Nature.comను సందర్శించినందుకు ధన్యవాదాలు. మీరు ఉపయోగిస్తున్న బ్రౌజర్ వెర్షన్‌లో CSS మద్దతు పరిమితంగా ఉంది. ఉత్తమ అనుభవం కోసం, మీరు అప్‌డేట్ చేయబడిన బ్రౌజర్‌ను ఉపయోగించాలని (లేదా ఇంటర్నెట్ ఎక్స్‌ప్లోరర్‌లో కంపాటిబిలిటీ మోడ్‌ను నిలిపివేయాలని) మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము. ఈలోగా, మద్దతు కొనసాగేలా చూసేందుకు, మేము స్టైల్స్ మరియు జావాస్క్రిప్ట్ లేకుండా సైట్‌ను రెండర్ చేస్తాము.
ఆంగుస్టిఫోలియస్ లూపిన్ (NLL, లూపినస్ ఆంగుస్టిఫోలియస్ L.) అనేది ఆహార ఉత్పత్తికి మరియు నేల మెరుగుదలకు ఉపయోగించే ఒక లెగ్యూమినస్ మొక్క. ఒక పంటగా NLL యొక్క ప్రపంచవ్యాప్త విస్తరణ, వినాశకరమైన ఆంత్రాక్నోస్ వ్యాధిని కలిగించే లూపిన్ ఆంత్రాక్నోస్‌తో సహా అనేక వ్యాధికారక శిలీంధ్రాలను ఆకర్షించింది. పెరిగిన నిరోధకతను ప్రసాదించే Lanr1 మరియు AnMan అనే రెండు అలెల్స్‌ను NLL బ్రీడింగ్‌లో ఉపయోగించారు, కానీ వాటి అంతర్లీన అణు యంత్రాంగాలు ఇంకా తెలియవు. ఈ అధ్యయనంలో, యూరోపియన్ NLL నమూనాలను స్క్రీన్ చేయడానికి Lanr1 మరియు AnMan మార్కర్లను ఉపయోగించారు. నియంత్రిత వాతావరణంలో వ్యాక్సిన్‌ను పరీక్షించడం ద్వారా రెండు నిరోధక దాతల సమర్థతను నిర్ధారించారు. ప్రతినిధి నిరోధక మరియు సున్నితమైన లైన్‌లపై డిఫరెన్షియల్ జీన్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్రొఫైలింగ్ నిర్వహించబడింది. ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత అనేది “GO:0006952 డిఫెన్స్ రెస్పాన్స్”, “GO:0055114 రెడాక్స్ ప్రాసెస్”, మరియు “GO:0015979 ఫోటోసింథసిస్” అనే జీన్ ఆంటాలజీ పదాల ఓవర్‌ఎక్స్‌ప్రెషన్‌తో ముడిపడి ఉంది. అదనంగా, Lanr1(83A:476) లైన్ టీకా వేసిన వెంటనే వేగంగా గణనీయమైన ట్రాన్స్క్రిప్టోమ్ రీప్రోగ్రామింగ్‌ను చూపించింది, అయితే ఇతర లైన్లు ఈ ప్రతిస్పందనలో సుమారు 42 గంటల ఆలస్యాన్ని చూపించాయి. రక్షణ ప్రతిస్పందనలు TIR-NBS, CC-NBS-LRR మరియు NBS-LRR జన్యువులు, వ్యాధిజనకతలో పాల్గొనే 10 ప్రోటీన్లు, లిపిడ్ బదిలీ ప్రోటీన్లు, ఎండోగ్లూకాన్-1,3-β-గ్లూకోసిడేస్, గ్లైసిన్-రిచ్ సెల్ వాల్ ప్రోటీన్లు మరియు ఆక్సిజన్ యొక్క రియాక్టివ్ పాత్ నుండి వచ్చే జన్యువులతో సంబంధం కలిగి ఉంటాయి. కిరణజన్య సంయోగక్రియతో సంబంధం ఉన్న జన్యువులను జాగ్రత్తగా అణచివేయడంతో సహా 83A:476కు వచ్చిన ప్రారంభ ప్రతిస్పందనలు, శిలీంధ్ర జీవశాస్త్రం యొక్క వృక్షసంబంధ పెరుగుదల దశలో విజయవంతమైన రక్షణతో ఏకీభవించాయి, ఇది ఒక ఎఫెక్టర్ రోగనిరోధక శక్తిని ప్రేరేపిస్తుందని సూచిస్తుంది. మాండెలోప్ ప్రతిచర్య నెమ్మదిస్తుంది, అలాగే మొత్తం క్షితిజ సమాంతర డ్రాగ్ కూడా నెమ్మదిస్తుంది.
సన్న ఆకుల లుపిన్ (NLL, Lupinus angustifolius L.) అనేది పశ్చిమ మధ్యధరా ప్రాంతంలో ఉద్భవించిన అధిక ప్రోటీన్ కలిగిన ఒక ధాన్యం¹,². దీనిని ప్రస్తుతం జంతువులు మరియు మానవుల కోసం ఒక ఆహార పంటగా పండిస్తున్నారు. సహజీవన నత్రజని స్థాపక బ్యాక్టీరియా ద్వారా జరిగే నత్రజని స్థాపన మరియు నేల యొక్క మొత్తం నిర్మాణం మెరుగుపడటం వలన, పంట మార్పిడి పద్ధతులలో దీనిని పచ్చి ఎరువుగా కూడా పరిగణిస్తారు. గత శతాబ్దంలో NLL వేగవంతమైన పెంపక ప్రక్రియకు గురైంది మరియు ఇప్పటికీ అధిక ప్రజనన ఒత్తిడికి లోనవుతోంది³,4,5,6,7,8,9,10,11,12. NLL యొక్క విస్తృత సాగుతో, వ్యాధికారక శిలీంధ్రాల వ్యాప్తి కొత్త వ్యవసాయ ఆవాసాలను అభివృద్ధి చేసి, పంటలను నాశనం చేసే కొత్త వ్యాధులను కలిగించింది. లూపిన్ రైతులు మరియు పెంపకందారులకు అత్యంత ముఖ్యమైన విషయం ఏమిటంటే, కోలెట్రిచమ్ లూపినీ (బోండార్) నిరెన్‌బర్గ్, ఫీలర్ & హేగెడోర్న్13 అనే వ్యాధికారక శిలీంధ్రం వల్ల కలిగే ఆంత్రాక్నోస్ వ్యాధి కనిపించడం. లూపిన్ రైతులు మరియు పెంపకందారులకు అత్యంత ముఖ్యమైన విషయం ఏమిటంటే, కోలెట్రిచమ్ లూపినీ (బోండార్) నిరెన్‌బర్గ్, ఫీలర్ & హేగెడోర్న్13 అనే వ్యాధికారక శిలీంధ్రం వల్ల కలిగే ఆంత్రాక్నోస్ వ్యాధి కనిపించడం. ఫెర్మెరోవ్ మరియు సెలెక్సియోనెరోవ్ లుపినా బైలో పోయావ్లెనియెన్ యాంట్రాక్నోజా, వాగ్నోవా గ్రిబ్కామ్ కొల్లెటోట్రిచమ్ లుపిని (బోండార్) నిరెన్‌బర్గ్, ఫీలర్ & హగెడోర్న్13. కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ (బోండార్) నిరెన్‌బర్గ్, ఫీలర్ & హేగెడోర్న్13 అనే వ్యాధికారక శిలీంధ్రం వల్ల కలిగే ఆంత్రాక్నోస్ వ్యాధి ఆవిర్భావం లూపిన్ రైతులు మరియు పెంపకందారులకు అత్యంత ముఖ్యమైనది.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原，它是由病原) నిరెన్‌బర్గ్, ఫీలర్ & హగెడోర్న్13 引起的。对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原(బోండార్)嵵జుట్టు。1 ఫెర్మెరోవ్ మరియు సెలెక్సియోనెరోవ్ ల్యుపినా యావ్లాయెట్సియా పోయావ్లేని యాంట్రాక్నోజా, విమోచన గ్రిబ్కోమ్ కొల్లెటోట్రిచమ్ లుపిని (బోండార్) నిరెన్‌బర్గ్, ఫీలర్ & హాగెడోర్న్13. కొలెట్రిచమ్ లూపినీ (బోండార్) నిరెన్‌బర్గ్, ఫీలర్ & హేగెడోర్న్13 అనే వ్యాధికారక శిలీంధ్రం వల్ల కలిగే ఆంత్రాక్నోస్ వ్యాధి వ్యాప్తి చెందడం లూపిన్ రైతులు మరియు పెంపకందారులకు అత్యంత ఆశ్చర్యకరమైన విషయం.ఈ వ్యాధికి సంబంధించిన తొలి నివేదికలు బ్రెజిల్ మరియు యునైటెడ్ స్టేట్స్ నుండి వచ్చాయి, వరుసగా 1912 మరియు 1929లో విలక్షణ లక్షణాలు కనిపించాయి. అయితే, సుమారు 30 సంవత్సరాల తర్వాత, ఈ వ్యాధికారకానికి Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. అని పేరు పెట్టారు. & Sacc., టెలియోమార్ఫ్ గ్లోమెరెల్లా సింగులాటా (స్టోన్‌మ్యాన్) స్పాల్డ్. & Sacc., టెలియోమార్ఫ్ గ్లోమెరెల్లా సింగులాటా (స్టోన్‌మ్యాన్) స్పాల్డ్. & సాక్., టెలియోమోర్ఫ్ గ్లోమెరెల్లా సింగ్యులాటా (స్టోన్‌మ్యాన్) స్పాల్డ్. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld యొక్క టెలియోమార్ఫ్. & సాక్.，有目的形态的గ్లోమెరెల్లా సింగ్యులాటా (స్టోన్‌మ్యాన్) స్పాల్డ్。 & సాక్.，有目的形态的గ్లోమెరెల్లా సింగ్యులాటా (స్టోన్‌మ్యాన్) స్పాల్డ్。 & సాక్., గ్లోమెరెల్లా సింగ్యులాటా (స్టోన్‌మ్యాన్) స్పాల్డ్ మరియు డెలెనాప్రావ్లెన్నోయ్ మోర్‌ఫోలాగీలు. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld in Targeted Morphology. & హెచ్. ష్రెంక్,. & హెచ్. ష్రెంక్, .మరియు హెచ్. ష్రెంక్. & H.施伦克,. & H.施伦克,.మరియు హెచ్. ష్లెంక్, .20వ శతాబ్దం మధ్యలో చేసిన ప్రాథమిక వ్యాధి ఫినోటైపింగ్, NLL మరియు పసుపు లుపిన్ (L. luteus L.) రకాలలో కొంత నిరోధకతను చూపించింది, కానీ పరీక్షించిన అన్ని తెల్ల లుపిన్ (L. albus L.) రకాలు అధిక సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉన్నాయి¹⁵,¹⁶. ఆంత్రాక్నోస్ వ్యాధి అభివృద్ధికి పెరిగిన వర్షపాతం (గాలిలో తేమ) మరియు ఉష్ణోగ్రత (12-28°C పరిధిలో) కారణమని అధ్యయనాలు చూపించాయి, ఇది అధిక ఉష్ణోగ్రతల వద్ద నిరోధకత ఉల్లంఘనకు దారితీస్తుంది¹⁷,¹⁸. వాస్తవానికి, అధిక తేమ పరిస్థితులలో, 12°C (16 గంటలు) వద్ద కంటే 24°C (4 గంటలు) వద్ద కోనిడియా మొలకెత్తి వ్యాధి ప్రారంభం కావడానికి నాలుగు రెట్లు తక్కువ సమయం పట్టింది¹⁹. అందువల్ల, కొనసాగుతున్న గ్లోబల్ వార్మింగ్ ఆంత్రాక్నోస్ వ్యాప్తికి దారితీసింది. అయితే, ఈ వ్యాధి ఫ్రాన్స్ (1982) మరియు ఉక్రెయిన్ (1983)లలో రాబోయే ముప్పుకు సూచనగా గమనించబడింది, కానీ ఆ సమయంలో లుపిన్ పరిశ్రమ దీనిని పట్టించుకోలేదని స్పష్టమవుతోంది²⁰,²¹. కొన్ని సంవత్సరాల తరువాత, ఈ వినాశకరమైన వ్యాధి ప్రపంచవ్యాప్తంగా వ్యాపించి, ఆస్ట్రేలియా, పోలాండ్ మరియు జర్మనీ వంటి ప్రధాన లూపిన్-ఉత్పత్తి చేసే దేశాలను కూడా ప్రభావితం చేసింది22,23,24. 1990ల మధ్యలో ఆంత్రాక్నోస్ వ్యాప్తి తరువాత, విస్తృతమైన స్క్రీనింగ్ ఫలితంగా NLL19 నమూనాలలో అనేక నిరోధక దాతలను గుర్తించారు. ఆంత్రాక్నోస్‌కు NLL నిరోధకత వివిధ జెర్మ్‌ప్లాజమ్ మూలాలలో కనిపించే రెండు వేర్వేరు ప్రబలమైన అల్లెల్స్ ద్వారా నియంత్రించబడుతుంది: తంజిల్ మరియు వోంగా రకాల్లో Lanr1 మరియు మండలే రకంలో AnMan25,26. ఈ అల్లెల్స్, ప్రజనన కార్యక్రమాలలో నిరోధక జెర్మ్‌ప్లాజమ్ ఎంపికకు మద్దతు ఇచ్చే మాలిక్యులర్ మార్కర్‌లకు పూరకంగా ఉంటాయి25,26,27,28,29,30. Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న నిరోధక బ్రీడింగ్ లైన్ 83A:476ను, ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత కోసం వేరుపడే RIL జనాభాను పొందడానికి సున్నితమైన వైల్డ్ లైన్ P27255తో క్రాస్ చేశారు, ఇది Lanr1 లోకస్‌ను క్రోమోజోమ్ NLL-1131, 32, 33కు కేటాయించడాన్ని సాధ్యం చేసింది. ఆంత్రాక్నోస్‌కు ఇరువైపులా ఉన్న నిరోధక లోకస్‌ల నుండి లింకేజ్ మ్యాప్ మార్కర్‌లను జన్యుపరమైన ఫ్రేమ్‌వర్క్, NLLతో అమర్చినప్పుడు, మూడు అల్లెల్స్ అన్నీ ఒకే క్రోమోజోమ్ (NLL-11)పై ఉన్నాయని, కానీ వేర్వేరు స్థానాల్లో ఉన్నాయని వెల్లడైంది29,34,35. అయితే, RILల సంఖ్య తక్కువగా ఉండటం మరియు మార్కర్‌లకు, సంబంధిత అల్లెల్స్‌కు మధ్య జన్యుపరమైన దూరం ఎక్కువగా ఉండటం వల్ల, వాటి అంతర్లీన జన్యువుల గురించి విశ్వసనీయమైన నిర్ధారణలకు రాలేము. మరోవైపు, లూపిన్‌లలో రివర్స్ జెనెటిక్స్ వాడకం వాటి చాలా తక్కువ పునరుత్పత్తి సామర్థ్యం కారణంగా కష్టంగా ఉంటుంది, ఇది జన్యు మార్పులను క్లిష్టతరం చేస్తుంది37.
