Nature.com වෙත පිවිසීම ගැන ඔබට ස්තූතියි. ඔබ භාවිතා කරන බ්‍රව්සර් අනුවාදයේ සීමිත CSS සහාය ඇත. හොඳම අත්දැකීම සඳහා, යාවත්කාලීන කළ බ්‍රව්සරයක් භාවිතා කරන ලෙස අපි නිර්දේශ කරමු (නැතහොත් Internet Explorer හි අනුකූලතා මාදිලිය අක්‍රීය කරන්න). මේ අතරතුර, අඛණ්ඩ සහාය සහතික කිරීම සඳහා, අපි වෙබ් අඩවිය විලාස සහ JavaScript නොමැතිව විදැහුම් කරන්නෙමු.
ඇන්ගුස්ටිෆෝලියස් ලුපින් (NLL, Lupinus angustifolius L.) යනු ආහාර නිෂ්පාදනය සහ පස වැඩිදියුණු කිරීම සඳහා භාවිතා කරන රනිල කුලයට අයත් ශාකයකි. බෝගයක් ලෙස NLL හි ගෝලීය ව්‍යාප්තිය විනාශකාරී ඇන්ත්‍රැක්නෝස් රෝගයට හේතු වන ලුපින් ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ඇතුළු බොහෝ ව්යාධිජනක දිලීර ආකර්ෂණය කර ගෙන ඇත. වැඩි ප්‍රතිරෝධයක් ලබා දෙන ඇලිලීස් දෙකක්, Lanr1 සහ AnMan, NLL අභිජනනය සඳහා භාවිතා කර ඇත, නමුත් යටින් පවතින අණුක යාන්ත්‍රණ තවමත් නොදනී. මෙම අධ්‍යයනයේ දී, යුරෝපීය NLL සාම්පල පරීක්ෂා කිරීම සඳහා Lanr1 සහ AnMan සලකුණු භාවිතා කරන ලදී. පාලිත පරිසරයක එන්නත පරීක්ෂා කිරීම ප්‍රතිරෝධී පරිත්‍යාගශීලීන් දෙදෙනාගේම කාර්යක්ෂමතාව තහවුරු කළේය. නියෝජිත ප්‍රතිරෝධී සහ සංවේදී රේඛා මත වෙනස් ජාන ප්‍රකාශන පැතිකඩක් සිදු කරන ලදී. ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය “GO:0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරය”, “GO:0055114 රෙඩොක්ස් ක්‍රියාවලිය” සහ “GO:0015979 ප්‍රභාසංස්ලේෂණය” යන ජාන ඔන්ටොලොජි පදවල අධික ප්‍රකාශනය සමඟ සම්බන්ධ විය. ඊට අමතරව, Lanr1(83A:476) රේඛාව එන්නත් කිරීමෙන් පසු සැලකිය යුතු පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතික්‍රමලේඛනයක් වේගයෙන් පෙන්නුම් කළ අතර, අනෙක් රේඛා මෙම ප්‍රතිචාරයේ පැය 42 කින් පමණ ප්‍රමාදයක් පෙන්නුම් කළේය. ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර TIR-NBS, CC-NBS-LRR සහ NBS-LRR ජාන, ව්‍යාධිජනකයට සම්බන්ධ ප්‍රෝටීන 10 ක්, ලිපිඩ හුවමාරු ප්‍රෝටීන, එන්ඩොග්ලුකන්-1,3-β-ග්ලූකෝසයිඩේස්, ග්ලයිසීන් බහුල සෛල බිත්ති ප්‍රෝටීන සහ ඔක්සිජන් ප්‍රතික්‍රියාශීලී මාර්ගයෙන් ලැබෙන ජාන සමඟ සම්බන්ධ වේ. ප්‍රභාසංස්ලේෂණය හා සම්බන්ධ ජාන ප්‍රවේශමෙන් මර්දනය කිරීම ඇතුළුව 83A:476 සඳහා මුල් ප්‍රතිචාර, දිලීර ජීව විද්‍යාවේ ශාකමය වර්ධන අවධියේදී සාර්ථක ආරක්ෂාවක් සමඟ සමපාත වූ අතර, එයින් ඇඟවෙන්නේ ඵලකාරකයක් ප්‍රතිශක්තිය අවුලුවන බවයි. සමස්ත තිරස් ඇදගෙන යාම මෙන්ම මැන්ඩලූප් ප්‍රතික්‍රියාව මන්දගාමී වේ.
පටු කොළ සහිත ලුපින් (NLL, Lupinus angustifolius L.) යනු බටහිර මධ්‍යධරණී කලාපයේ ආරම්භ වූ ඉහළ ප්‍රෝටීන් ධාන්‍ය වර්ගයකි1,2. එය දැනට සතුන් සහ මිනිසුන් සඳහා ආහාර බෝගයක් ලෙස වගා කෙරේ. සහජීවන නයිට්‍රජන් සවි කිරීමේ බැක්ටීරියා මගින් නයිට්‍රජන් සවි කිරීම සහ පසෙහි ව්‍යුහයේ සමස්ත වැඩිදියුණු කිරීම හේතුවෙන් එය බෝග භ්‍රමණ පද්ධතිවල හරිත පොහොර ලෙසද සැලකේ. NLL පසුගිය සියවසේදී හීලෑ කිරීමේ වේගවත් ක්‍රියාවලියකට භාජනය වී ඇති අතර තවමත් ඉහළ අභිජනන පීඩනයක් යටතේ පවතී3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. NLL බහුලව වගා කිරීමත් සමඟ, ව්යාධිජනක දිලීර අනුප්‍රාප්තිය නව කෘෂිකාර්මික ස්ථාන වර්ධනය කළ අතර නව බෝග විනාශ කරන රෝග ඇති කළේය. ලුපින් ගොවීන්ට සහ අභිජනනය කරන්නන්ට වඩාත්ම කැපී පෙනෙන දෙය වූයේ කොලෙටෝට්‍රිචම් ලුපිනි (බොන්ඩාර්) නිරෙන්බර්ග්, ෆයිලර් සහ හේගෙඩෝන් යන රෝගකාරක දිලීර නිසා ඇති වන ඇන්ත්‍රැක්නෝස් පෙනුමයි. ලුපින් ගොවීන්ට සහ අභිජනනය කරන්නන්ට වඩාත්ම කැපී පෙනෙන දෙය වූයේ කොලෙටෝට්‍රිචම් ලුපිනි (බොන්ඩාර්) නිරෙන්බර්ග්, ෆයිලර් සහ හේගෙඩෝන් යන රෝගකාරක දිලීර නිසා ඇති වන ඇන්ත්‍රැක්නෝස් පෙනුමයි. නයිබෝලි ප්‍රාථමික ෆෙර්මරොව් සහ සෙලෙක්ෂියෝනෙරොව් ලුපිනා බ්ලෝ පොවාව්ලේනි ඇන්ට්‍රැක්නෝසා, වොග්නෝසා грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. ලුපින් ගොවීන්ට සහ අභිජනනය කරන්නන්ට වඩාත් කැපී පෙනෙන දෙය වූයේ කොලෙටෝට්‍රිචම් ලුපිනි (බොන්ඩාර්) නිරෙන්බර්ග්, ෆයිලර් සහ හේගෙඩෝන් යන රෝගකාරක දිලීර නිසා ඇති වන ඇන්ත්‍රැක්නෝස් මතුවීමයි.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原，它是由病原) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 引起的。对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原(Bondar)嵵හිසකෙස්。1 නයිබෝලී ප්‍රචාරක යන්ත්‍ර සහ සෙලෙක්ෂියෝනරොව් ලුපිනා යව්ලෙන්සියා පොවාව්ලේනි ඇන්ට්‍රැක්නොසා, ප්‍රකාශය грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. ලුපින් ගොවීන්ට සහ අභිජනනය කරන්නන්ට වඩාත්ම කැපී පෙනෙන කරුණ වන්නේ කොලෙටෝට්‍රිචම් ලුපිනි (බොන්ඩාර්) නිරෙන්බර්ග්, ෆයිලර් සහ හේගෙඩෝන් යන රෝගකාරක දිලීර නිසා ඇති වන ඇන්ත්‍රැක්නෝස් මතුවීමයි.රෝගය පිළිබඳ මුල්ම වාර්තා බ්‍රසීලයෙන් සහ ඇමරිකා එක්සත් ජනපදයෙන් ලැබුණු අතර, සාමාන්‍ය රෝග ලක්ෂණ පිළිවෙලින් 1912 සහ 1929 දී දක්නට ලැබුණි. කෙසේ වෙතත්, වසර 30 කට පමණ පසු, රෝග කාරකය කොලෙටොට්‍රිචම් ග්ලෝයෝස්පෝරියෝයිඩ්ස් (පෙන්ස්.) පෙන්ස් ලෙස නම් කරන ලදී. සහ සැක්., ටෙලිමෝර්ෆ් ග්ලෝමරෙල්ලා සින්ගුලාටා (ස්ටෝන්මන්) ස්පෝල්ඩ්. සහ සැක්., ටෙලිමෝර්ෆ් ග්ලෝමරෙල්ලා සින්ගුලාටා (ස්ටෝන්මන්) ස්පෝල්ඩ්. & Sacc., telеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. සහ සැක්., ග්ලෝමරෙල්ලා සින්ගුලාටා (ස්ටෝන්මන්) ස්පෝල්ඩ්ගේ ටෙලිමෝර්ෆ්. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. සහ සැක්., ඉලක්කගත රූප විද්‍යාවේ ග්ලෝමරෙල්ලා සින්ගුලාටා (ස්ටෝන්මන්) ස්පෝල්ඩ්. සහ එච්. ෂ්‍රෙන්ක්,. සහ එච්. ෂ්‍රෙන්ක්, .සහ එච්. ෂ්‍රෙන්ක්. & H.施伦克,. & H.施伦克,.සහ එච්. ෂ්ලෙන්ක්, .20 වන සියවසේ මැද භාගයේදී සිදු කරන ලද මූලික රෝග ෆීනෝටයිපින් NLL සහ කහ ලුපින් (L. luteus L.) ප්‍රවේශයන්හි යම් ප්‍රතිරෝධයක් පෙන්නුම් කළ නමුත් පරීක්ෂා කරන ලද සියලුම සුදු ලුපින් (L. albus L.) ප්‍රවේශයන් ඉතා සංවේදී විය15,16. අධ්‍යයනවලින් පෙන්වා දී ඇත්තේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් වර්ධනය වැඩි වර්ෂාපතනය (වායු ආර්ද්‍රතාවය) සහ උෂ්ණත්වය (12-28°C පරාසයක) සමඟ සම්බන්ධ වී ඇති අතර එය ඉහළ උෂ්ණත්වවලදී ප්‍රතිරෝධය උල්ලංඝනය කිරීමට හේතු වන බවයි17, 18. ඇත්ත වශයෙන්ම, කොනීඩියා ප්‍රරෝහණය වීමට සහ රෝගය ආරම්භ වීමට අවශ්‍ය කාලය, ඉහළ ආර්ද්‍රතා තත්වයන් යටතේ 12°C (පැය 16) ට වඩා 24°C (පැය 4) දී හතර ගුණයකින් කෙටි විය19. මේ අනුව, අඛණ්ඩව සිදුවන ගෝලීය උණුසුම ඇන්ත්‍රැක්නෝස් පැතිරීමට හේතු වී ඇත. කෙසේ වෙතත්, මෙම රෝගය ප්‍රංශයේ (1982) සහ යුක්රේනයේ (1983) ඉදිරියේදී ඇති විය හැකි තර්ජනයක පෙර නිමිත්තක් ලෙස නිරීක්ෂණය කරන ලද නමුත්, ඒ වන විට ලුපින් කර්මාන්තය විසින් එය නොසලකා හරින ලදී20,21. වසර කිහිපයකට පසු, මෙම විනාශකාරී රෝගය ලොව පුරා පැතිර ගිය අතර ඕස්ට්‍රේලියාව, පෝලන්තය සහ ජර්මනිය වැනි ප්‍රධාන ලුපින් නිපදවන රටවලට ද බලපෑවේය22,23,24. 1990 ගණන්වල මැද භාගයේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් පැතිරීමකින් පසුව, පුළුල් පරීක්ෂාවකින් NLL19 සාම්පලවල ප්‍රතිරෝධී පරිත්‍යාගශීලීන් කිහිප දෙනෙකු හඳුනා ගැනීමට හැකි විය. ඇන්ත්‍රැක්නෝස් සඳහා NLL ප්‍රතිරෝධය විවිධ විෂබීජ ප්ලාස්ම ප්‍රභවයන්ගෙන් සොයාගත් වෙනම ප්‍රමුඛ ඇලිලී දෙකක් මගින් පාලනය වේ: ටැන්ජිල් සහ වොන්ගා වගාවල ලැන්ර්1 සහ වගාවේ ඇන්මෑන්. මැන්ඩලේ 25, 26. මෙම ඇලිලීස් අභිජනන වැඩසටහන් වල ප්‍රතිරෝධී විෂබීජ ප්ලාස්මය තෝරා ගැනීමට සහාය වන අණුක සලකුණු වලට අනුපූරක වේ25,26,27,28,29,30. ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය සඳහා RIL ජනගහනය වෙන් කිරීමක් ලබා ගැනීම සඳහා Lanr1 ඇලිලය රැගෙන යන ප්‍රතිරෝධී අභිජනන රේඛාව 83A:476, සංවේදී වල් රේඛාව P27255 සමඟ හරස් කරන ලද අතර, එමඟින් Lanr1 ස්ථානය NLL-1131, 32, 33 වර්ණදේහයට පැවරීමට හැකි විය. පාර්ශ්වීය ප්‍රතිරෝධක ස්ථානයේ සිට ඇන්ත්‍රැක්නෝස් දක්වා සම්බන්ධක සිතියම් සලකුණු ජානමය රාමුවක් සමඟ පෙළගැස්වීමෙන්, NLL එකම වර්ණදේහයේ (NLL-11) ඇලිලී තුනේම පිහිටීම හෙළි කළේය, නමුත් විවිධ ස්ථානවල29,34,35. කෙසේ වෙතත්, කුඩා RIL සංඛ්‍යාව සහ සලකුණු සහ අනුරූප ඇලිලී අතර විශාල ජානමය දුර නිසා, ඒවායේ යටින් පවතින ජාන පිළිබඳව විශ්වාසදායක නිගමනවලට එළඹිය නොහැක. අනෙක් අතට, ලුපින් වල ප්‍රතිලෝම ජාන විද්‍යාව භාවිතා කිරීම ඒවායේ ඉතා අඩු පුනර්ජනන විභවය නිසා දුෂ්කර වන අතර එමඟින් ජාන හැසිරවීම අපහසු වේ37.
