Nature.com غا كىرگىنىڭىزگە رەھمەت. سىز چەكلىك CSS قوللىشى بار تور كۆرگۈچ نۇسخىسىنى ئىشلىتىۋاتىسىز. ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن، يېڭىلانغان تور كۆرگۈچنى ئىشلىتىشىڭىزنى (ياكى Internet Explorer دا ماسلىشىشچانلىق ھالىتىنى چەكلىشىڭىزنى) تەۋسىيە قىلىمىز. بۇنىڭدىن باشقا، داۋاملىق قوللاشنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن، بىز تور بېكەتنى ئۇسلۇبسىز ۋە JavaScriptسىز كۆرسىتىمىز.
بىرلا ۋاقىتتا ئۈچ سىيرىلما رەسىم توپلىمىنى كۆرسىتىدۇ. بىرلا ۋاقىتتا ئۈچ سىيرىلما رەسىم ئارىسىدا يۆتكىلىش ئۈچۈن «ئالدىنقى» ۋە «كېيىنكى» كۇنۇپكىلىرىنى ئىشلىتىڭ، ياكى بىرلا ۋاقىتتا ئۈچ سىيرىلما رەسىم ئارىسىدا يۆتكىلىش ئۈچۈن ئاخىرىدىكى سىيرىلما كۇنۇپكىلىرىنى ئىشلىتىڭ.
كەڭ تۆشۈكلۈك زەررىچىلەرنى ئېلىش ئۈچۈن، تۆشۈكلۈك كرېمنىي زەررىچىلىرى سول-گېل ئۇسۇلى ئارقىلىق بىر قىسىم ئۆزگەرتىشلەر بىلەن تەييارلاندى. بۇ زەررىچىلەر N-فېنىلمالېئىمىد ئارىلاشقان پولىئامىدلارنى ئىشلەپچىقىرىش ئۈچۈن N-فېنىلمالېئىمىد-مېتىلۋىنىل ئىزوسىئانات (PMI) ۋە ستىرول بىلەن تەتۈر زەنجىر يۆتكەش-پارچە قىلىش (RAFT) پولىمېرلىشىشى ئارقىلىق ھاسىل قىلىندى. ستىرول (PMP) نىڭ مۇقىم باسقۇچى. تار دىئامېتىرلىق داتلاشماس پولات تۈۋرۈكلەر (ئىچكى دىئامېتىرى 100 × 1.8 مىللىمېتىر) سۇيۇقلۇق ئورالمىسى بىلەن ئورالغان. PMP تۈۋرۈكىنىڭ خروماتوگرافىيەلىك ئىقتىدارى باھالىنىپ، بەش پېپتىد (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، Leu ئامىنو كىسلاتا ئېنكېفالىن) ۋە ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىننىڭ (HAS) ترىپتىك گىدرولىزاتىدىن تەركىب تاپقان سۈنئىي پېپتىدلارنىڭ ئارىلاشمىسىنى ئايرىۋېلىندى. ئەڭ ياخشى ئېلىيۇتسىيە شارائىتىدا، پېپتىد ئارىلاشمىسى قوشۇلغان تاختىلارنىڭ نەزەرىيەۋى سانى 280،000 تاختا/كۋادرات مېتىرغا يەتتى. تەرەققىي قىلدۇرۇلغان تۈۋرۈكنىڭ ئايرىش ئىقتىدارىنى سودا Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمى ۋە ئېنىقلىق دەرىجىسى جەھەتتە سودا تۈۋرۈكىدىن يۇقىرى ئىكەنلىكى كۆزىتىلدى.
بىئو دورىگەرلىك كەسپى يېقىنقى يىللاردىن بۇيان بازار ئۈلۈشىنىڭ كۆرۈنەرلىك ئېشىشى بىلەن كېڭىيىۋاتقان دۇنيا بازىرىغا ئايلاندى. بىئو دورىگەرلىك كەسپىنىڭ پارتلاش خاراكتېرلىك ئېشىشىغا ئەگىشىپ، پېپتىد ۋە ئاقسىل ئانالىزىغا بولغان ئېھتىياج زور. نىشان پېپتىدتىن باشقا، پېپتىد بىرىكمىسى جەريانىدا ھەر خىل ئارىلاشمىلار ھاسىل بولىدۇ، شۇڭا پېپتىدنىڭ خالىغان ساپلىقىغا ئېرىشىش ئۈچۈن خروماتوگرافىيەلىك تازىلاش تەلەپ قىلىنىدۇ. بىر ئەۋرىشكىدە بايقىغىلى بولىدىغان تۈرلەرنىڭ كۆپلۈكى سەۋەبىدىن، بەدەن سۇيۇقلۇقى، توقۇلمىلىرى ۋە ھۈجەيرىلىرىدىكى ئاقسىللارنى ئانالىز قىلىش ۋە خاراكتېرىنى بېكىتىش ئىنتايىن قىيىن ۋەزىپە. ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى پېپتىد ۋە ئاقسىللارنى تەرتىپلەشتىكى ئۈنۈملۈك قورال بولسىمۇ، ئەگەر بۇنداق ئەۋرىشكىلەر بىۋاسىتە ماسسا سپېكترومېتىرىغا كىرگۈزۈلسە، ئايرىش قانائەتلىنەرلىك بولمايدۇ. بۇ مەسىلىنى MS ئانالىزىدىن بۇرۇن سۇيۇق خروماتوگرافىيە (LC) ئېلىپ بېرىش ئارقىلىق ھەل قىلغىلى بولىدۇ، بۇ مەلۇم ۋاقىتتا ماسسا سپېكترومېتىرىغا كىرىدىغان ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلارنىڭ مىقدارىنى ئازايتىدۇ4،5،6. بۇنىڭدىن باشقا، ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلار سۇيۇق باسقۇچ ئايرىش جەريانىدا تار رايوندا مەركەزلىشىپ، بۇ ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلارنى مەركەزلەشتۈرۈپ، MS بايقاش سەزگۈرلۈكىنى ئاشۇرالايدۇ. سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى (LC) ئۆتكەن ئون يىلدا زور دەرىجىدە تەرەققىي قىلدى ۋە پروتېئومىك ئانالىزدا كەڭ قوللىنىلىدىغان ئۇسۇلغا ئايلاندى7،8،9،10.
