Daalụ maka ịga leta Nature.com. Ụdị ihe nchọgharị ị na-eji nwere nkwado CSS pere mpe. Maka ahụmịhe kachasị mma, anyị na-akwado ka ị jiri ihe nchọgharị emelitere (ma ọ bụ gbanyụọ Ọnọdụ Ndakọrịta na Internet Explorer). Ka ọ dị ugbu a, iji hụ na nkwado na-aga n'ihu, anyị ga-egosi saịtị ahụ na-enweghị ụdị na JavaScript.
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) bụ osisi leguminous nke e ji emepụta nri na imeziwanye ala. Mgbasawanye zuru ụwa ọnụ nke NLL dị ka ihe ọkụkụ adọtala ọtụtụ ero na-akpata ọrịa, gụnyere lupine anthracnose, nke na-akpata ọrịa anthracnose na-emebi emebi. Ejirila alleles abụọ, Lanr1 na AnMan, nke na-enye mmụba iguzogide, mee ihe na ịzụlite NLL, mana usoro molekul dị n'okpuru ka amabeghị. N'ọmụmụ ihe a, ejiri ihe nrịbama Lanr1 na AnMan nyochaa ihe nlele NLL nke Europe. Nnwale nke ọgwụ mgbochi ahụ n'ebe a na-achịkwa kwadoro irè nke ndị na-enye onyinye na-eguzogide. Emere njirimara ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa dị iche iche na ahịrị ndị na-eguzogide na ndị nwere ike ibute ya. Njikọ iguzogide Anthracnose na oke ngosipụta nke okwu ontology mkpụrụ ndụ ihe nketa "GO:0006952 Nchedo Response", "GO:0055114 Redox Process", na "GO:0015979 Photosynthesis". Tinyere nke ahụ, ahịrị Lanr1(83A:476) gosiri mgbanwe dị ukwuu n'usoro ihe omume transcriptome ngwa ngwa mgbe a gbasịrị ọgwụ mgbochi, ebe ahịrị ndị ọzọ gosiri igbu oge na nzaghachi a site na ihe dị ka awa 42. Mmeghachi omume nchebe jikọtara ya na mkpụrụ ndụ ihe nketa TIR-NBS, CC-NBS-LRR na NBS-LRR, protein iri metụtara ọrịa, protein mbufe lipid, endoglucan-1,3-β-glucosidase, protein mgbidi cell glycine bara ụba, na mkpụrụ ndụ ihe nketa sitere na ụzọ oxygen na-emegharị ahụ. Mmeghachi omume mbụ na 83A:476, gụnyere iji nlezianya gbochie mkpụrụ ndụ ihe nketa metụtara photosynthesis, dabara na nchebe na-aga nke ọma n'oge usoro uto ahịhịa nke bayoloji fungal, na-egosi na onye na-eme ihe na-akpali mgbochi. Mmeghachi omume Mandeloop na-ebelata nwayọ, dịka ọ dị na drag kwụ ọtọ n'ozuzu ya.
Lupine dị warara (NLL, Lupinus angustifolius L.) bụ ọka nwere protein dị elu nke sitere na mpaghara ọdịda anyanwụ Mediterenian1,2. A na-akọ ya ugbu a dị ka ihe oriri maka anụmanụ na ụmụ mmadụ. A na-ewerekwa ya dị ka nri akwụkwọ ndụ akwụkwọ ndụ na sistemụ ntụgharị ihe ubi n'ihi ntinye nitrogen site na nje bacteria na-edozi nitrogen na mmezi zuru oke nke nhazi ala. NLL agafeela usoro nhazi ngwa ngwa na narị afọ gara aga ma ka nọ n'okpuru nrụgide dị elu nke ịzụlite ihe ubi3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. Site na ịkọ NLL sara mbara, usoro nke ero ndị na-akpata ọrịa mepụtara ebe ọrụ ugbo ọhụrụ ma kpatara ọrịa ndị na-ebibi ihe ubi ọhụrụ. Ihe kacha pụta ìhè nye ndị ọrụ ugbo na ndị na-azụ anụ lupin bụ ọdịdị nke anthracnose, nke ero nje na-akpata, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ihe kacha pụta ìhè nye ndị ọrụ ugbo na ndị na-azụ anụ lupin bụ ọdịdị nke anthracnose, nke ero nje na-akpata, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров. Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ihe kacha pụta ìhè nye ndị ọrụ ugbo na ndị na-azụ anụ lupine bụ mpụta nke anthracnose nke ero nje Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 kpatara.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真说：Feen Hagedorn13 ga-adị.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现。 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина. грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ihe kacha ewute ndị ọrụ ugbo na ndị na-azụ anụ lupine bụ mpụta nke anthracnose nke ero nje Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 kpatara.Akụkọ mbụ gbasara ọrịa ahụ sitere na Brazil na United States, ihe mgbaàmà ndị a na-ahụkarị pụtara na 1912 na 1929 n'otu n'otu. Agbanyeghị, mgbe ihe dị ka afọ 30 gasịrị, a kpọrọ nje ahụ Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph nke Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的 Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的 Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld na Usoro Ọmụmụ Ihe Ezubere. & H. Schrenk,. & H. Schrenk,.na H. Schrenk. & H.施伦克,. & H.施伦克,.na H. Schlenk,.Nchọpụta ọrịa mbụ emere n'etiti narị afọ nke 20 gosiri ụfọdụ iguzogide NLL na njikọta lupine odo (L. luteus L.), mana njikọta lupine ọcha niile (L. albus L.) a nwalere nwere nnukwu mmetụta15,16. Ọmụmụ ihe egosila na mmepe nke anthracnose na-ejikọta ya na mmụba mmiri ozuzo (iru mmiri ikuku) na okpomọkụ (n'ime oke 12-28°C), na-eduga na mmebi nke iguzogide na okpomọkụ dị elu17, 18. N'ezie, oge achọrọ maka conidia ka ọ tolite na ọrịa ahụ ịmalite, dị mkpụmkpụ okpukpu anọ na 24°C (awa 4) karịa na 12°C (awa 16) n'okpuru ọnọdụ iru mmiri dị elu19. Ya mere, okpomọkụ ụwa na-aga n'ihu emeela ka anthracnose gbasaa. Agbanyeghị, a hụrụ ọrịa ahụ na France (1982) na Ukraine (1983) dị ka ihe ịrịba ama nke ihe iyi egwu na-abịa, mana o doro anya na ụlọ ọrụ lupine leghaara ya anya n'oge ahụ20,21. Afọ ole na ole ka nke ahụ gasịrị, ọrịa a na-emebi ihe gbasaara n'ụwa niile ma metụtakwa mba ndị na-emepụta lupine dịka Australia, Poland na Germany22,23,24. Mgbe ọrịa anthracnose gbasasịrị n'etiti afọ 1990, nyocha sara mbara mere ka a mata ọtụtụ ndị na-enye onyinye na-eguzogide ọgwụ na ihe nlele NLL19. Mgbochi NLL megide anthracnose na-achịkwa site na mkpụrụ ndụ abụọ dị iche iche a na-ahụ na isi mmalite germplasm dị iche iche: Lanr1 na ụdị Tanjil na Wonga na AnMan na ụdị. Mandalay 25, 26. Mkpụrụ ndụ ndị a na-emeju ihe nrịbama molekul ndị na-akwado nhọrọ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa na-eguzogide ọgwụ na mmemme ọmụmụ 25, 26, 27, 28, 29, 30. A gafere ahịrị ọmụmụ na-eguzogide ọgwụ 83A:476 nke bu allele Lanr1 na ahịrị ọhịa P27255 iji nweta ọnụọgụgụ RIL nke na-ekewapụ maka iguzogide anthracnose, nke mere ka o kwe omume ikenye ebe Lanr1 na kromozom NLL-1131, 32, 33. Nhazi nke ihe nrịbama maapụ njikọ site na loci iguzogide n'akụkụ ruo anthracnose na usoro genomic, NLL kpughere ebe alleles atọ niile dị na otu kromozom (NLL-11), mana n'ọnọdụ dị iche iche29,34,35. Agbanyeghị, n'ihi obere ọnụọgụgụ RIL na nnukwu anya mkpụrụ ndụ ihe nketa dị n'etiti ihe nrịbama na alleles kwekọrọ, enweghị nkwubi okwu a pụrụ ịtụkwasị obi gbasara mkpụrụ ndụ ihe nketa ha dị n'okpuru. N'aka nke ọzọ, ojiji nke mkpụrụ ndụ ihe nketa azụ na lupins siri ike n'ihi obere ike ịmụgharị ha, nke na-eme ka njikwa mkpụrụ ndụ ihe nketa sie ike37.
Mmepe nke germplasm e ji aka mee nke na-ebu allele achọrọ na ọnọdụ homozygous, dịka 83A:476 (Lanr1) na Mandelup (AnMan), emepeela ụzọ ịmụ banyere iguzogide anthracnose n'ihu ọnụnọ nke njikọta megidere nke alleles n'ime oke ọhịa. Ohere nke usoro molekul. Tụlee nzaghachi nchebe nke genotypes kpọmkwem mepụtara. Ọmụmụ ihe a tụlere nzaghachi mbụ nke NLL na ọgwụ mgbochi C. lupini. Nke mbụ, e jiri akara molekul nke Lanr1 na AnMan kpuchie panel germplasm nke Europe nwere ahịrị 215. Emechara mee anthracnose phenotyping na ahịrị NLL 50, nke ahọpụtara na mbụ maka akara molekul, n'okpuru ọnọdụ a na-achịkwa. Dabere na nnwale ndị a, ahịrị anọ dị iche na nguzogide anthracnose na nhazi allelic Lanr1/AnMan maka njirimara ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa nchebe dị iche iche site na iji ụzọ abụọ ndị ọzọ: usoro RNA dị elu na nha PCR oge.
