng e mengata ea metabolism nakong ea kholo le nts'etsopele ea limela, hammoho le karabelong ea likhatello tsa tikoloho tse kang letsoai, komello, matla a khanya a mangata, le tlhaselo ea likokoana-hloko72. Li-peroxidase li ameha tšebelisanong ea mefuta e 'maloa ea limela le Anthracis, ho kenyeletsoa Stylosanthes humilis le C. gloeosporioides, Lens culinaris le C. truncatum, Phaseolus vulgaris le C. lindemuthianum, Cucumis sativus le C. lagenarium73,74,75,76. Karabelo e potlakile haholo, ka linako tse ling esita le ka 4 HPI, pele fungus e kenella liseleng tsa semela73. Jini ea peroxidase le eona e arabetse ho ente ea D. toxica NLL. Ntle le mesebetsi ea tsona e tloaelehileng ea ho laola ho phatloha ha oxidative kapa ho felisa khatello ea oxidative, li-peroxidase li ka sitisa kholo ea likokoana-hloko ka ho theha litšitiso tsa 'mele tse thehiloeng ho matlafatsong ea lebota la sele nakong ea ho lignification, subunit kapa ho hokahanya metsoako e itseng. Mosebetsi ona o ka amahanngoa le silico ho gene ea TanjilG_03329 e kenyang anion peroxidase e etsang lignin e ileng ea eketseha haholo thutong ea rona moleng o hanyetsanang oa 83A:476 ho 6 HPI, empa eseng mefuteng e meng le linakong tse sa kang tsa arabela.
9S-/13S-lipoxygenase ea linoleic acid ke mohato oa pele tseleng ea oxidative ea biosynthesis ea lipid78. Lihlahisoa tsa tsela ena li na le mesebetsi e mengata ts'ireletsong ea limela, ho kenyeletsoa ho matlafatsa lebota la sele ka ho thehoa ha li-callose le li-pectin deposits, le taolo ea khatello ea oxidative ka tlhahiso ea mefuta ea oksijene e arabelang79,80,81,82,83. Thutong ea hona joale, polelo ea linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase e fetotsoe mefuteng eohle, empa ho baahi ba kotsing 22660, keketseho e ne e le teng linakong tse fapaneng, ha mefuteng e nang le Lanr1 e hanyetsanang le allele ea AnMan, e totobatsa ho fapana ha lera la oxylipin liketsong tse sireletsang tsa anthrax lipakeng tsa li-genotype tsena.
Homologue ea 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) e ile ea eketseha haholo (liphatsa tsa lefutso tse 9) kapa ea fokotseha (liphatsa tsa lefutso tse 2) ha e entoa ka lupine. Ntle le mekhelo e 'meli, likarabo tsena kaofela li etsahetse ka 6 hp. ho 83A:476. Karabelo ea enzymatic e tsamaisoang ke liprotheine tsa ACO ke mohato o fokotsang sekhahla tlhahisong ea ethylene 'me ka hona e laoloa haholo84. Ethylene ke hormone ea semela e bapalang mesebetsi e fapaneng ho laoleng nts'etsopele ea limela le karabelo maemong a khatello ea abiotic le biotic. Ho kenngoa ha phetolelo ea ACO le ho kengoa tšebetsong ha tsela ea lipontšo tsa ethylene ho ameha ho eketseng ho hanyetsa raese ho fungus ea hemibiotrophic oryzae oryzae ka ho laola tlhahiso ea mefuta ea oksijene e arabelang le phytoalexins. Mokhoa o tšoanang haholo oa tšoaetso ea makhasi o fumanoeng pakeng tsa M. oryzae le C. lupini88,89, khahlanong le boemo ba keketseho e kholo ea li-homologue tsa ACO moleng oa 83A:476 o tlalehiloeng thutong ena, o fetola monyetla oa ho fana ka khanyetso ho NLL anthracnose Ethylene mohato o bohareng oa pontšo litseleng tsa limolek'hule.
Phuputsong ena ya hajwale, kgatello e kgolo ya dijini tse ngata tse amanang le photosynthesis e bontshitswe ho 6 hpi ho 83A:476 le ho 48 hpi ho Mandeloop le baahi ba 22660. Bongata le kgatelopele ya diphetoho tsena di lekana le boemo. Khanyetso ya anthracnose e bontshitswe tekong ena. Haufinyane tjena, kgatello e matla le ya pele ya dingolwa tse amanang le photosynthesis e tlalehilwe mehlaleng e mmalwa ya dikamano tsa dimela le dikokwana-hloko, ho kenyeletswa le dibaktheria tse bakang pathogenic le di-fungus. Lepotlapotla (ho tloha ho 2 HPI dikamanong tse ding) le kgatello ya lefatshe ka bophara ya dijini tse amanang le photosynthesis ho arabela tshwaetsong di ka baka boitshireletso ba dimela ho latela ho kenngwa ha mefuta ya oksijene e arabelang le ho sebelisana ha yona le tsela ya salicylic acid ho rarolla dikarabelo tsa allergy 90,94.
