Misaotra anao nitsidika ny Nature.com. Voafetra ny fanohanana CSS amin'ny dikan-tranonkala ampiasainao. Ho an'ny traikefa tsara indrindra, manoro hevitra anao izahay hampiasa navigateur nohavaozina (na hanafoana ny Compatibility Mode ao amin'ny Internet Explorer). Mandritra izany fotoana izany, mba hahazoana antoka fa mitohy ny fanohanana, dia hampiseho ny tranonkala tsy misy styles sy JavaScript izahay.
Ny Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) dia zavamaniry legume ampiasaina amin'ny famokarana sakafo sy fanatsarana ny tany. Ny fiparitahan'ny NLL manerantany amin'ny maha-vokatra azy dia nahasarika holatra maro, anisan'izany ny lupine anthracnose, izay miteraka ny aretina anthracnose mahatsiravina. Allele roa, Lanr1 sy AnMan, izay manome fanoherana bebe kokoa, no nampiasaina tamin'ny fiompiana NLL, saingy mbola tsy fantatra ny mekanisma molekiola fototra. Ato amin'ity fandalinana ity, ny marika Lanr1 sy AnMan dia nampiasaina handinihana ny santionan'ny NLL Eoropeana. Ny fitsapana ny vaksiny tao anaty tontolo voafehy dia nanamafy ny fahombiazan'ireo mpanome mahatohitra roa ireo. Ny famaritana ny fanehoana ny fototarazo samihafa dia natao tamin'ny taranaka mahatohitra sy mora voan'ny aretina. Ny fanoherana ny anthracnose dia mifandray amin'ny fanehoana tafahoatra ny teny ontolojian'ny fototarazo "GO:0006952 Defense Response", "GO:0055114 Redox Process", ary "GO:0015979 Photosynthesis". Ankoatra izany, ny andiany Lanr1(83A:476) dia naneho fandaharana transcriptome manan-danja haingana taorian'ny fampidirana azy, raha toa kosa ireo andiany hafa dia naneho fahatarana tamin'io valiny io tokony ho 42 ora. Ny valin'ny fiarovana dia mifandray amin'ny fototarazo TIR-NBS, CC-NBS-LRR ary NBS-LRR, proteinina 10 tafiditra amin'ny pathogenesis, proteinina famindrana lipida, endoglucan-1,3-β-glucosidase, proteinina rindrin'ny sela manankarena glycine, ary fototarazo avy amin'ny lalan'ny oksizenina mihetsika. Ny valin'ny voalohany amin'ny 83A:476, anisan'izany ny fanakanana tsara ny fototarazo mifandraika amin'ny photosynthesis, dia nifanindry tamin'ny fiarovana nahomby nandritra ny dingana fitomboan'ny zavamaniry amin'ny biolojian'ny holatra, izay manambara fa ny effector dia miteraka hery fiarovana. Mihena ny valin'ny Mandeloop, toy ny fisintonana mitsivalana amin'ny ankapobeny.
Ny lupine tery ravina (NLL, Lupinus angustifolius L.) dia serealy be proteinina avy any amin'ny faritra andrefan'i Mediterane1,2. Amin'izao fotoana izao dia volena ho sakafo ho an'ny biby sy ny olombelona izy io. Heverina ho zezika maitso ihany koa izy io amin'ny rafitra fifandimbiasan-tany noho ny firafitry ny azota ataon'ny bakteria mifamatotra amin'ny azota sy ny fanatsarana ny firafitry ny tany amin'ny ankapobeny. Ny NLL dia nandalo dingana haingana tamin'ny fiompiana tao anatin'ny taonjato lasa ary mbola eo ambany fanerena avo lenta amin'ny fiompiana3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. Noho ny fambolena NLL miely patrana, ny fifandimbiasan'ny holatra mampidi-doza dia namorona sehatra fambolena vaovao ary niteraka aretina vaovao manimba ny voly. Ny tena niavaka indrindra ho an'ireo mpamboly sy mpiompy lupine dia ny fisehoan'ny anthracnose, vokatry ny holatra mampidi-doza, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ny tena niavaka indrindra ho an'ireo mpamboly sy mpiompy lupine dia ny fisehoan'ny anthracnose, vokatry ny holatra mampidi-doza, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного памогринкого памогинком (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ny tena niavaka tamin'ireo mpamboly sy mpiompy lupine dia ny fipoahan'ny anthracnose vokatry ny holatra mampidi-doza Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真由病原真菌菌原真菌Hagedorn13 引起的。对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真菌lu。 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, вызываемогего прикмто lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ny tena manaitra ny mpamboly sy mpiompy lupine dia ny fipoiran'ny anthracnose vokatry ny holatra mampidi-doza Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.Avy any Brezila sy Etazonia ny tatitra voalohany momba ity aretina ity, ary niseho tamin'ny taona 1912 sy 1929 ireo soritr'aretina mahazatra. Na izany aza, rehefa afaka 30 taona teo ho eo, dia noheverina ho Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz ilay aretina. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph an'ny Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld amin'ny Morfolojia Voakendry. sy H. Schrenk,. & H. Schrenk, .ary H. Schrenk. & H.施伦克，。 & H.施伦克，。ary H. Schlenk, .Ny fandinihana mialoha ny aretina natao tamin'ny tapaky ny taonjato faha-20 dia naneho fanoherana ny NLL sy ny lupine mavo (L. luteus L.), saingy ny lupine fotsy rehetra (L. albus L.) nosedraina dia mora voan'ny aretina15,16. Ny fanadihadiana dia naneho fa ny fivoaran'ny anthracnose dia mifandray amin'ny fitomboan'ny rotsakorana (hamandoan'ny rivotra) sy ny mari-pana (eo anelanelan'ny 12-28°C), izay mitarika ho amin'ny fanitsakitsahana ny fanoherana amin'ny mari-pana ambony kokoa17, 18. Raha ny marina, ny fotoana ilaina mba hitsimohan'ny conidia sy hanombohan'ny aretina dia inefatra heny fohy kokoa amin'ny 24°C (4 ora) noho ny amin'ny 12°C (16 ora) amin'ny toe-javatra misy hamandoana avo19. Noho izany, ny fiakaran'ny mari-pana maneran-tany mitohy dia nitarika ny fiparitahan'ny anthracnose. Na izany aza, hita tany Frantsa (1982) sy Okraina (1983) ho toy ny fambara fandrahonana mananontanona ny aretina, saingy toa tsy noraharahain'ny indostrian'ny lupine tamin'izany fotoana izany20,21. Taona vitsivitsy taty aoriana, ity aretina mahatsiravina ity dia niely nanerana izao tontolo izao ary nisy fiantraikany tamin'ireo firenena mpamokatra lupine lehibe toa an'i Aostralia, Polonina ary Alemaina22,23,24. Taorian'ny fihanaky ny anthracnose tamin'ny tapaky ny taona 1990, ny fitiliana lalina dia niafara tamin'ny famantarana ireo mpamatsy mahatohitra maromaro tao amin'ny santionan'ny NLL19. Ny fanoherana ny NLL amin'ny anthracnose dia fehezin'ny allele roa miavaka hita ao amin'ny loharanon'ny germplasm samihafa: Lanr1 ao amin'ny karazana Tanjil sy Wonga ary AnMan ao amin'ny karazana. Mandalay 25, 26. Ireo allele ireo dia mameno ireo marika molekiola izay manohana ny fisafidianana germplasm mahatohitra amin'ny fandaharan'asa fiompiana25,26,27,28,29,30. Ny taranaka mahatohitra 83A:476 mitondra ny allele Lanr1 dia nampiarahina tamin'ny taranaka mora voan'ny aretina P27255 mba hahazoana vondron'olona RIL manasaraka ny fanoherana ny anthracnose, izay nahafahana nametraka ny toerana misy ny Lanr1 amin'ny chromosome NLL-1131, 32, 33. Ny fampifanarahana ny mari-pamantarana sarintany rohy avy amin'ny loci fanoherana amin'ny anthracnose miaraka amin'ny rafitra genomic, ny NLL dia naneho ny toerana misy ny allele telo rehetra amin'ny chromosome iray ihany (NLL-11), saingy amin'ny toerana samihafa29,34,35. Na izany aza, noho ny isan'ny RIL vitsy sy ny elanelana ara-pandovan-toetra lehibe eo amin'ny mari-pamantarana sy ny allele mifanaraka amin'izany, dia tsy misy fehin-kevitra azo antoka azo atao momba ny fototarazo fototra. Etsy ankilany, sarotra ny fampiasana ny génétique mivadika amin'ny lupins noho ny fahafahany mamerina amin'ny laoniny ambany dia ambany, izay mahatonga ny fanodinkodinana ara-pandovan-toetra ho sarotra37.
Ny fivoaran'ny germplasm voaompy mitondra ny allele irina ao amin'ny toetry ny homozygous, toy ny 83A:476 (Lanr1) sy Mandelup (AnMan), dia nanokatra ny varavarana ho amin'ny fandalinana ny fanoherana ny anthracnose eo anatrehan'ny fisian'ny fitambaran'ny alleles mifanohitra amin'ny mponina any an'ala. Ny mety ho fiasan'ny mekanisma molekiola. Ampitahao ny valin'ny fiarovana ateraky ny genotypes manokana. Ity fandalinana ity dia nanombana ny valin'ny transcriptome voalohany an'ny NLL amin'ny vaksiny C. lupini. Voalohany, ny tontonana germplasm NLL Eoropeana misy tsipika 215 dia nojerena tamin'ny alàlan'ny marika molekiola izay manamarika ny alleles Lanr1 sy AnMan. Avy eo dia natao tamin'ny tsipika NLL 50 ny phenotyping anthracnose, izay nofantenana teo aloha ho an'ny marika molekiola, teo ambanin'ny fepetra voafehy. Mifototra amin'ireo fanandramana ireo, tsipika efatra samy hafa amin'ny fanoherana ny anthracnose sy ny firafitry ny allelic Lanr1/AnMan no nofantenana ho an'ny profiling ny fanehoan-kevitry ny fototarazo fiarovana samihafa amin'ny alàlan'ny fomba fiasa mifameno roa: ny filaharan'ny RNA avo lenta sy ny fandrefesana PCR amin'ny fotoana tena izy.
