Nature.com ကိုလာရောက်လည်ပတ်တဲ့အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါတယ်။ သင်သည် အကန့်အသတ်ရှိသော CSS ပံ့ပိုးမှုဖြင့် ဘရောက်ဆာဗားရှင်းကို အသုံးပြုနေပါသည်။ အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသောဘရောက်ဆာ (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီသောမုဒ်ကိုပိတ်ပါ) ကိုအသုံးပြုရန် ကျွန်ုပ်တို့အကြံပြုအပ်ပါသည်။ ထို့အပြင်၊ ဆက်လက်ပံ့ပိုးမှုသေချာစေရန်၊ ပုံစံများနှင့် JavaScript မပါဘဲ ဝဘ်ဆိုက်ကို ပြသပါသည်။
ဆလိုက် သုံးခုပါသော အဝိုင်းကို တစ်ပြိုင်နက် ပြသသည်။ တစ်ကြိမ်လျှင် ဆလိုက်သုံးခုကို ရွှေ့ရန် ယခင်နှင့် နောက်ခလုတ်များကို အသုံးပြုပါ သို့မဟုတ် တစ်ကြိမ်လျှင် ဆလိုက်သုံးခုကို ရွှေ့ရန် အဆုံးရှိ ဆလိုက်ခလုတ်များကို အသုံးပြုပါ။
ချွေးပေါက်ကျယ်သော အမှုန်များရရှိရန် အချို့သော ပြုပြင်မွမ်းမံမှုများဖြင့် Sol-gel နည်းလမ်းဖြင့် စိမ့်ဝင်နေသော ဆီလီကာအမှုန်များကို ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ ဤအမှုန်အမွှားများကို N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) နှင့် styrene တို့ဖြင့် ဆင်းသက်လာခဲ့ပြီး N-phenylmaleimide intercalated polyamides ထုတ်လုပ်ရန်အတွက် reverse chain transfer-fragmentation (RAFT) polymerization မှတဆင့် ဆင်းသက်လာသည်။ Styrene (PMP) ငုတ်တုတ်အဆင့်။ ကျဉ်းမြောင်းသော သံမဏိကော်လံများ (100 × 1.8 မီလီမီတာ အတွင်းအချင်း) ကို slurry ထုပ်ပိုးမှုဖြင့် ထုပ်ပိုးထားသည်။ PMP ကော်လံ၏ chromatographic စွမ်းဆောင်ရည်ကို peptides ငါးမျိုး (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) နှင့် human tryptic hydrolyzate (လူ့အယ်လ်ဘမ်) ၏ tryptic hydrolyzate (Leu amino acid enkephalin) တို့ပါရှိသော ပေါင်းစပ်ပေါင်းစပ်မှုကို ခွဲခြားရန် အကဲဖြတ်ပါသည်။ အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများအောက်တွင်၊ peptides ရောနှောထားသော သီအိုရီကိန်းဂဏန်းများသည် plates/sq.m တွင် 280,000 သို့ရောက်ရှိခဲ့သည်။ စီးပွားဖြစ် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် တီထွင်ထားသော ကော်လံ၏ ခွဲထွက်ခြင်းစွမ်းဆောင်ရည်ကို နှိုင်းယှဉ်ကြည့်ပါက PMP ကော်လံ၏ ခွဲထွက်မှုစွမ်းဆောင်ရည်သည် ခွဲခြားမှုထိရောက်မှုနှင့် ကြည်လင်ပြတ်သားမှုဆိုင်ရာ စီးပွားရေးကော်လံထက် သာလွန်ကြောင်း တွေ့ရှိရပါသည်။
ဇီဝဆေးဝါးလုပ်ငန်းသည် မကြာသေးမီနှစ်များအတွင်း စျေးကွက်ဝေစု သိသာထင်ရှားစွာ တိုးမြင့်လာကာ ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာ စျေးကွက်ချဲ့ထွင်လာခဲ့သည်။ biopharmaceutical လုပ်ငန်း 1,2,3 ၏ပေါက်ကွဲကြီးထွားမှုနှင့်အတူ peptide နှင့်ပရိုတိန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာဘို့ကြီးစွာလိုအပ်ပါသည်။ ပစ်မှတ် peptide အပြင်၊ peptide ပေါင်းစပ်မှုအတွင်း အမျိုးမျိုးသော အညစ်အကြေးများကို ဖွဲ့စည်းထားသောကြောင့် peptide ၏ အလိုရှိသော သန့်စင်မှုကို ရရှိရန် chromatographic သန့်စင်ရန် လိုအပ်ပါသည်။ ခန္ဓာကိုယ်အရည်များ၊ တစ်ရှူးများနှင့် ဆဲလ်များရှိ ပရိုတိန်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းသည် နမူနာတစ်ခုတည်းတွင် တွေ့ရှိနိုင်သော ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော မျိုးစိတ်အရေအတွက် များပြားခြင်းကြောင့် အလွန်ခက်ခဲသောအလုပ်ဖြစ်သည်။ အစုလိုက်အပြုံလိုက် spectrometry သည် peptides နှင့် ပရိုတိန်းများကို စီစစ်ရန်အတွက် ထိရောက်သောကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သော်လည်း၊ ထိုနမူနာများကို mass spectrometer သို့ တိုက်ရိုက်ထည့်သွင်းပါက၊ ခွဲထွက်ခြင်းသည် ကျေနပ်ဖွယ်မရှိပါ။ သတ်မှတ်ထားသောအချိန် 4,5,6 တွင် mass spectrometer သို့ဝင်ရောက်သည့်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုပမာဏကိုလျှော့ချမည့် MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းမပြုမီအရည် chromatography (LC) ကိုလုပ်ဆောင်ခြင်းဖြင့်ဤပြဿနာကိုဖြေရှင်းနိုင်သည်။ ထို့အပြင်၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာသူများသည် အရည်အဆင့်ခွဲခြားမှုအတွင်း ကျဉ်းမြောင်းသောဒေသတွင် အာရုံစူးစိုက်နိုင်ပြီး၊ ထို့ကြောင့် ဤခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်များကို အာရုံစူးစိုက်ပြီး MS ထောက်လှမ်းမှု၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို တိုးစေသည်။ Liquid chromatography (LC) သည် လွန်ခဲ့သည့်ဆယ်စုနှစ်များအတွင်း သိသိသာသာ တိုးတက်လာခဲ့ပြီး proteomic analysis7,8,9,10 အတွက် တွင်ကျယ်စွာအသုံးပြုသည့်နည်းလမ်းတစ်ခု ဖြစ်လာခဲ့သည်။
Reverse-phase liquid chromatography (RP-LC) ကို stationary phase11,12,13 အဖြစ် octadecyl-modified silica (ODS) ကို အသုံးပြု၍ peptides များ၏ အရောအနှောများကို သန့်စင်ပြီး ပိုင်းခြားရန် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုပါသည်။ သို့သော် ၎င်းတို့၏ ရှုပ်ထွေးသောဖွဲ့စည်းပုံနှင့် amphoteric သဘောသဘာဝကြောင့်၊ 14,15 RP သည် ငြိမ်ဝပ်နေသောအဆင့်များသည် peptides နှင့် ပရိုတိန်းများကို ကျေနပ်ဖွယ်ခွဲထုတ်ခြင်းမပြုနိုင်ပါ။ ထို့ကြောင့်၊ ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အပိုင်းအစများပါရှိသော peptides နှင့် ပရိုတိန်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းသည် ဤခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်များအား အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်ထိန်းသိမ်းထားရန် အထူးဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော စာရေးကိရိယာအဆင့်များ လိုအပ်ပါသည်။ Multimodal အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများကိုပေးဆောင်သည့် ရောနှောထားသောခရိုမာတီဂရပ်ဖစ်သည် peptides၊ ပရိုတိန်းများနှင့် အခြားရှုပ်ထွေးသောအရောအနှောများကိုခွဲထုတ်ရန်အတွက် RP-LC ၏အခြားရွေးချယ်စရာတစ်ခုဖြစ်နိုင်သည်။ ရောစပ်ထားသော စာရေးကိရိယာအဆင့်များ အများအပြားကို ပြင်ဆင်ထားပြီး အဆိုပါ ငြိမ်ဝပ်ပိပြားမှု အဆင့်များပါရှိသော ကော်လံများကို peptides နှင့် proteins 17,18,19,20,21 တို့ကို ခွဲထုတ်ရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အုပ်စုများရှိနေခြင်းကြောင့်၊ ရောစပ်မုဒ်စထရိအဆင့်များ (WAX/RPLC၊ HILIC/RPLC၊ polar intercalation/RPLC) သည် peptides နှင့် proteins တို့ကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် သင့်လျော်ပါသည်။ ၊ ပိုလာအရောအနှော ပေါင်းစပ်ထားသော ဝင်ရိုးစွန်းအုပ်စုများဖြင့် ဝင်ရိုးစွန်းများ ပေါင်းစပ်ထားသော လုတ်ဆွဲအဆင့်များသည် ခွဲထွက်နိုင်စွမ်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများအတွက် ထူးခြားသောရွေးချယ်နိုင်စွမ်းကို ပြသသောကြောင့် ခွဲထွက်ခြင်းသည် ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာချက်နှင့် စာရေးကိရိယာအဆင့်အကြား အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုအပေါ် မူတည်သောကြောင့် ခွဲထွက်ခြင်း Multimodal interactions 29,30,31,32။ မကြာသေးမီက Zhang et al ။ 30 သည် behenyl-terminated polyamines ၏ ပကတိအဆင့်များကို ရရှိခဲ့ပြီး ဟိုက်ဒရိုကာဗွန်များ၊ စိတ်ဓာတ်ကျဆေးများ၊ ဖလေဗွန်နွိုက်များ၊ နျူကလီးအိုဆိုဒ်များ၊ အီစထရိုဂျင်များနှင့် အခြားခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်အချို့ကို အောင်မြင်စွာ ခွဲထုတ်ခဲ့သည်။ ဝင်ရိုးစွန်းတွင် မြှုပ်ထားသော စာရေးကိရိယာတွင် ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အုပ်စုနှစ်ခုလုံးပါရှိသောကြောင့် ၎င်းကို peptides နှင့် proteins များကို hydrophobic နှင့် hydrophilic အစိတ်အပိုင်းများအဖြစ် ခွဲခြားရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။ ဝင်ရိုးစွန်းအတွင်းလိုင်းကော်လံများ (ဥပမာ၊ amide inline ပါရှိသော C18 ကော်လံများ) ကို ကုန်သွယ်မှုအမည် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံများအောက်တွင် ရနိုင်သော်လည်း ဤကော်လံများကို amine 33 ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက်သာ အသုံးပြုထားပါသည်။
လက်ရှိလေ့လာမှုတွင်၊ ဝင်ရိုးစွန်းတွင် မြှုပ်နှံထားသည့် ဓာတ်ခွဲခန်းသုံးအဆင့် (N-phenylmaleimide၊ polystyrene မြှုပ်သွင်းခြင်း) ကို ပြင်ဆင်ပြီး peptide ခွဲခြားခြင်းနှင့် tryptic HSA ကွဲထွက်ခြင်းအတွက် အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ ငုတ်တုတ်အဆင့်ကို ပြင်ဆင်ရန် အောက်ပါဗျူဟာကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ 31၊ 34၊ 35၊ 36၊ 37၊ 38၊ 39 တို့၏ အချိုးအစားများမှာ ယူရီးယား၊ polyethylene glycol (PEG)၊ TMOS နှင့် aqueous-acetic acid တို့ကို ကြီးမားသော အမှုန်အမွှားများရရှိရန် ချိန်ညှိပေးထားပါသည်။ ဒုတိယအနေဖြင့်၊ အသစ်သော phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ligand ကို ပေါင်းစပ်ပြီး ၎င်း၏ ဆင်းသက်လာသော ဆီလီကာအမှုန်များကို ဝင်ရိုးစွန်းတွင် မြှုပ်နှံထားသည့် ကိရိယာအဆင့်များကို ပြင်ဆင်ရန်အတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။ ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားသော ထုပ်ပိုးမှုအစီအစဉ်အရ ရရှိသော စာရေးကိရိယာအဆင့်ကို သံမဏိကော်လံ (အတွင်းပိုင်းအချင်း 100 × 1.8 မီလီမီတာ) အတွင်းသို့ ထုပ်ပိုးထားပါသည်။ ကော်လံအတွင်း တူညီသောအလွှာတစ်ခုသေချာစေရန် ကော်လံ၏ထုပ်ပိုးမှုကို စက်တုန်ခါမှုဖြင့် ကူညီပေးသည်။ ထုပ်ပိုးထားသောကော်လံကို peptides ငါးခုပါရှိသော peptides အရောအနှော (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide) တို့ကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် အကဲဖြတ်ထားပါသည်။ လူ့သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ် (HSA) ၏ tryptic hydrolysates ။ peptide အရောအနှောနှင့် HSA tryptic ချေဖျက်မှုကို ကောင်းမွန်သော ကြည်လင်ပြတ်သားမှုနှင့် ထိရောက်မှုတို့ဖြင့် ခွဲခြားထားသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ PMP ကော်လံ၏ ခြားနားမှုစွမ်းဆောင်ရည်ကို Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ peptides နှင့် proteins များသည် PMP ကော်လံတွင် ကောင်းမွန်သော ကြည်လင်ပြတ်သားမှုနှင့် မြင့်မားသော ခွဲထွက်မှုထိရောက်မှုရှိသည်ကို သတိပြုမိကြပြီး PMP ကော်လံ၏ ခွဲထွက်မှုထိရောက်မှုသည် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံထက် မြင့်မားသည်။
PEG (polyethylene glycol)၊ ယူရီးယား၊ အက်ဆစ်အက်ဆစ်၊ trimethoxyorthosilicate (TMOS)၊ trimethylchlorosilane (TMCS)၊ trypsin၊ လူ့သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ် (HSA)၊ ammonium chloride၊ ယူရီးယား၊ hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS)၊ methacryloyl EMPO ကလိုရိုက် ကလိုရိုက် (MC)၊ HPLC၊ မီသနော၊ 2-propanol နှင့် acetone အတွက် ပါအောက်ဆိုဒ် (BPO)၊ acetonitrile (ACN)။ Sigma-Aldrich ကုမ္ပဏီ (St. Louis, Missouri, USA)။
ယူရီးယား (၈ ဂရမ်)၊ polyethylene glycol (8 g) နှင့် 0.01 N. acetic acid ၏ 8 ml တို့ကို ရောနှောပြီး 10 မိနစ်ကြာ မွှေပေးပြီး TMOS ၏ 24 ml ကို ရေခဲအေးပေးသည့်အောက်တွင် ထည့်ထားသည်။ တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောကို 40°C တွင် 6 နာရီကြာအပူပေးပြီး 120°C တွင် stainless steel autoclave တွင် 8 နာရီကြာအပူပေးသည်။ ရေကို ချေမှုန်းပြီး အကြွင်းအကျန်များကို 70°C တွင် ၁၂ နာရီကြာ အခြောက်ခံခဲ့သည်။ အခြောက်လှန်းထားသော အနုတုံးများကို ချောမွေ့စွာ ရောနယ်ပြီး 550°C တွင် 12 နာရီကြာ မီးဖိုတွင် ခဲထားသည်။ အမှုန်အမွှားအရွယ်အစား၊ ချွေးပေါက်အရွယ်အစားနှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာ၏ မျိုးပွားနိုင်စွမ်းကို စမ်းသပ်ရန်အတွက် အသုတ်သုံးခုကို ပြင်ဆင်ထားပြီး ထူးခြားချက်ဖြစ်သည်။
polystyrene ကွင်းဆက်များအတွက် ဝင်ရိုးစွန်းအုပ်စုနှင့် စာရေးကိရိယာအဆင့်။ ပြင်ဆင်မှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်းကို အောက်တွင်ဖော်ပြထားသည်။