83A:476 (Lanr1) සහ Mandelup (AnMan) වැනි සමජාතීය තත්වයේ අපේක්ෂිත ඇලිලය රැගෙන යන ගෘහාශ්‍රිත විෂබීජ ප්ලාස්මයේ වර්ධනය, වල් ජනගහනය තුළ ඇලිලීස් වල ප්‍රතිවිරුද්ධ සංයෝජන පැවතීම හමුවේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය අධ්‍යයනය කිරීමට දොර විවර කර ඇත. අණුක යාන්ත්‍රණවල හැකියාවන්. නිශ්චිත ප්‍රවේණි වර්ග මගින් ජනනය කරන ලද ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර සසඳන්න. මෙම අධ්‍යයනය C. lupini එන්නත සඳහා NLL හි මුල් පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතිචාරය ඇගයීමට ලක් කළේය. පළමුව, Lanr1 සහ AnMan ඇලිලීස් සලකුණු කරන අණුක සලකුණු භාවිතයෙන් රේඛා 215 ක් අඩංගු යුරෝපීය NLL විෂබීජ ප්ලාස්ම පැනලයක් පරීක්ෂා කරන ලදී. පසුව පාලිත තත්වයන් යටතේ, අණුක සලකුණු සඳහා කලින් තෝරාගත් NLL රේඛා 50 ක් මත ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ෆීනෝටයිපින් සිදු කරන ලදී. මෙම අත්හදා බැලීම් මත පදනම්ව, ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධයෙන් සහ Lanr1/AnMan ඇලලික් සංයුතියෙන් වෙනස් රේඛා හතරක් අනුපූරක ප්‍රවේශයන් දෙකක් භාවිතා කරමින් අවකල ආරක්ෂක ජාන ප්‍රකාශන පැතිකඩ සඳහා තෝරා ගන්නා ලදී: ඉහළ ප්‍රතිදාන RNA අනුක්‍රමණය සහ තත්‍ය කාලීන PCR ප්‍රමාණනය.
Lanr1 (Anseq3 සහ Anseq4) සහ AnMan (Anseq4) සහ AnMan (AnManM1) සලකුණු සහිත NLL ජර්ම්ප්ලාස්ම කට්ටලයක් (N = 215) පරීක්ෂා කිරීමේදී පෙන්නුම් කළේ සියලුම සලකුණු සඳහා “ප්‍රතිරෝධක” ඇලීලය විස්තාරණය කරන්නේ එක් රේඛාවක් (95726, සලාමන්කා-බී අසල) පමණක් බවත්, “'සංවේදී' ඇලීල පැවතීම” රේඛා 158 (~73.5%) හි සියලුම සලකුණු වල අනුපාතය සොයා ගත් බවත්ය. රේඛා දහතුනක් Lanr1 සලකුණෙහි “ප්‍රතිරෝධී” ඇලීල දෙකක් සහ රේඛා 8 ක් Lanr1 සලකුණෙහි “ප්‍රතිරෝධී” ඇලීල නිපදවීය. සලකුණ. AnMan සලකුණෙහි “ප්‍රතිරෝධක” ඇලීලය (පරිපූරක වගුව S1). Anseq3 සලකුණ සඳහා රේඛා දෙකක් විෂමජාතීය වූ අතර AnManM1 සලකුණ සඳහා එක් විෂමජාතීය විය. රේඛා 42 ක් (19.5%) Anseq3 සහ Anseq4 ඇලිලීස් වල ප්‍රතිවිරුද්ධ අවධීන් ගෙන ගිය අතර, මෙම ස්ථාන දෙක අතර නැවත එක්වීමේ ඉහළ සංඛ්‍යාතයක් පෙන්නුම් කළේය. පාලිත තත්වයන් යටතේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ෆීනෝටයිප් (පරිපූරක වගුව S2) මගින් පරීක්ෂා කරන ලද ප්‍රවේණික වර්ගවල ප්‍රතිරෝධයේ විචල්‍යතාවය හෙළි කරන ලද අතර එය ඇන්ත්‍රැක්නෝස් වල බරපතලකමෙන් පිළිබිඹු විය. සාමාන්‍ය ලකුණු වල වෙනස්කම් 1.8 (මධ්‍යස්ථව ප්‍රතිරෝධී) සිට 6.9 (සංවේදී) දක්වා වූ අතර ශාක බර වෙනස්කම් 0.62 (සංවේදී) සිට 4.45 g (ප්‍රතිරෝධී) දක්වා විය. අත්හදා බැලීමේ අනුරූ දෙකක නිරීක්ෂණය කරන ලද අගයන් අතර (රෝගයේ බරපතලකම ලකුණු සඳහා 0.51, ශාක බර සඳහා P = 0.00017 සහ 0.61, P < 0.0001) මෙන්ම මෙම පරාමිතීන් දෙක අතර (− 0.59 සහ − 0.77, P < 0.0001) සැලකිය යුතු සහසම්බන්ධයක් තිබුණි. අත්හදා බැලීමේ අනුරූ දෙකක නිරීක්ෂණය කරන ලද අගයන් අතර (රෝගයේ බරපතලකම ලකුණු සඳහා 0.51, ශාක බර සඳහා P = 0.00017 සහ 0.61, P < 0.0001) මෙන්ම මෙම පරාමිතීන් දෙක අතර (− 0.59 සහ − 0.77, P < 0.0001) සැලකිය යුතු සහසම්බන්ධයක් තිබුණි. වයිවාලෙනා දොස්තොවර්නයා කොරලියෂියා මෙග්දු සන්චේනියමි, නැබ්ලියුඩෙමිමි සහ නව පොව්ටෝර්නොස්ටියා එක්ස්පෙරිමෙන්ටා (051 тяжести болезни, P = 0,00017 සහ 0,61 для массы растения, P <0,0001), а также между этими двуме - 0,00017 ආර් < 0,0001) 0,0001). අත්හදා බැලීමේ පුනරාවර්තන දෙකක දී නිරීක්ෂණය කරන ලද අගයන් අතර සැලකිය යුතු සහසම්බන්ධයක් සොයා ගන්නා ලදී (රෝගයේ බරපතලකම ලකුණු සඳහා 0.51, ශාක බර සඳහා P = 0.00017 සහ 0.61, P < 0.0001), මෙන්ම මෙම පරාමිතීන් දෙක අතර (- 0.59 සහ -0.77, P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（病严重程度评分为，P0.51 0.00017,植物重量为0.61,P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77,P <0.0001)ඒ වගේම分为 0.51 , p = 0.00017 , 植物 为 为 0.61 , p <0.0001和- 0.59 和– 0.59 和- 0.77,P <0.0001)。 Наблюдалась значительная кореляция между значения, неблудаемыми в двух повторностях (විචිකිච්ඡාවෙන්) 0,51, P = 0,00017 и масса растения 0,61, P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,00070, 1.00,0001) අනුපිටපත් වල නිරීක්ෂණය කරන ලද අගයන් අතර (රෝගයේ බරපතලකම ලකුණු 0.51, P = 0.00017 සහ ශාක බර 0.61, P < 0.0001) සහ මෙම පරාමිතීන් දෙක අතර (-0.59 සහ -0 .0001) 0.77, P<0.0001) සැලකිය යුතු සහසම්බන්ධයක් තිබුණි. ).සංවේදී ශාකවල දක්නට ලැබෙන සාමාන්‍ය රෝග ලක්ෂණ අතරට “එඬේරාගේ දුන්න” ව්‍යුහයකට සමාන කඳේ ඇඹරීම සහ ඇඹරීම ඇතුළත් වන අතර, පසුව තැඹිලි/රෝස ස්පෝරෝසොයිට් සහිත ඕවලාකාර තුවාල ඇති වේ (පරිපූරක රූපය 1). Lanr1 (83A:476 සහ Tanjil) සහ AnMan (Mandelup) ජාන රැගෙන යන ඕස්ට්‍රේලියානු ප්‍රවේශයන් මධ්‍යස්ථව ප්‍රතිරෝධී වේ, 0.0331 සහ 0.0036). “ප්‍රතිරෝධී” Lanr1 සහ/හෝ AnMan ඇලිලීස් ද රැගෙන යන සමහර රේඛා රෝගයේ රෝග ලක්ෂණ පෙන්නුම් කරයි.
සිත්ගන්නා කරුණ නම්, කිසිදු "ප්‍රතිරෝධී" සලකුණු ඇලීලයක් නොමැති NLL රේඛා කිහිපයක් ඉහළ මට්ටමේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධයක් (Lanr1 හෝ AnMan ප්‍රවේණි වර්ග සඳහා සැසඳිය හැකි හෝ ඉහළ) අනාවරණය කළේය, උදාහරණයක් ලෙස Boregine (පරාමිතීන් දෙකටම P අගය < 0.0001), Bojar (ලකුණු සඳහා P අගය < 0.0001 සහ ශාක බර සඳහා 0.001) සහ ජනගහනය B-549/79b (ලකුණු සඳහා P අගය < 0.0001 සහ බර සඳහා වැදගත් නොවන). සිත්ගන්නා කරුණ නම්, කිසිදු "ප්‍රතිරෝධී" සලකුණු ඇලීලයක් නොමැති NLL රේඛා කිහිපයක් ඉහළ මට්ටමේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධයක් (Lanr1 හෝ AnMan ප්‍රවේණි වර්ග සඳහා සැසඳිය හැකි හෝ ඉහළ) අනාවරණය කළේය, උදාහරණයක් ලෙස Boregine (පරාමිතීන් දෙකටම P අගය < 0.0001), Bojar (ලකුණු සඳහා P අගය < 0.0001 සහ ශාක බර සඳහා 0.001) සහ ජනගහනය B-549/79b (ලකුණු සඳහා P අගය < 0.0001 සහ බර සඳහා වැදගත් නොවන). ඇන්ටෙරෙස්නෝ, ච්ටෝ නෙස්කෝල්කෝ ලින්ක් එන්එල්එල්, ලිෂෙන්නික් කැකෝගෝ-ලිබෝ «රෙසිස්ටෙන්ට්නොගෝ» මාර්කර්නොගෝ ඇලිලියා, පොකූස් устойчивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких0, таких 0 для обоих параметров), Bojar (значение P < 0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) සහ популяции B-509/7091 для оценки и незначимо для масsы). සිත්ගන්නා කරුණ නම්, 'ප්‍රතිරෝධී' සලකුණු ඇලීලයක් නොමැති NLL රේඛා කිහිපයක් ඇන්ත්‍රැක්නෝස් වලට ඉහළ මට්ටමේ ප්‍රතිරෝධයක් පෙන්නුම් කළේය (Lanr1 හෝ AnMan ප්‍රවේණි වර්ග සඳහා සැසඳිය හැකි හෝ ඉහළ), උදාහරණයක් ලෙස Boregine (පරාමිතීන් දෙකටම P අගය < 0.0001), Bojar (ඇගයීම සඳහා P අගය < 0.0001 සහ ශාක බර සඳහා 0.001) සහ ජනගහනය B-549/79b (ඇගයීම සඳහා P අගය < 0.0001 සහ බර සඳහා සැලකිය යුතු නොවේ).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽痸或AnMan 基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001,植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001,重量不昍 සිත්ගන්නා කරුණ නම්, "ප්‍රතිදේහජනක" සලකුණු නොමැති සමහර NLL පද්ධති ඉහළ තිරස් ප්‍රතිරෝධයක් (Lanr1 හෝ AnMan ජාන හෝ ඊට වැඩි) පෙන්වීමයි, උදාහරණයක් ලෙස Boregine (පරාමිතීන් දෙකම P < 0.0001), Bojar (P අගය < 0.0001, ශාක බර 0.001) සහ වික්‍රියා B-549/79b (P අගය < 0.0001, බර සැලකිය යුතු නොවේ). එන්තෙරෙස්නෝ, එච්ටෝ නෙකෝටෝරි ලිනි එන්එල්එල්, ලිෂෙන්නි කැකිච්-ලිබෝ මාර්කර්නික් ඇලෙලි «රෙසිස්ටෙන්ට්නෝස්ටි», පොකුණු устойчивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), ටැකි කැක් බෝරජින් (ජනචේනි параметров <0,0001), බෝජාර් (значение P <0,0001, масса растения 0,001) සහ популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незнач). සිත්ගන්නා කරුණ නම්, 'ප්‍රතිරෝධක' සලකුණු ඇලීල නොමැති සමහර NLL රේඛා, ඉහළ මට්ටමේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධයක් පෙන්නුම් කළේය (Lanr1 හෝ AnMan ප්‍රවේණි වර්ගවලට සාපේක්ෂව හෝ ඊට වැඩි), උදාහරණයක් ලෙස Boregine (පරාමිතීන් දෙකටම P අගය <0.0001), Bojar (P-අගය < 0.0001, ශාක බර 0.001) සහ ජනගහනය B-549/79b (P-අගය < 0.0001, බර සැලකිය යුතු නොවේ).මෙම සංසිද්ධිය නව ජානමය ප්‍රතිරෝධක ප්‍රභවයක හැකියාව යෝජනා කරයි, සලකුණු ප්‍රවේණික වර්ග සහ රෝග ෆීනෝටයිප් අතර නිරීක්ෂණය කරන ලද සහසම්බන්ධතාවයක් නොමැතිකම පැහැදිලි කරයි (P අගයන් ~0.42 සිට ~0.98 දක්වා). මේ අනුව, කොල්මොගොරොව්-ස්මිර්නොව් පරීක්ෂණයෙන් පෙන්නුම් කළේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය පිළිබඳ දත්ත සාමාන්‍යයෙන් ලකුණු (P-අගය 0.25 සහ 0.11) සහ ශාක ස්කන්ධය (P-අගය 0.47 සහ 0.55) සඳහා බෙදා හැර ඇති බවයි, එයින් ඇඟවෙන්නේ Lanr1 සහ AnMan වලට වඩා වැඩි ඇලීල සම්බන්ධ වන බව මම උපකල්පනය කරන බවයි.
ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක පරීක්ෂාවේ ප්‍රතිඵල මත පදනම්ව, පිටපත් කිරීමේ විශ්ලේෂණය සඳහා රේඛා 4ක් තෝරා ගන්නා ලදී: 83A:476, බොරෙජින්, මැන්ඩලප් සහ ජනගහනය 22660. මෙම රේඛා RNA අනුක්‍රමණය මගින් එන්නත් කිරීමේ අත්හදා බැලීම් වලදී ඇන්ත්‍රැක්ස් ප්‍රතිරෝධය සඳහා නැවත පරීක්ෂා කරන ලදී, ඒවා පෙර පරීක්ෂණයට සමාන නම්. ලකුණු අගයන් පහත පරිදි විය: බොරෙජින් (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), මැන්ඩලප් (3.82 ± 1.42) සහ ජනගහනය 22660 (6.11 ± 1.29).
ඉලුමිනා නෝවාසෙක් 6000 ප්‍රොටෝකෝලය නියැදියකට සාමාන්‍යයෙන් Mread යුගල 40.5 ක් (29.7 සිට 54.4 Mreads දක්වා) ලබා ගත්තේය (පරිපූරක වගුව S3). යොමු අනුපිළිවෙලෙහි පෙළගැස්වීමේ ලකුණු 75.5% සිට 88.6% දක්වා පරාසයක පැවතුනි. ජීව විද්‍යාත්මක අනුරූ අතර පර්යේෂණාත්මක ප්‍රභේද අතර කියවීමේ ගණන් කිරීමේ දත්තවල සාමාන්‍ය සහසම්බන්ධය 0.812 සිට 0.997 දක්වා (මධ්‍යන්‍යය 0.959) පරාසයක පැවතුනි. විශ්ලේෂණය කරන ලද ජාන 35,170 න් 2917 ක් කිසිදු ප්‍රකාශනයක් අනාවරණය නොකළ අතර අනෙක් ජාන 4785 නොසැලකිය හැකි මට්ටමකින් (පාදක මධ්‍යන්‍යය < 5) ප්‍රකාශ විය. විශ්ලේෂණය කරන ලද ජාන 35,170 න් 2917 ක් කිසිදු ප්‍රකාශනයක් අනාවරණය නොකළ අතර අනෙක් ජාන 4785 නොසැලකිය හැකි මට්ටමකින් (පාදක මධ්‍යන්‍යය < 5) ප්‍රකාශ විය. Из 35 170 ප්‍රවාහක ජෙනෝව් 2917 ප්‍රොජව්ලියලි එක්ස්ප්‍රෙසි, ඒ ඔස්ටල්නි 4785 ජෙනෝව් එක්ස්ප්‍රෙස්සි незначительном уровне (базовое среднее <5). විශ්ලේෂණය කරන ලද ජාන 35,170 න් 2917 ක් කිසිදු ප්‍රකාශනයක් නොපෙන්වූ අතර, ඉතිරි ජාන 4785 නොසැලකිය හැකි මට්ටමක (පාදක මධ්‍යන්‍යය <5) ප්‍රකාශ විය.在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785个基因的表达可以忽略不计（基本平均值< 5）。35,170 Из 35 170 ප්‍රොනලිසයිරොවානික් ජෙනෝව් 2917 නෙ එක්ස්ප්‍රෙසිරොවාලිස්, ඔස්ටල්නි 4785 ජෙනෝව් නිරූපණ නිශ්චය (базовое среднее значение <5). විශ්ලේෂණය කරන ලද ජාන 35,170 න් 2917 ක් ප්‍රකාශ නොවූ අතර ඉතිරි ජාන 4785 ට නොසැලකිය හැකි ප්‍රකාශනයක් තිබුණි (පාදක මධ්‍යන්‍යය <5).මේ අනුව, අත්හදා බැලීම අතරතුර ප්‍රකාශිත ලෙස සලකනු ලැබූ ජාන සංඛ්‍යාව (පාදක මධ්‍යන්‍යය ≥ 5) 27,468 (78.1%) විය (පරිපූරක වගුව S4).
පළමු වරට C. lupini (strain Col-08) එන්නත් කිරීමට ප්‍රතිචාර දැක්වූයේ පළමු වරට Col-08 රේඛා ප්‍රතිසංස්කරණය කිරීමෙනි (වගුව 1), කෙසේ වෙතත්, රේඛා අතර සැලකිය යුතු වෙනස්කම් නිරීක්ෂණය විය. මේ අනුව, ප්‍රතිරෝධක රේඛාව 83A:476 (Lanr1 ජානය රැගෙන යන) පළමු වරට (hpi 6) සැලකිය යුතු ලෙස ප්‍රතිසංස්කරණය කිරීම පෙන්නුම් කළේ මෙම අවස්ථාවේදී අනෙකුත් අවස්ථාවේදී 31-69 ගුණයකින් හුදකලා වූ ඉහළ සහ පහළ ජාන සංඛ්‍යාවේ වැඩි වීමෙනි. ඊට අමතරව, දෙවන අවස්ථාවේදී (hpi 12) ජාන කිහිපයක ප්‍රකාශනය සැලකිය යුතු ලෙස වෙනස් වී ඇති බැවින්, මෙම උච්චතම අවස්ථාව කෙටි කාලීන විය. සිත්ගන්නා කරුණ නම්, බද්ධ පරීක්ෂණයේදී ඉහළ මට්ටමේ ප්‍රතිරෝධයක් පෙන්නුම් කළ බොරෙජින්, අත්හදා බැලීම අතරතුර එවැනි දැවැන්ත පිටපත් කිරීමේ නැවත වැඩසටහන්කරණයකට භාජනය නොවීය. කෙසේ වෙතත්, වෙනස් ලෙස ප්‍රකාශිත ජාන ගණන (DEG) Boregine සහ 12 HPI හි 83A:476 සඳහා සමාන විය. මැන්ඩෙලප් සහ ජනගහනය 22660 යන දෙකම අවසාන කාල ලක්ෂ්‍යයේදී (48 l/s) DEG උච්චතම අවස්ථා පෙන්නුම් කළ අතර, එය ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරවල සාපේක්ෂ ප්‍රමාදයක් පෙන්නුම් කරයි.
අනෙකුත් සියලුම රේඛා හා සසඳන විට 6 HPI හි C. lupini වලට ප්‍රතිචාර වශයෙන් 83A:476 දැවැන්ත පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතික්‍රමලේඛනයකට භාජනය වූ නිසා, මෙම අවස්ථාවේදී නිරීක්ෂණය කරන ලද DEG වලින් ~91% ක් පෙළපත්-විශේෂිත විය (රූපය 1). කෙසේ වෙතත්, අධ්‍යයන රේඛා අතර මුල් ප්‍රතිචාරවල යම් අතිච්ඡාදනයක් ඇති විය, මන්ද පිළිවෙලින් බොරෙජින්, මැන්ඩෙලප් සහ ජනගහනය 22660 හි 68.5%, 50.9% සහ 52.6% DEG, 83A:476 හි ඇතැම් කාලවලදී සොයාගත් ඒවා සමඟ අතිච්ඡාදනය විය. කෙසේ වෙතත්, මෙම DEGs 83A:476 භාවිතයෙන් දැනට අනාවරණය වී ඇති සියලුම DEG වලින් කුඩා කොටසක් (0.97–1.70%) සඳහා පමණක් හේතු විය. ඊට අමතරව, සියලුම රේඛාවලින් DEG 11ක් මේ අවස්ථාවේදී සුසංයෝගී විය (අතිරේක වගු S4-S6), ශාක ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරවල පොදු සංරචක ඇතුළුව: ලිපිඩ හුවමාරු ප්‍රෝටීන් (TanjilG_32225), එන්ඩොග්ලුකන්-1,3-β-ග්ලූකෝසයිඩ් එන්සයිමය (TanjilG_23384), SAM22 (TanjilG_31528 සහ TanjilG_31531) වැනි ආතතිය-ප්‍රේරිත ප්‍රෝටීන දෙකක්, මූලික රබර් කිරි ප්‍රෝටීන් (TanjilG_32352), සහ ග්ලයිසීන් බහුල ව්‍යුහාත්මක සෛල බිත්ති ප්‍රෝටීන දෙකක් (TanjilG_19701 සහ TanjilG_19702). 83A:476 සහ Boregine අතර 24 HPI (මුළු 16-38% DEG) සහ Mandelup සහ Population 22660 අතර 48 HPI (මුළු 14-20% DEG) අතර පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතිචාරවල සාපේක්ෂව ඉහළ අතිච්ඡාදනයක් ද තිබුණි.
කොලෙටොට්‍රිකම් ලුපිනි (පෝලන්තයේ වීර්සෙනිස් හි ලුපයින් ක්ෂේත්‍රවලින් ලබාගත් Col-08 වික්‍රියාව, 1999) සමඟ එන්නත් කරන ලද පටු කොළ සහිත ලුපින් (NLL) රේඛා වල වෙනස් ලෙස ප්‍රකාශිත ජාන (DEG) ගණන පෙන්වන වෙන් රූප සටහන. විශ්ලේෂණය කරන ලද NLL රේඛා වූයේ: 83A:476 (ප්‍රතිරෝධී, Lanr1 ඇලිලය රැගෙන යන), බොරෙජින් (ප්‍රතිරෝධී, ජානමය පසුබිම නොදන්නා), මැන්ඩලප් (මධ්‍යස්ථව ප්‍රතිරෝධී, AnMan ඇලිලය රැගෙන යන) සහ ජනගහනය 22660 (ඉතා සංවේදී). hpi යන කෙටි යෙදුම එන්නතෙන් පසු පැය ගණනක් නියෝජනය කරයි. ප්‍රස්ථාරය සරල කිරීම සඳහා ශුන්‍ය අගයන් ඉවත් කර ඇත.
6 hpi හි අධික ලෙස ප්‍රකාශිත ජාන කට්ටලය කැනොනිකල් R ජාන වසම් පැවතීම සඳහා විශ්ලේෂණය කරන ලදී (පරිපූරක වගුව S7). මෙම අධ්‍යයනයෙන් 83A:476 හි පමණක් NBS-LRR වසම් සහිත සම්භාව්‍ය රෝග ප්‍රතිරෝධක ජානවල පිටපත් කිරීමේ ප්‍රේරණය අනාවරණය විය. මෙම කට්ටලය TIR-NBS-LRR ජානයකින් (tanjilg_05042), CC-NBS-LRR ජාන පහකින් (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, සහ tanjilg_16162) සහ NBS-LRRE හතරකින් (tanjilg_16162) මෙන්ම NBS-Lrr හතරකින් (tanjilg_16162) සහ NBS-LRR හතරකින් (Tanjilg_16162) සමන්විත විය. මෙම ජාන සියල්ලටම සංරක්ෂිත අනුපිළිවෙලින් සකස් කරන ලද කැනොනිකල් වසම් ඇත. NBS-LRR වසම් ජාන වලට අමතරව, RLL කයිනේස් කිහිපයක් 6 hpi හිදී සක්‍රිය කරන ලදී, එනම් බොරෙජින් (TanjilG_19877) හි එකක්, මැන්ඩෙලප් (TanjilG_07141 සහ TanjilG_19877) හි දෙකක් සහ ජනගහනය 22660 (TanjilG_09014 සහ TanjilG_10361) හි දෙකක් සහ 83A 27:476 හි දෙකක්.
C. lupini (strain Col-08) එන්නත් කිරීමට ප්‍රතිචාර වශයෙන් සැලකිය යුතු ලෙස වෙනස් වූ ප්‍රකාශනයක් සහිත ජාන ජාන ඔන්ටොලොජි (GO) පොහොසත් කිරීමේ විශ්ලේෂණයට භාජනය කරන ලදී (පරිපූරක වගුව S8). බොහෝ විට අධි නියෝජනය කරන ලද ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලි පදය වූයේ "GO:0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරය" වන අතර එය ඉහළ වැදගත්කමක් සහිත (P අගය < 0.001) සංයෝජන 16 න් 6 කින් (කාල × රේඛාව) දර්ශනය විය (රූපය 2). බොහෝ විට අධි නියෝජනය කරන ලද ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලි පදය වූයේ "GO:0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරය" වන අතර එය ඉහළ වැදගත්කමක් සහිත (P අගය < 0.001) සංයෝජන 16 න් 6 කින් (කාල × රේඛාව) දර්ශනය විය (රූපය 2). Наиболее часто чрезмерно представленныm terminom BIOLOGиcheskogo процесса бул «GO: 0006952 засто, появлялся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). බොහෝ විට අධි නියෝජනය කරන ලද ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලි පදය වූයේ 'GO:0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරය' වන අතර එය ඉහළ වැදගත්කමක් සහිත (P අගය < 0.001) සංයෝජන 16 න් 6 කින් (කාල × පෙළපත) දර්ශනය විය (රූපය 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16个（时间×线）组合中的6 个中，具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）。 වඩාත්ම නියෝජනය කරන ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලි පදය වන්නේ “GO:0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරය” වන අතර එය (时间×线) සංයෝජන 16 න් 6 කින් දිස්වන අතර ඉහළ වැදගත්කමක් (P අගය < 0.001) (图2) ඇත. Наиболее часто чрезмерно представленныm terminom биологического процесса был «GO: 0006952 ආරක්ෂක ප්රතිචාරය» в 6 из 16 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). බොහෝ විට අධි නියෝජනය කරන ලද ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලි පදය වූයේ 'GO:0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරය' වන අතර එය ඉහළ වැදගත්කමක් සහිත (P අගය < 0.001) සංයෝජන 16 න් 6 කින් (කාල × රේඛාව) දර්ශනය විය (රූපය 2).මෙම පදය 83A හි කාල ලක්ෂ්‍ය දෙකක දී අධික ලෙස නිරූපණය විය: 476 සහ Boregine (6 සහ 24 hpi) සහ Mandelup සහ Population 22660 හි එක් කාල ලක්ෂ්‍යයක දී (පිළිවෙලින් 12 සහ 6 hpi). මෙය අපේක්ෂිත ප්‍රතිඵලයක් වන අතර, ප්‍රතිරෝධී රේඛාවල දිලීර නාශක ප්‍රතිචාරය ඉස්මතු කරයි. ඊට අමතරව, 83A:476 "GO:0055114 රෙඩොක්ස් ක්‍රියාවලිය" යන පදයෙන් නිරූපණය වන ඔක්සිකාරක පිපිරීමට අදාළ ජාන වේගයෙන් ප්‍රේරණය කිරීමෙන් C. lupini වෙත ප්‍රතිචාර දැක්වූ අතර, එය නිශ්චිත ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරයක් පෙන්නුම් කරන අතර, Boregine 'GO' යන පදයට අදාළ නිශ්චිත ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර හෙළි කළේය. :0006950 ආතති ප්‍රතිචාරය”. ජනගහනය 22660 ද්විතියික පරිවෘත්තීය ද්‍රව්‍ය ඇතුළත් තිරස් ප්‍රතිරෝධක ප්‍රතිචාරය සක්‍රීය කළ අතර, “GO:0016104 ට්‍රයිටර්පීන් ජෛව සංස්ලේෂණ ක්‍රියාවලිය” සහ “GO:0006722 ට්‍රයිටර්පීන් පරිවෘත්තීය ක්‍රියාවලිය” යන අධික පද ගණන ඉස්මතු කළේය (පද දෙකම එකම ජාන කට්ටලයකට අයත් වේ), GO පද පොහොසත් කිරීමේ විශ්ලේෂණයේ ප්‍රතිඵල සැලකිල්ලට ගනිමින්, මැන්ඩලප් ප්‍රතික්‍රියා ස්ථායිතාව බොරෙජින් සහ ජනගහනය 22660 අතර විය. ඊට අමතරව, මුල් ප්‍රතික්‍රියාව 83A:476 (6 hpi) සහ ප්‍රමාද වූ ප්‍රතික්‍රියාව මැන්ඩලප් සහ ජනගහනය 22660 අතර GO:0015979 'ප්‍රභාසංස්ලේෂණය' යන පදය සහ අනෙකුත් අදාළ ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලීන් ඇතුළත් වේ.
ඇන්ත්‍රැක්ස් ලුපින් (1999 දී පෝලන්තයේ වීර්සෙනිස් හි ලුපින් ක්ෂේත්‍රවලින් ලබාගත් Col-08 වික්‍රියාව) සමඟ එන්නත් කරන ලද පටු-පත්‍ර සහිත ලුපින් (NLL) වල පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතිචාර අතරතුර වෙනස් ලෙස ප්‍රකාශිත ජානවල විවරණයේදී තෝරාගත් ජෛව ක්‍රියාවලි ජාන ඔන්ටොලොජි පද බෙහෙවින් අතිශයෝක්තියට නංවා ඇත. විශ්ලේෂණය කරන ලද NLL රේඛා වූයේ: 83A:476 (ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය Lanr1 ඇලිලය රැගෙන යයි), බොරෙජින් (ප්‍රතිරෝධී, නොදන්නා ජානමය පසුබිම), මැන්ඩලප් (මධ්‍යස්ථව ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය AnMan ඇලිලය රැගෙන යයි) සහ ජනගහනය 22660 (සංවේදී).
