Ẹ ṣeun fún ṣíbẹ̀wò sí Nature.com. Ẹ̀yà aṣàwákiri tí ó ní àtìlẹ́yìn CSS díẹ̀ ni o ń lò. Fún ìrírí tí ó dára jùlọ, a gbà ọ́ nímọ̀ràn pé kí o lo ẹ̀rọ aṣàwákiri tí a ti mú gbóná (tàbí kí o má ṣe pa Ìgbésẹ̀ Ìbáramu nínú Internet Explorer). Ní ​​àfikún, láti rí i dájú pé àtìlẹ́yìn ń lọ lọ́wọ́, a ń fi ojú-ọ̀nà náà hàn láìsí àwọn àṣà àti JavaScript.
Ó ń fi ìṣàfihàn àwọn ìṣàfihàn mẹ́ta hàn lẹ́ẹ̀kan náà. Lo àwọn bọ́tìnì Ìṣáájú àti Ìtẹ̀lé láti gbé àwọn ìṣàfihàn mẹ́ta jáde ní àkókò kan, tàbí lo àwọn bọ́tìnì ìṣàfihàn ní ìparí láti gbé àwọn ìṣàfihàn mẹ́ta jáde ní àkókò kan náà.
A ṣe àwọn èròjà silica oníhò pẹ̀lú ọ̀nà sol-gel pẹ̀lú àwọn àtúnṣe díẹ̀ láti gba àwọn èròjà oníhò wíwọ́. A fi N-phenylmaleemide-methylvinyl isocyanate (PMI) àti styrene ṣe àwọn èròjà wọ̀nyí nípasẹ̀ reverse chain transfer-fragmentation (RAFT) polymerization láti ṣe àwọn polyamides intercalated N-phenylmaleemide. Styrene (PMP) stainable phase. A fi ìdìpọ̀ slurry dì àwọn ọ̀wọ́n irin alagbara tí ó ní ihò díẹ̀ (100 × 1.8 mm inner diameter). A ṣe àyẹ̀wò iṣẹ́ chromatographic ti ọ̀wọ́n PMP láti ya àdàpọ̀ àwọn peptides synthetic tí ó ní àwọn peptide márùn-ún (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) àti tryptic hydrolyzate ti albumin serum ènìyàn (HAS) sọ́tọ̀. Lábẹ́ àwọn ipò ìtújáde tó dára jùlọ, iye àwọn àwo tí a fi àdàpọ̀ peptides ṣe dé 280,000 àwo/sq.m. Ní ìfiwéra iṣẹ́ ìyàsọ́tọ̀ ti ọ̀wọ́n tí a ṣe àgbékalẹ̀ pẹ̀lú ọ̀wọ́n Ascentis Express RP-Amide ti ìṣòwò, a ṣàkíyèsí pé agbára ìyàsọ́tọ̀ ti ọ̀wọ́n PMP ga ju ọ̀wọ́n ìṣòwò lọ ní ti agbára ìyàsọ́tọ̀ àti ìpinnu.
Ilé iṣẹ́ biopharmaceutical ti di ọjà àgbáyé tó ń gbòòrò sí i pẹ̀lú ìbísí pàtàkì nínú ìpín ọjà ní àwọn ọdún àìpẹ́ yìí. Pẹ̀lú ìdàgbàsókè tó ń wáyé nínú ilé iṣẹ́ biopharmaceutical1,2,3, àìní ńlá wà fún ìwádìí peptide àti protein. Yàtọ̀ sí peptide tí a fẹ́, onírúurú àìmọ́ ni a ń ṣẹ̀dá nígbà ìṣẹ̀dá peptide, nítorí náà, ìwẹ̀nùmọ́ chromatographic ni a nílò láti gba ìwẹ̀nùmọ́ tí peptide náà fẹ́. Ìwádìí àti ìṣàfihàn àwọn protein nínú omi ara, àsopọ ara, àti àwọn sẹ́ẹ̀lì jẹ́ iṣẹ́ tó ṣòro gan-an nítorí iye àwọn ẹ̀yà tó ṣeé ṣe kí a rí tí ó wà nínú àyẹ̀wò kan ṣoṣo. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé mass spectrometry jẹ́ ohun èlò tó gbéṣẹ́ fún títẹ̀lé àwọn peptide àti protein, tí a bá fi irú àwọn àpẹẹrẹ bẹ́ẹ̀ sínú mass spectrometer tààrà, ìyàsọ́tọ̀ náà kò ní tẹ́lọ́rùn. A lè yanjú ìṣòro yìí nípa ṣíṣe liquid chromatography (LC) kí a tó ṣe àyẹ̀wò MS, èyí tí yóò dín iye analytes tí ń wọ mass spectrometer kù ní àkókò kan pàtó4,5,6. Ní àfikún, analytes lè pọkàn pọ̀ sí agbègbè tóóró nígbà tí omi bá ya, nípa bẹ́ẹ̀ wọ́n ń kó àwọn analytes wọ̀nyí pọ̀ sí i, wọ́n sì ń mú kí ìmọ̀lára ìwádìí MS pọ̀ sí i. Ìṣàyẹ̀wò kírámótọ́ọ̀gì omi (LC) ti lọ síwájú gidigidi ní ọdún mẹ́wàá tó kọjá, ó sì ti di ọ̀nà tí a ń lò fún ìṣàyẹ̀wò kírámótọ́ọ̀gì7,8,9,10.