N-phenylmaleimide (200 mg) နှင့် methyl vinyl isocyanate (100 mg) ကို မဟိုက်ဒရိတ်တိုလူအီးတွင် ပျော်ဝင်ခဲ့ပြီး၊ ထို့နောက် 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ၏ 0.1 ml ကို phenylmaleimide နှင့် methyl CP PM isocyanate ကိုရရှိရန် တုံ့ပြန်မှုပုလင်းထဲသို့ ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။ ) အရောအနှောကို 60 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် 3 နာရီကြာအပူပေးပြီး 40 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် 3 နာရီကြာအောင်ဇကာနှင့်အခြောက်ခံပါ။
ဆီလီကာအခြောက်အမှုန်များ (2 ဂရမ်) ကို 500 မီလီလီတာ အောက်ခြေပုလင်းဝိုင်းတွင် 10 မိနစ်ကြာ မွှေပြီး အသံထွက်အောင် ခြောက်သွေ့သော Toluene (100 မီလီလီတာ) ဖြင့် ဖြန့်ကျက်ထားသည်။ PMCP (10 mg) ကို toluene တွင် ပျော်ဝင်ပြီး တုံ့ပြန်မှုဘူးခွံထဲသို့ drop-wise ထပ်ထည့်သည်။ အရောအနှောကို 100°C တွင် 8 နာရီကြာ စစ်ထုတ်ပြီး acetone ဖြင့် ဆေးကြောပြီး 60°C တွင် ၃ နာရီကြာ အခြောက်ခံခဲ့သည်။ ထို့နောက် PMCP (100 g) နှင့်ဆက်စပ်သော ဆီလီကာအမှုန်များကို တိုလူအီး (200 မီလီလီတာ) တွင် ပျော်ဝင်ခဲ့ပြီး 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) ကို ဓါတ်ကူပစ္စည်းအဖြစ် dibutyltin dilaurate 100 μl ၏ရှေ့မှောက်တွင် ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။ အရောအနှောကို 50 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် 8 နာရီကြာမွှေပြီး 50 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် 3 နာရီကြာအခြောက်ခံခဲ့သည်။
Styrene (1 ml)၊ benzoyl peroxide BPO (0.5 ml) နှင့် TEMPO-PMCP (1.5 g) နှင့် ဆက်စပ်နေသော ဆီလီကာအမှုန်များကို တိုလူအေးတွင် ဖြန့်ကျက်ပြီး နိုက်ထရိုဂျင်ဖြင့် သန့်စင်ထားသည်။ styrene ၏ ပေါ်လီမာကို 100°C တွင် 12 နာရီကြာ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ရလာတဲ့ ထုတ်ကုန်ကို မီသနောနဲ့ ဆေးကြောပြီး 60°C မှာ တစ်ညလုံး အခြောက်ခံပါတယ်။ တုံ့ပြန်မှု၏ ယေဘူယျအစီအမံကို ပုံတွင် ပြထားသည်။ တစ်ခု .
နမူနာများကို 393 K ဖြင့် 1 နာရီကြာ ဖယ်ရှားပြီး ကျန်ဖိအား 10–3 Torr ထက်နည်းသော ရလဒ်ကို ရရှိသည်အထိ ဖယ်ရှားခဲ့သည်။ နှိုင်းရဖိအား P/P0 = 0.99 တွင်စုပ်ယူသော N2 ပမာဏကို စုစုပေါင်း pore volume ကိုဆုံးဖြတ်ရန်အသုံးပြုခဲ့သည်။ စကင်န်အီလက်ထရွန် အဏုစကုပ် (Hitachi High Technologies၊ တိုကျို၊ ဂျပန်နိုင်ငံ) ကို အသုံးပြု၍ သန့်စင်ပြီး လစ်ဂန်-ချည်နှောင်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ ပုံသဏ္ဍာန်ကို စစ်ဆေးခဲ့သည်။ အခြောက်နမူနာများ (ဆီလီကာစစ်စစ်နှင့် ligand ချည်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ) ကို ကာဗွန်တိပ်ကို အသုံးပြု၍ အလူမီနီယံချောင်းများပေါ်တွင် ထားရှိခဲ့သည်။ Q150T sputtering ကိရိယာကို အသုံးပြု၍ နမူနာပေါ်တွင် ရွှေကို စုဆောင်းထားပြီး 5 nm အထူ Au အလွှာကို နမူနာပေါ်တွင် အပ်နှံထားသည်။ ၎င်းသည် ဗို့အားနိမ့်သည့် လုပ်ငန်းစဉ်၏ စွမ်းဆောင်ရည်ကို မြှင့်တင်ပေးပြီး အအေးဒဏ်ကို ဖြန်းပေးပါသည်။ Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 ဒြပ်စင်ဖွဲ့စည်းမှုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာကိရိယာကို အသုံးပြု၍ ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ Malvern အမှုန်အမွှားအရွယ်အစားခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ကို အမှုန်အရွယ်အစားဖြန့်ဖြူးမှုရရှိရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ မွမ်းမံထားသော ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများနှင့် ligand-bound silica အမှုန်များ (5 မီလီဂရမ် တစ်ခုစီ) ကို isopropanol ၏ 5 ml တွင် ပျံ့နှံ့သွားပြီး၊ 10 မိနစ်ကြာ အသံချဲ့ထွင်ကာ 5 မိနစ်အထိ တုန်လှုပ်သွားကာ Mastersizer optical ခုံတန်းရှည်တစ်ခုပေါ်တွင် ထားရှိခဲ့သည်။ အပူချိန် 30 မှ 800 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် တစ်မိနစ်လျှင် 5°C နှုန်းဖြင့် သာမိုဂရာဗီမက်ထရစ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို လုပ်ဆောင်သည်။
31 တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း လုပ်ထုံးလုပ်နည်းအတိုင်း တူညီသောလုပ်ထုံးလုပ်နည်းအတိုင်း ကိုးကား၍ 31 တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း slurry ဖြည့်နည်းဖြင့် စီတန်းထားသော ကျဉ်းမြောင်းသော စတီးလ်ကော်လံများ (ဖန်စီစီထားသော၊ ID 100 × 1 .8 မီလီမီတာ) နှင့် 1 µm frit ပါရှိသော ထွက်ပေါက်တစ်ခုကို slurry packaging နည်းပညာဖြင့် USA၊ IL (AIL) ထုပ်ပိုးမှုနည်းပညာဖြင့် ချိတ်ဆက်ထားသည်။ 1.2 ml တွင် 1.2 ml တွင် ငုတ်လျှိုးနေသောအဆင့်၏ 150 mg ကို ဆိုင်းငံ့ထားပြီး ရေလှောင်ကော်လံတစ်ခုထဲသို့ ကျွေးခြင်းဖြင့် ဆိုင်းထိန်းစနစ်ကို ပြင်ဆင်ပါ။ Methanol ကို slurry solvent နှင့် control solvent အဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည်။ 10 မိနစ်အတွက် 100 MP ဖိအားအစီအစဥ်ကို အသုံးပြု၍ ကော်လံကို ထုပ်ပိုးပါ။ ထုပ်ပိုးခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်တွင် တူညီသောကော်လံထုပ်ပိုးခြင်းကိုသေချာစေရန်အတွက် စက်တုန်ခါမှုဖြစ်စေရန်အတွက် ဓာတ်ငွေ့ခရိုမာတိုဂရမ်ကော်လံတုန်ခါမှုနှစ်ခု (Alltech၊ Deerfield, IL, USA) ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ slurry packer ကိုပိတ်ပြီး string ကိုပျက်စီးခြင်းမှကာကွယ်ရန်ဖိအားများကိုဖြည်းဖြည်းချင်းထုတ်ပါ။ ကော်လံသည် slurry nozzle မှ ချိတ်ဆက်မှု ပြတ်တောက်ပြီး အခြားအဝင်ပေါက်တွင် တပ်ဆင်ထားပြီး ၎င်း၏လုပ်ဆောင်ချက်ကို စမ်းသပ်ရန်အတွက် LC စနစ်သို့ ချိတ်ဆက်ထားသည်။