83A:476 (Lanr1) మరియు Mandelup (AnMan) వంటి, హోమోజైగస్ స్థితిలో కావలసిన అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న పెంపకం చేయబడిన జెర్మ్‌ప్లాజమ్ అభివృద్ధి, అడవి జనాభాలో వ్యతిరేక అల్లెల్ కలయికలు ఉన్నప్పటికీ ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతను అధ్యయనం చేయడానికి మార్గం సుగమం చేసింది. అణు యంత్రాంగాల అవకాశాలు. నిర్దిష్ట జన్యురకాల ద్వారా ఉత్పన్నమయ్యే రక్షణ ప్రతిస్పందనలను పోల్చండి. ఈ అధ్యయనం C. lupini టీకాకు NLL యొక్క ప్రారంభ ట్రాన్స్క్రిప్టోమ్ ప్రతిస్పందనను మూల్యాంకనం చేసింది. మొదట, Lanr1 మరియు AnMan అల్లెల్స్‌ను గుర్తించే అణు మార్కర్లను ఉపయోగించి 215 లైన్‌లను కలిగి ఉన్న యూరోపియన్ NLL జెర్మ్‌ప్లాజమ్ ప్యానెల్‌ను స్క్రీన్ చేశారు. ఆ తర్వాత, నియంత్రిత పరిస్థితులలో, అణు మార్కర్ల కోసం ముందుగా ఎంపిక చేయబడిన 50 NLL లైన్‌లపై ఆంత్రాక్నోస్ ఫినోటైపింగ్ నిర్వహించబడింది. ఈ ప్రయోగాల ఆధారంగా, ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత మరియు Lanr1/AnMan అల్లెలిక్ కూర్పులో విభిన్నంగా ఉన్న నాలుగు లైన్‌లను రెండు పరిపూరక విధానాలను ఉపయోగించి డిఫరెన్షియల్ డిఫెన్స్ జీన్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్రొఫైలింగ్ కోసం ఎంపిక చేశారు: హై-త్రూపుట్ RNA సీక్వెన్సింగ్ మరియు రియల్-టైమ్ PCR క్వాంటిఫికేషన్.
Lanr1 (Anseq3 మరియు Anseq4) మరియు AnMan (AnManM1) మార్కర్లతో NLL జెర్మ్‌ప్లాజమ్ (N = 215) సమితిని స్క్రీనింగ్ చేయగా, కేవలం ఒకే ఒక లైన్ (95726, సలామాంకా-బి సమీపంలో) మాత్రమే అన్ని మార్కర్లకు "నిరోధక" అల్లెల్‌ను విస్తరింపజేసిందని తేలింది. అయితే, 158 (~73.5%) లైన్లలో అన్ని మార్కర్ల నిష్పత్తిలో "'సున్నితమైన' అల్లెల్స్ ఉనికి" కనుగొనబడింది. పదమూడు లైన్లు Lanr1 మార్కర్ యొక్క రెండు "నిరోధక" అల్లెల్స్‌ను ఉత్పత్తి చేయగా, 8 లైన్లు AnMan మార్కర్ యొక్క "నిరోధక" అల్లెల్స్‌ను ఉత్పత్తి చేశాయి (అనుబంధ పట్టిక S1). రెండు లైన్లు Anseq3 మార్కర్‌కు హెటెరోజైగస్‌గా ఉండగా, ఒకటి AnManM1 మార్కర్‌కు హెటెరోజైగస్‌గా ఉంది. 42 లైన్లు (19.5%) Anseq3 మరియు Anseq4 అల్లెల్స్ యొక్క వ్యతిరేక దశలను కలిగి ఉన్నాయి, ఇది ఈ రెండు లోసైల మధ్య అధిక పునఃసంయోగ పౌనఃపున్యాన్ని సూచిస్తుంది. నియంత్రిత పరిస్థితులలోని ఆంత్రాక్నోస్ ఫినోటైప్‌లు (అనుబంధ పట్టిక S2) పరీక్షించిన జన్యురకాల నిరోధకతలో వైవిధ్యాన్ని వెల్లడించాయి, ఇది ఆంత్రాక్నోస్ తీవ్రతలో ప్రతిబింబించింది. సగటు స్కోర్‌లలో తేడాలు 1.8 (మితంగా నిరోధకత) నుండి 6.9 (సున్నితమైనది) వరకు మరియు మొక్కల బరువులో తేడాలు 0.62 (సున్నితమైనది) నుండి 4.45 గ్రా (నిరోధకత) వరకు ఉన్నాయి. ప్రయోగం యొక్క రెండు పునరావృత్తులలో గమనించిన విలువల మధ్య (వ్యాధి తీవ్రత స్కోర్‌లకు 0.51, P = 0.00017 మరియు మొక్క బరువుకు 0.61, P < 0.0001) అలాగే ఈ రెండు పారామితుల మధ్య (− 0.59 మరియు − 0.77, P < 0.0001) గణనీయమైన సహసంబంధం ఉంది. ప్రయోగం యొక్క రెండు పునరావృత్తులలో గమనించిన విలువల మధ్య (వ్యాధి తీవ్రత స్కోర్‌లకు 0.51, P = 0.00017 మరియు మొక్క బరువుకు 0.61, P < 0.0001) అలాగే ఈ రెండు పారామితుల మధ్య (− 0.59 మరియు − 0.77, P < 0.0001) గణనీయమైన సహసంబంధం ఉంది. వియవ్లేనా డోస్టోవర్నయా కోరల్యాసియా మెగ్డూ జానచెనియామి, నాబ్లిడామిమి వి ద్వూ పోవ్టోర్నోస్ట్యాహ్ ఎక్సపెరిమెంట్,510 త్యాజెస్టి బోలెజ్ని, P = 0,00017 и 0,61 для массы rasteniya, P <0,0001) 0,0001). ప్రయోగం యొక్క రెండు పునరావృతాలలో గమనించిన విలువల మధ్య (వ్యాధి తీవ్రత స్కోర్‌లకు 0.51, P = 0.00017 మరియు మొక్క బరువుకు 0.61, P < 0.0001), అలాగే ఈ రెండు పారామితుల మధ్య (- 0.59 మరియు -0.77, P < 0.0001) గణనీయమైన సహసంబంధం కనుగొనబడింది.మీరు 0.00017，植物重量为0.61，P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77,P <0.0001)在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 ఉదాహరణ分为 0.51 , p = 0.00017 , 植物 为 为 0.61 , p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （5-09-5和– 0.59 和– 0.59 和- 0.77, P <0.0001)。 నాబ్లిడాలస్ ప్రఖ్యాతి గాంచిన కొర్రెలియా మెగ్డూ జాన్చెనియమి, నాబ్లిడామిమి వి ద్వూ పోవ్టోర్నోస్ట్యాస్ (సాంకేతికత 0,51, P = 0,00017 మరియు మాస్సా రాస్టేనియ 0,61, పి <0,0001), మరియు మేఘడు ఎటిమి двумя PARAMETRAMI (-0,59 и -0,0001) 0,77, P <0,0001. రెండుసార్లు గమనించిన విలువలు (వ్యాధి తీవ్రత స్కోరు 0.51, P = 0.00017 మరియు మొక్క బరువు 0.61, P < 0.0001) మధ్య మరియు ఈ రెండు పారామితుల మధ్య (-0.59 మరియు -0.0001) 0.77, P<0.0001 మధ్య గణనీయమైన సహసంబంధం ఉంది. ).వ్యాధికి గురయ్యే మొక్కలలో కనిపించే సాధారణ లక్షణాలలో, కాండం "గొర్రెల కాపరి విల్లు" ఆకారాన్ని పోలి వంకరలు తిరగడం, ఆ తర్వాత నారింజ/గులాబీ రంగు స్పోరోజోయిట్‌లతో కూడిన అండాకారపు మచ్చలు ఏర్పడటం వంటివి ఉంటాయి (అనుబంధ చిత్రం 1). Lanr1 (83A:476 మరియు Tanjil) మరియు AnMan (Mandelup) జన్యువులను కలిగి ఉన్న ఆస్ట్రేలియన్ రకాలు మధ్యస్థ నిరోధకతను కలిగి ఉంటాయి (0.0331 మరియు 0.0036). "నిరోధక" Lanr1 మరియు/లేదా AnMan అల్లెల్స్‌ను కూడా కలిగి ఉన్న కొన్ని లైన్లు ఈ వ్యాధి లక్షణాలను చూపుతాయి.
ఆసక్తికరంగా, ఎటువంటి “నిరోధక” మార్కర్ అల్లెల్ లేని కొన్ని NLL లైన్లు అధిక స్థాయి ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతను (Lanr1 లేదా AnMan జన్యురకాలతో పోల్చదగిన లేదా అంతకంటే ఎక్కువ) వెల్లడించాయి, ఉదాహరణకు బోరెగిన్ (రెండు పారామితులకు P విలువ < 0.0001), బోజార్ (స్కోర్‌కు P విలువ < 0.0001 మరియు మొక్క బరువుకు 0.001) మరియు పాపులేషన్ B-549/79b (స్కోర్‌కు P విలువ < 0.0001 మరియు బరువుకు గణనీయమైనది కాదు). ఆసక్తికరంగా, ఎటువంటి “నిరోధక” మార్కర్ అల్లెల్ లేని కొన్ని NLL లైన్లు అధిక స్థాయి ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతను (Lanr1 లేదా AnMan జన్యురకాలతో పోల్చదగిన లేదా అంతకంటే ఎక్కువ) వెల్లడించాయి, ఉదాహరణకు బోరెగిన్ (రెండు పారామితులకు P విలువ < 0.0001), బోజార్ (స్కోర్‌కు P విలువ < 0.0001 మరియు మొక్క బరువుకు 0.001) మరియు పాపులేషన్ B-549/79b (స్కోర్‌కు P విలువ < 0.0001 మరియు బరువుకు గణనీయమైనది కాదు). ఆంతెరెస్నో, చ్టో నెస్కోల్కో లినియ్ NLL, లిషెనిహ్ కాకోగో-లైబో «రెజిస్టెన్ట్నోగో» మార్కర్నోగో అలీలియా, పోకస్ устойчивости к అంట్రాక్నోజూ (సోపోస్టవిమ్ లేదా బోలే వైసోకియ్, CHEM для GANOTIPOV Lanr1 లేదా AnMan), టాకిక్ కాక్ బోరెజిన్ (ప్రధానంగా 01,000 P1000 параметров), బోజార్ (జనాఛేని పి <0,0001 для оценки и 0,001 для massы rasteniya) మరియు పోపులియా B-549/79b (ప్రజాస్వామ్య P <0,0001 для оценки и носение). ఆసక్తికరంగా, 'నిరోధక' మార్కర్ అల్లెల్ లేని అనేక NLL లైన్లు ఆంత్రాక్నోస్‌కు అధిక స్థాయి నిరోధకతను చూపించాయి (లాన్‌ఆర్1 లేదా యాన్‌మాన్ జన్యురకాలతో పోల్చదగిన లేదా అంతకంటే ఎక్కువ), ఉదాహరణకు బోరెజైన్ (రెండు పారామితులకు P విలువ < 0.0001), బోజార్ (మూల్యాంకనానికి P విలువ < 0.0001 మరియు మొక్క బరువుకు 0.001) మరియు పాపులేషన్ B-549/79b (మూల్యాంకనానికి P విలువ < 0.0001 మరియు బరువుకు గణనీయమైనది కాదు).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽痸或AnMan 基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001,植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001,重量不昍 ఎటువంటి “యాంటిజెనిక్” మార్కర్లు లేని కొన్ని NLL వ్యవస్థలు అధిక క్షితిజ సమాంతర నిరోధకతను (Lanr1 లేదా AnMan జన్యువులకు సమానమైన లేదా అంతకంటే ఎక్కువ) ప్రదర్శించడం ఆసక్తికరమైన విషయం, ఉదాహరణకు బోరెజైన్ (రెండు పారామితులు P < 0.0001), బోజార్ (P విలువ < 0.0001, మొక్క బరువు 0.001) మరియు స్ట్రెయిన్ B-549/79b (P విలువ < 0.0001, బరువు గణనీయమైనది కాదు). ఇంటరెస్నో, హెచ్‌టో నెకోటోరీ లినిస్ ఎన్‌ఎల్‌ఎల్, లిషెనియస్ కాకిహ్-లైబో మార్కర్న్ అల్లెలీ «రెజిస్టెన్స్‌నోస్టి», పోకవస్ устойчивости к అంట్రాక్నోజూ (స్రవ్నిమీ లేదా విషె, ఛేమ్ యు గెనోటిపోవ్ లాన్ర్1 లేదా ఆన్‌మాన్), టాకీ కాక్ బోరెజిన్ (జానచెనీ పి డోర్ బోర్జిన్, (ప్రసిద్ధ పి <0,0001, మాస్ రాస్టేనియా 0,001) మరియు популяция B-549/79b (Oценка P-значение <0,0001, масса незначительна). ఆసక్తికరంగా, 'నిరోధకత' మార్కర్ అల్లెల్స్ లేని కొన్ని NLL లైన్లు అధిక స్థాయిలో ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతను (Lanr1 లేదా AnMan జన్యురకాలతో పోల్చదగిన లేదా అంతకంటే ఎక్కువ) చూపించాయి, ఉదాహరణకు బోరెగిన్ (రెండు పారామితులకు P విలువ <0.0001), బోజార్ (P-విలువ < 0.0001, మొక్క బరువు 0.001) మరియు పాపులేషన్ B-549/79b (P-విలువ < 0.0001, బరువు గణనీయమైనది కాదు).ఈ దృగ్విషయం నిరోధకతకు ఒక నూతన జన్యు మూలం ఉండే అవకాశం ఉందని సూచిస్తుంది, ఇది మార్కర్ జన్యురూపాలు మరియు వ్యాధి దృశ్యరూపాల మధ్య గమనించిన సహసంబంధం లేకపోవడాన్ని వివరిస్తుంది (P విలువలు ~0.42 నుండి ~0.98 వరకు). అందువల్ల, కోల్మోగోరోవ్-స్మిర్నోవ్ పరీక్ష ప్రకారం, ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతకు సంబంధించిన డేటా స్కోర్‌లు (P-విలువలు 0.25 మరియు 0.11) మరియు మొక్క ద్రవ్యరాశి (P-విలువలు 0.47 మరియు 0.55) పరంగా సుమారుగా సాధారణ పంపిణీని కలిగి ఉందని తేలింది. ఇది Lanr1 మరియు AnMan కంటే ఎక్కువ అలెల్స్ ఇందులో పాలుపంచుకుంటున్నాయని నేను ప్రతిపాదించడానికి సూచిస్తుంది.
ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత స్క్రీనింగ్ ఫలితాల ఆధారంగా, ట్రాన్స్క్రిప్టోమ్ విశ్లేషణ కోసం 4 రకాలను ఎంపిక చేశారు: 83A:476, బోరెగిన్, మాండెలుప్, మరియు పాపులేషన్ 22660. ఈ రకాలు మునుపటి పరీక్షలో ఉన్నట్లే ఉన్నాయని నిర్ధారించుకున్న తర్వాత, RNA సీక్వెన్సింగ్ ద్వారా టీకా ప్రయోగాలలో ఆంత్రాక్స్ నిరోధకత కోసం వాటిని తిరిగి పరీక్షించారు. స్కోర్ విలువలు ఈ క్రింది విధంగా ఉన్నాయి: బోరెగిన్ (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), మాండెలుప్ (3.82 ± 1.42) మరియు పాపులేషన్ 22660 (6.11 ± 1.29).