Nnyocha nke otu germplasm NLL (N = 215) na akara Lanr1 (Anseq3 na Anseq4) na AnMan (Anseq4) na AnMan (AnManM1) gosiri na naanị otu ahịrị (95726, dị nso na Salamanca-b) na-eme ka allele "eguzogide" maka akara niile dịkwuo elu, ebe "Ọnọdụ nke alleles 'nwere ike ịdị ndụ'" hụrụ oke nke akara niile na ahịrị 158 (~73.5%). Ahịrị iri na atọ mepụtara alleles "eguzogide" abụọ nke akara Lanr1, ahịrị asatọ mepụtara alleles "eguzogide" nke akara Lanr1. allele "eguzogide" nke akara AnMan (Tebụl Mgbakwunye S1). Ahịrị abụọ bụ heterozygous maka akara Anseq3 na otu heterozygous maka akara AnManM1. Ahịrị 42 (19.5%) nwere usoro dị iche iche nke alleles Anseq3 na Anseq4, na-egosi ugboro ole njikọta dị elu n'etiti loci abụọ a. Ụdị Anthracnose dị n'okpuru ọnọdụ a na-achịkwa (Tebụl Mgbakwunye S2) kpughere mgbanwe dị na iguzogide genotypes anwalere, nke gosipụtara na oke anthracnose. Ọdịiche dị na nkezi akara sitere na 1.8 (na-eguzogide nwayọ) ruo 6.9 (na-eguzogide nwayọ) na ọdịiche dị n'ibu osisi sitere na 0.62 (na-eguzogide nwayọ) ruo 4.45 g (na-eguzogide). E nwere njikọ dị mkpa n'etiti ụkpụrụ ndị a hụrụ na mmegharị abụọ nke nnwale ahụ (0.51 maka akara oke ọrịa, P = 0.00017 na 0.61 maka ibu osisi, P < 0.0001) yana n'etiti paramita abụọ a (− 0.59 na − 0.77, P < 0.0001). E nwere njikọ dị mkpa n'etiti ụkpụrụ ndị a hụrụ na mmegharị abụọ nke nnwale ahụ (0.51 maka akara oke ọrịa, P = 0.00017 na 0.61 maka ibu osisi, P < 0.0001) yana n'etiti paramita abụọ a (− 0.59 na − 0.77, P < 0.0001). Ndị na-eme ihe nkiri na ndị na-eme ihe nkiri na ndị na-eme ihe nkiri na-eme ka ndị mmadụ na-eme ihe n'eziokwu (0,51 ). ma ọ bụ, P = 0,00017 na 0,61 для массы растения, P <0,0001) 0,0001). A hụrụ njikọ dị mkpa n'etiti ụkpụrụ ndị a hụrụ na ugboro abụọ nke nnwale ahụ (0.51 maka akara oke ọrịa, P = 0.00017 na 0.61 maka ibu osisi, P < 0.0001), yana n'etiti paramita abụọ a (- 0.59 na -0.77, P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分为0.51，P. 0.00017，植物重量为0.61，P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77，P <0.001)在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性, p = 0.00017 ， 植物 为 为 0.61 ， p <0.0001） 以及和- 0.59 ndị - 0.77, P <0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями. 0,00017 na ndị ọzọ 0,61, P <0,0001), na ndị na-eme egwuregwu parameter (-0,59 na -0,0001) 0,77, P <0,0001. E nwere njikọ dị mkpa n'etiti ụkpụrụ ndị a hụrụ na ọnụọgụ abụọ (akara oke ọrịa 0.51, P = 0.00017 na ibu osisi 0.61, P < 0.0001) na n'etiti paramita abụọ a (-0.59 na -0 .0001) 0.77, P<0.0001. ).Ihe mgbaàmà ndị a na-ahụkarị n'osisi ndị nwere ike ibute ọrịa gụnyere ịgbagọ na ịgbagọ nke ogwe osisi ahụ dị ka usoro "ụta onye ọzụzụ atụrụ", wee soro ya nwee ọnya oval nwere mkpụrụ ndụ oroma/pink sporozoites (Foto mgbakwunye 1). Mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1 (83A:476 na Tanjil) na AnMan (Mandelup) na-eguzogide ọgwụ nke ọma, 0.0331 na 0.0036). Ụfọdụ ahịrị ndị nwekwara "ihe mgbochi" Lanr1 na/ma ọ bụ alleles AnMan na-egosi ihe mgbaàmà nke ọrịa ahụ.
N'ụzọ na-adọrọ mmasị, ahịrị NLL ole na ole na-enweghị allele akara "na-eguzogide" gosipụtara ọkwa dị elu nke iguzogide anthracnose (nke a pụrụ iji tụnyere ma ọ bụ karịa maka ụdị mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1 ma ọ bụ AnMan), dị ka Boregine (uru P < 0.0001 maka paramita abụọ ahụ), Bojar (uru P < 0.0001 maka akara na 0.001 maka ibu osisi) na Population B-549/79b (uru P < 0.0001 maka akara na nke na-adịghị mkpa maka ibu). N'ụzọ na-adọrọ mmasị, ahịrị NLL ole na ole na-enweghị allele akara "na-eguzogide" gosipụtara ọkwa dị elu nke iguzogide anthracnose (nke a pụrụ iji tụnyere ma ọ bụ karịa maka ụdị mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1 ma ọ bụ AnMan), dị ka Boregine (uru P < 0.0001 maka paramita abụọ ahụ), Bojar (uru P < 0.0001 maka akara na 0.001 maka ibu osisi) na Population B-549/79b (uru P < 0.0001 maka akara na nke na-adịghị mkpa maka ibu). Интересно, что несколько линий NLL, akwụkwọ ndụ akwụkwọ ndụ устойчивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как, 0000 (1) обоих параметров), Bojar (значение P <0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) na популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). N'ụzọ na-akpali mmasị, ọtụtụ ahịrị NLL na-enweghị allele akara 'na-eguzogide' gosiri ọkwa dị elu nke iguzogide anthracnose (dịka ma ọ bụ karịa maka ụdị mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1 ma ọ bụ AnMan), dị ka Boregine (uru P < 0.0001 maka paramita abụọ ahụ), Bojar (uru P < 0.0001 maka nyocha na 0.001 maka ibu osisi) na ọnụọgụgụ B-549/79b (uru P < 0.0001 maka nyocha mana ọ bụghị ihe dị mkpa maka ibu).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重量不找。 Ọ dị mma ịmara na ụfọdụ sistemụ NLL nke na-enweghị ihe nrịbama "antigenic" na-egosi oke iguzogide kwụ ọtọ (nke kwekọrọ na mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1 ma ọ bụ AnMan ma ọ bụ karịa), dịka Boregine (paramita abụọ ahụ P < 0.0001), Bojar (uru P < 0.0001, ibu osisi 0.001) na ụdị B-549/79b (uru P < 0.0001, ibu adịghị mkpa). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», показалеи устойчивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P диля об0), Bojar (значение P <0,0001, масса растения 0,001) na популяция B-549/79b (оценка P-значение) <0,0001, масса незначительна). N'ụzọ na-akpali mmasị, ụfọdụ ahịrị NLL na-enweghị ihe nrịbama 'eguzogide' ọ bụla gosiri ọkwa dị elu nke iguzogide anthracnose (dịka ma ọ bụ karịa genotypes Lanr1 ma ọ bụ AnMan), dị ka Boregine (uru P maka paramita abụọ ahụ <0.0001), Bojar (uru P < 0.0001, ibu osisi 0.001) na ọnụ ọgụgụ mmadụ B-549/79b (uru P < 0.0001, ibu adịghị mkpa).Ihe a na-egosi na o nwere ike ịbụ isi iyi mkpụrụ ndụ ihe nketa ọhụrụ nke iguzogide, na-akọwa enweghị njikọ dị n'etiti genotypes akara na ụdị ọrịa (uru P site na ~0.42 ruo ~0.98). Ya mere, ule Kolmogorov-Smirnov gosiri na data gbasara nguzogide anthracnose na-ekesakarị maka akara (uru P 0.25 na 0.11) na oke osisi (uru P 0.47 na 0.55), na-atụ aro I na-eche na alleles karịrị Lanr1 na AnMan so na ya.
Dabere na nsonaazụ nke nyocha iguzogide anthracnose, ahọpụtara ahịrị anọ maka nyocha transcriptome: 83A:476, Boregine, Mandelup, na Population 22660. A nwalegharịrị ahịrị ndị a maka iguzogide anthrax na nnwale ịgba ọgwụ mgbochi site na usoro RNA, ma ọ bụrụhaala na ha dị otu ahụ na ule gara aga. Ụkpụrụ akara ndị ahụ bụ ndị a: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) na ọnụ ọgụgụ mmadụ 22660 (6.11 ± 1.29).
Usoro Illumina NovaSeq 6000 nwetara nkezi nke ụzọ abụọ Mread 40.5 kwa ihe nlele (29.7 ruo 54.4 Mreads) (Tebụl Mgbakwunye S3). Akara nhazi na usoro ntụaka sitere na 75.5% ruo 88.6%. Njikọ nkezi nke data ọnụọgụgụ agụmagụ n'etiti mgbanwe nnwale n'etiti ihe ndị e ji mee ihe na-emepụta ihe dị ndụ sitere na 0.812 ruo 0.997 (nkezi 0.959). N'ime mkpụrụ ndụ ihe nketa 35,170 e nyochachara, 2917 egosighi ngosipụta ọ bụla, ebe e gosipụtara mkpụrụ ndụ ihe nketa 4785 ndị ​​ọzọ n'ọkwa dị ntakịrị (nkezi ntọala < 5). N'ime mkpụrụ ndụ ihe nketa 35,170 e nyochachara, 2917 egosighi ngosipụta ọ bụla, ebe e gosipụtara mkpụrụ ndụ ihe nketa 4785 ndị ​​ọzọ n'ọkwa dị ntakịrị (nkezi ntọala < 5). Иz 35 170 proanalyzirovannыh genov 2917 na ihe ngosi ihe ngosi, ostalnыe 4785. незначительном уровне (базовое среднее <5). N'ime mkpụrụ ndụ ihe nketa 35,170 e nyochachara, 2917 egosighi ngosipụta ọ bụla, ebe mkpụrụ ndụ ihe nketa 4785 fọdụrụ gosipụtara n'ọkwa dị ntakịrị (nkezi ntọala <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 5)35,170 Иz 35 170 proanalizyrovannыh genov 2917 na эkspressirovalis, a ostalnыe 4785 (базовое среднее значение <5). N'ime mkpụrụ ndụ ihe nketa 35,170 e nyochachara, 2917 egosipụtaghị, mkpụrụ ndụ ihe nketa 4785 ndị ​​ọzọ nwekwara ngosipụta dị nta (nkezi ntọala <5).Ya mere, ọnụọgụ mkpụrụ ndụ ihe nketa a na-ewere dị ka nke e gosipụtara (nkezi ntọala ≥ 5) n'oge nnwale ahụ bụ 27,468 (78.1%) (Tebụl Mgbakwunye S4).
