សូមអរគុណសម្រាប់ការចូលមើលគេហទំព័រ Nature.com។ អ្នកកំពុងប្រើកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលមានការគាំទ្រ CSS មានកំណត់។ ដើម្បីទទួលបានបទពិសោធន៍ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកដែលបានធ្វើបច្ចុប្បន្នភាព (ឬបិទរបៀបឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ លើសពីនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្រជាបន្តបន្ទាប់ យើងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
បង្ហាញ​រង្វង់​នៃ​ស្លាយ​បី​ក្នុង​ពេល​តែ​មួយ។ ប្រើ​ប៊ូតុង​មុន និង​បន្ទាប់ ដើម្បី​ផ្លាស់ទី​តាម​រយៈ​ស្លាយ​បី​ក្នុង​ពេល​តែ​មួយ ឬ​ប្រើ​ប៊ូតុង​គ្រាប់​រំកិល​នៅ​ខាង​ចុង ដើម្បី​ផ្លាស់ទី​តាម​រយៈ​ស្លាយ​បី​ក្នុង​ពេល​តែ​មួយ។
ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលមានរន្ធញើសត្រូវបានរៀបចំដោយវិធីសាស្ត្រសូល-ជែលជាមួយនឹងការកែប្រែមួយចំនួនដើម្បីទទួលបានភាគល្អិតរន្ធញើសធំទូលាយ។ ភាគល្អិតទាំងនេះត្រូវបានដេរីវេជាមួយ N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) និង styrene តាមរយៈប៉ូលីមែររីស្យុងបំលែងខ្សែសង្វាក់បញ្ច្រាស (RAFT) ដើម្បីបង្កើតជាប៉ូលីអាមីត N-phenylmaleimide អន្តរកាល។ ដំណាក់កាលស្ថានី Styrene (PMP)។ ជួរឈរដែកអ៊ីណុកដែលមានរន្ធតូចចង្អៀត (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 × 1.8 ម.ម) ត្រូវបានខ្ចប់ជាមួយនឹងការវេចខ្ចប់រាវ។ ការអនុវត្តក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីនៃជួរឈរ PMP ត្រូវបានវាយតម្លៃដើម្បីបំបែកល្បាយនៃប៉ិបទីតសំយោគដែលមានប៉ិបទីតចំនួនប្រាំ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) និង tryptic hydrolyzate នៃអាល់ប៊ុមមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HAS)។ ក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការរំលាយល្អបំផុត ចំនួនទ្រឹស្តីនៃបន្ទះដែលមានល្បាយនៃ peptides បានឈានដល់ 280,000 បន្ទះ/ម៉ែត្រការ៉េ។ ការប្រៀបធៀបប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបែកនៃជួរឈរដែលបានអភិវឌ្ឍជាមួយជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide ពាណិជ្ជកម្ម គេសង្កេតឃើញថាប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបែកនៃជួរឈរ PMP គឺល្អជាងជួរឈរពាណិជ្ជកម្មទាក់ទងនឹងប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបែក និងគុណភាពបង្ហាញ។
ឧស្សាហកម្មជីវឱសថបានក្លាយជាទីផ្សារសកលដែលកំពុងពង្រីកខ្លួន ជាមួយនឹងការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃចំណែកទីផ្សារក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ។ ជាមួយនឹងការរីកចម្រើនយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃឧស្សាហកម្មជីវឱសថ1,2,3 មានតម្រូវការយ៉ាងខ្លាំងសម្រាប់ការវិភាគ peptide និងប្រូតេអ៊ីន។ បន្ថែមពីលើ peptide គោលដៅ ភាពមិនបរិសុទ្ធផ្សេងៗត្រូវបានបង្កើតឡើងក្នុងអំឡុងពេលសំយោគ peptide ដូច្នេះការបន្សុទ្ធក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីត្រូវបានទាមទារដើម្បីទទួលបានភាពបរិសុទ្ធដែលចង់បាននៃ peptide ។ ការវិភាគ និងការកំណត់លក្ខណៈនៃប្រូតេអ៊ីននៅក្នុងសារធាតុរាវរាងកាយ ជាលិកា និងកោសិកាគឺជាកិច្ចការដ៏លំបាកមួយដោយសារតែចំនួនដ៏ច្រើននៃប្រភេទសត្វដែលអាចរកឃើញដែលមាននៅក្នុងគំរូតែមួយ។ ទោះបីជាម៉ាស្សស្ពិចត្រូម៉ែត្រីគឺជាឧបករណ៍ដ៏មានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ការតម្រៀប peptide និងប្រូតេអ៊ីនក៏ដោយ ប្រសិនបើគំរូបែបនេះត្រូវបានណែនាំដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងម៉ាស្សស្ពិចត្រូម៉ែត្រី ការបំបែកនឹងមិនពេញចិត្តទេ។ បញ្ហានេះអាចត្រូវបានដោះស្រាយដោយការអនុវត្តក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវ (LC) មុនពេលវិភាគ MS ដែលនឹងកាត់បន្ថយបរិមាណនៃសារធាតុវិភាគដែលចូលទៅក្នុងម៉ាស្សស្ពិចត្រូម៉ែត្រីនៅពេលជាក់លាក់មួយ4,5,6។ លើសពីនេះ សារធាតុវិភាគអាចប្រមូលផ្តុំនៅក្នុងតំបន់តូចចង្អៀតក្នុងអំឡុងពេលបំបែកដំណាក់កាលរាវ ដោយហេតុនេះប្រមូលផ្តុំសារធាតុវិភាគទាំងនេះ និងបង្កើនភាពរសើបនៃការរកឃើញ MS។ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវ (LC) បានរីកចម្រើនគួរឱ្យកត់សម្គាល់ក្នុងរយៈពេលមួយទសវត្សរ៍កន្លងមកនេះ ហើយបានក្លាយជាវិធីសាស្ត្រដែលប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយសម្រាប់ការវិភាគប្រូតេអូមិច7,8,9,10។
ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណាក់កាលបញ្ច្រាស (RP-LC) ត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយដើម្បីបន្សុទ្ធ និងបំបែកល្បាយនៃប៉ិបទីតដោយប្រើស៊ីលីកាកែប្រែដោយអុកតាដេស៊ីល (ODS) ជាដំណាក់កាលស្ថានី11,12,13។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដោយសារតែរចនាសម្ព័ន្ធស្មុគស្មាញ និងលក្ខណៈអំផូទែរិចរបស់វា14,15 ដំណាក់កាលស្ថានី RP មិនអាចផ្តល់នូវការបំបែកប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនដែលពេញចិត្តបានទេ។ ដូច្នេះ ការវិភាគប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនដែលមានបំណែកប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល តម្រូវឱ្យមានដំណាក់កាលស្ថានីដែលត្រូវបានរចនាឡើងជាពិសេសដើម្បីធ្វើអន្តរកម្ម និងរក្សាសារធាតុវិភាគទាំងនេះ16។ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីចម្រុះ ដែលផ្តល់នូវអន្តរកម្មពហុម៉ូឌុល អាចជាជម្រើសមួយជំនួស RP-LC សម្រាប់ការបំបែកប៉ិបទីត ប្រូតេអ៊ីន និងល្បាយស្មុគស្មាញផ្សេងទៀត។ ដំណាក់កាលស្ថានីចម្រុះជាច្រើនត្រូវបានរៀបចំ ហើយជួរឈរដែលបំពេញដោយដំណាក់កាលស្ថានីទាំងនេះត្រូវបានប្រើដើម្បីបំបែកប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីន17,18,19,20,21។ ដោយសារតែវត្តមាននៃក្រុមប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល ដំណាក់កាលស្ថានីរបៀបចម្រុះ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, អន្តរកម្មប៉ូល/RPLC) គឺសមរម្យសម្រាប់ការបំបែកប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីន22,23,24,25,26,27,28។ ដំណាក់កាលស្ថានីអន្តរកម្មប៉ូលដែលមានក្រុមប៉ូលភ្ជាប់គ្នាបង្ហាញសមត្ថភាពបំបែកល្អ និងការជ្រើសរើសពិសេសសម្រាប់សារធាតុវិភាគប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល ពីព្រោះការបំបែកអាស្រ័យលើអន្តរកម្មរវាងសារធាតុវិភាគ និងដំណាក់កាលស្ថានី។ អន្តរកម្មពហុម៉ូឌុល29,30,31,32។ ថ្មីៗនេះ Zhang et al. 30 ទទួលបានដំណាក់កាលស្ថានីដែលបញ្ចប់ដោយ behenyl នៃប៉ូលីអាមីន និងបានបំបែកអ៊ីដ្រូកាបូន ថ្នាំប្រឆាំងនឹងជំងឺធ្លាក់ទឹកចិត្ត flavonoids នុយក្លេអូស៊ីត អេស្ត្រូសែន និងសារធាតុវិភាគមួយចំនួនទៀតដោយជោគជ័យ។ សម្ភារៈស្ថានីដែលបង្កប់ក្នុងប៉ូលមានទាំងក្រុមប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល ដូច្នេះវាអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីបំបែកប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនទៅជាផ្នែកដែលមិនជ្រាបទឹក និងផ្នែកដែលមិនជ្រាបទឹក។ ជួរឈរ​ក្នុង​បន្ទាត់​ប៉ូល (ឧ. ជួរឈរ C18 ជាមួយ​អាមីដ​ក្នុង​បន្ទាត់) មាន​ក្រោម​ឈ្មោះ​ពាណិជ្ជកម្ម​ថា ជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide ប៉ុន្តែ​ជួរឈរ​ទាំងនេះ​ត្រូវ​បាន​ប្រើ​សម្រាប់​តែ​ការវិភាគ​អាមីន 33 ប៉ុណ្ណោះ។
នៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្ននេះ ដំណាក់កាលស្ថានីដែលបង្កប់ប៉ូល (N-phenylmaleimide, ប៉ូលីស្ទីរ៉ែនដែលបង្កប់) ត្រូវបានរៀបចំ និងវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែក peptide និងការបំបែក tryptic HSA។ យុទ្ធសាស្ត្រខាងក្រោមត្រូវបានប្រើដើម្បីរៀបចំដំណាក់កាលស្ថានី។ ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលមានរន្ធញើសត្រូវបានរៀបចំតាមនីតិវិធីដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងការបោះពុម្ពផ្សាយពីមុនរបស់យើង ជាមួយនឹងការផ្លាស់ប្តូរមួយចំនួននៅក្នុងគ្រោងការណ៍រៀបចំ 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39។ សមាមាត្រនៃអ៊ុយរ៉េ ប៉ូលីអេទីឡែនគ្លីកូល (PEG) TMOS និងអាស៊ីតទឹក-អាសេទិកត្រូវបានកែតម្រូវដើម្បីទទួលបានភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលមានទំហំរន្ធញើសធំ។ ទីពីរ លីហ្គែន phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ថ្មីត្រូវបានសំយោគ ហើយភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលបានបំលែងរបស់វាត្រូវបានប្រើដើម្បីរៀបចំដំណាក់កាលស្ថានីដែលបង្កប់ប៉ូល។ ដំណាក់កាលស្ថានីដែលទទួលបានត្រូវបានវេចខ្ចប់ទៅក្នុងជួរឈរដែកអ៊ីណុក (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 × 1.8 ម.ម) ស្របតាមគ្រោងការណ៍វេចខ្ចប់ដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង។ ការវេចខ្ចប់ជួរឈរត្រូវបានជួយដោយរំញ័រមេកានិចដើម្បីធានាបាននូវស្រទាប់ឯកសណ្ឋាននៅក្នុងជួរឈរ។ ជួរឈរដែលខ្ចប់ត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកល្បាយនៃប៉ិបទីតដែលមានប៉ិបទីតចំនួនប្រាំ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, ប៉ិបទីត leucine-enkephalin) និងសារធាតុ tryptic hydrolysates នៃអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HSA)។ វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថាល្បាយប៉ិបទីត និងការរំលាយប៉ិបទីត HSA ត្រូវបានបំបែកដោយគុណភាពបង្ហាញ និងប្រសិទ្ធភាពល្អ។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃជួរឈរ PMP ត្រូវបានប្រៀបធៀបទៅនឹងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide។ វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថា ប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនមានគុណភាពបង្ហាញល្អ និងប្រសិទ្ធភាពបំបែកខ្ពស់នៅលើជួរឈរ PMP ហើយប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃជួរឈរ PMP គឺខ្ពស់ជាងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide។
PEG (ប៉ូលីអេទីឡែន គ្លីកូល), អ៊ុយរ៉េ, អាស៊ីតអាសេទិក, ទ្រីមេតូស៊ីអ័រថូស៊ីលីកេត (TMOS), ទ្រីមេទីលក្លរ៉ូស៊ីឡាន (TMCS), ទ្រីបស៊ីន, អាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HSA), អាម៉ូញ៉ូមក្លរួ, អ៊ុយរ៉េ, ហិចសាមេទីលមេតាគ្រីឡូយឌីស៊ីឡាហ្សាន (HMDS), មេតាគ្រីឡូអ៊ីលក្លរួ (MC), ស្ទីរ៉ែន, 4-អ៊ីដ្រូស៊ី-ថេមប៉ូ, ប៊េនហ្សូអ៊ីលប៉េរ៉ុកស៊ីត (BPO), អាសេតូនីទ្រីល (ACN) សម្រាប់ HPLC, មេតាណុល, 2-ប្រូផាណុល និងអាសេតូន។ ក្រុមហ៊ុន Sigma-Aldrich (សាំងល្វីស, មីសសួរី, សហរដ្ឋអាមេរិក)។
ល្បាយនៃអ៊ុយរ៉េ (៨ក្រាម) ប៉ូលីអេទីឡែនគ្លីកូល (៨ក្រាម) និងអាស៊ីតអាសេទិក ០,០១ នីត្រូសែន (N) ចំនួន ៨មីលីលីត្រ ត្រូវបានកូររយៈពេល ១០នាទី ហើយ TMOS ចំនួន ២៤មីលីលីត្រ ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងនោះ ក្រោមការធ្វើឱ្យត្រជាក់ដោយទឹកកក។ ល្បាយប្រតិកម្មត្រូវបានកំដៅនៅសីតុណ្ហភាព ៤០អង្សាសេ រយៈពេល ៦ម៉ោង ហើយបន្ទាប់មកនៅសីតុណ្ហភាព ១២០អង្សាសេ រយៈពេល ៨ម៉ោង ក្នុងឡដុតដែកអ៊ីណុក។ ទឹកត្រូវបានច្រោះចេញ ហើយសំណល់ត្រូវបានសម្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព ៧០អង្សាសេ រយៈពេល ១២ម៉ោង។ ប្លុកទន់ស្ងួតត្រូវបានកិនឱ្យរលោង ហើយដុតក្នុងឡនៅសីតុណ្ហភាព ៥៥០អង្សាសេ រយៈពេល ១២ម៉ោង។ បាច់ចំនួនបីត្រូវបានរៀបចំ និងកំណត់លក្ខណៈ ដើម្បីសាកល្បងភាពអាចបង្កើតឡើងវិញបាននៃទំហំភាគល្អិត ទំហំរន្ធ និងផ្ទៃ។
ក្រុមប៉ូល និងដំណាក់កាលស្ថានីសម្រាប់ខ្សែសង្វាក់ប៉ូលីស្ទីរ៉ែន។ នីតិវិធីរៀបចំត្រូវបានពិពណ៌នាខាងក្រោម។