Ny fandinihana andiana plasma germplasm NLL (N = 215) miaraka amin'ny marika Lanr1 (Anseq3 sy Anseq4) sy AnMan (Anseq4) ary AnMan (AnManM1) dia naneho fa andalana iray ihany (95726, akaikin'i Salamanca-b) no manamafy ny allele "fanoherana" ho an'ny marika rehetra, raha toa kosa ny "Fisian'ny allele 'mora tohina'" dia nahita ny ampahany amin'ny marika rehetra tamin'ny andalana 158 (~73.5%). Ny andalana telo ambin'ny folo dia namorona allele "mahatohitra" roa an'ny marika Lanr1, ary ny andalana 8 dia namorona allele "mahatohitra" an'ny marika Lanr1. Ny allele "fanoherana" an'ny marika AnMan (Tabilao Fanampiny S1). Ny andalana roa dia heterozygous ho an'ny marika Anseq3 ary ny iray heterozygous ho an'ny marika AnManM1. 42 ny karazana (19.5%) nitondra dingana mifanohitra amin'ny allele Anseq3 sy Anseq4, izay manondro fa matetika no misy ny fifangaroan'ny zavamaniry eo amin'ireo loci roa ireo. Ny phenotype anthracnose amin'ny toe-javatra voafehy (Tabilao Fanampiny S2) dia naneho fiovaovan'ny fanoheran'ny genotypes nosedraina, izay hita taratra amin'ny hamafin'ny anthracnose. Ny fahasamihafan'ny isa antonony dia manomboka amin'ny 1.8 (mahatanty antonony) ka hatramin'ny 6.9 (mora tohina) ary ny fahasamihafan'ny lanjan'ny zavamaniry dia manomboka amin'ny 0.62 (mora tohina) ka hatramin'ny 4.45 g (mahatanty). Nisy fifandraisana manan-danja teo amin'ny soatoavina hita tamin'ny famerenana roa tamin'ny andrana (0.51 ho an'ny isa momba ny hamafin'ny aretina, P = 0.00017 ary 0.61 ho an'ny lanjan'ny zavamaniry, P < 0.0001) ary koa teo amin'ireo masontsivana roa ireo (− 0.59 sy − 0.77, P < 0.0001). Nisy fifandraisana manan-danja teo amin'ny soatoavina hita tamin'ny famerenana roa tamin'ny andrana (0.51 ho an'ny isa hamafin'ny aretina, P = 0.00017 ary 0.61 ho an'ny lanjan'ny zavamaniry, P < 0.0001) ary koa teo amin'ireo masontsivana roa ireo (− 0.59 sy − 0.77, P < 0.0001). Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 для тля = 0,00017 и 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р001 < 0,0). Hita fa nisy fifandraisana manan-danja teo amin'ireo soatoavina hita tamin'ny famerimberenana indroa tamin'ny andrana (0.51 ho an'ny isa momba ny hamafin'ny aretina, P = 0.00017 ary 0.61 ho an'ny lanjan'ny zavamaniry, P < 0.0001), ary koa teo amin'ireo masontsivana roa ireo (- 0.59 sy -0.77, P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为 =0. 0.00017，植物重量为0.61，P < 0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77，P <0.0001).在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 了 评 度 了0,51 ， p = 0,00017 ， 植物 为 为 0,61 ， p <0,0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（（ 和 9–5 . 0.59 和– 0.59 和- 0.77, P < 0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тяжести няжести 1,0,0,0,00 и масса растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, P <0,0001. Nisy fifandraisana manan-danja teo amin'ireo soatoavina hita indroa (isa hamafin'ny aretina 0.51, P = 0.00017 ary lanjan'ny zavamaniry 0.61, P < 0.0001) ary teo amin'ireo masontsivana roa ireo (-0.59 sy -0 .0001) dia 0.77, P<0.0001. ).Ny soritr'aretina mahazatra hita amin'ny zavamaniry mora voan'ny aretina dia ahitana ny fiolahana sy ny fihodinkodinana amin'ny tahony izay mitovy amin'ny rafitra "tsipìkan'ny mpiandry ondry", arahin'ny fery boribory lavalava misy sporozoita volomboasary/mavokely (Sary Fanampiny 1). Ny taranaka Aostraliana mitondra ny fototarazo Lanr1 (83A:476 sy Tanjil) sy AnMan (Mandelup) dia mahatohitra antonony, 0.0331 sy 0.0036). Ny taranaka sasany izay mitondra ny alleles Lanr1 sy/na AnMan "mahatohitra" ihany koa dia mampiseho soritr'aretin'ny aretina.
Mahaliana fa ny andalana NLL vitsivitsy tsy misy allele marika "mahatanty" dia naneho fanoherana avo lenta amin'ny anthracnose (mitovy na ambony noho ny an'ny genotypes Lanr1 na AnMan), toy ny Boregine (P value < 0.0001 ho an'ny masontsivana roa), Bojar (P value < 0.0001 ho an'ny isa ary 0.001 ho an'ny lanjan'ny zavamaniry) ary Population B-549/79b (P value < 0.0001 ho an'ny isa ary tsy manan-danja ho an'ny lanjany). Mahaliana fa ny andalana NLL vitsivitsy tsy misy allele marika "mahatanty" dia naneho fanoherana avo lenta amin'ny anthracnose (mitovy na ambony noho ny an'ny genotypes Lanr1 na AnMan), toy ny Boregine (P value < 0.0001 ho an'ny masontsivana roa), Bojar (P value < 0.0001 ho an'ny isa ary 0.001 ho an'ny lanjan'ny zavamaniry) ary Population B-549/79b (P value < 0.0001 ho an'ny isa ary tsy manan-danja ho an'ny lanjany). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокний укостного антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine (значение P <0,0001 для пробраба) (значение P < 0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) sy популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). Mahaliana fa andiana NLL maromaro tsy misy allele marika 'mahatanty' no naneho fanoherana avo lenta amin'ny anthracnose (azo ampitahaina na ambony noho ny an'ny genotypes Lanr1 na AnMan), toy ny Boregine (sanda P < 0.0001 ho an'ny masontsivana roa), Bojar (sanda P < 0.0001 ho an'ny fanombanana ary 0.001 ho an'ny lanjan'ny zavamaniry) ary ny mponina B-549/79b (sanda P < 0.0001 ho an'ny fanombanana ary tsy manan-danja ho an'ny lanja).Ny基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重量不显。 Mahaliana fa ny rafitra NLL sasany izay tsy manana marika "antigenika" dia mampiseho fanoherana mitsivalana avo lenta (mitovy amin'ny fototarazo Lanr1 na AnMan na ambony kokoa), toy ny Boregine (samy manana masontsivana P < 0.0001), Bojar (sanda P < 0.0001, lanjan'ny zavamaniry 0.001) ary ny karazana B-549/79b (sanda P < 0.0001, lanja tsy manan-danja). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», показали высокие уостикич антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001, Bojar <0,0001), Boregine масса растения 0,001) sy популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). Mahaliana fa ny sasany amin'ireo karazana NLL tsy misy alleles marika 'fanoherana' dia naneho fanoherana avo lenta amin'ny anthracnose (azo ampitahaina na ambony noho ny genotypes Lanr1 na AnMan), toy ny Boregine (sanda P ho an'ny masontsivana roa <0.0001), Bojar (sanda P < 0.0001, lanjan'ny zavamaniry 0.001) ary ny mponina B-549/79b (sanda P < 0.0001, lanja tsy manan-danja).Ity tranga ity dia manondro ny mety hisian'ny loharanon-kery vaovao avy amin'ny fototarazo, izay manazava ny tsy fisian'ny fifandraisana hita eo amin'ny karazana mari-pamantarana sy ny karazana aretina (sanda P manomboka amin'ny ~0.42 ka hatramin'ny ~0.98). Noho izany, ny fitsapana Kolmogorov-Smirnov dia naneho fa ny angon-drakitra momba ny fanoherana ny anthracnose dia mizara ara-dalàna eo ho eo ho an'ny isa (sanda P 0.25 sy 0.11) sy ny haben'ny zavamaniry (sanda P 0.47 sy 0.55), izay manondro fa mihevitra aho fa misy alleles maro kokoa noho ny Lanr1 sy AnMan tafiditra amin'izany.
Mifototra amin'ny valin'ny fitiliana ny fanoherana ny anthracnose, dia karazana 4 no nofantenana ho an'ny fanadihadiana transcriptome: 83A:476, Boregine, Mandelup, ary Population 22660. Ireo karazana ireo dia nosedraina indray ho an'ny fanoherana ny anthrax tamin'ny andrana vaksiny tamin'ny alàlan'ny filaharan'ny RNA, raha toa ka mitovy amin'ny tamin'ny fitsapana teo aloha. Ireto avy ny sandan'ny isa: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) ary mponina 22660 (6.11 ± 1.29).
Ny protokol Illumina NovaSeq 6000 dia nahatratra salan'isa 40.5 Mread pairs isaky ny santionany (29.7 hatramin'ny 54.4 Mreads) (Tabilao Fanampiny S3). Ny isa fandrindrana ao amin'ny filaharan'ny referansa dia eo anelanelan'ny 75.5% sy 88.6%. Ny salan'isa fifandraisana eo amin'ny angon-drakitra momba ny isan'ny famakiana eo amin'ny fiovaovan'ny andrana eo amin'ny famerenana biolojika dia eo anelanelan'ny 0.812 sy 0.997 (salan'isa 0.959). Tamin'ireo fototarazo 35.170 nodinihina, dia 2917 no tsy naneho fanehoana, ary ireo fototarazo 4785 hafa dia tsy naneho fanehoana firy (salan'isa fototra < 5). Tamin'ireo fototarazo 35.170 nodinihina, dia 2917 no tsy naneho fanehoana, ary ireo fototarazo 4785 hafa dia tsy naneho fanehoana firy (salan'isa fototra < 5). Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспресиронвались темирон (базовое среднее <5). Tamin'ireo fototarazo 35 170 nodinihina, dia tsy naneho fanehoana ny fototarazo 2917, ary ireo fototarazo 4785 sisa dia tsy naneho fanehoana firy (salan'isa fototra <5).35.170 5）.35.170 Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительнсубю среднее значение <5). Tamin'ireo fototarazo 35.170 nodinihina, dia tsy nisy naneho ny tenany ny 2917 ary ireo fototarazo 4785 sisa dia tsy dia naneho firy ny tenany (salan'isa fototra <5).Noho izany, ny isan'ny fototarazo noheverina fa naseho (salan'isa fototra ≥ 5) nandritra ny andrana dia 27.468 (78.1%) (Tabilao Fanampiny S4).