ఇల్యూమినా నోవాసీక్ 6000 ప్రోటోకాల్ ప్రతి నమూనాకు సగటున 40.5 Mread జతలను (29.7 నుండి 54.4 Mreads) సాధించింది (అనుబంధ పట్టిక S3). రిఫరెన్స్ సీక్వెన్స్‌లో అలైన్‌మెంట్ స్కోర్‌లు 75.5% నుండి 88.6% వరకు ఉన్నాయి. బయోలాజికల్ రెప్లికేట్‌ల మధ్య ప్రయోగాత్మక వేరియంట్‌ల మధ్య రీడ్ కౌంట్ డేటా యొక్క సగటు సహసంబంధం 0.812 నుండి 0.997 వరకు ఉంది (సగటు 0.959). విశ్లేషించిన 35,170 జన్యువులలో, 2917 జన్యువులు ఎటువంటి వ్యక్తీకరణను చూపించలేదు, మరియు మిగిలిన 4785 జన్యువులు అతి తక్కువ స్థాయిలో (బేస్ మీన్ < 5) వ్యక్తీకరించబడ్డాయి. విశ్లేషించిన 35,170 జన్యువులలో, 2917 జన్యువులు ఎటువంటి వ్యక్తీకరణను చూపించలేదు, మరియు మిగిలిన 4785 జన్యువులు అతి తక్కువ స్థాయిలో (బేస్ మీన్ < 5) వ్యక్తీకరించబడ్డాయి. Из 35 170 ప్రోనాలైజేషన్ జెనోవ్ 2917 కాదు ప్రోవాలీ ఎక్స్‌ప్రెసిలు, ఎ ఓస్టాల్ 4785 జెనోవ్ ఎక్సప్రెసిస్ నిస్సందేహంగా ఉరోవ్నే среднее <5). విశ్లేషించిన 35,170 జన్యువులలో, 2917 జన్యువులు ఎటువంటి వ్యక్తీకరణను చూపించలేదు మరియు మిగిలిన 4785 జన్యువులు అతి తక్కువ స్థాయిలో (బేస్ మీన్ <5) వ్యక్తీకరించబడ్డాయి.在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785个基因的表达可以忽略不计（基本平均值< 5）。35,170 Из 35 170 ప్రోనాలైజేషన్ జెనోవ్ 2917 కాదు ఎక్స్‌ప్రెస్సిరోవాలిస్, ఎ ఓస్టాలియో 4785 జెనోవ్ ఎమిలీస్ నెసంగ్నాస్ (బాజోవో స్రెడ్నీ значение <5). విశ్లేషించిన 35,170 జన్యువులలో, 2917 జన్యువులు వ్యక్తీకరించబడలేదు మరియు మిగిలిన 4785 జన్యువులు అతి తక్కువ వ్యక్తీకరణను కలిగి ఉన్నాయి (బేస్ మీన్ <5).ఈ విధంగా, ప్రయోగం సమయంలో వ్యక్తీకరించబడినవిగా పరిగణించబడిన జన్యువుల సంఖ్య (బేస్ మీన్ ≥ 5) 27,468 (78.1%) (సప్లిమెంటరీ టేబుల్ S4).
మొదటి సమయ బిందువు నుండి, అన్ని NLL లైన్లు C. లూపిని (స్ట్రెయిన్ Col-08) టీకాకు ట్రాన్స్క్రిప్టోమ్‌ను పునఃప్రోగ్రామింగ్ చేయడం ద్వారా ప్రతిస్పందించాయి (పట్టిక 1), అయినప్పటికీ, లైన్ల మధ్య గణనీయమైన తేడాలు గమనించబడ్డాయి. ఈ విధంగా, నిరోధక లైన్ 83A:476 (Lanr1 జన్యువును కలిగి ఉన్నది) మొదటి సమయ బిందువు (6 hpi) వద్ద గణనీయమైన ట్రాన్స్క్రిప్టోమ్ పునఃప్రోగ్రామింగ్‌ను చూపించింది, ఈ సమయ బిందువు వద్ద ఇతర సమయ బిందువులతో పోలిస్తే వేరుచేయబడిన అప్- మరియు డౌన్-జన్యువుల సంఖ్యలో 31-69 రెట్లు పెరుగుదల కనిపించింది. అదనంగా, ఈ గరిష్ఠ స్థాయి స్వల్పకాలికమైనది, ఎందుకంటే రెండవ సమయ బిందువు (12 hpi) వద్ద కేవలం కొన్ని జన్యువుల వ్యక్తీకరణ మాత్రమే గణనీయంగా మార్పు చెంది ఉంది. ఆసక్తికరంగా, అంటుకట్టే పరీక్షలో అధిక స్థాయి నిరోధకతను చూపిన బోరెజైన్, ప్రయోగ సమయంలో అటువంటి భారీ ట్రాన్స్క్రిప్షనల్ పునఃప్రోగ్రామింగ్‌కు గురికాలేదు. అయినప్పటికీ, 12 HPI వద్ద బోరెజైన్ మరియు 83A:476 లలో విభిన్నంగా వ్యక్తీకరించబడిన జన్యువుల (DEG) సంఖ్య సమానంగా ఉంది. మాండెలుప్ మరియు జనాభా 22660 రెండూ చివరి సమయ బిందువు (48 l/s) వద్ద DEG శిఖరాలను చూపించాయి, ఇది రక్షణ ప్రతిస్పందనలలో సాపేక్ష ఆలస్యాన్ని సూచిస్తుంది.
మిగతా అన్ని లైన్‌లతో పోలిస్తే, 6 HPI వద్ద C. lupini కి ప్రతిస్పందనగా 83A:476 భారీ ట్రాన్స్‌క్రిప్టోమ్ రీప్రోగ్రామింగ్‌కు గురైనందున, ఈ సమయ బిందువు వద్ద గమనించిన DEGలలో ~91% వంశ-నిర్దిష్టమైనవి (పటం 1). అయితే, అధ్యయన లైన్‌ల మధ్య ప్రారంభ ప్రతిస్పందనలలో కొంత అతివ్యాప్తి ఉంది, ఎందుకంటే బోరెజైన్, మాండెలుప్ మరియు పాపులేషన్ 22660 లలో వరుసగా 68.5%, 50.9% మరియు 52.6% DEGలు, నిర్దిష్ట సమయాలలో 83A:476లో కనుగొనబడిన వాటితో అతివ్యాప్తి చెందాయి. అయితే, ఈ DEGలు 83A:476ను ఉపయోగించి ప్రస్తుతం గుర్తించిన అన్ని DEGలలో కేవలం ఒక చిన్న భాగాన్ని (0.97–1.70%) మాత్రమే కలిగి ఉన్నాయి. అదనంగా, ఈ సమయంలో అన్ని లైన్‌ల నుండి 11 DEGలు పొందికగా ఉన్నాయి (అనుబంధ పట్టికలు S4-S6), వీటిలో మొక్కల రక్షణ ప్రతిస్పందనల సాధారణ భాగాలు ఉన్నాయి: లిపిడ్ ట్రాన్స్‌ఫర్ ప్రోటీన్ (TanjilG_32225), ఎండోగ్లూకాన్-1,3-β-గ్లూకోసైడ్ ఎంజైమ్ (TanjilG_23384), SAM22 వంటి రెండు ఒత్తిడి-ప్రేరిత ప్రోటీన్లు (TanjilG_31528 మరియు TanjilG_31531), బేసిక్ లాటెక్స్ ప్రోటీన్ (TanjilG_32352), మరియు రెండు గ్లైసిన్-రిచ్ స్ట్రక్చరల్ సెల్ వాల్ ప్రోటీన్లు (TanjilG_19701 మరియు TanjilG_19702). 24 HPI వద్ద 83A:476 మరియు బోరెజైన్ మధ్య (మొత్తం 16-38% DEG) మరియు 48 HPI వద్ద మాండెలుప్ మరియు పాపులేషన్ 22660 మధ్య (మొత్తం 14-20% DEG) ట్రాన్స్క్రిప్టోమ్ ప్రతిస్పందనలలో సాపేక్షంగా అధిక అతివ్యాప్తి కూడా ఉంది.
1999లో పోలాండ్‌లోని వియర్‌జెనిస్‌లోని లూపిన్ పొలాల నుండి పొందిన కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ (Col-08 స్ట్రెయిన్)తో టీకాలు వేసిన సన్న ఆకుల లూపిన్ (NLL) లైన్‌లలో భిన్నంగా వ్యక్తమయ్యే జన్యువుల (DEG) సంఖ్యను చూపించే వెన్ రేఖాచిత్రం. విశ్లేషించబడిన NLL లైన్‌లు: 83A:476 (నిరోధకత కలిగినది, Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), బోరెగిన్ (నిరోధకత కలిగినది, జన్యు నేపథ్యం తెలియదు), మాండెలుప్ (మితమైన నిరోధకత కలిగినది, AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది) మరియు పాపులేషన్ 22660 (చాలా సున్నితమైనది). hpi అనే సంక్షిప్త పదం టీకా వేసిన తర్వాత గంటలను సూచిస్తుంది. గ్రాఫ్‌ను సరళీకరించడానికి సున్నా విలువలు తొలగించబడ్డాయి.
6 hpi వద్ద అధికంగా వ్యక్తీకరించబడిన జన్యువుల సమితిని ప్రామాణిక R జన్యు డొమైన్‌ల ఉనికి కోసం విశ్లేషించారు (అనుబంధ పట్టిక S7). ఈ అధ్యయనం 83A:476 వద్ద మాత్రమే NBS-LRR డొమైన్‌లతో క్లాసిక్ వ్యాధి నిరోధక జన్యువుల ట్రాన్స్‌క్రిప్టోమ్ ప్రేరణను వెల్లడించింది. ఈ సమితిలో ఒక TIR-NBS-LRR జన్యువు (tanjilg_05042), ఐదు CC-NBS-LRR జన్యువులు (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, మరియు tanjilg_16162), మరియు నాలుగు NBS-LR (tanjilg_16162), మరియు నాలుగు NBS-LRRE (tanjilg_16162) అలాగే నాలుగు NBS-Lrr (tanjilg_16162) మరియు నాలుగు NBS-LRR (TANJILG_16162) ఉన్నాయి. ఈ జన్యువులన్నీ సంరక్షించబడిన క్రమాలలో అమర్చబడిన ప్రామాణిక డొమైన్‌లను కలిగి ఉన్నాయి. NBS-LRR డొమైన్ జన్యువులతో పాటు, 6 hpi వద్ద అనేక RLL కైనేజ్‌లు క్రియాశీలమయ్యాయి, అవి: బోరెగిన్‌లో ఒకటి (TanjilG_19877), మాండెలుప్‌లో రెండేసి (TanjilG_07141 మరియు TanjilG_19877) మరియు పాపులేషన్ 22660లో (TanjilG_09014 మరియు TanjilG_10361), మరియు 83A 27:476లో రెండు.
C. lupini (స్ట్రెయిన్ Col-08) తో టీకా వేయడం వలన వ్యక్తీకరణలో గణనీయంగా మార్పు చెందిన జన్యువులను జీన్ ఆంటాలజీ (GO) సుసంపన్నత విశ్లేషణకు గురిచేశారు (అనుబంధ పట్టిక S8). అత్యంత తరచుగా అతిగా ప్రాతినిధ్యం వహించిన జీవ ప్రక్రియ పదం “GO:0006952 రక్షణ ప్రతిస్పందన”, ఇది 16 (సమయం × లైన్) కలయికలలో 6 లో అధిక ప్రాముఖ్యతతో (P విలువ < 0.001) కనిపించింది (Fig. 2). అత్యంత తరచుగా అతిగా ప్రాతినిధ్యం వహించిన జీవ ప్రక్రియ పదం “GO:0006952 రక్షణ ప్రతిస్పందన”, ఇది 16 (సమయం × లైన్) కలయికలలో 6 లో అధిక ప్రాముఖ్యతతో (P విలువ < 0.001) కనిపించింది (Fig. 2). నయిబోలీ చాస్టో ప్రెజెంటర్ ప్రెడ్స్టావ్లెనిమ్ టెర్మినోమ్ బయోలాగిచెస్కోగో ప్రోషెస్సా బైల్ «GO: 0006952 ప్రకటన, » పోస్ట్ 6 లేదా 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (రిస్. 2). అత్యంత తరచుగా అతిగా ప్రాతినిధ్యం వహించిన జీవ ప్రక్రియ పదం 'GO:0006952 రక్షణ ప్రతిస్పందన', ఇది 16 (సమయం × వంశం) కలయికలలో 6 లో అధిక ప్రాముఖ్యతతో (P విలువ < 0.001) కనిపించింది (Fig. 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16个（时间×线）组合中的6 个中，具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）。 అత్యంత ప్రాతినిధ్యం వహించే జీవ ప్రక్రియ పదం “GO:0006952 రక్షణ ప్రతిస్పందన”, ఇది 16 (సమయం×రేఖ) కలయికలలో 6 లో అధిక ప్రాముఖ్యతతో (P విలువ < 0.001) కనిపిస్తుంది (పటం 2). నాయిబోలీ చాస్టో ప్రెజెర్నో ప్రెడ్స్టావ్లెనిమ్ టెర్మినోమ్ బయోలాగిచెస్కోగో ప్రోషెస్సా బైల్ «GO: 0006952 డిఫెన్స్ రెస్పాన్స్» в 6 из 16 కాంబినేషన్ (వ్రేమ × линия) с высокой значимостью (значение పి <0,001) (రిస్. 2). అత్యంత తరచుగా అతిగా ప్రాతినిధ్యం వహించిన జీవ ప్రక్రియ పదం 'GO:0006952 డిఫెన్స్ రెస్పాన్స్', ఇది 16 కలయికలలో (సమయం × లైన్) 6 కలయికలలో అధిక ప్రాముఖ్యతతో (P విలువ < 0.001) కనిపించింది (Fig. 2).ఈ పదం 83A: 476 మరియు బోరెజైన్‌లలో రెండు సమయ బిందువుల వద్ద (6 మరియు 24 hpi) మరియు మాండెలుప్ మరియు పాపులేషన్ 22660లలో ఒక సమయ బిందువు వద్ద (వరుసగా 12 మరియు 6 hpi) అధికంగా కనిపించింది. ఇది ఊహించిన ఫలితమే, ఇది నిరోధక లైన్‌ల యొక్క యాంటీఫంగల్ ప్రతిస్పందనను హైలైట్ చేస్తుంది. అదనంగా, 83A:476, "GO:0055114 రెడాక్స్ ప్రాసెస్" అనే పదం ద్వారా సూచించబడిన ఆక్సిడేటివ్ బర్స్ట్‌కు సంబంధించిన జన్యువులను వేగంగా ప్రేరేపించడం ద్వారా C. లూపినీకి ప్రతిస్పందించింది, ఇది ఒక నిర్దిష్ట రక్షణ ప్రతిస్పందనను సూచిస్తుంది, అయితే బోరెజైన్ 'GO' అనే పదానికి సంబంధించిన నిర్దిష్ట రక్షణ ప్రతిస్పందనలను వెల్లడించింది. :0006950 ఒత్తిడి ప్రతిస్పందన”. జనాభా 22660 ద్వితీయ జీవక్రియలను కలిగి ఉన్న క్షితిజ సమాంతర నిరోధక ప్రతిస్పందనను సక్రియం చేసింది, అధిక సంఖ్యలో “GO:0016104 ట్రైటెర్పెన్ బయోసింథసిస్ ప్రక్రియ” మరియు “GO:0006722 ట్రైటెర్పెన్ జీవక్రియ ప్రక్రియ” అనే పదాలను హైలైట్ చేసింది (ఈ రెండు పదాలు ఒకే జన్యు సమితికి చెందినవి), GO టర్మ్ ఎన్రిచ్‌మెంట్ విశ్లేషణ ఫలితాలను పరిగణనలోకి తీసుకుంటే, మాండెలుప్ ప్రతిచర్య స్థిరత్వం బోరెగిన్ మరియు జనాభా 22660 మధ్య ఉంది. అదనంగా, ప్రారంభ ప్రతిచర్య 83A:476 (6 hpi) మరియు ఆలస్యమైన ప్రతిచర్య మాండెలుప్ మరియు జనాభా 22660 GO:0015979 'కిరణజన్య సంయోగక్రియ' అనే పదాన్ని మరియు ఇతర సంబంధిత జీవ ప్రక్రియలను కలిగి ఉన్నాయి.