تەتۈر باسقۇچلۇق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى (RP-LC) پېپتىدلارنىڭ ئارىلاشمىلىرىنى تازىلاش ۋە ئايرىش ئۈچۈن كەڭ قوللىنىلىدۇ، بۇ ئۇسۇلدا ئوكتادېتسىل ئۆزگەرتىلگەن كرېمنىي (ODS) نى مۇقىم باسقۇچ سۈپىتىدە ئىشلىتىدۇ11،12،13. قانداقلا بولمىسۇن، ئۇلارنىڭ مۇرەككەپ قۇرۇلمىسى ۋە ئامفوتېرىك تەبىئىتى سەۋەبىدىن،14،15 RP مۇقىم باسقۇچلىرى پېپتىدلار بىلەن ئاقسىللارنى قانائەتلىنەرلىك ئايرىيالمايدۇ. شۇڭلاشقا، قۇتۇپلۇق ۋە قۇتۇپسىز پارچىلىرى بار پېپتىدلار ۋە ئاقسىللارنى تەھلىل قىلىش ئۈچۈن، بۇ ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلارنى ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش ۋە ساقلاش ئۈچۈن ئالاھىدە لايىھەلەنگەن مۇقىم باسقۇچلار تەلەپ قىلىنىدۇ16. كۆپ خىل ئۇسۇللۇق ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان ئارىلاشما خروماتوگرافىيە پېپتىدلار، ئاقسىللار ۋە باشقا مۇرەككەپ ئارىلاشمىلارنى ئايرىش ئۈچۈن RP-LC نىڭ ئورنىنى ئالالايدۇ. بىر قانچە ئارىلاش تىپتىكى مۇقىم باسقۇچلار تەييارلاندى ۋە بۇ مۇقىم باسقۇچلار بىلەن تولدۇرۇلغان ئىستونلار پېپتىدلار بىلەن ئاقسىللارنى ئايرىش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى17،18،19،20،21. قۇتۇپ ۋە قۇتۇپسىز گۇرۇپپىلارنىڭ مەۋجۇتلۇقى سەۋەبىدىن، ئارىلاشما ھالەتتىكى مۇقىم باسقۇچلار (WAX/RPLC، HILIC/RPLC، قۇتۇپ ئارىلىقى/RPLC) پېپتىد ۋە ئاقسىللارنى ئايرىشقا ماس كېلىدۇ22،23،24،25،26،27،28. ، كوۋالېنتلىق باغلىنىشلىق قۇتۇپ گۇرۇپپىلىرى بىلەن قۇتۇپ ئارىلىقىدىكى مۇقىم باسقۇچلار قۇتۇپ ۋە قۇتۇپسىز ئانالىزاتلارغا نىسبەتەن ياخشى ئايرىش ئىقتىدارى ۋە ئۆزگىچە تاللاشچانلىقنى كۆرسىتىدۇ، چۈنكى ئايرىش ئانالىزات بىلەن مۇقىم باسقۇچ ئوتتۇرىسىدىكى ئۆز-ئارا تەسىرگە باغلىق. كۆپ خىل ئۇسۇلدىكى ئۆز-ئارا تەسىرلەر29،30،31،32. يېقىندا، جاڭ قاتارلىقلار 30 پولىئامىننىڭ بېخېنىل بىلەن ئاخىرلاشقان مۇقىم باسقۇچلىرىنى قولغا كەلتۈردى ۋە گىدروكاربون، ئانتىدېپرېسسىيە دورىلىرى، فلاۋونوئىدلار، نۇكلېئوزىدلار، ئېستروگېنلار ۋە باشقا بىر قىسىم ئانالىزاتلارنى مۇۋەپپەقىيەتلىك ئايرىدى. قۇتۇپقا كىرگۈزۈلگەن مۇقىم ماتېرىيال قۇتۇپ ۋە قۇتۇپسىز گۇرۇپپىلارغا ئىگە، شۇڭا ئۇنى پېپتىد ۋە ئاقسىللارنى گىدروفوب ۋە گىدروفىل قىسىملارغا ئايرىشقا ئىشلىتىشكە بولىدۇ. قۇتۇپ ئىچكى سىزىقلىق تۈۋرۈكلەر (مەسىلەن، ئامىد ئىچكى سىزىقلىق C18 تۈۋرۈكلىرى) Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكلىرى سودا نامى ئاستىدا سېتىلىدۇ، ئەمما بۇ تۈۋرۈكلەر پەقەت ئامىنو 33 نى تەھلىل قىلىش ئۈچۈنلا ئىشلىتىلگەن.
بۇ تەتقىقاتتا، قۇتۇپلۇق قىستۇرما تۇراقلىق باسقۇچ (N-فېنىلمالېئىمىد، قىستۇرما پولىسترولېن) تەييارلىنىپ، پېپتىد ئايرىش ۋە تىرىپتىك HSA پارچىلىنىشى ئۈچۈن باھالاندى. تۇراقلىق باسقۇچنى تەييارلاش ئۈچۈن تۆۋەندىكى ئۇسۇل قوللىنىلدى. تۆشۈكلۈك كرېمنىي زەررىچىلىرى ئىلگىرىكى نەشرلىرىمىزدە بايان قىلىنغان تەرتىپلەرگە ئاساسەن تەييارلاندى، تەييارلاش لايىھەسى 31، 34، 35، 36، 37، 38، 39 دا بەزى ئۆزگىرىشلەر قىلىندى. چوڭ تۆشۈكلۈك كرېمنىي زەررىچىلىرىنى ئېلىش ئۈچۈن كاربامىد، پولىئېتىلېن گلىكول (PEG)، TMOS ۋە سۇ-سىركە كىسلاتاسىنىڭ نىسبىتى تەڭشەلدى. ئىككىنچىدىن، يېڭى فېنىلمالېئىمىد-مېتىلۋىنىل ئىزوسىئانات بىرىكمىسى سىنتېز قىلىندى ۋە ئۇنىڭدىن ھاسىل قىلىنغان كرېمنىي زەررىچىلىرى قۇتۇپلۇق قىستۇرما تۇراقلىق باسقۇچلارنى تەييارلاش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى. ئېرىشكەن تۇراقلىق باسقۇچ ئەلالاشتۇرۇلغان قاچىلاش لايىھەسىگە ئاساسەن داتلاشماس پولات تۈۋرۈككە (ئىچكى دىئامېتىرى 100 × 1.8 مىللىمېتىر) قاچىلاندى. تۈۋرۈكنىڭ قاچىلاش جەريانى مېخانىكىلىق تىترەش ئارقىلىق ياردەم قىلىنىپ، تۈۋرۈك ئىچىدە بىردەك قەۋەتنىڭ بولۇشىغا كاپالەتلىك قىلىنىدۇ. ئورالغان تۈۋرۈك بەش پېپتىد (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، لېئۇسىن-ئېنكېفالىن پېپتىد) ۋە ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىن (HSA) نىڭ ترىپتىك گىدرولىزاتلىرىدىن تەركىب تاپقان پېپتىد ئارىلاشمىسىنى ئايرىش ئۈچۈن باھالاندى. پېپتىد ئارىلاشمىسى ۋە HSA ترىپتىك ھەزىم قىلىش ماددىسىنىڭ ياخشى ئېنىقلىق ۋە ئۈنۈملۈك ئايرىۋېتىلگەنلىكى كۆزىتىلدى. PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمى Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمى بىلەن سېلىشتۇرۇلدى. پېپتىدلار ۋە ئاقسىللارنىڭ PMP تۈۋرۈكىدە ياخشى ئېنىقلىق ۋە يۇقىرى ئايرىش ئۈنۈمىگە ئىگە ئىكەنلىكى، ھەمدە PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمى Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمىدىن يۇقىرى ئىكەنلىكى كۆزىتىلدى.
