សូមអរគុណសម្រាប់ការទស្សនា Nature.com ។ អ្នកកំពុងប្រើកំណែកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលមានការគាំទ្រ CSS មានកំណត់។ សម្រាប់បទពិសោធន៍ដ៏ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលបានអាប់ដេត (ឬបិទមុខងារភាពឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ លើសពីនេះទៀត ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្រជាបន្តបន្ទាប់ យើងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
បង្ហាញរង្វង់នៃស្លាយបីក្នុងពេលតែមួយ។ ប្រើប៊ូតុងមុន និងបន្ទាប់ ដើម្បីផ្លាស់ទីតាមស្លាយបីក្នុងពេលតែមួយ ឬប្រើប៊ូតុងគ្រាប់រំកិលនៅចុងបញ្ចប់ ដើម្បីផ្លាស់ទីតាមស្លាយបីក្នុងពេលតែមួយ។
ភាគល្អិត​ស៊ីលីកា​ដែល​មាន​រន្ធ​ញើស​ត្រូវ​បាន​រៀបចំ​ដោយ​វិធីសាស្ត្រ sol-gel ដោយ​មាន​ការ​កែប្រែ​ខ្លះ​ដើម្បី​ទទួល​បាន​ភាគល្អិត​រន្ធ​ញើស​ធំទូលាយ។ ភាគល្អិតទាំងនេះត្រូវបានចម្លងដោយ N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) និង styrene តាមរយៈការផ្ទេរខ្សែសង្វាក់បញ្ច្រាស (RAFT) polymerization ដើម្បីផលិត N-phenylmaleimide intercalated polyamides ។ Styrene (PMP) ដំណាក់កាលស្ថានី។ សសរដែកអ៊ីណុកតូចចង្អៀត (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 × 1.8 មីលីម៉ែត្រ) ត្រូវបានខ្ចប់ដោយខ្ចប់ខ្ចប់។ ដំណើរការ chromatographic នៃជួរឈរ PMP ត្រូវបានវាយតម្លៃដើម្បីបំបែកល្បាយនៃ peptides សំយោគដែលមាន peptides ប្រាំ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) និង tryptic hydrolyzate អាល់ប៊ុយមីនរបស់មនុស្ស។ នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការ elution ដ៏ល្អប្រសើរ ចំនួនទ្រឹស្តីនៃចានជាមួយនឹងល្បាយនៃ peptides ឈានដល់ 280,000 plates/sq.m. ការប្រៀបធៀបការអនុវត្តការបំបែកនៃជួរឈរដែលបានអភិវឌ្ឍជាមួយនឹងជួរឈរពាណិជ្ជកម្ម Ascentis Express RP-Amide វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថាប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃជួរឈរ PMP គឺប្រសើរជាងជួរឈរពាណិជ្ជកម្មទាក់ទងនឹងប្រសិទ្ធភាពនិងដំណោះស្រាយនៃការបំបែក។
ឧស្សាហកម្មជីវឱសថបានក្លាយជាទីផ្សារពិភពលោកដែលកំពុងពង្រីកជាមួយនឹងការកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងនៃចំណែកទីផ្សារក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ។ ជាមួយនឹងការរីកចម្រើនយ៉ាងខ្លាំងនៃឧស្សាហកម្មជីវឱសថ 1,2,3 មានតម្រូវការដ៏អស្ចារ្យសម្រាប់ការវិភាគ peptide និងប្រូតេអ៊ីន។ បន្ថែមពីលើ peptide គោលដៅ ភាពមិនបរិសុទ្ធផ្សេងៗត្រូវបានបង្កើតឡើងកំឡុងពេលសំយោគ peptide ដូច្នេះការបន្សុត chromatographic គឺត្រូវបានទាមទារដើម្បីទទួលបានភាពបរិសុទ្ធដែលចង់បាននៃ peptide ។ ការវិភាគ និងការកំណត់លក្ខណៈនៃប្រូតេអ៊ីននៅក្នុងអង្គធាតុរាវ ជាលិកា និងកោសិកាគឺជាកិច្ចការដ៏លំបាកបំផុតមួយ ដោយសារចំនួនដ៏ច្រើននៃប្រភេទសត្វដែលអាចរកឃើញមានសក្តានុពលនៅក្នុងគំរូតែមួយ។ ទោះបីជាម៉ាស់ spectrometry គឺជាឧបករណ៍ដ៏មានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់តម្រៀប peptides និងប្រូតេអ៊ីនក៏ដោយ ប្រសិនបើគំរូបែបនេះត្រូវបានណែនាំដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងម៉ាស់ spectrometer ការបំបែកនឹងមិនពេញចិត្តទេ។ បញ្ហានេះអាចត្រូវបានដោះស្រាយដោយការអនុវត្តរាវ chromatography (LC) មុនពេលការវិភាគ MS ដែលនឹងកាត់បន្ថយបរិមាណនៃការវិភាគដែលចូលទៅក្នុងម៉ាស់ spectrometer នៅពេលវេលាដែលបានផ្តល់ឱ្យ 4,5,6 ។ លើសពីនេះ អ្នកវិភាគអាចប្រមូលផ្តុំនៅក្នុងតំបន់តូចចង្អៀតមួយកំឡុងពេលបំបែកដំណាក់កាលរាវ ដោយហេតុនេះការប្រមូលផ្តុំការវិភាគទាំងនេះ និងបង្កើនភាពប្រែប្រួលនៃការរកឃើញ MS ។ Liquid chromatography (LC) បានរីកចម្រើនយ៉ាងខ្លាំងក្នុងរយៈពេលមួយទស្សវត្សរ៍កន្លងមកនេះ ហើយបានក្លាយទៅជាវិធីសាស្រ្តដែលត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយសម្រាប់ការវិភាគ proteomic7,8,9,10។
Reverse-phase-chromatography liquid chromatography (RP-LC) ត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយដើម្បីបន្សុទ្ធ និងបំបែកល្បាយនៃ peptides ដោយប្រើ octadecyl-modified silica (ODS) ជាដំណាក់កាលស្ថានី 11,12,13។ ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយដោយសារតែរចនាសម្ព័ន្ធស្មុគស្មាញនិងធម្មជាតិ amphoteric 14,15 RP ដំណាក់កាលស្ថានីមិនអាចផ្តល់នូវការបំបែកដ៏គួរឱ្យពេញចិត្តនៃ peptides និងប្រូតេអ៊ីន។ ដូច្នេះការវិភាគនៃ peptides និងប្រូតេអ៊ីនជាមួយនឹងបំណែកប៉ូលនិងមិនប៉ូលតម្រូវឱ្យមានដំណាក់កាលស្ថានីដែលបានរចនាឡើងជាពិសេសដើម្បីធ្វើអន្តរកម្មនិងរក្សាទុកការវិភាគទាំងនេះ 16 ។ chromatography ចម្រុះ ដែលផ្តល់នូវអន្តរកម្មពហុមុខងារ អាចជាជម្រើសមួយសម្រាប់ RP-LC សម្រាប់បំបែក peptides ប្រូតេអ៊ីន និងល្បាយស្មុគស្មាញផ្សេងទៀត។ ដំណាក់កាលស្ថានីចម្រុះជាច្រើនត្រូវបានរៀបចំ ហើយជួរឈរដែលបំពេញដោយដំណាក់កាលស្ថានីទាំងនេះត្រូវបានប្រើដើម្បីបំបែក peptides និងប្រូតេអ៊ីន17,18,19,20,21។ ដោយសារតែវត្តមាននៃក្រុមប៉ូលនិងមិនប៉ូល ដំណាក់កាលស្ថានីចម្រុះ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) គឺសមរម្យសម្រាប់ការបំបែក peptides និងប្រូតេអ៊ីន 22,23,24,25,26,27,28។ , polar intercalated ដំណាក់កាលស្ថានី ជាមួយនឹងក្រុមប៉ូលដែលភ្ជាប់ជាមួយ covalently បង្ហាញពីសមត្ថភាពបំបែកដ៏ល្អ និងការជ្រើសរើសតែមួយគត់សម្រាប់ការវិភាគប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល