Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद. तुम्ही मर्यादित CSS समर्थनासह ब्राउझरची आवृत्ती वापरत आहात. सर्वोत्तम अनुभवासाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही अद्ययावत ब्राउझर वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये कॉम्पॅटिबिलिटी मोड अक्षम करा). याव्यतिरिक्त, सतत समर्थन सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही ही साइट स्टाईल्स आणि जावास्क्रिप्टशिवाय दाखवतो.
एकाच वेळी तीन स्लाईड्सचा कॅरोसेल दाखवतो. एका वेळी तीन स्लाईड्स पुढे जाण्यासाठी 'मागील' आणि 'पुढील' बटणे वापरा, किंवा एका वेळी तीन स्लाईड्स पुढे जाण्यासाठी शेवटी असलेली स्लायडर बटणे वापरा.
विस्तृत-छिद्र कण मिळवण्यासाठी सोल-जेल पद्धतीत काही सुधारणा करून सच्छिद्र सिलिका कण तयार करण्यात आले. या कणांचे रिव्हर्स चेन ट्रान्सफर-फ्रॅगमेंटेशन (RAFT) पॉलिमरायझेशनद्वारे एन-फेनिलमेलिमाइड-मिथाइलविनाइल आयसोसायनेट (PMI) आणि स्टायरिनसह डेरिव्हेटायझेशन करून एन-फेनिलमेलिमाइड इंटरकॅलेटेड पॉलिअमाइड्स स्टायरिन (PMP) स्थिर प्रावस्था तयार करण्यात आली. अरुंद छिद्रांचे स्टेनलेस स्टील स्तंभ (१०० × १.८ मिमी आतील व्यास) स्लरी पॅकिंगने भरण्यात आले. पाच पेप्टाइड्स (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu अमिनो आम्ल एन्केफॅलिन) आणि मानवी सीरम अल्ब्युमिनच्या (HAS) ट्रिप्टिक हायड्रोलायझेटचा समावेश असलेल्या संश्लेषित पेप्टाइड्सच्या मिश्रणाला वेगळे करण्यासाठी PMP स्तंभाच्या क्रोमॅटोग्राफिक कामगिरीचे मूल्यांकन करण्यात आले. इष्टतम इल्युशन परिस्थितीत, पेप्टाइड्सच्या मिश्रणासह प्लेट्सची सैद्धांतिक संख्या २८०,००० प्लेट्स/चौरस मीटर पर्यंत पोहोचली. विकसित कॉलमच्या विलगीकरण कामगिरीची व्यावसायिक Ascentis Express RP-Amide कॉलमशी तुलना केल्यावर, असे दिसून आले की विलगीकरण कार्यक्षमता आणि रिझोल्यूशनच्या बाबतीत PMP कॉलमची विलगीकरण कार्यक्षमता व्यावसायिक कॉलमपेक्षा श्रेष्ठ होती.
बायोफार्मास्युटिकल उद्योग हा अलिकडच्या वर्षांत बाजारपेठेतील हिश्श्यात लक्षणीय वाढ झालेला एक विस्तारणारा जागतिक बाजार बनला आहे. बायोफार्मास्युटिकल उद्योगाच्या प्रचंड वाढीमुळे१,२,३ पेप्टाइड आणि प्रथिने विश्लेषणाची मोठी गरज निर्माण झाली आहे. लक्ष्यित पेप्टाइड व्यतिरिक्त, पेप्टाइड संश्लेषणादरम्यान विविध अशुद्धी तयार होतात, त्यामुळे पेप्टाइडची इच्छित शुद्धता मिळवण्यासाठी क्रोमॅटोग्राफिक शुद्धीकरण आवश्यक असते. शरीरातील द्रव, ऊती आणि पेशींमधील प्रथिनांचे विश्लेषण आणि वैशिष्ट्यीकरण हे एक अत्यंत आव्हानात्मक कार्य आहे, कारण एकाच नमुन्यात मोठ्या संख्येने संभाव्य शोधण्यायोग्य प्रजाती उपस्थित असतात. जरी मास स्पेक्ट्रोमेट्री हे पेप्टाइड आणि प्रथिनांच्या अनुक्रमणासाठी एक प्रभावी साधन असले तरी, जर असे नमुने थेट मास स्पेक्ट्रोमीटरमध्ये टाकले गेले, तर विलगीकरण असमाधानकारक होईल. ही समस्या एमएस विश्लेषणापूर्वी लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (एलसी) करून सोडवली जाऊ शकते, ज्यामुळे एका वेळी मास स्पेक्ट्रोमीटरमध्ये प्रवेश करणाऱ्या विश्लेषकांची मात्रा कमी होईल४,५,६. याव्यतिरिक्त, द्रव प्रावस्था विलगीकरणादरम्यान विश्लेष्य पदार्थ एका अरुंद क्षेत्रात केंद्रित होऊ शकतात, ज्यामुळे हे विश्लेष्य पदार्थ केंद्रित होतात आणि एमएस डिटेक्शनची संवेदनशीलता वाढते. द्रव क्रोमॅटोग्राफी (एलसी) मध्ये गेल्या दशकात लक्षणीय प्रगती झाली आहे आणि प्रोटिओमिक विश्लेषणासाठी ही एक व्यापकपणे वापरली जाणारी पद्धत बनली आहे7,8,9,10.