PEG (پولىئېتىلېن گلىكول)، كاربامىد، ئاتسېتاتىك كىسلاتا، ترىمېتوكسىئورتوسىلىكات (TMOS)، ترىمېتىلخلوروسىلان (TMCS)، ترىپسىن، ئىنسان زەردابى ئالبۇمىنى (HSA)، ئاممونىي خىلورىد، كاربامىد، گېكسامېتىلمېتاكرىلوئىلدىسىلازان (HMDS)، مېتاكرىلوئىد خىلورىد (MC)، ستىرول، 4-گىدروكسى-TEMPO، بېنزوئىل پېروكسىد (BPO)، HPLC ئۈچۈن ئاتسېتونىترىل (ACN)، مېتانول، 2-پروپانول ۋە ئاتسېتون. سىگما-ئالدرىچ شىركىتى (سانت لۇئىس، مىسسۇرى، ئامېرىكا).
كاربامىد (8 گرام)، پولىئېتىلېن گلىكول (8 گرام) ۋە 8 مىللىلىتىر 0.01 N ئاتسېتاتىك كىسلاتا ئارىلاشمىسى 10 مىنۇت ئارىلاشتۇرۇلدى، ئاندىن مۇز بىلەن سوۋۇتۇش ئارقىلىق 24 مىللىلىتىر TMOS قوشۇلدى. رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى 40 سېلسىيە گرادۇستا 6 سائەت، ئاندىن 120 سېلسىيە گرادۇستا 8 سائەت داتلاشماس پولات ئاپتوماتىك ئوتوكلاۋدا قىزىتىلدى. سۇ سۈزۈلۈپ، قالغان ماددىلار 70 سېلسىيە گرادۇستا 12 سائەت قۇرۇتۇلدى. قۇرۇتۇلغان يۇمشاق بۆلەكلەر سىلىق ئېزىلىپ، 550 سېلسىيە گرادۇستا 12 سائەت قىزىتىلدى. زەررىچە چوڭلۇقى، تۆشۈك چوڭلۇقى ۋە يۈز كۆلىمىنىڭ قايتا ھاسىل بولۇش ئىقتىدارىنى سىناق قىلىش ئۈچۈن ئۈچ تۈركۈم تەييارلىنىپ، خاراكتېرلەشتۈرۈلدى.
پولىسترېل زەنجىرلىرى ئۈچۈن قۇتۇپ گۇرۇپپىسى ۋە مۇقىم باسقۇچ. تەييارلاش تەرتىپى تۆۋەندە بايان قىلىنىدۇ.
N-فېنىلمالېئىمىد (200 مىللىگرام) ۋە مېتىل ۋىنىل ئىزوسىئانات (100 مىللىگرام) سۇسىز تولۇئېندا ئېرىتىلدى، ئاندىن فېنىلمالېئىمىد ۋە مېتىل ۋىنىل ئىزوسىئانات (PMCP) نىڭ بىرلىكتە پولىمېرىنى ئېلىش ئۈچۈن رېئاكسىيە بوتۇلكىسىغا 0.1 مىللىلىتىر 2،2′-ئازوئىزوبۇتىرونىترىل (AIBN) قوشۇلدى. ) ئارىلاشما 60 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت قىزىتىلدى، سۈزۈلدى ۋە 40 سېلسىيە گرادۇستا ئوچاقتا 3 سائەت قۇرۇتۇلدى.
قۇرۇتۇلغان كرېمنىي زەررىچىلىرى (2 گرام) قۇرۇق تولۇئېنغا (100 مىللىلىتىر) ئېرىتىلىپ، ئارىلاشتۇرۇلۇپ، 500 مىللىلىتىرلىق يۇمىلاق ئاستىدىكى بوتۇلكىدا 10 مىنۇت ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى بىلەن تەكشۈرۈلدى. PMCP (10 مىللىگرام) تولۇئېندا ئېرىتىلىپ، قوشۇمچە قۇۋۇر ئارقىلىق رېئاكسىيە بوتۇلكىسىغا تامچىلاپ قوشۇلدى. ئارىلاشما 100 سېلسىيە گرادۇستا 8 سائەت قايتا قاينىتىلىپ، سۈزۈلۈپ، ئاتسېتون بىلەن يۇيۇلۇپ، 60 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت قۇرۇتۇلدى. ئاندىن، PMCP (100 گرام) بىلەن مۇناسىۋەتلىك كرېمنىي زەررىچىلىرى تولۇئېندا (200 مىللىلىتىر) ئېرىتىلىپ، ئۇنىڭغا 100 μl دىبۇتىلتىن دىلاۋرات كاتالىزاتور سۈپىتىدە قوشۇلۇپ، 4-ھىدروكسى-TEMPO (2 مىللىلىتىر) قوشۇلدى. ئارىلاشما 50 سېلسىيە گرادۇستا 8 سائەت ئارىلاشتۇرۇلۇپ، سۈزۈلۈپ، 50 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت قۇرۇتۇلدى.
ستىرول (1 مىللىلىتىر)، بېنزوئىل پېروكسىد BPO (0.5 مىللىلىتىر) ۋە TEMPO-PMCP (1.5 گرام) غا چاپلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى تولۇئېنغا ئېرىتىلىپ، ئازوت بىلەن تازىلاندى. ستىرولنىڭ پولىمېرلىشىشى 100 سېلسىيە گرادۇستا 12 سائەت ئېلىپ بېرىلدى. نەتىجىدە ھاسىل بولغان مەھسۇلات مېتانول بىلەن يۇيۇلۇپ، 60 سېلسىيە گرادۇستا بىر كېچە قۇرۇتۇلدى. رېئاكسىيەنىڭ ئومۇمىي لايىھەسى 1-رەسىمدە كۆرسىتىلدى.