ពីព្រោះការបំបែកអាស្រ័យលើអន្តរកម្មរវាងអ្នកវិភាគ និងដំណាក់កាលស្ថានី អន្តរកម្មពហុមុខងារ 29,30,31,32។ ថ្មីៗនេះ Zhang et al ។ 30 ទទួលបាន behenyl-terminated phases of polyamines និងបំបែកដោយជោគជ័យនូវ hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens និងការវិភាគមួយចំនួនផ្សេងទៀត។ វត្ថុធាតុស្ថានីដែលបានបង្កប់ប៉ូលមានទាំងក្រុមប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល ដូច្នេះវាអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីបំបែក peptides និងប្រូតេអ៊ីនទៅជាផ្នែក hydrophobic និង hydrophilic ។ ជួរឈរក្នុងបន្ទាត់រាងប៉ូល (ឧ. ជួរឈរ C18 ជាមួយ amide inline) អាចរកបានក្រោមឈ្មោះពាណិជ្ជកម្ម Ascentis Express RP-Amide columns ប៉ុន្តែជួរឈរទាំងនេះត្រូវបានប្រើសម្រាប់តែការវិភាគនៃ amine 33 ប៉ុណ្ណោះ។
នៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្ន ដំណាក់កាលស្ថានីបង្កប់ប៉ូល (N-phenylmaleimide, បង្កប់ polystyrene) ត្រូវបានរៀបចំ និងវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែក peptide និងការបំបែក HSA tryptic ។ យុទ្ធសាស្ត្រខាងក្រោមត្រូវបានប្រើដើម្បីរៀបចំដំណាក់កាលស្ថានី។ ភាគល្អិត​ស៊ីលីកា​ដែល​ផុយស្រួយ​ត្រូវ​បាន​រៀបចំ​តាម​នីតិវិធី​ដែល​បាន​ពិពណ៌នា​នៅ​ក្នុង​ការ​បោះពុម្ព​មុន​របស់​យើង​ដោយ​មាន​ការ​ផ្លាស់​ប្តូរ​ខ្លះ​ក្នុង​គ្រោងការណ៍​រៀបចំ 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39។ សមាមាត្រ​នៃ​អ៊ុយ ប៉ូលីអេទីឡែន glycol (PEG) TMOS និង​អាស៊ីត aqueous-acetic ត្រូវ​បាន​កែ​សម្រួល​ដើម្បី​ទទួល​បាន​ភាគល្អិត​ធំ។ ទីពីរ សារធាតុ phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ligand ថ្មីត្រូវបានសំយោគ ហើយភាគល្អិតស៊ីលីកាដេរីវេរបស់វាត្រូវបានប្រើប្រាស់ដើម្បីរៀបចំដំណាក់កាលស្ថានីដែលបានបង្កប់ប៉ូល ដំណាក់កាលស្ថានីដែលទទួលបានត្រូវបានខ្ចប់ចូលទៅក្នុងជួរឈរដែកអ៊ីណុក (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 × 1.8 មម) យោងទៅតាមគ្រោងការណ៍វេចខ្ចប់ដែលប្រសើរឡើង។ ការវេចខ្ចប់នៃជួរឈរត្រូវបានជួយដោយការរំញ័រមេកានិចដើម្បីធានាឱ្យមានស្រទាប់ឯកសណ្ឋាននៅក្នុងជួរឈរ។ ជួរឈរដែលបានវេចខ្ចប់ត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកនៃល្បាយនៃ peptides ដែលមាន peptides ប្រាំ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide) ។ និង tryptic hydrolysates នៃ albumin សេរ៉ូមមនុស្ស (HSA) ។ វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថាល្បាយ peptide និង HSA tryptic digest បំបែកចេញជាមួយនឹងគុណភាពបង្ហាញ និងប្រសិទ្ធភាពល្អ។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃជួរឈរ PMP ត្រូវបានប្រៀបធៀបទៅនឹងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide ។ វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថា peptides និងប្រូតេអ៊ីនមានគុណភាពបង្ហាញល្អនិងប្រសិទ្ធភាពបំបែកខ្ពស់នៅលើជួរឈរ PMP ហើយប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃជួរឈរ PMP គឺខ្ពស់ជាងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide ។
PEG (polyethylene glycol), អ៊ុយ, អាស៊ីតអាសេទិក, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, អាល់ប៊ុមសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HSA), អាម៉ូញ៉ូមក្លរីត, អ៊ុយ, ហេកមេទីលមេតាក្លូអ៊ីលឌីស៊ីឡាហ្សាន (HMDS), មេតាក្លូអ៊ីល អេមអេមប៉ូ ក្លរីន អ៊ីដ្រូអ៊ីត-ប៊ីនស៊ីល-អ៊ីដ្រូអ៊ីត ប៊ីនស៊ីល-អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន អ៊ីដ្រូសែន peroxide (BPO), acetonitrile (ACN) សម្រាប់ HPLC, មេតាណុល, 2-propanol និង acetone ។ ក្រុមហ៊ុន Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA)។
ល្បាយនៃអ៊ុយ (8 ក្រាម) ប៉ូលីអេទីឡែន glycol (8 ក្រាម) និង 8 មីលីលីត្រនៃ 0.01 N. អាស៊ីតអាសេទិកត្រូវបានកូររយៈពេល 10 នាទី ហើយ 24 មីលីលីត្រនៃ TMOS ត្រូវបានបន្ថែមនៅទីនោះក្រោមការត្រជាក់ទឹកកក។ ល្បាយប្រតិកម្មត្រូវបានកំដៅនៅសីតុណ្ហភាព 40 អង្សាសេរយៈពេល 6 ម៉ោងហើយបន្ទាប់មកនៅ 120 អង្សាសេរយៈពេល 8 ម៉ោងក្នុង autoclave ដែកអ៊ីណុក។ ទឹកត្រូវបានកាត់ចោល ហើយសំណល់ត្រូវស្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 70°C រយៈពេល 12 ម៉ោង។ ដុំ​ទន់​ស្ងួត​ត្រូវ​បាន​កិន​ឱ្យ​ម៉ត់​រលោង ហើយ​ដុត​ក្នុង​ឡ​នៅ​សីតុណ្ហភាព 550°C រយៈពេល 12 ម៉ោង។ បាច់ចំនួនបីត្រូវបានរៀបចំ និងកំណត់លក្ខណៈដើម្បីសាកល្បងលទ្ធភាពផលិតឡើងវិញនៃទំហំភាគល្អិត ទំហំរន្ធញើស និងផ្ទៃ។
ក្រុមប៉ូល និងដំណាក់កាលស្ថានីសម្រាប់ខ្សែសង្វាក់ polystyrene ។ នីតិវិធីរៀបចំត្រូវបានពិពណ៌នាដូចខាងក្រោម។
N-phenylmaleimide (200 mg) និង methyl vinyl isocyanate (100 mg) ត្រូវបានរំលាយនៅក្នុង toluene anhydrous ហើយបន្ទាប់មក 0.1 ml នៃ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងដបប្រតិកម្ម ដើម្បីទទួលបាន copolymer នៃ phenylmaleimide និង CPPM isocyanate ។ ) ល្បាយនេះត្រូវបានកំដៅនៅសីតុណ្ហភាព 60 អង្សាសេរយៈពេល 3 ម៉ោង ត្រងនិងស្ងួតក្នុងឡនៅសីតុណ្ហភាព 40 អង្សាសេរយៈពេល 3 ម៉ោង។