ऑक्टाडेसिल-मॉडिफाइड सिलिका (ODS) स्थिर प्रावस्था म्हणून वापरून पेप्टाइड्सच्या मिश्रणांचे शुद्धीकरण आणि विलगीकरण करण्यासाठी रिव्हर्स-फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (RP-LC) मोठ्या प्रमाणावर वापरली जाते¹¹,¹²,¹³. तथापि, त्यांच्या जटिल संरचनेमुळे आणि उभयधर्मी स्वरूपामुळे¹⁴,¹⁵, RP स्थिर प्रावस्था पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांचे समाधानकारक विलगीकरण करू शकत नाहीत. म्हणून, ध्रुवीय आणि अध्रुवीय खंडांसह पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या विश्लेषणासाठी, या विश्लेष्यांशी आंतरक्रिया करण्यासाठी आणि त्यांना टिकवून ठेवण्यासाठी विशेषतः डिझाइन केलेल्या स्थिर प्रावस्थांची आवश्यकता असते¹⁶. मिश्र क्रोमॅटोग्राफी, जी बहुविध आंतरक्रिया प्रदान करते, पेप्टाइड्स, प्रथिने आणि इतर जटिल मिश्रणांचे विलगीकरण करण्यासाठी RP-LC ला एक पर्याय असू शकते. अनेक मिश्र-प्रकारच्या स्थिर प्रावस्था तयार केल्या गेल्या आणि या स्थिर प्रावस्थांनी भरलेले स्तंभ पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांचे विलगीकरण करण्यासाठी वापरले गेले¹⁷,¹⁸,¹⁹,²⁰,²¹. ध्रुवीय आणि अध्रुवीय गटांच्या उपस्थितीमुळे, मिश्र पद्धतीचे स्थिर टप्पे (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ध्रुवीय इंटरकॅलेशन/RPLC) पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या विलगिकरणासाठी योग्य आहेत²²,²³,²⁴,²⁵,²⁶,²⁷,²⁸. सहसंयुज बंधांनी जोडलेले ध्रुवीय गट असलेले ध्रुवीय इंटरकॅलेटेड स्थिर टप्पे ध्रुवीय आणि अध्रुवीय विश्लेषकांसाठी चांगली विलगिकरण क्षमता आणि अद्वितीय निवडक्षमता दर्शवतात, कारण विलगिकरण हे विश्लेषक आणि स्थिर टप्प्यामधील आंतरक्रियेवर अवलंबून असते बहुविध आंतरक्रिया²⁹,³⁰,³¹,³². अलीकडेच, झांग आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी³⁰ पॉलिअमाइन्सचे बेहेनिल-टर्मिनेटेड स्थिर टप्पे मिळवले आणि हायड्रोकार्बन्स, अँटीडिप्रेसंट्स, फ्लेव्होनॉइड्स, न्यूक्लियोसाइड्स, इस्ट्रोजेन्स आणि इतर काही विश्लेषकांचे यशस्वीरित्या विलगिकरण केले. ध्रुवीय अंतर्भूत स्थिर पदार्थामध्ये ध्रुवीय आणि अध्रुवीय दोन्ही गट असतात, त्यामुळे त्याचा उपयोग पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांना हायड्रोफोबिक आणि हायड्रोफिलिक भागांमध्ये विलग करण्यासाठी केला जाऊ शकतो. पोलर इनलाइन कॉलम्स (उदा., अमाइड इनलाइन असलेले C18 कॉलम्स) हे Ascentis Express RP-Amide कॉलम्स या व्यापारी नावाने उपलब्ध आहेत, परंतु हे कॉलम्स फक्त अमाइन 33 च्या विश्लेषणासाठी वापरले गेले आहेत.
सध्याच्या अभ्यासात, पेप्टाइड विलगीकरण आणि ट्रिप्टिक HSA क्लीव्हेजसाठी एक ध्रुवीय एम्बेडिंग स्टेशनरी फेज (एन-फेनिलमेलिमाइड, एम्बेडिंग पॉलिस्टीरिन) तयार करून तिचे मूल्यांकन करण्यात आले. स्टेशनरी फेज तयार करण्यासाठी खालील धोरण वापरण्यात आले. आमच्या मागील प्रकाशनांमध्ये वर्णन केलेल्या प्रक्रियांनुसार, तयारी योजना ३१, ३४, ३५, ३६, ३७, ३८, ३९ मध्ये काही बदल करून सच्छिद्र सिलिका कण तयार करण्यात आले. मोठ्या छिद्रांच्या आकाराचे सिलिका कण मिळवण्यासाठी युरिया, पॉलिथिलीन ग्लायकोल (PEG), TMOS आणि जलीय-ऍसिटिक ऍसिड यांचे प्रमाण समायोजित करण्यात आले. दुसरे म्हणजे, एक नवीन फेनिलमेलिमाइड-मिथाइलविनाइल आयसोसायनेट लिगँड संश्लेषित करण्यात आला आणि त्याचे व्युत्पन्न केलेले सिलिका कण ध्रुवीय एम्बेडेड स्टेशनरी फेज तयार करण्यासाठी वापरण्यात आले. प्राप्त झालेली स्टेशनरी फेज एका ऑप्टिमाइझ्ड पॅकिंग योजनेनुसार स्टेनलेस स्टील कॉलममध्ये (आतील व्यास १०० × १.८ मिमी) भरण्यात आली. कॉलममध्ये एकसमान थर सुनिश्चित करण्यासाठी यांत्रिक कंपनाद्वारे कॉलमच्या पॅकिंगला मदत केली जाते. पाच पेप्टाइड्स (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, ल्युसिन-एन्केफालिन पेप्टाइड) आणि मानवी सीरम अल्ब्युमिनच्या (HSA) ट्रिप्टिक हायड्रोलायसेट्सच्या मिश्रणाच्या विलगिकरणासाठी पॅक्ड कॉलमचे मूल्यांकन करण्यात आले. असे दिसून आले की पेप्टाइड मिश्रण आणि HSA ट्रिप्टिक डायजेस्ट चांगल्या रिझोल्यूशन आणि कार्यक्षमतेने वेगळे झाले. PMP कॉलमच्या विलगिकरण कार्यक्षमतेची तुलना Ascentis Express RP-Amide कॉलमच्या कार्यक्षमतेशी करण्यात आली. असे दिसून आले की पेप्टाइड्स आणि प्रथिने PMP कॉलमवर चांगले रिझोल्यूशन आणि उच्च विलगिकरण कार्यक्षमता दर्शवतात, आणि PMP कॉलमची विलगिकरण कार्यक्षमता Ascentis Express RP-Amide कॉलमपेक्षा जास्त आहे.
PEG (पॉलिथिलीन ग्लायकॉल), युरिया, ऍसिटिक ऍसिड, ट्रायमेथॉक्सीऑर्थोसिलिकेट (TMOS), ट्रायमेथिलक्लोरोसिलेन (TMCS), ट्रिप्सिन, ह्युमन सीरम अल्ब्युमिन (HSA), अमोनियम क्लोराईड, युरिया, हेक्झामेथिलमेथॅक्रिलॉयलडायसिलाझेन (HMDS), मेथॅक्रिलॉयल क्लोराईड (MC), स्टायरीन, 4-हायड्रॉक्सी-TEMPO, बेंझॉयल पेरॉक्साइड (BPO), HPLC साठी ऍसिटोनायट्राइल (ACN), मिथेनॉल, 2-प्रोपेनॉल आणि ऍसिटोन. सिग्मा-अल्ड्रिच कंपनी (सेंट लुईस, मिसूरी, यूएसए).
युरिया (८ ग्रॅम), पॉलीएथिलीन ग्लायकॉल (८ ग्रॅम) आणि ०.०१ एन ॲसेटिक ॲसिडचे ८ मिली यांचे मिश्रण १० मिनिटे ढवळण्यात आले आणि बर्फाखाली थंड ठेवून त्यात २४ मिली टीएमओएस (TMOS) टाकण्यात आले. हे अभिक्रिया मिश्रण स्टेनलेस स्टीलच्या ऑटोक्लेव्हमध्ये ४०°C तापमानावर ६ तास आणि नंतर १२०°C तापमानावर ८ तास तापवण्यात आले. पाणी ओतून टाकण्यात आले आणि उरलेला अवशेष ७०°C तापमानावर १२ तास वाळवण्यात आला. वाळवलेले मऊ ठोकळे गुळगुळीत दळण्यात आले आणि ओव्हनमध्ये ५५०°C तापमानावर १२ तास तापवण्यात आले. कणांचा आकार, छिद्रांचा आकार आणि पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ यांच्या पुनरुत्पादकतेची चाचणी करण्यासाठी तीन बॅच तयार करून त्यांचे वैशिष्ट्यीकरण करण्यात आले.