ئەۋرىشكىلەر 393 K تېمپېراتۇرىدا 1 سائەت گازسىزلاندۇرۇلدى، ئاندىن 10-3 Torr دىن تۆۋەن قالدۇق بېسىم قولغا كەلتۈرۈلدى. ئومۇمىي تۆشۈك ھەجىمىنى بېكىتىش ئۈچۈن نىسپىي بېسىم P/P0 = 0.99 دا سۈمۈرۈلگەن N2 مىقدارى ئىشلىتىلدى. ساپ ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ مورفولوگىيەسى سىكانىرلاش ئېلېكترون مىكروسكوپى (Hitachi High Technologies, توكيو, ياپونىيە) ئارقىلىق تەكشۈرۈلدى. قۇرۇق ئەۋرىشكىلەر (ساپ كرېمنىي ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى) كاربون لېنتا ئارقىلىق ئاليۇمىن تاياقچىلارغا قويۇلدى. ئالتۇن Q150T پۈركۈش ئۈسكۈنىسى ئارقىلىق ئەۋرىشكە قويۇلدى، ھەمدە ئەۋرىشكە 5 نانومېتىر قېلىنلىقتىكى Au قەۋىتى قويۇلدى. بۇ تۆۋەن توك بېسىمى جەريانىنىڭ ئۈنۈمىنى يۇقىرى كۆتۈرۈپ، نېپىز سوغۇق پۈركۈش بىلەن تەمىنلەيدۇ. ئېلېمېنت ئانالىزى Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 ئېلېمېنت تەركىب ئانالىزاتورى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تەقسىملىنىشىنى ئىگىلەش ئۈچۈن Malvern زەررىچە چوڭلۇقى ئانالىزاتورى (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ئىشلىتىلدى. قاپلانمىغان كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە بىرىكمە بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى (ھەر بىرى 5 مىللىگرام) 5 مىللىلىتىر ئىزوپروپانولغا ئېرىتىلىپ، 10 مىنۇت ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى بىلەن تەكشۈرۈلۈپ، 5 مىنۇت ئارىلاشتۇرۇلۇپ، ماستېرسىزېر ئوپتىكىلىق ئۈستەلگە قويۇلدى. تېرموگراۋىمېتىرلىق ئانالىز 30 سېلسىيە گرادۇستىن 800 سېلسىيە گرادۇسقىچە بولغان تېمپېراتۇرا دائىرىسىدە مىنۇتىغا 5 سېلسىيە گرادۇس سۈرئەت بىلەن ئېلىپ بېرىلىدۇ.
ئەينەك تالا بىلەن قاپلانغان تار دىئامېتىرلىق (ID 100 × 1.8 مىللىمېتىر) داتلاشماس پولات تۈۋرۈكلەر 31-نومۇرلۇق پايدىلىنىش ماتېرىيالىدىكىگە ئوخشاش ئۇسۇلدا سۇيۇقلۇق تولدۇرۇش ئۇسۇلى ئارقىلىق ئورالدى. داتلاشماس پولات تۈۋرۈك (ئەينەك بىلەن قاپلانغان، ID 100 × 1.8 مىللىمېتىر) ۋە 1 µm فرىت بار چىقىش ئېغىزى سۇيۇقلۇق قاچىلاش ماشىنىسىغا (Alltech Deerfield, IL, USA) ئۇلاندى. 150 مىللىگرام سۇيۇقلۇقنى 1.2 مىللىلىتىر مېتانولغا قويۇپ، ئۇنى سۇ ئامبىرىغا قۇيۇش ئارقىلىق سۇيۇقلۇقنىڭ سۇسپېنزىيەسىنى تەييارلاڭ. سۇيۇقلۇق ئېرىتكۈچى ۋە كونترول ئېرىتكۈچى سۈپىتىدە مېتانول ئىشلىتىلدى. تۈۋرۈكنى 10 مىنۇت 100 MP، 15 مىنۇت 80 MP ۋە 30 مىنۇت 60 MP بېسىم تەرتىپى ئارقىلىق ئوراڭ. ئوراش جەريانىدا، تۈۋرۈكنىڭ بىردەك ئورالىشىنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن، مېخانىكىلىق تىترەش ئۈچۈن ئىككى گاز خروماتوگرافىيە تۈۋرۈك تىترەش ئۈسكۈنىسى (Alltech, Deerfield, IL, USA) ئىشلىتىلدى. سۇيۇقلۇق قاچىلاش ئۈسكۈنىسىنى تاقاپ، سىمنىڭ بۇزۇلۇشىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن بېسىمنى ئاستا قويۇپ بېرىڭ. تۈۋرۈك سۇ چىقىرىش ئېغىزىدىن ئايرىلدى، يەنە بىر ئورنىتىش ئېغىزىغا ئۇلىنىپ، ئۇنىڭ ئىشلىشىنى سىناش ئۈچۈن LC سىستېمىسىغا ئۇلاندى.
خاسلاشتۇرۇلغان MLC LC پومپىسى (10AD Shimadzu, ياپونىيە)، 50 nL ئوكۇل قىلىش ھالقىسى بار ئۈلگە ئالغۇچ (Valco (ئامېرىكا) C14 W.05)، پەردە گاز چىقىرىغۇچ (Shimadzu DGU-14A) ۋە UV-VIS كاپىللا دېرىزىسى ئارقىلىق ياسالغان. دېتېكتور ئۈسكۈنىسى (UV-2075) ۋە ئېماللانغان مىكرو ئىستون. قوشۇمچە ئىستون كېڭىيىشىنىڭ تەسىرىنى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرۈش ئۈچۈن ناھايىتى تار ۋە قىسقا تۇتاشتۇرۇش تۇرۇبىسى ئىشلىتىڭ. ئىستوننى تولدۇرغاندىن كېيىن، 1/16 دىيۇملۇق ئازايتىش ئېغىزىنىڭ چىقىش ئېغىزىغا كاپىللا (50 µm id 365) ئورنىتىڭ ۋە ئازايتىش ئېغىزىنىڭ كاپىللا (50 µm) ئورنىتىڭ. سانلىق مەلۇمات توپلاش ۋە خروماتوگرامما بىر تەرەپ قىلىش Multichro 2000 يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلىدۇ. 254 nm دا، سىناق قىلىنغۇچىلارنىڭ UV سۈمۈرۈشچانلىقى 0 دە نازارەت قىلىندى. خروماتوگرامما سانلىق مەلۇماتلىرى OriginPro8 (نورسامپتون, MA) ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى.
ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىن، لىئوفىللاشتۇرۇلغان پاراشوك، ≥ 96% (ئاگاروز گېلى ئېلېكتروفورېزى) 3 مىللىگرام ترىپسىن (1.5 مىللىگرام)، 4.0 M كاربامىد (1 مىللىلىتىر) ۋە 0.2 M ئاممونىي بىكاربونات (1 مىللىلىتىر) بىلەن ئارىلاشتۇرۇلىدۇ. ئېرىتمە 10 مىنۇت ئارىلاشتۇرۇلۇپ، 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق سۇ مۇنچىسىدا 6 سائەت ساقلىنىدۇ، ئاندىن 1 مىللىلىتىر %0.1 TFA بىلەن سوۋۇتۇلىدۇ. ئېرىتمىنى سۈزۈپ، 4 سېلسىيە گرادۇستىن تۆۋەن تېمپېراتۇرىدا ساقلاڭ.