စိတ်ကြိုက် MLC ကို LC ပန့် (10AD Shimadzu, Japan)၊ 50 nL ဆေးထိုးစက် (Valco (USA) C14 W.05)၊ အမြှေးပါး degasser (Shimadzu DGU-14A) နှင့် UV-VIS သွေးကြောမျှင်ပြတင်းပေါက်ပါရှိသော နမူနာကို အသုံးပြု၍ တည်ဆောက်ထားသည်။ ထောက်လှမ်းကိရိယာ (UV-2075) နှင့် ကြွေထည်မိုက်ခရိုကော်လံ။ ထပ်ဆင့်ကော်လံချဲ့ထွင်ခြင်း၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုကို လျှော့ချရန် အလွန်ကျဉ်းမြောင်းသော တိုတောင်းသော ချိတ်ဆက်ပြွန်များကို အသုံးပြုပါ။ ကော်လံကိုဖြည့်ပြီးနောက်၊ 1/16″ လျှော့ချလမ်းဆုံ၏ ထွက်ပေါက်တွင် သွေးကြောမျှင် (50 µm id 365) ကို တပ်ဆင်ပြီး လျှော့ချရေးလမ်းဆုံ၏ သွေးကြောမျှင် (50 µm) ကို တပ်ဆင်ပါ။ Multichro 2000 ဆော့ဖ်ဝဲလ်ကို အသုံးပြု၍ ဒေတာစုဆောင်းခြင်းနှင့် chromatogram လုပ်ဆောင်ခြင်းတို့ကို လုပ်ဆောင်ပါသည်။ 254 nm တွင်၊ ဘာသာရပ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်များ၏ ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည်စုပ်ယူမှုကို 0 တွင် စောင့်ကြည့်ခဲ့သည်။ Chromatographic ဒေတာကို OriginPro8 (Northampton, MA) သုံးပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။
လူ၏သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ်၊ lyophilized အမှုန့်၊ ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg နှင့် trypsin (1.5 mg)၊ 4.0 M ယူရီးယား (1 ml) နှင့် 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ml) တို့ ရောစပ်သည်။ ဖြေရှင်းချက်အား 10 မိနစ်မွှေပြီး 37°C တွင် ရေချိုးခန်းထဲတွင် 6 နာရီကြာထားကာ 0.1% TFA 1 ml ဖြင့် မီးငြိမ်းပါသည်။ အဖြေကို စစ်ထုတ်ပြီး 4°C အောက်တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
peptides နှင့် tryptic digest HSA ကို PMP ကော်လံတွင် သီးခြားစီ အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။ PMP ကော်လံဖြင့် ပိုင်းခြားထားသော peptides နှင့် HSA အရောအနှော၏ tryptic hydrolysis ကို စစ်ဆေးပြီး ရလဒ်များကို Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါ။ အောက်ဖော်ပြပါ ညီမျှခြင်းကို အသုံးပြု၍ သီအိုရီပိုင်းပြားများ၏ အရေအတွက်ကို တွက်ချက်သည်-
သန့်စင်သော ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများနှင့် ligand ချည်နှောင်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ SEM ပုံများကို ပုံ 2 တွင်ပြသထားသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုများနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါက အမှုန်အမွှားများသည် ရှည်လျားသော သို့မဟုတ် ပုံမှန်မဟုတ်သော symmetry ရှိသော SEM ပုံများဖြစ်သည်။ လစ်ဂန် (C, D) ဖြင့် ချည်နှောင်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်သည် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ကို ဖုံးအုပ်ထားသော ပိုလီစတီရင်းကွင်းဆက်များကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်။
သန့်စင်သော ဆီလီကာအမှုန်များ (A, B) နှင့် ligand bound silica အမှုန်များ (C, D) တို့၏ အီလက်ထရွန် အမိုက်စား ဂရပ်ဖစ်များ။
သန့်စင်သော ဆီလီကာအမှုန်များနှင့် လစ်ဂန်-ချည်နှောင်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ ဖြန့်ဖြူးမှုအရွယ်အစားကို ပုံ 2. 3(A) တွင် ပြထားသည်။ Volumetric particle size distribution curves များသည် ဓာတုပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် ဆီလီကာအမှုန်အရွယ်အစား တိုးလာကြောင်း ပြသခဲ့သည် (ပုံ။ 3A)။ လက်ရှိလေ့လာမှုမှ ဆီလီကာအမှုန်အမွှားအရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှုဒေတာနှင့် ယခင်လေ့လာမှုကို ဇယား 1(A) တွင် နှိုင်းယှဉ်ထားသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုတွင် (polystyrene bonded silica အမှုန်များ) 34 တွင် ad(0.5) တန်ဖိုး 3.05 µm နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက PMP ၏ထုထည်ပမာဏ d(0.5) သည် 3.36 µm ဖြစ်သည်။ တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောတွင် PEG၊ ယူရီးယား၊ TMOS နှင့် acetic acid အချိုးအစား ပြောင်းလဲမှုကြောင့်၊ ဤအသုတ်၏ အမှုန်အမွှားခွဲဝေမှုသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါက ကျဉ်းမြောင်းသွားပါသည်။ PMP အဆင့်၏အမှုန်အရွယ်အစားသည် ကျွန်ုပ်တို့အစောပိုင်းလေ့လာခဲ့သည့် polystyrene bound silica particle အဆင့်ထက် အနည်းငယ်ပိုကြီးပါသည်။ ဆိုလိုသည်မှာ စတီရင်းပါသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်လုပ်ဆောင်နိုင်စွမ်းသည် ဆီလီကာမျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် ပိုလီစတီရင်းအလွှာ (0.97 µm) သာ အပ်နှံပြီး PMP အဆင့်တွင် အလွှာအထူမှာ 1.38 µm ဖြစ်သည်ကို ဆိုလိုသည်။
Particle size distribution (A) နှင့် pore size distribution (B) သန့်စင်သော ဆီလီကာအမှုန်များနှင့် ligand bound silica particles များ။
ဤလေ့လာမှုတွင်အသုံးပြုသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ ချွေးပေါက်အရွယ်အစား၊ ချွေးပေါက်ထုထည်နှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာတို့ကို ဇယား 1 (B) တွင် ပြသထားသည်။ သန့်စင်သော ဆီလီကာအမှုန်များနှင့် လစ်ဂန်-ချည်နှောင်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ PSD ပရိုဖိုင်များကို ပုံများတွင် ပြထားသည်။ 3(B)။ ရလဒ်များသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှု ၃၄ နှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည်။ သန့်စင်သော နှင့် ligand-bound silica အမှုန်များ၏ ချွေးပေါက် အရွယ်အစားများသည် 310 Å နှင့် 241 Å အသီးသီး ဖြစ်သည် ကို ညွှန်ပြပြီး ဓာတုဗေဒ ပြုပြင် ပြောင်းလဲမှု အပြီး ဇယား 1 (B) တွင် ပြထားသည့် အတိုင်း ချွေးပေါက် အရွယ်အစား 69 Å လျော့ကျသွားပြီး shift curve ကို ပုံတွင် ပြထားသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ မျက်နှာပြင် အကျယ်အဝန်း သည် လက်ရှိ လေ့လာနိုင်သော စီလီကာ အမှုန် 2g/1g ဖြစ်သည်၊ ယခင်လေ့လာမှု (124 m2/g)။ ဇယား 1(B တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း) ဓာတုပြုပြင်ပြီးနောက် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ဧရိယာ (m2/g) သည်လည်း 116 m2/g မှ 105 m2/g သို့ လျော့နည်းသွားသည်။