ភាគល្អិតស៊ីលីកាស្ងួត (2 ក្រាម) ត្រូវបានបែកខ្ចាត់ខ្ចាយក្នុងសារធាតុ Toluene ស្ងួត (100 មីលីលីត្រ) កូរឱ្យសព្វ និងបន្លឺសម្លេងរយៈពេល 10 នាទីក្នុងដបទឹក 500 មីលីលីត្រ។ PMCP (10 mg) ត្រូវបានរំលាយនៅក្នុង toluene ហើយបន្ថែមដំណក់ទឹកទៅក្នុងដបប្រតិកម្មតាមរយៈបំពង់បន្ថែម។ ល្បាយនេះត្រូវបានច្រោះនៅសីតុណ្ហភាព 100 អង្សាសេរយៈពេល 8 ម៉ោង ត្រង លាងជាមួយអាសេតូន និងស្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 60 អង្សាសេរយៈពេល 3 ម៉ោង។ បន្ទាប់មក ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលជាប់ទាក់ទងជាមួយ PMCP (100 ក្រាម) ត្រូវបានរំលាយនៅក្នុង toluene (200 មីលីលីត្រ) ហើយ 4-hydroxy-TEMPO (2 មីលីលីត្រ) ត្រូវបានបន្ថែមនៅទីនោះក្នុងវត្តមាន 100 μl នៃ dibutyltin dilaurate ជាកាតាលីករ។ ល្បាយនេះត្រូវបានកូរនៅសីតុណ្ហភាព 50 អង្សាសេរយៈពេល 8 ម៉ោង ត្រងនិងស្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 50 អង្សាសេរយៈពេល 3 ម៉ោង។
Styrene (1 មីលីលីត្រ), benzoyl peroxide BPO (0.5 មីលីលីត្រ) និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ទៅនឹង TEMPO-PMCP (1.5 ក្រាម) ត្រូវបានបំបែកនៅក្នុង toluene និងសម្អាតដោយអាសូត។ វត្ថុធាតុ polymerization នៃ styrene ត្រូវបានអនុវត្តនៅ 100 ° C រយៈពេល 12 ម៉ោង។ ផលិតផលលទ្ធផលត្រូវបានលាងសម្អាតដោយមេតាណុល និងស្ងួតពេញមួយយប់នៅសីតុណ្ហភាព 60°C។ គ្រោងការណ៍ទូទៅនៃប្រតិកម្មត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងរូបភព។ មួយ។
សំណាកត្រូវបានរំលាយនៅ 393 K សម្រាប់រយៈពេល 1 ម៉ោងរហូតដល់សម្ពាធសំណល់តិចជាង 10-3 Torr ត្រូវបានទទួល។ បរិមាណ N2 adsorbed នៅសម្ពាធដែលទាក់ទង P/P0 = 0.99 ត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់បរិមាណរន្ធញើសសរុប។ សរីរវិទ្យានៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងលីហ្គែនត្រូវបានពិនិត្យដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កែន (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan)។ សំណាកស្ងួត (ភាគល្អិតស៊ីលីកា និង ligand ចងភ្ជាប់) ត្រូវបានដាក់នៅលើកំណាត់អាលុយមីញ៉ូមដោយប្រើកាសែតកាបូន។ មាសត្រូវបានដាក់នៅលើសំណាកដោយប្រើឧបករណ៍បំពង Q150T ហើយស្រទាប់ Au ក្រាស់ 5 nm ត្រូវបានដាក់នៅលើគំរូ។ នេះធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃដំណើរការតង់ស្យុងទាប និងផ្តល់នូវការបាញ់ថ្នាំត្រជាក់ល្អ។ ការវិភាគធាតុត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 elemental analyzer ។ ឧបករណ៍វិភាគទំហំភាគល្អិត Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ត្រូវបានប្រើដើម្បីទទួលបានការបែងចែកទំហំភាគល្អិត។ ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលមិនមានលាបពណ៌ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ដោយលីហ្គែន (៥ មីលីក្រាមនីមួយៗ) ត្រូវបានបែកខ្ចាត់ខ្ចាយក្នុង 5 មីលីលីត្រនៃអ៊ីសូប្រូផាណុល បញ្ចេញសំឡេងរយៈពេល 10 នាទី រំជើបរំជួលរយៈពេល 5 នាទី ហើយដាក់នៅលើកៅអីអុបទិក Mastersizer ។ ការវិភាគទែម៉ូក្រាវីម៉ែត្រត្រូវបានអនុវត្តក្នុងអត្រា 5 ° C ក្នុងមួយនាទីក្នុងជួរសីតុណ្ហភាពពី 30 ទៅ 800 ° C ។
សរសៃកញ្ចក់តម្រង់ជួរជួរដែកអ៊ីណុកតូចចង្អៀតដែលមានវិមាត្រ (ID 100 × 1.8 ម.ម) ត្រូវបានខ្ចប់ដោយវិធីបំពេញសារធាតុរអិលតាមនីតិវិធីដូចក្នុងសេចក្តីយោង 31។ ជួរឈរដែកអ៊ីណុក (កញ្ចក់មានលេខសម្គាល់ 100 × 1.8 ម.ម) និងព្រីដែលមានបន្ទះដែកទំហំ 1 µm ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅម៉ាស៊ីនវេចខ្ចប់បច្ចេកវិទ្យា slurry, AIL, USA ។ រៀបចំការផ្អាកនៃដំណាក់កាលស្ថានីដោយផ្អាក 150 mg នៃដំណាក់កាលស្ថានីក្នុង 1.2 មីលីលីត្រនៃ methanol ហើយបញ្ចូលវាទៅក្នុងជួរឈរអាងស្តុកទឹក។ មេតាណុល​ត្រូវ​បាន​គេ​ប្រើ​ជា​សារធាតុ​រំលាយ​សារធាតុ​រអិល​និង​សារធាតុរំលាយ​គ្រប់គ្រង។ ខ្ចប់ជួរឈរដោយអនុវត្តលំដាប់សម្ពាធ 100 MP រយៈពេល 10 នាទី 80 MP សម្រាប់ 15 នាទី និង 60 MP សម្រាប់ 30 នាទី។ ដំណើរការវេចខ្ចប់បានប្រើឧបករណ៍រំញ័រជួរឈរឧស្ម័នពីរ (Alltech, Deerfield, IL, USA) សម្រាប់រំញ័រមេកានិច ដើម្បីធានាបាននូវការវេចខ្ចប់ជួរឈរឯកសណ្ឋាន។ បិទឧបករណ៍វេចខ្ចប់ទឹករំអិល ហើយបញ្ចេញសម្ពាធយឺតៗ ដើម្បីការពារកុំឱ្យខូចខ្សែ។ ជួរឈរត្រូវបានផ្តាច់ចេញពីបំពង់បង្ហូរប្រេង ហើយឧបករណ៍ភ្ជាប់ផ្សេងទៀតត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងច្រកចូល និងភ្ជាប់ទៅនឹងប្រព័ន្ធ LC ដើម្បីសាកល្បងប្រតិបត្តិការរបស់វា។
MLC ផ្ទាល់ខ្លួនត្រូវបានសាងសង់ដោយប្រើស្នប់ LC (10AD Shimadzu ប្រទេសជប៉ុន) ឧបករណ៍សំណាកដែលមានរង្វិលជុំចាក់ 50 nL (Valco (USA) C14 W.05) ភ្នាស degasser (Shimadzu DGU-14A) និងបង្អួច capillary UV-VIS ។ ឧបករណ៍ចាប់សញ្ញា (UV-2075) និងមីក្រូជួរឈរដែលដាក់បញ្ចូល។ ប្រើបំពង់តភ្ជាប់តូចចង្អៀត និងខ្លី ដើម្បីកាត់បន្ថយឥទ្ធិពលនៃការពង្រីកជួរឈរបន្ថែម។ បន្ទាប់ពីបំពេញជួរឈរ សូមដំឡើង capillary (50 µm id 365) នៅច្រកចេញនៃប្រសព្វកាត់បន្ថយ 1/16″ និងដំឡើង capillary (50 µm) នៃប្រសព្វកាត់បន្ថយ។ ការប្រមូលទិន្នន័យ និងដំណើរការក្រូម៉ាតូក្រាមត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើកម្មវិធី Multichro 2000។ នៅ 254 nm ការស្រូបកាំរស្មីយូវីនៃវត្ថុវិភាគត្រូវបានត្រួតពិនិត្យនៅ 0. ទិន្នន័យ Chromatographic ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើ OriginPro8 (Northampton, MA) ។
អាល់ប៊ុយមីននៃសេរ៉ូមមនុស្ស ម្សៅ lyophilized ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg លាយជាមួយ trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 ml) និង 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ml) ។ ដំណោះស្រាយត្រូវបានកូររយៈពេល 10 នាទីហើយរក្សាទុកក្នុងទឹកងូតទឹកនៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សាសេរយៈពេល 6 ម៉ោងបន្ទាប់មកពន្លត់ដោយ 1 មីលីលីត្រនៃ 0.1% TFA ។ ត្រងសូលុយស្យុង ហើយទុកក្រោម 4°C។