N-phenylmaleimide (200 មីលីក្រាម) និង methyl vinyl isocyanate (100 មីលីក្រាម) ត្រូវបានរំលាយក្នុង toluene anhydrous ហើយបន្ទាប់មក 0.1 មីលីលីត្រ នៃ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងដបប្រតិកម្ម ដើម្បីទទួលបានកូប៉ូលីមែរនៃ phenylmaleimide និង methyl vinyl isocyanate (PMCP)។ ល្បាយនេះត្រូវបានកំដៅនៅសីតុណ្ហភាព 60°C រយៈពេល 3 ម៉ោង ត្រង និងសម្ងួតក្នុងឡនៅសីតុណ្ហភាព 40°C រយៈពេល 3 ម៉ោង។
ភាគល្អិតស៊ីលីកាស្ងួត (2 ក្រាម) ត្រូវបានបំបែកក្នុង toluene ស្ងួត (100 មីលីលីត្រ) កូរ និងបង្កើតសំឡេងរយៈពេល 10 នាទីក្នុងដបបាតមូល 500 មីលីលីត្រ។ PMCP (10 មីលីក្រាម) ត្រូវបានរំលាយក្នុង toluene ហើយបន្ថែមទៅក្នុងដបប្រតិកម្មតាមលំដាប់លំដោយតាមរយៈចីវលោបន្ថែម។ ល្បាយនេះត្រូវបានចាក់ត្រឡប់នៅសីតុណ្ហភាព 100°C រយៈពេល 8 ម៉ោង ត្រង លាងជាមួយអាសេតូន និងសម្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 60°C រយៈពេល 3 ម៉ោង។ បន្ទាប់មក ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលទាក់ទងនឹង PMCP (100 ក្រាម) ត្រូវបានរំលាយក្នុង toluene (200 មីលីលីត្រ) ហើយ 4-hydroxy-TEMPO (2 មីលីលីត្រ) ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងនោះនៅក្នុងវត្តមាននៃ dibutyltin dilaurate 100 μl ជាកាតាលីករ។ ល្បាយនេះត្រូវបានកូរនៅសីតុណ្ហភាព 50°C រយៈពេល 8 ម៉ោង ត្រង និងសម្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 50°C រយៈពេល 3 ម៉ោង។
ស្ទីរ៉ែន (1 មីលីលីត្រ) ប៊េនហ្សូអ៊ីល ប៉េរ៉ុកស៊ីត BPO (0.5 មីលីលីត្រ) និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ទៅនឹង TEMPO-PMCP (1.5 ក្រាម) ត្រូវបានបំបែកនៅក្នុងតូលូអ៊ីន ហើយបន្សុទ្ធដោយអាសូត។ ការធ្វើប៉ូលីមែរនៃស្ទីរ៉ែនត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាព 100°C រយៈពេល 12 ម៉ោង។ ផលិតផលលទ្ធផលត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយមេតាណុល ហើយសម្ងួតពេញមួយយប់នៅសីតុណ្ហភាព 60°C។ គ្រោងការណ៍ទូទៅនៃប្រតិកម្មត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1។
គំរូត្រូវបានបន្សាបឧស្ម័ននៅសីតុណ្ហភាព 393 K រយៈពេល 1 ម៉ោងរហូតដល់សម្ពាធដែលនៅសល់តិចជាង 10–3 Torr ត្រូវបានទទួល។ បរិមាណ N2 ដែលស្រូបយកនៅសម្ពាធទាក់ទង P/P0 = 0.99 ត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់បរិមាណរន្ធញើសសរុប។ រូបរាងនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន ត្រូវបានពិនិត្យដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន (Hitachi High Technologies, តូក្យូ, ជប៉ុន)។ គំរូស្ងួត (ស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន) ត្រូវបានដាក់លើដំបងអាលុយមីញ៉ូមដោយប្រើកាសែតកាបូន។ មាសត្រូវបានដាក់លើគំរូដោយប្រើឧបករណ៍បាញ់ Q150T ហើយស្រទាប់ Au ក្រាស់ 5 nm ត្រូវបានដាក់លើគំរូ។ នេះធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃដំណើរការវ៉ុលទាប និងផ្តល់នូវការបាញ់ត្រជាក់ល្អ។ ការវិភាគធាតុត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគសមាសធាតុធាតុ Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112។ ឧបករណ៍វិភាគទំហំភាគល្អិត Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ត្រូវបានប្រើដើម្បីទទួលបានការចែកចាយទំហំភាគល្អិត។ ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលមិនទាន់ស្រោប និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន (៥ មីលីក្រាមក្នុងមួយៗ) ត្រូវបានបំបែកក្នុងអ៊ីសូប្រូផាណុល ៥ មីលីលីត្រ បញ្ចេញសំឡេងរយៈពេល ១០ នាទី កូររយៈពេល ៥ នាទី ហើយដាក់លើតុអុបទិក Mastersizer។ ការវិភាគទម្ងន់កម្ដៅត្រូវបានអនុវត្តក្នុងអត្រា ៥ អង្សាសេក្នុងមួយនាទីក្នុងចន្លោះសីតុណ្ហភាពពី ៣០ ទៅ ៨០០ អង្សាសេ។
សសរដែកអ៊ីណុកដែលមានរន្ធតូចចង្អៀត និងមានសរសៃកញ្ចក់ ដែលមានទំហំ (ID 100 × 1.8 mm) ត្រូវបានវេចខ្ចប់ដោយវិធីសាស្ត្របំពេញសារធាតុរាវ ដោយអនុវត្តតាមនីតិវិធីដូចគ្នានឹងឯកសារយោង 31។ សសរដែកអ៊ីណុក (ដែលមានសរសៃកញ្ចក់ ID 100 × 1 .8 mm) និងច្រកចេញដែលមានបន្ទះ frit ទំហំ 1 µm ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងម៉ាស៊ីនវេចខ្ចប់សារធាតុរាវ (Alltech Deerfield, IL, USA)។ រៀបចំស៊ុស្ពង់ស្យុងនៃដំណាក់កាលឋិតិវន្តដោយស៊ុស្ពង់ស្យុង 150 mg នៃដំណាក់កាលឋិតិវន្តក្នុងមេតាណុល 1.2 ml ហើយបញ្ចូលវាទៅក្នុងសសរស្តុក។ មេតាណុលត្រូវបានប្រើជាសារធាតុរំលាយសារធាតុរាវ និងជាសារធាតុរំលាយត្រួតពិនិត្យ។ វេចខ្ចប់សសរដោយអនុវត្តលំដាប់សម្ពាធ 100 MP រយៈពេល 10 នាទី 80 MP រយៈពេល 15 នាទី និង 60 MP រយៈពេល 30 នាទី។ ដំណើរការវេចខ្ចប់បានប្រើឧបករណ៍រំញ័រសសរក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីឧស្ម័នពីរ (Alltech, Deerfield, IL, USA) សម្រាប់រំញ័រមេកានិច ដើម្បីធានាបាននូវការវេចខ្ចប់សសរឯកសណ្ឋាន។ បិទឧបករណ៍វេចខ្ចប់សារធាតុរាវ ហើយបញ្ចេញសម្ពាធយឺតៗ ដើម្បីការពារការខូចខាតដល់ខ្សែ។ ជួរឈរ​ត្រូវ​បាន​ផ្ដាច់​ចេញពី​ក្បាល​បង្ហូរ​ទឹក​កខ្វក់ ហើយ​ឧបករណ៍​សម​មួយ​ទៀត​ត្រូវ​បាន​ភ្ជាប់​ទៅ​នឹង​ច្រក​ចូល ហើយ​ភ្ជាប់​ទៅ​ប្រព័ន្ធ LC ដើម្បី​សាកល្បង​ប្រតិបត្តិការ​របស់​វា។
MLC ផ្ទាល់ខ្លួនមួយត្រូវបានសាងសង់ឡើងដោយប្រើស្នប់ LC (10AD Shimadzu ប្រទេសជប៉ុន) ឧបករណ៍យកសំណាកដែលមានរង្វិលជុំចាក់ 50 nL (Valco (USA) C14 W.05) ឧបករណ៍បន្សាបឧស្ម័នភ្នាស (Shimadzu DGU-14A) និងបង្អួចសរសៃឈាម UV-VIS។ ឧបករណ៍ចាប់សញ្ញា (UV-2075) និងមីក្រូជួរឈរដែលស្រោបដោយអេណាមែល។ ប្រើបំពង់ភ្ជាប់តូចចង្អៀត និងខ្លីខ្លាំងដើម្បីកាត់បន្ថយឥទ្ធិពលនៃការពង្រីកជួរឈរបន្ថែម។ បន្ទាប់ពីបំពេញជួរឈររួច សូមដំឡើងសរសៃឈាម (50 µm id 365) នៅច្រកចេញនៃចំណុចប្រសព្វកាត់បន្ថយ 1/16″ ហើយដំឡើងសរសៃឈាម (50 µm) នៃចំណុចប្រសព្វកាត់បន្ថយ។ ការប្រមូលទិន្នន័យ និងដំណើរការក្រូម៉ាតូក្រាមត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើកម្មវិធី Multichro 2000។ នៅ 254 nm ការស្រូបយកកាំរស្មីយូវីនៃវត្ថុវិភាគត្រូវបានត្រួតពិនិត្យនៅ 0។ ទិន្នន័យក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីត្រូវបានវិភាគដោយប្រើ OriginPro8 (Northampton, MA)។
អាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស ម្សៅស្ងួត ≥ 96% (អាហ្គារ៉ូសជែលអេឡិចត្រូផូរីស) 3 មីលីក្រាម លាយជាមួយទ្រីបស៊ីន (1.5 មីលីក្រាម) អ៊ុយរ៉េ 4.0 M (1 មីលីលីត្រ) និងអាម៉ូញ៉ូមប៊ីកាបូណាត 0.2 M (1 មីលីលីត្រ)។ ដំណោះស្រាយត្រូវបានកូររយៈពេល 10 នាទី ហើយរក្សាទុកក្នុងអាងងូតទឹកនៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 6 ម៉ោង បន្ទាប់មកពន្លត់ជាមួយ TFA 0.1% 1 មីលីលីត្រ។ ត្រងដំណោះស្រាយ ហើយរក្សាទុកក្រោម 4°C។
ការបំបែកល្បាយនៃ peptides និង tryptic digest HSA នៅលើជួរឈរ PMP ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយឡែកពីគ្នា។ ពិនិត្យមើល tryptic hydrolysis នៃល្បាយនៃ peptides និង HSA ដែលបំបែកដោយជួរឈរ PMP ហើយប្រៀបធៀបលទ្ធផលជាមួយជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide។ ចំនួនបន្ទះទ្រឹស្តីត្រូវបានគណនាដោយប្រើសមីការដូចខាងក្រោម៖
រូបភាព SEM នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2។ រូបភាព SEM នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ (A, B) បង្ហាញរាងស្វ៊ែរ ដែលភាគល្អិតទាំងនោះមានរាងវែង ឬមានស៊ីមេទ្រីមិនទៀងទាត់ បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង។ ផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ដោយលីហ្គែន (C, D) គឺរលោងជាងផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ ដែលអាចបណ្តាលមកពីខ្សែសង្វាក់ប៉ូលីស្ទីរ៉ែនគ្របដណ្តប់លើផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកា។
មីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេននៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ (A, B) និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន (C, D)។
ការចែកចាយទំហំភាគល្អិតនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយសារធាតុ ligand ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2.3(ក)។ ខ្សែកោងចែកចាយទំហំភាគល្អិតបរិមាណបានបង្ហាញថាទំហំភាគល្អិតស៊ីលីកាបានកើនឡើងបន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមី (រូបភាពទី 3A)។ ទិន្នន័យចែកចាយទំហំភាគល្អិតស៊ីលីកាពីការសិក្សាបច្ចុប្បន្ន និងការសិក្សាមុនត្រូវបានប្រៀបធៀបនៅក្នុងតារាងទី 1(ក)។ ទំហំភាគល្អិតបរិមាណ d(0.5) នៃ PMP គឺ 3.36 µm បើប្រៀបធៀបទៅនឹងតម្លៃ ad(0.5) 3.05 µm នៅក្នុងការសិក្សាមុនរបស់យើង (ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយប៉ូលីស្ទីរ៉ែន)34។ ដោយសារតែការផ្លាស់ប្តូរសមាមាត្រនៃ PEG, urea, TMOS និងអាស៊ីតអាសេទិកនៅក្នុងល្បាយប្រតិកម្ម ការចែកចាយទំហំភាគល្អិតនៃបាច់នេះគឺតូចចង្អៀតជាងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាមុនរបស់យើង។ ទំហំភាគល្អិតនៃដំណាក់កាល PMP មានទំហំធំជាងបន្តិចជាងដំណាក់កាលភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយប៉ូលីស្ទីរ៉ែនដែលយើងបានសិក្សាពីមុន។ នេះមានន័យថា មុខងារផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាជាមួយស្ទីរ៉ែនបានដាក់តែស្រទាប់ប៉ូលីស្ទីរ៉ែន (0.97 µm) នៅលើផ្ទៃស៊ីលីកា ខណៈពេលដែលនៅក្នុងដំណាក់កាល PMP កម្រាស់ស្រទាប់គឺ 1.38 µm។
ការចែកចាយទំហំភាគល្អិត (ក) និងការចែកចាយទំហំរន្ធញើស (ខ) នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន។
ទំហំរន្ធញើស បរិមាណរន្ធញើស និងផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលប្រើក្នុងការសិក្សានេះត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1 (ខ)។ ទម្រង់ PSD នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែនត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 3(ខ)។ លទ្ធផលគឺអាចប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាមុនរបស់យើង34។ ទំហំរន្ធញើសនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាសុទ្ធ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែនគឺ 310 Å និង 241 Å រៀងគ្នា ដែលបង្ហាញថាបន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមី ទំហំរន្ធញើសបានថយចុះ 69 Å ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1 (ខ) ហើយខ្សែកោងផ្លាស់ប្តូរត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1។ ផ្ទៃជាក់លាក់នៃភាគល្អិតស៊ីលីកានៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្នគឺ 116 m2/g ដែលអាចប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាមុនរបស់យើង (124 m2/g)។ ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1(ខ) ផ្ទៃ (m2/g) នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាបន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមីក៏បានថយចុះពី 116 m2/g មកត្រឹម 105 m2/g ផងដែរ។