Malite n'oge mbụ, ahịrị NLL niile zara ọgwụ mgbochi nke C. lupini (ụdị Col-08) site na imegharị usoro ihe omume nke transcriptome (Tebụl 1), agbanyeghị, a hụrụ nnukwu ọdịiche dị n'etiti ahịrị ndị ahụ. Ya mere, ahịrị iguzogide 83A:476 (nke na-ebu mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1) gosipụtara mgbanwe mgbanwe nke transcriptome dị mkpa na oge mbụ (6 hpi) yana mmụba okpukpu 31-69 na ọnụọgụ mkpụrụ ndụ ihe nketa dị elu na ala nkewapụrụ iche ma e jiri ya tụnyere oge ndị ọzọ n'oge a. Na mgbakwunye, oke a adịteghị aka, ebe ngosipụta nke naanị mkpụrụ ndụ ihe nketa ole na ole ka gbanwere nke ukwuu na oge nke abụọ (12 hpi). N'ụzọ na-adọrọ mmasị, Boregine, nke gosikwara ọkwa dị elu nke iguzogide na ule graft, emeghị nnukwu mgbanwe mgbanwe ntụgharị n'oge nnwale ahụ. Agbanyeghị, ọnụọgụ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa dị iche iche (DEG) bụ otu maka Boregine na 83A:476 na 12 HPI. Ma Mandelup ma ọnụ ọgụgụ mmadụ 22660 gosiri na DEG kacha elu n'oge ikpeazụ (48 l/s), nke na-egosi igbu oge n'ihe gbasara nzaghachi nchekwa.
Ebe ọ bụ na 83A:476 mere nnukwu mgbanwe nhazigharị transcriptome dịka nzaghachi nye C. lupini na 6 HPI ma e jiri ya tụnyere ahịrị ndị ọzọ niile, ~91% nke DEG ndị a hụrụ n'oge a bụ ndị kpọmkwem n'usoro ọmụmụ (Foto 1). Agbanyeghị, e nwere ụfọdụ njikọ na nzaghachi mbụ n'etiti ahịrị ọmụmụ ihe, ebe 68.5%, 50.9%, na 52.6% DEG na Boregine, Mandelup, na ọnụ ọgụgụ mmadụ 22660, n'otu n'otu, jikọtara ya na ndị a hụrụ na 83A:476 n'oge ụfọdụ. Agbanyeghị, DEG ndị a bụ naanị obere akụkụ (0.97–1.70%) nke DEG niile achọpụtara ugbu a site na iji 83A:476. Na mgbakwunye, 11 DEGs sitere na ahịrị niile bụ otu n'oge a (Tebụl Mgbakwunye S4-S6), gụnyere ihe ndị a na-ahụkarị na nzaghachi nchekwa osisi: protein mbufe lipid (TanjilG_32225), endoglucan-1,3-β-glucoside enzyme (TanjilG_23384), protein abụọ nwere ike ibute nrụgide dịka SAM22 (TanjilG_31528 na TanjilG_31531), protein latex bụ isi (TanjilG_32352), na protein mgbidi sel abụọ nwere glycine (TanjilG_19701 na TanjilG_19702). Enwekwara nnukwu nkwekọ na nzaghachi transcriptome n'etiti 83A:476 na Boregine na 24 HPI (mkpokọta 16-38% DEG) na n'etiti Mandelup na Population 22660 na 48 HPI (mkpokọta 14-20% DEG).
Ihe osise Venn nke na-egosi ọnụọgụ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa dị iche iche (DEG) n'ahịrị lupine dị warara (NLL) nke e tinyere Colletotrichum lupini (ụdị Col-08 nke e nwetara site na ubi lupine na Wierzhenice, Poland, 1999) n'ime ha. Ahịrị NLL ndị a tụlere bụ: 83A:476 (na-eguzogide ọgwụ, na-ebu allele Lanr1), Boregine (na-eguzogide ọgwụ, amaghị ihe ndabere mkpụrụ ndụ ihe nketa), Mandelup (na-eguzogide ọgwụ nke ọma, na-ebu allele AnMan) na ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (nwere ike ịdị mfe). Mkpirisi okwu hpi na-anọchi anya awa ole na ole mgbe a gbasịrị ọgwụ mgbochi. Ewepụla uru efu iji mee ka eserese ahụ dị mfe.
E nyochachara usoro mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a na-egosipụta oke oke na 6 hpi maka ọnụnọ nke ngalaba mkpụrụ ndụ ihe nketa R (Tebụl Mgbakwunye S7). Ọmụmụ ihe a kpughere mmụba nke mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị na-eguzogide ọrịa ochie na ngalaba NBS-LRR naanị na 83A:476. Nchịkọta a nwere otu mkpụrụ ndụ ihe nketa TIR-NBS-LRR (tanjilg_05042), mkpụrụ ndụ ihe nketa CC-NBS-LRR ise (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, na tanjilg_16162), na NBS-LR anọ, Tanjilg_16162), na NBS-LRRE anọ (tanjilg_16162) yana NBS-Lrr anọ (tanjilg_16162) na NBS-LRR anọ (TANJILG_16162). Mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a niile nwere ngalaba ndị a haziri n'usoro echekwara. Na mgbakwunye na mkpụrụ ndụ ihe nketa ngalaba NBS-LRR, e tinyere ọtụtụ kinases RLL n'ọrụ na 6 hpi, ya bụ, otu na Boregine (TanjilG_19877), abụọ na Mandelup (TanjilG_07141 na TanjilG_19877) na na ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (TanjilG_09014 na TanjilG_10361) na abụọ na 83A 27:476.
Mkpụrụ ndụ ihe nketa nwere mgbanwe dị ukwuu n'ọkwa dịka a tụrụ anya ya mgbe a gbasịrị C. lupini (ụdị Col-08) ọgwụ, e tinyere ya na nyocha mmụba Gene Ontology (GO) (Mgbakwunye Tebụl S8). Okwu usoro ihe ndị dị ndụ a na-egosipụtakarị n'ụzọ karịrị akarị bụ "GO:0006952 agbachitere nzaghachi" nke pụtara na njikọta 6 n'ime 16 (oge × ahịrị) yana nnukwu mkpa (uru P < 0.001) (Foto 2). Okwu usoro ihe ndị dị ndụ a na-egosipụtakarị n'ụzọ karịrị akarị bụ "GO:0006952 agbachitere nzaghachi" nke pụtara na njikọta 6 n'ime 16 (oge × ahịrị) yana nnukwu mkpa (uru P < 0.001) (Foto 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитой,» появлялся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Okwu usoro ihe ndị dị ndụ a na-egosipụtakarị n'ụzọ karịrị akarị bụ 'GO:0006952 protection response', nke pụtara na njikọta isii n'ime 16 (oge × usoro) nwere nnukwu mkpa (P uru < 0.001) (Foto 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952个中，具有高显着性（P 值<0.001）（图2）。 Okwu usoro ihe ndị dị ndụ kacha pụta ìhè bụ "GO:0006952 protection response", nke pụtara na 6 n'ime 16 (时间×线), yana nnukwu ihe dị mkpa (P uru < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 Nzaghachi agbachitere», 6. из 16 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Okwu usoro ihe ndị dị ndụ a na-ejikarị egosipụta bụ 'GO:0006952 Defense Response', nke pụtara na njikọta isii n'ime 16 (oge × ahịrị) nke nwere nnukwu mkpa (uru P < 0.001) (Foto 2).E gosipụtara okwu a n'oge abụọ n'ime 83A: 476 na Boregine (6 na 24 hpi) na n'otu oge na Mandelup na Population 22660 (12 na 6 hpi, n'otu n'otu). Nke a bụ nsonaazụ a tụrụ anya ya, na-egosipụta mmeghachi omume fungal nke ahịrị ndị na-eguzogide ọgwụ. Na mgbakwunye, 83A:476 zara C. lupini site na iweta mkpụrụ ndụ ihe nketa ngwa ngwa metụtara mgbawa oxidative nke okwu ahụ bụ "GO:0055114 redox process" nọchitere anya, na-egosi mmeghachi omume nchebe kpọmkwem, ebe Boregine kpughere mmeghachi omume nchebe kpọmkwem, metụtara okwu ahụ bụ 'GO'. :0006950 Nzaghachi nrụgide". Population 22660 mere ka nzaghachi nguzogide kwụ ọtọ nke gụnyere metabolites nke abụọ pụta ìhè, na-egosipụta oke ọnụọgụ okwu "GO:0016104 Usoro nke biosynthesis triterpene" na "GO:0006722 Usoro nke metabolite triterpene" (okwu abụọ ahụ so na otu usoro mkpụrụ ndụ ihe nketa), na-eburu n'uche nsonaazụ nke nyocha nkwalite okwu GO, nkwụsi ike mmeghachi omume Mandelup dị n'etiti Boregine na Population 22660. Na mgbakwunye, mmeghachi omume mbụ 83A:476 (6 hpi) na mmeghachi omume oge Mandelup na Population 22660 gụnyere okwu GO:0015979 'photosynthesis' na usoro ihe ndị ọzọ metụtara bayoloji.
Okwu gbasara mkpụrụ ndụ ihe nketa bioprocess nke a họọrọ n'ime nkọwa nke mkpụrụ ndụ ihe nketa dị iche iche n'oge nzaghachi transcriptome nke lupine dị warara-leaf (NLL) nke a gbara ọgwụ lupine anthrax (ụdị Col-08 nke sitere na ubi lupine na Wierzhenice, Poland, na 1999) bụ ihe karịrị akarị. Ahịrị NLL ndị a tụlere bụ: 83A:476 (na-eguzogide ọgwụ, na-ebu allele Lanr1 homozygous), Boregine (na-eguzogide ọgwụ, amaghị ihe ndabere mkpụrụ ndụ ihe nketa), Mandelup (na-eguzogide ọgwụ nke ọma, na-ebu allele AnMan homozygous) na ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (nwere ike ibute ọrịa).
Ebe ọ bụ na nnyocha a bu n'obi ịchọpụta mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị na-enye aka na iguzogide anthracnose, e jiri mbelata nke mkpụrụ ndụ ihe nketa e kenyere okwu GO “GO: 0006952 Mmeghachi omume nchebe” na “GO: 0055114 Usoro Redox” nyochaa mkpụrụ ndụ ihe nketa ebe ọ bụ na ihe ndabere pụtara ≥ 30 yana opekata mpe otu ahịrị. × isi oge na-ejikọta uru dị mkpa na ọnụọgụgụ nke log2 (mgbanwe mpịachi). Ọnụọgụ mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị na-emezu ihe ndị a bụ 65 maka GO:0006952 na 524 maka GO:0055114.