ការបំបែកល្បាយនៃ peptides និង tryptic digest HSA នៅលើជួរឈរ PMP ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយឡែកពីគ្នា។ ពិនិត្យមើល hydrolysis tryptic នៃល្បាយនៃ peptides និង HSA ដែលបំបែកដោយជួរឈរ PMP ហើយប្រៀបធៀបលទ្ធផលជាមួយនឹងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide ។ ចំនួនចានទ្រឹស្តីត្រូវបានគណនាដោយប្រើសមីការខាងក្រោម៖
រូបភាព SEM នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាចងភ្ជាប់ ligand ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2 ។ រូបភាព SEM នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ (A, B) បង្ហាញរាងស្វ៊ែរ ដែលភាគល្អិតត្រូវបានពន្លូត ឬមានភាពស៊ីមេទ្រីមិនទៀងទាត់ បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង។ ផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងដោយ ligand (C, D) គឺរលោងជាងភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ ដែលអាចបណ្តាលមកពីខ្សែសង្វាក់ polystyrene គ្របដណ្តប់លើផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកា។
ការស្កេនមីក្រូក្រាហ្វអេឡិចត្រុងនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ (A, B) និងភាគល្អិតស៊ីលីកាចងភ្ជាប់ ligand (C, D) ។
ការចែកចាយទំហំភាគល្អិតនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ដោយ ligand ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2. 3(A) ។ ខ្សែកោងនៃការចែកចាយទំហំភាគល្អិតបរិមាណបានបង្ហាញថាទំហំភាគល្អិតស៊ីលីកាបានកើនឡើងបន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមី (រូបភាព 3A)។ ទិន្នន័យការបែងចែកទំហំភាគល្អិតស៊ីលីកាពីការសិក្សាបច្ចុប្បន្ន និងការសិក្សាពីមុនត្រូវបានប្រៀបធៀបក្នុងតារាង 1(A) ។ ទំហំភាគល្អិតបរិមាណ d(0.5) នៃ PMP គឺ 3.36 µm បើប្រៀបធៀបទៅនឹងតម្លៃ ad(0.5) នៃ 3.05 µm ក្នុងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង (ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលជាប់ស្អិត polystyrene) 34. ដោយសារការផ្លាស់ប្តូរសមាមាត្រនៃ PEG, អ៊ុយ, TMOS និងអាស៊ីតអាសេទិកនៅក្នុងល្បាយប្រតិកម្ម ការចែកចាយទំហំភាគល្អិតនៃបាច់នេះគឺតូចជាងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង។ ទំហំភាគល្អិតនៃដំណាក់កាល PMP គឺធំជាងបន្តិចនៃដំណាក់កាលភាគល្អិតស៊ីលីកុន polystyrene ដែលយើងបានសិក្សាពីមុន។ នេះមានន័យថា មុខងារផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកជាមួយនឹង styrene ទុកតែស្រទាប់ polystyrene (0.97 µm) នៅលើផ្ទៃស៊ីលីកា ខណៈដែលក្នុងដំណាក់កាល PMP កម្រាស់ស្រទាប់គឺ 1.38 µm ។
ការចែកចាយទំហំភាគល្អិត (A) និងការចែកចាយទំហំរន្ធញើស (B) នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាចងភ្ជាប់ ligand ។
ទំហំរន្ធញើស បរិមាណរន្ធញើស និងផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលប្រើក្នុងការសិក្សានេះត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1 (B) ។ ទម្រង់ PSD នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ដោយ ligand ត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងរូបភព។ ៣(ខ)។ លទ្ធផលគឺអាចប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង34។ ទំហំរន្ធញើសនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និង ligand-bound គឺ 310 Å និង 241 Å រៀងគ្នា ដែលបង្ហាញថាបន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមី ទំហំរន្ធញើសបានថយចុះចំនួន 69 Å ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1 (B) ហើយខ្សែកោងផ្លាស់ប្តូរត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភព។ ផ្ទៃជាក់លាក់នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាគឺ 2/1g បច្ចុប្បន្នរបស់យើងអាចសិក្សាបានក្នុង 16 m ។ ការសិក្សាពីមុន (124 m2 / g) ។ ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1(B) ផ្ទៃដី (m2/g) នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាបន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមីក៏ថយចុះពី 116 m2/g ទៅ 105 m2/g ។
លទ្ធផលនៃការវិភាគធាតុនៃដំណាក់កាលស្ថានីត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងតារាង។ 2. មាតិកាកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នគឺ 6.35% ដែលទាបជាងនៅក្នុងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង (ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងសារធាតុ polystyrene, 7.93% 35 និង 10.21% រៀងគ្នា) 42. មាតិកាកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នខាងក្រោម ចាប់តាំងពីប៉ូលឡាមួយចំនួនដូចជា phenylmaleimide-methyanocate methyanate-POMP មាន ប្រើបន្ថែមលើ styrene ក្នុងការរៀបចំ SP ។ ភាគរយទម្ងន់នៃអាសូតក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នគឺ 2.21% បើប្រៀបធៀបទៅនឹង 0.1735 និង 0.85% នៅក្នុងការសិក្សាមុន42។ នេះមានន័យថាដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នមានភាគរយទម្ងន់ខ្ពស់នៃអាសូតដោយសារ phenylmaleimide ។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ ផលិតផល (4) និង (5) មានមាតិកាកាបូន 2.7% និង 2.9% រៀងគ្នា ខណៈដែលផលិតផលចុងក្រោយ (6) មានមាតិកាកាបូន 6.35% ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 2។ ការវិភាគទែម៉ូក្រាវីម៉ែត្រ (TGA) ត្រូវបានប្រើក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីនៃ PMP ដើម្បីធ្វើតេស្តសម្រាប់ការសម្រកទម្ងន់ ហើយខ្សែកោង TGA ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 4 ។ រូបភព។ គឺស្ថិតនៅក្នុងការព្រមព្រៀងគ្នាដ៏ល្អជាមួយនឹងមាតិកាកាបូន (6.35%) ចាប់តាំងពី ligands មិនត្រឹមតែមាន C ប៉ុណ្ណោះទេប៉ុន្តែក៏មាន N, O និង H ផងដែរ។