Hatramin'ny fotoana voalohany, ny taranaka NLL rehetra dia namaly ny fampidirana C. lupini (karazana Col-08) tamin'ny alàlan'ny fandaharana indray ny transcriptome (Tabilao 1), na izany aza, dia nisy fahasamihafana lehibe hita teo amin'ireo taranaka. Noho izany, ny taranaka fanoherana 83A:476 (mitondra ny fototarazo Lanr1) dia naneho fandaharana indray ny transcriptome tamin'ny fotoana voalohany (6 hpi) miaraka amin'ny fitomboana 31-69 heny amin'ny isan'ny fototarazo miakatra sy midina mitokana raha oharina amin'ny fotoana hafa tamin'io fotoana io. Ankoatra izany, ity tampon'isa ity dia fohy ny fotoana, satria ny fanehoana ny fototarazo vitsivitsy ihany no niova be tamin'ny fotoana faharoa (12 hpi). Mahaliana fa ny Boregine, izay naneho fanoherana avo lenta ihany koa tamin'ny fitsapana grefy, dia tsy nandalo fandaharana indray ny transcription nandritra ny fanandramana. Na izany aza, ny isan'ny fototarazo maneho fahasamihafana (DEG) dia mitovy ho an'ny Boregine sy 83A:476 amin'ny 12 HPI. Samy naneho ny tampon'isa DEG tamin'ny fotoana farany (48 l/s) i Mandelup sy ny mponina 22660, izay manondro fahatarana kely teo amin'ny valin-kafatra fiarovana.
Satria nandalo fandaharana transcriptome goavana ny 83A:476 ho setrin'ny C. lupini tamin'ny 6 HPI raha oharina amin'ny taranaka hafa rehetra, ~91% amin'ireo DEG hita tamin'io fotoana io dia manokana ho an'ny taranaka (Sary 1). Na izany aza, nisy fifanindriana teo amin'ny valinteny voalohany teo amin'ireo taranaka nodinihina, satria ny 68.5%, 50.9%, ary 52.6% DEG tao Boregine, Mandelup, ary ny mponina 22660, tsirairay avy, dia nifanindry tamin'ireo hita tao amin'ny 83A:476 tamin'ny fotoana sasany. Na izany aza, ireo DEG ireo dia ampahany kely fotsiny (0.97–1.70%) amin'ny DEG rehetra hita amin'izao fotoana izao amin'ny fampiasana 83A:476. Ankoatra izany, DEG 11 avy amin'ny taranaka rehetra no mifanaraka tsara tamin'io fotoana io (Tabilao Fanampiny S4-S6), anisan'izany ireo singa mahazatra amin'ny fiarovan-tenan'ny zavamaniry: proteinina famindrana lipida (TanjilG_32225), anzima endoglucan-1,3-β-glucoside (TanjilG_23384), proteinina roa azo avy amin'ny stress toy ny SAM22 (TanjilG_31528 sy TanjilG_31531), proteinina latex fototra (TanjilG_32352), ary proteinina roa manankarena glycine amin'ny rindrin'ny sela (TanjilG_19701 sy TanjilG_19702). Nisy ihany koa ny fifanindriana avo lenta teo amin'ny valin'ny transcriptome teo amin'ny 83A:476 sy Boregine tamin'ny 24 HPI (16-38% DEG amin'ny fitambarany) ary teo amin'i Mandelup sy ny Population 22660 tamin'ny 48 HPI (14-20% DEG amin'ny fitambarany).
Kisarisary Venn mampiseho ny isan'ny fototarazo maneho fahasamihafana (DEG) ao amin'ny taranaka lupine tery-leaved (NLL) notsindronina tamin'ny Colletotrichum lupini (karazana Col-08 azo avy amin'ny saha lupine any Wierzhenice, Polonina, 1999). Ny taranaka NLL nodinihina dia: 83A:476 (mahatanty, mitondra ny allele Lanr1), Boregine (mahatanty, tsy fantatra ny fototarazony), Mandelup (mahatanty antonony, mitondra ny allele AnMan) ary mponina 22660 (mora voan'ny aretina). Ny fanafohezana hpi dia midika hoe ora maro aorian'ny vaksiny. Nesorina ny sanda aotra mba hanatsorana ny grafika.
Nodinihina ny fisian'ny sehatra fototarazo R mahazatra (Tabilao Fanampiny S7) ny andiana fototarazo nihoatra ny fanehoana azy tamin'ny 6 hpi. Ity fandalinana ity dia naneho ny fampidirana transcriptome an'ireo fototarazo mahatohitra aretina mahazatra miaraka amin'ny sehatra NBS-LRR amin'ny 83A:476 ihany. Ity andiany ity dia nahitana fototarazo TIR-NBS-LRR iray (tanjilg_05042), fototarazo CC-NBS-LRR dimy (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, ary tanjilg_16162), ary efatra NBS-LR, Tanjilg_16162), ary efatra NBS-LRRE (tanjilg_16162) ary koa efatra NBS-Lrr (tanjilg_16162) sy efatra NBS-LRR (TANJILG_16162). Ireo fototarazo rehetra ireo dia manana sehatra mahazatra voalamina amin'ny filaharana voatahiry. Ankoatra ireo fototarazo NBS-LRR, dia nisy kinase RLL maromaro niasa tamin'ny 6 hpi, dia ny iray tao amin'ny Boregine (TanjilG_19877), roa tao amin'ny Mandelup (TanjilG_07141 sy TanjilG_19877) ary tao amin'ny mponina 22660 (TanjilG_09014 sy TanjilG_10361) ary roa tao amin'ny 83A 27:476.
Ireo fototarazo izay niova be ny fanehoany ho setrin'ny fampidirana C. lupini (karazana Col-08) dia nohadihadiana momba ny fanatsarana ny Gene Ontology (GO) (Tabilao Fanampiny S8). Ny teny ampiasaina matetika indrindra amin'ny fizotran'ny biôlôjika dia ny hoe "GO:0006952 defense response" izay niseho tamin'ny fitambarana 6 amin'ny 16 (fotoana × tsipika) miaraka amin'ny dikany lehibe (P value < 0.001) (Sary 2). Ny teny ampiasaina matetika indrindra amin'ny fizotran'ny biôlôjika dia ny hoe "GO:0006952 defense response" izay niseho tamin'ny fitambarana 6 amin'ny 16 (fotoana × tsipika) miaraka amin'ny dikany lehibe (P value < 0.001) (Sary 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответный» 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ny teny ampiasaina matetika indrindra amin'ny fizotran'ny biôlôjika dia ny 'GO:0006952 defense response', izay niseho tamin'ny fitambarana 6 amin'ny 16 (fotoana × tetiarana) miaraka amin'ny dikany lehibe (P value < 0.001) (Sary 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16 个（时间（时间上一一一一一一么个中，具有高显着性（P ‼< 0.001）（图2）. Ny teny maneho indrindra ny fizotran'ny biôlôjika dia ny "GO:0006952 defense response", izay miseho amin'ny 6 amin'ireo fitambarana 16 (时间×线), miaraka amin'ny dikany lehibe (P value < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 Defense Response», которылый 6 поского процесса был комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Ny teny ampiasaina matetika indrindra momba ny dingana biolojika dia ny 'GO:0006952 Defense Response', izay niseho tamin'ny fitambarana 6 amin'ny 16 (fotoana × tsipika) miaraka amin'ny dikany lehibe (sanda P < 0.001) (Sary 2).Io teny io dia nampiasaina be loatra tamin'ny fotoana roa tao amin'ny 83A: 476 sy Boregine (6 sy 24 hpi) ary tamin'ny fotoana iray tao amin'ny Mandelup sy Population 22660 (12 sy 6 hpi, tsirairay avy). Vokatra andrasana izany, izay manasongadina ny fihetsiky ny holatra amin'ireo karazana mahatohitra. Ankoatra izany, ny 83A:476 dia namaly ny C. lupini tamin'ny alàlan'ny fanentanana haingana ny fototarazo mifandraika amin'ny fipoahan'ny oksidativa asehon'ny teny hoe "GO:0055114 redox process", izay manondro valinteny fiarovana manokana, raha toa kosa ny Boregine dia naneho valinteny fiarovana manokana, mifandraika amin'ny teny hoe 'GO'. :0006950 Valintenin'ny adin-tsaina”. Ny mponina 22660 dia nampihetsika ny valintenin'ny fanoherana mitsivalana izay nahitana metabolites faharoa, izay nanasongadina ny habetsahan'ny teny hoe "GO:0016104 Fizotry ny biosynthesis triterpene" sy "GO:0006722 Fizotry ny metabolisman'ny triterpene" (samy an'ny andiana fototarazo mitovy ny teny roa), raha jerena ny valin'ny fanadihadiana momba ny fanatsarana ny teny GO, ny fahamarinan'ny fihetsiky ny Mandelup dia teo anelanelan'ny Boregine sy ny mponina 22660. Ankoatra izany, ny fihetsika mialoha 83A:476 (6 hpi) sy ny fihetsika tara Mandelup sy ny mponina 22660 dia ahitana ny teny hoe GO:0015979 'photosynthesis' sy ny dingana biolojika hafa mifandraika amin'izany.
Ireo teny ontolojian'ny fototarazo bioprocess nofantenana tao amin'ny fanamarihana ireo fototarazo maneho fahasamihafana nandritra ny valinteny transcriptome an'ny lupine ravina tery (NLL) notsindronina lupine anthrax (karazana Col-08 azo avy amin'ny saha lupine tao Wierzhenice, Polonina, tamin'ny 1999) dia nohalehibeazina be. Ireo tsipika NLL nodinihina dia: 83A:476 (mahatanty, mitondra ny allele Lanr1 homozygous), Boregine (mahatanty, tsy fantatra ny fototarazony), Mandelup (mahatanty antonony, mitondra ny allele AnMan homozygous) ary mponina 22660 (mora tohina).
Satria ny tanjon'ity fandalinana ity dia ny hamantatra ireo fototarazo izay mandray anjara amin'ny fanoherana ny anthracnose, ireo fototarazo nomena ny teny hoe GO "GO: 0006952 Valiny fiarovana" sy "GO: 0055114 Fizotran'ny Redox" dia nohadihadiana tamin'ny alàlan'ny fanapahana satria ny salan'isa fototra ≥ 30 miaraka amin'ny tsipika iray farafahakeliny. × teboka amin'ny fotoana mampifangaro ny sanda manan-danja ara-statistika amin'ny log2 (fiovan'ny fihodinana). Ny isan'ny fototarazo mahafeno ireo fepetra ireo dia 65 ho an'ny GO:0006952 ary 524 ho an'ny GO:0055114.