पॉलिस्टीरिन साखळ्यांसाठी ध्रुवीय गट आणि स्थिर अवस्था. तयार करण्याची प्रक्रिया खाली वर्णन केली आहे.
एन-फिनाइलमेलिमाइड (२०० मिग्रॅ) आणि मिथाइल विनाइल आयसोसायनेट (१०० मिग्रॅ) निर्जल टोल्युइनमध्ये विरघळवण्यात आले, आणि नंतर फिनाइलमेलिमाइड आणि मिथाइल विनाइल आयसोसायनेटचा कोपॉलिमर (PMCP) मिळवण्यासाठी अभिक्रिया फ्लास्कमध्ये ०.१ मिली २,२′-अझोइसोब्युटिरोनायट्राइल (AIBN) टाकण्यात आले. हे मिश्रण ६०°C तापमानावर ३ तास ​​तापवण्यात आले, गाळण्यात आले आणि ओव्हनमध्ये ४०°C तापमानावर ३ तास ​​वाळवण्यात आले.
५०० मिलीच्या गोल बुडाच्या फ्लास्कमध्ये, २ ग्रॅम वाळलेले सिलिका कण १०० मिली कोरड्या टोल्युइनमध्ये विखुरले, ढवळले आणि १० मिनिटे सोनिकेट केले. १० मिलीग्रॅम पीएमसीपी टोल्युइनमध्ये विरघळवून, एका अ‍ॅडिशन फनेलद्वारे थेंब-थेंब करून रिॲक्शन फ्लास्कमध्ये टाकण्यात आले. हे मिश्रण १००°C तापमानावर ८ तास रिफ्लक्स केले, गाळले, अ‍ॅसिटोनने धुतले आणि ६०°C तापमानावर ३ तास ​​वाळवले. त्यानंतर, १०० ग्रॅम पीएमसीपीशी संबंधित सिलिका कण २०० मिली टोल्युइनमध्ये विरघळवले आणि उत्प्रेरक म्हणून १०० मायक्रोलिटर डायब्युटिलटिन डायलॉरेटच्या उपस्थितीत त्यात २ मिली ४-हायड्रॉक्सी-टेम्पो टाकण्यात आले. हे मिश्रण ५०°C तापमानावर ८ तास ढवळले, गाळले आणि ५०°C तापमानावर ३ तास ​​वाळवले.
स्टायरिन (१ मिली), बेंझॉयल पेरॉक्साइड (बीपीओ) (०.५ मिली) आणि टेम्पो-पीएमसीपीला जोडलेले सिलिका कण (१.५ ग्रॅम) टोल्युइनमध्ये विखुरले गेले आणि नायट्रोजनने शुद्ध केले गेले. स्टायरिनचे बहुलकीकरण १००°C तापमानावर १२ तास केले गेले. परिणामी उत्पादन मिथेनॉलने धुतले गेले आणि ६०°C तापमानावर रात्रभर वाळवले गेले. अभिक्रियेची सामान्य योजना आकृती एकमध्ये दर्शविली आहे.
१०⁻³ टॉर पेक्षा कमी अवशिष्ट दाब मिळेपर्यंत नमुन्यांमधील वायू ३९३ केल्विन तापमानावर १ तास काढून टाकण्यात आला. एकूण छिद्रांचे आकारमान निश्चित करण्यासाठी, P/P0 = ०.९९ या सापेक्ष दाबावर शोषलेल्या नायट्रोजन (N2) वायूच्या प्रमाणाचा वापर करण्यात आला. शुद्ध आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कणांच्या आकारविज्ञानाची तपासणी स्कॅनिंग इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोप (हिताची हाय टेक्नॉलॉजीज, टोकियो, जपान) वापरून करण्यात आली. कोरडे नमुने (शुद्ध सिलिका आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कण) कार्बन टेप वापरून ॲल्युमिनियमच्या सळ्यांवर ठेवण्यात आले. Q150T स्पटरिंग उपकरणाचा वापर करून नमुन्यावर सोन्याचा थर चढवण्यात आला आणि नमुन्यावर ५ नॅनोमीटर जाडीचा सोन्याचा थर जमा करण्यात आला. यामुळे कमी व्होल्टेज प्रक्रियेची कार्यक्षमता सुधारते आणि उत्तम कोल्ड स्प्रेइंग मिळते. थर्मो इलेक्ट्रॉन (वॉल्थम, एमए, यूएसए) फ्लॅश EA1112 एलिमेन्टल कंपोझिशन ॲनालायझर वापरून मूलद्रव्यीय विश्लेषण करण्यात आले. कणांच्या आकाराचे वितरण मिळवण्यासाठी माल्व्हर्न पार्टिकल साइज ॲनालायझर (वॉर्सेस्टरशायर, यूके) मास्टरसायझर २००० चा वापर करण्यात आला. लेप नसलेले सिलिका कण आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कण (प्रत्येकी ५ मिग्रॅ) ५ मिली आयसोप्रोपेनॉलमध्ये विखुरले गेले, १० मिनिटे सोनिकेट केले गेले, ५ मिनिटे ढवळले गेले आणि मास्टरसायझर ऑप्टिकल बेंचवर ठेवले गेले. थर्मोग्रॅव्हिमेट्रिक विश्लेषण ३० ते ८०० °C तापमानाच्या श्रेणीत, प्रति मिनिट ५ °C च्या दराने केले जाते.
संदर्भ ३१ मध्ये दिलेल्या प्रक्रियेनुसारच, ग्लास फायबरने अस्तरित केलेले आणि अरुंद छिद्राचे (ID 100 × 1.8 mm) स्टेनलेस स्टीलचे कॉलम स्लरी फिलिंग पद्धतीने भरण्यात आले. स्टेनलेस स्टीलचा कॉलम (ग्लास लाइन्ड, ID 100 × 1.8 mm) आणि १ µm फ्रिट असलेले एक आउटलेट स्लरी पॅकेजिंग मशीनला (ऑलटेक डियरफील्ड, IL, USA) जोडण्यात आले. १५० मिग्रॅ स्टेशनरी फेज १.२ मिली मिथेनॉलमध्ये निलंबित करून आणि ते एका रिझर्व्हॉयर कॉलममध्ये भरून स्टेशनरी फेजचे निलंबन तयार करा. मिथेनॉलचा वापर स्लरी सॉल्व्हेंट आणि कंट्रोल सॉल्व्हेंट म्हणून करण्यात आला. १० मिनिटांसाठी १०० MP, १५ मिनिटांसाठी ८० MP आणि ३० मिनिटांसाठी ६० MP या दाबांच्या क्रमाने कॉलम भरा. कॉलममध्ये एकसमान पॅकिंग सुनिश्चित करण्यासाठी, पॅकिंग प्रक्रियेत यांत्रिक कंपनासाठी दोन गॅस क्रोमॅटोग्राफी कॉलम व्हायब्रेटर्सचा (ऑलटेक, डियरफील्ड, IL, USA) वापर करण्यात आला. स्ट्रिंगचे नुकसान टाळण्यासाठी स्लरी पॅकर बंद करा आणि दाब हळूहळू कमी करा. कॉलम स्लरी नोजलपासून वेगळा करण्यात आला आणि त्याच्या कार्यप्रणालीची चाचणी घेण्यासाठी इनलेटला दुसरे फिटिंग जोडून ते एलसी सिस्टीमशी जोडण्यात आले.