សារធាតុ ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ត្រូវបានជ្រើសរើសដើម្បីកែប្រែផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកា ដោយសារតែក្រុមប៉ូឡូញ phenylmaleimide និង vinylisocyanate ។ ក្រុម Vinyl isocyanate អាច​មាន​ប្រតិកម្ម​បន្ថែម​ទៀត​ជាមួយ styrene ដោយ​សារធាតុ polymerization រ៉ាឌីកាល់​រស់។ ហេតុផលទីពីរគឺការបញ្ចូលក្រុមដែលមានអន្តរកម្មកម្រិតមធ្យមជាមួយការវិភាគ និងមិនមានអន្តរកម្មអេឡិចត្រូស្ទិកខ្លាំងរវាងការវិភាគ និងដំណាក់កាលស្ថានី ចាប់តាំងពី phenylmaleimide moiety មិនមានបន្ទុកនិម្មិតនៅ pH ធម្មតា។ បន្ទាត់រាងប៉ូលនៃដំណាក់កាលស្ថានីអាចត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយបរិមាណដ៏ល្អប្រសើរនៃ styrene និងពេលវេលាប្រតិកម្មនៃវត្ថុធាតុ polymerization រ៉ាឌីកាល់សេរី។ ជំហានចុងក្រោយនៃប្រតិកម្ម (វត្ថុធាតុ polymerization រ៉ាឌីកាល់សេរី) គឺសំខាន់ព្រោះវាផ្លាស់ប្តូរប៉ូលនៃដំណាក់កាលស្ថានី។ ការវិភាគធាតុត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីពិនិត្យមើលមាតិកាកាបូននៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីទាំងនេះ។ វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថាការបង្កើនបរិមាណ styrene និងពេលវេលាប្រតិកម្មបង្កើនមាតិកាកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានីនិងច្រាសមកវិញ។ SPs ដែលត្រូវបានរៀបចំជាមួយនឹងកំហាប់ផ្សេងគ្នានៃ styrene មានផ្ទុកកាបូនខុសៗគ្នា។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ ដំណាក់កាលស្ថានីទាំងនេះត្រូវបានដាក់នៅលើជួរឈរដែកអ៊ីណុក ហើយលក្ខណៈក្រូម៉ាតរបស់ពួកគេ (ការជ្រើសរើស ដំណោះស្រាយ តម្លៃ N ជាដើម) ត្រូវបានត្រួតពិនិត្យ។ ដោយផ្អែកលើការពិសោធន៍ទាំងនេះ សមាសភាពល្អប្រសើរបំផុតសម្រាប់ការរៀបចំដំណាក់កាលស្ថានី PMP ត្រូវបានជ្រើសរើសដើម្បីផ្តល់នូវភាពប៉ូលដែលបានគ្រប់គ្រង និងការរក្សាបានល្អនៃការវិភាគ។
ជួរឈរ PMP ក៏ត្រូវបានគេវាយតម្លៃផងដែរសម្រាប់ការវិភាគនៃល្បាយចំនួនប្រាំនៃ peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) ដោយប្រើសមត្ថភាពនៃដំណាក់កាលចល័ត។ 60/40 (v/v) ACN/water (0.1% TFA) នៅអត្រាលំហូរ 80 µl/min ។ នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការ elution ដ៏ល្អប្រសើរ (200,000 plates/m) ចំនួនចានទ្រឹស្តី (N) ក្នុងមួយជួរ (100 × 1.8 mm) គឺ 20,000 ± 100។ តម្លៃ N សម្រាប់ជួរឈរ PMP ទាំងបីត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 3 ហើយ chromatograms ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាព 5A ។ ការវិភាគលឿនក្នុងអត្រាលំហូរខ្ពស់ (700 µl/min) នៅលើជួរឈរ PMP សារធាតុ peptides 5 ត្រូវបានដកចេញក្នុងរយៈពេលមួយនាទី តម្លៃ N ដ៏ល្អឥតខ្ចោះ 13,500 ± 330 ក្នុងមួយជួរ (100 x 1.8 mm អង្កត់ផ្ចិត) ស្មើនឹង 135,000 plates/m (រូបភាព 5B)។ ជួរឈរចំនួនបីដែលមានទំហំដូចគ្នា (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 x 1.8 មម) ត្រូវបានបំពេញដោយបណ្តុំ PMP ដំណាក់កាលស្ថានីចំនួនបីផ្សេងគ្នា ដើម្បីសាកល្បងការបន្តពូជ។ ការវិភាគត្រូវបានកត់ត្រាទុកសម្រាប់ជួរឈរនីមួយៗដោយបំបែកល្បាយតេស្តដូចគ្នានៅលើជួរឈរនីមួយៗដោយប្រើលក្ខខណ្ឌនៃការ elution ដ៏ល្អប្រសើរ ចំនួននៃទ្រឹស្តីបទ N និងរយៈពេលរក្សាទុក។ ទិន្នន័យភាពអាចផលិតឡើងវិញបានសម្រាប់ជួរឈរ PMP ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 4 ។ លទ្ធភាពនៃការផលិតឡើងវិញនៃជួរឈរ PMP មានទំនាក់ទំនងយ៉ាងល្អជាមួយនឹងតម្លៃ % RSD ទាបបំផុតដូចបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 3 ។
ការបំបែកល្បាយ peptide នៅលើជួរឈរ PMP (B) និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (A), ដំណាក់កាលចល័ត 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), វិមាត្រជួរឈរ PMP (100 x 1.8 mm id), ការវិភាគលំដាប់ Elution នៃសមាសធាតុ៖ 1 (Gly-Tyr), 2-Tyr (Gly-Tyr), 2-Tyr (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) និង 5 (អាស៊ីត leucic enkephalin) ។
ជួរឈរ PMP (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 x 1.8 មីលីម៉ែត្រ) ត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកនៃ tryptic hydrolyzate នៃអាល់ប៊ុមសេរ៉ូមរបស់មនុស្សដោយ HPLC ។ ក្រូម៉ាតូក្រាមនៅក្នុងរូបភាពទី 6 បង្ហាញថាគំរូត្រូវបានបំបែកយ៉ាងល្អជាមួយនឹងគុណភាពបង្ហាញល្អណាស់។ ដំណោះស្រាយ HSA ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើអត្រាលំហូរ 100 μl/min ដំណាក់កាលចល័តនៃ 70/30 acetonitrile/water និង 0.1% TFA ។ Cleavage of HSA ត្រូវបានបែងចែកទៅជា 17 peaks ដូចដែលបានបង្ហាញនៅក្នុង chromatogram (Fig ។ 6) ដែលត្រូវគ្នាទៅនឹង peptides 17 ។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃកំពូលបុគ្គលពី HSA hydrolyzate ត្រូវបានគណនា ហើយតម្លៃត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 5 ។