මෙම අධ්‍යයනය ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධයට දායක වන ජාන හඳුනා ගැනීම අරමුණු කරගත් බැවින්, GO “GO: 0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර” සහ “GO: 0055114 රෙඩොක්ස් ක්‍රියාවලීන්” යන පද සඳහා පවරා ඇති ජාන, අවම වශයෙන් එක් රේඛාවක් සමඟ මූලික අර්ථය ≥ 30 ක් වන බැවින්, කපා හැරීම් සමඟ විශ්ලේෂණය කරන ලදී. × log2 හි සංඛ්‍යානමය වශයෙන් සැලකිය යුතු අගයන් (ගුණ කිරීමේ වෙනස) ඒකාබද්ධ කරන කාල ලක්ෂ්‍යය. මෙම නිර්ණායක සපුරාලන ජාන සංඛ්‍යාව GO:0006952 සඳහා 65 ක් සහ GO:0055114 සඳහා 524 ක් විය.
83A:476 GO:0006952 යන පදය සමඟ විවරණය කරන ලද DEG උච්ච දෙකක් හෙළි කළේය, පළමුවැන්න අඟලකට ජාන 6 ක් (ජාන 64, ඉහළ සහ පහළ නියාමනය) සහ දෙවැන්න අඟලකට ජාන 24 ක් (ජාන 15, ඉහළ නියාමනය පමණි). බොරෙජින් ද GO:0006952 එකම වේලාවක උච්චතම ස්ථානයට පැමිණි බව පෙන්නුම් කළේය, නමුත් අඩු DEG (11 සහ 8) සහ මනාප සක්‍රිය කිරීම සමඟ. මැන්ඩලූප් 12 සහ 48 HPI හි GO:0006952 උච්ච දෙකක් පෙන්නුම් කළ අතර, දෙකම ජාන 12 ක් රැගෙන ගියේය (පළමුවැන්න සක්‍රිය ජාන සහිත වන අතර දෙවැන්න මර්දන ජාන පමණක් සහිත), 6 HPI (ජාන 13) හි 22660 ජනගහනයට වැඩි වීමේ උච්චතම නියාමනයේ වැඩි ප්‍රමුඛතාවයක් තිබුණි. මෙම උච්චතම අවස්ථා වලදී GO:0006952 DEG වලින් 96.4% ක් එකම ආකාරයේ ප්‍රතිචාරයක් (ඉහළට හෝ පහළට) ලබා දුන් බව සැලකිල්ලට ගත යුතු අතර, එය සම්බන්ධ වූ ජාන සංඛ්‍යාවේ වෙනස්කම් තිබියදීත් ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරවල සැලකිය යුතු අතිච්ඡාදනයක් පෙන්නුම් කරයි. GO:0006952 යන පදයට අදාළ විශාලතම අනුපිළිවෙල සමූහය, 10 වන පන්තියේ ව්‍යාධිජනක-ආශ්‍රිත ප්‍රෝටීන් (PR-10) ප්‍රෝටීන් ක්ලේඩ් සහ මූලික ප්‍රෝටීන් රබර් කිරි වලට අයත් වන කුසගින්න ආතති-ආශ්‍රිත පණිවිඩ ප්‍රෝටීන් 22 (SAM22-වැනි) සංකේතනය කරයි. සමාන (MLP-වැනි) ප්‍රෝටීන්) ප්‍රෝටීන් (රූපය 3). කණ්ඩායම් දෙක ප්‍රකාශනයේ ස්වභාවය සහ ප්‍රතිචාරයේ දිශාව අනුව වෙනස් විය. SAM22-වැනි ප්‍රෝටීන කේතනය කරන ජාන මුල් කාල ලක්ෂ්‍යයන්හිදී (6 හෝ 12 hpi) ස්ථාවර සහ සැලකිය යුතු ප්‍රේරණයක් පෙන්නුම් කළ අතර අත්හදා බැලීම අවසානයේ (48 hpi) සාමාන්‍යයෙන් ප්‍රතිචාර නොදැක්වීය, MLP-වැනි ප්‍රෝටීන 6 hpi හි සම්බන්ධීකරණය පෙන්නුම් කළේය. hpi. 83A:476 සහ මැන්ඩලප් 48 hp/in දී, අනෙකුත් සියලුම දත්ත ලක්ෂ්‍ය පාහේ ප්‍රතිචාර නොදක්වන ලදී. ඊට අමතරව, SAM22-සමාන ප්‍රෝටීන් ජානවල ප්‍රකාශන පැතිකඩවල වෙනස්කම් ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධයේ නිරීක්ෂණය කරන ලද විචල්‍යතාවයෙන් පසුව, වඩාත් ප්‍රතිරෝධී රේඛාවලට මෙම ජාන වඩාත් සංවේදී ජානවලට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස ප්‍රේරණය කරන කාල ලක්ෂ්‍ය වැඩි වූ බැවිනි. තවත් LlR18A/B-සමාන PR-10 ජානයක් SAM22-සමාන ප්‍රෝටීන් ජානයට බෙහෙවින් සමාන ප්‍රකාශන රටාවක් පෙන්නුම් කළේය.
"GO:0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරය" යන ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලි පදයේ ප්‍රධාන සංරචක සහ Lanr1 සහ AnMan ඇලිලීස් වල අපේක්ෂක ජානවල ප්‍රකාශන රටා හඳුනා ගන්නා ලදී. Log2 පරිමාණය එන්නත් කරන ලද (Colletotrichum lupini, strain Col-08, lupine ක්ෂේත්‍ර වලින් ලබාගත්, Wizhenica, Poland, 1999) සහ පාලන (sham-එන්නත් කරන ලද) ශාක අතර log2 අගයන් (නැමීමේ වෙනස) නියෝජනය කරයි. පහත පටු පත්‍ර ලුපින් රේඛා විශ්ලේෂණය කරන ලදී: 83A:476 (ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය Lanr1 ඇලිලය රැගෙන යන), Boregine (ප්‍රතිරෝධී, ජානමය පසුබිම නොදන්නා), Mandelup (මධ්‍යස්ථ ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය AnMan ඇලිලය රැගෙන යන), සහ ජනගහනය 22660 (සංවේදී).
ඊට අමතරව, RNA-seq අපේක්ෂක ජාන Lanr1 (TanjilG_05042) සහ AnMan (TanjilG_12861) වල ප්‍රකාශන පැතිකඩ ඇගයීමට ලක් කරන ලදී (රූපය 3). TanjilG_05042 ජානය පළමු වරට (hpi 6) පමණක් 83A:476 හි සැලකිය යුතු ප්‍රතිචාරයක් (සක්‍රිය කිරීමක්) පෙන්නුම් කළ අතර, TanjilG_12861 මැන්ඩෙලූප් හි සැලකිය යුතු වූයේ කාල ලක්ෂ්‍ය දෙකක පමණි: 6 hpi (පහළ නියාමනය) සහ 24 hpi (hpi 6). වෙනස් කළ හැකි) ).
GO:0055114 "රෙඩොක්ස් ක්‍රියාවලිය" යන පදයේ වඩාත්ම අධික ලෙස ප්‍රකාශිත ජාන වූයේ සයිටොක්‍රෝම් P450 ප්‍රෝටීන සහ පෙරොක්සිඩේස් කේතනය කරන ජාන (රූපය 4). 6 HPI හිදී 83A:476 සිට හුදකලා කරන ලද සාම්පල සඳහා, එන්නත් කරන ලද සහ පාලන ශාක අතර උපරිම හෝ අවම log2 (නැමීමේ වෙනසක්) අගයන් (ජාන වලින් 86.6% ක් සඳහා) සාමාන්‍යයෙන් නිරීක්ෂණය කරන ලද අතර, මෙම ප්‍රවේණි වර්ගය එන්නත් කිරීම සඳහා ඉහළ ප්‍රතිචාරය ඉස්මතු කරයි. 83A:476 වඩාත්ම වැදගත් GO පෙන්නුම් කළේය: 0055114 DEG 6 hpi (ජාන 503) හි ඇති අතර, ඉතිරි රේඛා 48 hpi (බොරෙජින්, ජාන 31; මැන්ඩලප්, ජාන 85; සහ ජනගහනය 22660, ජාන 78)). GO:0055114 පවුලේ බොහෝ ජානවල, එන්නත් කිරීම සඳහා ප්‍රතිචාර වර්ග දෙකක් (සක්‍රිය කිරීම සහ නිෂේධනය) නිරීක්ෂණය කරන ලදී. සිත්ගන්නා කරුණ නම්, මැන්ඩලූප් හි 48 hp හි GO: 0055114 යන පදය සඳහා හඳුනාගත් DEG වලින් 97.6% දක්වා මෙම නිරීක්ෂණවලින් පෙනී යන්නේ, සැලකිය යුතු ලෙස කුඩා පරිමාණයක් තිබියදීත් (එනම්, විකෘති වූ රෙඩොක්ස් ජාන ගණන, 85 එදිරිව 503), මැන්ඩලූප් ඇන්ත්‍රැක්නෝස් වලට ප්‍රමාද වූ පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතිචාරවල රටාව 83A:476 හි මුල් ප්‍රතිචාරයට සමාන බවයි. බොරෙජින් සහ ජනගහනය 22660 හි, මෙම අභිසාරීතාවය පිළිවෙලින් 51.6% සහ 75.6% කින් අඩුය.
"GO:0055114 රෙඩොක්ස් ක්‍රියාවලිය" යන ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලියේ ප්‍රධාන සංරචකවල ප්‍රකාශන රටා අනාවරණය විය. Log2 පරිමාණය එන්නත් කරන ලද (Colletotrichum lupini, strain Col-08, lupine ක්ෂේත්‍ර වලින් ලබාගත්, Wizhenica, Poland, 1999) සහ පාලන (sham-inoculated) ශාක අතර log2 අගයන් (නැමීමේ වෙනස) නියෝජනය කරයි. පහත පටු පත්‍ර ලුපින් රේඛා විශ්ලේෂණය කරන ලදී: 83A:476 (ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය Lanr1 ඇලිලය රැගෙන යන), Boregine (ප්‍රතිරෝධී, ජානමය පසුබිම නොදන්නා), Mandelup (මධ්‍යස්ථව ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය AnMan ඇලිලය රැගෙන යන) සහ ජනගහනය 22660 (සංවේදී).
83A:476 C. lupini (strain Col-08) සමඟ එන්නත් කිරීම සඳහා වූ පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතිචාරවලට GO:0015979 "ප්‍රභාසංස්ලේෂණය" යන පදයට ආරෝපණය කරන ලද ජාන සම්බන්ධීකරණය කරන ලද නිහඬ කිරීම සහ අනෙකුත් අදාළ ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලීන් ද ඇතුළත් විය (රූපය 5). මෙම GO:0015979 DEG කට්ටලයේ 83A:476 හි 6 hpi හි සැලකිය යුතු ලෙස මර්දනය කරන ලද ජාන 105 ක් අඩංගු විය. මෙම උප කුලකයෙහි, 22660 ජනගහනයේ එකම අවස්ථාවේදීම HPI 48 කදී සහ 35 කදී මැන්ඩෙලප් හි ජාන 37 ක් ද නියාමනය කරන ලද අතර, එයට ජාන වර්ග දෙකටම පොදු DEG 19 ක් ඇතුළත් වේ. GO: 0015979 පදයට අදාළ කිසිදු DEG එකක් ඕනෑම සංයෝජනයකින් (රේඛාව x කාලය) සැලකිය යුතු ලෙස සක්‍රිය කර නොමැත.
"GO:0015979 ප්‍රභාසංස්ලේෂණය" යන ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලියේ ප්‍රධාන සංරචකවල ප්‍රකාශන රටා අනාවරණය විය. Log2 පරිමාණය එන්නත් කරන ලද (Colletotrichum lupini, strain Col-08, lupine ක්ෂේත්‍ර වලින් ලබාගත්, Wizhenica, Poland, 1999) සහ පාලන (sham-inoculated) ශාක අතර log2 අගයන් (නැමීමේ වෙනස) නියෝජනය කරයි. පහත පටු පත්‍ර ලුපින් රේඛා විශ්ලේෂණය කරන ලදී: 83A:476 (ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය Lanr1 ඇලීලය රැගෙන යන), Boregine (ප්‍රතිරෝධී, ජානමය පසුබිම නොදන්නා), Mandelup (මධ්‍යස්ථව ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය AnMan ඇලීලය රැගෙන යන) සහ ජනගහනය 22660 (සංවේදී).
අවකල ප්‍රකාශන විශ්ලේෂණයේ ප්‍රතිඵල මත පදනම්ව සහ ව්‍යාධිජනක දිලීර වලට එරෙහිව ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරවලට සම්බන්ධ වී ඇති බවට අනුමාන කෙරේ, තත්‍ය කාලීන PCR (පරිපූරක වගුව S9) මගින් ප්‍රකාශන පැතිකඩ ප්‍රමාණනය කිරීම සඳහා මෙම ජාන හතේ කට්ටලය තෝරා ගන්නා ලදී.