Ny 83A:476 dia naneho tampon'ny DEG roa nasiana marika GO:0006952, ny voalohany tamin'ny gène 6 isaky ny santimetatra (gène 64, fitsipika miakatra sy midina) ary ny faharoa tamin'ny gène 24 isaky ny santimetatra (gène 15, fitsipika miakatra ihany). Nasehon'i Boregine ihany koa fa nahatratra ny fara tampony tamin'ny fotoana iray ihany ny GO:0006952, saingy niaraka tamin'ny DEG kely kokoa (11 sy 8) sy ny fampahavitrihana manokana. Nasehon'i Mandeloop ny tampon'ny GO:0006952 roa tamin'ny HPI 12 sy 48, samy mitondra gène 12 (ny voalohany miaraka amin'ny gène mampandeha, ary ny faharoa miaraka amin'ny gène manakana fotsiny), raha toa kosa ny mponina 22660 amin'ny HPI 6 (gène 13) dia nanana ny tampon'ny fitomboana bebe kokoa. Tsara homarihina fa 96.4% amin'ny DEG GO:0006952 amin'ireo tampon'isa ireo dia nanana karazana valinteny mitovy (miakatra na midina), izay manondro fifandimbiasana lehibe amin'ny valinteny fiarovana na dia eo aza ny fahasamihafan'ny isan'ny gène tafiditra. Ny vondrona lehibe indrindra amin'ny filaharana mifandraika amin'ny teny hoe GO:0006952 dia mandika ny Starvation Stress-Associated Message Protein 22 (SAM22-like), izay an'ny clade proteinina pathogenesis-associated protein (PR-10) kilasy 10 sy ny proteinina fototra latex. mitovy (MLP-like) proteinina (Sary 3). Samy hafa ny vondrona roa amin'ny toetran'ny fanehoana sy ny fitarihan'ny valiny. Ny fototarazo mandika ny proteinina mitovy amin'ny SAM22 dia naneho induction tsy tapaka sy manan-danja tamin'ny fotoana voalohany (6 na 12 hpi) ary tamin'ny ankapobeny dia tsy nandray andraikitra tamin'ny faran'ny fanandramana (48 hpi), raha toa kosa ny proteinina mitovy amin'ny MLP dia naneho fandrindrana tamin'ny 6 hpi. hpi. 83A:476 sy Mandelup tamin'ny 48 hp/in, saika ny teboka data hafa rehetra dia tsy nandray andraikitra. Ankoatra izany, ny fahasamihafan'ny mombamomba ny fanehoana ny fototarazo proteinina mitovy amin'ny SAM22 dia nanaraka ny fiovaovan'ny fanoherana ny anthracnose, satria ny taranaka mahatohitra kokoa dia manana teboka fotoana bebe kokoa izay mampirisika ireo fototarazo ireo noho ny fototarazo mora tohina kokoa. Ny gène PR-10 iray hafa mitovy amin'ny LlR18A/B dia naneho lamina fanehoana mitovy amin'ny gène proteinina mitovy amin'ny SAM22.
Ireo singa fototra amin'ny dingana biolojika antsoina hoe "GO:0006952 Defense Response" sy ny lamina fanehoana ireo fototarazo kandidà amin'ny allele Lanr1 sy AnMan dia voafaritra. Ny mizana Log2 dia maneho ny sandan'ny log2 (fiovan'ny vala) eo amin'ny zavamaniry notsindronina (Colletotrichum lupini, karazana Col-08, azo avy amin'ny saha lupine, Wizhenica, Polonina, 1999) sy ny zavamaniry fanaraha-maso (notsindronina sandoka) amin'ny fotoana iray ihany. Ireto karazana lupine tery leaf manaraka ireto dia nodinihina: 83A:476 (mahatanty, mitondra ny allele Lanr1 homozygous), Boregine (mahatanty, tsy fantatra ny fototarazo), Mandelup (mahatanty antonony, mitondra ny allele AnMan homozygous), ary Population 22660 (mora tohina).
Ankoatra izany, nojerena ny mombamomba ny fanehoana ny fototarazo kandidà RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) sy AnMan (TanjilG_12861) (Sary 3). Ny fototarazo TanjilG_05042 dia naneho valiny manan-danja (fampahavitrihana) tamin'ny 83A:476 tamin'ny fotoana voalohany (6 hpi), raha toa kosa ka manan-danja tao amin'ny Mandeloop ny TanjilG_12861 tamin'ny fotoana roa ihany: 6 hpi (fihenan'ny fandrindrana) sy 24 hpi (6 hpi). Miaraka amin'ny.). azo amboarina) ).
Ireo fototarazo be loatra indrindra ao amin'ny teny hoe GO:0055114 "dingana redox" dia ireo fototarazo izay mandika ny proteinina cytochrome P450 sy ny peroxidase (Sary 4). Ho an'ny santionany nalaina avy amin'ny 83A:476 tamin'ny 6 HPI, ny sanda log2 ambony indrindra na ambany indrindra (fiovan'ny vala) (ho an'ny 86.6% amin'ireo fototarazo) dia hita matetika teo amin'ireo zavamaniry notsindronina sy ireo zavamaniry fanaraha-maso, izay manasongadina ny fihetsika avo lenta nataon'ity fototarazo ity tamin'ny firaisana ara-nofo. Ny 83A:476 dia naneho ny GO: 0055114 DEG manan-danja indrindra tamin'ny 6 hpi (fototarazo 503), raha ny ambin'ireo andalana kosa tamin'ny 48 hpi (Boregine, fototarazo 31; Mandelup, fototarazo 85; ary Population 22660, fototarazo 78)). Tamin'ny ankamaroan'ny fototarazo ao amin'ny fianakaviana GO:0055114, dia hita ny karazana fihetsika roa natao tamin'ny vaksiny (fampahavitrihana sy fanakanana). Mahaliana fa hatramin'ny 97.6% amin'ireo DEG no fantatra amin'ny teny hoe GO: 0055114 ao amin'ny Mandelupe amin'ny 48 hp. Ireo fandinihana ireo dia manondro fa, na dia kely kokoa aza ny ambaratonga (izany hoe, ny isan'ny fototarazo redox niovaova, 85 raha oharina amin'ny 503), ny lamina amin'ny valinteny transcriptome tara amin'ny mandeloup amin'ny anthracnose dia mitovy amin'ny valinteny voalohany amin'ny 83A:476. Ao amin'ny Boregine sy ny Population 22660, ity fihaonana ity dia ambany kokoa amin'ny 51.6% sy 75.6% tsirairay avy.
Naseho ireo lamina fanehoana ireo singa fototra amin'ny teny hoe "GO:0055114 Redox process". Ny mizana Log2 dia maneho ny sandan'ny log2 (fiovan'ny fihodinana) eo amin'ireo zavamaniry notsindronina (Colletotrichum lupini, karazana Col-08, azo avy amin'ny saha lupine, Wizhenica, Polonina, 1999) sy ireo zavamaniry fanaraha-maso (notsindronina sandoka) amin'ny fotoana iray ihany. Ireto karazana lupine tery leaf manaraka ireto no nodinihina: 83A:476 (mahatanty, mitondra ny allele Lanr1 homozygous), Boregine (mahatanty, tsy fantatra ny fototarazony), Mandelup (mahatanty antonony, mitondra ny allele AnMan homozygous), ary Mponina 22660 (mora tohina).
83A:476 Ny valinteny transcriptomic tamin'ny vaksiny C. lupini (karazana Col-08) dia nahitana ihany koa ny fampanginana mirindra ny gène izay nomena ny teny hoe GO:0015979 "photosynthesis" sy ny dingana biolojika hafa mifandraika amin'izany (SARY 5). Ity andiany DEG GO:0015979 ity dia nahitana gène 105 izay voafehy be tamin'ny 6 hpi tamin'ny 83A:476. Amin'ity andiany ity, gène 37 ihany koa no nihena tao amin'ny Mandelup tamin'ny 48 HPI sy 35 tamin'ny fotoana iray ihany tao amin'ny mponina 22660, anisan'izany ny DEG 19 iraisan'ny gène roa. Tsy nisy DEG mifandraika amin'ny teny hoe GO: 0015979 no navitrika be tamin'ny fitambarana rehetra (tsipika x fotoana).
Naseho ireo lamina fanehoana ireo singa fototra amin'ny dingana biolojika "GO:0015979 Photosynthesis". Ny mizana Log2 dia maneho ny sandan'ny log2 (fiovan'ny fihodinana) eo amin'ny zavamaniry voatsindrona (Colletotrichum lupini, karazana Col-08, azo avy amin'ny saha lupine, Wizhenica, Polonina, 1999) sy ny zavamaniry fanaraha-maso (voatsindrona sandoka) amin'ny fotoana iray ihany. Ireto karazana lupine tery leaf manaraka ireto no nodinihina: 83A:476 (mahatanty, mitondra ny allele Lanr1 homozygous), Boregine (mahatanty, tsy fantatra ny fototarazo), Mandelup (mahatanty antonony, mitondra ny allele AnMan homozygous), ary Mponina 22660 (mora tohina).
Mifototra amin'ny valin'ny fanadihadiana ny fanehoan-kevitra samihafa sy izay azo heverina fa tafiditra amin'ny valinteny fiarovana amin'ny holatra mampidi-doza, ity andiana gène fito ity dia nofantenana ho an'ny fandrefesana ny mombamomba ny fanehoan-kevitra amin'ny alàlan'ny PCR amin'ny fotoana tena izy (Tabilao Fanampiny S9).
Ny fototarazo proteinina heverina fa TanjilG_10657 dia nateraky ny fitomboana be dia be tamin'ny taranaka rehetra nodinihina sy ny fotoana rehetra raha oharina amin'ny zavamaniry fanaraha-maso (manahaka) (Tabilao Fanampiny S10, S11). Ho fanampin'izany, ny mombamomba ny fanehoana ny TanjilG_10657 dia naneho fironana mitombo nandritra ny fanandramana ho an'ny taranaka rehetra. Ny mponina 22660 dia naneho ny fahatsapana ambony indrindra an'ny TanjilG_10657 tamin'ny fampidirana miaraka amin'ny fampahavitrihana in-114 ary ny haavon'ny fanehoana ambony indrindra (4.4 ± 0.4) amin'ny 24 HPI (Sary 6a). Ny fototarazo proteinina PR10 LlR18A TanjilG_27015 koa dia naneho ny fampahavitrihana tamin'ny taranaka rehetra sy ny fotoana rehetra, miaraka amin'ny dikany ara-statistika amin'ny ankamaroan'ny teboka angon-drakitra (Sary 6b). Mitovy amin'ny TanjilG_10657, ny haavon'ny fanehoana ambony indrindra an'ny TanjilG_27015 dia hita tamin'ny mponina 22660 nampidirina tamin'ny 24 HPI (19.5 ± 2.4). Niakatra be ny tahan'ny asidra endochitinase TanjilG_04706 tamin'ny taranaka rehetra sy tamin'ny fotoana rehetra afa-tsy ny Boregine 6 hpi (Sary 6c). Nitombo be izany tamin'ny fotoana voalohany (6 HPI) tamin'ny 83A:476 (in-10.5) ary nitombo kely tamin'ny taranaka hafa (in-6.6-7.5). Nandritra ny andrana, nitovy tamin'izany ny tahan'ny fanehoan'ny TanjilG_04706 tamin'ny 83A:476 sy Boregine, raha nitombo be kosa izany tao amin'ny Mandelup sy ny Population 22660, nahatratra sanda avo lenta (5.9 ± 1.5 sy 6.2 ± 1.5). Ny gene mitovy amin'ny endoglucan-1,3-β-glucosidase TanjilG_23384 dia naneho fihetsehana avo lenta tamin'ny fotoana roa voalohany (6 sy 12 hpi) tamin'ny taranaka rehetra afa-tsy ny mponina 22660 (Sary 6d). Ny haavon'ny fanehoana ambony indrindra an'ny TanjilG_23384 dia hita tamin'ny fotoana faharoa (12 hpi) tao Mandelup (2.7 ± 0.3) sy 83A:476 (1.5 ± 0.1). Tamin'ny 24 HPI, ny fanehoana ny TanjilG_23384 dia somary ambany tamin'ny andalana rehetra nodinihina (manomboka amin'ny 0.04 ± 0.009 ka hatramin'ny 0.44 ± 0.12).
