ຂອບໃຈທີ່ທ່ານເຂົ້າມາຢ້ຽມຊົມ Nature.com. ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບລຸ້ນທີ່ທ່ານກຳລັງໃຊ້ຢູ່ນັ້ນຮອງຮັບ CSS ໄດ້ຈຳກັດ. ເພື່ອປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼື ປິດໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer). ໃນລະຫວ່າງນີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການຮອງຮັບຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາຈະສະແດງຜົນເວັບໄຊທ໌ໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບ ແລະ JavaScript.
ອັງກຸສຕິໂຟລິອຸສ ລູປິນ (NLL, Lupinus angustifolius L.) ເປັນພືດຕະກຸນຖົ່ວທີ່ໃຊ້ສຳລັບການຜະລິດອາຫານ ແລະ ການປັບປຸງດິນ. ການຂະຫຍາຍຕົວທົ່ວໂລກຂອງ NLL ໃນຖານະເປັນພືດໄດ້ດຶງດູດເຊື້ອເຫັດທີ່ເປັນພະຍາດຫຼາຍຊະນິດ, ລວມທັງລູປິນ ແອນທຣັກໂນສ, ເຊິ່ງເປັນສາເຫດຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສທີ່ຮ້າຍແຮງ. ສອງອັນລີນ, Lanr1 ແລະ AnMan, ເຊິ່ງເພີ່ມຄວາມຕ້ານທານ, ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ໃນການປັບປຸງພັນ NLL, ແຕ່ກົນໄກໂມເລກຸນທີ່ຕິດພັນຍັງບໍ່ທັນຮູ້ເທື່ອ. ໃນການສຶກສານີ້, ເຄື່ອງໝາຍ Lanr1 ແລະ AnMan ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກວດສອບຕົວຢ່າງ NLL ຂອງເອີຣົບ. ການທົດສອບວັກຊີນໃນສະພາບແວດລ້ອມທີ່ຄວບຄຸມໄດ້ຢືນຢັນປະສິດທິພາບຂອງຜູ້ໃຫ້ທີ່ຕ້ານທານທັງສອງ. ການວິເຄາະການສະແດງອອກຂອງ gene ທີ່ແຕກຕ່າງກັນໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນສາຍພັນທີ່ເປັນຕົວແທນທີ່ຕ້ານທານ ແລະ ສາຍພັນທີ່ອ່ອນໄຫວ. ການຕ້ານທານແອນທຣັກໂນສແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບການສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປຂອງຄຳສັບ ontology ຂອງ gene “GO:0006952 Defense Response”, “GO:0055114 Redox Process”, ແລະ “GO:0015979 Photosynthesis”. ນອກຈາກນັ້ນ, ສາຍ Lanr1(83A:476) ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຂຽນໂປຣແກຣມໃໝ່ທີ່ສຳຄັນຢ່າງໄວວາຫຼັງຈາກການສັກຢາປ້ອງກັນ, ໃນຂະນະທີ່ສາຍອື່ນໆສະແດງໃຫ້ເຫັນການຊັກຊ້າໃນການຕອບສະໜອງນີ້ປະມານ 42 ຊົ່ວໂມງ. ການຕອບສະໜອງດ້ານການປ້ອງກັນແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບຍີນ TIR-NBS, CC-NBS-LRR ແລະ NBS-LRR, 10 ໂປຣຕີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການເກີດພະຍາດ, ໂປຣຕີນການໂອນໄຂມັນ, endoglucan-1,3-β-glucosidase, ໂປຣຕີນຜະໜັງເຊວທີ່ອຸດົມດ້ວຍ glycine, ແລະຍີນຈາກເສັ້ນທາງປະຕິກິລິຍາຂອງອົກຊີເຈນ. ການຕອບສະໜອງໃນຕອນຕົ້ນຕໍ່ 83A:476, ລວມທັງການສະກັດກັ້ນຢ່າງລະມັດລະວັງຂອງຍີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການສັງເຄາະແສງ, ສອດຄ່ອງກັບການປົກປ້ອງທີ່ປະສົບຜົນສຳເລັດໃນລະຫວ່າງໄລຍະການເຕີບໂຕຂອງພືດຂອງຊີວະວິທະຍາຂອງເຊື້ອເຫັດ, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ effector ກະຕຸ້ນພູມຕ້ານທານ. ປະຕິກິລິຍາ Mandeloop ແມ່ນຊ້າລົງ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການລາກຕາມແນວນອນໂດຍລວມ.
ຕົ້ນລູປິນໃບແຄບ (NLL, Lupinus angustifolius L.) ເປັນທັນຍາພືດທີ່ມີໂປຣຕີນສູງທີ່ມີຕົ້ນກຳເນີດມາຈາກພາກພື້ນຕາເວັນຕົກຂອງເມດີແຕຣາເນ1,2. ປະຈຸບັນມັນຖືກປູກເປັນພືດອາຫານສຳລັບສັດ ແລະ ມະນຸດ. ມັນຍັງຖືກຖືວ່າເປັນປຸ໋ຍຂຽວໃນລະບົບການປູກພືດໝູນວຽນ ເນື່ອງຈາກການตรึงໄນໂຕຣເຈນໂດຍເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ແກ້ໄຂໄນໂຕຣເຈນຮ່ວມກັນ ແລະ ການປັບປຸງໂຄງສ້າງດິນໂດຍລວມ. ຕົ້ນລູປິນໃບແຄບໄດ້ຜ່ານຂະບວນການລ້ຽງຢ່າງໄວວາໃນສະຕະວັດທີ່ຜ່ານມາ ແລະ ຍັງຢູ່ພາຍໃຕ້ແຮງກົດດັນການປັບປຸງພັນສູງ3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. ດ້ວຍການປູກຝັງ NLL ຢ່າງແຜ່ຫຼາຍ, ການສືບທອດຂອງເຊື້ອເຫັດທີ່ເປັນພະຍາດໄດ້ພັດທະນາຊ່ອງທາງການກະເສດໃໝ່ ແລະ ເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດທຳລາຍພືດຊະນິດໃໝ່. ສິ່ງທີ່ໜ້າສັງເກດທີ່ສຸດສຳລັບຊາວກະສິກອນ ແລະ ຜູ້ປັບປຸງພັນພືດລູປິນແມ່ນຮູບລັກສະນະຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສ ເຊິ່ງເກີດຈາກເຊື້ອເຫັດທີ່ເປັນພະຍາດຄື Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. ສິ່ງທີ່ໜ້າສັງເກດທີ່ສຸດສຳລັບຊາວກະສິກອນ ແລະ ຜູ້ປັບປຸງພັນພືດລູປິນແມ່ນຮູບລັກສະນະຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສ ເຊິ່ງເກີດຈາກເຊື້ອເຫັດທີ່ເປັນພະຍາດຄື Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызваниного Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. ສິ່ງທີ່ໜ້າສັງເກດທີ່ສຸດຕໍ່ຊາວກະສິກອນ ແລະ ຜູ້ປັບປຸງພັນພືດລູປິນແມ່ນການເກີດຂຶ້ນຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສ ທີ່ເກີດຈາກເຊື້ອເຫັດທີ່ເປັນພະຍາດ Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真真真病的出现，它是由病原真真真珌& Hagedorn13 引起的 .对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真真真真真(Bondar)嵵Haired.1 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываепам грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. ສິ່ງທີ່ໜ້າປະທັບໃຈທີ່ສຸດສຳລັບຊາວກະສິກອນ ແລະ ຜູ້ປັບປຸງພັນພືດລູປິນແມ່ນການເກີດຂຶ້ນຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສ ທີ່ເກີດຈາກເຊື້ອເຫັດທີ່ເປັນພະຍາດ Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.ລາຍງານການລະບາດຂອງພະຍາດນີ້ໃນເບື້ອງຕົ້ນແມ່ນມາຈາກປະເທດບຣາຊິນ ແລະ ສະຫະລັດອາເມລິກາ, ໂດຍມີອາການທົ່ວໄປປາກົດຂຶ້ນໃນປີ 1912 ແລະ 1929 ຕາມລໍາດັບ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຫຼັງຈາກປະມານ 30 ປີ, ເຊື້ອພະຍາດດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກກຳນົດວ່າເປັນ Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., ເທເລໂອມໍຟ Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., ເທເລໂອມໍຟ Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., ຮູບຊົງເທເລໂອມໍຟຂອງ Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ໃນຮູບຮ່າງວິທະຍາເປົ້າໝາຍ. & ຮ. ຊເຣງ. & ຮ. ຊເຣງ,.ແລະ H. Schrenk. & H.施伦克，. & H.施伦克，.ແລະ H. Schlenk,.ການວິເຄາະຮູບແບບພະຍາດເບື້ອງຕົ້ນທີ່ເຮັດໃນກາງສະຕະວັດທີ 20 ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມຕ້ານທານບາງຢ່າງໃນ NLL ແລະ lupine ສີເຫຼືອງ (L. luteus L.), ແຕ່ lupine ສີຂາວທັງໝົດ (L. albus L.) ທີ່ທົດສອບແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ15,16. ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການພັດທະນາຂອງ anthracnose ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງຝົນຕົກ (ຄວາມຊຸ່ມຊື່ນຂອງອາກາດ) ແລະອຸນຫະພູມ (ໃນລະດັບ 12-28°C), ເຊິ່ງນຳໄປສູ່ການລະເມີດຄວາມຕ້ານທານໃນອຸນຫະພູມທີ່ສູງຂຶ້ນ17, 18. ໃນຄວາມເປັນຈິງ, ເວລາທີ່ຕ້ອງການສຳລັບ conidia ໃນການແຕກງອກ ແລະ ພະຍາດເລີ່ມຕົ້ນແມ່ນສັ້ນກວ່າສີ່ເທົ່າທີ່ 24°C (4 ຊົ່ວໂມງ) ກ່ວາທີ່ 12°C (16 ຊົ່ວໂມງ) ພາຍໃຕ້ສະພາບຄວາມຊຸ່ມຊື່ນສູງ19. ດັ່ງນັ້ນ, ພາວະໂລກຮ້ອນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງໄດ້ນຳໄປສູ່ການແຜ່ລະບາດຂອງ anthracnose. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ພະຍາດດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນປະເທດຝຣັ່ງ (1982) ແລະຢູເຄຣນ (1983) ເປັນສັນຍານຂອງໄພຂົ່ມຂູ່ທີ່ຈະມາເຖິງ, ແຕ່ເບິ່ງຄືວ່າຖືກລະເລີຍໂດຍອຸດສາຫະກຳ lupine ໃນເວລານັ້ນ20,21. ສອງສາມປີຕໍ່ມາ, ພະຍາດຮ້າຍແຮງນີ້ໄດ້ແຜ່ລາມໄປທົ່ວໂລກ ແລະ ຍັງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ບັນດາປະເທດທີ່ຜະລິດພືດ lupine ທີ່ສຳຄັນເຊັ່ນ: ອົດສະຕຣາລີ, ໂປແລນ ແລະ ເຢຍລະມັນ22,23,24. ຫຼັງຈາກການລະບາດຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສໃນກາງຊຸມປີ 1990, ການກວດຄັດກອງຢ່າງກວ້າງຂວາງໄດ້ສົ່ງຜົນໃຫ້ມີການລະບຸຕົວຜູ້ໃຫ້ເຊື້ອທີ່ຕ້ານທານຫຼາຍໂຕໃນຕົວຢ່າງ NLL19. ການຕ້ານທານຂອງ NLL ຕໍ່ກັບພະຍາດແອນທຣັກໂນສແມ່ນຖືກຄວບຄຸມໂດຍສອງອາເລນທີ່ໂດດເດັ່ນທີ່ພົບເຫັນຢູ່ໃນແຫຼ່ງເຊື້ອພັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ: Lanr1 ໃນພັນທຸກໍາ Tanjil ແລະ Wonga ແລະ AnMan ໃນພັນທຸກໍາ. Mandalay 25, 26. ອາເລນເຫຼົ່ານີ້ເສີມເຄື່ອງໝາຍໂມເລກຸນທີ່ສະໜັບສະໜູນການຄັດເລືອກເຊື້ອພັນທີ່ຕ້ານທານໃນໂຄງການປັບປຸງພັນ25,26,27,28,29,30. ສາຍພັນທີ່ທົນທານຕໍ່ເຊື້ອພະຍາດ 83A:476 ທີ່ມີ allele Lanr1 ໄດ້ຖືກປະສົມກັບສາຍພັນທຳມະຊາດທີ່ອ່ອນໄຫວ P27255 ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ປະຊາກອນ RIL ທີ່ແຍກອອກເພື່ອຕ້ານທານກັບເຊື້ອພະຍາດ anthracnose, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ສາມາດກຳນົດ locus Lanr1 ໃຫ້ກັບໂຄໂມໂຊມ NLL-1131, 32, 33. ການຈັດລຽນຂອງເຄື່ອງໝາຍແຜນທີ່ເຊື່ອມໂຍງຈາກ loci ຕ້ານທານຂ້າງຄຽງໄປຫາເຊື້ອພະຍາດ anthracnose ດ້ວຍຂອບ genomic, NLL ໄດ້ເປີດເຜີຍສະຖານທີ່ຂອງ allele ທັງສາມຢູ່ໃນໂຄໂມໂຊມດຽວກັນ (NLL-11), ແຕ່ຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ29,34,35. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ເນື່ອງຈາກຈຳນວນ RILs ໜ້ອຍ ແລະ ໄລຍະຫ່າງທາງພັນທຸກຳທີ່ໃຫຍ່ລະຫວ່າງເຄື່ອງໝາຍ ແລະ alleles ທີ່ສອດຄ້ອງກັນ, ບໍ່ສາມາດສະຫຼຸບໄດ້ຢ່າງໜ້າເຊື່ອຖືກ່ຽວກັບ genes ທີ່ຢູ່ເບື້ອງຕົ້ນຂອງພວກມັນ. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ການນຳໃຊ້ພັນທຸກຳປີ້ນກັບກັນໃນ lupins ແມ່ນຍາກເນື່ອງຈາກທ່າແຮງການຟື້ນຟູທີ່ຕ່ຳຫຼາຍ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການຫມູນໃຊ້ທາງພັນທຸກຳມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກ37.
ການພັດທະນາເຊື້ອພັນທີ່ລ້ຽງດ້ວຍ allele ທີ່ຕ້ອງການໃນສະພາບ homozygous, ເຊັ່ນ 83A:476 (Lanr1) ແລະ Mandelup (AnMan), ໄດ້ເປີດປະຕູສູ່ການສຶກສາຄວາມຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose ໃນເວລາທີ່ມີການປະສົມຂອງ alleles ທີ່ກົງກັນຂ້າມໃນປະຊາກອນປ່າ. ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງກົນໄກໂມເລກຸນ. ປຽບທຽບການຕອບສະໜອງການປ້ອງກັນທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍ genotypes ສະເພາະ. ການສຶກສານີ້ໄດ້ປະເມີນການຕອບສະໜອງ transcriptome ໃນຕອນຕົ້ນຂອງ NLL ຕໍ່ກັບການສັກຢາວັກຊີນ C. lupini. ກ່ອນອື່ນໝົດ, ແຜງເຊື້ອພັນ NLL ຂອງເອີຣົບທີ່ມີ 215 ສາຍໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງໝາຍໂມເລກຸນທີ່ໝາຍ alleles Lanr1 ແລະ AnMan. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການຈັດປະເພດ phenotyping ຂອງ anthracnose ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ 50 ສາຍ NLL, ເຊິ່ງຖືກເລືອກກ່ອນໜ້ານີ້ສຳລັບເຄື່ອງໝາຍໂມເລກຸນ, ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ຄວບຄຸມ. ໂດຍອີງໃສ່ການທົດລອງເຫຼົ່ານີ້, ສີ່ສາຍທີ່ແຕກຕ່າງກັນໃນການຕ້ານທານ anthracnose ແລະອົງປະກອບ allelic Lanr1/AnMan ໄດ້ຖືກຄັດເລືອກສຳລັບການວິເຄາະການສະແດງອອກຂອງ gene ປ້ອງກັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນໂດຍໃຊ້ສອງວິທີການເສີມ: ການລຳດັບ RNA ທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງ ແລະ ການວັດແທກປະລິມານ PCR ແບບເວລາຈິງ.