PMP ئىستونىدا پېپتىد ۋە تىرىپتىك دىزېد HSA ئارىلاشمىسىنى ئايرىش ئايرىم باھالاندى. PMP ئىستونىدا ئايرىلغان پېپتىد ۋە HSA ئارىلاشمىسىنىڭ تىرىپتىك گىدرولىزلىنىشىنى تەكشۈرۈپ، نەتىجىلەرنى Ascentis Express RP-Amide ئىستون بىلەن سېلىشتۇرۇڭ. نەزەرىيەۋى تاختىلارنىڭ سانى تۆۋەندىكى تەڭلىمە ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ:
ساپ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ SEM رەسىملىرى 2-رەسىمدە كۆرسىتىلدى. ساپ كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ SEM رەسىملىرى (A، B) ئىلگىرىكى تەتقىقاتلىرىمىزغا سېلىشتۇرغاندا، زەررىچىلەرنىڭ سوزۇلغان ياكى نورمالسىز سىممېترىكلىققا ئىگە بولغان شار شەكلىنى كۆرسىتىدۇ. لىگاند (C، D) بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ يۈزى ساپ كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭكىدىن سىلىقراق، بۇ كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ يۈزىنى قاپلىغان پولىسترېل زەنجىرى سەۋەبىدىن بولۇشى مۇمكىن.
ساپ كرېمنىي زەررىچىلىرى (A، B) ۋە بىرىكمە بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى (C، D) نىڭ سىكانىرلاش ئېلېكترون مىكروگرافىيەسى.
ساپ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە لىگاند بىلەن باغلىنىشلىق كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىشى 2-رەسىم 3(A) دا كۆرسىتىلدى. ھەجىملىك ​​زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىش ئەگرى سىزىقلىرى خىمىيىلىك ئۆزگەرتىشتىن كېيىن كرېمنىي زەررىچىسى چوڭلۇقىنىڭ ئاشقانلىقىنى كۆرسەتتى (3A-رەسىم). نۆۋەتتىكى تەتقىقات ۋە ئالدىنقى تەتقىقاتتىكى كرېمنىي زەررىچىسى چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىش سانلىق مەلۇماتلىرى 1(A) جەدۋەلدە سېلىشتۇرۇلدى. PMP نىڭ ھەجىملىك ​​زەررىچە چوڭلۇقى d(0.5) 3.36 µm بولۇپ، ئالدىنقى تەتقىقاتىمىزدىكى ad(0.5) قىممىتى 3.05 µm غا سېلىشتۇرغاندا (پولىستىرول بىلەن باغلىنىشلىق كرېمنىي زەررىچىلىرى)34. رېئاكسىيە ئارىلاشمىسىدىكى PEG، كاربامىد، TMOS ۋە ئاتسېتاتىك كىسلاتا نىسبىتىنىڭ ئۆزگىرىشى سەۋەبىدىن، بۇ تۈركۈمنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىشى ئالدىنقى تەتقىقاتىمىزغا سېلىشتۇرغاندا تارراق بولدى. PMP باسقۇچىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى ئىلگىرى تەتقىق قىلغان پولىستىرول بىلەن باغلىنىشلىق كرېمنىي زەررىچىسى باسقۇچىنىڭكىدىن سەل چوڭراق. بۇ دېگەنلىك، سىترول بىلەن كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ يۈزەكى فۇنكسىيەلىشىشى كرېمنىي يۈزىگە پەقەت بىر قەۋەت پولىسترېل (0.97 µm) قەۋەت قوشقان، PMP باسقۇچىدا بولسا قەۋەتنىڭ قېلىنلىقى 1.38 µm بولغان.
ساپ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە بىرىكمە كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تەقسىملىنىشى (A) ۋە تۆشۈك چوڭلۇقىنىڭ تەقسىملىنىشى (B).
بۇ تەتقىقاتتا ئىشلىتىلگەن كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ تۆشۈك چوڭلۇقى، تۆشۈك ھەجىمى ۋە يۈز كۆلىمى 1-جەدۋەل (B) دا كۆرسىتىلدى. ساپ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ PSD پروفىلى 3(B)-رەسىمدە كۆرسىتىلدى. نەتىجىلەر ئىلگىرىكى تەتقىقاتىمىز بىلەن سېلىشتۇرغىلى بولىدۇ34. ساپ ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ تۆشۈك چوڭلۇقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 310 Å ۋە 241 Å بولۇپ، بۇ خىمىيىلىك ئۆزگەرتىشتىن كېيىن، تۆشۈك چوڭلۇقىنىڭ 1-جەدۋەل (B) دا كۆرسىتىلگەندەك 69 Å تۆۋەنلىگەنلىكىنى، يۆتكىلىش ئەگرى سىزىقىنىڭ رەسىمدە كۆرسىتىلگەنلىكىنى كۆرسىتىدۇ. نۆۋەتتىكى تەتقىقاتتىكى كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ سېلىشتۇرما يۈز كۆلىمى 116 m2/g بولۇپ، بۇ ئىلگىرىكى تەتقىقاتىمىز بىلەن سېلىشتۇرغىلى بولىدۇ (124 m2/g). 1(B)-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەندەك، خىمىيىلىك ئۆزگەرتىشتىن كېيىنكى كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ يۈز كۆلىمى (m2/g) مۇ 116 m2/g دىن 105 m2/g غا تۆۋەنلىگەن.
تىرناقسىز باسقۇچنىڭ ئېلېمېنت ئانالىزىنىڭ نەتىجىسى 2-جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى. ھازىرقى تىرناقسىز باسقۇچنىڭ كاربون مىقدارى %6.35 بولۇپ، بۇ بىزنىڭ ئىلگىرىكى تەتقىقاتىمىزدىكىدىن تۆۋەن (پولىسترېل بىلەن مۇناسىۋەتلىك كرېمنىي زەررىچىلىرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا %7.93335 ۋە %10.21) 42. SP تەييارلاشتا ستىرولدىن باشقا، فېنىلمالېئىمىد مېتىل ۋىنىل ئىزوسىئانات (PCMP) ۋە 4-ھىدروكسى-TEMPO قاتارلىق بەزى قۇتۇپلۇق بىرىكمىلەر ئىشلىتىلگەنلىكى ئۈچۈن، ھازىرقى تىرناقسىز باسقۇچنىڭ كاربون مىقدارى تۆۋەندە كۆرسىتىلدى. ھازىرقى تىرناقسىز باسقۇچتىكى ئازوتنىڭ ئېغىرلىق نىسبىتى ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردىكى %0.1735 ۋە %0.85 گە سېلىشتۇرغاندا %2.21. بۇ دېگەنلىك، ھازىرقى تىرناقسىز باسقۇچتا فېنىلمالېئىمىد سەۋەبىدىن ئازوتنىڭ ئېغىرلىق نىسبىتى يۇقىرى. شۇنىڭغا ئوخشاش، (4) ۋە (5) مەھسۇلاتلارنىڭ كاربون مىقدارى ئايرىم-ئايرىم ھالدا %2.7 ۋە %2.9 بولۇپ، ئاخىرقى مەھسۇلات (6) نىڭ كاربون مىقدارى %6.35 بولۇپ، 2-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەندەك. PMP نىڭ مۇقىم باسقۇچىدا ئورۇقلاش سىنىقى قىلىش ئۈچۈن تېرموگراۋىمېتىرلىق ئانالىز (TGA) ئىشلىتىلدى، TGA ئەگرى سىزىقى 4-رەسىمدە كۆرسىتىلدى. TGA ئەگرى سىزىقى %8.6 ئورۇقلاشنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ كاربون مىقدارى (%6.35) بىلەن ماس كېلىدۇ، چۈنكى بىرىكمىلەردە پەقەت Cلا ئەمەس، بەلكى N، O ۋە Hمۇ بار.