HSA tryptic hydrolysates ត្រូវបានបំបែកនៅលើជួរឈរ PMP (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 x 1.8 mm) អត្រាលំហូរ (100 μl/min) ដំណាក់កាលចល័ត 60/40 acetonitrile/water និង 0.1% TFA ។
ដែល L ជាប្រវែងជួរឈរ η គឺជា viscosity នៃដំណាក់កាលចល័ត ΔP គឺជាសម្ពាធខាងក្រោយនៃជួរឈរ ហើយ u គឺជាល្បឿនលីនេអ៊ែរនៃដំណាក់កាលចល័ត។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរ PMP គឺ 2.5 × 10-14 m2 អត្រាលំហូរគឺ 25 μl / នាទី 60/40 v / v ត្រូវបានប្រើ។ ACN/ទឹក។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរ PMP (ID 100 × 1.8 mm) គឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងការសិក្សា Ref.34 មុនរបស់យើង។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយភាគល្អិត porous ខាងក្រៅគឺ 1.7 × 10 .6 µm, 2.5 × 10-14 m2 សម្រាប់ភាគល្អិត 5 µm 43 ។ ដូច្នេះ permeability នៃដំណាក់កាល PMP គឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹង permeability នៃភាគល្អិតស្នូល-សែលដែលមានទំហំ 5 μm។
ដែល Wx គឺជាម៉ាស់នៃជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយសារធាតុ chloroform Wy គឺជាម៉ាស់នៃជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយមេតាណុល ហើយ ρ គឺជាដង់ស៊ីតេនៃសារធាតុរំលាយ។ ដង់ស៊ីតេនៃមេតាណុល (ρ = 0.7866) និង chloroform (ρ = 1.484) ។ porosity សរុបនៃជួរឈរភាគល្អិត silica-C18 (100 × 1.8 mm ID)34 និងជួរឈរ C18-urea31 ដែលបានសិក្សាពីមុនរបស់យើងគឺ 0.63 និង 0.55 រៀងគ្នា។ នេះ​មាន​ន័យ​ថា​វត្តមាន​នៃ​អ៊ុយ​រ៉ា​ហ្គា​ន​កាត់បន្ថយ​ភាព​ជ្រាប​ចូល​នៃ​ដំណាក់កាល​ស្ថានី​។ ម្យ៉ាងវិញទៀត porosity សរុបនៃជួរឈរ PMP (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 × 1.8 មម) គឺ 0.60 ។ ជួរឈរ PMP គឺអាចជ្រាបចូលបានតិចជាងជួរឈរដែលផ្ទុកដោយភាគល្អិតស៊ីលីកាចង C18 ពីព្រោះនៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីប្រភេទ C18 លីហ្គែន C18 ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងភាគល្អិតស៊ីលីកានៅក្នុងខ្សែសង្វាក់លីនេអ៊ែរ ខណៈពេលដែលនៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីនៃប្រភេទ polystyrene វត្ថុធាតុ polymer ក្រាស់ត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅជុំវិញភាគល្អិត។ ស្រទាប់ A. នៅក្នុងការពិសោធន៍ធម្មតា porosity ជួរឈរត្រូវបានគណនាដូចខាងក្រោម៖
នៅលើរូបភព។ 7A, B បង្ហាញប្លង់ Van Deemter សម្រាប់ជួរឈរ PMP (id 100 x 1.8 mm) និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) ក្រោមលក្ខខណ្ឌដូចគ្នា 60/40 ACN/H2O និង 0.1% TFA 20 µl/min នៅលើជួរឈរ 8.0 តម្លៃ HETP អប្បបរមានៅអត្រាលំហូរល្អបំផុត (80 µl/min) គឺ 2.6 µm និង 3.9 µm សម្រាប់ជួរឈរ PMP និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide រៀងគ្នា។ តម្លៃ HETP បង្ហាញថាប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃជួរឈរ PMP (100 x 1.8 mm id) គឺខ្ពស់ជាងជួរ Ascentis Express RP-Amide ដែលមានពាណិជ្ជកម្ម (100 x 1.8 mm id)។ ក្រាហ្វ van Deemter នៅក្នុងរូបភាពទី 7(A) បង្ហាញថាការថយចុះនៃតម្លៃ N គឺមិនខ្ពស់ខ្លាំងជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃលំហូរធៀបនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកខ្ពស់នៃជួរឈរ PMP (id 100 × 1.8 mm) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide គឺផ្អែកលើរូបរាង និងទំហំភាគល្អិតដែលបានកែលម្អ និងនីតិវិធីវេចខ្ចប់ជួរឈរដ៏ស្មុគ្រស្មាញដែលប្រើក្នុងការងារបច្ចុប្បន្ន 34 ។
(ក) គ្រោង Van Deemter (HETP ធៀបនឹងល្បឿនលីនេអ៊ែរដំណាក់កាលចល័ត) ទទួលបាននៅលើជួរឈរ PMP (id 100 x 1.8 mm) ក្នុង 60/40 ACN/H2O ជាមួយនឹង 0.1% TFA ។ (ខ) គ្រោង Van Deemter (HETP ធៀបនឹងល្បឿនលីនេអ៊ែរដំណាក់កាលចល័ត) ទទួលបាននៅលើជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) ក្នុង 60/40 ACN/H2O ជាមួយនឹង 0.1% TFA ។
ដំណាក់កាលស្ថានីប៉ូលនៃប៉ូលីស្ទីរ៉េន intercalated ត្រូវបានរៀបចំ និងវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកនៃល្បាយនៃ peptides សំយោគ និង tryptic hydrolyzate នៃអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HSA) នៅក្នុង chromatography រាវដែលមានដំណើរការខ្ពស់។ ដំណើរការ chromatographic នៃជួរឈរ PMP សម្រាប់ល្បាយ peptide គឺល្អឥតខ្ចោះនៅក្នុងលក្ខខណ្ឌនៃប្រសិទ្ធភាពបំបែកនិងដំណោះស្រាយ។ ការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបែកនៃជួរឈរ PMP គឺដោយសារតែហេតុផលជាច្រើនដូចជាទំហំភាគល្អិតស៊ីលីកា និងទំហំរន្ធញើស ការសំយោគដែលបានគ្រប់គ្រងនៃដំណាក់កាលស្ថានី និងសម្ភារៈវេចខ្ចប់ជួរឈរស្មុគស្មាញ។ បន្ថែមពីលើប្រសិទ្ធភាពបំបែកខ្ពស់ អត្ថប្រយោជន៍មួយទៀតនៃដំណាក់កាលស្ថានីនេះគឺសម្ពាធថយក្រោយជួរឈរទាបក្នុងអត្រាលំហូរខ្ពស់។ ជួរឈរ PMP គឺអាចផលិតឡើងវិញបានខ្ពស់ ហើយអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីវិភាគល្បាយនៃ peptides និងការរំលាយអាហារ tryptic នៃប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗ។ យើងមានបំណងប្រើជួរឈរនេះសម្រាប់ការបំបែកសមាសធាតុ bioactive ពីផលិតផលធម្មជាតិ ចំរាញ់ចេញពីរុក្ខជាតិឱសថ និងផ្សិតនៅក្នុងរាវ chromatography ។ នៅពេលអនាគត ជួរឈរ PMP ក៏នឹងត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកប្រូតេអ៊ីន និងអង្គបដិប្រាណ monoclonal ផងដែរ។