एलसी पंप (10AD शिमात्झू, जपान), 50 nL इंजेक्शन लूप असलेला सॅम्पलर (वाल्को (यूएसए) C14 W.05), एक मेंब्रेन डिगॅसर (शिमात्झू DGU-14A), आणि एक UV-VIS कॅपिलरी विंडो वापरून एक कस्टम एमएलसी तयार करण्यात आला. डिटेक्टर डिव्हाइस (UV-2075) आणि इनॅमल्ड मायक्रोकॉलम. कॉलमच्या अतिरिक्त प्रसरणाचा परिणाम कमी करण्यासाठी अत्यंत अरुंद आणि लहान कनेक्टिंग ट्यूब वापरा. ​​कॉलम भरल्यानंतर, 1/16″ रिड्यूसिंग जंक्शनच्या आउटलेटवर एक कॅपिलरी (50 µm id 365) आणि रिड्यूसिंग जंक्शनवर एक कॅपिलरी (50 µm) स्थापित करा. डेटा संकलन आणि क्रोमॅटोग्राम प्रक्रिया मल्टीक्रो 2000 सॉफ्टवेअर वापरून केली जाते. 254 nm वर, विषय विश्लेषकांच्या UV शोषणाचे निरीक्षण 0 वर केले गेले. क्रोमॅटोग्राफिक डेटाचे विश्लेषण ओरिजिनप्रो8 (नॉर्थहॅम्प्टन, एमए) वापरून केले गेले.
मानवी सीरम अल्ब्युमिन, लायोफिलाइज्ड पावडर, ≥ ९६% (ॲगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस) ३ मिग्रॅ, ट्रायप्सिन (१.५ मिग्रॅ), ४.० एम युरिया (१ मिली) आणि ०.२ एम अमोनियम बायकार्बोनेट (१ मिली) मध्ये मिसळले. हे द्रावण १० मिनिटे ढवळले आणि ३७°C तापमानाच्या वॉटर बाथमध्ये ६ तास ठेवले, त्यानंतर ०.१% TFA च्या १ मिलीने अभिक्रिया थांबवली. द्रावण गाळून घ्या आणि ४°C पेक्षा कमी तापमानात साठवा.
PMP कॉलमवर पेप्टाइड्स आणि ट्रिप्टिक डायजेस्ट HSA यांच्या मिश्रणाच्या विलगीकरणाचे स्वतंत्रपणे मूल्यांकन केले गेले. PMP कॉलमद्वारे विलगीकृत केलेल्या पेप्टाइड्स आणि HSA यांच्या मिश्रणाच्या ट्रिप्टिक हायड्रोलिसिसची तपासणी करा आणि निकालांची तुलना Ascentis Express RP-Amide कॉलमशी करा. सैद्धांतिक प्लेट्सची संख्या खालील समीकरणाचा वापर करून मोजली जाते:
शुद्ध सिलिका कण आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कणांच्या SEM प्रतिमा आकृती २ मध्ये दर्शविल्या आहेत. शुद्ध सिलिका कणांच्या SEM प्रतिमा (A, B) गोलाकार आकार दर्शवतात, ज्यामध्ये आमच्या पूर्वीच्या अभ्यासाच्या तुलनेत कण लांबट किंवा अनियमित सममिती असलेले आहेत. लिगँडने बद्ध असलेल्या सिलिका कणांचा पृष्ठभाग (C, D) शुद्ध सिलिका कणांपेक्षा अधिक गुळगुळीत आहे, जे सिलिका कणांच्या पृष्ठभागाला आच्छादणाऱ्या पॉलिस्टीरिन साखळ्यांमुळे असू शकते.
शुद्ध सिलिका कणांचे (A, B) आणि लिगँड बद्ध सिलिका कणांचे (C, D) स्कॅनिंग इलेक्ट्रॉन मायक्रोग्राफ.
शुद्ध सिलिका कण आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कणांचे आकार वितरण आकृती २.३(अ) मध्ये दाखवले आहे. व्हॉल्यूमेट्रिक कण आकार वितरण वक्रांवरून असे दिसून आले की रासायनिक बदलानंतर सिलिका कणांचा आकार वाढला (आकृती ३अ). सध्याच्या अभ्यासातील आणि मागील अभ्यासातील सिलिका कण आकार वितरणाच्या माहितीची तुलना तक्ता १(अ) मध्ये केली आहे. आमच्या मागील अभ्यासात (पॉलिस्टीरिन-बद्ध सिलिका कण)३४ मध्ये आढळलेल्या ३.०५ µm च्या ad(0.5) मूल्याच्या तुलनेत, PMP चा व्हॉल्यूमेट्रिक कण आकार d(0.5) ३.३६ µm होता. अभिक्रिया मिश्रणातील PEG, युरिया, TMOS आणि ॲसेटिक ॲसिडच्या गुणोत्तरात बदल झाल्यामुळे, आमच्या मागील अभ्यासाच्या तुलनेत या बॅचचे कण आकार वितरण अधिक संकुचित होते. PMP फेजचा कण आकार, आम्ही पूर्वी अभ्यासलेल्या पॉलिस्टीरिन-बद्ध सिलिका कण फेजच्या कण आकारापेक्षा किंचित मोठा आहे. याचा अर्थ असा की स्टायरिनसह सिलिका कणांच्या पृष्ठभागाच्या कार्यात्मकीकरणामुळे सिलिका पृष्ठभागावर फक्त पॉलिस्टायरिनचा थर (0.97 µm) जमा झाला, तर PMP अवस्थेमध्ये थराची जाडी 1.38 µm होती.
शुद्ध सिलिका कण आणि लिगँड बद्ध सिलिका कणांचे कण आकार वितरण (A) आणि छिद्र आकार वितरण (B).