لىگاند فېنىلمالېئىمىد-مېتىلۋىنىل ئىزوسىئانات كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ يۈزىنى ئۆزگەرتىش ئۈچۈن تاللانغان، چۈنكى ئۇنىڭ قۇتۇپلۇق فېنىلمالېئىمىد ۋە ۋىنىلىسوسىئانات گۇرۇپپىلىرى بار. ۋىنىل ئىزوسىئانات گۇرۇپپىلىرى تىرىك رادىكال پولىمېرلىشىش ئارقىلىق ستىرول بىلەن تېخىمۇ رېئاكسىيە قىلالايدۇ. ئىككىنچى سەۋەب، ئانالىز قىلىنىدىغان ماددا بىلەن ئوتتۇراھال ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان ۋە ئانالىز قىلىنىدىغان ماددا بىلەن مۇقىم باسقۇچ ئوتتۇرىسىدا كۈچلۈك ئېلېكتروستاتىك ئۆز-ئارا تەسىر بولمايدىغان بىر گۇرۇپپىنى قوشۇش، چۈنكى فېنىلمالېئىمىد بۆلىكى نورمال pH قىممىتىدە ھېچقانداق مەۋھۇم زەرەتكە ئىگە ئەمەس. مۇقىم باسقۇچنىڭ قۇتۇپلۇقىنى ئەڭ ياخشى مىقداردىكى ستىرول ۋە ئەركىن رادىكال پولىمېرلىشىشنىڭ رېئاكسىيە ۋاقتى ئارقىلىق كونترول قىلغىلى بولىدۇ. رېئاكسىيەنىڭ ئاخىرقى باسقۇچى (ئەركىن رادىكال پولىمېرلىشىش) ئىنتايىن مۇھىم، چۈنكى ئۇ مۇقىم باسقۇچنىڭ قۇتۇپلۇقىنى ئۆزگەرتىدۇ. بۇ مۇقىم باسقۇچلاردىكى كاربون مىقدارىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن ئېلېمېنت ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى. ستىرول مىقدارىنى ۋە رېئاكسىيە ۋاقتىنى ئاشۇرۇش مۇقىم باسقۇچتىكى كاربون مىقدارىنى ئاشۇرىدىغانلىقى ۋە ئەكسىچە ئىكەنلىكى كۆزىتىلدى. ئوخشىمىغان قويۇقلۇقتىكى ستىرول بىلەن تەييارلانغان SP لارنىڭ كاربون يۈكى ئوخشىمايدۇ. شۇنىڭغا ئوخشاش، بۇ مۇقىم باسقۇچلار داتلاشماس پولات تۈۋرۈكلەرگە قويۇلۇپ، ئۇلارنىڭ خروماتوگرافىيەلىك خۇسۇسىيىتى (تاللاشچانلىقى، ئېنىقلىقى، N قىممىتى قاتارلىقلار) تەكشۈرۈلدى. بۇ تەجرىبىلەرگە ئاساسەن، كونترول قىلىنىدىغان قۇتۇپلۇق ۋە ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلارنىڭ ياخشى ساقلىنىشىنى تەمىنلەش ئۈچۈن PMP مۇقىم باسقۇچىنى تەييارلاش ئۈچۈن ئەلالاشتۇرۇلغان تەركىب تاللاندى.
PMP ئىستونىغا يەنە بەش خىل پېپتىد ئارىلاشمىسى (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) نىڭ ھەرىكەتچان باسقۇچنىڭ سىغىمى ئارقىلىق ئانالىز قىلىنىشى باھالاندى. 60/40 (v/v) ACN/سۇ (0.1% TFA) 80 µl/min ئېقىم سۈرئىتىدە. ئەڭ ياخشى ئېلىيۇتسىيە شارائىتىدا (200,000 تاختا/m2)، ھەر بىر ئىستون (100 × 1.8 mm) نىڭ نەزەرىيەۋى تاختا سانى (N) 20,000 ± 100 بولىدۇ. ئۈچ PMP ئىستونىنىڭ N قىممىتى 3-جەدۋەلدە، خروماتوگراممىلىرى 5A-رەسىمدە كۆرسىتىلدى. PMP ئىستونىدا يۇقىرى ئېقىم سۈرئىتىدە (700 µl/min) تېز ئانالىز قىلىندى، بىر مىنۇت ئىچىدە بەش پېپتىد ئېرىتىلدى، ھەر بىر ئىستوندا 13500 ± 330 N قىممىتى (دىئامېتىرى 100 x 1.8 mm) بولۇپ، 135000 تاختا/m غا تەڭ (5B-رەسىم). ئوخشاش چوڭلۇقتىكى ئۈچ ئىستون (ئىچكى دىئامېتىرى 100 x 1.8 mm) ئۈچ خىل PMP مۇقىم باسقۇچلۇق ماددىسى بىلەن تولدۇرۇلدى، بۇنىڭ بىلەن قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارى سىناق قىلىندى. ھەر بىر ئىستون ئۈچۈن ئەڭ ياخشى ئېرىتىش شارائىتى، نەزەرىيەۋى تاختا سانى N ۋە ساقلاش ۋاقتى ئارقىلىق ھەر بىر ئىستوندا ئوخشاش سىناق ئارىلاشمىسىنى ئايرىش ئارقىلىق ئانالىز خاتىرىلەندى. PMP ئىستونلىرىنىڭ قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارى سانلىق مەلۇماتلىرى 4-جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى. 3-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەندەك، PMP ئىستونىنىڭ قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارى ئىنتايىن تۆۋەن %RSD قىممىتى بىلەن ياخشى مۇناسىۋەتلىك بولدى.