លទ្ធផលនៃការវិភាគធាតុនៃដំណាក់កាលស្ថានីត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងតារាងទី 2. មាតិកាកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នគឺ 6.35% ដែលទាបជាងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង (ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលទាក់ទងនឹងប៉ូលីស្ទីរ៉ែន 7.93%35 និង 10.21% រៀងគ្នា) 42. មាតិកាកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នខាងក្រោម ដោយសារសារធាតុផ្សំប៉ូលមួយចំនួនដូចជា phenylmaleimide methyl vinyl isocyanate (PCMP) និង 4-hydroxy-TEMPO ត្រូវបានប្រើប្រាស់បន្ថែមលើ styrene ក្នុងការរៀបចំ SP។ ភាគរយទម្ងន់នៃអាសូតនៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នគឺ 2.21% បើប្រៀបធៀបទៅនឹង 0.1735 និង 0.85% នៅក្នុងការសិក្សាពីមុន 42។ នេះមានន័យថាដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នមានភាគរយទម្ងន់ខ្ពស់នៃអាសូតដោយសារតែ phenylmaleimide។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ ផលិតផល (4) និង (5) មានមាតិកាកាបូន 2.7% និង 2.9% រៀងគ្នា ខណៈពេលដែលផលិតផលចុងក្រោយ (6) មានមាតិកាកាបូន 6.35% ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 2។ ការវិភាគទម្ងន់កម្ដៅដោយកម្ដៅ (TGA) ត្រូវបានប្រើលើដំណាក់កាលស្ថានីនៃ PMP ដើម្បីសាកល្បងការសម្រកទម្ងន់ ហើយខ្សែកោង TGA ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 4។ ខ្សែកោង TGA បង្ហាញពីការសម្រកទម្ងន់ 8.6% ដែលស្របគ្នាយ៉ាងល្អជាមួយនឹងមាតិកាកាបូន (6.35%) ដោយសារសារធាតុចងមិនត្រឹមតែមាន C ប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងមាន N, O និង H ផងដែរ។
លីហ្គែន ហ្វេនីលម៉ាលេអ៊ីមីដ-មេទីលវីនីលអ៊ីសូស៊ីយ៉ាណាត ត្រូវបានជ្រើសរើសដើម្បីកែប្រែផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកា ដោយសារតែក្រុមប៉ូល ហ្វេនីលម៉ាលេអ៊ីមីដ និងវីនីលអ៊ីសូស៊ីយ៉ាណាតរបស់វា។ ក្រុមវីនីលអ៊ីសូស៊ីយ៉ាណាតអាចមានប្រតិកម្មបន្ថែមទៀតជាមួយស្ទីរ៉ែនដោយប្រតិកម្មប៉ូលីមែររ៉ាឌីកាល់រស់។ ហេតុផលទីពីរគឺដើម្បីបញ្ចូលក្រុមដែលមានអន្តរកម្មមធ្យមជាមួយសារធាតុវិភាគ និងគ្មានអន្តរកម្មអេឡិចត្រូស្តាទិចខ្លាំងរវាងសារធាតុវិភាគ និងដំណាក់កាលស្ថានី ដោយសារផ្នែកហ្វេនីលម៉ាលេអ៊ីមីដមិនមានបន្ទុកនិម្មិតនៅ pH ធម្មតា។ ប៉ូលារីតេនៃដំណាក់កាលស្ថានីអាចត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយបរិមាណល្អបំផុតនៃស្ទីរ៉ែន និងពេលវេលាប្រតិកម្មនៃប្រតិកម្មប៉ូលីមែររ៉ាឌីកាល់សេរី។ ជំហានចុងក្រោយនៃប្រតិកម្ម (ប្រតិកម្មប៉ូលីមែររ៉ាឌីកាល់សេរី) គឺមានសារៈសំខាន់ព្រោះវាផ្លាស់ប្តូរប៉ូលារីតេនៃដំណាក់កាលស្ថានី។ ការវិភាគធាតុត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីពិនិត្យមើលមាតិកាកាបូននៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីទាំងនេះ។ វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថា ការបង្កើនបរិមាណស្ទីរ៉ែន និងពេលវេលាប្រតិកម្មបង្កើនមាតិកាកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានី និងច្រាសមកវិញ។ SPs ដែលរៀបចំជាមួយនឹងកំហាប់ផ្សេងៗគ្នានៃស្ទីរ៉ែនមានបន្ទុកកាបូនខុសៗគ្នា។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ ដំណាក់កាលឋិតិវន្តទាំងនេះត្រូវបានដាក់នៅលើសសរដែកអ៊ីណុក ហើយលក្ខណៈក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបស់វា (ការជ្រើសរើស កម្រិតភាពច្បាស់ តម្លៃ N ជាដើម) ត្រូវបានត្រួតពិនិត្យ។ ដោយផ្អែកលើការពិសោធន៍ទាំងនេះ សមាសធាតុដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងសម្រាប់ការរៀបចំដំណាក់កាលឋិតិវន្ត PMP ត្រូវបានជ្រើសរើសដើម្បីផ្តល់នូវប៉ូលារីតេដែលបានគ្រប់គ្រង និងការរក្សាសារធាតុវិភាគបានល្អ។
ជួរឈរ PMP ក៏ត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការវិភាគល្បាយប៉ិបទីតចំនួនប្រាំ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) ដោយប្រើសមត្ថភាពនៃដំណាក់កាលចល័ត។ 60/40 (v/v) ACN/ទឹក (0.1% TFA) ក្នុងអត្រាលំហូរ 80 µl/នាទី។ ក្រោមលក្ខខណ្ឌ elution ល្អបំផុត (200,000 បន្ទះ/ម៉ែត្រ) ចំនួនបន្ទះទ្រឹស្តី (N) ក្នុងមួយជួរឈរ (100 × 1.8 ម.ម) គឺ 20,000 ± 100។ តម្លៃ N សម្រាប់ជួរឈរ PMP ទាំងបីត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 3 ហើយក្រូម៉ាតូក្រាមត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 5A។ ការវិភាគលឿនក្នុងអត្រាលំហូរខ្ពស់ (700 µl/នាទី) លើជួរឈរ PMP ប៉ិបទីតចំនួនប្រាំត្រូវបានបញ្ចេញក្នុងរយៈពេលមួយនាទី តម្លៃ N ល្អឥតខ្ចោះ 13,500 ± 330 ក្នុងមួយជួរឈរ (អង្កត់ផ្ចិត 100 x 1.8 ម.ម) ស្មើនឹង 135,000 បន្ទះ/ម.ម (រូបភាពទី 5B)។ ជួរឈរបីដែលមានទំហំដូចគ្នា (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 x 1.8 ម.ម) ត្រូវបានបំពេញដោយដំណាក់កាលស្ថានី PMP ចំនួនបីផ្សេងគ្នា ដើម្បីសាកល្បងភាពអាចបង្កើតឡើងវិញបាន។ សារធាតុវិភាគត្រូវបានកត់ត្រាសម្រាប់ជួរឈរនីមួយៗ ដោយបំបែកល្បាយសាកល្បងដូចគ្នានៅលើជួរឈរនីមួយៗ ដោយប្រើលក្ខខណ្ឌអេឡិចត្រុងល្អបំផុត ចំនួនបន្ទះទ្រឹស្តី N និងពេលវេលារក្សាទុក។ ទិន្នន័យភាពអាចបង្កើតឡើងវិញសម្រាប់ជួរឈរ PMP ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 4។ ភាពអាចបង្កើតឡើងវិញនៃជួរឈរ PMP មានទំនាក់ទំនងល្អជាមួយតម្លៃ %RSD ទាបខ្លាំង ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 3។
ការបំបែកល្បាយ peptide នៅលើជួរឈរ PMP (B) និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (A) ដំណាក់កាលចល័ត 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%) វិមាត្រជួរឈរ PMP (100 x 1.8 mm id) ការវិភាគលំដាប់ Elution នៃសមាសធាតុ៖ 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) និង 5 (អាស៊ីត leucic enkephalin)។
ជួរឈរ PMP (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 x 1.8 ម.ម) ត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែក tryptic hydrolyzate នៃអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្សដោយ HPLC។ chromatogram ក្នុងរូបភាពទី 6 បង្ហាញថាគំរូត្រូវបានបំបែកយ៉ាងល្អជាមួយនឹងគុណភាពបង្ហាញល្អណាស់។ ដំណោះស្រាយ HSA ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើអត្រាលំហូរ 100 μl/នាទី ដំណាក់កាលចល័ត 70/30 acetonitrile/ទឹក និង 0.1% TFA។ ការបំបែក HSA ត្រូវបានបែងចែកជា 17 កំពូល ដូចបង្ហាញក្នុង chromatogram (រូបភាពទី 6) ដែលត្រូវគ្នានឹង peptide ចំនួន 17។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃកំពូលនីមួយៗពី HSA hydrolyzate ត្រូវបានគណនា ហើយតម្លៃត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 5។