පාලන (අනුකරණය) ශාක හා සසඳන විට සියලුම අධ්‍යයනය කරන ලද රේඛා සහ කාල ලක්ෂ්‍යයන්හි TanjilG_10657 යන අනුමාන ප්‍රෝටීන් ජානය සැලකිය යුතු ලෙස ප්‍රේරණය විය (පරිපූරක වගු S10, S11). ඊට අමතරව, සියලුම රේඛා සඳහා අත්හදා බැලීමේ කාලය තුළ TanjilG_10657 හි ප්‍රකාශන පැතිකඩ වැඩිවන ප්‍රවණතාවක් පෙන්නුම් කළේය. ජනගහනය 22660 114 ගුණයකින් සක්‍රිය කිරීම සහ 24 HPI හි ඉහළම සාපේක්ෂ ප්‍රකාශන මට්ටම (4.4 ± 0.4) සමඟ එන්නත් කිරීම සඳහා TanjilG_10657 හි ඉහළම සංවේදීතාව පෙන්නුම් කළේය (රූපය 6a). PR10 LlR18A ප්‍රෝටීන් ජානය TanjilG_27015 ද සියලුම රේඛා සහ කාල ලක්ෂ්‍යයන් හරහා සක්‍රිය වීම පෙන්නුම් කළ අතර, බොහෝ දත්ත ලක්ෂ්‍යයන්හි සංඛ්‍යානමය වැදගත්කමක් ඇත (රූපය 6b). TanjilG_10657 ට සමානව, TanjilG_27015 හි ඉහළම සාපේක්ෂ ප්‍රකාශන මට්ටම 22660 එන්නත් කරන ලද ජනගහනයේ 24 HPI (19.5 ± 2.4) හි නිරීක්ෂණය විය. TanjilG_04706 අම්ල එන්ඩොචිටිනේස් ජානය සියලුම රේඛා සහ සියලුම කාල ලක්ෂ්‍යවල සැලකිය යුතු ලෙස ඉහළ නංවා ඇත. බොරෙජින් 6 hpi (රූපය 6c) හැර. එය පළමු කාල ලක්ෂ්‍යයේ (6 HPI) 83A:476 (10.5 ගුණයකින්) දැඩි ලෙස ප්‍රේරණය කරන ලද අතර අනෙකුත් රේඛා වල (6.6-7.5 ගුණයකින්) මධ්‍යස්ථව වැඩි විය. අත්හදා බැලීම අතරතුර, TanjilG_04706 හි ප්‍රකාශනය 83A:476 සහ බොරෙජින් හි සමාන මට්ටම්වල පැවති අතර, මැන්ඩෙලප් සහ ජනගහනය 22660 හි එය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි වූ අතර සාපේක්ෂව ඉහළ අගයන් කරා ළඟා විය (පිළිවෙලින් 5.9 ± 1.5 සහ 6.2 ± 1.5). එන්ඩොග්ලුකන්-1,3-β-ග්ලූකෝසයිඩේස් වැනි ජානය TanjilG_23384 ජනගහනය 22660 හැර අනෙකුත් සියලුම රේඛා වල පළමු කාල ලක්ෂ්‍ය දෙකෙහි (6 සහ 12 hpi) ඉහළ සක්‍රියතාවයක් පෙන්නුම් කළේය (රූපය 6d). TanjilG_23384 හි ඉහළම සාපේක්ෂ ප්‍රකාශන මට්ටම් මැන්ඩෙලප් (2.7 ± 0.3) සහ 83A:476 (1.5 ± 0.1) හි දෙවන කාල ලක්ෂ්‍යයේදී (12 hpi) නිරීක්ෂණය කරන ලදී. HPI 24 හිදී, අධ්‍යයනය කරන ලද සියලුම රේඛා වල (0.04 ± 0.009 සිට 0.44 ± 0.12 දක්වා) TanjilG_23384 ප්‍රකාශනය සාපේක්ෂව අඩු විය.
ප්‍රමාණාත්මක PCR මගින් අනාවරණය කරන ලද තෝරාගත් ජාන (ag) වල ප්‍රකාශන පැතිකඩ. 6, 12 සහ 24 යන සංඛ්‍යා එන්නත ලබා දීමෙන් පසු පැය නියෝජනය කරයි. LanDExH7 සහ LanTUB6 ජාන සාමාන්‍යකරණය සඳහා භාවිතා කරන ලද අතර LanTUB6 අන්තර්-ශ්‍රේණි ක්‍රමාංකනය සඳහා භාවිතා කරන ලදී. දෝෂ තීරු ජීව විද්‍යාත්මක අනුරූ තුනක් මත පදනම් වූ සම්මත අපගමනය නියෝජනය කරන අතර, ඒ සෑම එකක්ම තාක්ෂණික අනුරූ තුනක සාමාන්‍යය වේ. 1999 දී පෝලන්තයේ වීර්සෙනිකා හි ලුපින් ක්ෂේත්‍රයෙන් ලබාගත් එන්නත් කරන ලද (කොලෙටොට්‍රිචම් ලුපිනි, වික්‍රියා කොල්-08) සහ පාලන (ව්‍යාජ එන්නත් කරන ලද) ශාක අතර ප්‍රකාශන මට්ටම්වල වෙනස්කම්වල සංඛ්‍යානමය වැදගත්කම දත්ත ලක්ෂ්‍යවලට ඉහළින් සලකුණු කර ඇත (*P අගය < 0.05, **P අගය ≤ 0.01, ***P අගය ≤ 0.001). 1999 දී පෝලන්තයේ වීර්සෙනිකා හි ලුපින් ක්ෂේත්‍රයෙන් ලබාගත් එන්නත් කරන ලද (කොලෙටොට්‍රිචම් ලුපිනි, වික්‍රියා කොල්-08) සහ පාලන (ව්‍යාජ එන්නත් කරන ලද) ශාක අතර ප්‍රකාශන මට්ටම්වල වෙනස්කම්වල සංඛ්‍යානමය වැදගත්කම දත්ත ලක්ෂ්‍යවලට ඉහළින් සලකුණු කර ඇත (*P අගය < 0.05, **P අගය ≤ 0.01, ***P අගය ≤ 0.001). Статистическая значимость различий в уровнях Мкспресии между инокулированными (Colletotrichum lupini, chol-08, Colletotricum19 г. с поля люпина в Верженице, Польша) සහ කොන්ත්‍රාත්තුව dannыh (*значение P <0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001). 1999 දී පෝලන්තයේ වයර්සෙනිස් හි ලුපයින් ක්ෂේත්‍රයකින් ලබාගත් එන්නත් කරන ලද (කොලෙටොට්‍රිචම් ලුපිනි, වික්‍රියා කොල්-08) සහ පාලන (ව්‍යාජ-එන්නත් කරන ලද) ශාක අතර ප්‍රකාශන මට්ටම්වල සංඛ්‍යානමය වශයෙන් සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දත්ත ලක්ෂ්‍යවලට ඉහළින් සටහන් කර ඇත (*P අගය < 0.05, **P-අගය ≤ 0.01, ***P-අගය ≤ 0.001).接种 (කොලෙටොට්‍රිචම් lupini, Col-08株, 1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在着性标记在湕渍0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001).接种 （colletotricum lupini , color-08 株 , 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 。 0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 01) 0. Статистически значимые различия в уровнях жекспресии между инокулированными (කොලෙටොට්‍රිචම් ලුපිනි, ෂිටම්, කෝල්-08 පොලී ලියුපිනා වර්ජෙනිෂෙ, පොල්ෂා, 1999 සිට. ටොච්කාමි данных (* значение P <0,05, ** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). 1999 දී පෝලන්තයේ වර්සෙනිස් හි ලුපයින් ක්ෂේත්‍රවලින් ලබාගත් එන්නත් කරන ලද (කොලෙටොට්‍රිචම් ලුපිනි, වික්‍රියා කොල්-08) සහ පාලන (ව්‍යාජ-එන්නත් කරන ලද) ශාක අතර ප්‍රකාශන මට්ටම්වල සංඛ්‍යානමය වශයෙන් සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දත්ත ලක්ෂ්‍යවලට ඉහළින් සටහන් කර ඇත (*P අගය < 0.05 , **P-අගය ≤ 0.01, ***P-අගය ≤ 0.001).විශ්ලේෂණය කරන ලද NLL රේඛා වූයේ: 83A:476 (ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය Lanr1 ඇලීලය රැගෙන යන), මැන්ඩෙලප් (මධ්‍යස්ථව ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය AnMan ඇලීලය රැගෙන යන), බොරෙජින් (ප්‍රතිරෝධී, නොදන්නා ජානමය පසුබිම) සහ ජනගහනය 22660 (ප්‍රතිරෝධී).
Lanr1 ලොකස් හි අපේක්ෂක ජානය TanjilG_05042 RNA-seq අධ්‍යයනයන්ගෙන් ලබාගත් පැතිකඩවලට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස වෙනස් ප්‍රකාශන රටාවක් පෙන්නුම් කළේය (රූපය 6e). මෙම ජානයේ සැලකිය යුතු සක්‍රියකරණය මැන්ඩෙලප් සහ 22660 ජනගහනය තුළ නිරීක්ෂණය විය (පිළිවෙලින් 39.7 සහ 11.7 ගුණයක් දක්වා), එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස සාපේක්ෂව ඉහළ ප්‍රකාශන මට්ටම් (පිළිවෙලින් 1.4 ± 0.14 සහ 7.2 ± 1.3 දක්වා). 83A:476 ද TanjilG_05042 ජානයේ (3.8 ගුණයක් දක්වා) යම් ඉහළ නියාමනයක් හෙළි කළේය, කෙසේ වෙතත්, ලබා ගත් සාපේක්ෂ ප්‍රකාශන මට්ටම් (0.044 ± 0.002) මැන්ඩෙලප් සහ 22660 ජනගහනයේ නිරීක්ෂණය කළ ඒවාට වඩා 30 ගුණයකට වඩා අඩු විය. qPCR මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලද ව්‍යාජ-එන්නත් කරන ලද (පාලන) ප්‍රභේදවල ප්‍රවේණි වර්ග අතර ප්‍රකාශන මට්ටම්වල සැලකිය යුතු වෙනස්කම් පෙන්නුම් කළ අතර, 22660 සහ 83A:476 ජනගහනය අතර මෙන්ම 22660 සහ 22660 ජනගහනය අතර 58 ගුණයක වෙනසක් කරා ළඟා විය. බොරෙජින් සහ මැන්ඩලප් අතර දෙගුණයක වෙනසක් ලබා ගන්නා ලදී.
83A:476 හි එන්නතට ප්‍රතිචාර වශයෙන් AnMan locus හි අපේක්ෂක ජානය, TanjilG_12861, සක්‍රිය කරන ලද අතර Mandelup, 22660 ජනගහනය තුළ උදාසීන වූ අතර, Boregine හි අඩු නියාමනය කරන ලදී (රූපය 6f). TanjilG_12861 ජානයේ සාපේක්ෂ ප්‍රකාශනය එන්නත් කරන ලද 83A: 476 හි ඉහළම අගය විය (0.14±0.01). 17.4 kDa පන්තියේ I තාප කම්පන ප්‍රෝටීන් ජානය TanjilG_05080 HSP17.4 සියලුම අධ්‍යයනය කරන ලද වික්‍රියා සහ කාල ලක්ෂ්‍යවල අඩු සාපේක්ෂ ප්‍රකාශන මට්ටම් පෙන්නුම් කළේය (රූපය 6g). 22660 ජනගහනයේ 24 HPI හි ඉහළම අගය නිරීක්ෂණය කරන ලදී (0.14 ± 0.02, එන්නත් කිරීමට ප්‍රතිචාර වශයෙන් අට ගුණයකින් වැඩි වීම).
ජාන ප්‍රකාශන පැතිකඩ සංසන්දනය කිරීමේදී (රූපය 7) TanjilG_10657 සහ අනෙකුත් ජාන හතරක් අතර ඉහළ සහසම්බන්ධයක් අනාවරණය විය: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), සහ TanjilG_04706 (r = 0.79). එවැනි ප්‍රතිඵල ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර අතරතුර මෙම ජානවල සම-නියාමනය පෙන්නුම් කළ හැකිය. TanjilG_12861 සහ TanjilG_23384 ජාන අනෙකුත් ජාන හා සසඳන විට අඩු පියර්සන් සහසම්බන්ධතා සංගුණක අගයන් (පිළිවෙලින් 0.08 සිට 0.43 දක්වා සහ -0.19 සිට 0.28 දක්වා) සහිත විවිධ ප්‍රකාශන පැතිකඩ පෙන්වීය.
ප්‍රමාණාත්මක PCR භාවිතයෙන් ජාන ප්‍රකාශන පැතිකඩ අතර සහසම්බන්ධතා අනාවරණය විය. පහත පටු පත්‍ර ලුපයින් රේඛා විශ්ලේෂණය කරන ලදී: 83A:476 (ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය Lanr1 ඇලිලය රැගෙන යන), මැන්ඩලප් (මධ්‍යස්ථව ප්‍රතිරෝධී, සමජාතීය AnMan ඇලිලය රැගෙන යන), බොරෙජින් (ප්‍රතිරෝධී, ජානමය පසුබිම නොදන්නා) සහ ජනගහනය 22660 (සංවේදී). එන්නත් කරන ලද (1999 දී පෝලන්තයේ වීර්සෙනිස් හි ලුපයින් ක්ෂේත්‍රවලින් ලබාගත් කොලෙටෝට්‍රිචම් ලුපිනි, වික්‍රියා Col-08) සහ පාලන (ෂැම්-එන්නත් කරන ලද) ශාක ඇතුළුව, කාල ලක්ෂ්‍ය තුනක් (එන්නත් කිරීමෙන් පැය 6, 12 සහ 24) ගණනය කරන ලදී. පරිමාණයෙන් පියර්සන් සහසම්බන්ධතා සංගුණකයේ අගය පෙන්වයි.
අඟලකට අශ්වබල 6 ක ධාරිතාවයකින් ලබාගත් දත්ත මත පදනම්ව, මුල් ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර කෙරෙහි අවධානය යොමු කිරීම සඳහා එන්නත් කරන ලද සහ පාලන ශාක සංසන්දනය කිරීමෙන් හඳුනාගත් 9981 DEG මත WGCNA සිදු කරන ලදී (පරිපූරක වගුව S12). ප්‍රවේණික වර්ග සහ පර්යේෂණාත්මක ප්‍රභේද අතර සහසම්බන්ධිත (ධනාත්මක හෝ සෘණ) ප්‍රකාශන පැතිකඩ සහිත ජාන මොඩියුල (පොකුරු) විසි දෙකක් සොයා ගන්නා ලදී. සාමාන්‍යයෙන්, ජාන ප්‍රකාශන මට්ටම් 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 අනුපිළිවෙලින් පහළට යමින් පැවතුනි (කෙසේ වෙතත්, ප්‍රභේද දෙකෙහිම, පාලන ශාකවල මෙම ප්‍රවණතාවය වඩාත් ශක්තිමත් විය). සාමාන්‍යයෙන්, ජාන ප්‍රකාශන මට්ටම් 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 අනුපිළිවෙලින් පහළට යමින් පැවතුනි (කෙසේ වෙතත්, ප්‍රභේද දෙකෙහිම, පාලන ශාකවල මෙම ප්‍රවණතාවය වඩාත් ශක්තිමත් විය). පෝරියඩ්කේ 83A:476 > මැන්ඩලප් > බෝරජින් > ජනගහනය 22660 тенденция была сильнее у контрольных растений). සාමාන්‍යයෙන්, ජාන ප්‍රකාශන මට්ටම් 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 අනුපිළිවෙලින් අඩු විය (කෙසේ වෙතත්, ප්‍රභේද දෙකෙහිම, පාලන ශාකවල මෙම ප්‍රවණතාවය වඩාත් ශක්තිමත් විය).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > ජනගහනය 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）。平均 而 言 , 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boegine> ජනගහනය 22660 的 顺序 下降在 植物 ඔබ 更.... රුසියාවේ 83A:476 > මැන්ඩලප් > බෝරජින් > ජනගහනය 22660 была сильнее у контрольных растений). සාමාන්‍යයෙන්, 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 ශ්‍රේණියේ ජාන ප්‍රකාශන මට්ටම් අඩු විය (කෙසේ වෙතත්, ප්‍රභේද දෙකෙහිම, පාලන ශාකවල මෙම ප්‍රවණතාවය වඩාත් ශක්තිමත් විය).එන්නත් කිරීමේ ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ජාන ප්‍රකාශනය ඉහළ නැංවීමට හේතු විය, විශේෂයෙන් මොඩියුල 18, 19, 14, 6 සහ 1 (බලපෑමේ අවරෝහණ අනුපිළිවෙලින්), සෘණ නියාමනය (උදා: මොඩියුල 9 සහ 20) හෝ උදාසීන බලපෑම් සහිතව (උදා: මොඩියුල 11, 22, 8 සහ 13). GO කාලීන පොහොසත් කිරීමේ විශ්ලේෂණය (පරිපූරක වගුව S13) මඟින් qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 සහ TanjilG_27015) මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලද ජාන ඇතුළුව, උපරිම සක්‍රියතාවයකින් යුත් එන්නත් කරන ලද මොඩියුලය (18) සඳහා “GO: 0006952 ආරක්ෂිත ප්‍රතිචාර” මෙන්ම බොහෝ එන්නත් කරන ලද වඩාත්ම මර්දනය කරන ලද ප්‍රභාසංස්ලේෂණ මොඩියුල (9) අනාවරණය විය. මොඩියුලය 18 සාන්ද්‍රකය (රූපය 8) PR-10-සමාන LlR18B ප්‍රෝටීනය කේතනය කරන TanjilG_26536 ජානය ලෙස හඳුනාගෙන ඇති අතර, මොඩියුලය 9 සාන්ද්‍රකය ප්‍රභා පද්ධති II PsbQ ප්‍රෝටීනය කේතනය කරන TanjilG_28955 ජානය ලෙස හඳුනාගෙන ඇත. අපේක්ෂක ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක ජානයක් වන Lanr1, TanjilG_05042, මොඩියුලය 22 (රූපය 9) හි දක්නට ලැබුණු අතර එය TanjilG_01212 කේන්ද්‍රය රැගෙන යන “GO:0044260 සෛලීය සාර්ව අණුක පරිවෘත්තීය ක්‍රියාවලීන්” සහ “GO:0006355 පිටපත් කිරීමේ නියාමනය, DNA සැකැස්ම” යන පද සමඟ සම්බන්ධ වේ. ජානය තාප ආතති පිටපත් කිරීමේ සාධකය A-4a (HSFA4a) සංකේතනය කරයි.