83A:476 kpughere elu DEG abụọ e dere aha ya na okwu GO:0006952, nke mbụ na mkpụrụ ndụ ihe nketa 6 kwa inch (mkpụrụ ndụ ihe nketa 64, nhazi elu na ala) na nke abụọ na mkpụrụ ndụ ihe nketa 24 kwa inch (mkpụrụ ndụ ihe nketa 15, nhazi elu naanị). Boregine gosikwara na GO:0006952 ruru elu n'otu oge ahụ, mana na obere DEG (11 na 8) na mkpali mmasị. Mandeloop gosiri elu GO abụọ:0006952 na 12 na 48 HPI, ha abụọ nwere mkpụrụ ndụ ihe nketa 12 (nke mbụ nwere mkpụrụ ndụ ihe nketa na-arụ ọrụ, nke abụọ nwere naanị mkpụrụ ndụ ihe nketa na-egbochi), ebe ọnụọgụgụ 22660 na 6 HPI (mkpụrụ ndụ ihe nketa 13) nwere oke karịa nke iwu mmụba. Ọ dị mkpa ịmara na 96.4% nke GO:0006952 DEG na elu ndị a nwere otu ụdị nzaghachi (elu ma ọ bụ ala), na-egosi nnukwu njikọta na nzaghachi nchekwa n'agbanyeghị ọdịiche dị na ọnụọgụgụ mkpụrụ ndụ ihe nketa metụtara. Otu kachasị ukwuu nke usoro ndị metụtara okwu GO:0006952 na-akọwapụta "Assounded Message Protein 22" (SAM22-like), nke bụ protein klaasị 10 nke metụtara pathogenesis (PR-10) na protein core latex. yiri (MLP-like) protein (Fig. 3). Otu abụọ ahụ dị iche na ọdịdị nke ngosipụta na ntụziaka nke nzaghachi. Mkpụrụ ndụ ihe nketa nke na-etinye protein ndị yiri SAM22 gosiri mmụba na-agbanwe agbanwe na mmalite oge (6 ma ọ bụ 12 hpi) ma ha anaghị anabata ya na njedebe nke nnwale ahụ (48 hpi), ebe protein ndị yiri MLP gosipụtara njikọta na 6 hpi. hpi. 83A:476 na Mandelup na 48 hp/in, ihe fọrọ nke nta ka ọ bụrụ isi data ndị ọzọ niile anabataghị. Na mgbakwunye, ọdịiche dị na profaịlụ ngosipụta nke mkpụrụ ndụ ihe nketa protein yiri SAM22 sochiri mgbanwe a hụrụ na nguzogide anthracnose, ebe ahịrị ndị na-eguzogide ọgwụ nwere oge ka ukwuu na-akpali mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a karịa mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị nwere ike ibute ọrịa. Mkpụrụ ndụ ihe nketa ọzọ nke LlR18A/B-dị ka PR-10 gosipụtara ụdị ngosipụta yiri nke ahụ na mkpụrụ ndụ ihe nketa protein dị ka SAM22.
Achọpụtara ihe ndị bụ isi dị na okwu usoro ihe ndị dị ndụ bụ "GO:0006952 Defense Response" na ụkpụrụ ngosipụta nke mkpụrụ ndụ ihe nketa nke alleles Lanr1 na AnMan. Usoro Log2 na-anọchite anya ụkpụrụ log2 (mgbanwe mpịachi) n'etiti ọgwụ a gbanyere mkpọrọgwụ (Colletotrichum lupini, ụdị Col-08, nke e nwetara site na ubi lupine, Wizhenica, Poland, 1999) na osisi njikwa (sham-inoculated) n'otu oge. A tụlere ahịrị lupine ndị a dị warara: 83A:476 (na-eguzogide, na-ebu homozygous Lanr1 allele), Boregine (na-eguzogide, amaghi ihe ndabere mkpụrụ ndụ ihe nketa), Mandelup (na-eguzogide obere, na-ebu homozygous AnMan allele), na Population 22660 (nwere ike ịnweta).
Tinyere nke ahụ, a tụlere profaịlụ ngosipụta nke mkpụrụ ndụ ihe nketa RNA-seq nke Lanr1 (TanjilG_05042) na AnMan (TanjilG_12861) (Foto 3). Mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_05042 gosiri nzaghachi dị mkpa (mmelite) na 83A:476 naanị na oge mbụ (6 hpi), ebe TanjilG_12861 dị mkpa na Mandeloop naanị na oge abụọ: 6 hpi (nhazi ala) na 24 hpi (6 hpi). Na.). ).
Mkpụrụ ndụ ihe nketa kachasị pụta ìhè n'okwu GO:0055114 bụ mkpụrụ ndụ ihe nketa nke na-egosi protein cytochrome P450 na peroxidase (Foto 4). Maka ihe nlele ewepụtara na 83A:476 na 6 HPI, a na-ahụkarị oke ma ọ bụ nke kacha nta log2 (mgbanwe mpịachi) (maka 86.6% nke mkpụrụ ndụ ihe nketa) n'etiti osisi a gbara ọgwụ na ndị na-achịkwa, na-egosipụta oke nzaghachi nke mkpụrụ ndụ ihe nketa a na-enye maka ịgba ọgwụ mgbochi. 83A:476 gosiri GO kachasị mkpa: 0055114 DEG na 6 hpi (mkpụrụ ndụ ihe nketa 503), ebe ahịrị ndị ọzọ dị na 48 hpi (Boregine, mkpụrụ ndụ ihe nketa 31; Mandelup, mkpụrụ ndụ ihe nketa 85; na Population 22660, mkpụrụ ndụ ihe nketa 78)). N'ọtụtụ mkpụrụ ndụ ihe nketa nke ezinụlọ GO:0055114, a hụrụ ụdị nzaghachi abụọ maka ịgba ọgwụ mgbochi (mmelite na mgbochi). Ihe na-adọrọ mmasị bụ na ruo 97.6% nke DEGs achọpụtara maka okwu GO: 0055114 na Mandelupe na 48 hp Ihe ndị a chọpụtara na-egosi na, n'agbanyeghị obere nha (ya bụ, ọnụọgụ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa redox gbanwere, 85 megide 503), ụkpụrụ nke nzaghachi transcriptome nke mandeloup na anthracnose yiri nzaghachi mbụ nke 83A:476. Na Boregine na Population 22660, njikọta a dị ala na 51.6% na 75.6%, n'otu n'otu.
E kpughere ụkpụrụ ngosipụta nke ihe ndị bụ isi nke okwu usoro ihe ndị dị ndụ "GO:0055114 Redox process". Usoro Log2 na-anọchite anya ụkpụrụ log2 (mgbanwe mpịachi) n'etiti ọgwụ a gbanyere mkpọrọgwụ (Colletotrichum lupini, ụdị Col-08, nke e si n'ubi lupine nweta, Wizhenica, Poland, 1999) na osisi njikwa (sham-inoculated) n'otu oge. A tụlere ahịrị lupine ndị a dị warara: 83A:476 (na-eguzogide ọgwụ, na-ebu allele Lanr1 homozygous), Boregine (na-eguzogide ọgwụ, amabeghị ihe ndabere mkpụrụ ndụ ihe nketa), Mandelup (na-eguzogide ọgwụ nke ọma, na-ebu allele AnMan homozygous), na Population 22660 (nwere ike ịnweta ya).
83A:476 Nzaghachi transcriptomic nye ịgba ọgwụ mgbochi site na C. lupini (ụdị Col-08) tinyekwara mmechi nke mkpụrụ ndụ ihe nketa nke akpọrọ GO:0015979 "photosynthesis" na usoro ihe ndị ọzọ metụtara ya (FIG. 5). Ntọala GO:0015979 DEG a nwere mkpụrụ ndụ ihe nketa 105 nke e mechibidoro nke ukwuu na 6 hpi na 83A:476. Na mpaghara a, e mekwara ka mkpụrụ ndụ ihe nketa 37 daa na Mandelup na 48 HPI na 35 n'otu oge ahụ na ọnụọgụgụ 22660, gụnyere 19 DEGs nke a na-ahụkarị na genotypes abụọ ahụ. Enweghị DEGs metụtara okwu GO: 0015979 nke e mere ka ọ rụọ ọrụ nke ọma na njikọta ọ bụla (oge ahịrị x).
E kpughere ụkpụrụ ngosipụta nke ihe ndị bụ isi nke okwu usoro ihe ndị dị ndụ "GO:0015979 Photosynthesis". Usoro Log2 na-anọchite anya ụkpụrụ log2 (mgbanwe mpịachi) n'etiti ọgwụ a gbanyere mkpọrọgwụ (Colletotrichum lupini, ụdị Col-08, nke e si n'ubi lupine nweta, Wizhenica, Poland, 1999) na osisi njikwa (sham-inoculated) n'otu oge. A tụlere ahịrị lupine ndị a dị warara: 83A:476 (na-eguzogide ọgwụ, na-ebu allele Lanr1 homozygous), Boregine (na-eguzogide ọgwụ, amabeghị ihe ndabere mkpụrụ ndụ ihe nketa), Mandelup (na-eguzogide ọgwụ nke ọma, na-ebu allele AnMan homozygous), na Population 22660 (nwere ike ịnweta ya).
Dabere na nsonaazụ nke nyocha ngosipụta dị iche iche ma nwee ike itinye aka na nzaghachi nchekwa megide ero ndị na-akpata ọrịa, ahọpụtara otu mkpụrụ ndụ ihe nketa asaa a maka ịtụle profaịlụ ngosipụta site na PCR oge (Tebụl Mgbakwunye S9).