Ny mombamomba ny fanehoan'ireo fototarazo voafantina (ag) hita tamin'ny alalan'ny PCR. Ny isa 6, 12 ary 24 dia maneho ora aorian'ny vaksiny. Ny fototarazo LanDExH7 sy LanTUB6 dia nampiasaina ho an'ny fanaraha-maso ary ny LanTUB6 dia nampiasaina ho an'ny fanamarinana eo anelanelan'ny andiany. Ny bara diso dia maneho ny fivilian-dàlana mahazatra mifototra amin'ny dika mitovy biolojika telo, izay samy salan'isa amin'ny dika mitovy ara-teknika telo. Ny lanjan'ny statistika amin'ny fahasamihafana eo amin'ny haavon'ny fanehoana eo amin'ireo zavamaniry notsindronina (Colletotrichum lupini, karazana Col-08, azo tamin'ny 1999 avy amin'ny saha lupin any Wierzenica, Polonina) sy ireo zavamaniry fanaraha-maso (notsindronina sarintsariny) dia voamarika eo ambonin'ireo teboka angon-drakitra (*P < 0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Ny lanjan'ny statistika amin'ny fahasamihafana eo amin'ny haavon'ny fanehoana eo amin'ireo zavamaniry notsindronina (Colletotrichum lupini, karazana Col-08, azo tamin'ny 1999 avy amin'ny saha lupin any Wierzenica, Polonina) sy ireo zavamaniry fanaraha-maso (notsindronina sarintsariny) dia voamarika eo ambonin'ireo teboka angon-drakitra (*P < 0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, получен гля 1999 г. в Верженице, Польша) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*знач0,ние P. 0,01, ***значение P ≤ 0,001). Voamarika etsy ambony ireo fahasamihafana manan-danja ara-statistika eo amin'ny haavon'ny fanehoana eo amin'ny zavamaniry notsindronina (Colletotrichum lupini, karazana Col-08, azo tamin'ny 1999 avy amin'ny saha lupine any Wierzhenice, Polonina) sy ny zavamaniry fanaraha-maso (notsindronina sandoka) (*P value < 0.05, **P-value ≤ 0.01, ***P-value ≤ 0.001).接种（Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在数据為0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照 （ 接秉 （接秉水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученплый спод Верженице, Польша, в 1999 г.) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены над точками (*, ниных дан, 0,000,000) P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). Voamarika etsy ambony ireo fahasamihafana manan-danja ara-statistika eo amin'ny haavon'ny fanehoana eo amin'ny zavamaniry notsindronina (Colletotrichum lupini, karazana Col-08, azo avy amin'ny saha lupine any Verzhenice, Polonina, tamin'ny 1999) sy ny zavamaniry fanaraha-maso (notsindronina sandoka) (*P < 0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001).Ireo karazana NLL nodinihina dia: 83A:476 (mahatanty, mitondra ny allele Lanr1 homozygous), Mandelup (mahatanty antonony, mitondra ny allele AnMan homozygous), Boregine (mahatanty, tsy fantatra ny fototarazony) ary mponina 22660 (mora voan'ny aretina).
Ny fototarazo kandidà TanjilG_05042 ao amin'ny toerana Lanr1 dia naneho lamina fanehoana hafa be avy amin'ireo mombamomba azo avy amin'ny fanadihadiana RNA-seq (Sary 6e). Hita fa nisy fiantraikany lehibe tamin'ity fototarazo ity tao Mandelup sy ny mponina 22660 (hatramin'ny in-39.7 sy in-11.7 tsirairay avy), ka nahatonga ny haavon'ny fanehoana avo lenta (hatramin'ny 1.4 ± 0.14 sy 7.2 ± 1.3 tsirairay avy). Ny 83A:476 koa dia naneho fitomboan'ny fototarazo TanjilG_05042 (hatramin'ny in-3.8), na izany aza, ny haavon'ny fanehoana azo (0.044 ± 0.002) dia ambany mihoatra ny in-30 noho ireo hita tao Mandelup sy ny mponina 22660. Ny fandinihana tamin'ny alalan'ny qPCR dia naneho fahasamihafana lehibe teo amin'ny haavon'ny fanehoana eo amin'ny genotypes amin'ny variants mock-vaccinated (fanaraha-maso), ka nahatratra fahasamihafana in-58 eo amin'ny mponina 22660 sy 83A:476, ary koa eo amin'ny mponina 22660 sy 22660. Fahasamihafana roa sosona no tratra teo amin'ny Boregine sy Mandalup.
Ny gène kandidà ao amin'ny toerana misy ny AnMan, TanjilG_12861, dia navitrika ho setrin'ny vaksiny tao amin'ny 83A:476 sy Mandelup, tsy miandany tao amin'ny mponina 22660, ary nihena tao amin'ny Boregine (Sary 6f). Ny fanehoana mifandraika amin'ny gène TanjilG_12861 no avo indrindra tao amin'ny 83A: 476 notsindronina (0.14±0.01). Ny gène proteinina mahatohina hafanana kilasy I 17.4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 dia naneho ambaratonga fanehoana mifandraika ambany kokoa tamin'ny karazana sy fotoana rehetra nodinihina (Sary 6g). Ny sanda ambony indrindra dia hita tamin'ny 24 HPI tao amin'ny mponina 22660 (0.14 ± 0.02, fitomboana valo heny amin'ny valin'ny vaksiny).
Ny fampitahana ny mombamomba ny fanehoan-kevitry ny fototarazo (Sary 7) dia naneho fifandraisana avo lenta teo amin'ny TanjilG_10657 sy ireo fototarazo efatra hafa: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), ary TanjilG_04706 (r = 0.79). Ireo valiny ireo dia mety manondro ny fiaraha-mandrindra ireo fototarazo ireo mandritra ny valin-kafatra fiarovana. Ny fototarazo TanjilG_12861 sy TanjilG_23384 dia naneho mombamomba ny fanehoan-kevitra samihafa miaraka amin'ny sandan'ny coefficient correlation Pearson ambany kokoa (manomboka amin'ny 0.08 ka hatramin'ny 0.43 ary -0.19 ka hatramin'ny 0.28, tsirairay avy) raha oharina amin'ny fototarazo hafa.
Hita tamin'ny alalan'ny PCR quantitative ny fifandraisana misy eo amin'ny mombamomba ny fanehoan-kevitry ny fototarazo. Ireto karazana lupine teryleaf manaraka ireto no nodinihina: 83A:476 (mahatanty, mitondra ny allele Lanr1 homozygous), Mandelup (mahatanty antonony, mitondra ny allele AnMan homozygous), Boregine (mahatanty, tsy fantatra ny fototarazony), ary ny Population 22660 (mora tohina). Nokajiana ny fotoana telo (6, 12 ary 24 ora aorian'ny fampidirana), anisan'izany ny zavamaniry notsindronina (Colletotrichum lupini, karazana Col-08, azo avy amin'ny saha lupine any Wierzhenice, Polonina, tamin'ny 1999) sy ny zavamaniry fanaraha-maso (notsindronina sandoka). Ny mizana dia mampiseho ny sandan'ny coefficient correlation Pearson.
Mifototra amin'ny angon-drakitra azo tamin'ny hery 6 horsepower isaky ny santimetatra, ny WGCNA dia natao tamin'ny DEG 9981 izay voafaritra tamin'ny fampitahana ny zavamaniry notsindronina sy ny zavamaniry fanaraha-maso mba hifantohana amin'ny valin-kafatra fiarovana voalohany (Tabilao Fanampiny S12). Môdioly gène (vondron-gène) roa amby roapolo no hita miaraka amin'ny mombamomba ny fanehoana mifandraika (tsara na ratsy) eo amin'ny génotypes sy ny fiovaovan'ny andrana. Amin'ny ankapobeny, nidina araka ny filaharany 83A:476 > Mandelup > Boregine > Mponina 22660 ny haavon'ny fanehoana ny fototarazo (na izany aza, tamin'ireo karazany roa ireo dia nihamafy kokoa io fironana io tamin'ny zavamaniry fanaraha-maso). Amin'ny ankapobeny, nidina araka ny filaharany 83A:476 > Mandelup > Boregine > Mponina 22660 ny haavon'ny fanehoana ny fototarazo (na izany aza, tamin'ireo karazany roa ireo dia nihamafy kokoa io fironana io tamin'ny zavamaniry fanaraha-maso). Всреднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 сильнее у контрольных растений). Raha ny salan'isa, nihena ny haavon'ny fanehoana ny fototarazo teo amin'ny filaharana 83A:476 > Mandelup > Boregine > Mponina 22660 (na izany aza, tamin'ireo karazany roa ireo, dia nihamafy kokoa io fironana io tamin'ny zavamaniry fanaraha-maso).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）。平均 而 言 ， 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> mponina 22660 的 顺序 下降 （， 在 种 中 在 种 中植物 中 更） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 контрольных растений). Nihena ny haavon'ny fanehoana ny fototarazo tao amin'ny andiany 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660, raha ny salan'isa (na izany aza, tamin'ireo karazany roa ireo, dia nihamafy kokoa io fironana io tamin'ny zavamaniry fanaraha-maso).Niafara tamin'ny fiakaran'ny fanehoan-kevitry ny fototarazo ny vaksiny, indrindra tao amin'ny môdioly 18, 19, 14, 6 ary 1 (midina ny filaharan'ny vokany), ny fandrindrana ratsy (ohatra ny môdioly 9 sy 20) na misy fiantraikany tsy miandany (ohatra ny môdioly 11, 22, 8 ary 13). Ny fanadihadiana momba ny fanatsarana ny teny GO (Tabilao Fanampiny S13) dia naneho "GO: 0006952 Valinteny miaro" ho an'ny môdioly notsindronina (18) miaraka amin'ny fampandehanana ambony indrindra, anisan'izany ny fototarazo nodinihina tamin'ny qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 ary TanjilG_27015), ary koa ireo môdioly fotosintesis maro izay voasakana indrindra amin'ny Inoculate (9). Ny môdioly 18 concentrator (Sary 8) dia fantatra ho ny gène TanjilG_26536 izay mandika ny proteinina PR-10-like LlR18B, ary ny môdioly 9 concentrator dia fantatra ho ny gène TanjilG_28955 izay mandika ny proteinina photosystem II PsbQ. Ny gène Lanr1, TanjilG_05042, kandidà mahatohitra ny anthracnose, dia hita tao amin'ny môdioly 22 (Sary 9) ary mifandray amin'ny teny hoe "GO:0044260 Cellular macromolecular metabolic processes" sy "GO:0006355 Transcriptional regulation, DNA templateing" mitondra ny TanjilG_01212 hub. Ny gène dia mandika ny heat stress transcription factor A-4a (HSFA4a).