Qetellong, mekhoa ea karabelo ea tšireletso e sisintsoeng bakeng sa moloko o hanyetsanang ka ho fetisisa (83A:476) e kenyelletsa ho lemoha ka potlako kokoana-hloko ke gene ea R (mohlomong TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) le salicylic acid le ethylene signaling tse bakoang ke allergy reaction, tse lateloang ke ho thehoa ha ketso ea SAR ea nako e telele. e tšehetsoa ke protheine ea DIR-1. Ho lokela ho hlokomeloa hore nako ea biotrophic bakeng sa tšoaetso ea C. lupini e khuts'oane haholo (matsatsi a ka bang 2), e lateloa ke kholo ea necrotic95. Phetoho lipakeng tsa mekhahlelo ena e ka amahanngoa le necrosis le tlhahiso ea liprotheine tse ka kenngoang ethylene tse sebetsang e le litsosa tsa liketso tsa hypersensitivity limela tse amohelang. Ka hona, nako ea ho hapa C. lupini ka katleho mohatong oa biotrophic e nyane haholo. Lenaneo la bocha la liphatsa tsa lefutso tse amanang le redox le photosynthesis le bonoang ho 83A:476 ho 6 hpi le tsamaisana le tsoelo-pele ea fungal hyphae 'me le phatlalatsa nts'etsopele ea karabelo e atlehileng ea tšireletso mohatong oa biotrophic. Likarabelo tsa transcriptomic tsa Mandelup le baahi ba 22660 li ka 'na tsa lieha haholo ho tšoara fungus pele li fetohela kholong ea necrotic, leha ho le joalo, Mandelup e ka ba molemo ho feta baahi ba 22660 hobane taolo e potlakileng ea protheine ea PR-10 e khothalletsa khanyetso e otlolohileng.
ETI, e susumetsoang ke gene ea R e tloaelehileng, e bonahala e le mokhoa o tloaelehileng oa ho hanyetsa linaoa khahlanong le anthracnose. Kahoo, mohlaleng oa linaoa oa Medicago truncatula, ho hanyetsa anthracnose ho fanoa ke gene ea RCT1, setho sa sehlopha sa gene ea semela sa TIR-NBS-LRR97. Gene ena e boetse e fana ka khanyetso ea anthracnose ea spread-spectrum ho alfalfa ha e fetisetsoa limela tse kotsing. Bean e tloaelehileng (P. vulgaris), liphatsa tsa lefutso tse fetang mashome a mabeli tsa anthracnose li se li khethollotsoe ho fihlela joale. Tse ling tsa liphatsa tsena tsa lefutso li fumanoa libakeng tse haellang liphatsa tsa lefutso tsa R tse tloaelehileng, leha ho le joalo tse ling tse ngata li fumaneha mathōkong a li-chromosome tse jereng sehlopha sa gene ea NBS-LRR, ho kenyeletsoa le TIR-NBS-LRRs99. Phuputso ea SSR ea genome-wide e boetse e tiisitse kamano ea gene ea NBS-LRR le khanyetso ea anthracnose ho bean e tloaelehileng. Gene ea R e tloaelehileng e boetse e fumanoe sebakeng sa genomic se jereng sebaka se seholo sa khanyetso ea anthracnose ho lupine e tšoeu ea 101.
Mosebetsi oa rona o bontša hore karabelo ea hang-hang ea khanyetso, e sebetsang mohatong oa pele oa tšoaetso ea limela (haholo-holo eseng ka mor'a 12 hpi), e sireletsa lupine e nang le makhasi a masesaane ho anthracnose e bakoang ke fungus e bakang pathogenic Collelotrichum lupini ka katleho. Re sebelisa tatellano e phahameng ea ho phalla ha lintho, re bontšitse liprofaele tsa polelo e fapaneng ea liphatsa tsa lefutso tsa khanyetso ea anthracnose limela tsa NLL tse tsamaisoang ke liphatsa tsa lefutso tsa khanyetso ea Lanr1 le AnMan. Tšireletso e atlehileng e kenyelletsa ho rala ka hloko liphatsa tsa lefutso bakeng sa liprotheine tse amehang ho redox, photosynthesis, le pathogenesis ka mor'a lihora tse 'maloa semela se kopana le pathogen ka lekhetlo la pele. Likarabelo tse tšoanang tsa tšireletso, empa li lieha ka nako, ha li sebetse hantle haholo ho sireletsa limela mafung. Khanyetso ea anthrax e tsamaisoang ke gene ea Lanr1 e tšoana le karabelo e tloaelehileng e potlakileng ea gene ea R (tšireletso e bakoang ke effector), ha gene ea AnMan mohlomong e fana ka karabelo e otlolohileng (tšireletso e bakoang ke paterone ea limolek'hule e amanang le microbe), e fanang ka boemo bo itekanetseng ba botsitso.