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតទៅលើប្រព័ន្ធបំបែក peptide chromatography ដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែក I: ការអភិវឌ្ឍន៍ពិធីការសម្រាប់លក្ខណៈជួរឈរ។ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតទៅលើប្រព័ន្ធបំបែក chromatography peptide ដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែក I: ការអភិវឌ្ឍន៍ពិធីការសម្រាប់ការកំណត់លក្ខណៈជួរឈរ។Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., និង Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតលើប្រព័ន្ធបំបែក Peptide ដោយ Reverse-Phase Chromatography, ផ្នែកទី I: ការបង្កើតពិធីការសម្រាប់ការកំណត់លក្ខណៈជួរឈរ។ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតទៅលើប្រព័ន្ធបំបែក peptide chromatography ដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែក I: ការអភិវឌ្ឍន៍ពិធីការសម្រាប់លក្ខណៈជួរឈរ។ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតទៅលើប្រព័ន្ធបំបែក peptide chromatography ដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែក I: ការអភិវឌ្ឍន៍ពិធីការសម្រាប់លក្ខណៈជួរឈរ។Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., និង Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតលើប្រព័ន្ធបំបែក Peptide ដោយ Reverse-Phase Chromatography, ផ្នែកទី I: ការបង្កើតពិធីការសម្រាប់ការកំណត់លក្ខណៈជួរឈរ។J.色谱法。 1603, 113-129។ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019) ។
Gomez, B. et al ។ វិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការបង្កើត peptides សកម្មប្រសើរឡើងសម្រាប់ការព្យាបាលនៃជំងឺឆ្លង។ ជីវបច្ចេកវិទ្យា។ សមិទ្ធិផល 36(2), 415–429។ https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018) ។
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. peptides ព្យាបាលសំយោគ៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។ Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. peptides ព្យាបាលសំយោគ៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។Vliege P, Lisowski V, Martinez J និង Chreschatyski M. peptides ព្យាបាលសំយោគ៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។Vliege P, Lisowski V, Martinez J និង Khreschatsky M. peptides ព្យាបាលសំយោគ៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។ ការរកឃើញគ្រឿងញៀន។ ថ្ងៃនេះ ១៥ (១–២), ៤០–៥៦។ https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010) ។
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography ។ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography ។សូមមើល F., Smith RD និង Shen Yu ។ កម្រិតខ្ពស់នៃក្រូម៉ាតូក្រាមរាវ proteomic ។ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱។ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. សមាសភាពប្រូតេអ៊ីនកម្រិតខ្ពស់液相色谱។សូមមើល F., Smith RD និង Shen Yu ។ កម្រិតខ្ពស់នៃក្រូម៉ាតូក្រាមរាវ proteomic ។J. Chromatography ។ A 1261, 78–90 (2012)។
Liu, W. et al ។ កម្រិតខ្ពស់នៃអង្គធាតុរាវ chromatography-mass spectrometry គឺអាចបញ្ចូលគ្នានូវសារធាតុមេតាបូឡូមិក និងប្រូតេអូមដែលមានមូលដ្ឋានទូលំទូលាយ។ រន្ធគូថ។ ជឹម។ Acta 1069, 89–97 (2019) ។
Chesnut, SM & Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍ឱសថ។ Chesnut, SM & Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍ឱសថ។Chesnut, SM និង Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍ឱសថ។Chesnut, SM និង Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍ថ្នាំ។ J. វិទ្យាសាស្ត្រខែកញ្ញា។ 30(8), 1183–1190 (2007)។
Wu, N. & Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃ chromatography រាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកលឿន។ Wu, N. & Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃ chromatography រាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកលឿន។Wu, N. និង Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃ chromatography រាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកយ៉ាងឆាប់រហ័ស។ Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面។ Wu, N. & Clausen, AM Basic និងទិដ្ឋភាពជាក់ស្តែងនៃ chromatography រាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកយ៉ាងឆាប់រហ័ស។Wu, N. និង Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃ chromatography រាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកយ៉ាងឆាប់រហ័ស។J. កញ្ញា វិទ្យាសាស្ត្រ។ ៣០(៨), ១១៦៧–១១៨២។ https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007) ។