"GO: 0006952 ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර" යන අධි නියෝජනය කරන ලද ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලි පද සහිත මොඩියුලවල ජාන සම-ප්‍රකාශනයේ බරිත ජාල විශ්ලේෂණය. qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 සහ TanjilG_27015) මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලද ජාන හතර ඉස්මතු කිරීම සඳහා බන්ධනය සරල කරන ලදී.
"GO: 0006355: පිටපත් කිරීමේ නියාමනය, DNA සැකැස්ම" යන අධි නියෝජනය කරන ලද ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලි පදයක් සහිත මොඩියුලයක ජාන සම-ප්‍රකාශනය පිළිබඳ බරිත ජාල විශ්ලේෂණය සහ අපේක්ෂක ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක ජානයක් Lanr1 TanjilG_05042 රැගෙන යාම. TanjilG_05042 ජානය සහ මධ්‍යම TanjilG_01212 ජානය හුදකලා කිරීම සඳහා බන්ධනය සරල කරන ලදී.
ඕස්ට්‍රේලියාවේ එකතු කරන ලද ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක පරීක්ෂාවකින් පෙන්නුම් කළේ මුල් කාලීනව නිකුත් කරන ලද වගාවන් බොහොමයක් සංවේදී බවයි; කල්‍යා, කොරොමප් සහ මැන්ඩෙලප් මධ්‍යස්ථ ප්‍රතිරෝධී ලෙස විස්තර කර ඇති අතර, වොන්ගා, ටැන්ජිල් සහ 83A:476 ඉතා ප්‍රතිරෝධී ලෙස විස්තර කර ඇත26,27,31. එකම ප්‍රතිරෝධක ඇලීලයක්, Lanr1 ලෙස නම් කර ඇති අතර, කොරොමප් සහ මැන්ඩෙලප් වලට AnMan10, 26, 39 ලෙස නම් කර ඇති වෙනස් ඇලීලයක් තිබුණි, කල්‍යාට වෙනස් ඇලීලයක්, Lanr2. ජර්මනියේ ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය සඳහා පරීක්ෂා කිරීමෙන් LanrBo36 ලෙස නම් කරන ලද Lanr1 හැර වෙනත් අපේක්ෂක ඇලීලයක් සහිත ප්‍රතිරෝධී රේඛාවක් Bo7212 හඳුනා ගැනීමට හැකි විය.
අපගේ අධ්‍යයනයෙන් පරීක්ෂා කරන ලද විෂබීජ ප්ලාස්මයේ Lanr1 ඇලිලයේ ඉතා අඩු සංඛ්‍යාතයක් (6% ක් පමණ) අනාවරණය විය. මෙම නිරීක්ෂණය Anseq3 සහ Anseq4 සලකුණු භාවිතා කරමින් නැගෙනහිර යුරෝපීය විෂබීජ ප්ලාස්ම පරීක්ෂා කිරීමේ ප්‍රතිඵලවලට අනුකූල වන අතර, Lanr1 ඇලිලය බෙලාරුසියානු රේඛා දෙකක පමණක් පවතින බව පෙන්නුම් කළේය. මෙයින් ඇඟවෙන්නේ Lanr1 ඇලිලය තවමත් දේශීය අභිජනන වැඩසටහන් මගින් බහුලව භාවිතා නොවන බවයි, ඕස්ට්‍රේලියාවේ මෙන් නොව, එය සලකුණු-සහායිත අභිජනනය සඳහා ප්‍රධාන ඇලිල වලින් එකකි. ඕස්ට්‍රේලියානු වාර්තාවට සාපේක්ෂව යුරෝපීය ක්ෂේත්‍ර තත්වයන් තුළ Lanr1 ඇලිලය විසින් සපයන ලද අඩු ප්‍රතිරෝධය නිසා මෙය සිදුවිය හැකිය. ඊට අමතරව, ඕස්ට්‍රේලියාවේ අධික වර්ෂාපතන ප්‍රදේශවල ඇන්ත්‍රැක්නෝස් පිළිබඳ අධ්‍යයනයන් පෙන්වා දී ඇත්තේ Lanr1 ඇලිලය මගින් මැදිහත් වන ප්‍රතිරෝධක ප්‍රතිචාර රෝග කාරකයේ වර්ධනයට සහ වේගවත් සංවර්ධනයට හිතකර කාලගුණික තත්ත්වයන් තුළ ඵලදායී නොවිය හැකි බවයි. ඇත්ත වශයෙන්ම, වර්තමාන අධ්‍යයනයේදී, Lanr1 ඇලිලය රැගෙන යන ප්‍රවේණික වර්ගවල ඇන්ත්‍රැක්නෝස් හි සමහර රෝග ලක්ෂණ ද නිරීක්ෂණය කරන ලද අතර, C. lupini වර්ධනය සඳහා ප්‍රශස්ත තත්වයන් යටතේ ප්‍රතිරෝධය අතුරුදහන් විය හැකි බව යෝජනා කරයි. ඊට අමතරව, Lanr1 ස්ථානයේ සිට ආසන්න වශයෙන් 1 cM ක් පමණ වන Anseq3 සහ Anseq4 සලකුණු වල පැවැත්ම පිළිබඳ ව්‍යාජ ධනාත්මක අර්ථකථන 28,30,43 විය හැකිය.
අපගේ අධ්‍යයනයෙන් පෙන්නුම් කළේ Lanr1 ඇලිලය රැගෙන යන 83A:476, පළමු විශ්ලේෂණය කරන ලද කාල ලක්ෂ්‍යයේදී (6 hpi) මහා පරිමාණ ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටෝම් ප්‍රතික්‍රමලේඛනය සමඟ C. lupini එන්නත් කිරීමට ප්‍රතිචාර දැක්වූ බවයි, නමුත් AnMan ඇලිලය රැගෙන යන මැන්ඩෙලප් හි, ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටෝමික් ප්‍රතිචාර බොහෝ කලකට පසුව නිරීක්ෂණය විය. (24 සිට 48 hp දක්වා). ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරවල මෙම තාවකාලික වෙනස්කම් රෝග ලක්ෂණ වල වෙනස්කම් සමඟ සම්බන්ධ වී ඇති අතර, ප්‍රතිරෝධයට සාර්ථක ප්‍රතිචාරයක් සඳහා මුල් රෝග කාරක හඳුනාගැනීමේ වැදගත්කම ඉස්මතු කරයි. ශාක පටක ආසාදනය කිරීම සඳහා, ඇන්ත්‍රැක්ස් බීජාණු ප්‍රරෝහණය, සෛල බෙදීම සහ ඇප්‍රෙසෝරියම් සෑදීම ඇතුළුව ධාරක මතුපිට සංවර්ධන අවධීන් කිහිපයක් හරහා යා යුතුය. උපග්‍රන්ථයක් යනු ධාරකයේ මතුපිටට සම්බන්ධ වන සහ ධාරක පටක වලට විනිවිද යාමට පහසුකම් සපයන ආසාදිත ව්‍යුහයකි. මේ අනුව, කඩල සාරයේ ඇති C. gloeosporioides බීජාණු විනාඩි 75-90ක් පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීමෙන් පසු න්‍යෂ්ටියේ පළමු බෙදීම, මිනිත්තු 90-120කට පසු විෂබීජ නලයක් සෑදීම සහ පැය 4කට පසු මර්දනය පෙන්නුම් කළේය. අඹ C. gloeosporioides පැය 3ක පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරුවකින් පසු 40%කට වඩා වැඩි කේතුධර ප්‍රරෝහණයක් පෙන්නුම් කළ අතර පැය 4කට පසු 20%ක් පමණ ඇප්‍රෙසර් සෑදීම පෙන්නුම් කළේය. C. gloeosporioides හි වෛරස්-ආශ්‍රිත CAP20 ජානය, පැය 4 විනාඩි 46කට පසු CAP20 ප්‍රෝටීන් ඉහළ සාන්ද්‍රණයක් සහිත අලිගැට පේර මතුපිට ඉටි වල පැය 3.5ක පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරුවකින් පසු එපිෆයිට්-සාදන කොනීඩියා හි පිටපත් කිරීමේ ක්‍රියාකාරිත්වය පෙන්නුම් කළේය. ඒ හා සමානව, C. trifolii හි මෙලනින් ජෛව සංස්ලේෂණ ජානවල ක්‍රියාකාරිත්වය පැය 2ක පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරුවකදී ප්‍රේරණය කරන ලද අතර ඉන් පසුව පැය 1කට පසු ඇප්‍රෙසෝරියම් සෑදී ඇත. කොළ පටක අධ්‍යයනයන් පෙන්වා දී ඇත්තේ C. acutatum සමඟ එන්නත් කරන ලද ස්ට්‍රෝබෙරි 8 hpi හි පළමු මර්දනය ඇති බවත්, C. coccodes සමඟ එන්නත් කරන ලද තක්කාලි 4 hpi හි පළමු මර්දනය ඇති බවත්, C. coccodes සමඟ එන්නත් කරන ලද තක්කාලි 4 hpi හි පළමු මර්දනය ඇති බවත්, Colletotrichum spp. ආසාදන ක්‍රියාවලියේ කාල පරිමාණයට බොහෝ දුරට අනුකූල වන බවත්ය. 83A:476 සඳහා වේගවත් ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර මෙම රේඛාවේ ශාක ප්‍රතිරෝධය සහ ඵලකාරක-ප්‍රේරිත ප්‍රතිශක්තිය (ETI) ජාන සම්බන්ධ වීම යෝජනා කරන අතර, මැන්ඩලප් හි ප්‍රමාද වූ ප්‍රතිචාර ක්ෂුද්‍ර-ආශ්‍රිත අණුක රටා-ප්‍රේරිත ප්‍රතිශක්තිය (MTI) කල්පිතයට සහාය වේ 50. 83A: 476 සහ මැන්ඩලප් සඳහා මුල් ප්‍රතිචාර. ප්‍රමාද වූ ප්‍රතිචාරයේ ඉහළ හෝ පහළ-නියාමනය කරන ලද ජාන අතර අර්ධ අතිච්ඡාදනය ද මෙම සංකල්පයට සහාය වේ, මන්ද ETI බොහෝ විට වේගවත් සහ වැඩිදියුණු කළ MTI ප්‍රතිචාරයක් ලෙස සලකනු ලබන අතර එය ආසාදන ස්ථානයේ වැඩසටහන්ගත සෛල මරණයෙන් අවසන් වන අතර එය ඇනෆිලැක්ටික් කම්පනය ලෙස හැඳින්වේ 51,52.
Gene Ontology GO:0006952 "ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරය" යන අධි නියෝජනය කරන ලද පදයට ආරෝපණය කරන ලද ජාන බොහොමයක්, ආතතියෙන් ඇතිවන උපවාස පණිවිඩය 22 ප්‍රෝටීනයේ (SAM22 ට සමාන) සමජාතීය 11 සහ ප්‍රධාන රබර් කිරි ප්‍රෝටීන්-සමාන (MLPs) හත වේ. -like ප්‍රෝටීන 31, 34, 43 සහ 423 අනුක්‍රමික සමානකමක් පෙන්නුම් කළේය. SAM22-සමාන ජාන දිගු කාලයක් පැවති සැලකිය යුතු සක්‍රියතාවයක් පෙන්නුම් කළ අතර, ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධයේ වැඩි මට්ටම් පෙන්නුම් කළේය (83A:476 සහ Boregine). කෙසේ වෙතත්, MLP-සමාන ජාන අඩු කරන ලද්දේ අපේක්ෂක ප්‍රතිරෝධක ඇලීලය රැගෙන යන රේඛා වල පමණි (83A:476/Lanr1 at 6 hpi සහ Mandelup/AnMan at 24 hpi). හඳුනාගත් සියලුම SAM22-සමාන සමජාතීය 105 kb පමණ විහිදෙන ජාන පොකුරකින් ආරම්භ වන අතර MLP-සමාන ජාන ජෙනෝමයේ වෙනම කලාපවලින් ආරම්භ වන බව සැලකිල්ලට ගත යුතුය. ඩයපෝර්තෙටොක්සිකා එන්නත් කිරීමට NLL ප්‍රතිරෝධය පිළිබඳ අපගේ පෙර අධ්‍යයනයේදී එවැනි SAM22-සමාන ජාන සම්බන්ධීකරණයෙන් සක්‍රිය වීම ද සොයා ගන්නා ලදී, එයින් ඇඟවෙන්නේ ඒවා ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරයේ තිරස් සංරචකවලට සම්බන්ධ වන බවයි. තුවාල හෝ සැලිසිලික් අම්ලය, දිලීර ප්‍රේරක හෝ හයිඩ්‍රජන් පෙරොක්සයිඩ් සමඟ ප්‍රතිකාර කිරීම සඳහා SAM22-සමාන ජානවල ධනාත්මක ප්‍රතිචාරයක් පිළිබඳ වාර්තා මගින් ද මෙම නිගමනයට සහාය වේ.