या अभ्यासात वापरलेल्या सिलिका कणांचे छिद्रांचे आकारमान, छिद्रांचे घनफळ आणि पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ तक्ता १ (ब) मध्ये दर्शविले आहे. शुद्ध सिलिका कण आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कणांचे PSD प्रोफाइल आकृती ३ (ब) मध्ये दर्शविले आहेत. हे परिणाम आमच्या मागील अभ्यासाशी³⁴ तुलनात्मक होते. शुद्ध आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कणांच्या छिद्रांचे आकारमान अनुक्रमे ३१० Å आणि २४१ Å होते, जे दर्शवते की रासायनिक बदलानंतर, छिद्रांचे आकारमान ६९ Å ने कमी झाले, जसे तक्ता १ (ब) मध्ये दर्शविले आहे, आणि शिफ्ट वक्र आकृतीमध्ये दर्शविला आहे. सध्याच्या अभ्यासातील सिलिका कणांचे विशिष्ट पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ ११६ m²/g आहे, जे आमच्या मागील अभ्यासाशी (१२४ m²/g) तुलनात्मक आहे. तक्ता १ (ब) मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, रासायनिक बदलानंतर सिलिका कणांचे पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ (m²/g) देखील ११६ m²/g वरून १०५ m²/g पर्यंत कमी झाले.
स्थिर अवस्थेच्या मूलद्रव्य विश्लेषणाचे परिणाम तक्ता २ मध्ये सादर केले आहेत. सध्याच्या स्थिर अवस्थेतील कार्बनचे प्रमाण ६.३५% आहे, जे आमच्या मागील अभ्यासापेक्षा (पॉलिस्टायरीनशी संबंधित सिलिका कण, अनुक्रमे ७.९३% आणि १०.२१%) कमी आहे. SP च्या निर्मितीमध्ये स्टायरीन व्यतिरिक्त फेनिलमेलिमाइड मिथाइल विनाइल आयसोसायनेट (PCMP) आणि ४-हायड्रॉक्सी-TEMPO सारखे काही ध्रुवीय लिगँड्स वापरल्यामुळे सध्याच्या स्थिर अवस्थेतील कार्बनचे प्रमाण कमी आहे. सध्याच्या स्थिर अवस्थेतील नायट्रोजनची वजनी टक्केवारी २.२१% आहे, जी मागील अभ्यासांमधील ०.१७% आणि ०.८५% च्या तुलनेत आहे. याचा अर्थ असा की फेनिलमेलिमाइडमुळे सध्याच्या स्थिर अवस्थेत नायट्रोजनची वजनी टक्केवारी जास्त आहे. त्याचप्रमाणे, उत्पादने (4) आणि (5) मध्ये कार्बनचे प्रमाण अनुक्रमे 2.7% आणि 2.9% आहे, तर अंतिम उत्पादन (6) मध्ये कार्बनचे प्रमाण 6.35% आहे, जसे तक्ता 2 मध्ये दाखवले आहे. वजन घट तपासण्यासाठी PMP च्या स्थिर टप्प्यावर थर्मोग्रॅव्हिमेट्रिक विश्लेषण (TGA) वापरले गेले आणि TGA वक्र आकृती 4 मध्ये दाखवला आहे. TGA वक्र 8.6% वजन घट दर्शवतो, जे कार्बनच्या प्रमाणाशी (6.35%) सुसंगत आहे, कारण लिगँड्समध्ये केवळ C च नाही, तर N, O आणि H देखील असतात.
सिलिका कणांच्या पृष्ठभागात बदल करण्यासाठी फेनिलमेलिमाइड-मिथाइलविनाइल आयसोसायनेट या लिगँडची निवड करण्यात आली, कारण त्यात ध्रुवीय फेनिलमेलिमाइड आणि विनाइलआयसोसायनेट गट असतात. विनाइल आयसोसायनेट गट लिव्हिंग रॅडिकल पॉलिमरायझेशनद्वारे स्टायरीनसोबत पुढे अभिक्रिया करू शकतात. दुसरे कारण म्हणजे असा गट समाविष्ट करणे, ज्याची विश्लेषकासोबत मध्यम आंतरक्रिया होते आणि विश्लेषक व स्थिर प्रावस्था यांच्यात कोणतीही तीव्र स्थिरविद्युत आंतरक्रिया होत नाही, कारण सामान्य pH वर फेनिलमेलिमाइड भागावर कोणताही आभासी प्रभार नसतो. स्थिर प्रावस्थेची ध्रुवीयता स्टायरीनचे इष्टतम प्रमाण आणि मुक्त रॅडिकल पॉलिमरायझेशनच्या अभिक्रियेच्या वेळेनुसार नियंत्रित केली जाऊ शकते. अभिक्रियेचा अंतिम टप्पा (मुक्त रॅडिकल पॉलिमरायझेशन) महत्त्वपूर्ण आहे, कारण तो स्थिर प्रावस्थेची ध्रुवीयता बदलतो. या स्थिर प्रावस्थांमधील कार्बनचे प्रमाण तपासण्यासाठी मूलद्रव्यीय विश्लेषण करण्यात आले. असे दिसून आले आहे की, स्टायरीनचे प्रमाण आणि अभिक्रियेची वेळ वाढवल्यास स्थिर प्रावस्थेतील कार्बनचे प्रमाण वाढते आणि याउलटही घडते. स्टायरीनच्या वेगवेगळ्या सांद्रतेसह तयार केलेल्या स्थिर प्रावस्थांमध्ये कार्बनचे प्रमाण वेगवेगळे असते. त्याचप्रमाणे, हे स्थिर टप्पे स्टेनलेस स्टीलच्या स्तंभांवर ठेवण्यात आले आणि त्यांची क्रोमॅटोग्राफिक वैशिष्ट्ये (निवडक्षमता, विभेदन, N मूल्य, इत्यादी) तपासण्यात आली. या प्रयोगांच्या आधारे, विश्लेष्याची नियंत्रित ध्रुवीयता आणि चांगले धारणा प्रदान करण्यासाठी PMP स्थिर टप्प्याच्या तयारीसाठी एक अनुकूलित रचना निवडण्यात आली.
मोबाइल फेजच्या क्षमतेचा वापर करून, 60/40 (v/v) ACN/पाणी (0.1% TFA) 80 µl/min च्या प्रवाह दराने, पेप्टाइड्सच्या पाच मिश्रणांच्या (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, ल्युसिन-एन्केफॅलिन) विश्लेषणासाठी PMP कॉलमचे मूल्यांकन देखील करण्यात आले. इष्टतम इल्युशन परिस्थितीत (200,000 प्लेट्स/मी), प्रति कॉलम (100 × 1.8 मिमी) सैद्धांतिक प्लेट्सची संख्या (N) 20,000 ± 100 आहे. तीन PMP कॉलम्ससाठी N ची मूल्ये तक्ता 3 मध्ये दर्शविली आहेत आणि क्रोमॅटोग्राम आकृती 5A मध्ये दर्शविले आहेत. PMP कॉलमवर उच्च प्रवाह दराने (७०० µl/min) जलद विश्लेषण केले असता, एका मिनिटात पाच पेप्टाइड्स बाहेर पडले, प्रति कॉलम (१०० x १.८ मिमी व्यास) १३,५०० ± ३३० चे उत्कृष्ट N मूल्य मिळाले, जे १,३५,००० प्लेट्स/मी च्या समतुल्य आहे (आकृती ५B). पुनरुत्पादकता तपासण्यासाठी, एकाच आकाराचे (आतील व्यास १०० x १.८ मिमी) तीन कॉलम PMP स्टेशनरी फेजच्या तीन वेगवेगळ्या बॅचेसने भरण्यात आले. प्रत्येक कॉलमवर इष्टतम इल्युशन परिस्थिती, सैद्धांतिक प्लेट्सची संख्या N, आणि रिटेन्शन टाइम वापरून समान चाचणी मिश्रण वेगळे करून प्रत्येक कॉलमसाठी विश्लेषकांची नोंद केली गेली. PMP कॉलमसाठी पुनरुत्पादकतेचा डेटा तक्ता ४ मध्ये दर्शविला आहे. तक्ता ३ मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, PMP कॉलमची पुनरुत्पादकता अत्यंत कमी %RSD मूल्यांशी चांगल्या प्रकारे जुळली.