စာရေးကိရိယာအဆင့်၏ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုရလဒ်များကိုဇယားတွင်ဖော်ပြထားသည်။ 2. လက်ရှိ stationary အဆင့်၏ ကာဗွန်ပါဝင်မှုမှာ 6.35% ဖြစ်ပြီး ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုတွင် လျော့နည်းသွားသော (polystyrene နှင့် ဆက်စပ်နေသော ဆီလီကာအမှုန်များ၊ 7.93% 35 နှင့် 10.21% အသီးသီး) 42. အချို့သော ဝင်ရိုးစွန်းများဖြစ်သည့် phenylmaleimide-methyanate PC (POMP) နှင့် phenylmaleimide-methyloxy vinyl (POMP) တို့ဖြစ်ကြသောကြောင့် အောက်ဖော်ပြပါ ကာဗွန်ပါဝင်မှု SP ၏ပြင်ဆင်မှုတွင် styrene အပြင်အသုံးပြုသည်။ ယခင်လေ့လာမှုများ 42 တွင် 0.1735 နှင့် 0.85% နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက လက်ရှိ stationary အဆင့်ရှိ နိုက်ထရိုဂျင်၏အလေးချိန်ရာခိုင်နှုန်းသည် 2.21% ဖြစ်သည်။ ဆိုလိုသည်မှာ phenylmaleimide ကြောင့် လက်ရှိ ငြိမ်ဝပ်စွာနေရသော အဆင့်တွင် နိုက်ထရိုဂျင်၏ အလေးချိန် ရာခိုင်နှုန်း မြင့်မားသည်။ အလားတူ၊ ထုတ်ကုန် (၄) နှင့် (၅) တွင် ကာဗွန်ပါဝင်မှု 2.7% နှင့် 2.9% အသီးသီးရှိကြပြီး နောက်ဆုံးထုတ်ကုန် (6) တွင် ကာဗွန်ပါဝင်မှု 6.35% ပါ၀င်သည်။ ဇယား 2 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း အပူချိန်တိုင်းတာမှုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု (TGA) ကို ကိုယ်အလေးချိန်ကျရန်အတွက် PMP ၏ ငြိမ်ဝပ်မှုအဆင့်တွင် အသုံးပြုထားပြီး၊ TGA မျဉ်းကွေး၏ အလေးချိန်ကိုပြသထားသည်။ 4 ကို Figure တွင်ဖော်ပြထားသည်။ ligands များတွင် C သာမက N၊ O နှင့် H တို့ပါ၀င်သောကြောင့် ကာဗွန်ပါဝင်မှု (6.35%) နှင့် ကောင်းမွန်သောသဘောတူညီချက်ဖြစ်သည်။
၎င်း၏ဝင်ရိုးစွန်း phenylmaleimide နှင့် vinylisocyanate အုပ်စုများကြောင့် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ကို မွမ်းမံပြင်ဆင်ရန် ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ကို ရွေးချယ်ခဲ့သည်။ ဗီနိုင်းအိုင်ဆိုစီနိတ်အုပ်စုများသည် သက်ရှိအစွန်းရောက်ပိုလီမာပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် စတီရင်းနှင့် ထပ်မံတုံ့ပြန်နိုင်သည်။ ဒုတိယအကြောင်းအရင်းမှာ phenylmaleimide moiety သည် ပုံမှန် pH တွင် virtual charge မရှိသောကြောင့်၊ analyte နှင့် stationary အဆင့်ကြားတွင် ပြင်းထန်သော electrostatic အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများမရှိသော အုပ်စုကို ထည့်သွင်းရခြင်းဖြစ်ပါသည်။ ကင်းစင်သော ပေါ်လီမာဇေးရှင်း၏ အကောင်းဆုံး styrene ပမာဏနှင့် တုံ့ပြန်မှုအချိန်အားဖြင့် ငြိမ်ဝပ်ရေးအဆင့်၏ ဝင်ရိုးစွန်းကို ထိန်းချုပ်နိုင်သည်။ တုံ့ပြန်မှု၏နောက်ဆုံးအဆင့် (free radical polymerization) သည် stationary phase ၏ polarity ကိုပြောင်းလဲသောကြောင့် အရေးကြီးပါသည်။ ဤစက်သုံးအဆင့်များတွင် ကာဗွန်ပါဝင်မှုကို စစ်ဆေးရန် ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ styrene ပမာဏ တိုးလာခြင်းနှင့် တုံ့ပြန်မှုအချိန်သည် stationary phase ၏ ကာဗွန်ပါဝင်မှုကို တိုးပွားစေပြီး အပြန်အလှန်အားဖြင့် သတိပြုမိပါသည်။ စတီရင်း၏ ကွဲပြားသောပြင်းအားများဖြင့် ပြင်ဆင်ထားသော SP များတွင် မတူညီသော ကာဗွန်ဝန်များရှိသည်။ အလားတူပင်၊ အဆိုပါ စာရေးကိရိယာအဆင့်များကို stainless steel ကော်လံများတွင် ထားရှိခဲ့ပြီး ၎င်းတို့၏ chromatographic လက္ခဏာများ (ရွေးချယ်မှု၊ ကြည်လင်ပြတ်သားမှု၊ N တန်ဖိုး စသည်) ကို စစ်ဆေးခဲ့သည်။ ဤစမ်းသပ်ချက်များအပေါ်အခြေခံ၍ PMP ရေးရေးအဆင့်ပြင်ဆင်မှုအတွက် အကောင်းဆုံးဖွဲ့စည်းမှုတစ်ခုကို ထိန်းချုပ်ထားသော ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၏ ကောင်းမွန်သောထိန်းသိမ်းမှုကို ပေးစွမ်းရန် ရွေးချယ်ခဲ့သည်။
မိုဘိုင်းအဆင့်၏စွမ်းရည်ကိုအသုံးပြု၍ PMP ကော်လံကို peptides အရောအနှောငါးခု (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) တို့ကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက်လည်း အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။ 80 µl/min တွင် 60/40 (v/v) ACN/ရေ (0.1% TFA)။ အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများ (200,000 plates/m) ကော်လံတစ်ခုလျှင် သီအိုရီအပြား (N) အရေအတွက် (100 × 1.8 မီလီမီတာ) သည် 20,000 ± 100 ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံသုံးခုအတွက် N တန်ဖိုးများကို ဇယား 3 တွင်ပြသထားပြီး chromatograms များကို ပုံ 5A တွင်ပြသထားသည်။ PMP ကော်လံတွင် မြင့်မားသောစီးဆင်းနှုန်း (700 µl/min) ဖြင့် လျင်မြန်စွာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းဖြင့် တစ်မိနစ်အတွင်း စွန့်ထုတ်ထားသော peptides ငါးခု၊ ကော်လံတစ်ခုလျှင် အလွန်ကောင်းမွန်သော N တန်ဖိုး 13,500 ± 330 (100 x 1.8 မီလီမီတာ အချင်း)၊ 135,000 plates/m (ပုံ။ 5B) နှင့် ညီမျှသည်။ မျိုးပွားနိုင်မှုကို စမ်းသပ်ရန်အတွက် အရွယ်အစားတူ ကော်လံသုံးခု (အတွင်းအချင်း 100 x 1.8 မီလီမီတာ) တွင် မတူညီသော PMP စာရေးကိရိယာအဆင့်သုံးဆင့်ဖြင့် ဖြည့်ထားသည်။ အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများ၊ သီအိုရီပိုင်းပြား N အရေအတွက်နှင့် ထိန်းသိမ်းချိန်ကို အသုံးပြု၍ ကော်လံတစ်ခုစီရှိ တူညီသောစမ်းသပ်မှုအရောအနှောကို ကော်လံတစ်ခုစီအတွက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို မှတ်တမ်းတင်ထားသည်။ PMP ကော်လံများအတွက် ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်မှုဒေတာကို ဇယား 4 တွင်ပြသထားသည်။ PMP ကော်လံ၏ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်မှုသည် ဇယား 3 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း အလွန်နိမ့်သော % RSD တန်ဖိုးများနှင့် ဆက်နွယ်နေပါသည်။