A lo chromatography omi ti o pada-ipin (RP-LC) lati sọ awọn adalu peptides di mimọ ati ya sọtọ nipa lilo silica ti a ti yipada si octadecyl (ODS) gẹgẹbi ipele iduro11,12,13. Sibẹsibẹ, nitori eto ti o ni idiju ati iseda amphoteric wọn, awọn ipele iduro RP 14,15 ko le pese ipinya ti o ni itẹlọrun ti awọn peptides ati awọn ọlọjẹ. Nitorinaa, itupalẹ awọn peptides ati awọn ọlọjẹ pẹlu awọn ege polar ati ti kii ṣe polar nilo awọn ipele iduro ti a ṣe apẹrẹ pataki lati ṣe ajọṣepọ ati idaduro awọn itupalẹ wọnyi16. Chromatography adalu, eyiti o funni ni awọn ibaraenisepo multimodal, le jẹ yiyan si RP-LC fun yiya awọn peptides, awọn ọlọjẹ, ati awọn adalu idiju miiran. Ọpọlọpọ awọn ipele iduro-ipin iru adalu ni a pese ati awọn ọwọn ti o kun pẹlu awọn ipele iduro wọnyi ni a lo lati ya awọn peptides ati awọn ọlọjẹ17,18,19,20,21 sọtọ. Nítorí wíwà àwọn ẹgbẹ́ polar àti àwọn tí kì í ṣe polar, àwọn ipò adapo mode stainable phases (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) yẹ fún ìyàsọ́tọ̀ àwọn peptides àti proteins22,23,24,25,26,27,28., àwọn ipò adapo polar intercalated standalone pẹ̀lú àwọn ẹgbẹ́ polar covalently connected connectivity fihàn àwọn agbára ìyàsọ́tọ̀ tó dára àti yíyàn aláìlẹ́gbẹ́ fún àwọn analytes polar àti non-polar nítorí pé ìyàsọ́tọ̀ sinmi lórí ìbáṣepọ̀ láàárín analyte àti standalone phase interactions Multimodal 29,30,31,32. Láìpẹ́ yìí, Zhang àti àwọn ẹlòmíràn gba àwọn ipò adapo behenyl ti polyamines àti yíyà sọ́tọ̀ àwọn hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, àti àwọn analytes mìíràn. Ohun èlò adapo polar tí a fi sínú polar ní àwọn ẹgbẹ́ polar àti non-polar, nítorí náà a lè lò ó láti ya àwọn peptides àti proteins sí àwọn apá hydrophobic àti hydrophilic. Àwọn ọ̀wọ́n onígun mẹ́rin (fún àpẹẹrẹ, àwọn ọ̀wọ́n C18 pẹ̀lú amide inline) wà lábẹ́ orúkọ ìṣòwò Ascentis Express RP-Amide, ṣùgbọ́n a ti lo àwọn ọ̀wọ́n wọ̀nyí fún ìṣàyẹ̀wò amine 33 nìkan.
Nínú ìwádìí lọ́wọ́lọ́wọ́, a pèsè ìpele ìfipamọ́ polar (N-phenylmaleimide, embedding polystyrene) tí a sì ṣe àyẹ̀wò rẹ̀ fún ìpínyà peptide àti ìyapa tryptic HSA. A lo ọgbọ́n tí ó tẹ̀lé yìí láti pèsè ìpele ìfipamọ́. A pèsè àwọn èròjà silica tí ó ní ihò ní ìbámu pẹ̀lú àwọn ìlànà tí a ṣàlàyé nínú àwọn ìtẹ̀jáde wa tí ó ti kọjá, pẹ̀lú àwọn àyípadà díẹ̀ nínú àwọn ètò ìfipamọ́ 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. A ṣe àtúnṣe àwọn ìpíndọ́gba urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS àti aqueous-acetic acid láti gba àwọn èròjà silica pẹ̀lú àwọn ìwọ̀n ihò ńlá. Èkejì, a ṣe àgbékalẹ̀ ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate tuntun kan, a sì lo àwọn èròjà silica tí a ti yọ jáde láti pèsè àwọn ìpele ìfipamọ́ polar. A kó ìpele ìfipamọ́ tí a rí sínú ọ̀wọ̀n irin alagbara (ìwọ̀n ìbú 100 × 1.8 mm) gẹ́gẹ́ bí ètò ìfipamọ́ tí a ṣe àtúnṣe. Ìfipamọ́ ọ̀wọ̀n náà ni a ń ṣe ìrànlọ́wọ́ nípasẹ̀ ìgbìmọ̀ ìwakọ̀ láti rí i dájú pé ìpele kan náà wà láàrín ọ̀wọ̀n náà. A ṣe àyẹ̀wò ọ̀wọ̀n tí a kó jọ fún ìyàsọ́tọ̀ àdàpọ̀ peptides tí ó ní peptide márùn-ún (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide). àti tryptic hydrolysates ti albumin serum human (HSA). A ṣe àkíyèsí pé adalu peptide àti HSA tryptic digest yà sọ́tọ̀ pẹ̀lú ìpinnu àti ìṣiṣẹ́ tó dára. A fi ìṣiṣẹ́ ìpínyà ti ọ̀wọ̀n PMP wé ti ọ̀wọ̀n Ascentis Express RP-Amide. A ṣe àkíyèsí pé àwọn peptides àti proteins ní ìpinnu tó dára àti ìṣiṣẹ́ ìpínyà gíga lórí ọ̀wọ̀n PMP, àti pé ìṣiṣẹ́ ìpínyà ti ọ̀wọ̀n PMP ga ju ti ọ̀wọ̀n Ascentis Express RP-Amide lọ.
PEG (polyethylene glycol), urea, acetic acid, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, human serum albumin (HSA), ammonium chloride, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), methacryloyl chloride (MC), styrene, 4-hydroxy- TEMPO, benzoyl peroxide (BPO), acetonitrile (ACN) fún HPLC, methanol, 2-propanol àti acetone. Ilé-iṣẹ́ Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA).
A da adalu urea (8 g), polyethylene glycol (8 g) ati 8 milimita ti 0.01 N. acetic acid 0.01 fun iṣẹju mẹwa, a si fi 24 milimita ti TMOS kun un labẹ itutu yinyin. A mu adalu naa gbona ni 40°C fun wakati mẹfa lẹhinna ni 120°C fun wakati mẹjọ ninu autoclave irin alagbara kan. A yọ omi kuro, a si gbẹ iyokù naa ni 70°C fun wakati 12. A lọ awọn bulọọki asọ ti o gbẹ laisiyonu ati a fi calcine sinu adiro ni 550°C fun wakati 12. A pese awọn ipele mẹta ati a ṣe apejuwe wọn lati ṣe idanwo bi awọn iwọn patikulu ṣe le tun waye, iwọn iho ati agbegbe oju.
Àkójọpọ̀ polar àti ìpele ìdádúró fún àwọn ẹ̀wọ̀n polystyrene. A ṣe àlàyé ìlànà ìpèsè ní ìsàlẹ̀ yìí.