ການກວດຄັດກອງຊຸດຂອງເຊື້ອພັນທຸກໍາ NLL (N = 215) ທີ່ມີເຄື່ອງໝາຍ Lanr1 (Anseq3 ແລະ Anseq4) ແລະ AnMan (Anseq4) ແລະ AnMan (AnManM1) ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າມີພຽງສາຍດຽວ (95726, ໃກ້ກັບ Salamanca-b) ຂະຫຍາຍອາເລນ "ຕ້ານທານ" ສຳລັບເຄື່ອງໝາຍທັງໝົດ, ໃນຂະນະທີ່ "ການມີອາເລນ 'ອ່ອນໄຫວ'" ພົບສັດສ່ວນຂອງເຄື່ອງໝາຍທັງໝົດໃນ 158 ສາຍ (~73.5%). ສິບສາມສາຍໄດ້ຜະລິດອາເລນ "ຕ້ານທານ" ສອງອັນຂອງເຄື່ອງໝາຍ Lanr1, ແລະ 8 ສາຍໄດ້ຜະລິດອາເລນ "ຕ້ານທານ" ຂອງເຄື່ອງໝາຍ Lanr1. ອາເລນ "ຕ້ານທານ" ຂອງເຄື່ອງໝາຍ AnMan (ຕາຕະລາງເສີມ S1). ສອງສາຍແມ່ນ heterozygous ສຳລັບເຄື່ອງໝາຍ Anseq3 ແລະ heterozygous ໜຶ່ງອັນສຳລັບເຄື່ອງໝາຍ AnManM1. 42 ສາຍພັນ (19.5%) ມີໄລຍະທີ່ກົງກັນຂ້າມຂອງອາລີນ Anseq3 ແລະ Anseq4, ຊີ້ບອກເຖິງຄວາມຖີ່ສູງຂອງການລວມຕົວກັນລະຫວ່າງສອງ loci ນີ້. phenotypes ຂອງພະຍາດອັນທຣັກໂນສພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ຄວບຄຸມ (ຕາຕະລາງເສີມ S2) ໄດ້ເປີດເຜີຍຄວາມແຕກຕ່າງໃນຄວາມຕ້ານທານຂອງ genotypes ທີ່ໄດ້ທົດສອບ, ເຊິ່ງສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນໃນຄວາມຮຸນແຮງຂອງພະຍາດອັນທຣັກໂນສ. ຄວາມແຕກຕ່າງໃນຄະແນນສະເລ່ຍຢູ່ໃນລະຫວ່າງ 1.8 (ທົນທານຕໍ່ລະດັບປານກາງ) ຫາ 6.9 (ອ່ອນໄຫວ) ແລະຄວາມແຕກຕ່າງຂອງນ້ຳໜັກພືດຢູ່ໃນລະຫວ່າງ 0.62 (ອ່ອນໄຫວ) ຫາ 4.45 g (ທົນທານຕໍ່). ມີຄວາມສຳພັນທີ່ສຳຄັນລະຫວ່າງຄ່າທີ່ສັງເກດເຫັນໃນສອງຊ້ຳກັນຂອງການທົດລອງ (0.51 ສຳລັບຄະແນນຄວາມຮຸນແຮງຂອງພະຍາດ, P = 0.00017 ແລະ 0.61 ສຳລັບນ້ຳໜັກພືດ, P < 0.0001) ເຊັ່ນດຽວກັນກັບລະຫວ່າງສອງພາລາມິເຕີເຫຼົ່ານີ້ (-0.59 ແລະ -0.77, P < 0.0001). ມີຄວາມສຳພັນທີ່ສຳຄັນລະຫວ່າງຄ່າທີ່ສັງເກດເຫັນໃນສອງຊ້ຳກັນຂອງການທົດລອງ (0.51 ສຳລັບຄະແນນຄວາມຮຸນແຮງຂອງພະຍາດ, P = 0.00017 ແລະ 0.61 ສຳລັບນ້ຳໜັກພືດ, P < 0.0001) ເຊັ່ນດຽວກັນກັບລະຫວ່າງສອງພາລາມິເຕີເຫຼົ່ານີ້ (− 0.59 ແລະ − 0.77, P < 0.0001). Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях экспериментляжта (0,5. болезни, P = 0,00017 и 0,61 для массы растения, P< 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,0,59). 0,0001). ພົບວ່າມີຄວາມສຳພັນທີ່ສຳຄັນລະຫວ່າງຄ່າທີ່ສັງເກດເຫັນໃນສອງຄັ້ງຂອງການທົດລອງ (0.51 ສຳລັບຄະແນນຄວາມຮຸນແຮງຂອງພະຍາດ, P = 0.00017 ແລະ 0.61 ສຳລັບນ້ຳໜັກພືດ, P < 0.0001), ເຊັ່ນດຽວກັນກັບລະຫວ່າງສອງພາລາມິເຕີເຫຼົ່ານີ້ (- 0.59 ແລະ -0.77, P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为0.51，P = 0.00017，植物重量为0.61，P < 0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59和- 0.77，P < 0.0001).在两次重复实验中观察的值之间存在相关性（疾病严重程度评分为，5亦评分为。 p = 0.00017 ，植物为 0.61，p<0.0001）以及两个参数之间（（（～-0.59和–0.59和.5–0.59和–0.59和. 0.77, P < 0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тязания, оценка тя5блежест 0,00017 и масса растения 0,61, P<0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77,0 <10,000. ມີຄວາມສຳພັນທີ່ສຳຄັນລະຫວ່າງຄ່າທີ່ສັງເກດເຫັນໃນຊ້ຳກັນ (ຄະແນນຄວາມຮຸນແຮງຂອງພະຍາດ 0.51, P = 0.00017 ແລະ ນ້ຳໜັກພືດ 0.61, P < 0.0001) ແລະ ລະຫວ່າງສອງພາລາມິເຕີນີ້ (-0.59 ແລະ -0 .0001) 0.77, P<0.0001. ).ອາການທົ່ວໄປທີ່ພົບເຫັນໃນພືດທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວປະກອບມີການງໍ ແລະ ບິດຂອງລຳຕົ້ນທີ່ຄ້າຍຄືກັບໂຄງສ້າງ "ໜ້າທະນູຂອງຜູ້ລ້ຽງແກະ", ຕາມດ້ວຍຮອຍແຜຮູບໄຂ່ທີ່ມີ sporozoites ສີສົ້ມ/ສີບົວ (ຮູບທີ 1 ເພີ່ມເຕີມ). ການເຂົ້າເຖິງຂອງອົດສະຕຣາລີທີ່ມີເຊື້ອ Lanr1 (83A:476 ແລະ Tanjil) ແລະ AnMan (Mandelup) ມີຄວາມຕ້ານທານປານກາງ, 0.0331 ແລະ 0.0036). ບາງສາຍພັນທີ່ມີ alleles Lanr1 ແລະ/ຫຼື AnMan "ຕ້ານທານ" ສະແດງອາການຂອງພະຍາດ.
ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈແມ່ນສາຍພັນ NLL ຈຳນວນໜຶ່ງທີ່ຂາດອາເລນເຄື່ອງໝາຍ "ຕ້ານທານ" ເປີດເຜີຍລະດັບຄວາມຕ້ານທານຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສໃນລະດັບສູງ (ທຽບເທົ່າ ຫຼື ສູງກວ່າສຳລັບ genotypes Lanr1 ຫຼື AnMan), ເຊັ່ນ Boregine (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບທັງສອງພາລາມິເຕີ), Bojar (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບຄະແນນ ແລະ 0.001 ສຳລັບນ້ຳໜັກພືດ) ແລະ ປະຊາກອນ B-549/79b (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບຄະແນນ ແລະ ບໍ່ສຳຄັນສຳລັບນ້ຳໜັກ). ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈແມ່ນສາຍພັນ NLL ຈຳນວນໜຶ່ງທີ່ຂາດອາເລນເຄື່ອງໝາຍ "ຕ້ານທານ" ເປີດເຜີຍລະດັບຄວາມຕ້ານທານຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສໃນລະດັບສູງ (ທຽບເທົ່າ ຫຼື ສູງກວ່າສຳລັບ genotypes Lanr1 ຫຼື AnMan), ເຊັ່ນ Boregine (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບທັງສອງພາລາມິເຕີ), Bojar (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບຄະແນນ ແລະ 0.001 ສຳລັບນ້ຳໜັກພືດ) ແລະ ປະຊາກອນ B-549/79b (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບຄະແນນ ແລະ ບໍ່ສຳຄັນສຳລັບນ້ຳໜັກ). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показьрали устойчивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как чални 0дет как чални 1 значание таких как ча0ядет ( обоих параметров), Bojar (значение P < 0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈແມ່ນ, ສາຍພັນ NLL ຫຼາຍສາຍທີ່ບໍ່ມີ allele ເຄື່ອງໝາຍ 'ຕ້ານທານ' ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງລະດັບຄວາມຕ້ານທານສູງຕໍ່ກັບພະຍາດ anthracnose (ທຽບເທົ່າ ຫຼື ສູງກວ່າສຳລັບ genotypes Lanr1 ຫຼື AnMan), ເຊັ່ນ Boregine (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບທັງສອງພາລາມິເຕີ), Bojar (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບການປະເມີນ ແລະ 0.001 ສຳລັບນ້ຳໜັກພືດ) ແລະ ປະຊາກອນ B-549/79b (ຄ່າ P < 0.0001 ສຳລັບການປະເມີນ ແລະ ບໍ່ສຳຄັນສຳລັບນ້ຳໜັກ).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疈病抗斧 与基因型相当或更高),例如Boregine（两个参数的P值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P值< 0.0001，重量不显着). ເປັນສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈທີ່ລະບົບ NLL ບາງລະບົບທີ່ບໍ່ມີເຄື່ອງໝາຍ "ແອນຕິເຈນິກ" ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມຕ້ານທານທາງນອນສູງ (ເທົ່າກັບພັນທຸກໍາ Lanr1 ຫຼື AnMan ຫຼືສູງກວ່າ), ເຊັ່ນ Boregine (ທັງສອງພາລາມິເຕີ P < 0.0001), Bojar (ຄ່າ P < 0.0001, ນ້ຳໜັກພືດ 0.001) ແລະສາຍພັນ B-549/79b (ຄ່າ P < 0.0001, ນ້ຳໜັກບໍ່ສຳຄັນ). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», показалини высти устойчивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P <дратретра) 00:00:00. Bojar (значение P <0,0001, масса растения 0,001) и популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈແມ່ນສາຍພັນ NLL ບາງສາຍທີ່ບໍ່ມີອາເລນເຄື່ອງໝາຍ 'ຕ້ານທານ' ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງລະດັບຄວາມຕ້ານທານຂອງພະຍາດແອນທຣັກໂນສໃນລະດັບສູງ (ທຽບເທົ່າ ຫຼື ສູງກວ່າ genotypes Lanr1 ຫຼື AnMan), ເຊັ່ນ Boregine (ຄ່າ P ສຳລັບທັງສອງພາລາມິເຕີ <0.0001), Bojar (ຄ່າ P < 0.0001, ນ້ຳໜັກພືດ 0.001) ແລະ ປະຊາກອນ B-549/79b (ຄ່າ P < 0.0001, ນ້ຳໜັກບໍ່ສຳຄັນ).ປະກົດການນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງແຫຼ່ງພັນທຸກໍາໃໝ່ຂອງຄວາມຕ້ານທານ, ໂດຍອະທິບາຍເຖິງການຂາດການພົວພັນລະຫວ່າງ genotypes ຂອງເຄື່ອງໝາຍ ແລະ phenotypes ຂອງພະຍາດ (ຄ່າ P ຈາກ ~0.42 ຫາ ~0.98). ດັ່ງນັ້ນ, ການທົດສອບ Kolmogorov-Smirnov ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຂໍ້ມູນກ່ຽວກັບຄວາມຕ້ານທານ anthracnose ແມ່ນແຈກຢາຍປະມານປົກກະຕິສໍາລັບຄະແນນ (ຄ່າ P-0.25 ແລະ 0.11) ແລະ ມວນພືດ (ຄ່າ P-0.47 ແລະ 0.55), ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າຂ້ອຍສົມມຸດຕິຖານວ່າມີ alleles ຫຼາຍກວ່າ Lanr1 ແລະ AnMan ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.
ອີງຕາມຜົນຂອງການກວດຫາຄວາມຕ້ານທານຂອງເຊື້ອອັນທຣັກໂນສ, ມີ 4 ສາຍພັນທີ່ຖືກຄັດເລືອກມາວິເຄາະ transcriptome: 83A:476, Boregine, Mandelup, ແລະ Population 22660. ສາຍພັນເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກທົດສອບຄືນໃໝ່ສຳລັບການຕ້ານທານຂອງເຊື້ອອັນທຣັກໃນການທົດລອງການສັກຢາໂດຍການຈັດລຳດັບ RNA, ໂດຍມີເງື່ອນໄຂວ່າພວກມັນຄືກັນກັບໃນການທົດສອບຄັ້ງກ່ອນ. ຄ່າຄະແນນມີດັ່ງນີ້: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) ແລະ population 22660 (6.11 ± 1.29).
ໂປໂຕຄອນ Illumina NovaSeq 6000 ບັນລຸໄດ້ຄູ່ Mread ໂດຍສະເລ່ຍ 40.5 ຄູ່ຕໍ່ຕົວຢ່າງ (29.7 ຫາ 54.4 Mreads) (ຕາຕະລາງເສີມ S3). ຄະແນນການຈັດລຽນໃນລຳດັບອ້າງອີງມີຕັ້ງແຕ່ 75.5% ຫາ 88.6%. ສະຫະສຳພັນສະເລ່ຍຂອງຂໍ້ມູນຈຳນວນການອ່ານລະຫວ່າງຕົວແປທົດລອງລະຫວ່າງການຊ້ຳຊ້ອນທາງຊີວະພາບມີຕັ້ງແຕ່ 0.812 ຫາ 0.997 (ຄ່າສະເລ່ຍ 0.959). ໃນຈຳນວນ 35,170 ພັນທຸກຳທີ່ໄດ້ວິເຄາະ, ມີ 2917 ພັນທຸກຳທີ່ບໍ່ມີການສະແດງອອກ, ແລະ ອີກ 4785 ພັນທຸກຳໄດ້ສະແດງອອກໃນລະດັບທີ່ບໍ່ສຳຄັນ (ຄ່າສະເລ່ຍພື້ນຖານ < 5). ໃນຈຳນວນ 35,170 ພັນທຸກຳທີ່ໄດ້ວິເຄາະ, ມີ 2917 ພັນທຸກຳທີ່ບໍ່ມີການສະແດງອອກ, ແລະ ອີກ 4785 ພັນທຸກຳໄດ້ສະແດງອອກໃນລະດັບທີ່ບໍ່ສຳຄັນ (ຄ່າສະເລ່ຍພື້ນຖານ < 5). ອິ່ 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрельсировали незначительном уровне (базовое среднее <5). ໃນຈຳນວນ 35,170 ຍີນທີ່ຖືກວິເຄາະ, 2917 ຍີນບໍ່ໄດ້ສະແດງການສະແດງອອກ, ແລະ 4785 ຍີນທີ່ເຫຼືອໄດ້ສະແດງອອກໃນລະດັບທີ່ບໍ່ສຳຄັນ (ຄ່າສະເລ່ຍພື້ນຖານ <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785个基因的表达可以忽略不计（幇开）.35,170 Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели неэзльначит (базовое среднее значение <5). ໃນຈຳນວນ 35,170 ຍີນທີ່ຖືກວິເຄາະ, ມີ 2917 ຍີນທີ່ບໍ່ໄດ້ສະແດງອອກ ແລະ 4785 ຍີນທີ່ເຫຼືອມີການສະແດງອອກເລັກນ້ອຍ (ຄ່າສະເລ່ຍພື້ນຖານ <5).ດັ່ງນັ້ນ, ຈຳນວນຂອງຍີນທີ່ຖືວ່າສະແດງອອກ (ຄ່າສະເລ່ຍພື້ນຖານ ≥ 5) ໃນລະຫວ່າງການທົດລອງແມ່ນ 27,468 (78.1%) (ຕາຕະລາງເສີມ S4).