Fanadihadiana tambajotra lanjaina momba ny fiaraha-misehoan'ny fototarazo amin'ny môdioly miaraka amin'ny teny momba ny dingana biolojika be loatra "GO: 0006952 Defense responses". Nohafohezina ny fampifandraisana mba hanasongadinana ireo fototarazo efatra nodinihina tamin'ny qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 ary TanjilG_27015).
Fanadihadiana tambajotra lanjaina momba ny fiaraha-misehoan'ny fototarazo amin'ny môdioly iray miaraka amin'ny teny biolojika be loatra hoe "GO: 0006355: Fandrindrana ny fandikana, ny famolavolana ADN" ary mitondra ny fototarazo Lanr1 TanjilG_05042 izay mety ho mahatohitra ny anthracnose. Nohafohezina ny fametahana mba hanasarahana ny fototarazo TanjilG_05042 sy ny fototarazo TanjilG_01212 afovoany.
Ny fitiliana ny fanoherana ny anthracnose nangonina tany Aostralia dia naneho fa ny ankamaroan'ny karazana navoaka voalohany dia mora voan'ny aretina; Kalya, Coromup ary Mandelup dia voalaza fa antonony ny fanoherana azy, raha i Wonga, Tanjil ary 83A:476 kosa dia voalaza fa tena mahatohitra26,27,31. dia manana allele fanoherana mitovy, antsoina hoe Lanr1, ary Coromup sy Mandelup dia manana allele hafa, antsoina hoe AnMan10, 26, 39, raha i Kalya kosa dia nampita allele hafa., Lanr2. Ny fitiliana ny fanoherana ny anthracnose tany Alemaina dia niafara tamin'ny famantarana ny karazana Bo7212 mahatohitra miaraka amin'ny allele kandidà hafa ankoatra ny Lanr1, antsoina hoe LanrBo36.
Nasehon'ny fikarohanay fa ambany dia ambany ny fatran'ny allele Lanr1 ao amin'ny germplasm nosedraina (eo amin'ny 6%). Mifanaraka amin'ny valin'ny fitiliana ny germplasm Eoropeana Atsinanana amin'ny fampiasana ny marika Anseq3 sy Anseq4 ity fandinihana ity, izay naneho fa ny allele Lanr1 dia hita amin'ny karazany roa any Belarosia ihany. Izany dia manondro fa ny allele Lanr1 dia mbola tsy ampiasaina betsaka amin'ny fandaharan'asa fiompiana eo an-toerana, tsy toy ny any Aostralia, izay iray amin'ireo allele fototra amin'ny fiompiana tohanan'ny marika. Mety ho vokatry ny fanoherana ambany kokoa omen'ny allele Lanr1 amin'ny toe-javatra eo amin'ny saha Eoropeana raha oharina amin'ny tatitra Aostraliana izany. Ankoatra izany, ny fanadihadiana momba ny anthracnose any amin'ny faritra be orana any Aostralia dia naneho fa ny valin'ny fanoherana ateraky ny allele Lanr1 dia mety tsy hahomby amin'ny toetr'andro izay manohana ny fitomboana sy ny fivoarana haingana ny pathogen19,42. Raha ny marina, amin'ity fanadihadiana ity, dia hita ihany koa ny soritr'aretin'ny anthracnose sasany amin'ny genotypes mitondra ny allele Lanr1, izay manondro fa mety hanjavona ny fanoherana amin'ny toe-javatra tsara indrindra ho an'ny fivoaran'ny C. lupini. Ankoatra izany, azo atao ny mandika diso ny fisian'ny marika Anseq3 sy Anseq4, izay eo amin'ny 1 cM eo ho eo miala ny toerana Lanr1, 28,30,43.
Nasehon'ny fanadihadianay fa ny 83A:476, mitondra ny allele Lanr1, dia namaly ny fampidirana C. lupini tamin'ny alàlan'ny fandaharana transcriptome lehibe tamin'ny fotoana voalohany nodinihina (6 hpi), raha toa kosa ka hita taty aoriana ny valinteny transcriptomic tao Mandelup, mitondra ny allele AnMan, (manomboka amin'ny 24 ka hatramin'ny 48 hp). Ireo fiovaovan'ny fotoana eo amin'ny valintenin'ny fiarovana ireo dia mifandray amin'ny fahasamihafan'ny soritr'aretin'ny aretina, izay manasongadina ny maha-zava-dehibe ny famantarana mialoha ny pathogen mba hahombiazana amin'ny fanoherana. Mba hahazoana aretina amin'ny sela zavamaniry, ny spores anthrax dia tsy maintsy mandalo dingana maromaro eo amin'ny velaran'ny mpampiantrano, anisan'izany ny fitsimohan'ny zavamaniry, ny fizarana sela, ary ny fananganana appressorium. Ny appendage dia rafitra mifindra izay miraikitra amin'ny velaran'ny mpampiantrano ary manamora ny fidirana ao amin'ny sela mpampiantrano. Noho izany, ny spores an'ny C. gloeosporioides ao amin'ny fitrandrahana pitipoà dia naneho ny fizarana voalohany ny nucleus taorian'ny 75-90 minitra incubation, ny fananganana fantsona germ taorian'ny 90-120 minitra, ary ny fampihenana ny aretina taorian'ny 4 ora 45. Ny C. gloeosporioides avy amin'ny manga dia naneho fitomboana mihoatra ny 40% tao anatin'ny conidia taorian'ny 3 ora niorenana ary fiforonan'ny appressors teo amin'ny 20% taorian'ny 4 ora. Ny gène CAP20 mifandraika amin'ny virulence an'ny C. gloeosporioides dia naneho asa fandikana tao amin'ny conidia mamorona epiphyte taorian'ny 3.5 ora niorenana tao amin'ny savoka ambonin'ny zavokà miaraka amin'ny fifantohana avo lenta amin'ny proteinina CAP20 aorian'ny 4 ora 46 minitra. Toy izany koa, ny asan'ny gène biosynthesis melanin ao amin'ny C. trifolii dia nateraka nandritra ny 2 ora niorenana narahin'ny fiforonan'ny appressorium taorian'ny 1 ora. Ny fanadihadiana natao tamin'ny sela ravina dia naneho fa ny frezy natsofoka tamin'ny C. acutatum dia manana fihenana voalohany amin'ny 8 hpi, raha ny voatabia kosa natsofoka tamin'ny C. coccodes dia manana fihenana voalohany amin'ny 4 hpi48,49. mifanaraka betsaka amin'ny fe-potoana nifindran'ny aretina Colletotrichum spp. Ny valin-kafatra haingana amin'ny fiarovana amin'ny 83A:476 dia manondro ny fandraisan'anjaran'ny fanoheran'ny zavamaniry sy ny fototarazo immunity vokatry ny effector (ETI) amin'ity andiany ity, raha toa kosa ny valin-kafatra tara an'i Mandelup dia manohana ny petra-kevitra momba ny immunity vokatry ny molekiola (MTI) mifandraika amin'ny micro-associated molecular pattern-triggered immunity (MTI) 50. Valin-kafatra mialoha amin'ny 83A: 476 sy Mandelup. Ny fifandimbiasana ampahany eo amin'ny fototarazo miakatra na midina amin'ny valin-kafatra tara dia manohana ihany koa ity hevitra ity, satria ny ETI dia matetika heverina ho valin-kafatra MTI haingana sy nohatsaraina izay miafara amin'ny fahafatesan'ny sela voarindra eo amin'ny toerana misy ny aretina, fantatra amin'ny anarana hoe shock anaphylactic 51,52.
Ny ankamaroan'ny fototarazo izay lazaina fa avy amin'ny teny hoe Gene Ontology GO:0006952 "Defense Valinteny" dia ireo homologue 11 an'ny proteinina hafatra fifadian-kanina vokatry ny adin-tsaina 22 (mitovy amin'ny SAM22) sy ireo proteinina latex fito lehibe (MLP). Ny proteinina mitovy amin'ny 31, 34, 43 ary 423 dia naneho fitoviana amin'ny filaharany. Ny fototarazo mitovy amin'ny SAM22 dia naneho fihetsehana manan-danja izay naharitra kokoa, izay naneho fitomboan'ny fanoherana ny anthracnose (83A:476 sy Boregine). Na izany aza, ny fototarazo mitovy amin'ny MLP dia nihena ihany tamin'ny andalana mitondra ny allele fanoherana kandidà (83A:476/Lanr1 amin'ny 6 hpi sy Mandelup/AnMan amin'ny 24 hpi). Tsara homarihina fa ny homologue mitovy amin'ny SAM22 rehetra fantatra dia avy amin'ny vondrona fototarazo mirefy 105 kb eo ho eo, raha ny fototarazo mitovy amin'ny MLP kosa dia avy amin'ny faritra misaraka amin'ny genome. Hita tao amin'ny fanadihadianay teo aloha momba ny fanoherana ny NLL amin'ny vaksiny Diaporthetoxica ihany koa ny fampandehanana mirindra ireo fototarazo mitovy amin'ny SAM22, izay manambara fa tafiditra amin'ny singa mitsivalana amin'ny valin'ny fiarovana izy ireo. Tohanan'ny tatitra momba ny valinteny tsara avy amin'ny fototarazo mitovy amin'ny SAM22 amin'ny ratra na fitsaboana amin'ny asidra salisilika, mpanentana holatra, na peroxyde hydrogène ihany koa io fehin-kevitra io.