សារធាតុ​ចម្រាញ់​ទ្រីបទិក HSA ត្រូវ​បាន​បំបែក​នៅ​លើ​ជួរឈរ PMP (អង្កត់ផ្ចិត​ខាងក្នុង 100 x 1.8 ម.ម) អត្រា​លំហូរ (100 μl/នាទី) ដំណាក់កាល​ចល័ត 60/40 អាសេតូនីទ្រីល/ទឹក និង TFA 0.1%។
ដែល L ជាប្រវែងជួរឈរ, η ជា viscosity នៃដំណាក់កាលចល័ត, ΔP ជាសម្ពាធខាងក្រោយនៃជួរឈរ, និង u ជាល្បឿនលីនេអ៊ែរនៃដំណាក់កាលចល័ត។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរ PMP គឺ 2.5 × 10–14 m2, អត្រាលំហូរគឺ 25 µl/នាទី, 60/40 v/v ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ ACN/ទឹក។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរ PMP (ID 100 × 1.8 mm) គឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងការសិក្សា Ref.34 មុនរបស់យើង។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយភាគល្អិត porous គឺ 1.7 × 10 .6 µm, 2.5 × 10-14 m2 សម្រាប់ភាគល្អិត 5 µm43។ ដូច្នេះ ភាពជ្រាបចូលនៃដំណាក់កាល PMP គឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងភាពជ្រាបចូលនៃភាគល្អិត core-shell ដែលមានទំហំ 5 μm។
ដែល Wx ជាម៉ាស់នៃជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយក្លរ៉ូហ្វម Wy ជាម៉ាស់នៃជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយមេតាណុល និង ρ ជាដង់ស៊ីតេនៃសារធាតុរំលាយ។ ដង់ស៊ីតេនៃមេតាណុល (ρ = 0.7866) និងក្លរ៉ូហ្វម (ρ = 1.484)។ ភាពរលុងសរុបនៃជួរឈរភាគល្អិតស៊ីលីកា-C18 (100 × 1.8 mm ID)34 និងជួរឈរ C18-urea31 ដែលយើងបានសិក្សាពីមុនគឺ 0.63 និង 0.55 រៀងគ្នា។ នេះមានន័យថាវត្តមាននៃសារធាតុភ្ជាប់អ៊ុយរ៉េកាត់បន្ថយភាពជ្រាបចូលនៃដំណាក់កាលស្ថានី។ ម្យ៉ាងវិញទៀត ភាពរលុងសរុបនៃជួរឈរ PMP (អង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 100 × 1.8 mm) គឺ 0.60។ ជួរឈរ PMP មានភាពជ្រាបចូលតិចជាងជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយ C18 ពីព្រោះនៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីប្រភេទ C18 សារធាតុភ្ជាប់ C18 ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងភាគល្អិតស៊ីលីកានៅក្នុងខ្សែសង្វាក់លីនេអ៊ែរ ខណៈពេលដែលនៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីប្រភេទប៉ូលីស្ទីរ៉ែន សារធាតុប៉ូលីមែរក្រាស់ល្មមត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅជុំវិញភាគល្អិត។ ស្រទាប់ A។ នៅក្នុងការពិសោធន៍ធម្មតាមួយ ភាពរលុងនៃជួរឈរត្រូវបានគណនាដូចខាងក្រោម៖
នៅលើរូបភាពទី 7A, B បង្ហាញដ្យាក្រាម Van Deemter សម្រាប់ជួរឈរ PMP (ទំហំ 100 x 1.8 mm) និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (ទំហំ 100 x 1.8 mm) ក្រោមលក្ខខណ្ឌ elution ដូចគ្នា 60/40 ACN/H2O និង 0 .1% TFA 20 µl/នាទី ដល់ 800 µl/នាទី លើជួរឈរទាំងពីរ។ តម្លៃ HETP អប្បបរមា នៅអត្រាលំហូរល្អបំផុត (80 µl/នាទី) គឺ 2.6 µm និង 3.9 µm សម្រាប់ជួរឈរ PMP និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide រៀងៗខ្លួន។ តម្លៃ HETP បង្ហាញថាប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃជួរឈរ PMP (ទំហំ 100 x 1.8 mm) គឺខ្ពស់ជាងប្រសិទ្ធភាពនៃជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (ទំហំ 100 x 1.8 mm) ដែលមានលក់នៅលើទីផ្សារ។ ក្រាហ្វ van Deemter ក្នុងរូបភាពទី 7(ក) បង្ហាញថាការថយចុះនៃតម្លៃ N មិនខ្ពស់ជាងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃលំហូរបើប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកខ្ពស់ជាងនៃជួរឈរ PMP (id 100 × 1.8 mm) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide គឺផ្អែកលើរូបរាង និងទំហំភាគល្អិតដែលប្រសើរឡើង និងនីតិវិធីវេចខ្ចប់ជួរឈរដ៏ទំនើបដែលប្រើក្នុងការងារបច្ចុប្បន្ន34។
(ក) គំនូសតាង Van Deemter (HETP ទល់នឹង ល្បឿនលីនេអ៊ែរដំណាក់កាលចល័ត) ដែលទទួលបាននៅលើជួរឈរ PMP (ទំហំ 100 x 1.8 mm) ក្នុង 60/40 ACN/H2O ជាមួយ 0.1% TFA។ (ខ) គំនូសតាង Van Deemter (HETP ទល់នឹង ល្បឿនលីនេអ៊ែរដំណាក់កាលចល័ត) ដែលទទួលបាននៅលើជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (ទំហំ 100 x 1.8 mm) ក្នុង 60/40 ACN/H2O ជាមួយ 0.1% TFA។
ដំណាក់កាលឋិតិវន្តប៉ូលានៃប៉ូលីស្ទីរ៉ែនអន្តរកាលត្រូវបានរៀបចំ និងវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកល្បាយនៃប៉ិបទីតសំយោគ និងទ្រីបទីកអ៊ីដ្រូលីហ្សាតនៃអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HSA) នៅក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណើរការខ្ពស់។ ការអនុវត្តក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីនៃជួរឈរ PMP សម្រាប់ល្បាយប៉ិបទីកគឺល្អឥតខ្ចោះទាក់ទងនឹងប្រសិទ្ធភាពបំបែក និងគុណភាពបង្ហាញ។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកដែលប្រសើរឡើងនៃជួរឈរ PMP គឺដោយសារតែហេតុផលជាច្រើនដូចជាទំហំភាគល្អិតស៊ីលីកា និងទំហំរន្ធញើស ការសំយោគដែលបានគ្រប់គ្រងនៃដំណាក់កាលឋិតិវន្ត និងសម្ភារៈវេចខ្ចប់ជួរឈរស្មុគស្មាញ។ បន្ថែមពីលើប្រសិទ្ធភាពបំបែកខ្ពស់ គុណសម្បត្តិមួយទៀតនៃដំណាក់កាលឋិតិវន្តនេះគឺសម្ពាធត្រឡប់មកវិញជួរឈរទាបនៅអត្រាលំហូរខ្ពស់។ ជួរឈរ PMP អាចបង្កើតឡើងវិញបានខ្ពស់ ហើយអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីវិភាគល្បាយនៃប៉ិបទីក និងការរំលាយទ្រីបទីកនៃប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗ។ យើងមានបំណងប្រើជួរឈរនេះសម្រាប់ការបំបែកសមាសធាតុជីវសកម្មពីផលិតផលធម្មជាតិ សារធាតុចម្រាញ់ពីរុក្ខជាតិឱសថ និងផ្សិតនៅក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវ។ នៅពេលអនាគត ជួរឈរ PMP ក៏នឹងត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកប្រូតេអ៊ីន និងអង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ផងដែរ។