MLP-සමාන ජාන බොහෝ ශාක විශේෂවල බැක්ටීරියා, වෛරස් සහ ව්යාධිජනක දිලීර ආසාදන ඇතුළු විවිධ අජීවී සහ ජෛව ආතතීන්ට ප්‍රතිචාර දක්වන බව පෙන්වා දී ඇත55. ශාක සහ රෝග කාරක අතර ඇතැම් අන්තර්ක්‍රියා වලට ප්‍රතිචාර දැක්වීමේ දිශාවන් දැඩි ලෙස වැඩි වීමේ සිට (එනම්, Verticillium dahliae සමඟ කපු ආසාදනය අතරතුර) සැලකිය යුතු ලෙස අඩු වීම (එනම්, Alternaria spp සමඟ ඇපල් ගස ආසාදනය කිරීමෙන් පසු)56,57 දක්වා පරාසයක පැවතුනි. F. niger ආසාදනයට අලිගැට පේර ආරක්ෂාව අතරතුර සහ ඇපල් ගස ආසාදනය කිරීමේදී MLP-සමාන 423 ජානයේ සැලකිය යුතු අඩුවීමක් නිරීක්ෂණය වී ඇත. Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola සහ Alternaria alternata ඇපල් ව්‍යාධි වර්ග වේ58,59. ඊට අමතරව, MLP-සමාන 423 ජානය අධික ලෙස ප්‍රකාශ කරන ඇපල් කැලි වලට ප්‍රතිරෝධයට සම්බන්ධ ජානවල අඩු ප්‍රකාශනයක් තිබූ අතර දිලීර ආසාදනවලට වැඩි අවදානමක් තිබුණි59. Fusarium oxysporum f අනුගමනය කරමින්, MLP-සමාන 423 ජානය ප්‍රතිරෝධී පොදු බෝංචි ජනක ප්ලාස්මයේ ද මර්දනය කරන ලදී. cn. බෝංචි ආසාදනය 60.
අපගේ RNA-seq අධ්‍යයනයේ දී හඳුනාගත් PR-10 පවුලේ අනෙකුත් සාමාජිකයින් වූයේ අධි නියාමනයට ප්‍රතිචාර වශයෙන් LlR18A සහ LlR18B ජාන මෙන්ම ලිපිඩ හුවමාරු ප්‍රෝටීන් DIR1 සඳහා අධි නියාමනය කරන ලද (1 ජානය) හෝ අඩු නියාමනය කරන ලද (3 ජාන) ජානයයි. . ඊට අමතරව, WGCNA මෙම මොඩියුලයේ කේන්ද්‍රස්ථානයක් ලෙස LlR18B ජානය ඉස්මතු කරයි, එය එන්නත් කිරීමට බෙහෙවින් ගොදුරු වන අතර ආරක්ෂිත ප්‍රතිචාර ජාන කිහිපයක් රැගෙන යයි. LlR18A සහ LlR18B ජාන ව්යාධිජනක බැක්ටීරියා වලට ප්‍රතිචාර වශයෙන් කහ ලුපින් කොළවල මෙන්ම D. toxica එන්නත් කිරීමෙන් පසු NLL කඳන් තුළද ප්‍රේරණය කරන ලද අතර, මෙම ජානවල සහල් සමජාතීයතාවය වන RSOsPR10, ජැස්මොනික් අම්ල සංඥා මාර්ගයට සම්බන්ධ යැයි අනුමාන කරන ලද දිලීර ආසාදනයකින් වේගයෙන් ප්‍රේරණය විය53,61, 62. DIR1 ජානය පද්ධතිමය අත්පත් කරගත් ප්‍රතිරෝධය (SAR) ආරම්භය සඳහා අවශ්‍ය වන නිශ්චිත නොවන ලිපිඩ ප්‍රවාහන ප්‍රෝටීන සංකේතනය කරයි. ආරක්ෂිත ප්‍රතික්‍රියා වර්ධනය වීමත් සමඟ, දුරස්ථ අවයවවල SAR ප්‍රේරණය කිරීම සඳහා DIR1 ප්‍රෝටීනය ආසාදනයේ අවධානයෙන් ෆ්ලෝයම් හරහා ප්‍රවාහනය කෙරේ. සිත්ගන්නා කරුණ නම්, 84A:476 සහ ජනගහනය 22660 පේළිවල පළමු වරට ලක්ෂ්‍යයේදී TanjilG_02313 DIR1 ජානය සැලකිය යුතු ලෙස ප්‍රේරණය වූ නමුත් 84A:476 පේළියේ පමණක් ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය සාර්ථකව වර්ධනය විය. ඉතිරි සමජාතීය තුන 6 hpi හි 83A:476 රේඛාවේ පමණක් එන්නත් කිරීමට ප්‍රතිචාර දැක්වූ අතර, මෙම ප්‍රතිචාරය පහළට යොමු කරන ලද බැවින්, NLL හි DIR1 ජානයේ යම් උප ක්‍රියාකාරීත්වයක් මෙයින් පෙන්නුම් කළ හැකිය.
අපගේ අධ්‍යයනයේ දී, "GO:0055114 රෙඩොක්ස් ක්‍රියාවලිය" ලෙස හඳුන්වන ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලියට අනුරූප වන වඩාත් පොදු සංරචක වූයේ සයිටොක්‍රෝම් P450 ප්‍රෝටීන්, පෙරොක්සිඩේස්, ලිනොලෙයික් අම්ලය 9S-/13S-lipoxygenase සහ 1-ඇමයිනොසයික්ලොප්‍රොපේන්-1-කාබොක්සිලික් අම්ල ඔක්සිඩේස් ය. ඊට අමතරව, අපගේ WGCNA විසින් HSFA4a සමජාතීයතාවය Lanr1 ප්‍රතිරෝධක ජාන අපේක්ෂක TanjilG_05042 වැනි මොඩියුල රැගෙන යන මධ්‍යස්ථානයක් ලෙස අර්ථ දක්වයි. HSFA4a යනු ශාකවල න්‍යෂ්ටික පිටපත් කිරීමේ රෙඩොක්ස්-යැපෙන නියාමනයේ අංගයකි.
සයිටොක්‍රෝම් P450 ප්‍රෝටීන යනු ප්‍රාථමික හා ද්විතියික පරිවෘත්තීය ක්‍රියාවලියේදී NADPH සහ/හෝ O2 මත යැපෙන හයිඩ්‍රොක්සිලේෂන් ප්‍රතික්‍රියා උත්ප්‍රේරණය කරන ඔක්සිඩෝරෙඩක්ටේස් වන අතර, සෙනෝබයොටික් වල පරිවෘත්තීය ක්‍රියාවලිය මෙන්ම හෝමෝන, මේද අම්ල, ස්ටෙරෝල්, සෛල බිත්ති සංරචක, ජෛව පොලිමර් සහ ආරක්ෂිත සංයෝගවල ජෛව සංස්ලේෂණය ද ඇතුළත් වේ. අපගේ අධ්‍යයනයක දී, ශාක සයිටොක්‍රෝම් P450 ශ්‍රිතයේ විචල්‍යතාවය -10.6 log2 (ගුණයක වෙනසක්) සිට 5.7 දක්වා අඩු කරන ලද්දේ වෙනස් කරන ලද සමජාතීය (37) විශාල සංඛ්‍යාවක් සහ නිශ්චිත ජාන අතර ප්‍රතිචාර රටා වල වෙනස්කම් හේතුවෙන්, ඉහළට සංශෝධනයක් පිළිබිඹු කිරීමෙනි. . මෙතරම් විශාල ප්‍රෝටීන් සුපිරි පවුලක NLL ජානවල ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාකාරිත්වය පැහැදිලි කිරීම සඳහා RNA-seq දත්ත පමණක් භාවිතා කිරීම ඉතා සමපේක්ෂනීය වනු ඇත. කෙසේ වෙතත්, සමහර සයිටොක්‍රෝම් P450 ජාන ව්යාධිජනක දිලීර හෝ බැක්ටීරියා වලට වැඩි ප්‍රතිරෝධයක් සමඟ සම්බන්ධ වී ඇති බව සඳහන් කිරීම වටී, අසාත්මිකතා ප්‍රතික්‍රියා සඳහා දායකත්වයක් ඇතුළුව69,70,71.
III පන්තියේ පෙරොක්සිඩේස් යනු ශාක වර්ධනය හා සංවර්ධනය අතරතුර පුළුල් පරාසයක පරිවෘත්තීය ක්‍රියාවලීන් සඳහා මෙන්ම ලවණතාව, නියඟය, අධික ආලෝක තීව්‍රතාවය සහ රෝග කාරක ප්‍රහාරය වැනි පාරිසරික ආතතීන්ට ප්‍රතිචාර වශයෙන් බහුකාර්ය ශාක එන්සයිම වේ72. ස්ටයිලෝසැන්තස් හුමිලිස් සහ සී. ග්ලෝයෝස්පෝරියෝයිඩ්ස්, ලෙන්ස් කුලිනාරිස් සහ සී. ට්‍රන්කැටම්, ෆේසියෝලස් වල්ගාරිස් සහ සී. ලින්ඩෙමුතියනම්, කුකුමිස් සැටිවස් සහ සී. ලැජෙනරියම්73,74,75,76 ඇතුළු ඇන්ත්‍රැසිස් සමඟ ශාක විශේෂ කිහිපයක අන්තර්ක්‍රියාවට පෙර පෙරොක්සිඩේස් සම්බන්ධ වේ73. දිලීර ශාක පටකයට විනිවිද යාමට පෙර ප්‍රතිචාරය ඉතා වේගවත් වේ, සමහර විට 4 HPI හිදී පවා73. පෙරොක්සිඩේස් ජානය D. toxica NLL එන්නත් කිරීමට ද ප්‍රතිචාර දැක්වීය. ඔක්සිකාරක පිපිරීම නියාමනය කිරීමට හෝ ඔක්සිකාරක ආතතිය ඉවත් කිරීමට ඔවුන්ගේ සාමාන්‍ය කාර්යයන්ට අමතරව, විශේෂිත සංයෝග ලිග්නීකරණය, උප ඒකක හෝ හරස් සම්බන්ධ කිරීමේදී සෛල බිත්ති ශක්තිමත් කිරීම මත පදනම් වූ භෞතික බාධක නිර්මාණය කිරීමෙන් පෙරොක්සිඩේස් රෝග කාරක වර්ධනයට බාධා කළ හැකිය. මෙම ශ්‍රිතය සිලිකෝවේ ආරෝපණය කළ හැක්කේ, 6 HPI හි 83A:476 ප්‍රතිරෝධී රේඛාවේ අපගේ අධ්‍යයනයේ දී සැලකිය යුතු ලෙස ඉහළ නංවන ලද, නමුත් ප්‍රතිචාර නොදැක්වූ අනෙකුත් වික්‍රියා සහ කාල ලක්ෂ්‍යවල නොව, අනුමාන ලිග්නින් සාදන ඇනායන පෙරොක්සිඩේස් කේතනය කරන TanjilG_03329 ජානයට ය.
ලිනොලෙයික් අම්ලයේ 9S-/13S-lipoxygenase යනු ලිපිඩ ජෛව සංස්ලේෂණයේ ඔක්සිකාරක මාර්ගයේ පළමු පියවරයි78. මෙම මාර්ගයේ නිෂ්පාදන ශාක ආරක්ෂාව සඳහා බහුවිධ කාර්යයන් ඉටු කරයි, කැලෝස් සහ පෙක්ටීන් තැන්පතු සෑදීම හරහා සෛල බිත්ති ශක්තිමත් කිරීම සහ ප්‍රතික්‍රියාශීලී ඔක්සිජන් විශේෂ නිෂ්පාදනය හරහා ඔක්සිකාරක ආතතිය නියාමනය කිරීම ඇතුළුව79,80,81,82,83. වර්තමාන අධ්‍යයනයේ දී, ලිනොලෙයික් අම්ලයේ 9S-/13S-lipoxygenase ප්‍රකාශනය සියලුම වික්‍රියා වල වෙනස් කරන ලදී, නමුත් සංවේදී ජනගහනය 22660 තුළ, විවිධ කාල ලක්ෂ්‍යයන්හිදී ඉහළ නියාමනය පැවතුන අතර, ප්‍රතිරෝධී Lanr1 සහ AnMan ඇලිලය රැගෙන යන වික්‍රියා වලදී, එය මෙම ප්‍රවේණි වර්ග අතර ආරක්ෂිත ඇන්ත්‍රැක්ස් ප්‍රතික්‍රියා වලදී ඔක්සිලිපින් ස්ථරයේ විවිධාංගීකරණය අවධාරණය කරයි.
ලුපින් සමඟ එන්නත් කළ විට 1-ඇමයිනොසයික්ලොප්‍රොපේන්-1-කාබොක්සිලේට් ඔක්සිඩේස් (ACO) සමජාතීයතාව සැලකිය යුතු ලෙස ඉහළ නංවන ලදී (ජාන 9) හෝ අඩු කරන ලදී (ජාන 2). ව්‍යතිරේක දෙකක් හැර, මෙම ප්‍රතිචාර සියල්ලම 6 hp හි 83A:476 හි සිදු විය. ACO ප්‍රෝටීන මගින් මැදිහත් වන එන්සයිම ප්‍රතික්‍රියාව එතිලීන් නිෂ්පාදනයේ අනුපාත සීමා කිරීමේ පියවර වන අතර එබැවින් එය බෙහෙවින් නියාමනය කෙරේ84. එතිලීන් යනු ශාක සංවර්ධනය නියාමනය කිරීමේදී සහ අජීවී සහ ජෛව ආතති තත්වයන්ට ප්‍රතිචාර දැක්වීමේදී විවිධ භූමිකාවන් ඉටු කරන ශාක හෝමෝනයකි. ACO පිටපත් කිරීමේ ප්‍රේරණය සහ එතිලීන් සංඥා මාර්ගය සක්‍රීය කිරීම ප්‍රතික්‍රියාශීලී ඔක්සිජන් විශේෂ සහ ෆයිටොඇලෙක්සින් නිෂ්පාදනය නියාමනය කිරීමෙන් අර්ධ ජෛව විද්‍යාත්මක දිලීර ඔරිසා ඔරිසා ඔරිසා ඔරිසා ඔරිසා වලට සහල් වල ප්‍රතිරෝධය වැඩි කිරීමට සම්බන්ධ වේ. මෙම අධ්‍යයනයේ වාර්තා කර ඇති 83A:476 රේඛාවේ ACO සමජාතීයතාවන් සැලකිය යුතු ලෙස ඉහළ නැංවීමේ පසුබිමට එරෙහිව, M. oryzae සහ C. lupini88,89 අතර දක්නට ලැබෙන ඉතා සමාන පත්‍ර ආසාදන ක්‍රියාවලියක්, අණුක මාර්ගවල සංඥා මධ්‍යම පියවරක් වන NLL ඇන්ත්‍රැක්නෝස් එතිලීන් වලට ප්‍රතිරෝධය ලබා දීමේ හැකියාව මාරු කරයි.