ຈາກຈຸດເວລາທຳອິດ, ສາຍພັນ NLL ທັງໝົດຕອບສະໜອງຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ C. lupini (ສາຍພັນ Col-08) ໂດຍການຕັ້ງໂປຣແກຣມ transcriptome ຄືນໃໝ່ (ຕາຕະລາງທີ 1), ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ມີຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນລະຫວ່າງສາຍພັນ. ດັ່ງນັ້ນ, ສາຍຕ້ານທານ 83A:476 (ທີ່ມີ gene Lanr1) ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຕັ້ງໂປຣແກຣມ transcriptome ຄືນໃໝ່ທີ່ສຳຄັນຢູ່ຈຸດເວລາທຳອິດ (6 hpi) ດ້ວຍການເພີ່ມຂຶ້ນ 31-69 ເທົ່າຂອງຈຳນວນ gene ຂຶ້ນ ແລະ ລົງທີ່ໂດດດ່ຽວເມື່ອທຽບກັບຈຸດເວລາອື່ນໆໃນຈຸດເວລານີ້. ນອກຈາກນັ້ນ, ຈຸດສູງສຸດນີ້ແມ່ນສັ້ນ, ຍ້ອນວ່າການສະແດງອອກຂອງ gene ພຽງເລັກນ້ອຍເທົ່ານັ້ນຍັງຄົງມີການປ່ຽນແປງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຢູ່ຈຸດເວລາທີສອງ (12 hpi). ໜ້າສົນໃຈ, Boregine, ເຊິ່ງຍັງສະແດງໃຫ້ເຫັນລະດັບຄວາມຕ້ານທານສູງໃນການທົດສອບ graft, ບໍ່ໄດ້ຜ່ານການຕັ້ງໂປຣແກຣມ transcriptional ຄືນໃໝ່ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນລະຫວ່າງການທົດລອງ. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ຈຳນວນ gene ທີ່ສະແດງອອກແຕກຕ່າງກັນ (DEG) ແມ່ນຄືກັນສຳລັບ Boregine ແລະ 83A:476 ທີ່ 12 HPI. ທັງ Mandelup ແລະ ປະຊາກອນ 22660 ສະແດງໃຫ້ເຫັນຈຸດສູງສຸດຂອງ DEG ໃນຈຸດເວລາສຸດທ້າຍ (48 ລິດ/ວິນາທີ), ຊີ້ບອກເຖິງຄວາມຊັກຊ້າໃນການຕອບສະໜອງຂອງການປ້ອງກັນ.
ເນື່ອງຈາກ 83A:476 ໄດ້ຜ່ານການຕັ້ງໂປຣແກຣມໃໝ່ຂອງ transcriptome ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເພື່ອຕອບສະໜອງຕໍ່ C. lupini ທີ່ 6 HPI ເມື່ອທຽບກັບສາຍພັນອື່ນໆທັງໝົດ, ~91% ຂອງ DEGs ທີ່ສັງເກດເຫັນໃນຈຸດເວລານີ້ແມ່ນສະເພາະສາຍພັນ (ຮູບທີ 1). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ມີການຊ້ອນກັນບາງຢ່າງໃນການຕອບສະໜອງໃນຕອນຕົ້ນລະຫວ່າງສາຍພັນການສຶກສາ, ຍ້ອນວ່າ 68.5%, 50.9%, ແລະ 52.6% DEG ໃນ Boregine, Mandelup, ແລະປະຊາກອນ 22660, ຕາມລຳດັບ, ຊ້ອນກັນກັບທີ່ພົບໃນ 83A:476 ໃນບາງຈຸດໃນເວລາ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, DEGs ເຫຼົ່ານີ້ກວມເອົາພຽງແຕ່ສ່ວນນ້ອຍໆ (0.97–1.70%) ຂອງ DEGs ທັງໝົດທີ່ກວດພົບໃນປະຈຸບັນໂດຍໃຊ້ 83A:476. ນອກຈາກນັ້ນ, 11 DEGs ຈາກທຸກສາຍພັນແມ່ນສອດຄ່ອງກັນໃນເວລານີ້ (ຕາຕະລາງເສີມ S4-S6), ລວມທັງອົງປະກອບທົ່ວໄປຂອງການຕອບສະໜອງການປ້ອງກັນພືດ: ໂປຣຕີນການໂອນໄຂມັນ (TanjilG_32225), ເອນໄຊ endoglucan-1,3-β-glucoside (TanjilG_23384), ໂປຣຕີນສອງຊະນິດທີ່ກະຕຸ້ນຄວາມກົດດັນເຊັ່ນ SAM22 (TanjilG_31528 ແລະ TanjilG_31531), ໂປຣຕີນຢາງພື້ນຖານ (TanjilG_32352), ແລະໂປຣຕີນຜະໜັງເຊວທີ່ມີໂຄງສ້າງອຸດົມດ້ວຍ glycine ສອງຊະນິດ (TanjilG_19701 ແລະ TanjilG_19702). ນອກຈາກນີ້ຍັງມີການຊ້ອນກັນສູງໃນການຕອບສະໜອງ transcriptome ລະຫວ່າງ 83A:476 ແລະ Boregine ທີ່ 24 HPI (ທັງໝົດ 16-38% DEG) ແລະລະຫວ່າງ Mandelup ແລະ Population 22660 ທີ່ 48 HPI (ທັງໝົດ 14-20% DEG).
ແຜນວາດ Venn ສະແດງໃຫ້ເຫັນຈຳນວນຂອງ gene ທີ່ສະແດງອອກແຕກຕ່າງກັນ (DEG) ໃນສາຍພັນ lupine ໃບແຄບ (NLL) ທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາ Colletotrichum lupini (ສາຍພັນ Col-08 ທີ່ໄດ້ມາຈາກທົ່ງ lupine ໃນ Wierzhenice, ໂປແລນ, 1999). ສາຍພັນ NLL ທີ່ໄດ້ວິເຄາະແມ່ນ: 83A:476 (ທົນທານຕໍ່, ມີ allele Lanr1), Boregine (ທົນທານຕໍ່, ບໍ່ຮູ້ພື້ນຖານທາງພັນທຸກໍາ), Mandelup (ທົນທານຕໍ່ປານກາງ, ມີ allele AnMan) ແລະ population 22660 (ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫຼາຍ). ຕົວຫຍໍ້ hpi ໝາຍເຖິງຫຼາຍຊົ່ວໂມງຫຼັງຈາກການສັກຢາ. ຄ່າສູນໄດ້ຖືກລຶບອອກເພື່ອເຮັດໃຫ້ກຣາຟງ່າຍຂຶ້ນ.
ຊຸດຂອງຍີນທີ່ມີການສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປທີ່ 6 hpi ໄດ້ຖືກວິເຄາະສຳລັບການມີໂດເມນຍີນ R ທີ່ເປັນມາດຕະຖານ (ຕາຕະລາງເສີມ S7). ການສຶກສານີ້ໄດ້ເປີດເຜີຍການກະຕຸ້ນ transcriptome ຂອງຍີນຕ້ານທານພະຍາດຄລາສສິກທີ່ມີໂດເມນ NBS-LRR ເທົ່ານັ້ນທີ່ 83A:476. ຊຸດນີ້ປະກອບດ້ວຍຍີນ TIR-NBS-LRR ໜຶ່ງຍີນ (tanjilg_05042), ຍີນ CC-NBS-LRR ຫ້າຍີນ (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, ແລະ tanjilg_16162), ແລະ NBS-LR ສີ່ອັນ, Tanjilg_16162), ແລະ NBS-LRRE ສີ່ອັນ (tanjilg_16162) ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ NBS-Lrr ສີ່ອັນ (tanjilg_16162) ແລະ NBS-LRR ສີ່ອັນ (TANJILG_16162). ຍີນທັງໝົດເຫຼົ່ານີ້ມີໂດເມນທີ່ເປັນມາດຕະຖານທີ່ຈັດລຽງຢູ່ໃນລຳດັບທີ່ອະນຸລັກ. ນອກເໜືອໄປຈາກຍີນໂດເມນ NBS-LRR, ໄຄເນສ RLL ຫຼາຍອັນໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນຢູ່ທີ່ 6 hpi, ຄືໜຶ່ງໃນ Boregine (TanjilG_19877), ສອງໃນ Mandelup (TanjilG_07141 ແລະ TanjilG_19877) ແລະ ໃນປະຊາກອນ 22660 (TanjilG_09014 ແລະ TanjilG_10361) ແລະ ສອງໃນ 83A 27:476.
ພັນທຸກໍາທີ່ມີການສະແດງອອກທີ່ມີການປ່ຽນແປງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນການຕອບສະໜອງຕໍ່ການຕິດເຊື້ອດ້ວຍ C. lupini (ເຊື້ອພັນ Col-08) ໄດ້ຮັບການວິເຄາະການເສີມ Gene Ontology (GO) (ຕາຕະລາງເສີມ S8). ຄຳສັບກ່ຽວກັບຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ຖືກນຳສະເໜີຫຼາຍເກີນໄປທີ່ສຸດແມ່ນ “ການຕອບສະໜອງດ້ານການປ້ອງກັນ GO:0006952” ເຊິ່ງປາກົດຢູ່ໃນ 6 ໃນ 16 ການປະສົມປະສານ (ເສັ້ນເວລາ × ເສັ້ນ) ທີ່ມີຄວາມສຳຄັນສູງ (ຄ່າ P < 0.001) (ຮູບທີ 2). ຄຳສັບກ່ຽວກັບຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ຖືກນຳສະເໜີຫຼາຍເກີນໄປທີ່ສຸດແມ່ນ “ການຕອບສະໜອງດ້ານການປ້ອງກັນ GO:0006952” ເຊິ່ງປາກົດຢູ່ໃນ 6 ໃນ 16 ການປະສົມປະສານ (ເສັ້ນເວລາ × ເສັ້ນ) ທີ່ມີຄວາມສຳຄັນສູງ (ຄ່າ P < 0.001) (ຮູບທີ 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 зыйкитный, появлялся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). ຄຳສັບຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ຖືກນຳສະເໜີຫຼາຍເກີນໄປທີ່ສຸດແມ່ນ 'GO:0006952 defense response', ເຊິ່ງປາກົດຢູ່ໃນ 6 ໃນ 16 ການປະສົມປະສານ (ເວລາ × ສາຍພັນ) ທີ່ມີຄວາມສຳຄັນສູງ (ຄ່າ P < 0.001) (ຮູບທີ 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出的现在16 个（时闸×琿）个中，具有高显着性（P值< 0.001）（图2）. ຄຳສັບກ່ຽວກັບຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ເປັນຕົວແທນຫຼາຍທີ່ສຸດແມ່ນ “ການຕອບສະໜອງດ້ານການປ້ອງກັນ GO:0006952”, ເຊິ່ງປາກົດຢູ່ໃນ 6 ໃນ 16 ການປະສົມປະສານ (时间×线), ໂດຍມີຄວາມສຳຄັນສູງ (ຄ່າ P < 0.001) (ຮູບທີ 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 Defense Response», и в прологического из 16 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). ຄຳສັບກ່ຽວກັບຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ຖືກນຳສະເໜີຫຼາຍເກີນໄປທີ່ສຸດແມ່ນ 'GO:0006952 Defense Response', ເຊິ່ງປາກົດຢູ່ໃນ 6 ໃນ 16 ການປະສົມປະສານ (ເສັ້ນເວລາ ×) ທີ່ມີຄວາມສຳຄັນສູງ (ຄ່າ P < 0.001) (ຮູບທີ 2).ຄຳສັບນີ້ຖືກສະແດງເກີນຄວາມໝາຍໃນສອງຈຸດເວລາໃນ 83A: 476 ແລະ Boregine (6 ແລະ 24 hpi) ແລະ ໃນຈຸດເວລາໜຶ່ງໃນ Mandelup ແລະ Population 22660 (12 ແລະ 6 hpi, ຕາມລຳດັບ). ນີ້ແມ່ນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຄາດໄວ້, ເຊິ່ງເນັ້ນໃຫ້ເຫັນເຖິງການຕອບສະໜອງຕໍ່ຢາຕ້ານເຊື້ອລາຂອງສາຍພັນທີ່ຕ້ານທານ. ນອກຈາກນັ້ນ, 83A:476 ໄດ້ຕອບສະໜອງຕໍ່ C. lupini ໂດຍການກະຕຸ້ນເຊື້ອພັນທຸກຳທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການລະເບີດຂອງອົກຊີເດຊັນຢ່າງໄວວາ ເຊິ່ງເປັນຕົວແທນໂດຍຄຳວ່າ "ຂະບວນການ redox GO:0055114", ຊີ້ບອກເຖິງການຕອບສະໜອງການປ້ອງກັນສະເພາະ, ໃນຂະນະທີ່ Boregine ໄດ້ເປີດເຜີຍການຕອບສະໜອງການປ້ອງກັນສະເພາະ, ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຄຳວ່າ 'GO'. :0006950 ການຕອບສະໜອງຕໍ່ຄວາມຕຶງຄຽດ”. ປະຊາກອນ 22660 ໄດ້ກະຕຸ້ນການຕອບສະໜອງຄວາມຕ້ານທານຕາມແນວນອນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບສານເຜົາຜານຂັ້ນສອງ, ໂດຍເນັ້ນໃສ່ຈຳນວນຄຳສັບທີ່ຫຼາຍເກີນໄປ “GO:0016104 ຂະບວນການສັງເຄາະ triterpene” ແລະ “GO:0006722 ຂະບວນການເຜົາຜານ triterpene” (ທັງສອງຄຳສັບເປັນຂອງຊຸດຂອງຍີນດຽວກັນ), ໂດຍຄຳນຶງເຖິງຜົນຂອງການວິເຄາະການເສີມສ້າງຄຳສັບ GO, ຄວາມໝັ້ນຄົງຂອງປະຕິກິລິຍາ Mandelup ແມ່ນຢູ່ລະຫວ່າງ Boregine ແລະ ປະຊາກອນ 22660. ນອກຈາກນັ້ນ, ປະຕິກິລິຍາຕົ້ນໆ 83A:476 (6 hpi) ແລະ ປະຕິກິລິຍາຊັກຊ້າ Mandelup ແລະ ປະຊາກອນ 22660 ລວມມີຄຳວ່າ GO:0015979 'ການສັງເຄາະແສງ' ແລະ ຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາອື່ນໆທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.
ເງື່ອນໄຂຂອງ ontology ຂອງ gene ຂະບວນການທາງຊີວະພາບທີ່ເລືອກໃນຄໍາອະທິບາຍຂອງ gene ທີ່ສະແດງອອກແຕກຕ່າງກັນໃນລະຫວ່າງການຕອບສະໜອງ transcriptome ຂອງ lupine ໃບແຄບ (NLL) ທີ່ໄດ້ຮັບເຊື້ອ anthrax lupine (ເຊື້ອ Col-08 ທີ່ໄດ້ມາຈາກທົ່ງ lupine ໃນ Wierzhenice, ໂປແລນ, ໃນປີ 1999) ແມ່ນເວົ້າເກີນຈິງຫຼາຍ. ສາຍພັນ NLL ທີ່ໄດ້ວິເຄາະແມ່ນ: 83A:476 (ທົນທານຕໍ່, ມີ allele Lanr1 homozygous), Boregine (ທົນທານຕໍ່, ບໍ່ຮູ້ພື້ນຖານທາງພັນທຸກໍາ), Mandelup (ທົນທານຕໍ່ປານກາງ, ມີ allele AnMan homozygous) ແລະ population 22660 (ອ່ອນໄຫວ).
ເນື່ອງຈາກການສຶກສານີ້ມີຈຸດປະສົງເພື່ອລະບຸຍີນທີ່ປະກອບສ່ວນເຂົ້າໃນການຕ້ານທານພະຍາດແອນທຣັກໂນສ, ຍີນທີ່ຖືກກຳນົດໃຫ້ຢູ່ໃນເງື່ອນໄຂ GO “GO: 0006952 ການຕອບສະໜອງປ້ອງກັນ” ແລະ “ຂະບວນການ Redox GO: 0055114” ໄດ້ຖືກວິເຄາະດ້ວຍຈຸດຕັດເນື່ອງຈາກຄ່າສະເລ່ຍເບື້ອງຕົ້ນ ≥ 30 ດ້ວຍຢ່າງໜ້ອຍໜຶ່ງເສັ້ນ. × ຈຸດໃນເວລາລວມຄ່າທີ່ສຳຄັນທາງສະຖິຕິຂອງ log2 (ການປ່ຽນແປງເທົ່າ). ຈຳນວນຍີນທີ່ຕອບສະໜອງເງື່ອນໄຂເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນ 65 ສຳລັບ GO:0006952 ແລະ 524 ສຳລັບ GO:0055114.