A tú N-phenylmaleimide (200 mg) àti methyl vinyl isocyanate (100 mg) sínú toluene anhydrous, lẹ́yìn náà a fi 0.1 milimita ti 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) kún inú ìgò ìṣiṣẹ́ láti gba copolymer ti phenylmaleimide àti methyl vinyl isocyanate (PMCP). A gbóná àdàpọ̀ náà ní 60°C fún wákàtí mẹ́ta, a yọ́ ọ, a sì gbẹ ẹ́ nínú ààrò ní 40°C fún wákàtí mẹ́ta.
A tú àwọn èròjà silica gbígbẹ (2 g) ká sínú toluene gbígbẹ (100 ml), a rú wọn, a sì fi sonicated pò wọ́n fún ìṣẹ́jú mẹ́wàá nínú ìgò ìsàlẹ̀ yíká 500 ml. A tú PMCP (10 mg) ká sínú toluene, a sì fi kún un sínú ìgò náà nípasẹ̀ ìfàkún. A tú adalu náà jáde ní 100°C fún wákàtí mẹ́jọ, a yọ́, a fi acetone fọ̀ wọ́n, a sì gbẹ wọ́n ní 60°C fún wákàtí mẹ́ta. Lẹ́yìn náà, a tú àwọn èròjà silica tí ó ní í ṣe pẹ̀lú PMCP (100 g) ká sínú toluene (200 ml), a sì fi 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) kún un ní iwájú 100 μl ti dibutyltin dilaurate gẹ́gẹ́ bí ohun tí ó ń mú kí ó ṣiṣẹ́. A rú adalu náà ní 50°C fún wákàtí mẹ́jọ, a yọ́ wọ́n, a sì gbẹ wọ́n ní 50°C fún wákàtí mẹ́ta.
A tú Styrene (1 milimita), benzoyl peroxide BPO (0.5 milimita) ati awọn patikulu silica ti a so mọ TEMPO-PMCP (1.5 g) ka sinu toluene a si fi nitrogen wẹ̀ wọn. A ṣe polymerization ti styrene ni 100°C fun wakati 12. A fi methanol fọ ọja ti o jade naa a si gbẹ ni alẹ kan ni 60°C. Eto gbogbogbo ti iṣe naa han ni aworan akọkọ.
A yọ awọn ayẹwo naa kuro ni 393 K fun wakati kan titi ti titẹ ti o ku ti ko to 10–3 Torr fi di eyi ti o to. Iye N2 ti a fi sinu ara ni titẹ ibatan P/P0 = 0.99 ni a lo lati pinnu iwọn didun gbogbo iho. A ṣe ayẹwo apẹrẹ awọn patikulu silica mimọ ati ti a so mọ ligand nipa lilo ohun elo amọna elekitironi (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan). A fi awọn ayẹwo gbigbẹ (awọn patikulu silica mimọ ati awọn patikulu silica ti a so mọ ligand) sori awọn ọpa aluminiomu nipa lilo teepu erogba. A fi wura si ayẹwo naa nipa lilo ẹrọ sputtering Q150T, a si fi fẹlẹfẹlẹ Au ti o nipọn 5 nm sori ayẹwo naa. Eyi mu ṣiṣe ilana foliteji kekere dara si ati pese fifẹ tutu ti o dara. A ṣe itupalẹ eroja nipa lilo ohun elo amọna idapọ Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112. A lo ohun elo amọna titobi patikulu Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 lati gba pinpin iwọn patikulu naa. A fọ́n àwọn èròjà silica tí a kò fi ìbòrí bo àti àwọn èròjà silica tí a so mọ́ ligand (5 mg ọ̀kọ̀ọ̀kan) ká sínú 5 milimita isopropanol, a fi sonicated sí i fún ìṣẹ́jú mẹ́wàá, a sì fi sí orí bench optical Mastersizer. A ṣe àyẹ̀wò Thermogravimetric ní ìwọ̀n 5 °C fún ìṣẹ́jú kan ní ìwọ̀n iwọ̀n otutu láti 30 sí 800 °C.
Àwọn ọ̀wọ́n irin alagbara onígun mẹ́rin tí a fi okùn dí tí ó ní ìwọ̀n gígùn (ID 100 × 1.8 mm) ni a fi ọ̀nà ìkún slurry dí, tí a tẹ̀lé ìlànà kan náà gẹ́gẹ́ bí a ṣe tọ́ka sí i ní ìtọ́kasí 31. A so ọ̀wọ̀n irin alagbara (gilasi tí a fi gilasi ṣe, ID 100 × 1 .8 mm) àti ìjáde kan tí ó ní 1 µm frit pọ̀ mọ́ ẹ̀rọ ìdìpọ̀ slurry kan (Alltech Deerfield, IL, USA). A múra ìdádúró ti ìpele tí ó dúró nípa dídúró 150 mg ti ìpele tí ó dúró nínú 1.2 milimita methanol kí a sì fi sínú ọ̀wọ̀n ìpamọ́. A lo methanol gẹ́gẹ́ bí ohun tí a fi omi slurry ṣe àti ohun tí a fi ń ṣàkóso. Di ọ̀wọ̀n náà nípa lílo ìtẹ̀léra ìfúnpá ti 100 MP fún ìṣẹ́jú 10, 80 MP fún ìṣẹ́jú 15, àti 60 MP fún ìṣẹ́jú 30. Ìlànà ìdìpọ̀ náà lo àwọn ohun èlò ìgbìn gaasi chromatography méjì (Alltech, Deerfield, IL, USA) fún ìfúnpá mekaniki láti rí i dájú pé ìdìpọ̀ ọ̀wọ̀n kan náà wà. Ti ohun èlò ìdìpọ̀ slurry náà kí o sì tú ìfúnpá náà sílẹ̀ díẹ̀díẹ̀ láti dènà ìbàjẹ́ sí okùn náà. Wọ́n gé ọ̀wọ̀n náà kúrò nínú ihò slurry náà, wọ́n sì so ohun èlò míràn mọ́ ẹnu ọ̀nà náà, wọ́n sì so mọ́ ẹ̀rọ LC láti dán bí ó ṣe ń ṣiṣẹ́ wò.