1999లో పోలాండ్‌లోని వియర్‌జెనిస్‌లోని లూపిన్ పొలాల నుండి పొందిన ఆంత్రాక్స్ లూపిన్ (Col-08 స్ట్రెయిన్)తో టీకాలు వేసిన సన్న ఆకుల లూపిన్ (NLL) యొక్క ట్రాన్స్క్రిప్టోమ్ ప్రతిస్పందనల సమయంలో భిన్నంగా వ్యక్తమయ్యే జన్యువుల వ్యాఖ్యానంలో ఎంపిక చేయబడిన బయోప్రాసెస్ జీన్ ఆంటాలజీ పదాలు బాగా అతిశయోక్తిగా ఉన్నాయి. విశ్లేషించబడిన NLL లైన్లు: 83A:476 (నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), బోరెగిన్ (నిరోధకత కలిగినది, జన్యు నేపథ్యం తెలియదు), మాండెలుప్ (మితమైన నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది) మరియు పాపులేషన్ 22660 (సున్నితమైనది).
ఈ అధ్యయనం ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతకు దోహదపడే జన్యువులను గుర్తించడం లక్ష్యంగా పెట్టుకున్నందున, "GO: 0006952 రక్షణాత్మక ప్రతిస్పందనలు" మరియు "GO: 0055114 రెడాక్స్ ప్రక్రియలు" అనే పదాలకు కేటాయించబడిన జన్యువులను, కనీసం ఒక నిర్దిష్ట సమయంలో గణాంకపరంగా ముఖ్యమైన log2 (ఫోల్డ్ చేంజ్) విలువలను కలిపి, బేస్‌లైన్ సగటులు ≥ 30 ఉన్న కటాఫ్‌లతో విశ్లేషించడం జరిగింది. ఈ ప్రమాణాలకు అనుగుణంగా ఉన్న జన్యువుల సంఖ్య GO:0006952కు 65 మరియు GO:0055114కు 524గా ఉంది.
83A:476, GO:0006952 అనే పదంతో గుర్తించబడిన రెండు DEG శిఖరాలను వెల్లడించింది, మొదటిది అంగుళానికి 6 జన్యువుల వద్ద (64 జన్యువులు, అప్ మరియు డౌన్ రెగ్యులేషన్) మరియు రెండవది అంగుళానికి 24 జన్యువుల వద్ద (15 జన్యువులు, కేవలం అప్ రెగ్యులేషన్). బోరెజైన్ కూడా GO:0006952 అదే సమయ బిందువు వద్ద శిఖరస్థాయికి చేరుకుందని, కానీ తక్కువ DEG (11 మరియు 8) మరియు ప్రాధాన్యత క్రియాశీలతతో ఉందని చూపించింది. మాండెలూప్, 12 మరియు 48 HPI వద్ద GO:0006952 యొక్క రెండు శిఖరాలను చూపించింది, రెండూ 12 జన్యువులను కలిగి ఉన్నాయి (మొదటిది క్రియాశీలక జన్యువులతో, మరియు రెండవది కేవలం నిరోధక జన్యువులతో), అయితే 6 HPI వద్ద ఉన్న 22660 జనాభా (13 జన్యువులు) పెరుగుదల శిఖరం యొక్క అధిక ప్రాబల్యాన్ని కలిగి ఉంది. ఈ శిఖరాలలోని GO:0006952 DEG లలో 96.4% ఒకే రకమైన ప్రతిస్పందనను (అప్ లేదా డౌన్) కలిగి ఉన్నాయని గమనించాలి, ఇది పాల్గొన్న జన్యువుల సంఖ్యలో తేడాలు ఉన్నప్పటికీ రక్షణ ప్రతిస్పందనలలో గణనీయమైన అతివ్యాప్తిని సూచిస్తుంది. GO:0006952 అనే పదానికి సంబంధించిన అతిపెద్ద సీక్వెన్సుల సమూహం స్టార్వేషన్ స్ట్రెస్-అసోసియేటెడ్ మెసేజ్ ప్రోటీన్ 22 (SAM22-like)ను ఎన్‌కోడ్ చేస్తుంది, ఇది క్లాస్ 10 పాథోజెనిసిస్-అసోసియేటెడ్ ప్రోటీన్ (PR-10) ప్రోటీన్ క్లేడ్ మరియు కోర్ ప్రోటీన్ లాటెక్స్‌కు చెందినది. సారూప్య (MLP-like) ప్రోటీన్) ప్రోటీన్ (Fig. 3). ఈ రెండు సమూహాలు వ్యక్తీకరణ స్వభావంలో మరియు ప్రతిస్పందన దిశలో విభిన్నంగా ఉన్నాయి. SAM22-like ప్రోటీన్‌లను ఎన్‌కోడ్ చేసే జన్యువులు ప్రారంభ సమయ పాయింట్ల వద్ద (6 లేదా 12 hpi) స్థిరమైన మరియు గణనీయమైన ప్రేరణను చూపించాయి మరియు ప్రయోగం ముగిసే సమయానికి (48 hpi) సాధారణంగా ప్రతిస్పందించలేదు, అయితే MLP-like ప్రోటీన్‌లు 6 hpi వద్ద సమన్వయాన్ని చూపించాయి. 83A:476 మరియు మాండెలుప్ 48 hpi వద్ద, దాదాపు అన్ని ఇతర డేటా పాయింట్లు ప్రతిస్పందించలేదు. దీనికి అదనంగా, ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతలో గమనించిన వైవిధ్యానికి అనుగుణంగానే SAM22-వంటి ప్రోటీన్ జన్యువుల వ్యక్తీకరణ తీరులో తేడాలు కనిపించాయి, ఎందుకంటే ఎక్కువ నిరోధకత ఉన్న లైన్లలో, ఎక్కువ సున్నితత్వం ఉన్న జన్యువుల కంటే ఈ జన్యువులను గణనీయంగా ప్రేరేపించే సమయ బిందువులు ఎక్కువగా ఉన్నాయి. మరొక LlR18A/B-వంటి PR-10 జన్యువు, SAM22-వంటి ప్రోటీన్ జన్యువుకు చాలా సారూప్యమైన వ్యక్తీకరణ సరళిని చూపించింది.
"GO:0006952 రక్షణ ప్రతిస్పందన" అనే జీవ ప్రక్రియ పదం యొక్క ప్రధాన అంశాలు మరియు Lanr1, AnMan అల్లెల్స్ యొక్క అభ్యర్థి జన్యువుల వ్యక్తీకరణ నమూనాలు గుర్తించబడ్డాయి. లాగ్2 స్కేల్, ఒకే సమయ బిందువు వద్ద టీకాలు వేసిన (కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ, స్ట్రెయిన్ కోల్-08, 1999లో పోలాండ్‌లోని విజెనికాలోని లూపిన్ పొలాల నుండి పొందినది) మరియు నియంత్రణ (షాం-టీకాలు వేసిన) మొక్కల మధ్య లాగ్2 విలువలను (ఫోల్డ్ చేంజ్) సూచిస్తుంది. ఈ క్రింది సన్న-ఆకు లూపిన్ లైన్‌లు విశ్లేషించబడ్డాయి: 83A:476 (నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), బోరెజైన్ (నిరోధకత కలిగినది, జన్యు నేపథ్యం తెలియదు), మాండెలుప్ (మితమైన నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), మరియు పాపులేషన్ 22660 (సున్నితమైనది).
అదనంగా, RNA-seq కాండిడేట్ జన్యువులైన Lanr1 (TanjilG_05042) మరియు AnMan (TanjilG_12861) యొక్క ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్రొఫైల్‌లను మూల్యాంకనం చేశారు (పటం 3). TanjilG_05042 జన్యువు 83A:476 వద్ద మొదటి టైమ్ పాయింట్ (6 hpi) వద్ద మాత్రమే గణనీయమైన ప్రతిస్పందనను (యాక్టివేషన్) చూపింది, అయితే TanjilG_12861 మాండెలూప్‌లో రెండు టైమ్ పాయింట్ల వద్ద మాత్రమే గణనీయంగా ఉంది: 6 hpi (డౌన్ రెగ్యులేషన్) మరియు 24 hpi (6 hpi).
GO:0055114 "రిడాక్స్ ప్రక్రియ" అనే పదంలో అత్యధికంగా అతిగా వ్యక్తీకరించబడిన జన్యువులు సైటోక్రోమ్ P450 ప్రోటీన్లు మరియు పెరాక్సిడేజ్‌ను ఎన్‌కోడ్ చేసే జన్యువులు (పటం 4). 6 HPI వద్ద 83A:476 నుండి వేరుచేయబడిన నమూనాలలో, టీకాలు వేసిన మరియు నియంత్రణ మొక్కల మధ్య గరిష్ట లేదా కనిష్ట log2 (ఫోల్డ్ చేంజ్) విలువలు (86.6% జన్యువులకు) సాధారణంగా గమనించబడ్డాయి, ఇది టీకాలు వేయడానికి ఈ జన్యురకం యొక్క అధిక ప్రతిస్పందనను హైలైట్ చేస్తుంది. 83A:476, 6 hpi వద్ద అత్యంత ముఖ్యమైన GO: 0055114 DEG (503 జన్యువులు) ను చూపించింది, అయితే మిగిలిన లైన్లు 48 hpi వద్ద (బోరెజైన్, 31 జన్యువులు; మాండెలుప్, 85 జన్యువులు; మరియు పాపులేషన్ 22660, 78 జన్యువులు) చూపించాయి. GO:0055114 కుటుంబంలోని చాలా జన్యువులలో, టీకాకు రెండు రకాల ప్రతిస్పందనలు (యాక్టివేషన్ మరియు నిరోధం) గమనించబడ్డాయి. ఆసక్తికరంగా, 48 hp వద్ద మాండెలుపేలో GO: 0055114 అనే పదం కోసం గుర్తించబడిన DEGsలో 97.6% వరకు ఉన్నాయి. ఈ పరిశీలనలు సూచిస్తున్నదేమిటంటే, గణనీయంగా చిన్న స్థాయిలో ఉన్నప్పటికీ (అంటే, ఉత్పరివర్తన చెందిన రెడాక్స్ జన్యువుల సంఖ్య, 503కి బదులుగా 85), ఆంత్రాక్నోస్‌కు మాండెలుపే యొక్క ఆలస్యమైన ట్రాన్స్‌క్రిప్టోమ్ ప్రతిస్పందనల నమూనా 83A:476 యొక్క ముందస్తు ప్రతిస్పందనను పోలి ఉంటుంది. బోరెజైన్ మరియు పాపులేషన్ 22660లో, ఈ సారూప్యత వరుసగా 51.6% మరియు 75.6% వద్ద తక్కువగా ఉంది.
"GO:0055114 రెడాక్స్ ప్రక్రియ" అనే జీవ ప్రక్రియ పదం యొక్క ప్రధాన భాగాల వ్యక్తీకరణ నమూనాలు వెల్లడయ్యాయి. లాగ్2 స్కేల్, ఒకే సమయ బిందువు వద్ద టీకాలు వేసిన (కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ, స్ట్రెయిన్ కోల్-08, 1999లో పోలాండ్‌లోని విజెనికాలోని లూపిన్ పొలాల నుండి పొందినది) మరియు నియంత్రణ (షాం-టీకాలు వేసిన) మొక్కల మధ్య లాగ్2 విలువలను (రెట్లు మార్పు) సూచిస్తుంది. ఈ క్రింది సన్న-ఆకు లూపిన్ లైన్‌లు విశ్లేషించబడ్డాయి: 83A:476 (నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), బోరెజైన్ (నిరోధకత కలిగినది, జన్యు నేపథ్యం తెలియదు), మాండెలుప్ (మితమైన నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), మరియు పాపులేషన్ 22660 (సున్నితమైనది).
83A:476 C. lupini (స్ట్రెయిన్ Col-08) తో టీకా వేయడం వల్ల కలిగే ట్రాన్స్క్రిప్టోమిక్ ప్రతిస్పందనలలో GO:0015979 "కిరణజన్య సంయోగక్రియ" అనే పదం మరియు ఇతర సంబంధిత జీవ ప్రక్రియలకు ఆపాదించబడిన జన్యువుల సమన్వయ నిశ్శబ్దం కూడా ఉంది (FIG. 5). ఈ GO:0015979 DEG సెట్‌లో 83A:476 వద్ద 6 hpi వద్ద గణనీయంగా అణచివేయబడిన 105 జన్యువులు ఉన్నాయి. ఈ ఉపసమితిలో, 48 HPI వద్ద మాండెలుప్‌లో 37 జన్యువులు మరియు అదే సమయంలో 22660 జనాభాలో 35 జన్యువులు కూడా డౌన్‌రెగ్యులేట్ చేయబడ్డాయి, ఇందులో రెండు జన్యురకాలకు ఉమ్మడిగా ఉన్న 19 DEGలు ఉన్నాయి. GO: 0015979 అనే పదానికి సంబంధించిన ఏ DEGలు ఏ కలయికలోనూ (లైన్ x సమయం) గణనీయంగా క్రియాశీలం కాలేదు.
"GO:0015979 కిరణజన్య సంయోగక్రియ" అనే జీవ ప్రక్రియ యొక్క పదంలోని ప్రధాన భాగాల వ్యక్తీకరణ నమూనాలు వెల్లడయ్యాయి. లాగ్2 స్కేల్, ఒకే సమయ బిందువు వద్ద టీకాలు వేసిన (కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ, స్ట్రెయిన్ కోల్-08, 1999లో పోలాండ్‌లోని విజెనికాలోని లూపిన్ పొలాల నుండి పొందినది) మరియు నియంత్రణ (షాం-టీకాలు వేసిన) మొక్కల మధ్య లాగ్2 విలువలను (రెట్లు మార్పు) సూచిస్తుంది. ఈ క్రింది సన్న-ఆకు లూపిన్ లైన్‌లు విశ్లేషించబడ్డాయి: 83A:476 (నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), బోరెజైన్ (నిరోధకత కలిగినది, జన్యు నేపథ్యం తెలియదు), మాండెలుప్ (మితమైన నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), మరియు పాపులేషన్ 22660 (సున్నితమైనది).
డిఫరెన్షియల్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ విశ్లేషణ ఫలితాల ఆధారంగా మరియు బహుశా వ్యాధికారక శిలీంధ్రాలకు వ్యతిరేకంగా రక్షణ ప్రతిస్పందనలలో పాల్గొంటాయని భావించి, రియల్-టైమ్ PCR ద్వారా ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్రొఫైల్‌ల పరిమాణీకరణ కోసం ఈ ఏడు జన్యువుల సమితిని ఎంపిక చేశారు (సప్లిమెంటరీ టేబుల్ S9).