83A:476 ໄດ້ເປີດເຜີຍຈຸດສູງສຸດ DEG ສອງຈຸດທີ່ມີຄຳອະທິບາຍວ່າ GO:0006952, ຈຸດທຳອິດຢູ່ທີ່ 6 ຍີນຕໍ່ນິ້ວ (64 ຍີນ, ການຄວບຄຸມຂຶ້ນ ແລະ ລົງ) ແລະ ຈຸດທີສອງຢູ່ທີ່ 24 ຍີນຕໍ່ນິ້ວ (15 ຍີນ, ການຄວບຄຸມຂຶ້ນເທົ່ານັ້ນ). Boregine ຍັງໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ GO:0006952 ສູງສຸດໃນຈຸດເວລາດຽວກັນ, ແຕ່ມີ DEG ໜ້ອຍກວ່າ (11 ແລະ 8) ແລະ ການກະຕຸ້ນພິເສດ. Mandeloop ສະແດງໃຫ້ເຫັນຈຸດສູງສຸດສອງຈຸດຂອງ GO:0006952 ທີ່ 12 ແລະ 48 HPI, ທັງສອງມີ 12 ຍີນ (ຈຸດທຳອິດມີຍີນກະຕຸ້ນ, ແລະ ຈຸດທີສອງມີຍີນສະກັດກັ້ນເທົ່ານັ້ນ), ໃນຂະນະທີ່ປະຊາກອນ 22660 ຢູ່ທີ່ 6 HPI (13 ຍີນ) ມີການຄວບຄຸມຈຸດສູງສຸດເພີ່ມຂຶ້ນຫຼາຍກວ່າ. ຄວນສັງເກດວ່າ 96.4% ຂອງ GO:0006952 DEG ໃນຈຸດສູງສຸດເຫຼົ່ານີ້ມີການຕອບສະໜອງປະເພດດຽວກັນ (ຂຶ້ນ ຫຼື ລົງ), ຊີ້ບອກເຖິງການຊ້ອນກັນທີ່ສຳຄັນໃນການຕອບສະໜອງການປ້ອງກັນເຖິງວ່າຈະມີຄວາມແຕກຕ່າງໃນຈຳນວນຍີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ. ກຸ່ມລຳດັບທີ່ໃຫຍ່ທີ່ສຸດທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຄຳວ່າ GO:0006952 ເຂົ້າລະຫັດໂປຣຕີນຂໍ້ຄວາມທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຄວາມเครียดຈາກຄວາມອຶດຫິວ 22 (ຄ້າຍຄື SAM22), ເຊິ່ງເປັນຂອງຊັ້ນໂປຣຕີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການເກີດພະຍາດ (PR-10) ຊັ້ນ 10 ແລະໂປຣຕີນຫຼັກຄ້າຍຄືໂປຣຕີນ latex. ຄ້າຍຄືກັນ (ຄ້າຍຄື MLP) (ຮູບທີ 3). ສອງກຸ່ມແຕກຕ່າງກັນໃນລັກສະນະຂອງການສະແດງອອກ ແລະ ທິດທາງຂອງການຕອບສະໜອງ. ຍີນທີ່ເຂົ້າລະຫັດໂປຣຕີນຄ້າຍຄື SAM22 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການກະຕຸ້ນທີ່ສອດຄ່ອງ ແລະ ສຳຄັນໃນຈຸດເວລາຕົ້ນໆ (6 ຫຼື 12 hpi) ແລະ ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວບໍ່ຕອບສະໜອງໃນຕອນທ້າຍຂອງການທົດລອງ (48 hpi), ໃນຂະນະທີ່ໂປຣຕີນຄ້າຍຄື MLP ສະແດງໃຫ້ເຫັນການປະສານງານທີ່ 6 hpi. hpi. 83A:476 ແລະ Mandelup ທີ່ 48 hp/in, ຈຸດຂໍ້ມູນອື່ນໆເກືອບທັງໝົດບໍ່ຕອບສະໜອງ. ນອກຈາກນັ້ນ, ຄວາມແຕກຕ່າງໃນຮູບແບບການສະແດງອອກຂອງຍີນໂປຣຕີນຄ້າຍຄື SAM22 ໄດ້ຕິດຕາມຄວາມປ່ຽນແປງທີ່ສັງເກດເຫັນໃນການຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose, ຍ້ອນວ່າສາຍພັນທີ່ຕ້ານທານຫຼາຍກວ່າມີຈຸດເວລາຫຼາຍກວ່າທີ່ກະຕຸ້ນຍີນເຫຼົ່ານີ້ຫຼາຍກວ່າຍີນທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫຼາຍກວ່າ. ຍີນ PR-10 ອີກອັນໜຶ່ງທີ່ຄ້າຍຄື LlR18A/B ສະແດງໃຫ້ເຫັນຮູບແບບການສະແດງອອກທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບຍີນໂປຣຕີນທີ່ຄ້າຍຄື SAM22.
ອົງປະກອບຫຼັກຂອງຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາ “GO:0006952 ການຕອບສະໜອງດ້ານການປ້ອງກັນ” ແລະຮູບແບບການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອພັນທຸກໍາຂອງອະລີນ Lanr1 ແລະ AnMan ໄດ້ຖືກລະບຸ. ຂະໜາດ Log2 ສະແດງຄ່າ log2 (ການປ່ຽນແປງເທົ່າ) ລະຫວ່າງພືດທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາ (Colletotrichum lupini, ເຊື້ອພັນ Col-08, ໄດ້ມາຈາກທົ່ງ lupine, Wizhenica, ໂປແລນ, 1999) ແລະພືດຄວບຄຸມ (ການສັກຢາປອມ) ໃນຈຸດເວລາດຽວກັນ. ສາຍພັນ lupine ໃບແຄບຕໍ່ໄປນີ້ໄດ້ຖືກວິເຄາະ: 83A:476 (ທົນທານຕໍ່, ມີອະລີນ Lanr1 homozygous), Boregine (ທົນທານຕໍ່, ບໍ່ຮູ້ພື້ນຖານທາງພັນທຸກໍາ), Mandelup (ທົນທານຕໍ່ປານກາງ, ມີອະລີນ AnMan homozygous), ແລະ Population 22660 (ອ່ອນໄຫວ).
ນອກຈາກນັ້ນ, ໂປຣໄຟລ໌ການສະແດງອອກຂອງ RNA-seq candidate genes Lanr1 (TanjilG_05042) ແລະ AnMan (TanjilG_12861) ໄດ້ຖືກປະເມີນ (ຮູບທີ 3). genes TanjilG_05042 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຕອບສະໜອງທີ່ສຳຄັນ (ການກະຕຸ້ນ) ທີ່ 83A:476 ເທົ່ານັ້ນທີ່ຈຸດເວລາທຳອິດ (6 hpi), ໃນຂະນະທີ່ TanjilG_12861 ມີຄວາມສຳຄັນໃນ Mandeloop ເທົ່ານັ້ນທີ່ຈຸດເວລາສອງ: 6 hpi (down regulation) ແລະ 24 hpi (6 hpi). ດ້ວຍ.). ສາມາດປັບໄດ້)).
ຍີນທີ່ມີການສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປໃນຄຳວ່າ GO:0055114 “ຂະບວນການ redox” ແມ່ນຍີນທີ່ເຂົ້າລະຫັດໂປຣຕີນ cytochrome P450 ແລະ peroxidase (ຮູບທີ 4). ສຳລັບຕົວຢ່າງທີ່ແຍກອອກມາຈາກ 83A:476 ທີ່ 6 HPI, ຄ່າ log2 ສູງສຸດ ຫຼື ຕໍ່າສຸດ (ການປ່ຽນແປງເທົ່າ) (ສຳລັບ 86.6% ຂອງຍີນ) ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນລະຫວ່າງພືດທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາ ແລະ ພືດຄວບຄຸມ, ເນັ້ນໃຫ້ເຫັນເຖິງການຕອບສະໜອງສູງຂອງຍີນຊະນິດນີ້ຕໍ່ກັບເພດຂອງການສັກຢາ. 83A:476 ສະແດງໃຫ້ເຫັນ GO: 0055114 DEG ທີ່ສຳຄັນທີ່ສຸດທີ່ 6 hpi (503 ຍີນ), ໃນຂະນະທີ່ສາຍພັນທີ່ເຫຼືອຢູ່ທີ່ 48 hpi (Boregine, 31 ຍີນ; Mandelup, 85 ຍີນ; ແລະ Population 22660, 78 ຍີນ)). ໃນຍີນສ່ວນໃຫຍ່ຂອງຄອບຄົວ GO:0055114, ມີສອງປະເພດຂອງການຕອບສະໜອງຕໍ່ການສັກວັກຊີນ (ການກະຕຸ້ນ ແລະ ການຍັບຍັ້ງ) ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນ. ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈແມ່ນສູງເຖິງ 97.6% ຂອງ DEGs ທີ່ລະບຸໄວ້ສຳລັບຄຳວ່າ GO: 0055114 ໃນ Mandelupe ທີ່ 48 hp ການສັງເກດເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ, ເຖິງວ່າຈະມີຂະໜາດນ້ອຍກວ່າຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (ເຊັ່ນ: ຈຳນວນຂອງເຊື້ອ redox ທີ່ກາຍພັນ, 85 ທຽບກັບ 503), ຮູບແບບຂອງການຕອບສະໜອງ transcriptome ທີ່ຊັກຊ້າຂອງ mandeloup ຕໍ່ກັບ anthracnose ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບການຕອບສະໜອງໃນຕອນຕົ້ນຂອງ 83A:476. ໃນ Boregine ແລະ Population 22660, ການລວມຕົວນີ້ແມ່ນຕໍ່າກວ່າຢູ່ທີ່ 51.6% ແລະ 75.6%, ຕາມລຳດັບ.
ຮູບແບບຂອງການສະແດງອອກຂອງອົງປະກອບຫຼັກຂອງຄຳສັບຂອງຂະບວນການທາງຊີວະພາບ “ຂະບວນການ Redox GO:0055114” ໄດ້ຖືກເປີດເຜີຍ. ຂະໜາດ Log2 ສະແດງຄ່າ log2 (ການປ່ຽນແປງເທົ່າ) ລະຫວ່າງພືດທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາ (Colletotrichum lupini, ເຊື້ອພັນ Col-08, ໄດ້ມາຈາກທົ່ງ lupine, Wizhenica, ໂປແລນ, 1999) ແລະພືດຄວບຄຸມ (ການສັກຢາປອມ) ໃນຈຸດເວລາດຽວກັນ. ສາຍພັນ lupine ໃບແຄບຕໍ່ໄປນີ້ໄດ້ຖືກວິເຄາະ: 83A:476 (ທົນທານຕໍ່, ມີ allele Lanr1 homozygous), Boregine (ທົນທານຕໍ່, ບໍ່ຮູ້ພື້ນຖານທາງພັນທຸກໍາ), Mandelup (ທົນທານຕໍ່ປານກາງ, ມີ allele AnMan homozygous), ແລະ Population 22660 (ອ່ອນໄຫວ).
83A:476 ການຕອບສະໜອງທາງດ້ານການຖອດລະຫັດຕໍ່ກັບການສັກຢາປ້ອງກັນດ້ວຍ C. lupini (ສາຍພັນ Col-08) ຍັງປະກອບມີການປິດສຽງທີ່ປະສານງານຂອງ gene ທີ່ຖືກກຳນົດໂດຍຄຳວ່າ GO:0015979 “ການສັງເຄາະແສງ” ແລະຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາອື່ນໆທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ (ຮູບທີ 5). ຊຸດ GO:0015979 DEG ນີ້ມີ 105 gene ທີ່ຖືກສະກັດກັ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍທີ່ 6 hpi ທີ່ 83A:476. ໃນກຸ່ມຍ່ອຍນີ້, 37 gene ຍັງຖືກຫຼຸດລົງໃນ Mandelup ທີ່ 48 HPI ແລະ 35 ໃນຈຸດເວລາດຽວກັນໃນປະຊາກອນ 22660, ລວມທັງ 19 DEGs ທົ່ວໄປກັບທັງສອງ genotypes. ບໍ່ມີ DEGs ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຄຳວ່າ GO: 0015979 ຖືກກະຕຸ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນການປະສົມປະສານໃດໆ (ແຖວ x ເວລາ).
ຮູບແບບຂອງການສະແດງອອກຂອງອົງປະກອບຫຼັກຂອງໄລຍະຂອງຂະບວນການທາງຊີວະພາບ “GO:0015979 ການສັງເຄາະແສງ” ໄດ້ຖືກເປີດເຜີຍ. ຂະໜາດ Log2 ສະແດງຄ່າ log2 (ການປ່ຽນແປງເທົ່າ) ລະຫວ່າງພືດທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາ (Colletotrichum lupini, ເຊື້ອພັນ Col-08, ໄດ້ມາຈາກທົ່ງ lupine, Wizhenica, ໂປແລນ, 1999) ແລະພືດຄວບຄຸມ (ການສັກຢາປອມ) ໃນຈຸດເວລາດຽວກັນ. ສາຍພັນ lupine ໃບແຄບຕໍ່ໄປນີ້ໄດ້ຖືກວິເຄາະ: 83A:476 (ທົນທານຕໍ່, ມີ allele Lanr1 homozygous), Boregine (ທົນທານຕໍ່, ບໍ່ຮູ້ພື້ນຖານທາງພັນທຸກໍາ), Mandelup (ທົນທານຕໍ່ປານກາງ, ມີ allele AnMan homozygous), ແລະ Population 22660 (ອ່ອນໄຫວ).
ອີງຕາມຜົນຂອງການວິເຄາະການສະແດງອອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນ ແລະ ສົມມຸດວ່າມີສ່ວນຮ່ວມໃນການຕອບສະໜອງປ້ອງກັນຕໍ່ກັບເຊື້ອເຫັດທີ່ເປັນພະຍາດ, ຊຸດຂອງເຈັດພັນທຸກໍານີ້ໄດ້ຖືກຄັດເລືອກສໍາລັບການວັດປະລິມານຂອງຮູບແບບການສະແດງອອກໂດຍ PCR ໃນເວລາຈິງ (ຕາຕະລາງເສີມ S9).
ພັນທຸກຳໂປຣຕີນທີ່ສົມມຸດຕິຖານວ່າ TanjilG_10657 ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນທຸກສາຍພັນ ແລະ ຈຸດເວລາທີ່ໄດ້ສຶກສາເມື່ອທຽບກັບພືດຄວບຄຸມ (ແບບຢ່າງ) (ຕາຕະລາງເສີມ S10, S11). ນອກຈາກນັ້ນ, ຮູບແບບການສະແດງອອກຂອງ TanjilG_10657 ສະແດງໃຫ້ເຫັນແນວໂນ້ມທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຕະຫຼອດການທົດລອງສຳລັບທຸກສາຍພັນ. ປະຊາກອນ 22660 ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມອ່ອນໄຫວສູງສຸດຂອງ TanjilG_10657 ຕໍ່ກັບການສັກຢາທີ່ມີການກະຕຸ້ນ 114 ເທົ່າ ແລະ ລະດັບການສະແດງອອກສູງສຸດ (4.4 ± 0.4) ທີ່ 24 HPI (ຮູບທີ 6a). ພັນທຸກຳໂປຣຕີນ PR10 LlR18A TanjilG_27015 ຍັງສະແດງໃຫ້ເຫັນການກະຕຸ້ນໃນທຸກສາຍພັນ ແລະ ຈຸດເວລາທີ່ໄດ້ສຶກສາ, ໂດຍມີຄວາມສຳຄັນທາງສະຖິຕິຢູ່ຈຸດຂໍ້ມູນສ່ວນໃຫຍ່ (ຮູບທີ 6b). ຄ້າຍຄືກັນກັບ TanjilG_10657, ລະດັບການສະແດງອອກສູງສຸດຂອງ TanjilG_27015 ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນປະຊາກອນທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາ 22660 ຄົນທີ່ 24 HPI (19.5 ± 2.4). ຍີນອາຊິດ endochitinase TanjilG_04706 ໄດ້ຖືກເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນທຸກສາຍພັນ ແລະ ທຸກຈຸດເວລາຍົກເວັ້ນ Boregine 6 hpi (ຮູບທີ 6c). ມັນໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນຢ່າງແຂງແຮງໃນຈຸດເວລາທຳອິດ (6 HPI) ທີ່ 83A:476 (ໂດຍ 10.5 ເທົ່າ) ແລະ ເພີ່ມຂຶ້ນປານກາງໃນສາຍພັນອື່ນໆ (ໂດຍ 6.6-7.5 ເທົ່າ). ໃນລະຫວ່າງການທົດລອງ, ການສະແດງອອກຂອງ TanjilG_04706 ຍັງຄົງຢູ່ໃນລະດັບທີ່ຄ້າຍຄືກັນໃນ 83A:476 ແລະ Boregine, ໃນຂະນະທີ່ໃນ Mandelup ແລະ Population 22660 ມັນເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ, ບັນລຸຄ່າທີ່ຂ້ອນຂ້າງສູງ (5.9 ± 1.5 ແລະ 6.2 ± 1.5, ຕາມລໍາດັບ). ຍີນທີ່ຄ້າຍຄື endoglucan-1,3-β-glucosidase TanjilG_23384 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການກະຕຸ້ນສູງຢູ່ຈຸດເວລາສອງຄັ້ງທຳອິດ (6 ແລະ 12 hpi) ໃນທຸກສາຍພັນຍົກເວັ້ນປະຊາກອນ 22660 (ຮູບທີ 6d). ລະດັບການສະແດງອອກສູງສຸດຂອງ TanjilG_23384 ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຢູ່ຈຸດເວລາທີສອງ (12 hpi) ໃນ Mandelup (2.7 ± 0.3) ແລະ 83A:476 (1.5 ± 0.1). ທີ່ 24 HPI, ການສະແດງອອກຂອງ TanjilG_23384 ແມ່ນຂ້ອນຂ້າງຕໍ່າໃນທຸກສາຍພັນທີ່ໄດ້ສຶກສາ (ຈາກ 0.04 ± 0.009 ຫາ 0.44 ± 0.12).
ຮູບແບບການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອພັນທຸກໍາທີ່ເລືອກ (ag) ທີ່ເປີດເຜີຍໂດຍ PCR ດ້ານປະລິມານ. ຕົວເລກ 6, 12 ແລະ 24 ສະແດງເຖິງຊົ່ວໂມງຫຼັງຈາກການສັກຢາວັກຊີນ. ເຊື້ອພັນທຸກໍາ LanDExH7 ແລະ LanTUB6 ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການເຮັດໃຫ້ເປັນປົກກະຕິ ແລະ LanTUB6 ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການປັບທຽບລະຫວ່າງຊຸດ. ແຖບຄວາມຜິດພາດສະແດງເຖິງຄ່າຜັນປ່ຽນມາດຕະຖານໂດຍອີງໃສ່ສາມການຊໍ້າຊ້ອນທາງຊີວະພາບ, ເຊິ່ງແຕ່ລະອັນແມ່ນຄ່າສະເລ່ຍຂອງສາມການຊໍ້າຊ້ອນທາງວິຊາການ. ຄວາມສຳຄັນທາງສະຖິຕິຂອງຄວາມແຕກຕ່າງໃນລະດັບການສະແດງອອກລະຫວ່າງພືດທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນ (Colletotrichum lupini, ເຊື້ອພັນ Col-08, ໄດ້ຮັບໃນປີ 1999 ຈາກທົ່ງ lupin ໃນ Wierzenica, ໂປແລນ) ແລະ ພືດຄວບຄຸມ (ທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນແບບຈຳລອງ) ແມ່ນໝາຍໄວ້ຂ້າງເທິງຈຸດຂໍ້ມູນ (ຄ່າ *P < 0.05, ຄ່າ **P ≤ 0.01, ຄ່າ ***P ≤ 0.001). ຄວາມສຳຄັນທາງສະຖິຕິຂອງຄວາມແຕກຕ່າງໃນລະດັບການສະແດງອອກລະຫວ່າງພືດທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນ (Colletotrichum lupini, ເຊື້ອພັນ Col-08, ໄດ້ຮັບໃນປີ 1999 ຈາກທົ່ງ lupin ໃນ Wierzenica, ໂປແລນ) ແລະ ພືດຄວບຄຸມ (ທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນແບບຈຳລອງ) ແມ່ນໝາຍໄວ້ຂ້າງເທິງຈຸດຂໍ້ມູນ (ຄ່າ *P < 0.05, ຄ່າ **P ≤ 0.01, ຄ່າ ***P ≤ 0.001). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм 9 вгном 9 вугном 9 с поля люпина в Верженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечхена на дича* Pearl 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001). ຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ມີນัยສຳຄັນທາງສະຖິຕິໃນລະດັບການສະແດງອອກລະຫວ່າງຕົ້ນທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນ (Colletotrichum lupini, ເຊື້ອພັນ Col-08, ໄດ້ຮັບໃນປີ 1999 ຈາກສວນ lupine ໃນ Wierzhenice, ປະເທດໂປແລນ) ແລະ ຕົ້ນພືດຄວບຄຸມ (ທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນແບບປອມ) ໄດ້ຖືກລະບຸໄວ້ຂ້າງເທິງຈຸດຂໍ້ມູນ (ຄ່າ *P < 0.05, **P-value ≤ 0.01, ***P-value ≤ 0.001).接种 (Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数据点上方（*P 0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001).接种（colletotrichum lupini，color-08株，1999年波兰波兰wierzenica的羽扇获得）和对照（接种植植接种植差异的统计学显着性标记数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, люпина в Верженице, Польша, в 1999 г.) ແລະ контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены надынмечены над значение P < 0,05, ** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). ຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ມີນัยສຳຄັນທາງສະຖິຕິໃນລະດັບການສະແດງອອກລະຫວ່າງຕົ້ນທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນ (Colletotrichum lupini, ເຊື້ອພັນ Col-08, ໄດ້ມາຈາກທົ່ງນາ lupine ໃນ Verzhenice, ປະເທດໂປແລນ, ໃນປີ 1999) ແລະ ຕົ້ນພືດຄວບຄຸມ (ທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນແບບປອມ) ໄດ້ຖືກລະບຸໄວ້ຂ້າງເທິງຈຸດຂໍ້ມູນ (ຄ່າ *P < 0.05, **ຄ່າ P ≤ 0.01, ***ຄ່າ P ≤ 0.001).ສາຍພັນ NLL ທີ່ໄດ້ວິເຄາະແມ່ນ: 83A:476 (ຕ້ານທານ, ມີ allele Lanr1 homozygous), Mandelup (ຕ້ານທານປານກາງ, ມີ allele AnMan homozygous), Boregine (ຕ້ານທານ, ບໍ່ຮູ້ພື້ນຖານທາງພັນທຸກໍາ) ແລະ population 22660 (ອ່ອນໄຫວ).
ຍີນ TanjilG_05042 ທີ່ຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງ Lanr1 ສະແດງໃຫ້ເຫັນຮູບແບບການສະແດງອອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຈາກໂປຣໄຟລ໌ທີ່ໄດ້ຮັບຈາກການສຶກສາ RNA-seq (ຮູບທີ 6e). ການກະຕຸ້ນທີ່ສຳຄັນຂອງຍີນນີ້ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນ Mandelup ແລະປະຊາກອນ 22660 (ສູງເຖິງ 39.7 ແລະ 11.7 ເທົ່າຕາມລຳດັບ), ເຊິ່ງສົ່ງຜົນໃຫ້ລະດັບການສະແດງອອກຂ້ອນຂ້າງສູງ (ສູງເຖິງ 1.4 ± 0.14 ແລະ 7.2 ± 1.3 ຕາມລຳດັບ). 83A:476 ຍັງໄດ້ເປີດເຜີຍການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງຍີນ TanjilG_05042 ບາງຢ່າງ (ສູງເຖິງ 3.8 ເທົ່າ), ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ລະດັບການສະແດງອອກທີ່ກ່ຽວຂ້ອງທີ່ບັນລຸໄດ້ (0.044 ± 0.002) ແມ່ນຕໍ່າກວ່າຫຼາຍກວ່າ 30 ເທົ່າກ່ວາທີ່ສັງເກດເຫັນໃນ Mandelup ແລະປະຊາກອນ 22660. ການວິເຄາະໂດຍ qPCR ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນໃນລະດັບການສະແດງອອກລະຫວ່າງ genotype ໃນຕົວແປທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາວັກຊີນແບບຈຳລອງ (ກຸ່ມຄວບຄຸມ), ເຊິ່ງບັນລຸຄວາມແຕກຕ່າງ 58 ເທົ່າລະຫວ່າງປະຊາກອນ 22660 ແລະ 83A:476, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບລະຫວ່າງປະຊາກອນ 22660 ແລະ 22660. ຄວາມແຕກຕ່າງສອງເທົ່າໄດ້ບັນລຸໄດ້ລະຫວ່າງ Boregine ແລະ Mandalup.
ຍີນທີ່ເປັນຕົວເລືອກຢູ່ສະຖານທີ່ AnMan, TanjilG_12861, ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນເພື່ອຕອບສະໜອງຕໍ່ການສັກຢາວັກຊີນໃນ 83A:476 ແລະ Mandelup, ເປັນກາງໃນປະຊາກອນ 22660, ແລະຖືກຫຼຸດລົງໃນ Boregine (ຮູບທີ 6f). ການສະແດງອອກທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຂອງຍີນ TanjilG_12861 ແມ່ນສູງທີ່ສຸດໃນ 83A:476 ທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາວັກຊີນ (0.14±0.01). ຍີນໂປຣຕີນຊ໊ອກຄວາມຮ້ອນຊັ້ນ I 17.4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 ສະແດງໃຫ້ເຫັນລະດັບການສະແດງອອກທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຕ່ຳກວ່າໃນທຸກສາຍພັນ ແລະ ຈຸດເວລາທີ່ໄດ້ສຶກສາ (ຮູບທີ 6g). ຄ່າສູງສຸດໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຢູ່ທີ່ 24 HPI ໃນປະຊາກອນ 22660 (0.14±0.02, ເພີ່ມຂຶ້ນແປດເທົ່າໃນການຕອບສະໜອງຕໍ່ການສັກຢາວັກຊີນ).
ການປຽບທຽບໂປຣໄຟລ໌ການສະແດງອອກຂອງ gene (ຮູບທີ 7) ເປີດເຜີຍຄວາມສຳພັນສູງລະຫວ່າງ TanjilG_10657 ແລະ gene ອື່ນໆສີ່ຊະນິດຄື: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), ແລະ TanjilG_04706 (r = 0.79). ຜົນໄດ້ຮັບດັ່ງກ່າວອາດຈະຊີ້ບອກເຖິງການຮ່ວມມືຂອງ gene ເຫຼົ່ານີ້ໃນລະຫວ່າງການຕອບສະໜອງການປ້ອງກັນ. gene TanjilG_12861 ແລະ TanjilG_23384 ສະແດງໃຫ້ເຫັນໂປຣໄຟລ໌ການສະແດງອອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນດ້ວຍຄ່າສຳປະສິດສະຫະສຳພັນ Pearson ຕ່ຳກວ່າ (ຈາກ 0.08 ຫາ 0.43 ແລະ -0.19 ຫາ 0.28, ຕາມລຳດັບ) ເມື່ອທຽບກັບ gene ອື່ນໆ.
ການພົວພັນລະຫວ່າງໂປຣໄຟລ໌ການສະແດງອອກຂອງ gene ໄດ້ຖືກກວດພົບໂດຍໃຊ້ PCR ປະລິມານ. ສາຍພັນ lupine ໃບແຄບຕໍ່ໄປນີ້ໄດ້ຖືກວິເຄາະ: 83A:476 (ທົນທານຕໍ່, ມີ allele Lanr1 homozygous), Mandelup (ທົນທານຕໍ່ປານກາງ, ມີ allele AnMan homozygous), Boregine (ທົນທານຕໍ່, ບໍ່ຮູ້ພື້ນຖານທາງພັນທຸກໍາ), ແລະ Population 22660 (ອ່ອນໄຫວ). ຈຸດເວລາສາມຢ່າງໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ (6, 12 ແລະ 24 ຊົ່ວໂມງຫຼັງຈາກການສັກຢາ), ລວມທັງການສັກຢາ (Colletotrichum lupini, ສາຍພັນ Col-08, ໄດ້ມາຈາກທົ່ງ lupine ໃນ Wierzhenice, ໂປແລນ, ໃນປີ 1999) ແລະພືດຄວບຄຸມ (ການສັກຢາປອມ). ມາດຕາສ່ວນສະແດງໃຫ້ເຫັນຄ່າຂອງສໍາປະສິດສະຫະສໍາພັນ Pearson.
ອີງຕາມຂໍ້ມູນທີ່ໄດ້ມາທີ່ 6 ແຮງມ້າຕໍ່ນິ້ວ, WGCNA ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ 9981 DEG ທີ່ລະບຸໂດຍການປຽບທຽບພືດທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາປ້ອງກັນ ແລະ ພືດຄວບຄຸມເພື່ອສຸມໃສ່ການຕອບສະໜອງການປ້ອງກັນໃນໄລຍະຕົ້ນ (ຕາຕະລາງເສີມ S12). ພົບເຫັນໂມດູນຍີນ (ກຸ່ມ) ຊາວສອງໂມດູນທີ່ມີໂປຣໄຟລ໌ການສະແດງອອກທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ (ບວກ ຫຼື ລົບ) ລະຫວ່າງຈີໂນໄທບ ແລະ ຕົວແປທົດລອງ. ໂດຍສະເລ່ຍແລ້ວ, ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ gene ໄດ້ຫຼຸດລົງຕາມລຳດັບ 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 (ໃນທັງສອງຊະນິດ, ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ແນວໂນ້ມນີ້ແມ່ນເຂັ້ມແຂງກວ່າໃນພືດຄວບຄຸມ). ໂດຍສະເລ່ຍແລ້ວ, ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ gene ໄດ້ຫຼຸດລົງຕາມລຳດັບ 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 (ໃນທັງສອງຊະນິດ, ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ແນວໂນ້ມນີ້ແມ່ນເຂັ້ມແຂງກວ່າໃນພືດຄວບຄຸມ). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > ປະຊາກອນ 22660 ( в обоих вариантах , однентах , однентах , однентах , однентах , однентах , была сильнее у контрольных растений). ໂດຍສະເລ່ຍແລ້ວ, ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ gene ຫຼຸດລົງໃນລຳດັບ 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 (ໃນທັງສອງຊະນິດ, ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ແນວໂນ້ມນີ້ແມ່ນເຂັ້ມແຂງກວ່າໃນພືດຄວບຄຸມ).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > ປະຊາກອນ 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）.平均而言，基因水平按按 83a:476> mandelup> boregine> ປະຊາກອນ 22660 ຄົນ 的 顺序下降（，在种丙，在种中见，在种丙，在种中，在种中，在种中见，平均而言。 ເພີ່ມເຕີມ) . . . . . . . . . . . . . . . . . В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > ປະຊາກອນ 22660 (однако в обоих вариант ах сильнее у контрольных растений). ໂດຍສະເລ່ຍແລ້ວ, ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ gene ຫຼຸດລົງໃນຊຸດ 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 (ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນທັງສອງຊະນິດ, ແນວໂນ້ມນີ້ແມ່ນເຂັ້ມແຂງກວ່າໃນພືດຄວບຄຸມ).ການສັກວັກຊີນສົ່ງຜົນໃຫ້ການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງການສະແດງອອກຂອງ gene, ໂດຍສະເພາະໃນໂມດູນ 18, 19, 14, 6 ແລະ 1 (ຕາມລຳດັບຜົນກະທົບ), ການຄວບຄຸມທາງລົບ (ເຊັ່ນ: ໂມດູນ 9 ແລະ 20) ຫຼື ມີຜົນກະທົບທີ່ເປັນກາງ (ເຊັ່ນ: ໂມດູນ 11, 22, 8 ແລະ 13). ການວິເຄາະການເພີ່ມປະລິມານຂອງ GO (ຕາຕະລາງເສີມ S13) ໄດ້ເປີດເຜີຍ “GO: 0006952 ການຕອບສະໜອງປ້ອງກັນ” ສຳລັບໂມດູນທີ່ໄດ້ຮັບການສັກຢາ (18) ທີ່ມີການກະຕຸ້ນສູງສຸດ, ລວມທັງ gene ທີ່ວິເຄາະໂດຍ qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 ແລະ TanjilG_27015), ເຊັ່ນດຽວກັນກັບໂມດູນການສັງເຄາະແສງທີ່ຖືກສະກັດກັ້ນຫຼາຍທີ່ສຸດຂອງການສັກຢາ (9). ຕົວເຂັ້ມຂຸ້ນໂມດູນ 18 (ຮູບທີ 8) ຖືກລະບຸວ່າເປັນ gene TanjilG_26536 ທີ່ເຂົ້າລະຫັດໂປຣຕີນ LlR18B ທີ່ຄ້າຍຄື PR-10, ແລະຕົວເຂັ້ມຂຸ້ນໂມດູນ 9 ຖືກລະບຸວ່າເປັນ gene TanjilG_28955 ທີ່ເຂົ້າລະຫັດໂປຣຕີນ photosystem II PsbQ. gene ຕ້ານທານ anthracnose Lanr1 ທີ່ເປັນໄປໄດ້, TanjilG_05042, ຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃນໂມດູນ 22 (ຮູບທີ 9) ແລະກ່ຽວຂ້ອງກັບຄຳວ່າ "GO:0044260 ຂະບວນການເຜົາຜານອາຫານຂອງຈຸລັງ macromolecular" ແລະ "GO:0006355 Transcriptional regulation, DNA templating" ທີ່ມີສູນກາງ TanjilG_01212. gene ເຂົ້າລະຫັດປັດໄຈການຖອດລະຫັດຄວາມກົດດັນຄວາມຮ້ອນ A-4a (HSFA4a).