Mkpụrụ ndụ ihe nketa protein TanjilG_10657 a kpọlitere nke ukwuu n'ahịrị na oge niile a mụrụ ma e jiri ya tụnyere osisi ndị na-achịkwa (dị ka ihe atụ) (Tebụl mgbakwunye S10, S11). Na mgbakwunye, njirimara ngosipụta nke TanjilG_10657 gosiri mmụba na usoro nnwale ahụ maka ahịrị niile. Ọnụọgụgụ mmadụ 22660 gosipụtara mmetụta kachasị elu nke TanjilG_10657 na ịgba ọgwụ mgbochi site na mkpali ugboro 114 na ọkwa ngosipụta kachasị elu (4.4 ± 0.4) na 24 HPI (Fig. 6a). Mkpụrụ ndụ ihe nketa protein PR10 LlR18A TanjilG_27015 gosikwara mkpali n'ofe ahịrị na oge niile, yana mkpa ọnụọgụgụ na ọtụtụ ebe data (Fig. 6b). Dịka TanjilG_10657 si dị, a hụrụ ọkwa ngosipụta kachasị elu nke TanjilG_27015 n'ime ọnụọgụgụ mmadụ 22660 a gbara ọgwụ mgbochi na 24 HPI (19.5 ± 2.4). Mkpụrụ ndụ ihe nketa endochitinase TanjilG_04706 gbagoro nke ukwuu n'ahịrị niile na n'oge niile ma e wezụga Boregine 6 hpi (Foto 6c). E tinyere ya nke ọma n'oge mbụ (6 HPI) na 83A:476 (site na ugboro 10.5) ma mụbaa nke ọma n'ahịrị ndị ọzọ (site na ugboro 6.6-7.5). N'oge nnwale ahụ, ngosipụta nke TanjilG_04706 nọgidere na ọkwa yiri nke ahụ na 83A:476 na Boregine, ebe na Mandelup na Population 22660 ọ mụbara nke ukwuu, na-eru ụkpụrụ dị elu (5.9 ± 1.5 na 6.2 ± 1.5, n'otu n'otu). Mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_23384 nke yiri endoglucan-1,3-β-glucosidase gosiri mmụba dị elu na oge abụọ mbụ (6 na 12 hpi) n'ahịrị niile ma e wezụga ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (Foto 6d). A hụrụ ọkwa ngosipụta kachasị elu nke TanjilG_23384 n'oge nke abụọ (12 hpi) na Mandelup (2.7 ± 0.3) na 83A:476 (1.5 ± 0.1). Na 24 HPI, ngosipụta TanjilG_23384 dị obere na ahịrị niile a mụrụ (site na 0.04 ± 0.009 ruo 0.44 ± 0.12).
Nkọwapụta nke mkpụrụ ndụ ihe nketa ahọpụtara (ag) nke PCR quantitative gosiri. Nọmba 6, 12 na 24 na-anọchite anya awa ole na ole ka agbachara ọgwụ mgbochi. Ejiri mkpụrụ ndụ ihe nketa LanDExH7 na LanTUB6 mee ihe maka nhazi, ejirikwa LanTUB6 mee ihe maka nhazi usoro dị iche iche. Ogwe njehie na-anọchite anya mgbanwe ọkọlọtọ dabere na ihe ndị e ji mee ihe atọ dị ndụ, nke ọ bụla bụ nkezi nke ihe ndị e ji mee ihe atọ dị na teknụzụ. A na-akara ihe dị iche iche dị na ọkwa ngosipụta dị n'etiti ọgwụ a gbara ọgwụ (Colletotrichum lupini, ụdị Col-08, nke e nwetara na 1999 site na ubi lupin na Wierzenica, Poland) na osisi njikwa (mock-inoculated) akara n'elu isi ihe data (*P uru < 0.05, **P uru ≤ 0.01, ***P uru ≤ 0.001). A na-akara ihe dị iche iche dị na ọkwa ngosipụta dị n'etiti ọgwụ a gbara ọgwụ (Colletotrichum lupini, ụdị Col-08, nke e nwetara na 1999 site na ubi lupin na Wierzenica, Poland) na osisi njikwa (mock-inoculated) akara n'elu isi ihe data (*P uru < 0.05, **P uru ≤ 0.01, ***P uru ≤ 0.001). Ndị ọkà mmụta sayensị na ndị ọkà mmụta sayensị na-ahụ maka ọrịa ahụ na-eme ka ahụ dịkwuo mma ( Col. поля люпина в Верженице, Польша) na контрольными 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001). A na-ahụ ọdịiche dị mkpa n'ọkwa ngosipụta n'etiti ọgwụ a gbara ọgwụ (Colletotrichum lupini, ụdị Col-08, nke e nwetara na 1999 site na ubi lupine na Wierzhenice, Poland) na osisi njikwa (sham-inoculated) n'elu ebe data (*P uru < 0.05, **P uru ≤ 0.01, ***P uru ≤ 0.001).接种 (Colletotrichum lupini, Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记开0.05, ** P 值≤ 0.01, *** P 值≤ 0.001).接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Ndị na-eme ihe nkiri na ndị na-eme ihe nkiri na ndị na-eme ihe nkiri na ndị na-eme ihe nkiri na ndị na-eme ihe nkiri (Colletotrichum lupini, Shem Col-08, wdg). люпина в Верженице, Польша, в 1999 г.) na контрольным значение P <0,05, ** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). A hụrụ ọdịiche dị mkpa n'ọkwa ngosipụta n'etiti ọgwụ a gbara ọgwụ (Colletotrichum lupini, ụdị Col-08, nke e nwetara site na ubi lupine na Verzhenice, Poland, na 1999) na osisi njikwa (sham-inoculated) n'elu ebe data (*P uru < 0.05, **P uru ≤ 0.01, ***P uru ≤ 0.001).Ahịrị NLL ndị a tụlere bụ: 83A:476 (na-eguzogide ọgwụ, na-ebu allele Lanr1 homozygous), Mandelup (na-eguzogide ọgwụ nke ọma, na-ebu allele AnMan homozygous), Boregine (na-eguzogide ọgwụ, amaghị ihe sitere na mkpụrụ ndụ ihe nketa) na ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (nwere ike ibute ọrịa).
Mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_05042 nke dị n'ebe Lanr1 gosiri ụdị ngosipụta dị iche na profaịlụ ndị e nwetara site na ọmụmụ RNA-seq (Foto 6e). A hụrụ mmụba dị ukwuu nke mkpụrụ ndụ ihe nketa a na Mandelup na ọnụọgụ mmadụ 22660 (ruo ugboro 39.7 na 11.7, n'otu n'otu), nke butere ọkwa ngosipụta dị elu (ruo 1.4 ± 0.14 na 7.2 ± 1.3, n'otu n'otu). 83A:476 kpughekwara mmụba ụfọdụ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_05042 (ruo ugboro 3.8), agbanyeghị, ọkwa ngosipụta dị n'etiti (0.044 ± 0.002) dị ala karịa nke a hụrụ na Mandelup na ọnụọgụ mmadụ 22660. Nyocha nke qPCR gosiri nnukwu ọdịiche dị n'ọkwa ngosipụta n'etiti genotypes na ụdị ọgwụ mgbochi mock-vaccined (njikwa), na-eru ọdịiche okpukpu 58 n'etiti ọnụọgụgụ 22660 na 83A:476, yana n'etiti ọnụọgụgụ 22660 na 22660. E nwetara ọdịiche okpukpu abụọ n'etiti Boregine na Mandalup.
Mkpụrụ ndụ ihe nketa a na-akpọ TanjilG_12861, ka a na-arụ ọrụ na nzaghachi maka ịgba ọgwụ mgbochi na 83A:476 na Mandelup, ọ nọghị n'otu ebe na ndị mmadụ 22660, e wee belata ya na Boregine (Foto 6f). Ngosipụta nke mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_12861 bụ nke kachasị elu na 83A a gbara ọgwụ mgbochi: 476 (0.14±0.01). Mkpụrụ ndụ ihe nketa protein 17.4 kDa klas I TanjilG_05080 HSP17.4 gosiri ọkwa ngosipụta dị ala na ụdị ọrịa niile a mụrụ na oge (Foto 6g). A hụrụ uru kachasị elu na 24 HPI na ndị mmadụ 22660 (0.14 ± 0.02, mmụba okpukpu asatọ na nzaghachi maka ịgba ọgwụ mgbochi).
Ntụnyere nke profaịlụ ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa (Foto 7) gosiri njikọ dị elu n'etiti TanjilG_10657 na mkpụrụ ndụ ihe nketa anọ ndị ọzọ: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), na TanjilG_04706 (r = 0.79). Nsonaazụ ndị dị otú ahụ nwere ike igosi nhazi nke mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a n'oge nzaghachi nchekwa. Mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_12861 na TanjilG_23384 gosipụtara profaịlụ ngosipụta dị iche iche yana ụkpụrụ njikọ Pearson dị ala (site na 0.08 ruo 0.43 na -0.19 ruo 0.28, n'otu n'otu) ma e jiri ya tụnyere mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị ọzọ.
A chọpụtara njikọ dị n'etiti profaịlụ ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa site na iji PCR quantitative. A tụlere ahịrị lupine dị warara ndị a: 83A:476 (na-eguzogide, na-ebu allele homozygous Lanr1), Mandelup (na-eguzogide nwayọ, na-ebu allele homozygous AnMan), Boregine (na-eguzogide, amaghị ihe ndabere mkpụrụ ndụ ihe nketa), na Population 22660 (nwere ike ịdị ndụ). A gbakọọ isi ihe atọ (awa 6, 12 na 24 mgbe a gbasịrị ọgwụ), gụnyere ịgba ọgwụ mgbochi (Colletotrichum lupini, ụdị Col-08, nke enwetara site na ubi lupine na Wierzhenice, Poland, na 1999) na osisi njikwa (sham-inoculated). Ọnụọgụ ahụ na-egosi uru nke Pearson correlation coefficient.