PMP कॉलम (B) ​​आणि एसेन्टिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलम (A) वर पेप्टाइड मिश्रणांचे विलगीकरण, मोबाइल फेज 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP कॉलमचे आकारमान (100 x 1.8 मिमी आयडी), विश्लेषण संयुगांचा इल्युशन क्रम: 1 (ग्लाय-टायर), 2 (ग्लाय-ल्यू-टायर), 3 (ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग), 4 (टायर-आयले-ग्लाय-सेर-आर्ग) आणि 5 (ल्यूसिक अॅसिड एन्केफॅलिन).
HPLC द्वारे मानवी सीरम अल्ब्युमिनच्या ट्रिप्टिक हायड्रोलायझेटच्या विलगिकरणासाठी एका PMP कॉलमचे (आतील व्यास 100 x 1.8 मिमी) मूल्यांकन करण्यात आले. आकृती 6 मधील क्रोमॅटोग्राम दर्शवितो की नमुने अतिशय चांगल्या रिझोल्यूशनसह सुस्पष्टपणे वेगळे झाले आहेत. HSA द्रावणांचे विश्लेषण 100 μl/min च्या प्रवाह दराने, 70/30 ॲसिटोनायट्राइल/पाणी या मोबाइल फेज आणि 0.1% TFA वापरून करण्यात आले. क्रोमॅटोग्राममध्ये (आकृती 6) दर्शविल्याप्रमाणे, HSA चे क्लीव्हेज 17 शिखरांमध्ये विभागले गेले, जे 17 पेप्टाइड्सशी संबंधित आहेत. HSA हायड्रोलायझेटमधून प्रत्येक शिखराच्या विलगिकरण कार्यक्षमतेची गणना करण्यात आली आणि ही मूल्ये तक्ता 5 मध्ये दर्शविली आहेत.
HSA ट्रिप्टिक हायड्रोलायसेट्स PMP कॉलम (आतील व्यास 100 x 1.8 मिमी), प्रवाह दर (100 μl/मिनिट), मोबाइल फेज 60/40 ॲसिटोनाइट्राइल/पाणी, आणि 0.1% TFA वर वेगळे केले गेले.
येथे L ही कॉलमची लांबी आहे, η ही मोबाइल फेजची स्निग्धता आहे, ΔP हा कॉलमचा बॅक प्रेशर आहे आणि u हा मोबाइल फेजचा रेखीय वेग आहे. PMP कॉलमची पारगम्यता 2.5 × 10–14 m2 होती, प्रवाह दर 25 µl/min होता, 60/40 v/v ACN/पाणी वापरले गेले. PMP कॉलमची (ID 100 × 1.8 mm) पारगम्यता आमच्या मागील संदर्भ34 अभ्यासासारखीच होती. पृष्ठभागावर सच्छिद्र कणांनी भरलेल्या कॉलमची पारगम्यता 1.7×10.6 µm, 5 µm कणांसाठी 2.5×10-14 m2 आहे43. म्हणून, PMP फेजची पारगम्यता 5 μm आकाराच्या कोर-शेल कणांच्या पारगम्यतेसारखी आहे.
येथे Wx हे क्लोरोफॉर्मने भरलेल्या कॉलमचे वस्तुमान आहे, Wy हे मिथेनॉलने भरलेल्या कॉलमचे वस्तुमान आहे आणि ρ ही द्रावकाची घनता आहे. मिथेनॉलची घनता (ρ = 0.7866) आणि क्लोरोफॉर्मची घनता (ρ = 1.484). सिलिका-C18 कण कॉलम (100 × 1.8 मिमी ID)34 आणि आमच्या पूर्वी अभ्यासलेल्या C18-युरिया31 कॉलमची एकूण सच्छिद्रता अनुक्रमे 0.63 आणि 0.55 होती. याचा अर्थ असा की युरिया लिगँड्सच्या उपस्थितीमुळे स्थिर अवस्थेची पारगम्यता कमी होते. दुसरीकडे, PMP कॉलमची (आतील व्यास 100 × 1.8 मिमी) एकूण सच्छिद्रता 0.60 आहे. C18 बद्ध सिलिका कणांनी भरलेल्या स्तंभांपेक्षा PMP स्तंभ कमी पारगम्य असतात कारण C18 प्रकारच्या स्थिर प्रावस्थेमध्ये C18 लिगँड्स सिलिका कणांना रेषीय साखळ्यांमध्ये जोडलेले असतात, तर पॉलिस्टीरिन प्रकारच्या स्थिर प्रावस्थेमध्ये कणांभोवती तुलनेने जाड पॉलिमरचा थर A तयार होतो. एका सामान्य प्रयोगात, स्तंभाची सच्छिद्रता खालीलप्रमाणे मोजली जाते:
आकृती ७अ, ब मध्ये, PMP कॉलम (आतील व्यास १०० x १.८ मिमी) आणि Ascentis Express RP-Amide कॉलम (आतील व्यास १०० x १.८ मिमी) साठी, दोन्ही कॉलमवर ६०/४० ACN/H2O आणि ०.१% TFA या समान इल्युशन परिस्थितीत २० µl/min ते ८०० µl/min या प्रवाहाखाली काढलेले व्हॅन डीम्टर प्लॉट दाखवले आहेत. इष्टतम प्रवाह दरावर (८० µl/min), किमान HETP मूल्ये PMP कॉलमसाठी २.६ µm आणि Ascentis Express RP-Amide कॉलमसाठी ३.९ µm होती. HETP मूल्ये दर्शवतात की PMP कॉलमची (100 x 1.8 मिमी आयडी) विलगीकरण कार्यक्षमता व्यावसायिकरित्या उपलब्ध असलेल्या Ascentis Express RP-Amide कॉलमच्या (100 x 1.8 मिमी आयडी) तुलनेत खूप जास्त आहे. आकृती 7(A) मधील व्हॅन डीम्टर आलेख दर्शवतो की आमच्या मागील अभ्यासाच्या तुलनेत प्रवाह वाढल्याने N मूल्यामध्ये होणारी घट लक्षणीयरीत्या जास्त नाही. Ascentis Express RP-Amide कॉलमच्या तुलनेत PMP कॉलमची (आयडी 100 × 1.8 मिमी) उच्च विलगीकरण कार्यक्षमता ही सध्याच्या कामात वापरलेल्या सुधारित कणांचा आकार आणि माप तसेच अत्याधुनिक कॉलम पॅकिंग प्रक्रियेवर आधारित आहे³⁴.