A ṣe MLC aṣa kan nipa lilo fifa LC kan (10AD Shimadzu, Japan), ayẹwo pẹlu lupu abẹrẹ 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), degasser membrane kan (Shimadzu DGU-14A), ati ferese capillary UV-VIS kan. Ẹrọ idanimọ (UV-2075) ati microcolumn ti a fi enamel ṣe. Lo awọn ọpọn asopọ ti o kere pupọ ati kukuru lati dinku ipa ti imugboroosi ọwọn afikun. Lẹhin ti o ba kun ọpọn naa, fi capillary kan (50 µm id 365) sori ẹrọ ni ibi ti ipade idinku 1/16″ ki o si fi capillary (50 µm) ti ipade idinku naa sori ẹrọ. Gbigba data ati ṣiṣe chromatogram ni a ṣe nipa lilo sọfitiwia Multichro 2000. Ni 254 nm, a ṣe abojuto gbigba UV ti awọn itupalẹ koko-ọrọ ni 0. A ṣe itupalẹ data Chromatographic nipa lilo OriginPro8 (Northampton, MA).
Àbọ́múníìnì ẹ̀jẹ̀ ènìyàn, lulú lyophilized, ≥ 96% (electrophoresis jeli agarose) 3 mg ti a dapọ mọ trypsin (1.5 mg), urea 4.0 M (1 ml) ati 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ml). A da ojutu naa fun iṣẹju mẹwa a si fi sinu omi iwẹ ni 37°C fun wakati mẹfa, lẹhinna a pa a pẹlu 1 milimita ti 0.1% TFA. A sọ ojutu naa ki o si tọju ni isalẹ 4°C.
A ṣe àyẹ̀wò ìyàsọ́tọ̀ àdàpọ̀ peptides àti tryptic digest HSA lórí ọ̀wọ́n PMP kan. Ṣàyẹ̀wò tryptic hydrolysis ti adalu peptides àti HSA tí a yà sọ́tọ̀ pẹ̀lú ọ̀wọ́n PMP kan kí o sì fi àwọn èsì wéra pẹ̀lú ọ̀wọ́n Ascentis Express RP-Amide kan. A ṣírò iye àwọn àwo ìwádìí nípa lílo ìgbékalẹ̀ wọ̀nyí:
Àwòrán SEM ti àwọn èròjà silica mímọ́ àti àwọn èròjà silica tí a so mọ́ ligand ni a fihàn nínú Àwòrán 2. Àwòrán SEM ti àwọn èròjà silica mímọ́ (A, B) fi ìrísí oníyípo hàn níbi tí àwọn èròjà náà ti gùn tàbí tí wọ́n ní ìṣọ̀kan tí kò báradé ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ìkẹ́kọ̀ọ́ wa tẹ́lẹ̀. Ojú àwọn èròjà silica tí ligand (C, D) so mọ́ ara wọn jẹ́ dídán ju ti àwọn èròjà silica mímọ́ lọ, èyí tí ó lè jẹ́ nítorí àwọn ẹ̀wọ̀n polystyrene tí ó bo ojú àwọn èròjà silica náà.
Ṣíṣàyẹ̀wò àwọn micrograph elekitironi ti àwọn particles silica mímọ́ (A, B) àti àwọn particles silica tí a so mọ́ ligand (C, D).
A fi iye iwọn patiku ti awọn patikulu silica mimọ ati awọn patikulu silica ti a so mọ ligand han ni Fig. 2. 3(A). Awọn ìlà pinpin iwọn patiku volumetric fihan pe iwọn patiku silica pọ si lẹhin iyipada kemikali (Fig. 3A). A fi data pinpin iwọn patiku silica lati inu iwadi lọwọlọwọ ati iwadi ti tẹlẹ we ni Tabili 1(A). Iwọn patiku volumetric d(0.5) ti PMP jẹ 3.36 µm, ni akawe pẹlu iye ad(0.5) ti 3.05 µm ninu iwadi wa ti tẹlẹ (awọn patikulu silica ti a so mọ polystyrene)34. Nitori iyipada ninu ipin PEG, urea, TMOS ati acetic acid ninu adalu iṣe, pinpin iwọn patiku ti ipele yii kere si ni akawe si iwadi wa ti tẹlẹ. Iwọn patiku ti ipele PMP tobi diẹ ju ti ipele patiku silica ti a kọ tẹlẹ lọ. Èyí túmọ̀ sí wípé iṣẹ́ ojú ilẹ̀ àwọn èròjà silica pẹ̀lú styrene nìkan ni a fi polystyrene (0.97 µm) sí ojú ilẹ̀ silica, nígbàtí ní ìpele PMP, ìwọ̀n ìpele náà jẹ́ 1.38 µm.
Pínpín ìwọ̀n pàtákì (A) àti ìpínkiri ìwọ̀n ihò (B) ti àwọn pàtákì sílíkì mímọ́ àti àwọn pàtákì sílíkì tí a so mọ́ lígáńdì.
Ìwọ̀n ihò, ìwọ̀n ihò, àti agbègbè ojú àwọn èròjà silica tí a lò nínú ìwádìí yìí ni a fihàn nínú Táblì 1 (B). Àwọn ìwífún PSD ti àwọn èròjà silica mímọ́ àti àwọn èròjà silica tí a so mọ́ ligand ni a fihàn nínú Àwòrán 3(B). Àwọn àbájáde náà jọra sí ìwádìí wa tẹ́lẹ̀34. Ìwọ̀n ihò ti àwọn èròjà silica mímọ́ àti tí a so mọ́ ligand jẹ́ 310 Å àti 241 Å, lẹ́sẹẹsẹ, èyí tí ó fihàn pé lẹ́yìn àtúnṣe kẹ́míkà, ìwọ̀n ihò dínkù sí 69 Å, gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn nínú Táblì 1 (B), a sì fihàn ìlà yíyípadà nínú Àwòrán. Agbègbè ojú pàtó ti àwọn èròjà silica nínú ìwádìí lọ́wọ́lọ́wọ́ jẹ́ 116 m2/g, èyí tí ó jọ ìwádìí wa tẹ́lẹ̀ (124 m2/g). Gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn nínú Táblì 1(B), agbègbè ojú (m2/g) ti àwọn èròjà silica lẹ́yìn àtúnṣe kẹ́míkà tún dínkù láti 116 m2/g sí 105 m2/g.