වර්තමාන අධ්‍යයනයේ දී, ප්‍රභාසංස්ලේෂණය හා සම්බන්ධ බොහෝ ජාන විශාල පරිමාණයෙන් මර්දනය කිරීම 83A:476 හි 6 hpi සහ මැන්ඩෙලූප් හි 48 hpi සහ 22660 ජනගහනය නිරීක්ෂණය කරන ලදී. මෙම වෙනස්කම්වල ප්‍රමාණය සහ ප්‍රගතිය මට්ටමට සමානුපාතික වේ. මෙම අත්හදා බැලීමේදී ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය නිරීක්ෂණය කරන ලදී. මෑතකදී, ප්‍රභාසංස්ලේෂණයට අදාළ පිටපත් වල ශක්තිමත් සහ මුල් මර්දනය, ව්යාධිජනක බැක්ටීරියා සහ දිලීර ඇතුළු ශාක-රෝගකාරක අන්තර්ක්‍රියා වල ආකෘති කිහිපයක වාර්තා වී ඇත. කඩිමුඩියේ (සමහර අන්තර්ක්‍රියා වල 2 HPI සිට) සහ ආසාදනයට ප්‍රතිචාර වශයෙන් ප්‍රභාසංස්ලේෂණය හා සම්බන්ධ ජාන ගෝලීය වශයෙන් මර්දනය කිරීම, ප්‍රතික්‍රියාශීලී ඔක්සිජන් විශේෂ යෙදවීම සහ අසාත්මිකතා ප්‍රතික්‍රියා මැදිහත් වීම සඳහා සැලිසිලික් අම්ල මාර්ගය සමඟ ඔවුන්ගේ අන්තර්ක්‍රියා මත පදනම්ව ශාක ප්‍රතිශක්තිය අවුලුවනු ඇත 90,94.
නිගමනයක් ලෙස, වඩාත්ම ප්‍රතිරෝධී පරම්පරාව (83A:476) සඳහා යෝජනා කර ඇති ආරක්ෂක ප්‍රතිචාර යාන්ත්‍රණ අතරට R ජානය (අනුමාන වශයෙන් TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) මගින් වේගවත් රෝග කාරක හඳුනාගැනීම සහ අසාත්මිකතා ප්‍රතිචාර-මැදිහත් වූ සැලිසිලික් අම්ලය සහ එතිලීන් සංඥා කිරීම ඇතුළත් වන අතර, පසුව දිගු දුර SAR ක්‍රියාකාරිත්වය ස්ථාපිත කිරීම DIR-1 ප්‍රෝටීනය මගින් සහාය වේ. C. lupini ආසාදනය සඳහා ජෛව විද්‍යාත්මක කාලය ඉතා කෙටි (ආසන්න වශයෙන් දින 2), පසුව නෙරෝටික් වර්ධනය95 බව සැලකිල්ලට ගත යුතුය. මෙම අවධීන් අතර සංක්‍රාන්තිය ධාරක ශාකවල අධි සංවේදීතා ප්‍රතික්‍රියා සඳහා ප්‍රේරක ලෙස ක්‍රියා කරන එතිලීන්-ප්‍රේරිත ප්‍රෝටීන වල නෙරෝසිස් සහ ප්‍රකාශනය සමඟ සම්බන්ධ විය හැකිය. එබැවින්, ජෛව විද්‍යාත්මක අවධියේදී C. lupini සාර්ථකව අල්ලා ගැනීම සඳහා කාල කවුළුව ඉතා පටු ය. 6 hpi හි 83A:476 හි නිරීක්ෂණය කරන ලද රෙඩොක්ස් සහ ප්‍රභාසංස්ලේෂණය සමඟ සම්බන්ධ ජාන නැවත ක්‍රමලේඛනය කිරීම දිලීර හයිෆේ ප්‍රගතියට අනුකූල වන අතර ජෛව විද්‍යාත්මක අවධියේදී සාර්ථක ආරක්ෂිත ප්‍රතිචාරයක් වර්ධනය වීම පෙන්නුම් කරයි. මැන්ඩලප් සහ 22660 ජනගහනයේ පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතිචාර, නෙරෝටික් වර්ධනයට මාරු වීමට පෙර දිලීර අල්ලා ගැනීමට ප්‍රමාද වැඩි විය හැක, කෙසේ වෙතත්, PR-10 ප්‍රෝටීනයේ සාපේක්ෂව වේගවත් නියාමනය තිරස් ප්‍රතිරෝධය ප්‍රවර්ධනය කරන බැවින්, මැන්ඩලප් 22660 ජනගහනයට වඩා ඵලදායී විය හැකිය.
කැනොනිකල් R ජානය මගින් මෙහෙයවනු ලබන ETI, ඇන්ත්‍රැක්නෝස් වලට බෝංචි ප්‍රතිරෝධය සඳහා පොදු යාන්ත්‍රණයක් ලෙස පෙනේ. මේ අනුව, මෙඩිකාගෝ ට්‍රන්කැටුල ආකෘතියේ රනිල කුලයට අයත් බෝගයේ, ඇන්ත්‍රැක්නෝස් වලට ප්‍රතිරෝධය TIR-NBS-LRR97 ශාක R ජාන පන්තියේ සාමාජිකයෙකු වන RCT1 ජානය මගින් ලබා දෙනු ලැබේ. මෙම ජානය ඇල්ෆල්ෆා වල පුළුල් වර්ණාවලී ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය ද ලබා දෙයි, එය සංවේදී ශාක වෙත මාරු කරන විට. පොදු බෝංචි (P. vulgaris) හි, අද වන විට ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක ජාන දුසිම් දෙකකට වඩා හඳුනාගෙන ඇත. මෙම ජානවලින් සමහරක් කැනොනිකල් R ජාන නොමැති කලාපවල දක්නට ලැබේ, කෙසේ වෙතත් තවත් බොහෝ ඒවා TIR-NBS-LRRs99 ඇතුළුව NBS-LRR ජාන පොකුර රැගෙන යන වර්ණදේහවල දාරවල පිහිටා ඇත. ජෙනෝමය-පුළුල් SSR අධ්‍යයනයෙන් NBS-LRR ජානය පොදු බෝංචි වල ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධය සමඟ සම්බන්ධ වීම ද තහවුරු විය. සුදු ලුපින් 101 හි ප්‍රධාන ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක ස්ථානය රැගෙන යන ජෙනෝමික් කලාපයේ ද කැනොනිකල් R ජානය සොයා ගන්නා ලදී.
අපගේ කාර්යයෙන් පෙන්නුම් කරන්නේ, ශාක ආසාදනයේ මුල් අවධියේදී (වඩාත් සුදුසු වන්නේ පැය 12 ට නොඅඩු) සක්‍රිය කරන ලද ක්ෂණික ප්‍රතිරෝධක ප්‍රතික්‍රියාවක්, කොලෙලොට්‍රිකම් ලුපිනි නම් රෝගකාරක දිලීරය නිසා ඇති වන ඇන්ත්‍රැක්නෝස් වලින් පටු කොළ සහිත ලුපින් ඵලදායී ලෙස ආරක්ෂා කරන බවයි. ඉහළ ප්‍රතිදාන අනුපිළිවෙල භාවිතා කරමින්, Lanr1 සහ AnMan ප්‍රතිරෝධක ජාන මගින් මැදිහත් වන NLL ශාකවල ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක ජානවල අවකල ප්‍රකාශන පැතිකඩ අපි පෙන්නුම් කළෙමු. සාර්ථක ආරක්ෂාව යනු රෝග කාරකයක් සමඟ ශාකයේ පළමු සම්බන්ධතාවයෙන් පැය කිහිපයක් ඇතුළත රෙඩොක්ස්, ප්‍රභාසංස්ලේෂණය සහ ව්‍යාධිජනකයට සම්බන්ධ ප්‍රෝටීන සඳහා ජාන ප්‍රවේශමෙන් නිර්මාණය කිරීමයි. සමාන ආරක්ෂිත ප්‍රතික්‍රියා, නමුත් කාලය ප්‍රමාද වී, රෝග වලින් ශාක ආරක්ෂා කිරීමේදී බෙහෙවින් අඩු ඵලදායී වේ. Lanr1 ජානය මගින් මැදිහත් වන ඇන්ත්‍රැක්ස් ප්‍රතිරෝධය R ජානයේ (ඵලකාරක-ප්‍රේරිත ප්‍රතිශක්තිය) සාමාන්‍ය වේගවත් ප්‍රතිචාරයට සමාන වන අතර, AnMan ජානය බොහෝ විට තිරසාර ප්‍රතිචාරයක් (ක්ෂුද්‍ර ජීවී ආශ්‍රිත අණුක රටාවකින් අවුලුවන ප්‍රතිශක්තිය) සපයන අතර, මධ්‍යස්ථ මට්ටමේ තිරසාර බවක් ලබා දෙයි.
ඇන්ත්‍රැක්නෝස් සලකුණු සඳහා පරීක්ෂා කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලද NLL රේඛා 215 තුළ වගා වර්ග 74 ක්, හරස් කිරීම හෝ අභිජනනය මගින් ලබාගත් රේඛා 60 ක්, විකෘති 5 ක් සහ වල් හෝ මුල් ජර්ප්ලාස්ම් 76 ක් ඇතුළත් විය. රේඛා රටවල් 17 කින් පැමිණියේය, ප්‍රධාන වශයෙන් පෝලන්තය (58), ස්පාඤ්ඤය (47), ජර්මනිය (27), ඕස්ට්‍රේලියාව (26), රුසියාව (19), බෙලරුස් (7), ඉතාලිය (5) සහ වෙනත් රේඛා. රටවල් 10 කින්. කට්ටලයට යොමු ප්‍රතිරෝධී රේඛා ද ඇතුළත් වේ: 83A:476, ටැන්ජිල්, ලැන්ර්1 ඇලිලය රැගෙන යන වොන්ගා සහ ඇන්මෑන් ඇලිලය රැගෙන යන මැන්ඩලප්. රේඛා පෝලන්තයේ වියට්‍රෝවෝ හි පොස්නාන් ශාක අභිජනන සමාගම විසින් නඩත්තු කරන යුරෝපීය ලුපින් ජාන සම්පත් දත්ත සමුදායෙන් ලබා ගන්නා ලදී (පරිපූරක වගුව S1).
පාලිත තත්වයන් යටතේ ශාක වගා කරන ලදී (ඡායාරූප කාලය පැය 16, දිවා කාලයේ උෂ්ණත්වය 25°C සහ රාත්‍රියේ 18°C). ජීව විද්‍යාත්මක අනුපිටපත් දෙකක් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. ප්‍රොටෝකෝලයට අනුව DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) භාවිතයෙන් සති තුනක් පැරණි කොළ වලින් DNA හුදකලා කරන ලදී. හුදකලා DNA වල ගුණාත්මකභාවය සහ සාන්ද්‍රණය වර්ණාවලි ඡායාරූපමිතික ක්‍රම මගින් තක්සේරු කරන ලදී (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Anthracnose ප්‍රතිරෝධක ජානය AnMan (cv. Mandelup වෙතින් ලබාගත්) සලකුණු කරන AnManM1 සලකුණ සහ Lanr1 ජානය (cv. Tanjil වෙතින් ලබාගත්) දෙපස ඇති Anseq3 සහ Anseq4 සලකුණු 11,26,28 විශ්ලේෂණය කරන ලදී. ප්‍රතිරෝධී ඇලිලය සඳහා සමජාතීය සෛල "1" ලෙසත්, සංවේදී - "0" ලෙසත්, විෂම සෛල - 0.5 ලෙසත් ලකුණු කරන ලදී.
AnManM1, AnSeq3 සහ AnSeq4 සලකුණු සඳහා පරීක්ෂා කිරීමේ ප්‍රතිඵල සහ අවසාන පසු විපරම් අත්හදා බැලීම් සඳහා බීජ ලබා ගැනීමේ හැකියාව මත පදනම්ව, ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක ෆීනෝටයිපින් සඳහා NLL රේඛා 50ක් තෝරා ගන්නා ලදී. දිවා කාලයේදී 22°C සහ රාත්‍රියේදී 19°C උෂ්ණත්ව පරාසයක් සහිත පැය 14 ක ප්‍රකාශ කාල පරිච්ඡේදයක් සහිත පරිගණක පාලිත හරිතාගාරයක විශ්ලේෂණය අනුපිටපත් ලෙස සිදු කරන ලදී. බීජ කබාය ඉතා දැඩි වීම නිසා බීජ නිද්‍රාශීලී වීම වැළැක්වීමට සහ ඒකාකාර ප්‍රරෝහණය සහතික කිරීම සඳහා වැපිරීමට පෙර බීජ සීරීමට (තියුණු තලයකින් කළලයේ ප්‍රතිවිරුද්ධ පැත්තේ බීජ කබාය කපා දමනු ලැබේ). ශාක වගා කරන ලද්දේ විෂබීජහරණය කළ පස (TS-1 REC 085 මධ්‍යම මූලික, ක්ලස්මන්-ඩීල්මන් පොල්ස්කා, වෝර්සෝ, පෝලන්තය) සහිත භාජනවල (11 × 11 × 21 සෙ.මී.) වගා කරන ලදී. මහා පෝලන්තයේ වර්සෙනිට්සා හි කෙතක වගා කරන ලද පටු කොළ සහිත ලුපයින් ශාකවල කඳන් වලින් 1999 දී වගා කරන ලද කොලෙටොට්‍රිකම් ලුපිනි කෝල්-08 ප්‍රභේදය සමඟ එන්නත් කිරීම සිදු කරන ලදී (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E). ප්‍රදේශයක් ලබා ගන්න. බීජාණු සෑදීම සඳහා දින 21 ක් කළු ආලෝකය යටතේ 20° C උෂ්ණත්වයකදී SNA මාධ්‍යයේ හුදකලා වගා කරන ලදී. වැපිරීමෙන් සති හතරකට පසු, ශාක පත්‍ර 4-6 අවධියට ළඟා වූ විට, මිලිලීටරයකට 0.5 x 106 කොනීඩියා සාන්ද්‍රණයකින් කොනීඩියා අත්හිටුවීමකින් ඉසීමෙන් එන්නත් කිරීම සිදු කරන ලදී. එන්නත් කිරීමෙන් පසු, කොනීඩියා ප්‍රරෝහණය සහ ආසාදන ක්‍රියාවලිය පහසු කිරීම සඳහා ශාක පැය 24 ක් අඳුරේ තබා ඇත්තේ 98% ක පමණ ආර්ද්‍රතාවයකින් සහ 25°C උෂ්ණත්වයකදීය. ඉන්පසු ශාක පැය 14 ක ප්‍රකාශ කාලපරිච්ඡේදයක් යටතේ දිවා කාලයේ 22°C/රාත්‍රියේ 19°C සහ ආර්ද්‍රතාවය 70% ක් යටතේ වගා කරන ලදී. එන්නත් කිරීමෙන් දින 22 කට පසු රෝග ලකුණු ලබා ගන්නා ලද අතර කඳන් සහ කොළ මත නෙරෝටික් තුවාල පැවතීම හෝ නොපැවතීම මත පදනම්ව 0 (ප්‍රතිශක්තිකරණ) සිට 9 (ඉතා සංවේදී) දක්වා පරාසයක පැවතුනි. ඊට අමතරව, ලකුණු කිරීමෙන් පසු, ශාකවල බර මනිනු ලැබීය. සලකුණු ප්‍රවේණික වර්ග සහ රෝග සංසිද්ධි අතර සම්බන්ධතා ලක්ෂ්‍ය දෙකේ අනුක්‍රමික සහසම්බන්ධතා ලෙස ගණනය කරන ලදී (ඇන්ත්‍රැක්නෝස් ප්‍රතිරෝධක සංසිද්ධි විශ්ලේෂණය සඳහා රේඛා කට්ටලයේ විෂමජාතීය සලකුණු නොමැති වීම).