(अ) 0.1% TFA असलेल्या 60/40 ACN/H2O मध्ये PMP कॉलमवर (आयडी 100 x 1.8 मिमी) मिळवलेला व्हॅन डीम्टर प्लॉट (HETP विरुद्ध मोबाइल फेज लिनियर वेलॉसिटी). (ब) 0.1% TFA असलेल्या 60/40 ACN/H2O मध्ये Ascentis Express RP-Amide कॉलमवर (आयडी 100 x 1.8 मिमी) मिळवलेला व्हॅन डीम्टर प्लॉट (HETP विरुद्ध मोबाइल फेज लिनियर वेलॉसिटी).
उच्च कार्यक्षमता द्रव क्रोमॅटोग्राफीमध्ये (high performance liquid chromatography) संश्लेषित पेप्टाइड्स आणि मानवी सीरम अल्ब्युमिनच्या (HSA) ट्रिप्टिक हायड्रोलायझेटच्या मिश्रणाच्या विलगिकरणासाठी इंटरकॅलेटेड पॉलिस्टीरिनचा एक ध्रुवीय स्थिर टप्पा (polar stationary phase) तयार करून त्याचे मूल्यांकन करण्यात आले. पेप्टाइड मिश्रणांसाठी PMP स्तंभांची (columns) क्रोमॅटोग्राफिक कामगिरी विलगिकरण कार्यक्षमता आणि रिझोल्यूशनच्या बाबतीत उत्कृष्ट आहे. PMP स्तंभांची सुधारित विलगिकरण कार्यक्षमता ही सिलिका कणांचा आकार आणि छिद्रांचा आकार, स्थिर टप्प्यांचे नियंत्रित संश्लेषण आणि स्तंभातील गुंतागुंतीची पॅकिंग सामग्री यांसारख्या अनेक कारणांमुळे आहे. उच्च विलगिकरण कार्यक्षमतेव्यतिरिक्त, या स्थिर टप्प्याचा आणखी एक फायदा म्हणजे उच्च प्रवाह दरांवर स्तंभाचा कमी बॅक प्रेशर (back pressure) असतो. PMP स्तंभ अत्यंत पुनरुत्पादक (highly reproducible) आहेत आणि त्यांचा उपयोग पेप्टाइड्सच्या मिश्रणांचे आणि विविध प्रथिनांच्या ट्रिप्टिक पचनाचे विश्लेषण करण्यासाठी केला जाऊ शकतो. द्रव क्रोमॅटोग्राफीमध्ये नैसर्गिक उत्पादने, औषधी वनस्पती आणि बुरशी यांच्या अर्कांमधून जैव-सक्रिय संयुगे (bioactive compounds) वेगळे करण्यासाठी आम्ही या स्तंभाचा वापर करण्याचा मानस आहे. भविष्यात, प्रथिने आणि मोनोक्लोनल अँटीबॉडीजच्या विलगिकरणासाठी देखील PMP स्तंभांचे मूल्यांकन केले जाईल.
फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थॉगरसेन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड विलगीकरण प्रणालींचा अभ्यास भाग १: कॉलम वैशिष्ट्यीकरणासाठी प्रोटोकॉलचा विकास. फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थॉगरसेन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड विलगीकरण प्रणालींचा अभ्यास भाग १: कॉलम वैशिष्ट्यीकरणासाठी प्रोटोकॉलचा विकास.फील्ड, जेके, ओव्हरबी, एमआर, लाऊ, जे., टॉगरसेन, एच., आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स-फेज क्रोमॅटोग्राफीद्वारे पेप्टाइड विलगीकरण प्रणालींचा अभ्यास, भाग १: कॉलम वैशिष्ट्यीकरणासाठी प्रोटोकॉल विकसित करणे. फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थॉगरसेन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड विलगीकरण प्रणालींचा अभ्यास भाग १: कॉलम वैशिष्ट्यांसाठी प्रोटोकॉलचा विकास. फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थॉगरसेन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी पेप्टाइड विलगीकरण प्रणालींचा अभ्यास भाग १: कॉलम वैशिष्ट्यांसाठी प्रोटोकॉलचा विकास.फील्ड, जेके, ओव्हरबी, एमआर, लाऊ, जे., टॉगरसेन, एच., आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स-फेज क्रोमॅटोग्राफीद्वारे पेप्टाइड विलगीकरण प्रणालींचा अभ्यास, भाग १: कॉलम वैशिष्ट्यीकरणासाठी प्रोटोकॉल विकसित करणे.J.色谱法. 1603,113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
गोमेझ, बी. व इतर. संसर्गजन्य रोगांच्या उपचारांसाठी सुधारित सक्रिय पेप्टाइड्स तयार करण्याच्या पद्धती. बायोटेक्नॉलॉजी. अचिव्हमेंट्स 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
व्लिएघे, पी., लिसोव्स्की, व्ही., मार्टिनेझ, जे. आणि ख्रेस्टचॅटिस्की, एम. कृत्रिम उपचारात्मक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजारपेठ. व्लिएघे, पी., लिसोव्स्की, व्ही., मार्टिनेझ, जे. आणि ख्रेस्टचॅटिस्की, एम. कृत्रिम उपचारात्मक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजारपेठ.व्लिएगे पी, लिसोव्स्की व्ही, मार्टिनेझ जे आणि क्रेस्चाटिस्की एम. कृत्रिम उपचारात्मक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजारपेठ.व्लिएगे पी, लिसोव्स्की व्ही, मार्टिनेझ जे आणि ख्रेशचत्स्की एम. सिंथेटिक थेरप्युटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजारपेठ. ड्रग डिस्कव्हरी. टुडे 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
झी, एफ., स्मिथ, आरडी आणि शेन, वाय. प्रगत प्रोटीओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी. झी, एफ., स्मिथ, आरडी आणि शेन, वाय. प्रगत प्रोटीओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी.सी एफ., स्मिथ आरडी आणि शेन यू. प्रगत प्रोटीओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. प्रगत प्रोटीन रचना 液相色谱.सी एफ., स्मिथ आरडी आणि शेन यू. प्रगत प्रोटीओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी.जे. क्रोमॅटोग्राफी. ए 1261, 78–90 (2012).