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតលើប្រព័ន្ធបំបែកប៉ិបទីតក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែកទី I៖ ការអភិវឌ្ឍពិធីការសម្រាប់ការកំណត់លក្ខណៈជួរឈរ។ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតលើប្រព័ន្ធបំបែកប៉ិបទីតក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែកទី I៖ ការអភិវឌ្ឍពិធីការសម្រាប់ការកំណត់លក្ខណៈជួរឈរ។Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., និង Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតប្រព័ន្ធបំបែកប៉ិបទីតដោយក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែកទី I៖ ការបង្កើតពិធីការសម្រាប់ការកំណត់លក្ខណៈជួរឈរ។ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតលើប្រព័ន្ធបំបែកប៉ិបទីតក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែកទី I៖ ការអភិវឌ្ឍពិធីការសម្រាប់លក្ខណៈជួរឈរ។ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតលើប្រព័ន្ធបំបែកប៉ិបទីតក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែកទី I៖ ការអភិវឌ្ឍពិធីការសម្រាប់លក្ខណៈជួរឈរ។Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., និង Petersson, P. ការស៊ើបអង្កេតប្រព័ន្ធបំបែកប៉ិបទីតដោយក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែកទី I៖ ការបង្កើតពិធីការសម្រាប់ការកំណត់លក្ខណៈជួរឈរ។J.色谱法。 1603, 113-129។ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019) ។
Gomez, B. et al. វិធីសាស្រ្តសម្រាប់បង្កើត peptides សកម្មដែលប្រសើរឡើងសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺឆ្លង។ ជីវបច្ចេកវិទ្យា។ សមិទ្ធផល 36(2), 415–429។ https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)។
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. និង Khrestchatisky, M. ប៉ិបទីតសំយោគសម្រាប់ព្យាបាល៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។ Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. និង Khrestchatisky, M. ប៉ិបទីតសំយោគសម្រាប់ព្យាបាល៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។Vliege P, Lisowski V, Martinez J និង Chreschatyski M. ប៉ិបទីតព្យាបាលសំយោគ៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។Vliege P, Lisowski V, Martinez J និង Khreschatsky M. ប៉ិបទីត​ព្យាបាល​សំយោគ៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។ ការរកឃើញថ្នាំ។ Today 15 (1–2), 40–56។ https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)។
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវប្រូតេអូមិចកម្រិតខ្ពស់។ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវប្រូតេអូមិចកម្រិតខ្ពស់។សូមមើល F., Smith RD និង Shen Yu។ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវប្រូតេអូមិចកម្រិតខ្ពស់។ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱។ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. សមាសភាពប្រូតេអ៊ីនកម្រិតខ្ពស់液相色谱។សូមមើល F., Smith RD និង Shen Yu។ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវប្រូតេអូមិចកម្រិតខ្ពស់។J. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី។ A 1261, 78–90 (2012)។
Liu, W. et al. វិសាលគមមាត្ររាវកម្រិតខ្ពស់អាចផ្សំមេតាបូឡូមិក និងប្រូតេអូមិកដែលមានមូលដ្ឋានទូលំទូលាយ។ anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019)។
Chesnut, SM & Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។ Chesnut, SM & Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។Chesnut, SM និង Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។Chesnut, SM និង Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។ J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007)។
Wu, N. & Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកយ៉ាងរហ័ស។ Wu, N. & Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកយ៉ាងរហ័ស។Wu, N. និង Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកយ៉ាងរហ័ស។ Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面។ Wu, N. & Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវសម្ពាធខ្ពស់ខ្លាំងសម្រាប់ការបំបែកយ៉ាងរហ័ស។Wu, N. និង Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែកយ៉ាងរហ័ស។J. Sept. វិទ្យាសាស្ត្រ។ 30(8), 1167–1182។ https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)។
Wren, SA និង Tchelitcheff, P. ការប្រើប្រាស់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដែលមានដំណើរការខ្ពស់ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។ Wren, SA និង Tchelitcheff, P. ការប្រើប្រាស់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដែលមានដំណើរការខ្ពស់ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។Ren, SA និង Chelischeff, P. ការប្រើប្រាស់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដែលមានដំណើរការខ្ពស់បំផុតក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។ Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用។ Wren, SA និង Tchelitcheff, P.Ren, SA និង Chelischeff, P. ការអនុវត្តក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដែលមានដំណើរការខ្ពស់ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។J. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី។ 1119(1-2), 140-146។ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)។