ການວິເຄາະເຄືອຂ່າຍທີ່ມີນ້ຳໜັກຂອງການສະແດງອອກຮ່ວມກັນຂອງ gene ຂອງໂມດູນທີ່ມີເງື່ອນໄຂຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ເກີນຈິງ “GO: 0006952 ການຕອບສະໜອງດ້ານການປ້ອງກັນ”. ການຜູກມັດໄດ້ຖືກເຮັດໃຫ້ງ່າຍຂຶ້ນເພື່ອເນັ້ນໃສ່ gene ສີ່ອັນທີ່ວິເຄາະໂດຍ qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 ແລະ TanjilG_27015).
ການວິເຄາະເຄືອຂ່າຍທີ່ມີນ້ຳໜັກຂອງການສະແດງອອກຮ່ວມກັນຂອງ gene ຂອງໂມດູນທີ່ມີຄຳສັບຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ເກີນຈິງ “GO: 0006355: ການຄວບຄຸມການຖອດລະຫັດ, ການສ້າງແບບຈຳລອງ DNA” ແລະ ມີ gene ຕ້ານທານ anthracnose Lanr1 TanjilG_05042. ການຜູກມັດໄດ້ຖືກເຮັດໃຫ້ງ່າຍຂຶ້ນເພື່ອແຍກ gene TanjilG_05042 ແລະ gene ສູນກາງ TanjilG_01212.
ການກວດສອບຄວາມຕ້ານທານພະຍາດແອນທຣັກໂນສທີ່ເກັບກຳໄດ້ໃນອົດສະຕຣາລີສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າພັນທີ່ປ່ອຍອອກມາໃນໄລຍະຕົ້ນໆສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວ; Kalya, Coromup ແລະ Mandelup ໄດ້ຖືກອະທິບາຍວ່າທົນທານຕໍ່ພະຍາດໃນລະດັບປານກາງ, ໃນຂະນະທີ່ Wonga, Tanjil ແລະ 83A:476 ໄດ້ຖືກອະທິບາຍວ່າທົນທານຕໍ່ພະຍາດສູງ26,27,31. ມີອາເລນຕ້ານທານດຽວກັນ, ກຳນົດເປັນ Lanr1, ແລະ Coromup ແລະ Mandelup ມີອາເລນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ກຳນົດເປັນ AnMan10, 26, 39, ໃນຂະນະທີ່ Kalya ໄດ້ຖ່າຍທອດອາເລນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. , Lanr2. ການກວດສອບຄວາມຕ້ານທານພະຍາດແອນທຣັກໂນສໃນເຢຍລະມັນໄດ້ຜົນໃຫ້ລະບຸສາຍພັນຕ້ານທານ Bo7212 ດ້ວຍອາເລນທາງເລືອກອື່ນນອກເໜືອຈາກ Lanr1, ກຳນົດເປັນ LanrBo36.
ການສຶກສາຂອງພວກເຮົາໄດ້ເປີດເຜີຍຄວາມຖີ່ຕໍ່າຫຼາຍ (ປະມານ 6%) ຂອງ allele Lanr1 ໃນເຊື້ອພັນທີ່ຖືກທົດສອບ. ການສັງເກດການນີ້ສອດຄ່ອງກັບຜົນຂອງການກວດເຊື້ອພັນເອີຣົບຕາເວັນອອກໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງໝາຍ Anseq3 ແລະ Anseq4, ເຊິ່ງສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ allele Lanr1 ມີຢູ່ໃນສອງສາຍພັນເບລາຣຸດເທົ່ານັ້ນ. ນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ allele Lanr1 ຍັງບໍ່ທັນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໂດຍໂຄງການປັບປຸງພັນໃນທ້ອງຖິ່ນ, ບໍ່ເຫມືອນກັບໃນອົດສະຕາລີ, ບ່ອນທີ່ມັນເປັນໜຶ່ງໃນ alleles ທີ່ສຳຄັນສໍາລັບການປັບປຸງພັນດ້ວຍເຄື່ອງໝາຍ. ນີ້ອາດຈະເປັນຍ້ອນລະດັບຄວາມຕ້ານທານທີ່ຕໍ່າກວ່າທີ່ສະໜອງໃຫ້ໂດຍ allele Lanr1 ໃນສະພາບທົ່ງນາຂອງເອີຣົບເມື່ອທຽບກັບລາຍງານຂອງອົດສະຕາລີ. ນອກຈາກນັ້ນ, ການສຶກສາກ່ຽວກັບພະຍາດ anthracnose ໃນພື້ນທີ່ທີ່ມີຝົນຕົກສູງໃນອົດສະຕາລີໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຕອບສະໜອງຕໍ່ຄວາມຕ້ານທານທີ່ເກີດຈາກ allele Lanr1 ອາດຈະບໍ່ມີປະສິດທິພາບໃນສະພາບອາກາດທີ່ເອື້ອອໍານວຍໃຫ້ແກ່ການເຕີບໂຕແລະການພັດທະນາຢ່າງໄວວາຂອງເຊື້ອພະຍາດ19,42. ໃນຄວາມເປັນຈິງ, ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ອາການບາງຢ່າງຂອງ anthracnose ຍັງໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນ genotypes ທີ່ມີ allele Lanr1, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມຕ້ານທານອາດຈະຫາຍໄປພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການພັດທະນາຂອງ C. lupini. ນອກຈາກນັ້ນ, ການຕີຄວາມໝາຍທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງໃນທາງບວກກ່ຽວກັບການມີເຄື່ອງໝາຍ Anseq3 ແລະ Anseq4, ເຊິ່ງຢູ່ຫ່າງຈາກສະຖານທີ່ Lanr1 ປະມານ 1 cM, ກໍ່ເປັນໄປໄດ້ 28, 30, 43.
ການສຶກສາຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ 83A:476, ທີ່ມີ allele Lanr1, ຕອບສະໜອງຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ C. lupini ດ້ວຍການຂຽນໂປຣແກຣມໃໝ່ຂອງ transcriptome ຂະໜາດໃຫຍ່ຢູ່ຈຸດເວລາທີ່ວິເຄາະຄັ້ງທຳອິດ (6 hpi), ໃນຂະນະທີ່ຢູ່ໃນ Mandelup, ທີ່ມີ allele AnMan, ການຕອບສະໜອງ transcriptomic ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນພາຍຫຼັງຫຼາຍ (ຈາກ 24 ຫາ 48 hp). ການປ່ຽນແປງຊົ່ວຄາວເຫຼົ່ານີ້ໃນການຕອບສະໜອງການປ້ອງກັນແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບຄວາມແຕກຕ່າງໃນອາການຂອງພະຍາດ, ເຊິ່ງເນັ້ນໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມສຳຄັນຂອງການຮັບຮູ້ເຊື້ອພະຍາດໃນໄລຍະຕົ້ນໆສຳລັບການຕອບສະໜອງຕໍ່ຄວາມຕ້ານທານທີ່ປະສົບຜົນສຳເລັດ. ເພື່ອຕິດເຊື້ອເນື້ອເຍື່ອພືດ, ສະປໍຂອງພະຍາດອັນແທຣັກຕ້ອງຜ່ານຂັ້ນຕອນການພັດທະນາຫຼາຍຂັ້ນຕອນຢູ່ເທິງໜ້າດິນຂອງເຈົ້າພາບ, ລວມທັງການແຕກງອກ, ການແບ່ງຈຸລັງ, ແລະການສ້າງ appressorium. appendage ແມ່ນໂຄງສ້າງການຕິດເຊື້ອທີ່ຕິດກັບໜ້າດິນຂອງເຈົ້າພາບ ແລະອຳນວຍຄວາມສະດວກໃນການເຈາະເຂົ້າໄປໃນເນື້ອເຍື່ອຂອງເຈົ້າພາບ. ດັ່ງນັ້ນ, ສະປໍຂອງ C. gloeosporioides ໃນສານສະກັດຈາກຖົ່ວສະແດງໃຫ້ເຫັນການແບ່ງຕົວຄັ້ງທຳອິດຂອງນິວເຄຼຍຫຼັງຈາກການຟັກຕົວ 75-90 ນາທີ, ການສ້າງທໍ່ເຊື້ອຫຼັງຈາກ 90-120 ນາທີ, ແລະ ການສະກັດກັ້ນຫຼັງຈາກ 4 ຊົ່ວໂມງ 45. ໝາກມ່ວງ C. gloeosporioides ສະແດງໃຫ້ເຫັນການແຕກງອກຂອງ conidial ຫຼາຍກວ່າ 40% ຫຼັງຈາກການຟັກເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ ແລະ ການສ້າງຕົວກະຕຸ້ນປະມານ 20% ຫຼັງຈາກ 4 ຊົ່ວໂມງ. ຍີນ CAP20 ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຄວາມຮຸນແຮງຂອງ C. gloeosporioides ສະແດງໃຫ້ເຫັນກິດຈະກຳການຖອດລະຫັດໃນ conidia ທີ່ສ້າງ epiphyte ຫຼັງຈາກການຟັກເປັນເວລາ 3.5 ຊົ່ວໂມງໃນຂີ້ເຜີ້ງພື້ນຜິວຂອງໝາກອາໂວກາໂດທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງໂປຣຕີນ CAP20 ຫຼັງຈາກ 4 ຊົ່ວໂມງ 46 ນາທີ. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ກິດຈະກຳຂອງຍີນ biosynthesis melanin ໃນ C. trifolii ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນໃນລະຫວ່າງການຟັກເປັນເວລາ 2 ຊົ່ວໂມງ ແລະ ຕິດຕາມດ້ວຍການສ້າງ appressorium ຫຼັງຈາກ 1 ຊົ່ວໂມງ. ການສຶກສາກ່ຽວກັບເນື້ອເຍື່ອໃບໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າສະຕໍເບີຣີທີ່ຕິດເຊື້ອດ້ວຍ C. acutatum ມີການສະກັດກັ້ນຄັ້ງທຳອິດທີ່ 8 hpi, ໃນຂະນະທີ່ໝາກເລັ່ນທີ່ຕິດເຊື້ອດ້ວຍ C. coccodes ມີການສະກັດກັ້ນຄັ້ງທຳອິດທີ່ 4 hpi48,49. ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບຂະໜາດເວລາຂອງຂະບວນການຕິດເຊື້ອ Colletotrichum spp. ການຕອບສະໜອງປ້ອງກັນຢ່າງວ່ອງໄວຕໍ່ 83A:476 ຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງການມີສ່ວນຮ່ວມຂອງຄວາມຕ້ານທານຂອງພືດ ແລະ ພັນທຸກຳພູມຕ້ານທານທີ່ຖືກກະຕຸ້ນໂດຍ effector (ETI) ໃນສາຍພັນນີ້, ໃນຂະນະທີ່ການຕອບສະໜອງທີ່ຊັກຊ້າຂອງ Mandelup ສະໜັບສະໜູນສົມມຸດຕິຖານພູມຕ້ານທານທີ່ຖືກກະຕຸ້ນໂດຍຮູບແບບໂມເລກຸນ (MTI) ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຈຸລະພາກ 50. ການຕອບສະໜອງໃນຕອນຕົ້ນຕໍ່ 83A:476 ແລະ Mandelup. ການຊ້ອນກັນບາງສ່ວນລະຫວ່າງພັນທຸກຳທີ່ຄວບຄຸມຂຶ້ນ ຫຼື ລົງໃນການຕອບສະໜອງທີ່ຊັກຊ້າຍັງສະໜັບສະໜູນແນວຄວາມຄິດນີ້, ຍ້ອນວ່າ ETI ມັກຖືກພິຈາລະນາວ່າເປັນການຕອບສະໜອງ MTI ທີ່ເລັ່ງ ແລະ ເສີມສ້າງ ເຊິ່ງບັນລຸຈຸດສຸດຍອດໃນການຕາຍຂອງເຊວທີ່ຖືກວາງແຜນໄວ້ຢູ່ບ່ອນຕິດເຊື້ອ, ເຊິ່ງເອີ້ນວ່າອາການຊ໊ອກ anaphylactic 51,52.
ສ່ວນໃຫຍ່ຂອງຍີນທີ່ຖືກກ່າວເຖິງວ່າເປັນຄຳສັບທີ່ເກີນຈິງ Gene Ontology GO:0006952 “ການຕອບສະໜອງດ້ານການປ້ອງກັນ” ແມ່ນ 11 homologues ຂອງໂປຣຕີນ fasting message 22 ທີ່ເກີດຈາກຄວາມກົດດັນ (ຄ້າຍຄືກັບ SAM22) ແລະ ໂປຣຕີນຄ້າຍຄື latex ເຈັດຊະນິດ (MLPs). -like 31, 34, 43 ແລະ 423 ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມຄ້າຍຄືກັນຂອງລຳດັບ. ຍີນຄ້າຍຄື SAM22 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການກະຕຸ້ນທີ່ສຳຄັນທີ່ຢູ່ໄດ້ດົນກວ່າ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນລະດັບຄວາມຕ້ານທານຂອງ anthracnose ທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ (83A:476 ແລະ Boregine). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຍີນຄ້າຍຄື MLP ໄດ້ຖືກຫຼຸດລົງພຽງແຕ່ໃນສາຍທີ່ມີ allele ຕ້ານທານຜູ້ສະໝັກ (83A:476/Lanr1 ທີ່ 6 hpi ແລະ Mandelup/AnMan ທີ່ 24 hpi). ຄວນສັງເກດວ່າ homologues ຄ້າຍຄື SAM22 ທັງໝົດທີ່ລະບຸມາຈາກກຸ່ມຍີນທີ່ມີຂະໜາດປະມານ 105 kb, ໃນຂະນະທີ່ຍີນຄ້າຍຄື MLP ມາຈາກພາກພື້ນແຍກຕ່າງຫາກຂອງຈີໂນມ. ການກະຕຸ້ນປະສານງານຂອງເຊື້ອພັນທຸກໍາທີ່ຄ້າຍຄື SAM22 ດັ່ງກ່າວຍັງໄດ້ພົບເຫັນຢູ່ໃນການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບການຕ້ານທານ NLL ຕໍ່ກັບການຕິດເຊື້ອ Diaporthetoxica, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າພວກມັນມີສ່ວນຮ່ວມໃນອົງປະກອບທາງນອນຂອງການຕອບສະໜອງຕໍ່ການປ້ອງກັນ. ສະຫຼຸບນີ້ຍັງໄດ້ຮັບການສະໜັບສະໜູນຈາກບົດລາຍງານກ່ຽວກັບການຕອບສະໜອງໃນທາງບວກຂອງເຊື້ອພັນທຸກໍາທີ່ຄ້າຍຄື SAM22 ຕໍ່ກັບການບາດເຈັບ ຫຼື ການປິ່ນປົວດ້ວຍກົດ salicylic, ສານກະຕຸ້ນເຊື້ອລາ, ຫຼື hydrogen peroxide.