लिऊ, डब्ल्यू. व इतर. प्रगत लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री व्यापक मेटाबोलॉमिक्स आणि प्रोटीओमिक्स एकत्र करण्यास सक्षम आहे. एनस. चिम. अॅक्टा 1069, 89–97 (2019).
चेस्टनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे औषधनिर्माण विकासात यूएचपीएलसीची भूमिका. चेस्टनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे औषधनिर्माण विकासात यूएचपीएलसीची भूमिका.चेस्टनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे औषधनिर्माण विकासात UHPLC ची भूमिका.चेस्टनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे औषध विकासात UHPLC ची भूमिका. जे. सेप्ट सायन्स. 30(8), 1183–1190 (2007).
वू, एन. आणि क्लॉसेन, ए.एम. जलद विलगीकरणासाठी अल्ट्राहाय प्रेशर लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू. वू, एन. आणि क्लॉसेन, ए.एम. जलद विलगीकरणासाठी अल्ट्राहाय प्रेशर लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू.वू, एन. आणि क्लॉसेन, ए.एम. जलद विलगीकरणासाठी उच्च दाब द्रव क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面. वू, एन. आणि क्लॉसेन, ए.एम. जलद विलगीकरणासाठी अल्ट्रा-हाय प्रेशर लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू.वू, एन. आणि क्लॉसेन, ए.एम. जलद विलगीकरणासाठी उच्च दाब द्रव क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू.जे. सेप्ट. सायन्स. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
रेन, एसए आणि चेलीचेफ, पी. औषधनिर्माण विकासात अल्ट्रा-परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर. रेन, एसए आणि चेलीचेफ, पी. औषधनिर्माण विकासात अल्ट्रा-परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर.रेन, एसए आणि चेलिशेफ, पी. औषधनिर्माण विकासात अल्ट्रा हाय परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर. Wren, SA आणि Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. रेन, एसए आणि चेलीचेफ, पी.रेन, एसए आणि चेलिशेफ, पी. औषध विकासात अल्ट्रा-परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर.जे. क्रोमॅटोग्राफी. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
गु, एच. व इतर. एंटेरोव्हायरस 71 च्या कार्यक्षम शुद्धीकरणासाठी उच्च अंतर्गत टप्प्यासह तेल-पाणी इमल्शनपासून व्युत्पन्न केलेला एकसंध मॅक्रोपोरोस हायड्रोजेल. केमिकल. प्रोजेक्ट. जर्नल 401, 126051 (2020).
शी, वाय., झियांग, आर., होर्वाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटिओमिक्समध्ये लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका. शी, वाय., झियांग, आर., होर्वाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटिओमिक्समध्ये लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका.शी, वाय., झियांग, आर., होर्व्हॅथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटिओमिक्समध्ये लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका. शि, वाई., झियांग, आर., हॉर्व्हथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए 液相色谱在蛋白质组学中的作用. शि, वाय., झियांग, आर., होर्व्हाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेएशी, वाय., झियांग, आर., होर्व्हॅथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटिओमिक्समध्ये लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका.जे. क्रोमॅटोग्राफी. ए 1053 (1-2), 27-36 (2004).
फेकेटे, एस., वुटे, जे.-एल. & गिलार्मे, डी. उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या रिव्हर्स्ड-फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफिक विलगीकरणातील नवीन प्रवाह: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग. & गिलार्मे, डी. उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या रिव्हर्स्ड-फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफिक विलगीकरणातील नवीन प्रवाह: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматограбрафи соматографи: teoria आणि приложения. & गिलार्मे, डी. रिव्हर्स फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या विलगिकरणातील नवीन प्रवाह: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用. आणि गिलार्मे, डी.आणि गिलार्मे, डी. रिव्हर्स फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या विलगिकरणातील नवीन प्रवाह: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग.जे. फार्म. बायोमेडिकल सायन्स. अनुस. 69, 9–27 (2012).
गिलार, एम., ओलिवोवा, पी., डेली, एई आणि गेबलर, जेसी पहिल्या आणि दुसऱ्या विलगीकरण आयामांमध्ये भिन्न pH सह RP-RP-HPLC प्रणाली वापरून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय विलगीकरण. गिलार, एम., ओलिवोवा, पी., डेली, एई आणि गेबलर, जेसी पहिल्या आणि दुसऱ्या विलगीकरण आयामांमध्ये भिन्न pH सह RP-RP-HPLC प्रणाली वापरून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय विलगीकरण.गिलार एम., ओलिवोवा पी., डाली एई आणि गेबलर जेके यांनी पहिल्या आणि दुसऱ्या विलगीकरण आयामांमध्ये वेगवेगळ्या pH सह RP-RP-HPLC प्रणाली वापरून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय विलगीकरण केले.गिलार एम., ओलिवोवा पी., डाली एई आणि गेबलर जेके आरपी-आरपी-एचपीएलसी प्रणाली वापरून पहिल्या आणि दुसऱ्या विलगीकरण आयामांमध्ये वेगवेगळ्या पीएच मूल्यांचा वापर करून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय विलगीकरण. जे. सेप्ट सायन्स. 28 (14), 1694–1703 (2005).
फेलिट्टी, एस. व इतर. 2 µm पेक्षा लहान पूर्णपणे सच्छिद्र आणि वरवर सच्छिद्र C18 कणांनी भरलेल्या उच्च-कार्यक्षमता क्रोमॅटोग्राफी स्तंभांच्या वस्तुमान हस्तांतरण आणि गतिज वैशिष्ट्यांचा तपास. जे. सेप्ट सायन्स. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
पिओवेसाना, एस. व इतर. वनस्पतींमधील जैवक्रियाशील पेप्टाइड्सचे विलगीकरण, ओळख आणि प्रमाणीकरण यामधील अलीकडील ट्रेंड आणि विश्लेषणात्मक आव्हाने. एनस. क्रिएचर एनल. केमिकल. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
मुलर, जेबी इत्यादी. जीवनाच्या साम्राज्याचे प्रोटीओमिक लँडस्केप. नेचर 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
डी लुका, के. आणि इतर. प्रिपरेटिव्ह लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे उपचारात्मक पेप्टाइड्सचे उपचारानंतरचे उपचार. मॉलिक्युल्स (बासेल, स्वित्झर्लंड) 26(15), 4688 (2021).
यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. मिश्र-मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि त्याचे जैवपॉलिमरमधील अनुप्रयोग. यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. मिश्र-मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि त्याचे जैवपॉलिमरमधील अनुप्रयोग.यांग, यू. आणि गेंग, एक्स. मिश्र मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि बायोपॉलिमरसाठी त्याचा अनुप्रयोग. यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用. यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. मिश्र मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि जैवपॉलिमरमधील त्याचे अनुप्रयोग.यांग, यू. आणि जीन, एक्स. मिश्र मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि बायोपॉलिमरसाठी त्याचा अनुप्रयोग.जे. क्रोमॅटोग्राफी. ए 1218(49), 8813–8825 (2011).