PMP تۈۋرۈكى (B) ۋە Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكى (A) دىكى پېپتىد ئارىلاشمىلىرىنى ئايرىش، ھەرىكەتچان باسقۇچ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)، PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئۆلچىمى (100 x 1.8 mm id)، تەھلىل بىرىكمىلەرنىڭ ئېلىيۇتسىيە تەرتىپى: 1 (Gly-Tyr)، 2 (Gly-Leu-Tyr)، 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)، 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ۋە 5 (لېيسىك كىسلاتا ئېنكېفالىن).
HPLC ئارقىلىق ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىننىڭ ترىپتىك گىدرولىزاتىنى ئايرىش ئۈچۈن PMP تۈۋرۈكى (ئىچكى دىئامېتىرى 100 x 1.8 مىللىمېتىر) باھالاندى. 6-رەسىمدىكى خروماتوگراممىدىن كۆرۈۋېلىشقا بولىدۇكى، ئەۋرىشكىلەر ياخشى ئايرىلغان ۋە ئېنىقلىقى ناھايىتى ياخشى. HSA ئېرىتمىلىرى 100 μl/min ئېقىم سۈرئىتى، 70/30 ئاتسېتونىترىل/سۇنىڭ ھەرىكەتچان باسقۇچى ۋە 0.1% TFA ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. HSA نىڭ پارچىلىنىشى خروماتوگراممىدا (6-رەسىم) كۆرسىتىلگەندەك 17 چوققىغا بۆلۈندى، بۇ 17 پېپتىدقا ماس كېلىدۇ. HSA گىدرولىزاتىدىن يەككە چوققىلارنىڭ ئايرىش ئۈنۈمى ھېسابلىنىپ چىقىلدى ۋە قىممەتلەر 5-جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى.
HSA تىرىپتىك گىدرولىزاتلىرى PMP تۈۋرۈكىدە (ئىچكى دىئامېتىرى 100 x 1.8 مىللىمېتىر)، ئېقىش سۈرئىتى (مىنۇت 100 μl)، ھەرىكەتچان باسقۇچ 60/40 ئاتسېتونىترىل/سۇ ۋە %0.1 TFA دا ئايرىلدى.
بۇ يەردە L تۈۋرۈك ئۇزۇنلۇقى، η ھەرىكەتچان باسقۇچنىڭ يېپىشقاقلىقى، ΔP تۈۋرۈكنىڭ ئارقا بېسىمى، u بولسا ھەرىكەتچان باسقۇچنىڭ سىزىقلىق سۈرئىتى. PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى 2.5 × 10–14 m2، ئېقىم سۈرئىتى 25 µl/min، 60/40 v/v ئىشلىتىلگەن. ACN/سۇ. PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى (ID 100 × 1.8 mm) ئىلگىرىكى 34-نومۇرلۇق تەتقىقاتىمىزغا ئوخشايدۇ. يۈزەكى تۆشۈكلۈك زەررىچىلەر بىلەن تولدۇرۇلغان تۈۋرۈكنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى 1.7 × 10 .6 µm، 5 µm زەررىچىلەر ئۈچۈن 2.5 × 10-14 m24. شۇڭا، PMP باسقۇچىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى 5 µm چوڭلۇقتىكى يادرو قاپاق زەررىچىلىرىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقىغا ئوخشايدۇ.
بۇ يەردە Wx خلوروفورم بىلەن تولدۇرۇلغان تۈۋرۈكنىڭ ماسسىسى، Wy مېتانول بىلەن تولدۇرۇلغان تۈۋرۈكنىڭ ماسسىسى، ρ ئېرىتكۈچىنىڭ زىچلىقى. مېتانولنىڭ زىچلىقى (ρ = 0.7866) ۋە خلوروفورم (ρ = 1.484). كرېمنىي-C18 زەررىچە تۈۋرۈكى (100 × 1.8 mm ID)34 ۋە بىز ئىلگىرى تەتقىق قىلغان C18-كاربامىد31 تۈۋرۈكىنىڭ ئومۇمىي تۆشۈكلۈكى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 0.63 ۋە 0.55 بولدى. بۇ دېگەنلىك، كاربامىد بىرىكمىلىرىنىڭ بولۇشى مۇقىم باسقۇچنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقىنى تۆۋەنلىتىدۇ. يەنە بىر تەرەپتىن، PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئومۇمىي تۆشۈكلۈكى (ئىچكى دىئامېتىرى 100 × 1.8 mm) 0.60. PMP تۈۋرۈكلىرى C18 بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى بىلەن تولدۇرۇلغان تۈۋرۈكلەرگە قارىغاندا ئۆتكۈزۈشچانلىقى تۆۋەن، چۈنكى C18 تىپلىق مۇقىم باسقۇچلاردا C18 بىرىكمىلىرى كرېمنىي زەررىچىلىرىگە سىزىقلىق زەنجىرلەر شەكلىدە چاپلىنىدۇ، پولىسترېل تىپلىق مۇقىم باسقۇچلاردا بولسا زەررىچىلەرنىڭ ئەتراپىدا نىسبەتەن قېلىن پولىمېر شەكىللىنىدۇ. A قەۋىتى. ئادەتتىكى تەجرىبىدە، تۈۋرۈكنىڭ تۆشۈكلۈك دەرىجىسى تۆۋەندىكىدەك ھېسابلىنىدۇ:
7A ۋە B رەسىملىرىدە، ئوخشاش ئېلىيۇتسىيە شارائىتى ئاستىدا، ئىككى ئىستوندا 60/40 ACN/H2O ۋە 0.1% TFA 20 µl/min دىن 800 µl/min غىچە بولغان PMP ئىستون (id 100 x 1.8 mm) ۋە Ascentis Express RP-Amide ئىستون (id 100 x 1.8 mm) ئۈچۈن Van Deemter گىرافىكى كۆرسىتىلگەن. ئەڭ ياخشى ئېقىم سۈرئىتى (80 µl/min) دىكى ئەڭ تۆۋەن HETP قىممىتى PMP ئىستون ۋە Ascentis Express RP-Amide ئىستون ئۈچۈن ئايرىم-ئايرىم ھالدا 2.6 µm ۋە 3.9 µm بولغان. HETP قىممەتلىرى PMP ئىستونىنىڭ (100 x 1.8 mm id) ئايرىش ئۈنۈمىنىڭ بازاردا سېتىلىۋاتقان Ascentis Express RP-Amide ئىستونىغا (id 100 x 1.8 mm id) قارىغاندا خېلىلا يۇقىرى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. 7(A)-رەسىمدىكى ۋان دېمتېر گىرافىكى ئالدىنقى تەتقىقاتىمىزغا سېلىشتۇرغاندا ئېقىمنىڭ ئېشىشىغا ئەگىشىپ N قىممىتىنىڭ تۆۋەنلىشىنىڭ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرى ئەمەسلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. Ascentis Express RP-Amide ئىستونىغا سېلىشتۇرغاندا PMP ئىستونىنىڭ يۇقىرى ئايرىش ئۈنۈمى (id 100 × 1.8 mm) زەررىچە شەكلى ۋە چوڭلۇقىنىڭ ياخشىلىنىشى ۋە ھازىرقى خىزمەتتە ئىشلىتىلگەن مۇرەككەپ ئىستون ئوراش ئۇسۇلىغا ئاساسلانغان34.