Àwọn àbájáde ìṣàyẹ̀wò èròjà ti ìpele ìdádúró ni a gbé kalẹ̀ nínú Táblì. 2. Àkóónú erogba ti ìpele ìdádúró lọ́wọ́lọ́wọ́ jẹ́ 6.35%, èyí tí ó kéré sí i ju ti ìwádìí wa tẹ́lẹ̀ lọ (àwọn èròjà silica tí ó ní í ṣe pẹ̀lú polystyrene, 7.93%35 àti 10.21%, lẹ́sẹẹsẹ) 42. Àkóónú erogba ti ìpele ìdádúró lọ́wọ́lọ́wọ́ ní ìsàlẹ̀, níwọ̀n ìgbà tí a ti lo àwọn ligands polar bíi phenylmaleemide methyl vinyl isocyanate (PCMP) àti 4-hydroxy-TEMPO ní àfikún sí styrene nínú ìpèsè SP. Ìwọ̀n nitrogen nínú ìpele ìdádúró lọ́wọ́lọ́wọ́ jẹ́ 2.21% ní ìfiwéra pẹ̀lú 0.1735 àti 0.85% nínú àwọn ìwádìí ìṣáájú42. Èyí túmọ̀ sí wípé ìpele ìdádúró lọ́wọ́lọ́wọ́ ní ìpín ogorun ìwọ̀n gíga ti nitrogen nítorí phenylmaleemide. Bákan náà, àwọn ọjà (4) àti (5) ní ìwọ̀n erogba tó jẹ́ 2.7% àti 2.9%, lẹ́sẹẹsẹ, nígbà tí ọjà ìkẹyìn (6) ní ìwọ̀n erogba tó jẹ́ 6.35%, gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn nínú Táblì 2. A lo ìwádìí Thermogravimetric (TGA) lórí ìpele ìdádúró ti PMP láti dánwò fún pípadánù ìwọ̀n, a sì fihàn ìwọ̀n TGA nínú Àwòrán 4. Ìwọ̀n TGA fi ìwọ̀n àdánù tó jẹ́ 8.6% hàn, èyí tó bá ìwọ̀n erogba tó wà mu dáadáa (6.35%), nítorí pé àwọn ligands kò ní C nìkan, ṣùgbọ́n N, O àti H pẹ̀lú.
A yan ligand phenylmaleemide-methylvinyl isocyanate lati yi oju awọn patikulu silica pada nitori awọn ẹgbẹ polar phenylmaleemide ati vinylisocyanate rẹ. Awọn ẹgbẹ isocyanate vinyl le tun ṣe pẹlu styrene nipa gbigbe polymerization radical laaye. Idi keji ni lati fi ẹgbẹ kan ti o ni awọn ibaraẹnisọrọ alabọde pẹlu analyte sii ati pe ko si awọn ibaraẹnisọrọ electrostatic ti o lagbara laarin analyte ati ipele iduro, nitori pe apakan phenylmaleemide ko ni idiyele foju ni pH deede. A le ṣakoso polarity ti ipele iduro nipasẹ iye ti o dara julọ ti styrene ati akoko iṣe ti polymerization radical free. Igbesẹ ikẹhin ti iṣe (polymerization radical free) ṣe pataki bi o ti n yi polarity ti ipele iduro pada. A ṣe itupalẹ eroja lati ṣayẹwo akoonu erogba ninu awọn ipele iduro wọnyi. A ti ṣe akiyesi pe jijẹ iye styrene ati akoko iṣe mu akoonu erogba ti ipele iduro pọ si ati idakeji. Awọn SP ti a pese pẹlu awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti styrene ni awọn ẹru erogba oriṣiriṣi. Bákan náà, a gbé àwọn ìpele tí ó dúró ṣinṣin wọ̀nyí sí orí àwọn ọ̀wọ́n irin aláìlágbára, a sì ṣàyẹ̀wò àwọn ànímọ́ chromatographic wọn (yíyàn, ìpinnu, iye N, àti bẹ́ẹ̀ bẹ́ẹ̀ lọ). Ní ​​ìbámu pẹ̀lú àwọn àyẹ̀wò wọ̀nyí, a yan àkójọpọ̀ tí a ṣe àtúnṣe fún ìmúrasílẹ̀ ìpele tí ó dúró ṣinṣin ti PMP láti pèsè polarity tí a ṣàkóso àti ìdúró tí ó dára ti analyte náà.
A tún ṣe àyẹ̀wò ọ̀wọ̀n PMP fún ìṣàyẹ̀wò àwọn àdàpọ̀ márùn-ún ti àwọn peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) nípa lílo agbára ìpele alágbéka. 60/40 (v/v) ACN/omi (0.1% TFA) ní ìwọ̀n ìṣàn ti 80 µl/min. Lábẹ́ àwọn ipò ìtújáde tó dára jùlọ (200,000 àwo/m), iye àwọn àwo ìwádìí (N) fún ọ̀wọ̀n kọ̀ọ̀kan (100 × 1.8 mm) jẹ́ 20,000 ± 100. Àwọn ìwọ̀n N fún àwọn ọ̀wọ̀n PMP mẹ́ta náà ni a fihàn nínú Táblì 3 àti pé a fihàn àwọn chromatograms nínú Àwòrán 5A. Ìṣàyẹ̀wò kíákíá ní ìwọ̀n ìṣàn gíga (700 µl/ìṣẹ́jú) lórí ọ̀wọ́n PMP kan, àwọn peptide márùn-ún tí a yọ jáde láàrín ìṣẹ́jú kan, iye N tó dára jùlọ ti 13,500 ± 330 fún ọ̀wọ́n kan (ìwọ̀n ìlà 100 x 1.8 mm), tó dọ́gba pẹ̀lú àwọn àwo 135,000/ m (Àwòrán 5B). A fi àwọn ọ̀wọ́n mẹ́ta tí wọ́n ní ìwọ̀n kan náà kún (ìwọ̀n ìlà 100 x 1.8 mm) tí ó yàtọ̀ síra ti ìpele PMP láti dán ìṣàtúnṣe wò. A gba àwọn onímọ̀ nípa lílo àdàpọ̀ ìdánwò kan náà lórí ọ̀wọ́n kọ̀ọ̀kan nípa lílo àwọn ipò ìtújáde tí ó dára jùlọ, iye àwọn àwo ìwádìí N, àti àkókò ìpamọ́. A fi àwọn dátà ìṣàtúnṣe fún àwọn ọ̀wọ́n PMP hàn nínú Táblì 4. Ìṣàtúnṣe ti ọ̀wọ́n PMP bá àwọn ìwọ̀n %RSD tí ó kéré gan-an mu gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn nínú Táblì 3.