Dabere na data e nwetara na ike ịnyịnya isii kwa inch, e mere WGCNA na 9981 DEG achọpụtara site na ijikọta osisi ndị a gbanyere ọgwụ na ndị na-achịkwa iji lekwasị anya na nzaghachi nchebe mbụ (Tebụl Mgbakwunye S12). A hụrụ modulu mkpụrụ ndụ ihe nketa iri abụọ na abụọ (ụyọkọ) nwere profaịlụ ngosipụta (nke dị mma ma ọ bụ nke na-adịghị mma) n'etiti genotypes na ụdị nnwale. Ná nkezi, ọkwa ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa na-agbada n'usoro 83A:476 > Mandelup > Boregine > Ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (agbanyeghị, n'ụdị abụọ a, usoro a siri ike na osisi njikwa). Ná nkezi, ọkwa ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa na-agbada n'usoro 83A:476 > Mandelup > Boregine > Ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (agbanyeghị, n'ụdị abụọ a, usoro a siri ike na osisi njikwa). 83A:476 > Mandelup > Boregine > Ọnụ Ọgụgụ 22660 (Ndị mmadụ 2660) была сильнее у контрольных растений). Ná nkezi, ọkwa ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa belatara n'usoro 83A:476 > Mandelup > Boregine > Ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (agbanyeghị, n'ụdị abụọ a, usoro a siri ike na osisi njikwa).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Onu ogugu 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）。平均 而 ， 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> onu ogugu mmadu 22660 的 顺序中 更）                                  . 83A:476 > Mandelup > Boregine > Ọnụ Ọgụgụ 22660 сильнее у контрольных растений). Ná nkezi, ọkwa ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa belatara na usoro 83A:476 > Mandelup > Boregine > Ọnụọgụgụ mmadụ 22660 (agbanyeghị, n'ụdị abụọ a, usoro a siri ike na osisi njikwa).Ọgwụ mgbochi mere ka mmịpụta mkpụrụ ndụ ihe nketa dịkwuo elu, ọkachasị na modulu 18, 19, 14, 6 na 1 (n'usoro mbelata nke mmetụta), iwu adịghị mma (dịka ọmụmaatụ modulu 9 na 20) ma ọ bụ na mmetụta na-anọpụ iche (dịka ọmụmaatụ modulu 11, 22, 8 na 13). Nyocha mmụba okwu GO (Tebụl mgbakwunye S13) kpughere "GO: 0006952 Nzaghachi Nchebe" maka modulu a gbara ọgwụ (18) nwere ọrụ kachasị elu, gụnyere mkpụrụ ndụ ihe nketa nke qPCR nyochara (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 na TanjilG_27015), yana ọtụtụ modulu fotosynthesis a na-egbochi Inoculate (9). Achọpụtara na Modulu 18 concentrator (Foto 8) bụ mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_26536 nke na-agbanwe protein LlR18B dị ka PR-10, a chọpụtakwara na modulu 9 concentrator dị ka mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_28955 nke na-agbanwe protein fotosystem II PsbQ. A hụrụ mkpụrụ ndụ ihe nketa anthracnose na-eguzogide Lanr1, TanjilG_05042, na modulu 22 (Foto 9) ma jikọtara ya na okwu ndị bụ "GO:0044260 Cellular macromolecular metabolic processes" na "GO:0006355 Transcriptional regulatory, DNA templating" nke nwere ebe TanjilG_01212. Mkpụrụ ndụ ihe nketa ahụ na-agbanwe ihe na-akpata nrụgide okpomọkụ A-4a (HSFA4a).
Nnyocha netwọk nke njikọta mkpụrụ ndụ ihe nketa nke modulu nwere okwu usoro ihe ndị dị ndụ a na-egosipụta nke ukwuu "GO: 0006952 Defense Responses". E mere ka njikọ ahụ dị mfe iji gosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa anọ nke qPCR nyochara (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 na TanjilG_27015).
Nnyocha netwọk nke njikọta mkpụrụ ndụ ihe nketa nke modulu nwere okwu usoro ihe ndị dị ndụ a na-egosipụtakarị "GO: 0006355: Nhazi akwụkwọ, nhazi DNA" na ibu mkpụrụ ndụ ihe nketa anthracnose na-eguzogide Lanr1 TanjilG_05042. Emere ka njikọ dị mfe iji kewapụ mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_05042 na mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_01212 dị n'etiti.
Nnyocha iguzogide Anthracnose nke a chịkọtara na Australia gosiri na ọtụtụ n'ime ụdị osisi ndị e wepụtara n'oge mbụ nwere ike ịdị mfe ịnweta; a kọwara Kalya, Coromup na Mandelup dị ka ndị na-eguzogide ọgwụ nke ọma, ebe a kọwara Wonga, Tanjil na 83A:476 dị ka ndị na-eguzogide ọgwụ nke ukwuu26,27,31. nwere otu allele iguzogide ahụ, nke a kpọrọ Lanr1, Coromup na Mandelup nwekwara allele dị iche, nke a kpọrọ AnMan10, 26, 39, ebe Kalya gafere allele dị iche., Lanr2. Nnyocha maka iguzogide anthracnose na Germany mere ka a mata akara Bo7212 na allele nwere onye na-abụghị Lanr1, nke a kpọrọ LanrBo36.
Nnyocha anyị gosiri obere ugboro ole Lanr1 allele dị na germplasm a nwalere. Ihe a chọpụtara kwekọrọ na nsonaazụ nke inyocha germplasm East Europe site na iji akara Anseq3 na Anseq4, nke gosiri na allele Lanr1 dị naanị na ahịrị Belarus abụọ. Nke a na-egosi na mmemme ịzụ nwa mpaghara anaghị eji allele Lanr1 eme ihe nke ukwuu, n'adịghị ka na Australia, ebe ọ bụ otu n'ime alleles dị mkpa maka ịzụ nwa site na akara. Nke a nwere ike ịbụ n'ihi obere ọkwa iguzogide nke allele Lanr1 nyere na ọnọdụ ubi Europe ma e jiri ya tụnyere akụkọ Australia. Na mgbakwunye, ọmụmụ banyere anthracnose na mpaghara mmiri ozuzo dị elu na Australia egosila na nzaghachi iguzogide nke allele Lanr1 na-akwado nwere ike ọ gaghị adị irè na ọnọdụ ihu igwe nke na-akwado uto na mmepe ngwa ngwa nke nje19,42. N'ezie, na ọmụmụ ihe a, a hụkwara ụfọdụ ihe mgbaàmà nke anthracnose na genotypes na-ebu allele Lanr1, na-atụ aro na iguzogide nwere ike ịpụ n'anya n'okpuru ọnọdụ kacha mma maka mmepe nke C. lupini. Tinyere nke ahụ, nkọwa ụgha dị mma nke ọnụnọ nke ihe nrịbama Anseq3 na Anseq4, nke dị ihe dị ka 1 cM site na ebe Lanr1, kwere omume 28, 30, 43.
Nnyocha anyị gosiri na 83A:476, nke bu allele Lanr1, zara C. lupini inoculation site na nnukwu nhazi transcriptome na oge mbụ a tụlere (6 hpi), ebe na Mandelup, na-ebu allele AnMan, a hụrụ nzaghachi transcriptomik ọtụtụ mgbe e mesịrị. (site na 24 ruo 48 hp). Mgbanwe oge ndị a na nzaghachi nchekwa jikọtara ya na ọdịiche dị na mgbaàmà ọrịa, na-egosipụta mkpa ọ dị ịchọpụta nje n'oge maka nzaghachi na-aga nke ọma na iguzogide. Iji bute anụ ahụ osisi, anthrax spores ga-agafe ọtụtụ ọkwa mmepe na elu onye ọbịa, gụnyere germination, nkewa sel, na nhazi nke appressorium. Ihe mgbakwunye bụ usoro ọrịa nke na-arapara n'elu onye ọbịa ma na-eme ka ọ banye n'ime anụ ahụ onye ọbịa. Ya mere, spores nke C. gloeosporioides na ihe ewepụtara pea gosiri nkewa mbụ nke nucleus mgbe nkeji 75-90 nke incubation gasịrị, nhazi nke tube germ mgbe nkeji 90-120 gasịrị, na mgbochi mgbe awa 4 gachara 45. Mango C. gloeosporioides gosiri ihe karịrị 40% mkpụrụ osisi conidial mgbe awa atọ nke ịmịnye ya na ihe dị ka 20% nke ihe ndị na-egbochi ya mgbe awa anọ gachara. Mkpụrụ ndụ CAP20 nke C. gloeosporioides nke metụtara nje ahụ gosiri ọrụ ntụgharị na conidia na-akpụ epiphyte mgbe awa 3.5 gachara na wax avocado elu, yana nnukwu mkpokọta protein CAP20 mgbe awa 4 na nkeji 46 gachara. N'otu aka ahụ, a malitere ọrụ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa melanin biosynthesis na C. trifolii n'oge ịmịnye ya awa 2, wee mepụta appressorium mgbe awa 1 gachara. Ọmụmụ ihe gbasara anụ ahụ akwụkwọ egosila na strawberries a gbara C. acutatum ọgwụ nwere mgbochi mbụ na 8 hpi, ebe tomato a gbara C. coccodes ọgwụ nwere mgbochi mbụ na 4 hpi48,49. nke dabara na oge usoro ọrịa Collettrichum spp.. Mmeghachi omume nchebe ngwa ngwa na 83A:476 na-egosi itinye aka na iguzogide osisi na mkpụrụ ndụ ihe nketa nke effector-triggered immunity (ETI) n'ahịrị a, ebe nzaghachi oge Mandelup na-akwado echiche mgbochi nje nke micro-associated molecular pattern-triggered immunity (MTI) 50. Mmeghachi omume mbụ na 83A: 476 na Mandelup. Njikọ akụkụ dị n'etiti mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a na-achịkwa elu ma ọ bụ ndị a na-ebelata na nzaghachi oge na-akwadokwa echiche a, ebe a na-ewerekarị ETI dị ka nzaghachi MTI ngwa ngwa ma dịkwuo mma nke na-ejedebe na ọnwụ mkpụrụ ndụ a haziri ahazi na ebe ọrịa ahụ, nke a maara dị ka ihe mberede anaphylactic 51,52.
Ọtụtụ n'ime mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a na-akpọ "Nzaghachi Nchebe" bụ njikọ iri na otu nke ozi ibu ọnụ 22 protein (yiri SAM22) nke nrụgide kpatara na protein latex asaa (MLPs). -dị ka protein 31, 34, 43 na 423 gosiri myirịta usoro. Mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị yiri SAM22 gosipụtara mkpali dị ukwuu nke dịtere aka, na-egosi mmụba nke iguzogide anthracnose (83A:476 na Boregine). Agbanyeghị, e belatara mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị yiri MLP naanị n'ahịrị ndị nwere allele iguzogide candidate (83A:476/Lanr1 na 6 hpi na Mandelup/AnMan na 24 hpi). E kwesịrị ịmara na ụdị SAM22 niile a chọpụtara sitere na otu mkpụrụ ndụ ihe nketa nke dị ihe dị ka 105 kb, ebe mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị dị ka MLP sitere na mpaghara dị iche iche nke mkpụrụ ndụ ihe nketa. A hụkwara mmegharị nke mkpụrụ ndụ ihe nketa dị ka SAM22 n'ọmụmụ ihe anyị gara aga gbasara iguzogide NLL na ọgwụ Diaportetoxica, na-egosi na ha na-etinye aka na akụkụ kwụ ọtọ nke nzaghachi nchebe. Akụkọ gbasara mmeghachi omume dị mma nke mkpụrụ ndụ ihe nketa dị ka SAM22 na mmerụ ahụ ma ọ bụ ọgwụgwọ site na salicylic acid, ihe na-akpali fungal, ma ọ bụ hydrogen peroxide na-akwado nkwubi okwu a.