PMP ကော်လံ (B) နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (A)၊ မိုဘိုင်းအဆင့် 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)၊ PMP ကော်လံအတိုင်းအတာ (100 x 1.8 မီလီမီတာ id) ၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက် ကွန်ပေါင်းများ၏ Elution အစီအစဉ်- 1 (Gly-Tyr) , 2 (Gly-Tyr), 2 (2-Tyr)၊ (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) နှင့် 5 ( leucic acid enkephalin)။
HPLC မှလူ့သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ်မင်၏ tryptic hydrolyzate ကိုခွဲထုတ်ရန်အတွက် PMP ကော်လံ (အတွင်းအချင်း 100 x 1.8 မီလီမီတာ) ကို အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ ပုံ 6 ရှိ chromatogram သည် နမူနာများကို အလွန်ကောင်းမွန်သော ကြည်လင်ပြတ်သားမှုဖြင့် ကောင်းစွာ ပိုင်းခြားထားကြောင်း ပြသသည်။ HSA ဖြေရှင်းချက်များအား စီးဆင်းမှုနှုန်း 100 μl/min၊ 70/30 acetonitrile/water နှင့် 0.1% TFA မိုဘိုင်းအဆင့်ကို အသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ Cleavage of HSA ကို 17 peptides နှင့် သက်ဆိုင်သော chromatogram (ပုံ 6) တွင် ပြထားသည့်အတိုင်း အမြင့်ဆုံး 17 ခု ခွဲခြားထားသည်။ HSA hydrolyzate မှ အထွတ်အထိပ်တစ်ခုချင်းစီ၏ ခြားနားသော ထိရောက်မှုကို တွက်ချက်ပြီး တန်ဖိုးများကို ဇယား 5 တွင် ပြထားသည်။
HSA tryptic hydrolysates ကို PMP ကော်လံ (အတွင်းပိုင်း အချင်း 100 x 1.8 မီလီမီတာ)၊ စီးဆင်းမှုနှုန်း (100 μl/min)၊ မိုဘိုင်းအဆင့် 60/40 acetonitrile/water နှင့် 0.1% TFA တို့ကို ခွဲခြားထားသည်။
L သည် ကော်လံအရှည်ဖြစ်ပြီး η သည် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ viscosity ဖြစ်ပြီး ΔP သည် ကော်လံ၏နောက်ဘက်ဖိအားဖြစ်ပြီး u သည် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ linear velocity ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံ၏ စိမ့်ဝင်နိုင်စွမ်းမှာ 2.5 × 10–14 m2 ဖြစ်ပြီး စီးဆင်းမှုနှုန်းမှာ 25 µl/min၊ 60/40 v/v ကို အသုံးပြုထားသည်။ ACN/ရေ။ PMP ကော်လံ (ID 100 × 1.8 မီလီမီတာ) သည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင် Ref.34 လေ့လာမှုနှင့် ဆင်တူသည်။ အပေါ်ယံ အမှုန်အမွှားများဖြင့် ပြည့်နေသော ကော်လံတစ်ခု၏ စိမ့်ဝင်နိုင်မှုသည် 1.7×10 .6 µm၊ 5 µm အမှုန်များအတွက် 2.5×10-14 m2 ဖြစ်သည်။ ထို့ကြောင့် PMP အဆင့်၏ permeability သည် 5 μm အရွယ်အစားရှိသော core-shell အမှုန်များ၏ permeability နှင့်ဆင်တူသည်။
Wx သည် chloroform ဖြင့်ဖြည့်ထားသောကော်လံ၏ထုထည်ဖြစ်ပြီး Wy သည် methanol ဖြင့်ဖြည့်ထားသောကော်လံ၏ဒြပ်ထုဖြစ်ပြီး ρ သည် ပျော်ရည်၏သိပ်သည်းဆဖြစ်သည်။ မီသနော၏သိပ်သည်းဆ (ρ = 0.7866) နှင့် ကလိုရိုဖောင် (ρ = 1.484)။ ဆီလီကာ-C18 အမှုန်ကော်လံ (100 × 1.8 မီလီမီတာ ID)34 ၏ စုစုပေါင်း porosity သည် 0.63 နှင့် 0.55 အသီးသီးဖြစ်သည်။ ဆိုလိုသည်မှာ ယူရီးယား ligands များပါဝင်မှု သည် stationary phase ၏ permeability ကို လျော့နည်းစေသည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ PMP ကော်လံ (အတွင်းပိုင်းအချင်း 100 × 1.8 မီလီမီတာ) သည် 0.60 ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံများသည် C18 အမျိုးအစား ဆီလီကာအမှုန်များဖြင့် ထုပ်ပိုးထားသော ကော်လံများထက် စိမ့်ဝင်နိုင်မှု နည်းပါးသောကြောင့် C18 အမျိုးအစား စာရေးကိရိယာအဆင့်များတွင် C18 ligands များသည် linear chains ရှိ ဆီလီကာအမှုန်များနှင့် ချိတ်ဆက်ထားသောကြောင့်၊ polystyrene အမျိုးအစား stationary phases တွင် အတော်လေးထူသော ပိုလီမာကို အမှုန်များတစ်ဝိုက်တွင် ဖွဲ့စည်းထားပါသည်။ အလွှာ A. ပုံမှန်စမ်းသပ်မှုတစ်ခုတွင်၊ ကော်လံ porosity ကို အောက်ပါအတိုင်း တွက်ချက်သည်-
သဖန်းသီးပေါ်မှာ။ 7A၊ B သည် တူညီသော elution အခြေအနေများအောက်တွင် PMP ကော်လံ (id 100 x 1.8 mm) နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (id 100 x 1.8 mm) ကိုပြသသည်၊ 60/40 ACN/H2O နှင့် 0 .1% TFA 20 µl/min ကော်လံ 8.0 ပေါ်တွင် အကောင်းဆုံးစီးဆင်းမှုနှုန်း (80 µl/min) တွင် အနည်းဆုံး HETP တန်ဖိုးများသည် PMP ကော်လံအတွက် 2.6 µm နှင့် 3.9 µm နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ အသီးသီးဖြစ်သည်။ HETP တန်ဖိုးများသည် PMP ကော်လံ (100 x 1.8 mm id) ၏ ခွဲထွက်မှုစွမ်းဆောင်ရည်သည် စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (100 x 1.8 မီလီမီတာ id) ထက် များစွာမြင့်မားကြောင်း ပြသနေသည်။ ပုံ 7(A) ရှိ Van Deemter ဂရပ်သည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါက N တန်ဖိုးကျဆင်းမှုသည် သိသိသာသာမြင့်မားခြင်းမရှိကြောင်းပြသသည်။ Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက PMP ကော်လံ၏ ပိုမိုမြင့်မားသော ခွဲထွက်မှုစွမ်းဆောင်ရည် (id 100 × 1.8 mm) သည် တိုးတက်လာသော အမှုန်အမွှားပုံသဏ္ဍာန်နှင့် အရွယ်အစားနှင့် လက်ရှိအလုပ် 34 တွင် အသုံးပြုသည့် ခေတ်မီသောကော်လံထုပ်ပိုးခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်အပေါ် အခြေခံထားသည်။
(က) Van Deemter သည် 60/40 ACN/H2O တွင် 0.1% TFA ဖြင့် PMP ကော်လံ (id 100 x 1.8 mm) တွင်ရရှိသော HETP နှင့် mobile phase linear velocity။ (ခ) Van Deemter သည် 60/40 ACN/H2O တွင် 0.1% TFA ဖြင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (id 100 x 1.8 mm) တွင်ရရှိသော HETP (HETP နှင့် mobile phase linear velocity)။
မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်အရည် chromatography တွင် လူ့သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘမ်မင် (HSA) ၏ tryptic hydrolyzate ရောနှောမှုကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် intercalated polystyrene ၏ ဝင်ရိုးစွန်းအဆင့်ကို ပြင်ဆင်ပြီး အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ peptide အရောအနှောများအတွက် PMP ကော်လံများ၏ chromatographic စွမ်းဆောင်ရည်သည် ခွဲထွက်ခြင်းထိရောက်မှုနှင့် ကြည်လင်ပြတ်သားမှုဆိုင်ရာသတ်မှတ်ချက်များတွင် အလွန်ကောင်းမွန်ပါသည်။ PMP ကော်လံများ၏ ပိုမိုကောင်းမွန်သော ခွဲထွက်မှု ထိရောက်မှုသည် ဆီလီကာအမှုန်အမွှားအရွယ်အစားနှင့် ချွေးပေါက်အရွယ်အစား၊ စာရေးကိရိယာအဆင့်များ ပေါင်းစပ်ဖွဲ့စည်းမှုနှင့် ရှုပ်ထွေးသောကော်လံထုပ်ပိုးပစ္စည်းများကဲ့သို့သော အကြောင်းရင်းများစွာကြောင့်ဖြစ်သည်။ မြင့်မားသောခွဲထွက်ခြင်းထိရောက်မှုအပြင်၊ ဤ stationary အဆင့်၏နောက်ထပ်အားသာချက်မှာ မြင့်မားသောစီးဆင်းမှုနှုန်းတွင် low column back pressure ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံများသည် မျိုးပွားနိုင်စွမ်း အလွန်မြင့်မားပြီး အမျိုးမျိုးသော ပရိုတိန်းများ၏ peptides အရောအနှောများနှင့် tryptic အစာခြေခြင်းကို ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။ သဘာဝထုတ်ကုန်များမှ ဇီဝဓာတုဒြပ်ပေါင်းများကို ခွဲထုတ်ရန်၊ ဆေးဖက်ဝင်အပင်များနှင့် မှိုများကို အရည် chromatography တွင် ခွဲထုတ်ရန်အတွက် ဤကော်လံကို အသုံးပြုရန် ရည်ရွယ်ပါသည်။ အနာဂတ်တွင်၊ PMP ကော်လံများကို ပရိုတိန်းများနှင့် monoclonal antibodies ခွဲခြားခြင်းအတွက် အကဲဖြတ်မည်ဖြစ်သည်။
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation in reverse phase chromatography peptide separation systems part I- column characterisation အတွက် ပရိုတိုကော ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှု။ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation in reverse phase chromatography peptide separation systems part I- column characterization အတွက် ပရိုတိုကော ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှု။Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., and Petersson, P. Reverse-Phase Chromatography by Reverse-Phase Chromatography, Part I- Column Characterization အတွက် ပရိုတိုကောကို ဖော်ဆောင်ခြင်း။ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation in reverse phase chromatography peptide separation systems part I- ကော်လံလက္ခဏာများအတွက် ပရိုတိုကော ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှု။ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation in reverse phase chromatography peptide separation systems part I- ကော်လံလက္ခဏာများအတွက် ပရိုတိုကော ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှု။Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., and Petersson, P. Reverse-Phase Chromatography by Reverse-Phase Chromatography, Part I- Column Characterization အတွက် ပရိုတိုကောကို ဖော်ဆောင်ခြင်း။J.色谱法။ 1603၊ 113-129။ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)။
Gomez, B. et al. ကူးစက်ရောဂါများကို ကုသရန်အတွက် ပိုမိုကောင်းမွန်သော တက်ကြွသော peptides များကို ဖန်တီးရန် နည်းလမ်းများ။ ဇီဝနည်းပညာ။ အောင်မြင်မှုများ ၃၆(၂)၊ ၄၁၅-၄၂၉။ https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)။
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides- သိပ္ပံနှင့် စျေးကွက်။ Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides- သိပ္ပံနှင့် စျေးကွက်။Vliege P၊ Lisowski V၊ Martinez J နှင့် Chreschatyski M. Synthetic therapeutic peptides- သိပ္ပံနှင့် ဈေးကွက်။Vliege P၊ Lisowski V၊ Martinez J နှင့် Khreschatsky M. Synthetic therapeutic peptides- သိပ္ပံနှင့် ဈေးကွက်။ မူးယစ်ဆေးဝါးရှာဖွေတွေ့ရှိမှု။ ယနေ့ (၁–၂) ၁၅း၄၀–၅၆။ https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)။
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatographyF.၊ Smith RD နှင့် Shen Yu ကိုကြည့်ပါ။ အဆင့်မြင့် ပရိုတီအိုမစ်အရည် ခရိုမာတီဂရမ်။ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱။ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. အဆင့်မြင့် ပရိုတင်းဖွဲ့စည်းမှု 液相色谱။F.၊ Smith RD နှင့် Shen Yu ကိုကြည့်ပါ။ အဆင့်မြင့် ပရိုတီအိုမစ်အရည် ခရိုမာတီဂရမ်။J. Chromatography A 1261၊ 78-90 (2012)။
Liu, W. et al. အဆင့်မြင့်အရည် ခရိုမာတိုဂရမ်-ဒြပ်ထု spectrometry သည် ကျယ်ပြန့်သောအခြေခံဇီဝဖြစ်စဉ်များနှင့် ပရိုတီအိုမစ်များကို ပေါင်းစပ်နိုင်သည်။ စအို။ Chim Acta 1069၊ 89–97 (2019)။
Chesnut၊ SM & Salisbury၊ JJ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် UHPLC ၏အခန်းကဏ္ဍ။ Chesnut၊ SM & Salisbury၊ JJ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် UHPLC ၏အခန်းကဏ္ဍ။Chesnut၊ SM နှင့် Salisbury၊ JJ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် UHPLC ၏အခန်းကဏ္ဍ။Chesnut၊ SM နှင့် Salisbury၊ JJ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် UHPLC ၏အခန်းကဏ္ဍ။ J. စက်တင်ဘာ သိပ္ပံ 30(8)၊ 1183–1190 (2007)။
Wu, N. & Clausen, AM သည် လျင်မြန်စွာ ခွဲထွက်ရန်အတွက် အလွန်မြင့်မားသော ဖိအားအရည် chromatography ၏ အခြေခံကျပြီး လက်တွေ့ကျသော ရှုထောင့်များ။ Wu, N. & Clausen, AM သည် လျင်မြန်စွာ ခွဲထွက်ရန်အတွက် အလွန်မြင့်မားသော ဖိအားအရည် chromatography ၏ အခြေခံကျပြီး လက်တွေ့ကျသော ရှုထောင့်များ။Wu၊ N. နှင့် Clausen၊ AM သည် လျင်မြန်စွာ ခွဲထုတ်ရန်အတွက် မြင့်မားသောဖိအားအရည် chromatography ၏ အခြေခံကျပြီး လက်တွေ့ကျသော ရှုထောင့်များ။ Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面။ Wu၊ N. & Clausen၊ AM အခြေခံနှင့် လျင်မြန်စွာ ခွဲထုတ်ရန်အတွက် အလွန်မြင့်မားသောဖိအားအရည် chromatography ၏ လက်တွေ့ကျသော ရှုထောင့်များ။Wu၊ N. နှင့် Clausen၊ AM သည် လျင်မြန်စွာ ခွဲထုတ်ရန်အတွက် မြင့်မားသောဖိအားအရည် chromatography ၏ အခြေခံကျပြီး လက်တွေ့ကျသော ရှုထောင့်များ။J. စက်တင်ဘာ. သိပ္ပံ ၃၀(၈)၊ ၁၁၆၇–၁၁၈၂။ https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)။