Ìyàsọ́tọ̀ àwọn àdàpọ̀ peptide lórí ọ̀wọ́n PMP (B) àti ọ̀wọ́n Ascentis Express RP-Amide (A), ọ̀wọ́n fósẹ́ẹ̀tì 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), ìwọ̀n ọ̀wọ́n PMP (100 x 1.8 mm id), ìṣàyẹ̀wò Ìtòlẹ́sẹẹsẹ ìyọrísí àwọn èròjà: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) àti 5 (enkephalin leucic acid).
A ṣe àyẹ̀wò ọ̀wọ̀n PMP kan (ìwọ̀n ìbú 100 x 1.8 mm) fún ìyàsọ́tọ̀ tryptic hydrolyzate ti albumin serum ènìyàn nípasẹ̀ HPLC. Chromatogram nínú Àwòrán 6 fihàn pé àwọn àyẹ̀wò náà ya ara wọn sọ́tọ̀ pẹ̀lú ìpinnu tó dára gan-an. A ṣe àyẹ̀wò àwọn ojutu HSA nípa lílo ìwọ̀n ìṣàn ti 100 μl/min, ìpele tí ń gbé kiri ti 70/30 acetonitrile/omi àti 0.1% TFA. A pín ìpínyà HSA sí àwọn òkè 17, gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn nínú chromatogram (Àwòrán 6), tí ó bá àwọn peptide 17 mu. A ṣírò agbára ìyàsọ́tọ̀ àwọn òkè kọ̀ọ̀kan láti HSA hydrolyzate, a sì fihàn àwọn iye náà nínú Táblì 5.
A ya HSA tryptic hydrolysates sọ́tọ̀ lórí ọ̀wọ́n PMP kan (opin inu 100 x 1.8 mm), oṣuwọn sisan (100 μl/min), ipele alagbeka 60/40 acetonitrile/omi, ati 0.1% TFA.
Níbi tí L jẹ́ gígùn ọ̀wọ̀n, η ni ìfọ́sípò ti ìpele alágbéka, ΔP ni ìfúnpá ẹ̀yìn ọ̀wọ̀n, àti u ni iyàrá ìlà ti ìpele alágbéka. Ìfọ́sípò ti ọ̀wọ̀n PMP jẹ́ 2.5 × 10–14 m2, iwọ̀n ìṣàn náà jẹ́ 25 µl/min, a lo 60/40 v/v. ACN/omi. Ìfọ́sípò ti ọ̀wọ̀n PMP (ID 100 × 1.8 mm) jọ ti ìwádìí Ref.34 wa tẹ́lẹ̀. Ìfọ́sípò ti ọ̀wọ̀n tí ó kún fún àwọn èròjà oníhò tí ó wà lójú ni 1.7×10 .6 µm, 2.5×10-14 m2 fún àwọn èròjà 5 µm43. Nítorí náà, ìfọ́sípò ti ìpele PMP jọ ìfọ́sípò ti àwọn èròjà mojuto-ikarahun pẹ̀lú iwọ̀n 5 μm.
Níbi tí Wx jẹ́ ìwọ̀n ọ̀wọ̀n tí ó kún fún chloroform, Wy ni ìwọ̀n ọ̀wọ̀n tí ó kún fún methanol, àti ρ ni ìwọ̀n tí ó wà nínú omi. Ìwọ̀n methanol (ρ = 0.7866) àti chloroform (ρ = 1.484). Àpapọ̀ ìwọ̀n ọ̀wọ̀n tí ó wà nínú ... Layer A. Nínú ìdánwò kan tí a sábà máa ń ṣe, a máa ń ṣírò porosity column gẹ́gẹ́ bí a ṣe ń ṣe é yìí:
Lórí àwòrán 7A, B fi àwọn àwòrán Van Deemter hàn fún ọ̀wọ́n PMP (id 100 x 1.8 mm) àti ọ̀wọ́n Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) lábẹ́ àwọn ipò ìtújáde kan náà, 60/40 ACN/H2O àti 0 .1% TFA 20 µl/min sí 800 µl/min lórí ọ̀wọ́n méjèèjì. Àwọn ìwọ̀n HETP tó kéré jùlọ ní ìwọ̀n ìṣàn tó dára jùlọ (80 µl/min) jẹ́ 2.6 µm àti 3.9 µm fún ọ̀wọ́n PMP àti ọ̀wọ́n Ascentis Express RP-Amide, lẹ́sẹẹsẹ. Àwọn ìwọ̀n HETP fihàn pé agbára ìyàsọ́tọ̀ ti ọ̀wọ́n PMP (id 100 x 1.8 mm) ga ju ti ọ̀wọ́n Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) tí ó wà ní ọjà lọ. Àwòrán van Deemter nínú Àwòrán 7(A) fihàn pé ìdínkù nínú iye N kò ga jù bẹ́ẹ̀ lọ pẹ̀lú ìṣàn omi tó ń pọ̀ sí i ní ìfiwéra pẹ̀lú ìwádìí wa tẹ́lẹ̀. Ìṣiṣẹ́ ìyàsọ́tọ̀ tó ga jùlọ ti ọ̀wọ̀n PMP (id 100 × 1.8 mm) ní ìfiwéra pẹ̀lú ọ̀wọ̀n Ascentis Express RP-Amide da lórí ìrísí àti ìwọ̀n pàǹtí tí a ti mú sunwọ̀n sí i àti ìlànà ìdìpọ̀ ọ̀wọ̀n tí a lò nínú iṣẹ́ ìsinsìnyí34.