Hita fa mamaly ny fihenjanana abiotika sy biotika isan-karazany ny fototarazo mitovy amin'ny MLP, anisan'izany ny aretina bakteria, virosy ary holatra mampidi-doza amin'ny karazana zavamaniry maro55. Ny fomba fiatrehana ny fifandraisana sasany eo amin'ny zavamaniry sy ny pathogens dia nanomboka tamin'ny fitomboana be (ohatra, mandritra ny fihanaky ny landihazo amin'ny Verticillium dahliae) ka hatramin'ny fihenana be (ohatra, aorian'ny fihanaky ny Alternaria spp. amin'ny hazo paoma)56,57. Hita fa nihena be ny tahan'ny MLP-like 423 nandritra ny fiarovana ny zavokà tamin'ny aretina F. niger sy nandritra ny fihanaky ny hazo paoma Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola sy Alternaria alternata dia karazana paoma58,59. Ankoatra izany, ny calli paoma izay maneho tafahoatra ny fototarazo mitovy amin'ny MLP-like 423 dia nanana fanehoana ambany kokoa ny fototarazo mifandraika amin'ny fanoherana ary mora voan'ny aretina holatra59. Taorian'ny Fusarium oxysporum f, ny fototarazo mitovy amin'ny MLP-like 423 dia voasakana ihany koa tao amin'ny germplasm tsaramaso mahazatra mahatohitra. cn. Aretina tsaramaso 60.
Ireo mpikambana hafa ao amin'ny fianakaviana PR-10 hita tao amin'ny fandalinana RNA-seq nataonay dia ny fototarazo LlR18A sy LlR18B ho setrin'ny fiakaran'ny tahan'ny proteinina DIR1, ary koa ny fototarazo niakatra (fototarazo 1) na nidina (fototarazo 3) ho an'ny proteinina famindrana lipida DIR1. Ho fanampin'izany, ny WGCNA dia manasongadina ny fototarazo LlR18B ho toy ny foibe ao amin'ity môdioly ity, izay mora voan'ny vaksiny ary mitondra fototarazo fiarovana maromaro. Ny fototarazo LlR18A sy LlR18B dia nateraka tao amin'ny ravin'ny lupine mavo ho setrin'ny bakteria mampidi-doza, ary koa tao amin'ny tahony NLL taorian'ny fampidirana D. toxica, raha toa kosa ny homologue vary amin'ireo fototarazo ireo, RSOsPR10, dia nateraka haingana noho ny aretina fungal izay heverina fa tafiditra ao amin'ny lalan'ny famantarana asidra jasmonic53,61, 62. Ny fototarazo DIR1 dia mandika proteinina fitaterana lipida tsy voafaritra izay ilaina amin'ny fiandohan'ny fanoherana azo avy amin'ny vatana (SAR). Miaraka amin'ny fivoaran'ny fihetsika fiarovana, ny proteinina DIR1 dia entina avy amin'ny foiben'ny aretina amin'ny alàlan'ny phloem mba hamporisihana ny SAR any amin'ny taova lavitra. Mahaliana fa ny fototarazo TanjilG_02313 DIR1 dia nateraka tamin'ny fotoana voalohany tamin'ny andalana 84A:476 sy ny Population 22660, saingy ny fanoherana ny anthracnose dia nipoitra tamim-pahombiazana tamin'ny andalana 84A:476 ihany. Mety manondro ny tsy fahombiazan'ny fototarazo DIR1 ao amin'ny NLL izany, satria ireo homologues telo sisa dia namaly ny vaksiny tamin'ny andalana 83A:476 tamin'ny 6 hpi ihany, ary io fihetsika io dia nitodika tany ambany.
Tao amin'ny fanadihadianay, ireo singa mahazatra indrindra mifandraika amin'ny dingana biolojika antsoina hoe "GO:0055114 Redox process" dia ny proteinina cytochrome P450, peroxidase, asidra linoleika 9S-/13S-lipoxygenase, ary 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase. Ankoatra izany, ny WGCNA anay dia mamaritra ny homologue HSFA4a ho toy ny môdely mitondra foibe toy ny kandidà gène fanoherana Lanr1 TanjilG_05042. Ny HSFA4a dia singa iray amin'ny fandrindrana ny fandikana nokleary miankina amin'ny redox amin'ny zavamaniry.
Ny proteinina Cytochrome P450 dia oxidoreductases izay mandrisika ny fihetsiky ny hydroxylation miankina amin'ny NADPH sy/na O2 amin'ny metabolisma voalohany sy faharoa, anisan'izany ny metabolisman'ny xenobiotika, ary koa ny hormonina, asidra matavy, sterol, singa rindrin'ny sela, biopolymers, ary ny biosynthesis ny singa miaro 69. Tao amin'ny fanadihadianay iray, ny fiovaovan'ny fiasan'ny cytochrome P450 amin'ny zavamaniry dia nihena avy amin'ny -10.6 log2 (fiovan'ny vala) ho 5.7 noho ny homologues maro niova (37) sy ny fahasamihafan'ny lamina valinteny eo amin'ny fototarazo manokana, izay maneho ny fanavaozana miakatra. Ny fampiasana ny angon-drakitra RNA-seq ihany mba hanazavana ny fiasan'ny fototarazo NLL ao amin'ny superfamily proteinina lehibe toy izany dia ho vinavina be. Na izany aza, tsara ny manamarika fa ny fototarazo cytochrome P450 sasany dia mifandray amin'ny fitomboan'ny fanoherana ny holatra na bakteria pathogenic, anisan'izany ny fandraisana anjara amin'ny fihetseham-po mahazaka 69,70,71.
Ny peroxidases kilasy III dia anzima zavamaniry maro asa izay tafiditra amin'ny dingana metabolika isan-karazany mandritra ny fitomboan'ny zavamaniry sy ny fivoarany, ary koa ho setrin'ny adin-tsaina ara-tontolo iainana toy ny sira, ny hain-tany, ny hamafin'ny hazavana be, ary ny fanafihan'ny pathogen72. Ny peroxidases dia tafiditra amin'ny fifandraisan'ny karazana zavamaniry maromaro amin'ny Anthracis, anisan'izany ny Stylosanthes humilis sy C. gloeosporioides, Lens culinaris sy C. truncatum, Phaseolus vulgaris sy C. lindemuthianum, Cucumis sativus ary C. lagenarium73,74,75,76. Haingana dia haingana ny valiny, indraindray amin'ny 4 HPI aza, alohan'ny hidiran'ny holatra ao amin'ny sela zavamaniry73. Ny fototarazo peroxidase koa dia namaly ny fampidirana D. toxica NLL. Ankoatra ny asany mahazatra amin'ny fandrindrana ny fipoahan'ny oxidative na ny fanafoanana ny adin-tsaina oxidative, ny peroxidases dia afaka manelingelina ny fitomboan'ny pathogen amin'ny alàlan'ny famoronana sakana ara-batana mifototra amin'ny fanamafisana ny rindrin'ny sela mandritra ny lignification, subunit na cross-linking ny singa manokana. Azo lazaina fa vokatry ny fototarazo TanjilG_03329 izay mandika anion peroxidase mamorona lignin izay nitombo be tao amin'ny fianarantsika tao amin'ny andiany mahatohitra 83A:476 amin'ny 6 HPI ity fiasa ity, saingy tsy tamin'ny karazany sy fotoana hafa izay tsy namaly.
Ny 9S-/13S-lipoxygenase an'ny asidra linoleika no dingana voalohany amin'ny lalan'ny oksidativa amin'ny biosynthesis lipida78. Ny vokatra azo avy amin'ity lalan-kely ity dia manana andraikitra maro amin'ny fiarovana ny zavamaniry, anisan'izany ny fanamafisana ny rindrin'ny sela amin'ny alàlan'ny fiforonan'ny callose sy pectin, ary ny fanaraha-maso ny adin-tsaina oksidativa amin'ny alàlan'ny famokarana karazana oksizenina mihetsika79,80,81,82,83. Ato amin'ity fandalinana ity, ny fanehoana ny asidra linoleika 9S-/13S-lipoxygenase dia niova tamin'ny karazana rehetra, saingy tao amin'ny mponina mora voan'ny aretina 22660, ny fiakaran'ny regulation dia nanjaka tamin'ny fotoana samihafa, raha toa kosa ka tamin'ny karazana mitondra Lanr1 mahatohitra sy ny allele AnMan, dia manantitrantitra ny fahasamihafan'ny sosona oxylipin amin'ny fihetsiky ny anthrax miaro eo amin'ireo genotypes ireo.
Niakatra be ny tahan'ny homologue 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) (gène 9) na nidina ny tahan'ny (gène 2) rehefa nampidirana lupine. Ankoatra ny roa maningana, ireo valiny rehetra ireo dia nitranga tamin'ny 6 hp. tamin'ny 83A:476. Ny fihetsika anzima izay ampitain'ny proteinina ACO no dingana mametra ny tahan'ny famokarana ethylene ary noho izany dia voafehy tsara84. Ny ethylene dia hormonina avy amin'ny zavamaniry izay mitana anjara toerana isan-karazany amin'ny fandrindrana ny fivoaran'ny zavamaniry sy ny fiatrehana ny toe-javatra misy fihenjanana abiotika sy biotika. Ny famporisihana ny fandikana ACO sy ny fampandehanana ny lalan'ny famantarana ethylene dia tafiditra amin'ny fampitomboana ny fanoheran'ny vary amin'ny holatra hemibiotrophic oryzae oryzae amin'ny alàlan'ny fandrindrana ny famokarana karazana oksizenina mihetsika sy phytoalexins. Ny dingana mitovy amin'ny fifindran'ny aretina amin'ny ravina hita teo amin'ny M. oryzae sy C. lupini88,89, teo anatrehan'ny fiakaran'ny isan'ny homologue ACO ao amin'ny tsipika 83A:476 voalaza ato amin'ity fandalinana ity, dia manova ny mety hisian'ny fanoherana ny NLL anthracnose Ethylene, dingana fototra amin'ny lalan'ny molekiola.