నియంత్రణ (అనుకరణ) మొక్కలతో పోల్చినప్పుడు, అధ్యయనం చేసిన అన్ని లైన్‌లు మరియు సమయ బిందువులలో టాంజిల్G_10657 అనే ప్రోటీన్ జన్యువు గణనీయంగా ప్రేరేపించబడింది (అనుబంధ పట్టికలు S10, S11). అదనంగా, అన్ని లైన్‌లలో ప్రయోగం జరిగినంత సేపు టాంజిల్G_10657 యొక్క వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్ పెరుగుతున్న ధోరణిని చూపించింది. పాపులేషన్ 22660, టాంజిల్G_10657కు టీకా వేయడం పట్ల అత్యధిక సున్నితత్వాన్ని చూపించింది, 114 రెట్లు క్రియాశీలత మరియు 24 HPI వద్ద అత్యధిక సాపేక్ష వ్యక్తీకరణ స్థాయి (4.4 ± 0.4)ని ప్రదర్శించింది (పటం 6a). PR10 LlR18A ప్రోటీన్ జన్యువు టాంజిల్G_27015 కూడా అన్ని లైన్‌లు మరియు సమయ బిందువులలో క్రియాశీలతను చూపించింది, చాలా డేటా పాయింట్ల వద్ద గణాంక ప్రాముఖ్యతను ప్రదర్శించింది (పటం 6b). TanjilG_10657 మాదిరిగానే, TanjilG_27015 యొక్క అత్యధిక సాపేక్ష వ్యక్తీకరణ స్థాయి 24 HPI (19.5 ± 2.4) వద్ద 22660 టీకా వేసిన జనాభాలో గమనించబడింది. యాసిడ్ ఎండోకైటినేస్ జన్యువు TanjilG_04706, బోరెగిన్ 6 hpi మినహా అన్ని లైన్లలో మరియు అన్ని సమయ పాయింట్ల వద్ద గణనీయంగా అప్‌రెగ్యులేట్ చేయబడింది (Fig. 6c). ఇది మొదటి సమయ పాయింట్ (6 HPI) వద్ద 83A:476లో బలంగా ప్రేరేపించబడింది (10.5 రెట్లు) మరియు ఇతర లైన్లలో మధ్యస్తంగా పెరిగింది (6.6-7.5 రెట్లు). ప్రయోగ సమయంలో, 83A:476 మరియు బోరెజైన్‌లలో TanjilG_04706 యొక్క వ్యక్తీకరణ ఒకే స్థాయిలో ఉంది, అయితే మాండెలుప్ మరియు పాపులేషన్ 22660 లలో ఇది గణనీయంగా పెరిగి, సాపేక్షంగా అధిక విలువలకు (వరుసగా 5.9 ± 1.5 మరియు 6.2 ± 1.5) చేరుకుంది. ఎండోగ్లూకాన్-1,3-β-గ్లూకోసిడేస్-వంటి జన్యువు TanjilG_23384, పాపులేషన్ 22660 మినహా అన్ని లైన్‌లలో మొదటి రెండు సమయ పాయింట్ల వద్ద (6 మరియు 12 hpi) అధిక క్రియాశీలతను చూపింది (Fig. 6d). TanjilG_23384 యొక్క అత్యధిక సాపేక్ష వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు రెండవ సమయ పాయింట్ (12 hpi) వద్ద మాండెలుప్ (2.7 ± 0.3) మరియు 83A:476 (1.5 ± 0.1) లలో గమనించబడ్డాయి. 24 HPI వద్ద, అధ్యయనం చేసిన అన్ని లైన్లలో TanjilG_23384 వ్యక్తీకరణ సాపేక్షంగా తక్కువగా ఉంది (0.04 ± 0.009 నుండి 0.44 ± 0.12 వరకు).
క్వాంటిటేటివ్ PCR ద్వారా వెల్లడైన ఎంపిక చేసిన జన్యువుల (ag) వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్‌లు. 6, 12 మరియు 24 అనే సంఖ్యలు టీకా వేసిన తర్వాత గంటలను సూచిస్తాయి. సాధారణీకరణ కోసం LanDExH7 మరియు LanTUB6 జన్యువులను ఉపయోగించారు మరియు శ్రేణుల మధ్య క్రమాంకనం కోసం LanTUB6 ను ఉపయోగించారు. ఎర్రర్ బార్‌లు మూడు బయోలాజికల్ రెప్లికేట్‌ల ఆధారంగా ప్రామాణిక విచలనాన్ని సూచిస్తాయి, వీటిలో ప్రతి ఒక్కటి మూడు టెక్నికల్ రెప్లికేట్‌ల సగటు. టీకా వేసిన (పోలాండ్‌లోని వియర్‌జెనికాలోని లూపిన్ క్షేత్రం నుండి 1999లో పొందిన కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ, స్ట్రెయిన్ కోల్-08) మరియు నియంత్రణ (నకిలీ-టీకా వేసిన) మొక్కల మధ్య వ్యక్తీకరణ స్థాయిలలోని తేడాల గణాంక ప్రాముఖ్యత డేటా పాయింట్ల పైన గుర్తించబడింది (*P విలువ < 0.05, **P విలువ ≤ 0.01, ***P విలువ ≤ 0.001). టీకా వేసిన (పోలాండ్‌లోని వియర్‌జెనికాలోని లూపిన్ క్షేత్రం నుండి 1999లో పొందిన కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ, స్ట్రెయిన్ కోల్-08) మరియు నియంత్రణ (నకిలీ-టీకా వేసిన) మొక్కల మధ్య వ్యక్తీకరణ స్థాయిలలోని తేడాల గణాంక ప్రాముఖ్యత డేటా పాయింట్ల పైన గుర్తించబడింది (*P విలువ < 0.05, **P విలువ ≤ 0.01, ***P విలువ ≤ 0.001). స్థాటిస్టిచెస్కాయ ప్రఖ్యాతి గాంచింది. г. с పోల్య లిపినా వి వర్జెనిషే, పొల్షా) మరియు కాంట్రోలిమి (లోజ్నో ఇనోకులిరోవానిమి) 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***జనాఛేని పి ≤ 0,001). టీకాలు వేసిన (పోలాండ్‌లోని వియర్‌జెనిస్‌లోని లూపిన్ పొలం నుండి 1999లో పొందిన కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ, స్ట్రెయిన్ కోల్-08) మరియు నియంత్రణ (నకిలీ-టీకాలు వేసిన) మొక్కల మధ్య వ్యక్తీకరణ స్థాయిలలో గణాంకపరంగా ముఖ్యమైన తేడాలు డేటా పాయింట్ల పైన గుర్తించబడ్డాయి (*P విలువ < 0.05, **P-విలువ ≤ 0.01, ***P-విలువ ≤ 0.001).接种 (కొల్లెటోట్రిచమ్ లుపిని, కల్-08株, 1999 ）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在着性标记在湕渍0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001)。接扇水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 。 。 ≤ 0.01, **P ≤ 0.01, ***P ≤) 0. స్టాటిస్టిచెస్కి జానచిమ్య రజ్లిచియా వ్ యూరోన్యహ్ ఎక్సప్రెస్సీ మేఘడు ఇనోకులిరోవానిమి (కోలెటోట్రిచమ్ లుపిని, షూటమ్, కల్నల్-08 పోలీ లిపినా వి వర్జెనిషే, పోల్షా, లో 1999 లో ** పి-జనాఛేని ≤ 0,01, ***P-ప్రధానం ≤ 0,001). 1999లో పోలాండ్‌లోని వెర్ఝెనిస్‌లోని లూపిన్ పొలాల నుండి పొందిన, టీకాలు వేసిన (కొల్లెటోట్రిచమ్ లూపినీ, స్ట్రెయిన్ కోల్-08) మరియు నియంత్రణ (నకిలీ-టీకాలు వేసిన) మొక్కల మధ్య వ్యక్తీకరణ స్థాయిలలో గణాంకపరంగా ముఖ్యమైన తేడాలు డేటా పాయింట్ల పైన గుర్తించబడ్డాయి (*P విలువ < 0.05 , **P-విలువ ≤ 0.01, ***P-విలువ ≤ 0.001).విశ్లేషించబడిన NLL లైన్లు: 83A:476 (నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), మాండెలుప్ (మితమైన నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), బోరెగిన్ (నిరోధకత కలిగినది, జన్యు నేపథ్యం తెలియదు) మరియు పాపులేషన్ 22660 (సున్నితమైనది).
Lanr1 లోకస్‌లోని TanjilG_05042 అనే అభ్యర్థి జన్యువు, RNA-seq అధ్యయనాల నుండి పొందిన ప్రొఫైల్‌ల కంటే గణనీయంగా భిన్నమైన వ్యక్తీకరణ నమూనాను చూపించింది (Fig. 6e). ఈ జన్యువు యొక్క గణనీయమైన క్రియాశీలత మాండెలుప్ మరియు 22660 జనాభాలో గమనించబడింది (వరుసగా 39.7 మరియు 11.7 రెట్ల వరకు), దీని ఫలితంగా సాపేక్షంగా అధిక వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు (వరుసగా 1.4 ± 0.14 మరియు 7.2 ± 1.3 వరకు) నమోదయ్యాయి. 83A:476 కూడా TanjilG_05042 జన్యువు యొక్క కొంత అప్‌రెగ్యులేషన్‌ను (3.8 రెట్ల వరకు) వెల్లడించింది, అయితే, సాధించిన సాపేక్ష వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు (0.044 ± 0.002), మాండెలుప్ మరియు 22660 జనాభాలో గమనించిన వాటి కంటే 30 రెట్లకు పైగా తక్కువగా ఉన్నాయి. qPCR ద్వారా విశ్లేషించినప్పుడు, మాక్-వ్యాక్సినేటెడ్ (నియంత్రణ) వేరియంట్‌లలోని జన్యురకాల మధ్య వ్యక్తీకరణ స్థాయిలలో గణనీయమైన తేడాలు కనిపించాయి. జనాభా 22660 మరియు 83A:476 మధ్య, అలాగే జనాభా 22660 మరియు 22660 మధ్య 58 రెట్ల వ్యత్యాసం నమోదైంది. బోరెగిన్ మరియు మండలుప్ మధ్య రెండు రెట్ల వ్యత్యాసం సాధించబడింది.
ఆన్‌మాన్ లోకస్‌లోని కాండిడేట్ జన్యువు, టాంజిల్G_12861, 83A:476 మరియు మాండెలుప్‌లలో టీకాకు ప్రతిస్పందనగా క్రియాశీలమైంది, 22660 జనాభాలో తటస్థంగా ఉంది, మరియు బోరెగిన్‌లో డౌన్‌రెగ్యులేట్ చేయబడింది (పటం 6f). టీకా వేయబడిన 83A: 476లో టాంజిల్G_12861 జన్యువు యొక్క సాపేక్ష వ్యక్తీకరణ అత్యధికంగా ఉంది (0.14±0.01). 17.4 kDa క్లాస్ I హీట్ షాక్ ప్రోటీన్ జన్యువు టాంజిల్G_05080 HSP17.4, అధ్యయనం చేయబడిన అన్ని స్ట్రెయిన్‌లు మరియు సమయ పాయింట్లలో తక్కువ సాపేక్ష వ్యక్తీకరణ స్థాయిలను చూపించింది (పటం 6g). 22660 జనాభాలో 24 HPI వద్ద అత్యధిక విలువ గమనించబడింది (0.14 ± 0.02, టీకాకు ప్రతిస్పందనగా ఎనిమిది రెట్లు పెరుగుదల).
జన్యు వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్‌ల పోలిక (పటం 7) TanjilG_10657 మరియు మరో నాలుగు జన్యువుల మధ్య అధిక సహసంబంధాన్ని వెల్లడించింది: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), మరియు TanjilG_04706 (r = 0.79). ఇటువంటి ఫలితాలు రక్షణ ప్రతిస్పందనల సమయంలో ఈ జన్యువుల సహ-నియంత్రణను సూచించవచ్చు. ఇతర జన్యువులతో పోలిస్తే TanjilG_12861 మరియు TanjilG_23384 జన్యువులు తక్కువ పియర్సన్ సహసంబంధ గుణకం విలువలతో (వరుసగా 0.08 నుండి 0.43 మరియు -0.19 నుండి 0.28 వరకు) విభిన్న వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్‌లను చూపించాయి.
క్వాంటిటేటివ్ PCR ఉపయోగించి జన్యు వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్‌ల మధ్య పరస్పర సంబంధాలను గుర్తించారు. ఈ క్రింది సన్న ఆకుల లూపిన్ రకాలను విశ్లేషించారు: 83A:476 (నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), మాండెలుప్ (మితమైన నిరోధకత కలిగినది, హోమోజైగస్ AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉంది), బోరెగిన్ (నిరోధకత కలిగినది, జన్యు నేపథ్యం తెలియదు), మరియు పాపులేషన్ 22660 (సున్నితమైనది). టీకా వేసిన (1999లో పోలాండ్‌లోని వియర్‌జెనిస్‌లోని లూపిన్ పొలాల నుండి పొందిన కొల్లెటోట్రికమ్ లూపినీ, స్ట్రెయిన్ Col-08) మరియు నియంత్రణ (షాం-టీకా వేసిన) మొక్కలతో సహా, మూడు సమయ బిందువులను (టీకా వేసిన 6, 12 మరియు 24 గంటల తర్వాత) లెక్కించారు. స్కేల్ పియర్సన్ సహసంబంధ గుణకం విలువను చూపుతుంది.