Mela e 215 ea NLL e sebelisitsoeng ho hlahloba matšoao a anthracnose e ne e entsoe ka mefuta e 74 ea limela, mela e 60 e fumanoeng ka ho tšela kapa ho ikatisa, li-mutant tse 5, le li-germplasm tse 76 tsa naha kapa tsa pele. Mela e ne e tsoa linaheng tse 17, haholo-holo ho tsoa Poland (58), Spain (47), Jeremane (27), Australia (26), Russia (19), Belarus (7), Italy (5) le mela e meng. ho tsoa linaheng tse 10. Sete ena e boetse e kenyelletsa mela e hanyetsanang le litšupiso: 83A:476, Tanjil, Wonga e jereng allele ea Lanr1, le Mandelup e jereng allele ea AnMan. Mela e fumanoe ho tsoa ho European Lupine Genetic Resource Database e hlokometsoeng ke Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Poland (Table Supplementary S1).
Limela li holisitsoe tlas'a maemo a laoloang (photoperiod lihora tse 16, mocheso oa 25°C motšehare le 18°C ​​​​bosiu). Ho ile ha hlahlojoa likopi tse peli tsa baeloji. DNA e ile ea aroloa makhasing a libeke tse tharo ho sebelisoa DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Jeremane) ho latela mokhoa ona. Boleng le mahloriso a DNA e arohaneng li ile tsa hlahlojoa ka mekhoa ea spectrophotometric (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Letšoao la AnManM1 le tšoaeang gene ea ho hanyetsa anthracnose AnMan (e nkiloeng ho cv. Mandelup) le matšoao a Anseq3 le Anseq4 a pela gene ea Lanr1 (e nkiloeng ho cv. Tanjil) li ile tsa hlahlojoa ka 11,26,28. Li-homozygote tsa allele e hanyetsang li ile tsa fumanoa e le "1″, tse ka angoang habonolo - e le "0″, le li-heterozygote - e le 0.5.
Ho latela diphetho tsa tlhahlobo ya matshwao a AnManM1, AnSeq3 le AnSeq4 le ho fumaneha ha dipeo bakeng sa diteko tsa ho qetela tsa ho latela, mela e 50 ya NLL e kgethilwe bakeng sa phenotyping ya ho hanyetsa anthracnose. Tlhahlobo e entswe ka bobedi ka hara ntlo e laolwang ke khomphutha e nang le nako ya dihora tse 14 ya photoperiod ka mocheso wa 22°C motsheare le 19°C bosiu. Dipeo di a ngoathwa (ho kgaola kobo ya peo ka lehlakoreng le leng la lesea ka lehare le bohale) pele ho jalwa ho thibela peo ho kgutsa ka lebaka la kobo ya peo e thata haholo le ho netefatsa hore e mela ka ho lekana. Dimela di hodisitswe ka dipitsa (11 × 11 × 21 cm) ka mobu o nyopileng (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland). Ho entoa ho ile ha etsoa ka mofuta oa Colletotrichum lupini Col-08, o holisitsoeng ka 1999 ho tsoa likutung tsa limela tsa lupine tse makhasi a masesaane tse holisitsoeng tšimong ea Verzhenitsa, Greater Poland (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E). Fumana sebaka. Li-isolates li ile tsa lengoa sebakeng sa SNA mochesong oa 20° C. tlas'a khanya e ntšo ka matsatsi a 21 ho hlahisa sporulation. Libeke tse 'ne kamora ho jala, ha limela li se li fihlile mohatong oa makhasi a 4-6, ho entoa ho ile ha etsoa ka ho fafatsa ka ho emisoa ha conidia ka bongata ba 0.5 x 106 conidia ka ml. Kamora ho entoa, limela li ile tsa bolokoa lefifing ka lihora tse 24 mongobong oa hoo e ka bang 98% le mocheso oa 25°C ho nolofatsa ho mela ha conidia le ts'ebetso ea tšoaetso. Dimela di ile tsa hodiswa tlasa nako ya dihora tse 14 ya photoperiod ka 22°C motsheare/19°C bosiu le mongobo wa 70%. Palo ya lefu e ile ya etswa matsatsi a 22 kamora ho entwa mme ya tloha ho 0 (e sireleditsweng) ho isa ho 9 (e kotsing haholo) ho itshetlehile ka boteng kapa ho se be teng ha diso tse tshwerweng ke dikokwana-hloko dikutung le mahlakung. Ho phaella moo, kamora ho fumana dintlha, boima ba dimela bo ile ba lekanngwa. Dikamano pakeng tsa di-genotype tsa matshwao le di-phenotype tsa lefu di ile tsa balwa e le dikamano tsa dintlha tse pedi tsa tatellano (ho se be teng ha matshwao a heterozygous sete ya mela bakeng sa tlhahlobo ya phenotype ya ho hanyetsa anthracnose).