(A) Ìlà Van Deemter (ìlà HETP vs. ìlà líníà ìpele alágbéka) tí a rí lórí ọ̀wọ̀n PMP (id 100 x 1.8 mm) nínú 60/40 ACN/H2O pẹ̀lú 0.1% TFA. (B) Ìlà Van Deemter (ìlà HETP vs ìlà líníà ìpele alágbéka) tí a rí lórí ọ̀wọ̀n Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) nínú 60/40 ACN/H2O pẹ̀lú 0.1% TFA.
A ṣe àgbékalẹ̀ ìpele ìdúró polar ti polystyrene intercalated tí a sì ṣe àgbéyẹ̀wò rẹ̀ fún ìyàsọ́tọ̀ àdàpọ̀ àwọn peptides synthetic àti tryptic hydrolyzate ti human serum albumin (HSA) nínú chromatography omi tí ó ga jùlọ. Iṣẹ́ chromatographic ti àwọn ọ̀wọ́n PMP fún àwọn àdàpọ̀ peptide jẹ́ èyí tí ó dára ní ti ìṣiṣẹ́ ìyàsọ́tọ̀ àti ìpinnu. Ìṣiṣẹ́ ìyàsọ́tọ̀ tí ó dára síi ti àwọn ọ̀wọ́n PMP jẹ́ nítorí ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìdí bíi ìwọ̀n èròjà silica àti ìwọ̀n ihò, ìṣiṣẹ́ ìṣàkóso ti àwọn ìpele ìdúró, àti àwọn ohun èlò ìpapọ̀ ọ̀wọ̀n tí ó díjú. Ní àfikún sí ìṣiṣẹ́ ìyàsọ́tọ̀ gíga, àǹfààní mìíràn ti ìpele ìdúró yìí ni ìfúnpá ẹ̀yìn ọ̀wọ̀n kékeré ní àwọn ìwọ̀n ìṣàn gíga. Àwọn ọ̀wọ́n PMP ṣeé ṣe àtúnṣe púpọ̀, a sì lè lò ó láti ṣe àgbékalẹ̀ àwọn àdàpọ̀ peptides àti ìjẹun tryptic ti onírúurú proteins. A ní èrò láti lo ọ̀wọ̀n yìí fún ìyàsọ́tọ̀ àwọn agbo-ẹ̀rọ bioactive láti inú àwọn ọjà àdánidá, àwọn ìyọkúrò ti àwọn ewéko ìṣègùn àti olu nínú chromatography omi. Ní ọjọ́ iwájú, a óò tún ṣe àgbékalẹ̀ àwọn ọ̀wọ́n PMP fún ìyàsọ́tọ̀ àwọn amuaradagba àti àwọn èròjà monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Ìwádìí sí àwọn ètò ìpínyà peptide chromatography phase reversed apart I: Ìdàgbàsókè ìlànà kan fún ìṣàfihàn ọ̀wọ́n. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Ìwádìí sí àwọn ètò ìpínyà peptide chromatography phase reversed apart I: Ìdàgbàsókè ìlànà kan fún ìṣàfihàn ọ̀wọ́n.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., àti Petersson, P. Ìwádìí lórí Àwọn Ẹ̀rọ Ìyàsọ́tọ̀ Peptide nípasẹ̀ Ìyípadà Kírómátírìkì Ìpele, Apá Kìíní: Ṣíṣe Àgbékalẹ̀ Ìlànà fún Ìṣàfihàn Àwọn Ọ̀wọ̀n. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Ìwádìí sí àwọn ètò ìpínyà peptide chromatography phase reversed apart I: Ìdàgbàsókè ìlànà kan fún àwọn ànímọ́ ọ̀wọ́n. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Ìwádìí sí àwọn ètò ìpínyà peptide chromatography phase reversed apart I: Ìdàgbàsókè ìlànà kan fún àwọn ànímọ́ ọ̀wọ́n.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., àti Petersson, P. Ìwádìí lórí Àwọn Ẹ̀rọ Ìyàsọ́tọ̀ Peptide nípasẹ̀ Ìyípadà Kírómátírìkì Ìpele, Apá Kìíní: Ṣíṣe Àgbékalẹ̀ Ìlànà fún Ìṣàfihàn Àwọn Ọ̀wọ̀n.J.色谱法。 1603, 113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. àti àwọn ẹlòmíràn. Àwọn ọ̀nà láti ṣẹ̀dá àwọn peptides tó ń ṣiṣẹ́ dáadáa fún ìtọ́jú àwọn àrùn tó ń ranni. Ìmọ̀-ẹ̀rọ nípa ẹ̀dá-ara. Àwọn Àṣeyọrí 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Àwọn peptide ìtọ́jú oníṣẹ́-ọnà: Ìmọ̀ sáyẹ́ǹsì àti ọjà. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Àwọn peptide ìtọ́jú oníṣẹ́-ọnà: Ìmọ̀ sáyẹ́ǹsì àti ọjà.Vliege P, Lisowski V, Martinez J àti Chreschatyski M. Àwọn peptide ìtọ́jú oníṣẹ́-ọnà: ìmọ̀ sáyẹ́ǹsì àti ọjà.Vliege P, Lisowski V, Martinez J àti Khreschatsky M. Àwọn peptides ìtọ́jú oníṣẹ́-ọnà: ìmọ̀ sáyẹ́ǹsì àti ọjà. Ìwádìí oògùn. Lónìí 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Ìṣàyẹ̀wò omi proteomic tó ti lọ síwájú. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Ìṣàyẹ̀wò omi proteomic tó ti lọ síwájú.Wo F., Smith RD àti Shen Yu. Ìṣàyẹ̀wò omi proteomic tó ti ní ìlọsíwájú. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. To ti ni ilọsiwaju amuaradagba tiwqn 液相色谱.Wo F., Smith RD àti Shen Yu. Ìṣàyẹ̀wò omi proteomic tó ti ní ìlọsíwájú.J. Kírómátófó. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. àti àwọn ẹlòmíràn. Ìwádìí ìṣàyẹ̀wò chromatography-mass liquid tó ti ní ìlọsíwájú lè so àwọn èròjà àti proteomics pọ̀. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ninu idagbasoke oogun. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ninu idagbasoke oogun.Chesnut, SM àti Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ninu idagbasoke oogun.Chesnut, SM àti Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ninu idagbasoke oogun. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Àwọn kókó pàtàkì àti ìṣe ti chromatography omi titẹ gíga fún ìyàsọ́tọ̀ kíákíá. Wu, N. & Clausen, AM Àwọn kókó pàtàkì àti ìṣe ti chromatography omi titẹ gíga fún ìyàsọ́tọ̀ kíákíá.Wu, N. àti Clausen, AM Àwọn kókó pàtàkì àti ìṣe ti chromatography omi titẹ gíga fún ìyàsọ́tọ̀ kíákíá. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Àwọn apá ìpìlẹ̀ àti ìṣe ti chromatography omi titẹ gíga fún ìyàsọ́tọ̀ kíákíá.Wu, N. àti Clausen, AM Àwọn kókó pàtàkì àti ìṣe ti chromatography omi titẹ gíga fún ìyàsọ́tọ̀ kíákíá.J. Oṣù Kẹsàn-án. Ìmọ̀ Sáyẹ́ǹsì. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Lilo chromatography omi ti o lagbara pupọ ninu idagbasoke oogun. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Lilo chromatography omi ti o lagbara pupọ ninu idagbasoke oogun.Ren, SA ati Chelischeff, P. Lilo chromatography omi ti o ga julọ ninu idagbasoke oogun. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA ati Chelischeff, P. Lilo chromatography omi ti o lagbara pupọ ninu idagbasoke oogun.J. Kírómátófó. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. àti àwọn ẹlòmíràn. Hydrogel macroporous monolithic kan tí a rí láti inú emulsion epo-in-water pẹ̀lú ìpele inú gíga fún ìwẹ̀nùmọ́ tó munadoko ti enterovirus 71. Iṣẹ́ àgbékalẹ̀ Kemikali. Ìwé ìròyìn 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ipa ti kromatografi omi ninu awọn proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ipa ti kromatografi omi ninu awọn proteomics.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. àti Wilkins, JA Ipa ti kiromatogirafi omi ninu awọn proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. àti Wilkins, JA Ipa ti kiromatogirafi omi ninu awọn proteomics.J. Kírómátófó. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Àwọn àṣà tuntun nínú ìyàsọ́tọ̀ chromatographic omi tí a yí padà ti àwọn peptides àti àwọn protein tí a ń tọ́jú: Ìlànà àti àwọn ìlò. & Guillarme, D. Àwọn àṣà tuntun nínú ìyàsọ́tọ̀ chromatographic omi tí a yí padà ti àwọn peptides àti àwọn protein tí a ń tọ́jú: Ìlànà àti àwọn ìlò. & Guillarme, D. Новые тенденции обращенной фазой: теория и приложения. & Guillarme, D. Àwọn àṣà tuntun nínú pípín àwọn peptides ìtọ́jú àti àwọn protein nípasẹ̀ ìyípadà ìpele omi chromatography: ìlànà àti àwọn ìlò. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.àti Guillarmé, D. Àwọn àṣà tuntun nínú pípín àwọn peptides ìtọ́jú àti àwọn protein nípasẹ̀ ìyípadà ìpele omi chromatography: ìlànà àti àwọn ìlò.J. Pharm. Ìmọ̀ nípa Ìṣègùn Onímọ̀ nípa Ìṣègùn. ihò. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Ìyàsọ́tọ̀ onípele méjì ti àwọn peptides nípa lílo ètò RP-RP-HPLC pẹ̀lú pH tó yàtọ̀ síra ní àwọn ìwọ̀n ìpínyà àkọ́kọ́ àti ìkejì. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Ìyàsọ́tọ̀ onípele méjì ti àwọn peptides nípa lílo ètò RP-RP-HPLC pẹ̀lú pH tó yàtọ̀ síra ní àwọn ìwọ̀n ìpínyà àkọ́kọ́ àti ìkejì.Gilar M., Olivova P., Dali AE ati Gebler JK Iyapa onisẹpo meji ti awọn peptides nipa lilo eto RP-RP-HPLC pẹlu pH oriṣiriṣi ni awọn iwọn ipinya akọkọ ati keji.Gilar M., Olivova P., Dali AE ati Gebler JK Iyapa onisẹpo meji ti awọn peptides nipa lilo awọn iye pH oriṣiriṣi ni awọn iwọn ipinya akọkọ ati keji nipa lilo eto RP-RP-HPLC. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. àti àwọn ẹlòmíràn. Ìwádìí lórí ìyípadà ibi-iṣẹ́ àti àwọn ànímọ́ kinetic ti àwọn ọ̀wọ́n chromatography tí ó ní agbára gíga tí a fi àwọn patikulu C18 tí ó ní ihò pátápátá àti tí ó ní ihò ojú tí ó kéré sí 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. àti àwọn ẹlòmíràn. Àwọn ìpèníjà onímọ̀ tuntun àti ìwádìí nínú ìyàsọ́tọ̀, ìdámọ̀, àti ìfìdí múlẹ̀ àwọn peptides oníṣẹ́-abẹ ewéko. anus. Anal ẹ̀dá. Kẹ́míkà. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB àti àwọn ẹlòmíràn. Ìrísí Proteomic ti ìjọba ìyè. Ìṣẹ̀dá 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. àti àwọn ẹlòmíràn. Lẹ́yìn ìtọ́jú àwọn peptides ìtọ́jú nípa lílo chromatography omi tí a ṣe. Àwọn Molecules (Basel, Switzerland) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Àdàpọ̀ ìrísí krómátọ́ọ̀gì àti àwọn ìlò rẹ̀ sí àwọn biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. Àdàpọ̀ ìrísí krómátọ́ọ̀gì àti àwọn ìlò rẹ̀ sí àwọn biopolymers.Yang, Yu. àti Geng, X. Àdàpọ̀ ìrísí krómátọ́ọ̀gì àti lílò rẹ̀ sí àwọn biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Àdàpọ̀ ìrísí krómátọ́ọ̀gì àti lílò rẹ̀ nínú àwọn biopolymers.Yang, Yu. àti Gene, X. Àdàpọ̀ ìrísí krómátọ́ọ̀gì àti lílò rẹ̀ sí àwọn biopolymers.J. Kírómátófó. A 1218(49), 8813–8825 (2011).