ພັນທຸກຳທີ່ຄ້າຍຄື MLP ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຕອບສະໜອງຕໍ່ຄວາມກົດດັນທາງດ້ານ abiotic ແລະ biotic ຕ່າງໆ, ລວມທັງການຕິດເຊື້ອແບັກທີເຣຍ, ໄວຣັດ ແລະ ເຊື້ອລາທີ່ເປັນພະຍາດໃນພືດຫຼາຍຊະນິດ55. ທິດທາງຂອງການຕອບສະໜອງຕໍ່ການພົວພັນລະຫວ່າງພືດ ແລະ ເຊື້ອພະຍາດມີຕັ້ງແຕ່ການເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (ເຊັ່ນ: ໃນລະຫວ່າງການລະບາດຂອງຝ້າຍດ້ວຍ Verticillium dahliae) ຈົນເຖິງການຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (ເຊັ່ນ: ຫຼັງຈາກການຕິດເຊື້ອຕົ້ນໝາກໂປມດ້ວຍ Alternaria spp.)56,57. ການຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຂອງພັນທຸກຳທີ່ຄ້າຍຄື MLP 423 ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນລະຫວ່າງການປ້ອງກັນການຕິດເຊື້ອ F. niger ຂອງໝາກອາໂວກາໂດ ແລະ ໃນລະຫວ່າງການຕິດເຊື້ອຕົ້ນໝາກໂປມ Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola ແລະ Alternaria alternata ແມ່ນພະຍາດທາງພັນທຸກຳຂອງໝາກໂປມ58,59. ນອກຈາກນັ້ນ, ໝາກໂປມທີ່ສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປຂອງພັນທຸກຳທີ່ຄ້າຍຄື MLP 423 ມີການສະແດງອອກຂອງພັນທຸກຳທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຄວາມຕ້ານທານຕ່ຳ ແລະ ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ການຕິດເຊື້ອເຊື້ອລາຫຼາຍກວ່າ59. ຫຼັງຈາກ Fusarium oxysporum f, ພັນທຸກຳທີ່ຄ້າຍຄື MLP 423 ຍັງຖືກສະກັດກັ້ນໃນເຊື້ອພັນຖົ່ວທົ່ວໄປທີ່ຕ້ານທານ. cn. ການຕິດເຊື້ອຖົ່ວ 60.
ສະມາຊິກອື່ນໆຂອງຄອບຄົວ PR-10 ທີ່ຖືກລະບຸໃນການສຶກສາ RNA-seq ຂອງພວກເຮົາແມ່ນ gene LlR18A ແລະ LlR18B ເພື່ອຕອບສະໜອງຕໍ່ການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງລະດັບ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ gene ທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ (1 gene) ຫຼືຫຼຸດລົງ (3 gene) ສຳລັບໂປຣຕີນການໂອນຍ້າຍໄຂມັນ DIR1. ນອກຈາກນັ້ນ, WGCNA ເນັ້ນໃຫ້ເຫັນ gene LlR18B ເປັນສູນກາງໃນໂມດູນນີ້, ເຊິ່ງມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງຕໍ່ການສັກຢາວັກຊີນ ແລະ ມີ gene ຕອບສະໜອງປ້ອງກັນຫຼາຍຊະນິດ. gene LlR18A ແລະ LlR18B ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນໃນໃບ lupine ສີເຫຼືອງເພື່ອຕອບສະໜອງຕໍ່ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ເປັນພະຍາດ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບໃນລຳຕົ້ນ NLL ຫຼັງຈາກການສັກຢາ D. toxica, ໃນຂະນະທີ່ homologue ເຂົ້າຂອງ gene ເຫຼົ່ານີ້, RSOsPR10, ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນຢ່າງໄວວາໂດຍການຕິດເຊື້ອລາທີ່ສົມມຸດວ່າກ່ຽວຂ້ອງກັບເສັ້ນທາງສັນຍານກົດ jasmonic53,61,62. gene DIR1 ເຂົ້າລະຫັດໂປຣຕີນຂົນສົ່ງໄຂມັນທີ່ບໍ່ຈຳເພາະທີ່ຕ້ອງການສຳລັບການເລີ່ມຕົ້ນຂອງຄວາມຕ້ານທານທີ່ໄດ້ມາຢ່າງເປັນລະບົບ (SAR). ດ້ວຍການພັດທະນາປະຕິກິລິຍາປ້ອງກັນ, ໂປຣຕີນ DIR1 ຈະຖືກຂົນສົ່ງຈາກຈຸດໃຈກາງຂອງການຕິດເຊື້ອຜ່ານ phloem ເພື່ອກະຕຸ້ນ SAR ໃນອະໄວຍະວະທີ່ຢູ່ໄກ. ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈແມ່ນ, gene TanjilG_02313 DIR1 ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນຈຸດເວລາທຳອິດໃນສາຍ 84A:476 ແລະ Population 22660, ແຕ່ການຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose ໄດ້ພັດທະນາຢ່າງສຳເລັດຜົນພຽງແຕ່ໃນສາຍ 84A:476 ເທົ່ານັ້ນ. ນີ້ອາດຈະຊີ້ບອກເຖິງການເຮັດວຽກຍ່ອຍບາງຢ່າງຂອງ gene DIR1 ໃນ NLL, ເນື່ອງຈາກວ່າ homologues ສາມຊະນິດທີ່ເຫຼືອຕອບສະໜອງຕໍ່ການສັກຢາພຽງແຕ່ໃນສາຍ 83A:476 ທີ່ 6 hpi, ແລະການຕອບສະໜອງນີ້ແມ່ນມຸ້ງລົງລຸ່ມ.
ໃນການສຶກສາຂອງພວກເຮົາ, ສ່ວນປະກອບທີ່ພົບເລື້ອຍທີ່ສຸດທີ່ສອດຄ້ອງກັບຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ເອີ້ນວ່າ "ຂະບວນການ Redox GO:0055114" ແມ່ນໂປຣຕີນ cytochrome P450, peroxidase, linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase, ແລະ 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase. ນອກຈາກນັ້ນ, WGCNA ຂອງພວກເຮົາກຳນົດ homologue HSFA4a ເປັນໂມດູນທີ່ມີສູນກາງເຊັ່ນ: ຜູ້ທີ່ມີ gene ຕ້ານທານ Lanr1 TanjilG_05042. HSFA4a ແມ່ນສ່ວນປະກອບຂອງການຄວບຄຸມ redox ທີ່ຂຶ້ນກັບການຖອດລະຫັດນິວເຄຼຍໃນພືດ.
ໂປຣຕີນ Cytochrome P450 ແມ່ນ oxidoreductases ທີ່ກະຕຸ້ນປະຕິກິລິຍາ hydroxylation ທີ່ຂຶ້ນກັບ NADPH ແລະ/ຫຼື O2 ໃນການເຜົາຜານອາຫານຂັ້ນຕົ້ນ ແລະ ຂັ້ນສອງ, ລວມທັງການເຜົາຜານອາຫານຂອງ xenobiotics, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບຮໍໂມນ, ກົດໄຂມັນ, sterols, ອົງປະກອບຝາເຊລ, biopolymers, ແລະ ການສັງເຄາະທາງຊີວະພາບຂອງສານປະກອບປ້ອງກັນ 69. ໃນການສຶກສາຂອງພວກເຮົາ, ການປ່ຽນແປງຂອງໜ້າທີ່ cytochrome P450 ຂອງພືດໄດ້ຫຼຸດລົງຈາກ -10.6 log2 (ການປ່ຽນແປງເທົ່າ) ເປັນ 5.7 ເນື່ອງຈາກມີ homologues ຈຳນວນຫຼວງຫຼາຍທີ່ປ່ຽນແປງ (37) ແລະ ຄວາມແຕກຕ່າງໃນຮູບແບບການຕອບສະໜອງລະຫວ່າງ gene ສະເພາະ, ສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນເຖິງການປັບປຸງທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ. ການໃຊ້ພຽງແຕ່ຂໍ້ມູນ RNA-seq ເພື່ອອະທິບາຍໜ້າທີ່ທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ສົມມຸດຕິຖານຂອງ gene NLL ໃນ superfamily ໂປຣຕີນຂະໜາດໃຫຍ່ດັ່ງກ່າວຈະເປັນການຄາດເດົາສູງ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ມັນຄວນຈະສັງເກດວ່າ gene cytochrome P450 ບາງອັນແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບຄວາມຕ້ານທານທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຕໍ່ກັບເຊື້ອລາ ຫຼື ເຊື້ອແບັກທີເຣຍທີ່ເປັນພະຍາດ, ລວມທັງການປະກອບສ່ວນໃຫ້ກັບອາການແພ້ 69,70,71.
ເປີຣອກຊີເດສ ຊັ້ນ III ແມ່ນເອນໄຊມ໌ພືດທີ່ມີຫຼາຍໜ້າທີ່ ເຊິ່ງມີສ່ວນຮ່ວມໃນຂະບວນການເຜົາຜານອາຫານທີ່ຫຼາກຫຼາຍໃນລະຫວ່າງການເຕີບໃຫຍ່ ແລະ ການພັດທະນາຂອງພືດ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການຕອບສະໜອງຕໍ່ຄວາມກົດດັນດ້ານສິ່ງແວດລ້ອມເຊັ່ນ: ຄວາມເຄັມ, ໄພແຫ້ງແລ້ງ, ຄວາມເຂັ້ມຂອງແສງສະຫວ່າງສູງ, ແລະ ການໂຈມຕີຂອງເຊື້ອພະຍາດ72. ເປີຣອກຊີເດສມີສ່ວນຮ່ວມໃນການພົວພັນຂອງພືດຫຼາຍຊະນິດກັບ Anthracis, ລວມທັງ Stylosanthes humilis ແລະ C. gloeosporioides, Lens culinaris ແລະ C. truncatum, Phaseolus vulgaris ແລະ C. lindemuthianum, Cucumis sativus ແລະ C. lagenarium73,74,75,76. ການຕອບສະໜອງແມ່ນໄວຫຼາຍ, ບາງຄັ້ງແມ່ນແຕ່ຢູ່ທີ່ 4 HPI, ກ່ອນທີ່ເຊື້ອເຫັດຈະເຈາະເຂົ້າໄປໃນເນື້ອເຍື່ອພືດ73. ພັນທຸກຳເປີຣອກຊີເດສຍັງຕອບສະໜອງຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ D. toxica NLL. ນອກເໜືອໄປຈາກໜ້າທີ່ປົກກະຕິຂອງພວກມັນໃນການຄວບຄຸມການແຕກອອກຂອງອົກຊີເດສ ຫຼື ກຳຈັດຄວາມກົດດັນອົກຊີເດສ, ເປີຣອກຊີເດສສາມາດແຊກແຊງການເຕີບໂຕຂອງເຊື້ອພະຍາດໂດຍການສ້າງສິ່ງກີດຂວາງທາງກາຍະພາບໂດຍອີງໃສ່ການເສີມສ້າງຝາເຊວໃນລະຫວ່າງການເຮັດໃຫ້ເປັນລິແກນ, ໜ່ວຍຍ່ອຍ ຫຼື ການເຊື່ອມຕໍ່ກັນຂອງສານປະກອບສະເພາະ. ໜ້າທີ່ນີ້ສາມາດອະທິບາຍໄດ້ໃນ silico ວ່າເປັນຂອງ gene TanjilG_03329 ທີ່ເຂົ້າລະຫັດ anion peroxidase ທີ່ສ້າງ lignin ເຊິ່ງໄດ້ຖືກເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນການສຶກສາຂອງພວກເຮົາໃນສາຍພັນທີ່ຕ້ານທານ 83A:476 ທີ່ 6 HPI, ແຕ່ບໍ່ແມ່ນໃນສາຍພັນ ແລະ ຈຸດເວລາອື່ນໆທີ່ບໍ່ຕອບສະໜອງ.
9S-/13S-lipoxygenase ຂອງກົດ linoleic ແມ່ນຂັ້ນຕອນທຳອິດໃນເສັ້ນທາງອົກຊີເດຊັນຂອງການສັງເຄາະໄຂມັນ78. ຜະລິດຕະພັນຂອງເສັ້ນທາງນີ້ມີຫຼາຍໜ້າທີ່ໃນການປ້ອງກັນພືດ, ລວມທັງການເສີມສ້າງຝາຈຸລັງຜ່ານການສ້າງຊັ້ນ callose ແລະ pectin, ແລະການຄວບຄຸມຄວາມກົດດັນອົກຊີເດຊັນຜ່ານການຜະລິດຊະນິດອົກຊີເຈນທີ່ມີປະຕິກິລິຍາ79,80,81,82,83. ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ການສະແດງອອກຂອງກົດ linoleic 9S-/13S-lipoxygenase ໄດ້ມີການປ່ຽນແປງໃນທຸກສາຍພັນ, ແຕ່ໃນປະຊາກອນທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວ 22660, ການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງການຄວບຄຸມໄດ້ເກີດຂຶ້ນໃນຈຸດເວລາທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ໃນຂະນະທີ່ໃນສາຍພັນທີ່ມີ Lanr1 ທີ່ຕ້ານທານ ແລະ allele AnMan, ມັນເນັ້ນໜັກເຖິງຄວາມຫຼາກຫຼາຍຂອງຊັ້ນ oxylipin ໃນປະຕິກິລິຍາປ້ອງກັນ anthrax ລະຫວ່າງ genotypes ເຫຼົ່ານີ້.
ໂມໂນລັອກ 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) ໄດ້ຖືກເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (9 gene) ຫຼືຫຼຸດລົງ (2 gene) ເມື່ອຖືກສັກດ້ວຍ lupine. ຍົກເວັ້ນສອງຂໍ້ຍົກເວັ້ນ, ການຕອບສະໜອງທັງໝົດເຫຼົ່ານີ້ເກີດຂຶ້ນທີ່ 6 hp. ທີ່ 83A:476. ປະຕິກິລິຍາທາງເອນໄຊມ໌ທີ່ໄກ່ເກ່ຍໂດຍໂປຣຕີນ ACO ແມ່ນຂັ້ນຕອນທີ່ຈຳກັດອັດຕາໃນການຜະລິດເອທິລີນ ແລະ ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຖືກຄວບຄຸມສູງ84. ເອທິລີນເປັນຮໍໂມນພືດທີ່ມີບົດບາດຫຼາກຫຼາຍໃນການຄວບຄຸມການພັດທະນາຂອງພືດ ແລະ ການຕອບສະໜອງຕໍ່ສະພາບຄວາມກົດດັນທີ່ບໍ່ມີຊີວິດ ແລະ ຊີວະພາບ. ການກະຕຸ້ນການຖອດລະຫັດ ACO ແລະ ການກະຕຸ້ນເສັ້ນທາງສັນຍານເອທິລີນມີສ່ວນຮ່ວມໃນການເພີ່ມຄວາມຕ້ານທານຂອງເຂົ້າຕໍ່ກັບເຊື້ອເຫັດ hemibiotrophic oryzae oryzae ໂດຍການຄວບຄຸມການຜະລິດຊະນິດອົກຊີເຈນທີ່ມີປະຕິກິລິຍາ ແລະ phytoalexins. ຂະບວນການຕິດເຊື້ອໃບທີ່ຄ້າຍຄືກັນຫຼາຍທີ່ພົບລະຫວ່າງ M. oryzae ແລະ C. lupini88,89, ທຽບກັບພື້ນຖານຂອງການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງຄວາມຄ້າຍຄືກັນຂອງ ACO ໃນສາຍ 83A:476 ທີ່ລາຍງານໃນການສຶກສານີ້, ປ່ຽນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການໃຫ້ຄວາມຕ້ານທານຕໍ່ກັບ NLL anthracnose Ethylene ເປັນຂັ້ນຕອນສູນກາງສັນຍານໃນເສັ້ນທາງໂມເລກຸນ.
ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ການສະກັດກັ້ນຂະໜາດໃຫຍ່ຂອງຫຼາຍ gene ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການສັງເຄາະແສງໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຢູ່ທີ່ 6 hpi ໃນ 83A:476 ແລະຢູ່ທີ່ 48 hpi ໃນ Mandeloop ແລະປະຊາກອນ 22660. ຂອບເຂດ ແລະ ຄວາມຄືບໜ້າຂອງການປ່ຽນແປງເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນສັດສ່ວນກັບລະດັບ. ຄວາມຕ້ານທານຂອງພະຍາດ Anthracnose ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນການທົດລອງນີ້. ເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້, ການສະກັດກັ້ນທີ່ເຂັ້ມແຂງ ແລະ ຕົ້ນໆຂອງ transcripts ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການສັງເຄາະແສງໄດ້ຖືກລາຍງານໃນຫຼາຍຮູບແບບຂອງການພົວພັນລະຫວ່າງພືດກັບເຊື້ອພະຍາດ, ລວມທັງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ເປັນພະຍາດ ແລະ ເຊື້ອເຫັດ. Haste (ຈາກ 2 HPI ໃນການພົວພັນບາງຢ່າງ) ແລະ ການສະກັດກັ້ນທົ່ວໂລກຂອງ gene ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການສັງເຄາະແສງໃນການຕອບສະໜອງຕໍ່ການຕິດເຊື້ອສາມາດກະຕຸ້ນພູມຕ້ານທານຂອງພືດໂດຍອີງໃສ່ການນຳໃຊ້ຊະນິດອົກຊີເຈນທີ່ມີປະຕິກິລິຍາ ແລະ ການພົວພັນຂອງພວກມັນກັບເສັ້ນທາງ salicylic acid ເພື່ອໄກ່ເກ່ຍປະຕິກິລິຍາແພ້ 90,94.
ສະຫຼຸບແລ້ວ, ກົນໄກການຕອບສະໜອງປ້ອງກັນທີ່ສະເໜີມາສຳລັບເຊື້ອສາຍທີ່ຕ້ານທານຫຼາຍທີ່ສຸດ (83A:476) ປະກອບມີການຮັບຮູ້ເຊື້ອພະຍາດຢ່າງໄວວາໂດຍ gene R (ສົມມຸດວ່າ TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) ແລະ ການສົ່ງສັນຍານ salicylic acid ແລະ ethylene ທີ່ເກີດຈາກການແພ້, ຕາມດ້ວຍການສ້າງການກະທຳ SAR ໄລຍະຍາວ. ໄດ້ຮັບການສະໜັບສະໜູນຈາກໂປຣຕີນ DIR-1. ຄວນສັງເກດວ່າໄລຍະເວລາ biotrophic ສຳລັບການຕິດເຊື້ອ C. lupini ແມ່ນສັ້ນຫຼາຍ (ປະມານ 2 ມື້), ຕາມດ້ວຍການເຕີບໂຕຂອງເນື້ອເຍື່ອ 95. ການຫັນປ່ຽນລະຫວ່າງໄລຍະເຫຼົ່ານີ້ອາດຈະກ່ຽວຂ້ອງກັບ necrosis ແລະ ການສະແດງອອກຂອງໂປຣຕີນທີ່ກະຕຸ້ນ ethylene ເຊິ່ງເຮັດໜ້າທີ່ເປັນຕົວກະຕຸ້ນສຳລັບປະຕິກິລິຍາ hypersensitivity ໃນພືດເຈົ້າພາບ. ດັ່ງນັ້ນ, ໄລຍະເວລາສຳລັບການຈັບ C. lupini ທີ່ປະສົບຜົນສຳເລັດໃນໄລຍະ biotrophic ແມ່ນແຄບຫຼາຍ. ການຂຽນໂປຣແກຣມຄືນໃໝ່ຂອງ gene ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ redox ແລະການສັງເຄາະແສງທີ່ສັງເກດເຫັນໃນ 83A:476 ທີ່ 6 hpi ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບຄວາມຄືບໜ້າຂອງ hyphae ຂອງເຊື້ອເຫັດ ແລະ ປະກາດການພັດທະນາຂອງການຕອບສະໜອງປ້ອງກັນທີ່ປະສົບຜົນສຳເລັດໃນໄລຍະ biotrophic. ການຕອບສະໜອງ transcriptomic ຂອງ Mandelup ແລະປະຊາກອນ 22660 ອາດຈະຊັກຊ້າເກີນໄປທີ່ຈະຈັບເຊື້ອເຫັດກ່ອນທີ່ຈະປ່ຽນໄປສູ່ການເຕີບໂຕແບບເນົ່າເປື່ອຍ, ແນວໃດກໍ່ຕາມ, Mandelup ອາດຈະມີປະສິດທິພາບຫຼາຍກ່ວາປະຊາກອນ 22660 ເພາະວ່າການຄວບຄຸມທີ່ຂ້ອນຂ້າງໄວຂອງໂປຣຕີນ PR-10 ສົ່ງເສີມຄວາມຕ້ານທານແນວນອນ.
ETI, ຂັບເຄື່ອນໂດຍ gene R ທີ່ເປັນມາດຕະຖານ, ເບິ່ງຄືວ່າເປັນກົນໄກທົ່ວໄປສໍາລັບການຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose ຂອງຖົ່ວ. ດັ່ງນັ້ນ, ໃນຕົວແບບພືດຕະກຸນຖົ່ວ Medicago truncatula, ການຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose ແມ່ນໄດ້ຮັບຈາກ gene RCT1, ເຊິ່ງເປັນສະມາຊິກຂອງຊັ້ນ gene TIR-NBS-LRR97 ຂອງພືດ R. gene ນີ້ຍັງໃຫ້ຄວາມຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນ alfalfa ເມື່ອຖືກໂອນໄປຫາພືດທີ່ອ່ອນໄຫວ. ໃນຖົ່ວທົ່ວໄປ (P. vulgaris), ມີ gene ຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose ຫຼາຍກວ່າສອງສິບ gene ມາຮອດປະຈຸບັນ. ບາງ gene ເຫຼົ່ານີ້ພົບໃນພາກພື້ນທີ່ບໍ່ມີ gene R ທີ່ເປັນມາດຕະຖານ, ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ມີຫຼາຍ gene ອື່ນໆຕັ້ງຢູ່ແຄມຂອງໂຄໂມໂຊມທີ່ມີກຸ່ມ gene NBS-LRR, ລວມທັງ TIR-NBS-LRRs99. ການສຶກສາ SSR ທົ່ວຈີໂນມຍັງໄດ້ຢືນຢັນການພົວພັນຂອງ gene NBS-LRR ກັບການຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose ໃນຖົ່ວທົ່ວໄປ. gene R ທີ່ເປັນມາດຕະຖານຍັງຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃນພາກພື້ນຈີໂນມທີ່ມີ locus ຕ້ານທານພະຍາດ anthracnose ທີ່ສໍາຄັນໃນ lupine ສີຂາວ 101.
ວຽກງານຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າປະຕິກິລິຍາຕ້ານທານທັນທີ, ເຊິ່ງກະຕຸ້ນໃນໄລຍະຕົ້ນໆຂອງການຕິດເຊື້ອພືດ (ດີກວ່າບໍ່ຄວນເກີນ 12 hpi), ປົກປ້ອງຕົ້ນລູປິນໃບແຄບຈາກພະຍາດອັນທຣັກໂນສທີ່ເກີດຈາກເຊື້ອເຫັດ Collelotrichum lupini ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ. ໂດຍການໃຊ້ລຳດັບຜົນຜະລິດສູງ, ພວກເຮົາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນຮູບແບບການສະແດງອອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງຍີນຕ້ານທານອັນທຣັກໂນສໃນພືດ NLL ທີ່ມີເຊື້ອສາຍຈາກຍີນຕ້ານທານ Lanr1 ແລະ AnMan. ການປ້ອງກັນທີ່ປະສົບຜົນສຳເລັດກ່ຽວຂ້ອງກັບການອອກແບບຍີນຢ່າງລະມັດລະວັງສຳລັບໂປຣຕີນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ redox, ການສັງເຄາະແສງ, ແລະ pathogenesis ພາຍໃນຊົ່ວໂມງຫຼັງຈາກການຕິດຕໍ່ຄັ້ງທຳອິດຂອງພືດກັບເຊື້ອພະຍາດ. ປະຕິກິລິຍາປ້ອງກັນທີ່ຄ້າຍຄືກັນ, ແຕ່ຊັກຊ້າໃນເວລາ, ມີປະສິດທິພາບໜ້ອຍກວ່າຫຼາຍໃນການປົກປ້ອງພືດຈາກພະຍາດຕ່າງໆ. ການຕ້ານທານອັນທຣັກໂນສທີ່ມີເຊື້ອສາຍຈາກຍີນ Lanr1 ຄ້າຍຄືກັບການຕອບສະໜອງຢ່າງໄວວາຂອງຍີນ R (ພູມຕ້ານທານທີ່ຖືກກະຕຸ້ນໂດຍ effector), ໃນຂະນະທີ່ຍີນ AnMan ສ່ວນຫຼາຍມັກຈະໃຫ້ການຕອບສະໜອງຕາມແນວນອນ (ພູມຕ້ານທານທີ່ຖືກກະຕຸ້ນໂດຍຮູບແບບໂມເລກຸນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຈຸລິນຊີ), ໃຫ້ລະດັບຄວາມຍືນຍົງໃນລະດັບປານກາງ.
ສາຍພັນ NLL 215 ສາຍທີ່ໃຊ້ເພື່ອກວດຫາເຄື່ອງໝາຍພະຍາດແອນທຣັກໂນສປະກອບດ້ວຍ 74 ພັນ, 60 ສາຍພັນທີ່ໄດ້ມາຈາກການປະສົມພັນ ຫຼື ການປັບປຸງພັນ, 5 ສາຍພັນກາຍພັນ, ແລະ 76 ພັນທຸສາດທຳມະຊາດ ຫຼື ພັນທຸສາດຕົ້ນສະບັບ. ສາຍພັນດັ່ງກ່າວມາຈາກ 17 ປະເທດ, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນມາຈາກໂປແລນ (58), ສະເປນ (47), ເຢຍລະມັນ (27), ອົດສະຕາລີ (26), ຣັດເຊຍ (19), ເບລາຣຸດ (7), ອີຕາລີ (5) ແລະ ສາຍພັນອື່ນໆຈາກ 10 ປະເທດ. ຊຸດດັ່ງກ່າວຍັງປະກອບມີສາຍພັນທີ່ທົນທານຕໍ່ການອ້າງອີງ: 83A:476, Tanjil, Wonga ທີ່ມີ allele Lanr1, ແລະ Mandelup ທີ່ມີ allele AnMan. ສາຍພັນດັ່ງກ່າວໄດ້ຮັບຈາກຖານຂໍ້ມູນຊັບພະຍາກອນພັນທຸກໍາ Lupine ຂອງເອີຣົບທີ່ຮັກສາໄວ້ໂດຍ Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, ໂປແລນ (ຕາຕະລາງເສີມ S1).
ພືດໄດ້ຖືກປູກພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ຄວບຄຸມ (ໄລຍະເວລາແສງ 16 ຊົ່ວໂມງ, ອຸນຫະພູມ 25°C ໃນຕອນກາງເວັນ ແລະ 18°C ​​​​ໃນຕອນກາງຄືນ). ການວິເຄາະສຳເນົາທາງຊີວະພາບສອງອັນ. DNA ໄດ້ຖືກແຍກອອກຈາກໃບອາຍຸສາມອາທິດໂດຍໃຊ້ DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, ເຢຍລະມັນ) ຕາມໂປໂຕຄອນ. ຄຸນນະພາບ ແລະ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ທີ່ແຍກອອກມາໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍວິທີການ spectrophotometric (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). ເຄື່ອງໝາຍ AnManM1 ທີ່ໝາຍເຖິງ gene ຕ້ານທານ anthracnose AnMan (ມາຈາກ cv. Mandelup) ແລະ ເຄື່ອງໝາຍ Anseq3 ແລະ Anseq4 ທີ່ຢູ່ຂ້າງ gene Lanr1 (ມາຈາກ cv. Tanjil) ໄດ້ຖືກວິເຄາະ 11,26,28. Homozygotes ສຳລັບ allele ຕ້ານທານໄດ້ຖືກໃຫ້ຄະແນນເປັນ "1", ອ່ອນໄຫວ - ເປັນ "0", ແລະ heterozygotes - ເປັນ 0.5.
ອີງຕາມຜົນຂອງການກວດຫາເຄື່ອງໝາຍ AnManM1, AnSeq3 ແລະ AnSeq4 ແລະ ຄວາມພ້ອມຂອງເມັດພັນສຳລັບການທົດລອງຕິດຕາມຄັ້ງສຸດທ້າຍ, ສາຍພັນ NLL 50 ສາຍໄດ້ຖືກຄັດເລືອກສຳລັບການວິເຄາະລັກສະນະຕ້ານທານພະຍາດແອນແທຣັກໂນສ. ການວິເຄາະໄດ້ຖືກປະຕິບັດສອງຄັ້ງໃນເຮືອນແກ້ວທີ່ຄວບຄຸມດ້ວຍຄອມພິວເຕີທີ່ມີໄລຍະເວລາແສງ 14 ຊົ່ວໂມງທີ່ມີລະດັບອຸນຫະພູມ 22°C ໃນຕອນກາງເວັນ ແລະ 19°C ໃນຕອນກາງຄືນ. ເມັດພັນຈະຖືກຂູດ (ຕັດເປືອກເມັດອອກຢູ່ດ້ານກົງກັນຂ້າມຂອງຕົວອ່ອນດ້ວຍໃບມີດແຫຼມ) ກ່ອນການຫວ່ານເພື່ອປ້ອງກັນການພັກຕົວຂອງເມັດເນື່ອງຈາກເປືອກເມັດແຂງເກີນໄປ ແລະ ເພື່ອຮັບປະກັນການແຕກງອກທີ່ສະໝໍ່າສະເໝີ. ຕົ້ນໄມ້ໄດ້ຖືກປູກໃນກະຖາງ (11 × 11 × 21 ຊມ) ດ້ວຍດິນທີ່ປອດເຊື້ອ (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland). ການສັກຢາປ້ອງກັນໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍເຊື້ອ Colletotrichum lupini Col-08, ເຊິ່ງປູກໃນປີ 1999 ຈາກລຳຕົ້ນຂອງຕົ້ນ lupine ໃບແຄບທີ່ປູກຢູ່ໃນທົ່ງນາໃນ Verzhenitsa, ປະເທດໂປແລນ (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E). ກຳນົດພື້ນທີ່. ເຊື້ອສາຍທີ່ຖືກແຍກອອກໄດ້ຖືກเพาะเลี้ยงໃນສື່ກາງ SNA ທີ່ອຸນຫະພູມ 20°C ພາຍໃຕ້ແສງສີດຳເປັນເວລາ 21 ມື້ເພື່ອກະຕຸ້ນການສ້າງສະປໍ. ສີ່ອາທິດຫຼັງຈາກການຫວ່ານແກ່ນ, ເມື່ອຕົ້ນໄມ້ບັນລຸໄລຍະໃບ 4-6 ໃບ, ການສັກຢາປ້ອງກັນໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍການສີດພົ່ນດ້ວຍສານລະລາຍ conidia ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ 0.5 x 106 conidia ຕໍ່ ml. ຫຼັງຈາກການສັກຢາປ້ອງກັນ, ຕົ້ນໄມ້ໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຄວາມມືດເປັນເວລາ 24 ຊົ່ວໂມງທີ່ຄວາມຊຸ່ມຊື່ນປະມານ 98% ແລະອຸນຫະພູມ 25°C ເພື່ອອຳນວຍຄວາມສະດວກໃນການແຕກງອກຂອງ conidia ແລະຂະບວນການຕິດເຊື້ອ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຕົ້ນໄມ້ໄດ້ຖືກປູກພາຍໃຕ້ໄລຍະເວລາແສງ 14 ຊົ່ວໂມງທີ່ອຸນຫະພູມ 22°C ກາງເວັນ/19°C ກາງຄືນ ແລະຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ 70%. ຄະແນນພະຍາດໄດ້ເຮັດ 22 ມື້ຫຼັງຈາກການສັກຢາປ້ອງກັນ ແລະ ມີຄ່າຕັ້ງແຕ່ 0 (ພູມຕ້ານທານ) ຫາ 9 (ມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ) ຂຶ້ນກັບການມີ ຫຼື ບໍ່ມີບາດແຜເນົ່າເປື່ອຍຕາມລຳຕົ້ນ ແລະ ໃບ. ນອກຈາກນັ້ນ, ຫຼັງຈາກການໃຫ້ຄະແນນ, ນ້ຳໜັກຂອງຕົ້ນໄມ້ໄດ້ຖືກວັດແທກ. ຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງເຄື່ອງໝາຍ genotype ແລະ phenotype ຂອງພະຍາດໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ເປັນສະຫະສຳພັນຈຸດສອງລຳດັບ (ການບໍ່ມີເຄື່ອງໝາຍ heterozygous ໃນຊຸດຂອງສາຍສຳລັບການວິເຄາະ phenotype ຄວາມຕ້ານທານ anthracnose).