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ការប្រើប្រាស់ chromatography រាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពជ្រុលក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍ឱសថ។ Wren, SA & Tchelitcheff, P. ការប្រើប្រាស់ chromatography រាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពជ្រុលក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍ឱសថ។Ren, SA និង Chelischeff, P. ការប្រើប្រាស់ chromatography រាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍ឱសថ។ Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用។ Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA និង Chelischeff, P. ការអនុវត្តនៃ chromatography រាវដែលមានប្រសិទ្ធភាពជ្រុលក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍ថ្នាំ។J. Chromatography ។ ១១១៩(១-២), ១៤០-១៤៦។ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006) ។
Gu, H. et al ។ monolithic macroporous hydrogel បានមកពី emulsion ប្រេងក្នុងទឹក ជាមួយនឹងដំណាក់កាលខាងក្នុងខ្ពស់សម្រាប់ការបន្សុតប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពនៃមេរោគ enterovirus 71. គីមី។ គម្រោង។ ទិនានុប្បវត្តិ 401, 126051 (2020) ។
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA តួនាទីនៃក្រូម៉ាតរាវក្នុងប្រូតេអូម។ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA តួនាទីនៃក្រូម៉ាតរាវក្នុងប្រូតេអូម។Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. និង Wilkins, JA តួនាទីនៃក្រូម៉ាតូក្រាមរាវនៅក្នុង proteomics ។ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用។ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, J.AShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. និង Wilkins, JA តួនាទីនៃក្រូម៉ាតូក្រាមរាវនៅក្នុង proteomics ។J. Chromatography ។ A 1053 (1-2), 27-36 (2004) ។
Fekte, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. និន្នាការថ្មីក្នុងការបំបែកធាតុរាវក្រូម៉ាតូក្រាមដំណាក់កាលបញ្ច្រាសនៃ peptides និងប្រូតេអ៊ីនព្យាបាល៖ ទ្រឹស្តី និងកម្មវិធី។ & Guillarme, D. និន្នាការថ្មីក្នុងការបំបែកធាតុរាវក្រូម៉ាតូក្រាមដំណាក់កាលបញ្ច្រាសនៃ peptides និងប្រូតេអ៊ីនព្យាបាល៖ ទ្រឹស្តី និងកម្មវិធី។ & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной громатой громатой громат фазой: теория និង приложения ។ & Guillarme, D. និន្នាការថ្មីក្នុងការបំបែក peptides ព្យាបាល និងប្រូតេអ៊ីនដោយដំណាក់កាលបញ្ច្រាសនៃ chromatography រាវ៖ ទ្រឹស្តី និងកម្មវិធី។ & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用។ & Guillarme, D.និង Guillarmé, D. និន្នាការថ្មីក្នុងការបំបែក peptides និងប្រូតេអ៊ីនព្យាបាលដោយដំណាក់កាលបញ្ច្រាសនៃ chromatography រាវ៖ ទ្រឹស្តី និងកម្មវិធី។J. Pharm ។ ជីវវិទ្យា។ រន្ធគូថ។ ៦៩, ៩–២៧ (ឆ្នាំ ២០១២)។
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ការបំបែកពីរវិមាត្រនៃ peptides ដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC ជាមួយនឹង pH ផ្សេងគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយ និងទីពីរ។ Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ការបំបែកពីរវិមាត្រនៃ peptides ដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC ជាមួយនឹង pH ផ្សេងគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយ និងទីពីរ។Gilar M., Olivova P., Dali AE និង Gebler JK ការបំបែកពីរវិមាត្រនៃ peptides ដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC ជាមួយនឹង pH ផ្សេងគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយ និងទីពីរ។Gilar M. , Olivova P. , Dali AE និង Gebler JK ការបំបែកពីរវិមាត្រនៃ peptides ដោយប្រើតម្លៃ pH ផ្សេងគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយនិងទីពីរដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC ។ J. វិទ្យាសាស្ត្រខែកញ្ញា។ 28 (14), 1694–1703 (2005)។
Fellitti, S. et al ។ ការស៊ើបអង្កេតលើការផ្ទេរម៉ាស់ និងលក្ខណៈ kinetic នៃជួរឈរ chromatography ដំណើរការខ្ពស់ដែលផ្ទុកទៅដោយភាគល្អិត C18 ដែលមាន porous និង superficially porous តូចជាង 2 µm ។ J. វិទ្យាសាស្ត្រខែកញ្ញា។ ៤៣ (៩–១០), ១៧៣៧–១៧៤៥ (ឆ្នាំ ២០២០)។
Piovesana, S. et al ។ និន្នាការថ្មីៗ និងបញ្ហាប្រឈមក្នុងការវិភាគក្នុងភាពឯកោ ការកំណត់អត្តសញ្ញាណ និងសុពលភាពនៃ peptides bioactive រុក្ខជាតិ។ រន្ធគូថ។ សត្វរន្ធគូថ។ គីមី។ ៤១០(១៥), ៣៤២៥-៣៤៤៤។ https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018) ។
Muller, JB et al ។ ទេសភាពដ៏ប្រពៃនៃនគរជីវិត។ ធម្មជាតិ 582 (7813), 592–596 ។ https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020) ។
De Luca, K. et al ។ បន្ទាប់ពីការព្យាបាល peptides ព្យាបាលដោយការត្រៀមលក្ខណៈរាវ chromatography ។ ម៉ូលេគុល (Basel, Switzerland) 26(15), 4688 (2021)។
Yang, Y. & Geng, X. ក្រូម៉ាតូក្រាមរបៀបចម្រុះ និងកម្មវិធីរបស់វាចំពោះជីវប៉ូលីម័រ។ Yang, Y. & Geng, X. ក្រូម៉ាតូក្រាមរបៀបចម្រុះ និងកម្មវិធីរបស់វាចំពោះជីវប៉ូលីម័រ។យ៉ាង, យូ។ និង Geng, X. chromatography របៀបចម្រុះ និងកម្មវិធីរបស់វាចំពោះ biopolymers ។ Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用។ Yang, Y. & Geng, X. របៀបចម្រុះ chromatography និងកម្មវិធីរបស់វានៅក្នុង biopolymers ។យ៉ាង, យូ។ និងហ្សែន, X. ក្រូម៉ាតូក្រាមរបៀបចម្រុះ និងកម្មវិធីរបស់វាចំពោះជីវប៉ូលីមឺរ។J. Chromatography ។ A 1218(49), 8813–8825 (2011)។