Ato amin'ity fanadihadiana ity, dia hita fa nisy famoretana goavana ny fototarazo maro mifandraika amin'ny fototarazo tamin'ny 6 hpi tao amin'ny 83A:476 sy tamin'ny 48 hpi tao Mandeloop sy ny mponina 22660. Mifandanja amin'ny ambaratonga ny halehiben'ny sy ny fivoaran'ireo fiovana ireo. Hita tamin'ity andrana ity ny fanoherana ny anthracnose. Vao haingana, dia nisy tatitra momba ny famoretana mahery vaika sy mialoha ny transcripts mifandraika amin'ny fototarazo tamin'ny modely maromaro momba ny fifandraisan'ny zavamaniry sy ny pathogen, anisan'izany ny bakteria pathogenic sy ny holatra. Ny fahamaizinana (avy amin'ny 2 HPI amin'ny fifandraisana sasany) sy ny famoretana manerantany ny fototarazo mifandraika amin'ny fototarazo ho setrin'ny aretina dia mety hamporisika ny hery fiarovana amin'ny zavamaniry mifototra amin'ny fametrahana ny karazana oksizenina mihetsika sy ny fifandraisany amin'ny lalan'ny asidra salisilika mba hanelanelana ny fihetseham-po mahazaka 90,94.
Ho famaranana, ny mekanisma fiarovana naroso ho an'ny taranaka mahatohitra indrindra (83A:476) dia ahitana ny famantarana haingana ny pathogen amin'ny alàlan'ny gène R (mety ho TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) ary ny famantarana asidra salisilika sy etilena vokatry ny valin'ny allergy, arahin'ny fananganana SAR lavitra ezaka. Ny fihetsika dia tohanan'ny proteinina DIR-1. Tsara homarihina fa fohy dia fohy ny vanim-potoana biotrophic ho an'ny aretina C. lupini (eo amin'ny 2 andro eo ho eo), arahin'ny fitomboana necrotic95. Ny fifindrana eo amin'ireo dingana ireo dia mety mifandray amin'ny necrosis sy ny fanehoana proteinina azo avy amin'ny etilena izay miasa ho toy ny mpanentana ny fihetseham-po hypersensitivity amin'ny zavamaniry mpampiantrano. Noho izany, tery dia tery ny fe-potoana ahafahana misambotra ny C. lupini amin'ny dingana biotrophic. Ny fandaharana indray ny gène mifandraika amin'ny redox sy photosynthesis hita ao amin'ny 83A:476 amin'ny 6 hpi dia mifanaraka amin'ny fivoaran'ny hyphae holatra ary manambara ny fivoaran'ny valinteny fiarovana mahomby amin'ny dingana biotrophic. Mety ho tara loatra ny valin-kafatra transcriptomika an'i Mandelup sy ny mponina 22660 ka tsy afaka misambotra ny holatra alohan'ny hifindrana amin'ny fitomboana nekrotika, na izany aza, mety hahomby kokoa noho ny mponina 22660 i Mandelup satria ny fanaraha-maso haingana ny proteinina PR-10 dia mampiroborobo ny fanoherana mitsivalana.
Ny ETI, tarihin'ny fototarazo R mahazatra, dia toa fomba iray mahazatra amin'ny fanoherana ny anthracnose amin'ny tsaramaso. Noho izany, ao amin'ny karazana legume Medicago truncatula, ny fanoherana ny anthracnose dia omen'ny fototarazo RCT1, mpikambana ao amin'ny kilasin'ny fototarazo R an'ny zavamaniry TIR-NBS-LRR97. Ity fototarazo ity koa dia manome fanoherana ny anthracnose amin'ny alfalfa rehefa afindra amin'ny zavamaniry mora voan'ny anthracnose. Ao amin'ny tsaramaso mahazatra (P. vulgaris), maherin'ny roapolo ny fototarazo mahatohitra ny anthracnose no efa fantatra hatreto. Ny sasany amin'ireo fototarazo ireo dia hita any amin'ny faritra tsy misy fototarazo R mahazatra, na izany aza, maro hafa no hita eo amin'ny sisin'ny chromosome mitondra ny vondrona fototarazo NBS-LRR, anisan'izany ny TIR-NBS-LRRs99. Ny fanadihadiana SSR manerana ny genome dia nanamafy ihany koa ny fifandraisan'ny fototarazo NBS-LRR amin'ny fanoherana ny anthracnose amin'ny tsaramaso mahazatra. Ny fototarazo R mahazatra dia hita ihany koa ao amin'ny faritra genomic mitondra ny toerana lehibe indrindra mahatohitra ny anthracnose amin'ny lupine fotsy 101.
Asehon'ny asanay fa ny fihetsika fanoherana eo no ho eo, izay miasa amin'ny dingana voalohany amin'ny aretina amin'ny zavamaniry (tsara kokoa raha tsy mihoatra ny 12 hpi), dia miaro tsara ny lupine ravina tery amin'ny anthracnose vokatry ny holatra Collelotrichum lupini. Amin'ny fampiasana ny filaharan'ny vokatra avo lenta, dia nasehonay ny mombamomba ny fanehoana samihafa amin'ny fototarazo fanoherana ny anthracnose amin'ny zavamaniry NLL izay ampitain'ny fototarazo fanoherana ny Lanr1 sy AnMan. Ny fiarovana mahomby dia ny famolavolana amim-pitandremana ny fototarazo ho an'ny proteinina tafiditra amin'ny redox, photosynthesis, ary pathogenesis ao anatin'ny ora vitsivitsy aorian'ny fifandraisana voalohany amin'ny zavamaniry amin'ny pathogen. Ny fihetsika fiarovana mitovy amin'izany, saingy tara amin'ny fotoana, dia tsy dia mahomby loatra amin'ny fiarovana ny zavamaniry amin'ny aretina. Ny fanoherana ny anthrax ampitain'ny fototarazo Lanr1 dia mitovy amin'ny fihetsika haingana mahazatra an'ny fototarazo R (hery fiarovana vokatry ny effector), raha toa kosa ny fototarazo AnMan dia azo inoana fa manome fihetsika mitsivalana (hery fiarovana vokatry ny lamina molekiola mifandraika amin'ny mikraoba), izay manome faharetana antonony.
Ireo karazana NLL miisa 215 nampiasaina handinihana ireo mari-pamantarana anthracnose dia nahitana karazana 74, karazana 60 azo avy amin'ny fampiarahana na fiompiana, karazana mutant 5, ary karazana germplasm dia na tany am-boalohany miisa 76. Avy amin'ny firenena 17 ireo karazana ireo, indrindra avy any Polonina (58), Espaina (47), Alemaina (27), Aostralia (26), Rosia (19), Belarosia (7), Italia (5) ary karazana hafa avy amin'ny firenena 10. Ahitana ihany koa ireo karazana mahatohitra ny aretina: 83A:476, Tanjil, Wonga mitondra ny allele Lanr1, ary Mandelup mitondra ny allele AnMan. Avy amin'ny European Lupine Genetic Resource Database izay tantanin'ny Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Polonina (Tabilao Fanampiny S1) ireo karazana ireo.
Novolena tao anatin'ny fepetra voafehy ny zavamaniry (fotoana 16 ora, mari-pana 25°C mandritra ny andro ary 18°C ​​amin'ny alina). Nohadihadiana ny dika mitovy biolojika roa. Nalaina avy amin'ny ravina telo herinandro ny ADN tamin'ny fampiasana ny DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Alemaina) araka ny protocole. Notombanana tamin'ny alalan'ny fomba spectrophotometric (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Etazonia) ny kalitao sy ny fifantohan'ny ADN nalaina. Nohadihadiana ny marika AnManM1 izay manamarika ny fototarazo mahatohitra ny anthracnose AnMan (avy amin'ny cv. Mandelup) sy ny marika Anseq3 sy Anseq4 izay mifanila amin'ny fototarazo Lanr1 (avy amin'ny cv. Tanjil) 11,26,28. Ny homozygotes ho an'ny allele mahatohitra dia nomena isa "1", ny mora tohina - "0", ary ny heterozygotes - 0.5.
Mifototra amin'ny valin'ny sivana ho an'ny marika AnManM1, AnSeq3 ary AnSeq4 sy ny fisian'ny voa ho an'ny andrana fanaraha-maso farany, dia nisy karazana NLL 50 nofantenana ho an'ny phenotyping mahatohitra ny anthracnose. Natao indroa tao anaty trano maitso fehezin'ny solosaina miaraka amin'ny fotoperiode 14 ora miaraka amin'ny mari-pana 22°C mandritra ny andro ary 19°C amin'ny alina ny fanadihadiana. Kikisana ny voa (tapahina amin'ny lelany maranitra ny hoditry ny voa eo amin'ny ilany mifanohitra amin'ny embryon) alohan'ny famafazana mba hisorohana ny tsy fahatomombanan'ny voa noho ny hoditry ny voa mafy loatra ary mba hahazoana antoka fa mitsimoka mitovy. Nambolena tao anaty vilany (11 × 11 × 21 cm) miaraka amin'ny tany madio (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Varsovie, Polonina) ny zavamaniry. Natao tamin'ny karazana Colletotrichum lupini Col-08 ny fanindronana, izay nambolena tamin'ny taona 1999 avy amin'ny tahon'ny zavamaniry lupine tery ravina novolena tany an-tsaha tao Verzhenitsa, Polonina Lehibe (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E). Makà faritra iray. Novolena tao anaty tontolo SNA tamin'ny 20° C teo ambanin'ny hazavana mainty nandritra ny 21 andro ireo isolates mba hamporisihana ny sporulation. Efatra herinandro taorian'ny famafazana, rehefa nahatratra ny dingana 4-6 ravina ny zavamaniry, dia natao tamin'ny alàlan'ny famafazana conidia amin'ny fifantohana 0.5 x 106 conidia isaky ny ml ny fanindronana. Rehefa avy nanindronana, dia notehirizina tao anaty haizina nandritra ny 24 ora ny zavamaniry tamin'ny hamandoana eo amin'ny 98% eo ho eo sy ny mari-pana 25°C mba hanamora ny fitsimohan'ny conidia sy ny fizotran'ny aretina. Avy eo dia novolena tao anatin'ny fotoperiode 14 ora ireo zavamaniry tamin'ny mari-pana 22°C antoandro/19°C alina ary hamandoana 70%. Natao 22 andro taorian'ny tsindrona ny isa azo tamin'ny aretina ary nanomboka tamin'ny 0 (tsy voan'ny aretina) ka hatramin'ny 9 (mora voan'ny aretina) arakaraka ny fisiana na tsy fisian'ny fery necrotic amin'ny tahony sy ny ravina. Ankoatra izany, rehefa avy nojerena ny lanjan'ny zavamaniry dia norefesina. Ny fifandraisana misy eo amin'ny génotypes marika sy ny phenotypes aretina dia nokajiana ho toy ny fifandraisana amin'ny teboka roa (tsy fisian'ny marika heterozygous ao amin'ny andiana tsipika ho an'ny fanadihadiana ny phenotype mahatohitra anthracnose).