A gosila na mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị dị ka MLP na-aza ọtụtụ nrụgide abiotic na biotic, gụnyere ọrịa fungal bacterial, virus na pathogenic na ọtụtụ ụdị osisi55. Ntuziaka maka mmeghachi omume na mmekọrịta ụfọdụ dị n'etiti osisi na nje bacteria sitere na mmụba siri ike (ya bụ, n'oge a na-etinye owu na Verticillium dahliae) ruo na mbelata nke ukwuu (ya bụ, mgbe ọrịa apụl gasịrị na Alternaria spp.)56,57. A hụla mbelata dị ukwuu nke mkpụrụ ndụ ihe nketa 423 dị ka MLP n'oge nchebe avocado megide ọrịa F. niger na n'oge ọrịa nke osisi apụl Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola na Alternaria alternata bụ ụdị ọrịa apụl58,59. Na mgbakwunye, apple calli na-egosipụta oke oke mkpụrụ ndụ ihe nketa 423 dị ka MLP nwere obere ngosipụta nke mkpụrụ ndụ ihe nketa metụtara iguzogide ma nwee ike ibute ọrịa fungal59. Mgbe Fusarium oxysporum f gasịrị, a na-egbochi mkpụrụ ndụ ihe nketa 423 dị ka MLP na germ bean nkịtị na-eguzogide. cn. Ọrịa agwa 60.
Ndị ọzọ so n'ezinụlọ PR-10 achọpụtara n'ọmụmụ ihe anyị mere na RNA-seq bụ mkpụrụ ndụ ihe nketa LlR18A na LlR18B dịka nzaghachi maka mmụba, yana mkpụrụ ndụ ihe nketa (mkpụrụ ndụ ihe nketa 1) ma ọ bụ mkpụrụ ndụ ihe nketa 3 nke a na-achịkwaghị achịkwa maka protein nnyefe lipid DIR1. . Na mgbakwunye, WGCNA na-egosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa LlR18B dị ka ebe etiti na modulu a, nke nwere ike ịnweta ọgwụ mgbochi ma na-ebu ọtụtụ mkpụrụ ndụ ihe nketa nzaghachi nchebe. A kpaliri mkpụrụ ndụ ihe nketa LlR18A na LlR18B na akwụkwọ lupine odo na nzaghachi nye nje bacteria na-akpata ọrịa, yana na isi NLL mgbe a gbasịrị D. toxica, ebe njikọ osikapa nke mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a, RSOsPR10, butere ngwa ngwa site na ọrịa fungal nke a na-eche na ọ metụtara ụzọ mgbaama jasmonic acid53,61, 62. Mkpụrụ ndụ ihe nketa DIR1 na-akọwapụta protein njem lipid na-abụghị nke a kapịrị ọnụ nke achọrọ maka mmalite nke iguzogide sistemu enwetara (SAR). Site na mmepe nke mmeghachi omume nchebe, a na-ebufe protein DIR1 site na isi ihe nke ọrịa site na phloem iji kpalite SAR na akụkụ ahụ ndị dị anya. N'ụzọ na-akpali mmasị, mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_02313 DIR1 malitere nke ukwuu na oge mbụ na ahịrị 84A:476 na Population 22660, mana iguzogide anthracnose malitere nke ọma naanị na ahịrị 84A:476. Nke a nwere ike igosi obere ọrụ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa DIR1 na NLL, ebe ọ bụ na homologues atọ fọdụrụ zara naanị na inoculation naanị na ahịrị 83A:476 na 6 hpi, a na-eduzi nzaghachi a n'ala.
N'ọmụmụ ihe anyị, ihe ndị a na-ahụkarị dịka usoro ihe ndị dị ndụ si dị nke a kpọrọ "GO:0055114 Redox process" bụ protein cytochrome P450, peroxidase, linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase, na 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase. Na mgbakwunye, WGCNA anyị na-akọwa njikọ HSFA4a dị ka modulu ndị na-ebu ihe dịka onye na-achọ mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1 TanjilG_05042. HSFA4a bụ akụkụ nke iwu redox-dependent nke ntụgharị nuklia na osisi.
Protein Cytochrome P450 bụ oxidoreductases nke na-akwalite mmeghachi omume hydroxylation NADPH na/ma ọ bụ O2 dabere na metabolism nke mbụ na nke abụọ, gụnyere metabolism nke xenobiotics, yana homonụ, fatty acids, sterols, ihe mejupụtara mgbidi sel, biopolymers, na biosynthesis nke ogige nchebe 69. Na nnyocha anyị, mgbanwe dị na ọrụ cytochrome P450 osisi belatara site na -10.6 log2 (mgbanwe mpịachi) ruo 5.7 n'ihi ọtụtụ ọnụọgụgụ homologues gbanwere (37) na ọdịiche dị na usoro nzaghachi dị n'etiti mkpụrụ ndụ ihe nketa akọwapụtara, na-egosipụta mgbanwe elu. . Iji naanị data RNA-seq iji kọwaa ọrụ bayoloji nke mkpụrụ ndụ ihe nketa NLL na nnukwu ezinụlọ protein dị otú ahụ ga-abụ echiche dị ukwuu. Agbanyeghị, ọ dị mkpa ịmara na ụfọdụ mkpụrụ ndụ ihe nketa cytochrome P450 na-ejikọta ya na mmụba iguzogide fungi ma ọ bụ nje bacteria na-akpata ọrịa, gụnyere ntinye aka na mmeghachi omume nfụkasị69,70,71.
Klas nke Atọ peroxidases bụ enzymes osisi na-arụ ọrụ nke ukwuu, nke na-etinye aka na ọtụtụ usoro metabolic n'oge uto na mmepe nke osisi, yana nzaghachi maka nrụgide gburugburu ebe obibi dịka nnu, ụkọ mmiri ozuzo, oke ọkụ dị elu, na mwakpo nje72. Peroxidases na-etinye aka na mmekọrịta nke ọtụtụ ụdị osisi na Anthracis, gụnyere Stylosanthes humilis na C. gloeosporioides, Lens culinaris na C. truncatum, Phaseolus vulgaris na C. lindemuthianum, Cucumis sativus na C. lagenarium73,74,75,76. Mmeghachi omume ahụ dị ngwa ngwa, mgbe ụfọdụ ọbụna na 4 HPI, tupu ero ahụ abanye n'anụ ahụ osisi73. Mkpụrụ ndụ peroxidase mekwara ka D. toxica NLL gbaa ọgwụ mgbochi. Na mgbakwunye na ọrụ ha na-arụ iji chịkwaa mgbawa oxidative ma ọ bụ wepụ nrụgide oxidative, peroxidases nwere ike igbochi uto nje site na ịmepụta ihe mgbochi anụ ahụ dabere na nkwado mgbidi sel n'oge lignification, subunit ma ọ bụ njikọta nke ogige ụfọdụ. A pụrụ ịkọwa ọrụ a na silico site na mkpụrụ ndụ ihe nketa TanjilG_03329 nke na-akọwapụta anion peroxidase nke na-emepụta lignin nke e mere ka ọ dị elu nke ukwuu na ọmụmụ ihe anyị na ahịrị 83A:476 na 6 HPI, mana ọ bụghị na ụdị ndị ọzọ na oge ndị na-anaghị azaghachi.
9S-/13S-lipoxygenase nke linoleic acid bụ nzọụkwụ mbụ na ụzọ oxidative nke biosynthesis lipid78. Ngwaahịa nke ụzọ a nwere ọtụtụ ọrụ na nchekwa osisi, gụnyere ime ka mgbidi sel sie ike site na ịmepụta callose na pectin deposits, na ịchịkwa nrụgide oxidative site na mmepụta nke ụdị oxygen reactive79,80,81,82,83. N'ọmụmụ ihe a, a gbanwere ngosipụta nke linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase na ụdị niile, mana na ndị nwere ike 22660, mmụba dị elu karịa n'oge dị iche iche, ebe na ụdị ndị na-ebu Lanr1 na allele AnMan na-eguzogide, ọ na-emesi ike mmụba nke oyi akwa oxylipin na mmeghachi omume anthrax nchebe n'etiti ụdị mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a.
E tinyere lupine n'ime otu ihe ahụ (mkpụrụ ndụ ihe nketa 9) ma ọ bụ belata (mkpụrụ ndụ ihe nketa 2) mgbe e tinyere ya n'ime mmiri ọgwụ. E wezụga ihe abụọ, mmeghachi omume ndị a niile mere na 6 hp. na 83A:476. Mmeghachi omume enzymatic nke protein ACO na-akwado bụ nzọụkwụ na-egbochi ọnụego na mmepụta ethylene ma ya mere a na-achịkwa ya nke ọma84. Ethylene bụ homonụ osisi nke na-arụ ọrụ dị iche iche n'ịchịkwa mmepe osisi na nzaghachi nye ọnọdụ nrụgide abiotic na biotic. Mmelite nke ntụgharị ACO na ịgbalite ụzọ mgbaama ethylene na-etinye aka na ịbawanye iguzogide osikapa na hemibiotrophic fungus oryzae oryzae site na ịchịkwa mmepụta nke ụdị oxygen reactive na phytoalexins. Usoro ọrịa akwụkwọ yiri nke a hụrụ n'etiti M. oryzae na C. lupini88,89, megide ndabere nke mmụba dị ukwuu nke ACO homologues na ahịrị 83A:476 akọpụtara na ọmụmụ ihe a, na-agbanwe ohere nke inye NLL anthracnose Ethylene ihe mgbaàmà dị mkpa na ụzọ molekul.