Wren၊ SA & Tchelitcheff၊ P. ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် အလွန်စွမ်းဆောင်နိုင်သော အရည်ခရိုမာတိုဂရာကို အသုံးပြုခြင်း။ Wren၊ SA & Tchelitcheff၊ P. ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် အလွန်စွမ်းဆောင်နိုင်သော အရည်ခရိုမာတိုဂရာကို အသုံးပြုခြင်း။Ren, SA နှင့် Chelischeff, P. ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် အလွန်မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်အရည် chromatography ကိုအသုံးပြုခြင်း။ Wren၊ SA နှင့် Tchelitcheff၊ P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用။ Wren၊ SA & Tchelitcheff၊ P.Ren, SA နှင့် Chelischeff, P. ဆေးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် အလွန်စွမ်းဆောင်နိုင်သော အရည် chromatography အသုံးပြုမှု။J. Chromatography ၁၁၁၉(၁-၂)၊ ၁၄၀-၁၄၆။ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)။
Gu, H. et al. enterovirus 71. ထိရောက်စွာသန့်စင်ရန်အတွက် မြင့်မားသောအတွင်းပိုင်းအဆင့်ရှိသော ဆီ-ရေ emulsion မှရရှိသော monolithic macroporous ဟိုက်ဒရိုဂျယ်။ ပရောဂျက်။ ဂျာနယ် 401၊ 126051 (2020)။
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Proteomics တွင် liquid chromatography အခန်းကဏ္ဍ။ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Proteomics တွင် liquid chromatography အခန်းကဏ္ဍ။Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. and Wilkins, JA Proteomics တွင် liquid chromatography အခန်းကဏ္ဍ။ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. and Wilkins, JA Proteomics တွင် liquid chromatography အခန်းကဏ္ဍ။J. Chromatography 1053 (1-2), 27-36 (2004)။
Fekete၊ S.၊ Vutey၊ J.-L။ & Guillarme, D. ကုထုံးနှင့် ပရိုတင်းပရိုတိန်းများ၏ ပြောင်းပြန်-အဆင့်အရည် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ် ပိုင်းခြားခြင်းအတွက် ခေတ်ရေစီးကြောင်းအသစ်များ- သီအိုရီနှင့် အသုံးချမှုများ။ & Guillarme, D. ကုထုံးနှင့် ပရိုတင်းပရိုတိန်းများ၏ ပြောင်းပြန်-အဆင့်အရည် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ် ပိုင်းခြားခြင်းအတွက် ခေတ်ရေစီးကြောင်းအသစ်များ- သီအိုရီနှင့် အသုံးချမှုများ။ & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной громатой громат фазой: теория и приложения။ & Guillarme, D. ပြောင်းပြန်အဆင့်အရည် chromatography ဖြင့် ကုထုံး peptides နှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲထုတ်ခြင်းအတွက် ခေတ်ရေစီးကြောင်းအသစ်များ- သီအိုရီနှင့် အသုံးချမှုများ။ & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用။ & Guillarme, D.Guillarmé၊ D. ပြောင်းပြန်အဆင့်အရည် chromatography ဖြင့် ကုထုံး peptides နှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲထုတ်ရာတွင် ခေတ်ရေစီးကြောင်းအသစ်များ- သီအိုရီနှင့် အသုံးချမှုများ။J. Pharm ဇီဝဆေးသိပ္ပံ။ စအို။ ၆၉၊ ၉–၂၇ (၂၀၁၂)။
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC သည် RP-RP-HPLC စနစ်ဖြင့် မတူညီသော pH စနစ်ဖြင့် ပထမနှင့် ဒုတိယပိုင်းခြားသည့်အတိုင်းအတာဖြင့် peptides များကို နှစ်ဘက်မြင် ခွဲထုတ်ခြင်း။ Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC သည် RP-RP-HPLC စနစ်ဖြင့် မတူညီသော pH စနစ်ဖြင့် ပထမနှင့် ဒုတိယပိုင်းခြားသည့်အတိုင်းအတာဖြင့် peptides များကို နှစ်ဘက်မြင် ခွဲထုတ်ခြင်း။Gilar M., Olivova P., Dali AE နှင့် Gebler JK တို့သည် RP-RP-HPLC စနစ်ကို အသုံးပြု၍ ပထမနှင့် ဒုတိယပိုင်းခြားသည့်အတိုင်းအတာများတွင် မတူညီသော pH ရှိသော peptides များကို နှစ်ဘက်မြင် ခွဲခြားထားသည်။Gilar M., Olivova P., Dali AE နှင့် Gebler JK တို့သည် RP-RP-HPLC စနစ်ကို အသုံးပြု၍ ကွဲပြားသော pH တန်ဖိုးများကို အသုံးပြု၍ ပထမနှင့် ဒုတိယ ခွဲခြားမှုအတိုင်းအတာများတွင် pH တန်ဖိုးများကို အသုံးပြု၍ နှစ်ဖက်မြင် ခွဲထွက်ခြင်း။ J. စက်တင်ဘာ သိပ္ပံ ၂၈ (၁၄)၊ ၁၆၉၄–၁၇၀၃ (၂၀၀၅)။
Fellitti, S. et al. 2 µm ထက်ငယ်သော C18 အမှုန်များ အပြည့်အ၀ စိမ့်ဝင်ပြီး အပေါ်ယံ စိမ့်ဝင်နိုင်သော C18 အမှုန်များ ပါ၀င်သော စွမ်းဆောင်ရည်မြင့် ခရိုမာတိုဂရာကော်လံများ၏ အစုလိုက်အပြုံလိုက် လွှဲပြောင်းမှုနှင့် အရွေ့ဝိသေသလက္ခဏာများကို စူးစမ်းလေ့လာခြင်း။ J. စက်တင်ဘာ သိပ္ပံ ၄၃ (၉–၁၀)၊ ၁၇၃၇–၁၇၄၅ (၂၀၂၀)။
Piovesana, S. et al. မကြာသေးမီက ခေတ်ရေစီးကြောင်းများနှင့် အပင်များကို သီးခြားခွဲထုတ်ခြင်း၊ ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းနှင့် အတည်ပြုခြင်းတွင် ဇီဝကမ္မဖြစ်စဉ်ဆိုင်ရာ ပက်ပိုက်များ။ စအို။ သတ္တဝါ စအို။ ဓာတုဗေဒ။ 410(15), 3425-3444။ https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)။
Muller၊ JB et al ။ သက်ရှိနိုင်ငံတော်၏ မြင့်မြတ်သောရှုခင်း။ သဘာဝ 582 (7813), 592–596။ https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)။
De Luca, K. et al ။ Preparative liquid chromatography ဖြင့် ကုထုံး peptides ကို ကုသပြီးနောက်။ မော်လီကျူးများ (ဘေဆယ်၊ ဆွစ်ဇာလန်) 26(15)၊ 4688 (2021)။
Yang, Y. & Geng, X. ရောနှော-မုဒ် ခရိုမာတိုပညာနှင့် ၎င်း၏ ဇီဝပိုလီမာများအတွက် အသုံးချမှုများ။ Yang, Y. & Geng, X. ရောနှော-မုဒ် ခရိုမာတိုပညာနှင့် ၎င်း၏ ဇီဝပိုလီမာများအတွက် အသုံးချမှုများ။ယန်၊ ယု။ နှင့် Geng၊ X. ရောစပ်မုဒ် ခရိုမာတိုပညာနှင့် ၎င်း၏ ဇီဝပိုလီမာများအတွက် အသုံးချမှု။ Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用။ Yang, Y. & Geng, X. ရောစပ်မုဒ် ခရိုမာတီဂရာဖစ်နှင့် ဇီဝပိုလီမာများတွင် ၎င်း၏အသုံးချမှု။ယန်၊ ယု။ နှင့် Gene၊ X. ရောစပ်မုဒ် ခရိုမာတိုပညာနှင့် ၎င်း၏ ဇီဝပိုလီမာများအတွက် အသုံးချမှု။J. Chromatography A 1218(49), 8813–8825 (2011)။