Gu, H. et al. អ៊ីដ្រូជែល​ម៉ាក្រូផូរុស​មួយ​ដុំ​ដែល​មាន​ប្រភព​មក​ពី​សារធាតុ emulsion ប្រេង​ក្នុង​ទឹក​ដែល​មាន​ដំណាក់កាល​ខាងក្នុង​ខ្ពស់​សម្រាប់​ការ​បន្សុទ្ធ​មេរោគ​អង់តេរ៉ូវីរុស 71 ប្រកប​ដោយ​ប្រសិទ្ធភាព។ គម្រោង​គីមី។ ទិនានុប្បវត្តិ 401, 126051 (2020)។
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. និង Wilkins, JA តួនាទីរបស់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវក្នុងប្រូតេអូមិច។ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. និង Wilkins, JA តួនាទីរបស់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវក្នុងប្រូតេអូមិច។Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. និង Wilkins, JA តួនាទីរបស់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវក្នុងប្រូតេអូមិច។ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用។ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, J.AShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. និង Wilkins, JA តួនាទីរបស់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវក្នុងប្រូតេអូមិច។J. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី។ A 1053 (1-2), 27-36 (2004)។
ហ្វេកេតេ, អេស., វូទី, ជេ.-អិល. & Guillarme, D. និន្នាការថ្មីនៅក្នុងការបំបែកក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណាក់កាលបញ្ច្រាសនៃប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនព្យាបាល៖ ទ្រឹស្តី និងការអនុវត្ត។ & Guillarme, D. និន្នាការថ្មីនៅក្នុងការបំបែកក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណាក់កាលបញ្ច្រាសនៃប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនព្យាបាល៖ ទ្រឹស្តី និងការអនុវត្ត។ & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной громатой громатой громат фазой: теория និង приложения ។ & Guillarme, D. និន្នាការថ្មីនៅក្នុងការបំបែកប៉ិបទីតព្យាបាល និងប្រូតេអ៊ីនដោយវិធីសាស្ត្រក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណាក់កាលបញ្ច្រាស៖ ទ្រឹស្តី និងការអនុវត្ត។ & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用។ និង ហ្គីឡាម, ឌី.និង Guillarmé, D. និន្នាការថ្មីនៅក្នុងការបំបែក peptide និងប្រូតេអ៊ីនព្យាបាលដោយ chromatography រាវដំណាក់កាលបញ្ច្រាស៖ ទ្រឹស្តី និងការអនុវត្ត។J. Pharm. វិទ្យាសាស្ត្រជីវវេជ្ជសាស្ត្រ. រន្ធគូថ. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ការបំបែក peptides ពីរវិមាត្រដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC ជាមួយនឹង pH ខុសគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយ និងទីពីរ។ Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ការបំបែក peptides ពីរវិមាត្រដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC ជាមួយនឹង pH ខុសគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយ និងទីពីរ។Gilar M., Olivova P., Dali AE និង Gebler JK ការបំបែក peptide ពីរវិមាត្រដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC ជាមួយនឹង pH ខុសគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយ និងទីពីរ។Gilar M., Olivova P., Dali AE និង Gebler JK ការបំបែក peptide ពីរវិមាត្រដោយប្រើតម្លៃ pH ផ្សេងៗគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយ និងទីពីរដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC។ J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. ការស៊ើបអង្កេតលើការផ្ទេរម៉ាស់ និងលក្ខណៈចលនវិទ្យានៃជួរឈរក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដែលមានដំណើរការខ្ពស់ ដែលពោរពេញទៅដោយភាគល្អិត C18 ដែលមានរន្ធញើសពេញលេញ និងមានទំហំតូចជាង 2 µm។ J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020)។
Piovesana, S. et al. និន្នាការថ្មីៗ និងបញ្ហាប្រឈមផ្នែកវិភាគក្នុងការញែក ការកំណត់អត្តសញ្ញាណ និងការផ្ទៀងផ្ទាត់ប៉ិបទីតជីវសកម្មរុក្ខជាតិ។ រន្ធគូថ។ រន្ធគូថរបស់សត្វ។ គីមី។ 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. ទេសភាព​ប្រូតេអូម​នៃ​នគរ​ជីវិត។ ធម្មជាតិ 582 (7813), 592–596។ https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)។
De Luca, K. et al. ការព្យាបាលក្រោយការព្យាបាលនៃ peptide ព្យាបាលដោយ chromatography រាវរៀបចំ។ ម៉ូលេគុល (Basel, ស្វីស) 26(15), 4688 (2021)។
យ៉ាង, វ៉ាយ. និង ហ្គេង, អ៊ិច. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបៀបចម្រុះ និងការអនុវត្តរបស់វាចំពោះជីវប៉ូលីមែរ។ យ៉ាង, វ៉ាយ. និង ហ្គេង, អ៊ិច. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបៀបចម្រុះ និងការអនុវត្តរបស់វាចំពោះជីវប៉ូលីមែរ។យ៉ាង, យូ។ និង ហ្គេង, អ៊ិច. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបៀបចម្រុះ និងការអនុវត្តរបស់វាចំពោះជីវប៉ូលីមែរ។ Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用។ យ៉ាង, វ៉ាយ. និង ហ្គេង, អ៊ិច. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបៀបចម្រុះ និងការអនុវត្តរបស់វានៅក្នុងជីវប៉ូលីមែរ។យ៉ាង, យូ។ និង ហ្សែន, អ៊ិច។ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបៀបចម្រុះ និងការអនុវត្តរបស់វាចំពោះជីវប៉ូលីមែរ។J. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី។ A 1218(49), 8813–8825 (2011)។