N'ọmụmụ ihe a, a hụrụ nnukwu mwepu nke ọtụtụ mkpụrụ ndụ ihe nketa metụtara photosynthesis na 6 hpi na 83A:476 na 48 hpi na Mandeloop na ọnụọgụ mmadụ 22660. Oke na ọganihu nke mgbanwe ndị a kwekọrọ na ọkwa ahụ. A hụrụ nguzogide anthracnose na nnwale a. N'oge na-adịbeghị anya, akọpụtala ike na mmalite nke mwepu nke ihe ndekọ metụtara photosynthesis na ọtụtụ ụdị mmekọrịta osisi na nje, gụnyere nje bacteria na fungi. Ngwa ngwa (site na 2 HPI na ụfọdụ mmekọrịta) na mwepu zuru ụwa ọnụ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa jikọtara ya na photosynthesis na nzaghachi nye ọrịa nwere ike ịkpalite mgbochi osisi dabere na ntinye nke ụdị oxygen reactive na mmekọrịta ha na ụzọ salicylic acid iji mee ka mmeghachi omume nfụkasị ahụ dịgide 90,94.
Na mmechi, usoro nzaghachi nchekwa akwadoro maka usoro kachasị sie ike (83A:476) gụnyere nnabata ngwa ngwa nke nje site na mkpụrụ ndụ ihe nketa R (ikekwe TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) na salicylic acid na ethylene signaling nke mmeghachi omume nfụkasị ahụ, wee guzobe ọrụ SAR dị ogologo. A na-akwado protein DIR-1. Ọ dị mkpa ịmara na oge biotrophic maka ọrịa C. lupini dị mkpụmkpụ (ihe dị ka ụbọchị 2), nke na-esochi uto necrotic95. Mgbanwe dị n'etiti usoro ndị a nwere ike ijikọ ya na necrosis na ngosipụta nke protein ethylene-inducible nke na-arụ ọrụ dị ka ihe na-akpali mmeghachi omume hypersensitivity na osisi ndị ọbịa. Ya mere, oge maka ijide C. lupini nke ọma na ọkwa biotrophic dị obere. Nhazigharị nke mkpụrụ ndụ ihe nketa jikọtara ya na redox na photosynthesis a hụrụ na 83A:476 na 6 hpi kwekọrọ na ọganihu nke hyphae fungal ma na-ekwupụta mmepe nke nzaghachi nchebe na-aga nke ọma na ọkwa biotrophic. Nzaghachi nke Mandelup na ndị bi na 22660 nwere ike ịnwe oge dị ukwuu iji jide ero ahụ tupu ọ gbanwee gaa na uto necrotic, agbanyeghị, Mandelup nwere ike ịdị irè karịa ndị bi na 22660 n'ihi na nhazi ngwa ngwa nke protein PR-10 na-akwalite iguzogide kwụ ọtọ.
ETI, nke mkpụrụ ndụ ihe nketa R nke nwere ike ịdị, yiri ka ọ bụ usoro a na-ahụkarị maka iguzogide agwa megide anthracnose. Ya mere, na ụdị legume Medicago truncatula, iguzogide anthracnose na-esite na mkpụrụ ndụ ihe nketa RCT1, onye otu klas mkpụrụ ndụ ihe nketa R osisi TIR-NBS-LRR97. Mkpụrụ ndụ ihe nketa a na-enyekwa iguzogide anthracnose sara mbara na alfalfa mgbe a na-ebufe ya na osisi ndị nwere ike ibute ya. Na mkpụrụ ndụ ihe nketa nkịtị (P. vulgaris), achọpụtala ihe karịrị mkpụrụ ndụ ihe nketa iguzogide anthracnose iri abụọ na iri na abụọ ruo taa. A na-ahụ ụfọdụ n'ime mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị a na mpaghara na-enweghị mkpụrụ ndụ ihe nketa R ọ bụla nwere ike ịdị, mana ọtụtụ ndị ọzọ dị n'akụkụ kromozom ndị nwere mkpụrụ ndụ ihe nketa NBS-LRR, gụnyere TIR-NBS-LRRs99. Ọmụmụ SSR nke nwere mkpụrụ ndụ ihe nketa dum gosikwara njikọ nke mkpụrụ ndụ ihe nketa NBS-LRR na iguzogide anthracnose na mkpụrụ ndụ ihe nketa nkịtị. A hụkwara mkpụrụ ndụ ihe nketa R nke dị na mpaghara genomic nke nwere ebe mgbochi anthracnose dị ukwuu na lupine ọcha 101.
Ọrụ anyị na-egosi na mmeghachi omume nguzogide ozugbo, nke a na-arụ ọrụ na mbido ọrịa osisi (ọkacha mma ma ọ bụrụ na ọ gaghị agafe 12 hpi), na-echebe lupine dị warara site na anthracnose nke ero nje Collelotrichum lupini kpatara. Site na iji usoro mmepụta dị elu, anyị gosipụtara profaịlụ ngosipụta dị iche iche nke mkpụrụ ndụ ihe nketa nguzogide anthracnose na osisi NLL nke mkpụrụ ndụ ihe nketa nguzogide Lanr1 na AnMan na-akwado. Nchebe na-aga nke ọma gụnyere ịkpachara anya na imepụta mkpụrụ ndụ ihe nketa maka protein ndị metụtara redox, photosynthesis, na pathogenesis n'ime awa ole na ole nke mbụ osisi ahụ zutere nje. Mmeghachi omume nchebe ndị yiri ya, mana egbu oge n'oge, adịghị arụ ọrụ nke ọma n'ichebe osisi site na ọrịa. Nguzogide Anthrax nke mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1 na-akwado yiri nzaghachi ngwa ngwa nke mkpụrụ ndụ ihe nketa R (ngwọta nke na-akpali mmetụta), ebe mkpụrụ ndụ ihe nketa AnMan nwere ike inye nzaghachi kwụ ọtọ (ngwọta nke usoro molekul metụtara microbe na-akpali), na-enye ọkwa dị ala nke nkwado.
Ahịrị NLL 215 e ji enyocha ihe nrịbama anthracnose nwere ụdị osisi 74, ahịrị 60 e nwetara site na ịgafe ma ọ bụ ịmụ nwa, mutants 5, na germplasms ọhịa ma ọ bụ nke mbụ 76. Ahịrị ndị ahụ sitere na mba 17, ọkachasị site na Poland (58), Spain (47), Germany (27), Australia (26), Russia (19), Belarus (7), Italy (5) na ahịrị ndị ọzọ. Nhazi ahụ gụnyekwara ahịrị ndị na-eguzogide ntụaka: 83A:476, Tanjil, Wonga na-ebu allele Lanr1, na Mandelup na-ebu allele AnMan. E nwetara ahịrị ndị ahụ site na European Lupine Genetic Resource Database nke Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Poland na-elekọta (Mgbakwunye Tebụl S1).
A kụrụ osisi n'okpuru ọnọdụ a na-achịkwa (fotoperiod awa 16, okpomọkụ 25°C n'ehihie na 18°C ​​n'abalị). E nyochachara ihe abụọ dị ndụ. E kewapụrụ DNA site na akwụkwọ ndị dị izu atọ site na iji DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) dịka usoro ahụ si dị. E jiri usoro spectrophotometric nyochaa ịdị mma na njupụta nke DNA dịpụrụ adịpụ (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). E nyochachara ihe nrịbama AnManM1 nke na-egosi mkpụrụ ndụ ihe nketa iguzogide anthracnose AnMan (nke sitere na cv. Mandelup) na ihe nrịbama Anseq3 na Anseq4 nke dị n'akụkụ mkpụrụ ndụ ihe nketa Lanr1 (nke sitere na cv. Tanjil) 11,26,28. E nyere Homozygotes maka allele na-eguzogide dị ka "1″, nke nwere ike ịdị mfe - dị ka "0″, na heterozygotes - dị ka 0.5.
Dabere na nsonaazụ nke nyocha maka ihe nrịbama AnManM1, AnSeq3 na AnSeq4 na nnweta mkpụrụ maka nnwale ikpeazụ, ahọpụtara ahịrị NLL 50 maka phenotyping iguzogide anthracnose. Emere nyocha ahụ n'ime griin haus nke kọmputa na-achịkwa ya na oge foto nke awa 14 yana oke okpomọkụ nke 22°C n'ehihie na 19°C n'abalị. A na-akpụcha mkpụrụ (na-ebipụ mkpuchi mkpụrụ n'akụkụ nke ọzọ nke embrayo na agụba dị nkọ) tupu a kụọ ya iji gbochie mkpụrụ ịnọ n'ụra n'ihi na mkpuchi mkpụrụ siri ike ma hụ na ọ na-eto otu nha. A kụrụ osisi n'ime ite (11 × 11 × 21 cm) nwere ala na-adịghị ọcha (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland). E jiri ụdị Colletotrichum lupini Col-08 mee ọgwụ mgbochi, nke a kụrụ n'afọ 1999 site na mgbọrọgwụ osisi lupine dị warara nke a kụrụ n'ubi dị na Verzhenitsa, Greater Poland (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E). Nweta mpaghara. E tinyere ihe ndị a na SNA na okpomọkụ dị 20°C n'okpuru ìhè ojii ruo ụbọchị 21 iji kpalite sporulation. Izu anọ ka a kụchara mkpụrụ, mgbe osisi ndị ahụ ruru ọkwa akwụkwọ 4-6, a gbara ọgwụ mgbochi site n'ịgba ọgwụ mgbochi conidia na mkpokọta 0.5 x 106 conidia kwa ml. Mgbe a gbachara ọgwụ mgbochi, a na-edebe osisi ndị ahụ n'ọchịchịrị ruo awa 24 na iru mmiri dị ihe dị ka 98% na okpomọkụ nke 25°C iji mee ka conidia na usoro ọrịa ahụ dị mfe. E wee kụọ osisi ndị ahụ n'okpuru oge foto nke awa iri na anọ na 22°C ụbọchị/19°C n'abalị na iru mmiri 70%. E mere akara ọrịa ahụ ụbọchị iri abụọ na abụọ mgbe a gbasịrị ya ọgwụ ma malite na 0 (ihe na-alụso ọrịa ọgụ) ruo 9 (ihe na-esi ike nke ukwuu) dabere na ọnụnọ ma ọ bụ enweghị mmerụ ahụ necrotic na osisi na akwụkwọ. Na mgbakwunye, mgbe a gbasịrị akara, a tụrụ ibu nke osisi ndị ahụ. A gbakọrọ mmekọrịta dị n'etiti genotypes akara na phenotypes ọrịa dị ka njikọ isi abụọ (enweghị ihe nrịbama heterozygous na set nke ahịrị maka nyocha nke phenotype iguzogide anthracnose).