అంగుళానికి 6 హార్స్‌పవర్ వద్ద పొందిన డేటా ఆధారంగా, ప్రారంభ రక్షణ ప్రతిస్పందనలపై దృష్టి పెట్టడానికి, టీకాలు వేసిన మరియు నియంత్రణ మొక్కలను పోల్చడం ద్వారా గుర్తించిన 9981 DEG లపై WGCNA నిర్వహించబడింది (అనుబంధ పట్టిక S12). జన్యురకాలు మరియు ప్రయోగాత్మక వైవిధ్యాల మధ్య పరస్పర సంబంధం ఉన్న (సానుకూల లేదా ప్రతికూల) వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్‌లతో ఇరవై రెండు జన్యు మాడ్యూల్స్ (క్లస్టర్‌లు) కనుగొనబడ్డాయి. సగటున, జన్యు వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు 83A:476 > మాండెలుప్ > బోరెగిన్ > పాపులేషన్ 22660 అనే క్రమంలో తగ్గుముఖం పట్టాయి (అయితే, రెండు వేరియంట్‌లలోనూ, ఈ ధోరణి నియంత్రణ మొక్కలలో బలంగా ఉంది). సగటున, జన్యు వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు 83A:476 > మాండెలుప్ > బోరెగిన్ > పాపులేషన్ 22660 అనే క్రమంలో తగ్గుముఖం పట్టాయి (అయితే, రెండు వేరియంట్‌లలోనూ, ఈ ధోరణి నియంత్రణ మొక్కలలో బలంగా ఉంది). పోర్యాడ్కే 83A:476 > మాండలప్ > బోరెజిన్ > జనాభా 22660 టెండెనియస్ బిలా సిల్నీ యు కాంట్రాల్నిక్ రాస్టేనియ్). సగటున, జన్యు వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు 83A:476 > మాండెలుప్ > బోరెగిన్ > పాపులేషన్ 22660 క్రమంలో తగ్గాయి (అయితే, రెండు వేరియంట్‌లలోనూ, ఈ ధోరణి నియంత్రణ మొక్కలలో బలంగా ఉంది).平均而言，基因表达水平按83A:476 > మాండెలప్ > బోరెజిన్ > జనాభా 22660的顺序下陌平均 而 言 , 基因 水平 按 按 83a: 476> మాండలప్> బోరిజిన్> జనాభా 22660 的 顺序 下降在 植物 మీరు 更.... స్రెడ్నెమ్ యూరోవ్ని ఎక్సప్రెస్సీ గెనోవ్ స్నిజాలిస్ వ రియాడు 83A:476 > మాండెలప్ > బోరెజిన్ > జనాభా 22660 была сильnee u kontrolnыh растений). సగటున, 83A:476 > మాండెలుప్ > బోరెగిన్ > పాపులేషన్ 22660 క్రమంలో జన్యు వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు తగ్గాయి (అయితే, రెండు వేరియంట్‌లలోనూ, ఈ ధోరణి నియంత్రణ మొక్కలలో బలంగా ఉంది).టీకా వేయడం వలన జన్యు వ్యక్తీకరణ పెరిగింది, ముఖ్యంగా మాడ్యూల్స్ 18, 19, 14, 6 మరియు 1 (ప్రభావం యొక్క అవరోహణ క్రమంలో), ప్రతికూల నియంత్రణ (ఉదా మాడ్యూల్స్ 9 మరియు 20) లేదా తటస్థ ప్రభావాలతో (ఉదా మాడ్యూల్స్ 11, 22, 8 మరియు 13). GO టర్మ్ ఎన్రిచ్‌మెంట్ విశ్లేషణ (సప్లిమెంటరీ టేబుల్ S13) గరిష్ట క్రియాశీలతతో టీకా వేసిన మాడ్యూల్ (18) కోసం "GO: 0006952 రక్షిత ప్రతిస్పందనలు" అని వెల్లడించింది, ఇందులో qPCR ద్వారా విశ్లేషించబడిన జన్యువులు (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 మరియు TanjilG_27015), అలాగే టీకా వేయడం వలన కిరణజన్య సంయోగక్రియ ఎక్కువగా అణచివేయబడిన అనేక మాడ్యూల్స్ (9) ఉన్నాయి. మాడ్యూల్ 18 కాన్సెంట్రేటర్ (పటం 8) PR-10-వంటి LlR18B ప్రోటీన్‌ను ఎన్‌కోడ్ చేసే TanjilG_26536 జన్యువుగా గుర్తించబడింది, మరియు మాడ్యూల్ 9 కాన్సెంట్రేటర్ ఫోటోసిస్టమ్ II PsbQ ప్రోటీన్‌ను ఎన్‌కోడ్ చేసే TanjilG_28955 జన్యువుగా గుర్తించబడింది. ఒక అభ్యర్థి ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధక జన్యువు Lanr1, TanjilG_05042, మాడ్యూల్ 22 (పటం 9)లో కనుగొనబడింది మరియు ఇది TanjilG_01212 హబ్‌ను కలిగి ఉన్న “GO:0044260 సెల్యులార్ మాక్రోమాలిక్యులర్ మెటబాలిక్ ప్రాసెసెస్” మరియు “GO:0006355 ట్రాన్స్క్రిప్షనల్ రెగ్యులేషన్, DNA టెంప్లేటింగ్” అనే పదాలతో అనుబంధించబడింది. ఈ జన్యువు హీట్ స్ట్రెస్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ ఫ్యాక్టర్ A-4a (HSFA4a)ను ఎన్‌కోడ్ చేస్తుంది.
అధిక ప్రాతినిధ్యం ఉన్న జీవ ప్రక్రియ పదాలతో కూడిన మాడ్యూల్స్ యొక్క జన్యు సహ-వ్యక్తీకరణ యొక్క భారిత నెట్‌వర్క్ విశ్లేషణ “GO: 0006952 రక్షణ ప్రతిస్పందనలు”. qPCR ద్వారా విశ్లేషించబడిన నాలుగు జన్యువులను (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 మరియు TanjilG_27015) హైలైట్ చేయడానికి లైగేషన్ సరళీకరించబడింది.
అధిక ప్రాతినిధ్యం ఉన్న జీవ ప్రక్రియ పదం “GO: 0006355: ట్రాన్స్క్రిప్షనల్ రెగ్యులేషన్, DNA టెంప్లేటింగ్” మరియు కాండిడేట్ ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధక జన్యువు Lanr1 TanjilG_05042ను కలిగి ఉన్న ఒక మాడ్యూల్ యొక్క జన్యు సహ-వ్యక్తీకరణ యొక్క వెయిటెడ్ నెట్‌వర్క్ విశ్లేషణ. TanjilG_05042 జన్యువును మరియు కేంద్ర TanjilG_01212 జన్యువును వేరుచేయడానికి లైగేషన్ సరళీకరించబడింది.
ఆస్ట్రేలియాలో సేకరించిన ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత స్క్రీనింగ్ ప్రకారం, ముందుగా విడుదలైన చాలా రకాలు సున్నితమైనవిగా తేలింది; కల్యా, కోరమప్ మరియు మాండెలుప్‌లను మధ్యస్థ నిరోధకత కలిగినవిగా, వోంగా, టాంజిల్ మరియు 83A:476 లను అధిక నిరోధకత కలిగినవిగా వర్ణించారు26,27,31. వీటిలో Lanr1 అనే ఒకే నిరోధక అల్లెల్ ఉండగా, కోరమప్ మరియు మాండెలుప్‌లలో AnMan10 అనే వేరొక అల్లెల్ ఉంది,26,39, అయితే కల్యా Lanr2 అనే వేరొక అల్లెల్‌ను అందించింది. జర్మనీలో ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత కోసం జరిపిన స్క్రీనింగ్ ఫలితంగా, Lanr1 కాకుండా LanrBo36 అనే వేరొక అభ్యర్థి అల్లెల్‌తో కూడిన Bo7212 అనే నిరోధక రకాన్ని గుర్తించారు.
మా అధ్యయనంలో పరీక్షించిన జన్యుద్రవ్యంలో Lanr1 అల్లెల్ చాలా తక్కువ పౌనఃపున్యం (సుమారు 6%) కలిగి ఉందని వెల్లడైంది. ఈ పరిశీలన Anseq3 మరియు Anseq4 మార్కర్లను ఉపయోగించి తూర్పు యూరోపియన్ జన్యుద్రవ్యాన్ని స్క్రీనింగ్ చేసిన ఫలితాలతో ఏకీభవిస్తుంది, ఇది Lanr1 అల్లెల్ కేవలం రెండు బెలారసియన్ లైన్లలో మాత్రమే ఉందని చూపించింది. ఆస్ట్రేలియాలో మార్కర్-సహాయక పెంపకానికి ఇది కీలకమైన అల్లెల్స్‌లో ఒకటిగా ఉన్నప్పటికీ, స్థానిక పెంపక కార్యక్రమాలలో Lanr1 అల్లెల్ ఇంకా విస్తృతంగా ఉపయోగించబడటం లేదని ఇది సూచిస్తుంది. ఆస్ట్రేలియన్ నివేదికతో పోలిస్తే యూరోపియన్ క్షేత్ర పరిస్థితులలో Lanr1 అల్లెల్ అందించే నిరోధకత తక్కువ స్థాయిలో ఉండటం దీనికి కారణం కావచ్చు. అదనంగా, ఆస్ట్రేలియాలోని అధిక వర్షపాతం ఉన్న ప్రాంతాలలో ఆంత్రాక్నోస్‌పై జరిపిన అధ్యయనాలు, వ్యాధికారకం యొక్క పెరుగుదల మరియు వేగవంతమైన అభివృద్ధికి అనుకూలమైన వాతావరణ పరిస్థితులలో Lanr1 అల్లెల్ ద్వారా మధ్యవర్తిత్వం వహించే నిరోధక ప్రతిస్పందనలు ప్రభావవంతంగా ఉండకపోవచ్చని చూపించాయి¹⁹,⁴². వాస్తవానికి, ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న జన్యురకాలలో కూడా ఆంత్రాక్నోస్ యొక్క కొన్ని లక్షణాలు గమనించబడ్డాయి, ఇది C. lupini అభివృద్ధికి అనుకూలమైన పరిస్థితులలో నిరోధకత అదృశ్యమవుతుందని సూచిస్తుంది. అదనంగా, Lanr1 లోకస్ నుండి సుమారు 1 cM దూరంలో ఉన్న Anseq3 మరియు Anseq4 మార్కర్ల ఉనికికి సంబంధించిన తప్పుడు పాజిటివ్ వివరణలు సాధ్యమవుతాయి 28,30,43.
మా అధ్యయనం ప్రకారం, Lanr1 అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న 83A:476, C. lupini టీకాకు మొదటి విశ్లేషించిన సమయ బిందువు (6 hpi) వద్ద పెద్ద ఎత్తున ట్రాన్స్క్రిప్టోమ్ పునఃప్రోగ్రామింగ్‌తో ప్రతిస్పందించింది, అయితే AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న Mandelupలో, ట్రాన్స్క్రిప్టోమిక్ ప్రతిస్పందనలు చాలా ఆలస్యంగా (24 నుండి 48 hp వరకు) గమనించబడ్డాయి. రక్షణ ప్రతిస్పందనలలోని ఈ తాత్కాలిక వైవిధ్యాలు వ్యాధి లక్షణాలలోని తేడాలతో ముడిపడి ఉన్నాయి, ఇది నిరోధకతకు విజయవంతమైన ప్రతిస్పందన కోసం వ్యాధికారకాన్ని ముందుగానే గుర్తించడం యొక్క ప్రాముఖ్యతను నొక్కి చెబుతుంది. మొక్క కణజాలానికి సోకడానికి, ఆంత్రాక్స్ బీజాంశాలు అతిధేయ ఉపరితలంపై మొలకెత్తడం, కణ విభజన మరియు అప్రెసోరియం ఏర్పడటంతో సహా అనేక అభివృద్ధి దశల గుండా వెళ్ళాలి. అపెండేజ్ అనేది అతిధేయ ఉపరితలానికి అంటుకొని, అతిధేయ కణజాలంలోకి చొచ్చుకుపోవడాన్ని సులభతరం చేసే ఒక సంక్రమణ నిర్మాణం. ఈ విధంగా, బఠానీ సారంలోని C. gloeosporioides యొక్క బీజాంశాలు 75-90 నిమిషాల ఇంక్యుబేషన్ తర్వాత కేంద్రకం యొక్క మొదటి విభజనను, 90-120 నిమిషాల తర్వాత జెర్మ్ ట్యూబ్ ఏర్పడటాన్ని మరియు 4 గంటల తర్వాత అణచివేతను చూపించాయి 45. మామిడి C. gloeosporioides 3 గంటల ఇంక్యుబేషన్ తర్వాత 40% కంటే ఎక్కువ కోనిడియల్ మొలకెత్తడాన్ని మరియు 4 గంటల తర్వాత సుమారు 20% అప్రెసర్‌ల ఏర్పాటును చూపించింది. C. gloeosporioides యొక్క వీర్యత్వ-సంబంధిత CAP20 జన్యువు, అవకాడో ఉపరితల మైనంలో అధిక సాంద్రతలో CAP20 ప్రోటీన్‌తో 3.5 గంటల ఇంక్యుబేషన్ తర్వాత ఎపిఫైట్-ఏర్పరచే కోనిడియాలో 4 గంటల 46 నిమిషాల తర్వాత లిప్యంతరీకరణ చర్యను చూపించింది. అదేవిధంగా, C. trifolii లో మెలనిన్ జీవసంశ్లేషణ జన్యువుల చర్య 2 గంటల ఇంక్యుబేషన్ సమయంలో ప్రేరేపించబడి, ఆ తర్వాత 1 గంట తర్వాత అప్రెసోరియం ఏర్పడింది. ఆకు కణజాలాలపై జరిపిన అధ్యయనాలు, C. acutatum తో టీకాలు వేసిన స్ట్రాబెర్రీలలో 8 hpi వద్ద మొదటి నిరోధం కనిపించగా, C. coccodes తో టీకాలు వేసిన టమోటాలలో 4 hpi వద్ద మొదటి నిరోధం కనిపించిందని చూపించాయి48,49. ఇది చాలావరకు Colletotrichum spp. సంక్రమణ ప్రక్రియ యొక్క కాలమానంతో స్థిరంగా ఉంది. 83A:476 కు వేగవంతమైన రక్షణ ప్రతిస్పందనలు ఈ లైన్‌లో మొక్కల నిరోధకత మరియు ఎఫెక్టర్-ట్రిగ్గర్డ్ ఇమ్యూనిటీ (ETI) జన్యువుల ప్రమేయాన్ని సూచిస్తాయి, అయితే మాండెలుప్ యొక్క ఆలస్యమైన ప్రతిస్పందనలు మైక్రో-అసోసియేటెడ్ మాలిక్యులర్ ప్యాటర్న్-ట్రిగ్గర్డ్ ఇమ్యూనిటీ (MTI) పరికల్పనకు మద్దతు ఇస్తాయి50. 83A: 476 మరియు మాండెలుప్‌లకు ప్రారంభ ప్రతిస్పందనలు. ఆలస్యమైన ప్రతిస్పందనలో అప్- లేదా డౌన్-రెగ్యులేట్ చేయబడిన జన్యువుల మధ్య పాక్షిక అతివ్యాప్తి కూడా ఈ భావనకు మద్దతు ఇస్తుంది, ఎందుకంటే ETI తరచుగా వేగవంతమైన మరియు మెరుగైన MTI ప్రతిస్పందనగా పరిగణించబడుతుంది, ఇది సంక్రమణ ప్రదేశంలో ప్రోగ్రామ్ చేయబడిన కణ మరణానికి దారితీస్తుంది, దీనిని అనాఫిలాక్టిక్ షాక్ అని పిలుస్తారు51,52.
జీన్ ఆంటాలజీ GO:0006952 "రక్షణ ప్రతిస్పందన" అనే అతిగా ప్రాతినిధ్యం వహించే పదానికి ఆపాదించబడిన చాలా జన్యువులు, ఒత్తిడి-ప్రేరిత ఉపవాస సందేశం 22 ప్రోటీన్ (SAM22ను పోలినది) యొక్క 11 హోమోలాగ్‌లు మరియు ఏడు ప్రధాన లాటెక్స్ ప్రోటీన్-వంటివి (MLPలు). -వంటి ప్రోటీన్లు 31, 34, 43 మరియు 423 క్రమ సారూప్యతను చూపించాయి. SAM22-వంటి జన్యువులు ఎక్కువ కాలం పాటు కొనసాగిన గణనీయమైన క్రియాశీలతను చూపించాయి, ఇది ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత స్థాయిలను పెంచింది (83A:476 మరియు బోరెజైన్). అయితే, MLP-వంటి జన్యువులు అభ్యర్థి నిరోధక అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న లైన్‌లలో మాత్రమే డౌన్‌రెగ్యులేట్ చేయబడ్డాయి (83A:476/Lanr1 6 hpi వద్ద మరియు Mandelup/AnMan 24 hpi వద్ద). గుర్తించబడిన అన్ని SAM22-వంటి హోమోలాగ్‌లు సుమారుగా 105 kb విస్తరించి ఉన్న జన్యు సమూహం నుండి ఉద్భవించాయని, అయితే MLP-వంటి జన్యువులు జన్యువు యొక్క వేర్వేరు ప్రాంతాల నుండి ఉద్భవించాయని గమనించాలి. డయాపోర్థెటాక్సికా టీకాకు NLL నిరోధకతపై మేము గతంలో చేసిన అధ్యయనంలో కూడా ఇటువంటి SAM22-వంటి జన్యువుల సమన్వయ క్రియాశీలత కనుగొనబడింది, ఇది అవి రక్షణ ప్రతిస్పందన యొక్క క్షితిజ సమాంతర భాగాలలో పాలుపంచుకుంటాయని సూచిస్తుంది. గాయానికి లేదా సాలిసిలిక్ ఆమ్లం, శిలీంధ్ర ప్రేరకాలు లేదా హైడ్రోజన్ పెరాక్సైడ్‌తో చికిత్సకు SAM22-వంటి జన్యువులు సానుకూలంగా స్పందించినట్లు వచ్చిన నివేదికలు కూడా ఈ నిర్ధారణకు మద్దతు ఇస్తున్నాయి.
అనేక మొక్కల జాతులలో బాక్టీరియా, వైరల్ మరియు వ్యాధికారక శిలీంధ్రాల సంక్రమణలతో సహా వివిధ నిర్జీవ మరియు జీవ సంబంధిత ఒత్తిళ్లకు MLP-వంటి జన్యువులు ప్రతిస్పందిస్తాయని చూపబడింది55. మొక్కలు మరియు వ్యాధికారకాల మధ్య కొన్ని పరస్పర చర్యలకు ప్రతిస్పందన దిశలు బలంగా పెరగడం (అంటే, వెర్టిసిలియం డహ్లియేతో పత్తికి సోకినప్పుడు) నుండి గణనీయంగా తగ్గడం (అంటే, ఆల్టర్నేరియా జాతులతో ఆపిల్ చెట్టుకు సంక్రమణ తర్వాత) వరకు ఉన్నాయి56,57. F. నైగర్ సంక్రమణకు అవకాడో రక్షణ సమయంలో మరియు ఆపిల్ చెట్టుకు సంక్రమణ సమయంలో MLP-వంటి 423 జన్యువు యొక్క గణనీయమైన డౌన్‌రెగ్యులేషన్ గమనించబడింది. బోట్రియోస్ఫేరియా బెరెంగెరియానా f. cn. పిరికోలా మరియు ఆల్టర్నేరియా ఆల్టర్నాటా అనేవి ఆపిల్ పాథోటైప్‌లు58,59. అదనంగా, MLP-వంటి 423 జన్యువును అధికంగా వ్యక్తీకరించే ఆపిల్ క్యాలీలలో నిరోధకత-సంబంధిత జన్యువుల వ్యక్తీకరణ తక్కువగా ఉంది మరియు అవి శిలీంధ్ర సంక్రమణకు మరింత సున్నితంగా ఉన్నాయి59. ఫ్యూసేరియం ఆక్సిస్పోరమ్ ఎఫ్ తరువాత, నిరోధక సాధారణ బీన్ జెర్మ్‌ప్లాజమ్‌లో MLP-వంటి 423 జన్యువు కూడా అణచివేయబడింది. cn. బీన్ ఇన్ఫెక్షన్ 60.
మా RNA-seq అధ్యయనంలో గుర్తించబడిన PR-10 కుటుంబంలోని ఇతర సభ్యులు, అప్‌రెగ్యులేషన్‌కు ప్రతిస్పందనగా LlR18A మరియు LlR18B జన్యువులు, అలాగే లిపిడ్ ట్రాన్స్‌ఫర్ ప్రోటీన్ DIR1 కోసం అప్‌రెగ్యులేట్ చేయబడిన (1 జన్యువు) లేదా డౌన్‌రెగ్యులేట్ చేయబడిన (3 జన్యువులు) జన్యువు. అదనంగా, WGCNA ఈ మాడ్యూల్‌లో LlR18B జన్యువును ఒక హబ్‌గా హైలైట్ చేస్తుంది, ఇది టీకాలకు అత్యంత సున్నితంగా ఉంటుంది మరియు అనేక రక్షణాత్మక ప్రతిస్పందన జన్యువులను కలిగి ఉంటుంది. వ్యాధికారక బ్యాక్టీరియాకు ప్రతిస్పందనగా పసుపు లూపిన్ ఆకులలో, అలాగే D. toxica టీకా తర్వాత NLL కాండాలలో LlR18A మరియు LlR18B జన్యువులు ప్రేరేపించబడ్డాయి, అయితే ఈ జన్యువుల యొక్క వరి హోమోలాగ్, RSOsPR10, జాస్మోనిక్ యాసిడ్ సిగ్నలింగ్ మార్గంలో పాల్గొన్నట్లు భావించబడే శిలీంధ్ర సంక్రమణ ద్వారా వేగంగా ప్రేరేపించబడింది53,61, 62. DIR1 జన్యువు నిర్దిష్టేతర లిపిడ్ రవాణా ప్రోటీన్‌లను ఎన్‌కోడ్ చేస్తుంది, ఇవి సిస్టమిక్ అక్వైర్డ్ రెసిస్టెన్స్ (SAR) ప్రారంభానికి అవసరం. రక్షణాత్మక ప్రతిచర్యలు అభివృద్ధి చెందడంతో, DIR1 ప్రోటీన్ సంక్రమణ కేంద్రం నుండి ఫ్లోయమ్ ద్వారా రవాణా చేయబడి, దూరపు అవయవాలలో SARను ప్రేరేపిస్తుంది. ఆసక్తికరంగా, TanjilG_02313 DIR1 జన్యువు 84A:476 మరియు పాపులేషన్ 22660 లైన్లలో మొదటి సమయ బిందువు వద్ద గణనీయంగా ప్రేరేపించబడింది, కానీ ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత 84A:476 లైన్‌లో మాత్రమే విజయవంతంగా అభివృద్ధి చెందింది. ఇది NLLలో DIR1 జన్యువు యొక్క కొంత ఉపకార్యాత్మకతను సూచించవచ్చు, ఎందుకంటే మిగిలిన మూడు హోమోలాగ్‌లు 6 గంటల తర్వాత (hpi) 83A:476 లైన్‌లో మాత్రమే టీకాకు ప్రతిస్పందించాయి మరియు ఈ ప్రతిస్పందన కిందికి నిర్దేశించబడింది.
మా అధ్యయనంలో, “GO:0055114 రెడాక్స్ ప్రక్రియ” అనే జీవ ప్రక్రియకు సంబంధించిన అత్యంత సాధారణ భాగాలు సైటోక్రోమ్ P450 ప్రోటీన్, పెరాక్సిడేస్, లినోలిక్ యాసిడ్ 9S-/13S-లిపాక్సిజినేస్, మరియు 1-అమినోసైక్లోప్రొపేన్-1-కార్బాక్సిలిక్ యాసిడ్ ఆక్సిడేస్. దీనికి అదనంగా, మా WGCNA, HSFA4a హోమోలాగ్‌ను, Lanr1 నిరోధక జన్యు అభ్యర్థి TanjilG_05042 వంటి మాడ్యూళ్లను కలిగి ఉన్న ఒక హబ్‌గా నిర్వచిస్తుంది. HSFA4a అనేది మొక్కలలో కేంద్రక లిప్యంతరీకరణ యొక్క రెడాక్స్-ఆధారిత నియంత్రణలో ఒక భాగం.
సైటోక్రోమ్ P450 ప్రోటీన్లు ఆక్సిడోరిడక్టేజ్‌లు, ఇవి ప్రాథమిక మరియు ద్వితీయ జీవక్రియలో NADPH మరియు/లేదా O2-ఆధారిత హైడ్రాక్సిలేషన్ చర్యలను ఉత్ప్రేరకపరుస్తాయి. వీటిలో జెనోబయోటిక్స్ జీవక్రియతో పాటు హార్మోన్లు, కొవ్వు ఆమ్లాలు, స్టెరాల్స్, కణ గోడ భాగాలు, బయోపాలిమర్లు మరియు రక్షణాత్మక సమ్మేళనాల జీవసంశ్లేషణ కూడా ఉన్నాయి 69. మా అధ్యయనంలో, మొక్కల సైటోక్రోమ్ P450 పనితీరులోని వైవిధ్యం -10.6 log2 (ఫోల్డ్ చేంజ్) నుండి 5.7కి తగ్గింది. దీనికి కారణం పెద్ద సంఖ్యలో మార్పు చెందిన హోమోలాగ్‌లు (37) మరియు నిర్దిష్ట జన్యువుల మధ్య ప్రతిస్పందన నమూనాలలో తేడాలు, ఇది ఒక ఊర్ధ్వ సవరణను ప్రతిబింబిస్తుంది. ఇంత పెద్ద ప్రోటీన్ సూపర్‌ఫ్యామిలీలో NLL జన్యువుల యొక్క ఊహాజనిత జీవసంబంధమైన పనితీరును వివరించడానికి కేవలం RNA-seq డేటాను ఉపయోగించడం చాలా ఊహాజనితమైనది. అయినప్పటికీ, కొన్ని సైటోక్రోమ్ P450 జన్యువులు వ్యాధికారక శిలీంధ్రాలు లేదా బ్యాక్టీరియాకు పెరిగిన నిరోధకతతో సంబంధం కలిగి ఉన్నాయని, అలెర్జీ ప్రతిచర్యలకు కూడా ఇవి దోహదపడతాయని గమనించడం ముఖ్యం 69,70,71.
క్లాస్ III పెరాక్సిడేజ్‌లు అనేవి బహుళ విధులు గల మొక్కల ఎంజైమ్‌లు. ఇవి మొక్కల పెరుగుదల మరియు అభివృద్ధి సమయంలో, అలాగే లవణీయత, కరువు, అధిక కాంతి తీవ్రత మరియు వ్యాధికారక దాడి వంటి పర్యావరణ ఒత్తిళ్లకు ప్రతిస్పందనగా జరిగే అనేక రకాల జీవక్రియ ప్రక్రియలలో పాల్గొంటాయి72. స్టైలోసాంథెస్ హ్యూమిలిస్ మరియు సి. గ్లోయోస్పోరియోయిడ్స్, లెన్స్ క్యులినారిస్ మరియు సి. ట్రంకాటమ్, ఫేసియోలస్ వల్గారిస్ మరియు సి. లిండెముథియానమ్, కుకుమిస్ సాటివస్ మరియు సి. లాగేనారియమ్ వంటి అనేక మొక్కల జాతులు ఆంత్రాసిస్‌తో జరిపే పరస్పర చర్యలో పెరాక్సిడేజ్‌లు పాల్గొంటాయి73,74,75,76. శిలీంధ్రం మొక్క కణజాలంలోకి చొచ్చుకుపోయే ముందే, ఈ ప్రతిస్పందన చాలా వేగంగా ఉంటుంది, కొన్నిసార్లు 4 గంటల తర్వాత కూడా ఇది జరుగుతుంది73. పెరాక్సిడేజ్ జన్యువు డి. టాక్సికా NLL టీకాకు కూడా ప్రతిస్పందించింది. ఆక్సిడేటివ్ బరస్ట్‌ను నియంత్రించడం లేదా ఆక్సిడేటివ్ ఒత్తిడిని తొలగించడం వంటి వాటి సాధారణ విధులతో పాటు, పెరాక్సిడేజ్‌లు లిగ్నిఫికేషన్ సమయంలో కణ గోడను బలోపేతం చేయడం, నిర్దిష్ట సమ్మేళనాల సబ్‌యూనిట్ లేదా క్రాస్-లింకింగ్ ఆధారంగా భౌతిక అవరోధాలను సృష్టించడం ద్వారా వ్యాధికారక పెరుగుదలకు ఆటంకం కలిగించగలవు. ఈ విధిని ఇన్ సిలికో పద్ధతిలో TanjilG_03329 జన్యువుకు ఆపాదించవచ్చు. ఈ జన్యువు, లిగ్నిన్‌ను ఏర్పరిచే ఒక ఆనయాన్ పెరాక్సిడేజ్‌ను సంకేతీకరిస్తుంది. మా అధ్యయనంలో, ఈ జన్యువు 83A:476 నిరోధక లైన్‌లో 6 HPI వద్ద గణనీయంగా అప్‌రెగ్యులేట్ అయింది, కానీ స్పందించని ఇతర స్ట్రెయిన్‌లు మరియు సమయాలలో అలా జరగలేదు.
లినోలిక్ ఆమ్లం యొక్క 9S-/13S-లిపాక్సిజినేస్ అనేది లిపిడ్ బయోసింథసిస్ యొక్క ఆక్సీకరణ మార్గంలో మొదటి దశ78. ఈ మార్గం యొక్క ఉత్పత్తులు మొక్కల రక్షణలో బహుళ విధులను కలిగి ఉంటాయి, వీటిలో కల్లోజ్ మరియు పెక్టిన్ నిక్షేపాల ఏర్పాటు ద్వారా కణ గోడను బలోపేతం చేయడం, మరియు రియాక్టివ్ ఆక్సిజన్ జాతుల ఉత్పత్తి ద్వారా ఆక్సీకరణ ఒత్తిడిని నియంత్రించడం వంటివి ఉన్నాయి79,80,81,82,83. ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, అన్ని స్ట్రెయిన్‌లలో లినోలిక్ ఆమ్లం 9S-/13S-లిపాక్సిజినేస్ యొక్క వ్యక్తీకరణ మార్పు చెందింది, కానీ సున్నితమైన జనాభా 22660లో, వివిధ సమయాల్లో అప్‌రెగ్యులేషన్ ప్రబలంగా ఉంది, అయితే నిరోధక Lanr1 మరియు AnMan అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న స్ట్రెయిన్‌లలో, ఇది ఈ జన్యురకాల మధ్య రక్షణాత్మక ఆంత్రాక్స్ ప్రతిచర్యలలో ఆక్సిలిపిన్ పొర యొక్క వైవిధ్యీకరణను నొక్కి చెబుతుంది.
లూపిన్‌తో టీకా వేసినప్పుడు 1-అమినోసైక్లోప్రొపేన్-1-కార్బాక్సిలేట్ ఆక్సిడేస్ (ACO) హోమోలాగ్ గణనీయంగా అప్‌రెగ్యులేట్ (9 జన్యువులు) లేదా డౌన్‌రెగ్యులేట్ (2 జన్యువులు) చేయబడింది. రెండు మినహాయింపులతో, ఈ ప్రతిస్పందనలన్నీ 83A:476 వద్ద 6 గంటల తర్వాత సంభవించాయి. ACO ప్రోటీన్ల ద్వారా మధ్యవర్తిత్వం వహించే ఎంజైమాటిక్ చర్య ఇథిలీన్ ఉత్పత్తిలో రేట్-లిమిటింగ్ దశ మరియు అందువల్ల ఇది అధికంగా నియంత్రించబడుతుంది84. ఇథిలీన్ అనేది ఒక మొక్కల హార్మోన్, ఇది మొక్కల అభివృద్ధిని మరియు నిర్జీవ మరియు జీవ ఒత్తిడి పరిస్థితులకు ప్రతిస్పందనను నియంత్రించడంలో వివిధ రకాల పాత్రలను పోషిస్తుంది. ACO ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ ప్రేరణ మరియు ఇథిలీన్ సిగ్నలింగ్ మార్గం యొక్క క్రియాశీలత, రియాక్టివ్ ఆక్సిజన్ జాతులు మరియు ఫైటోఅలెక్సిన్‌ల ఉత్పత్తిని నియంత్రించడం ద్వారా హెమిబయోట్రోఫిక్ శిలీంధ్రం ఒరైజే ఒరైజేకు వ్యతిరేకంగా వరి యొక్క నిరోధకతను పెంచడంలో పాలుపంచుకుంటాయి. ఈ అధ్యయనంలో నివేదించబడిన 83A:476 లైన్‌లో ACO హోమోలాగ్‌ల గణనీయమైన అప్‌రెగ్యులేషన్ నేపథ్యంలో, M. oryzae మరియు C. lupini88,89 మధ్య చాలా సారూప్యమైన ఆకు సంక్రమణ ప్రక్రియ కనుగొనబడింది, ఇది NLL ఆంత్రాక్నోస్ ఇథిలీన్‌కు నిరోధకతను అందించే అవకాశాన్ని అణు మార్గాలలో ఒక సంకేత కేంద్ర దశకు మారుస్తుంది.
ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, 83A:476లో 6 hpi వద్ద మరియు మాండెలోప్ మరియు 22660 జనాభాలో 48 hpi వద్ద కిరణజన్య సంయోగక్రియకు సంబంధించిన అనేక జన్యువుల భారీ-స్థాయి అణచివేత గమనించబడింది. ఈ మార్పుల పరిధి మరియు పురోగతి స్థాయికి అనులోమానుపాతంలో ఉంటుంది. ఈ ప్రయోగంలో ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత గమనించబడింది. ఇటీవల, వ్యాధికారక బ్యాక్టీరియా మరియు శిలీంధ్రాలతో సహా మొక్క-వ్యాధికారక పరస్పర చర్యల యొక్క అనేక నమూనాలలో కిరణజన్య సంయోగక్రియకు సంబంధించిన ట్రాన్స్క్రిప్ట్‌ల యొక్క బలమైన మరియు ముందస్తు అణచివేత నివేదించబడింది. సంక్రమణకు ప్రతిస్పందనగా కిరణజన్య సంయోగక్రియకు సంబంధించిన జన్యువుల యొక్క వేగం (కొన్ని పరస్పర చర్యలలో 2 HPI నుండి) మరియు ప్రపంచవ్యాప్త అణచివేత, రియాక్టివ్ ఆక్సిజన్ జాతుల విస్తరణ మరియు అలెర్జీ ప్రతిచర్యలకు మధ్యవర్తిత్వం వహించడానికి సాలిసిలిక్ ఆమ్ల మార్గంతో వాటి పరస్పర చర్య ఆధారంగా మొక్క రోగనిరోధక శక్తిని ప్రేరేపించగలవు 90,94.
ముగింపుగా, అత్యంత నిరోధక వంశం (83A:476) కోసం ప్రతిపాదించబడిన రక్షణ ప్రతిస్పందన యంత్రాంగాలలో R జన్యువు (బహుశా TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) ద్వారా వేగవంతమైన వ్యాధికారక గుర్తింపు మరియు అలెర్జిక్ ప్రతిస్పందన-మధ్యవర్తిత్వ సాలిసిలిక్ ఆమ్లం మరియు ఇథిలీన్ సిగ్నలింగ్, ఆ తర్వాత దీర్ఘ-శ్రేణి SAR స్థాపన ఉన్నాయి. ఈ చర్యకు DIR-1 ప్రోటీన్ మద్దతు ఇస్తుంది. C. lupini సంక్రమణకు బయోట్రోఫిక్ కాలం చాలా తక్కువ (సుమారు 2 రోజులు) ఉంటుందని, ఆ తర్వాత నెక్రోటిక్ పెరుగుదల95 ఉంటుందని గమనించాలి. ఈ దశల మధ్య పరివర్తన నెక్రోసిస్ మరియు అతిధేయ మొక్కలలో హైపర్సెన్సిటివిటీ ప్రతిచర్యలకు ప్రేరకాలుగా పనిచేసే ఇథిలీన్-ప్రేరిత ప్రోటీన్ల వ్యక్తీకరణతో ముడిపడి ఉండవచ్చు. అందువల్ల, బయోట్రోఫిక్ దశలో C. lupiniని విజయవంతంగా పట్టుకోవడానికి సమయ పరిధి చాలా తక్కువగా ఉంటుంది. 6 గంటల తర్వాత 83A:476లో గమనించిన రెడాక్స్ మరియు కిరణజన్య సంయోగక్రియకు సంబంధించిన జన్యువుల పునఃప్రోగ్రామింగ్, శిలీంధ్ర హైఫేల పురోగతికి అనుగుణంగా ఉంది మరియు బయోట్రోఫిక్ దశలో విజయవంతమైన రక్షణాత్మక ప్రతిస్పందన అభివృద్ధిని సూచిస్తుంది. నెక్రోటిక్ పెరుగుదలకు మారడానికి ముందే శిలీంధ్రాన్ని పట్టుకోవడానికి మాండెలుప్ మరియు 22660 జనాభా యొక్క ట్రాన్స్క్రిప్టోమిక్ ప్రతిస్పందనలు చాలా ఆలస్యం కావచ్చు, అయినప్పటికీ, PR-10 ప్రోటీన్ యొక్క సాపేక్షంగా వేగవంతమైన నియంత్రణ క్షితిజ సమాంతర నిరోధకతను ప్రోత్సహిస్తుంది కాబట్టి, 22660 జనాభా కంటే మాండెలుప్ మరింత ప్రభావవంతంగా ఉండవచ్చు.
ప్రామాణిక R జన్యువు ద్వారా ప్రేరేపించబడిన ETI, బీన్‌లో ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతకు ఒక సాధారణ యంత్రాంగంగా కనిపిస్తుంది. అందువల్ల, నమూనా చిక్కుడు జాతి మొక్క అయిన మెడికాగో ట్రంకాటులాలో, TIR-NBS-LRR97 ప్లాంట్ R జన్యు తరగతికి చెందిన RCT1 జన్యువు ద్వారా ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత లభిస్తుంది. ఈ జన్యువును సున్నితమైన మొక్కలకు బదిలీ చేసినప్పుడు, అది అల్ఫాల్ఫాలో కూడా విస్తృత-శ్రేణి ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతను కలుగజేస్తుంది. సాధారణ బీన్ (P. vulgaris)లో, ఇప్పటి వరకు రెండు డజన్లకు పైగా ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధక జన్యువులు గుర్తించబడ్డాయి. ఈ జన్యువులలో కొన్ని ఏ ప్రామాణిక R జన్యువులు లేని ప్రాంతాలలో కనిపిస్తాయి, అయితే మరికొన్ని TIR-NBS-LRRs99తో సహా NBS-LRR జన్యు సమూహాన్ని కలిగి ఉన్న క్రోమోజోమ్‌ల అంచుల వద్ద ఉన్నాయి. జీనోమ్-వ్యాప్త SSR అధ్యయనం కూడా సాధారణ బీన్‌లో ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకతతో NBS-LRR జన్యువు యొక్క సంబంధాన్ని ధృవీకరించింది. తెల్ల లుపిన్ 101లో ప్రధాన ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధక లోకస్‌ను కలిగి ఉన్న జన్యు ప్రాంతంలో ప్రామాణిక R జన్యువు కూడా కనుగొనబడింది.
మొక్కకు సంక్రమణ జరిగిన తొలి దశలోనే (ప్రాధాన్యంగా సంక్రమణ జరిగిన 12 గంటలలోపు) క్రియాశీలమయ్యే తక్షణ నిరోధక చర్య, కోలెలోట్రికమ్ లూపినీ అనే వ్యాధికారక శిలీంధ్రం వల్ల కలిగే ఆంత్రాక్నోస్ నుండి సన్న ఆకుల లూపిన్‌ను సమర్థవంతంగా రక్షిస్తుందని మా పరిశోధన చూపిస్తుంది. హై థ్రూపుట్ సీక్వెన్సింగ్‌ను ఉపయోగించి, మేము Lanr1 మరియు AnMan నిరోధక జన్యువుల ద్వారా NLL మొక్కలలో ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధక జన్యువుల యొక్క విభిన్న వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్‌లను ప్రదర్శించాము. విజయవంతమైన రక్షణలో, మొక్క వ్యాధికారకంతో మొదటిసారి సంపర్కం చెందిన కొన్ని గంటలలోపే రెడాక్స్, కిరణజన్య సంయోగక్రియ మరియు వ్యాధిజనకతలో పాల్గొనే ప్రోటీన్‌ల జన్యువులను జాగ్రత్తగా రూపొందించడం ఇమిడి ఉంటుంది. ఇలాంటి రక్షణాత్మక చర్యలు, కానీ ఆలస్యంగా జరిగితే, మొక్కలను వ్యాధుల నుండి రక్షించడంలో చాలా తక్కువ ప్రభావవంతంగా ఉంటాయి. Lanr1 జన్యువు ద్వారా కలిగే ఆంత్రాక్స్ నిరోధకత, R జన్యువు యొక్క సాధారణ వేగవంతమైన ప్రతిస్పందనను (ఎఫెక్టర్-ట్రిగ్గర్డ్ ఇమ్యూనిటీ) పోలి ఉంటుంది, అయితే AnMan జన్యువు చాలా మటుకు క్షితిజ సమాంతర ప్రతిస్పందనను (మైక్రోబ్-అసోసియేటెడ్ మాలిక్యులర్ ప్యాటర్న్ ద్వారా ప్రేరేపించబడిన రోగనిరోధక శక్తి) అందిస్తుంది, ఇది ఒక మోస్తరు స్థాయి స్థిరత్వాన్ని కల్పిస్తుంది.
ఆంత్రాక్నోస్ మార్కర్ల కోసం పరీక్షించడానికి ఉపయోగించిన 215 NLL లైన్లలో 74 సాగు రకాలు, సంకరణం లేదా ప్రజననం ద్వారా పొందిన 60 లైన్లు, 5 మ్యూటెంట్లు, మరియు 76 అడవి లేదా అసలైన జెర్మ్‌ప్లాజమ్‌లు ఉన్నాయి. ఈ లైన్లు 17 దేశాల నుండి వచ్చాయి, ప్రధానంగా పోలాండ్ (58), స్పెయిన్ (47), జర్మనీ (27), ఆస్ట్రేలియా (26), రష్యా (19), బెలారస్ (7), ఇటలీ (5) మరియు 10 ఇతర దేశాల నుండి లైన్లు వచ్చాయి. ఈ సమితిలో లాన్‌ఆర్1 (Lanr1) అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న 83A:476, టాంజిల్, వోంగా, మరియు యాన్‌మ్యాన్ (AnMan) అల్లెల్‌ను కలిగి ఉన్న మాండెలుప్ వంటి సూచనాత్మక నిరోధక లైన్లు కూడా ఉన్నాయి. ఈ లైన్లను పోలాండ్‌లోని వియాట్రోవోలో ఉన్న పోజ్నాన్ ప్లాంట్ బ్రీడింగ్ లిమిటెడ్ నిర్వహించే యూరోపియన్ లూపిన్ జెనెటిక్ రిసోర్స్ డేటాబేస్ నుండి పొందారు (అనుబంధ పట్టిక S1).
మొక్కలను నియంత్రిత పరిస్థితులలో (16 గంటల కాంతి కాలం, పగటిపూట 25°C మరియు రాత్రిపూట 18°C ​​ఉష్ణోగ్రత) పెంచారు. రెండు జీవసంబంధమైన ప్రతిరూపాలను విశ్లేషించారు. ప్రోటోకాల్ ప్రకారం, DNeasy ప్లాంట్ మినీ కిట్ (Qiagen, Hilden, Germany) ఉపయోగించి మూడు వారాల వయస్సు గల ఆకుల నుండి DNAను వేరు చేశారు. వేరు చేసిన DNA యొక్క నాణ్యత మరియు సాంద్రతను స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రిక్ పద్ధతుల ద్వారా (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) అంచనా వేశారు. ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధక జన్యువు AnMan (cv. Mandelup నుండి ఉద్భవించినది)ను గుర్తించే AnManM1 మార్కర్ మరియు Lanr1 (cv. Tanjil నుండి ఉద్భవించినది) జన్యువుకు ఇరువైపులా ఉన్న Anseq3 మరియు Anseq4 మార్కర్లను విశ్లేషించారు 11,26,28. నిరోధక అల్లెల్ కోసం హోమోజైగోట్‌లకు “1”, సున్నితమైన వాటికి “0”, మరియు హెటెరోజైగోట్‌లకు 0.5గా స్కోర్ చేశారు.
AnManM1, AnSeq3 మరియు AnSeq4 మార్కర్ల స్క్రీనింగ్ ఫలితాలు మరియు చివరి అనుసరణ ప్రయోగాల కోసం విత్తనాల లభ్యత ఆధారంగా, ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధకత ఫినోటైపింగ్ కొరకు 50 NLL లైన్లను ఎంపిక చేశారు. ఈ విశ్లేషణను కంప్యూటర్ నియంత్రిత గ్రీన్‌హౌస్‌లో రెండుసార్లు నిర్వహించారు. ఈ గ్రీన్‌హౌస్‌లో 14 గంటల కాంతి కాలం, పగటిపూట 22°C మరియు రాత్రిపూట 19°C ఉష్ణోగ్రత ఉండేవి. విత్తన పొర చాలా గట్టిగా ఉండటం వల్ల విత్తన సుప్తావస్థ రాకుండా నివారించడానికి మరియు ఏకరీతిగా మొలకెత్తేలా చూడటానికి, విత్తే ముందు విత్తనాలను గీకారు (పిండానికి ఎదురుగా ఉన్న వైపున ఉన్న విత్తన పొరను పదునైన బ్లేడుతో కోసివేయడం). మొక్కలను క్రిమిరహిత మట్టి (TS-1 REC 085 మీడియం బేసిక్, క్లాస్‌మాన్-డీల్‌మాన్ పోల్స్కా, వార్సా, పోలాండ్) ఉన్న కుండీలలో (11 × 11 × 21 సెం.మీ.) పెంచారు. గ్రేటర్ పోలాండ్‌లోని వెర్ఝెనిట్సా (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E) ప్రాంతంలోని ఒక పొలంలో పెంచిన సన్న-ఆకుల లూపిన్ మొక్కల కాండాల నుండి 1999లో వృద్ధి చేసిన కొల్లెటోట్రికమ్ లూపినీ కోల్-08 స్ట్రెయిన్‌తో టీకా ప్రక్రియ నిర్వహించబడింది. స్పోరులేషన్‌ను ప్రేరేపించడానికి, వేరుచేసిన వాటిని 21 రోజుల పాటు బ్లాక్ లైట్ కింద 20° C వద్ద SNA మాధ్యమంలో కల్చర్ చేశారు. విత్తనాలు నాటిన నాలుగు వారాల తర్వాత, మొక్కలు 4-6 ఆకుల దశకు చేరుకున్నప్పుడు, ప్రతి mlకి 0.5 x 10⁶ కోనిడియా సాంద్రత గల కోనిడియా సస్పెన్షన్‌ను పిచికారీ చేయడం ద్వారా టీకా ప్రక్రియ నిర్వహించబడింది. టీకా ప్రక్రియ తర్వాత, కోనిడియా మొలకెత్తడానికి మరియు సంక్రమణ ప్రక్రియను సులభతరం చేయడానికి, మొక్కలను సుమారు 98% తేమ మరియు 25°C ఉష్ణోగ్రత వద్ద 24 గంటల పాటు చీకటిలో ఉంచారు. ఆ తర్వాత మొక్కలను 14-గంటల కాంతి కాలంలో, పగలు 22°C/రాత్రి 19°C ఉష్ణోగ్రత మరియు 70% తేమ కింద పెంచారు. వ్యాధిని ప్రవేశపెట్టిన 22 రోజుల తర్వాత, కాండాలు మరియు ఆకులపై నెక్రోటిక్ గాయాలు ఉండటం లేదా లేకపోవడాన్ని బట్టి వ్యాధి స్కోరును 0 (రోగనిరోధక శక్తి) నుండి 9 (అత్యంత సున్నితమైనది) వరకు లెక్కించారు. అదనంగా, స్కోరింగ్ తర్వాత, మొక్కల బరువును కొలిచారు. మార్కర్ జన్యురకాలు మరియు వ్యాధి ఫినోటైప్‌ల మధ్య సంబంధాలను పాయింట్ టూ-సీక్వెన్స్ సహసంబంధాలుగా లెక్కించారు (ఆంత్రాక్నోస్ నిరోధక ఫినోటైప్ విశ్లేషణ కోసం లైన్ల సమితిలో హెటెరోజైగస్ మార్కర్లు లేకపోవడం).