(A) 60/40 ACN/H2O دىكى PMP تۈۋرۈكىدىن (id 100 x 1.8 mm) %0.1 TFA بىلەن ئېلىنغان ۋان دېمتېر گىرافىكى (HETP بىلەن كۆچمە باسقۇچ سىزىقلىق سۈرئەت). (B) 60/40 ACN/H2O دىكى Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكىدىن (id 100 x 1.8 mm) %0.1 TFA بىلەن ئېلىنغان ۋان دېمتېر گىرافىكى (HETP بىلەن كۆچمە باسقۇچ سىزىقلىق سۈرئەت).
يۇقىرى ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىدە سۈنئىي پېپتىدلار ۋە ئىنسان زەردابى ئالبۇمىن (HSA) نىڭ تىرىپتىك گىدرولىزاتى ئارىلاشمىسىنى ئايرىش ئۈچۈن ئارىلاشتۇرۇلغان پولىسترېلنىڭ قۇتۇپلۇق تۇراقلىق باسقۇچى تەييارلاندى ۋە باھالاندى. پېپتىد ئارىلاشمىلىرى ئۈچۈن PMP ئىستونلىرىنىڭ خروماتوگرافىيەلىك ئىقتىدارى ئايرىش ئۈنۈمى ۋە ئېنىقلىق دەرىجىسى جەھەتتە ئىنتايىن ياخشى. PMP ئىستونلىرىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمىنىڭ ياخشىلىنىشى كرېمنىي زەررىچىسىنىڭ چوڭلۇقى ۋە تۆشۈك چوڭلۇقى، تۇراقلىق باسقۇچلارنىڭ كونترول قىلىنىدىغان سىنتېزى ۋە مۇرەككەپ ئىستون ئوراش ماتېرىياللىرى قاتارلىق بىر قانچە سەۋەبتىن كېلىپ چىققان. يۇقىرى ئايرىش ئۈنۈمىدىن باشقا، بۇ تۇراقلىق باسقۇچنىڭ يەنە بىر ئەۋزەللىكى يۇقىرى ئېقىم سۈرئىتىدە ئىستوننىڭ تۆۋەن بېسىمى. PMP ئىستونلىرى يۇقىرى دەرىجىدە قايتا ھاسىل قىلغىلى بولىدۇ ۋە پېپتىدلارنىڭ ئارىلاشمىسىنى ۋە ھەر خىل ئاقسىللارنىڭ تىرىپتىك ھەزىم قىلىنىشىنى تەھلىل قىلىشقا ئىشلىتىلىدۇ. بىز بۇ ئىستوننى تەبىئىي مەھسۇلاتلاردىن، دورا ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ ئېكىستراكتلىرى ۋە موگۇلاردىن بىئولوگىيىلىك ئاكتىپ ماددىلارنى ئايرىش ئۈچۈن سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىدە ئىشلىتىشنى پىلانلىدۇق. كەلگۈسىدە، PMP ئىستونلىرى ئاقسىللارنى ئايرىش ۋە مونوكلونال ئانتىتېلا ئۈچۈنمۇ باھالىنىدۇ.
فىلد، JK، ئېۋېربى، MR، لاۋ، J.، تخۆگېرسېن، H. ۋە پېتېرسسون، P. تەتۈر باسقۇچلۇق خروماتوگرافىيە پېپتىد ئايرىش سىستېمىسىنى تەكشۈرۈش I-قىسىم: تۈۋرۈك خاراكتېرىنى بېكىتىش ئۈچۈن كېلىشىم تۈزۈش. فىلد، JK، ئېۋېربى، MR، لاۋ، J.، تخېگېرسېن، H. ۋە پېتېرسسون، P. تەتۈر باسقۇچلۇق خروماتوگرافىيە پېپتىد ئايرىش سىستېمىسىنى تەكشۈرۈش I-قىسىم: تۈۋرۈك خاراكتېرىنى بېكىتىش ئۈچۈن كېلىشىم تۈزۈش.فىلد، JK، ئوۋېربى، MR، لاۋ، J.، توگېرسېن، H.، ۋە پېتېرسسون، P. تەتۈر باسقۇچلۇق خروماتوگرافىيە ئارقىلىق پېپتىد ئايرىش سىستېمىسىنى تەكشۈرۈش، I-قىسىم: تۈۋرۈك خاراكتېرىنى بېكىتىش ئۈچۈن بىر كېلىشىم تۈزۈش. فىلد، JK، ئېۋېربى، MR، لاۋ، J.، تخېگېرسېن، H. ۋە پېتېرسسون، P. تەتۈر باسقۇچلۇق خروماتوگرافىيە پېپتىد ئايرىش سىستېمىسىنى تەكشۈرۈش I-قىسىم: تۈۋرۈك خاراكتېرى ئۈچۈن كېلىشىم تۈزۈش. فىلد، JK، ئېۋېربى، MR، لاۋ، J.، تخېگېرسېن، H. ۋە پېتېرسسون، P. تەتۈر باسقۇچلۇق خروماتوگرافىيە پېپتىد ئايرىش سىستېمىسىنى تەكشۈرۈش I-قىسىم: تۈۋرۈك خاراكتېرى ئۈچۈن كېلىشىم تۈزۈش.فىلد، JK، ئوۋېربى، MR، لاۋ، J.، توگېرسېن، H.، ۋە پېتېرسسون، P. تەتۈر باسقۇچلۇق خروماتوگرافىيە ئارقىلىق پېپتىد ئايرىش سىستېمىسىنى تەكشۈرۈش، I-قىسىم: تۈۋرۈك خاراكتېرىنى بېكىتىش ئۈچۈن بىر كېلىشىم تۈزۈش.J. 色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)。
گومېز، ب. قاتارلىقلار. يۇقۇملۇق كېسەللىكلەرنى داۋالاش ئۈچۈن ياخشىلانغان ئاكتىپ پېپتىدلارنى ياساش ئۇسۇللىرى. بىئوتېخنىكا. نەتىجىلەر 36(2)، 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. سۈنئىي داۋالاش پېپتىدلىرى: ئىلىم-پەن ۋە بازار. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. سۈنئىي داۋالاش پېپتىدلىرى: ئىلىم-پەن ۋە بازار.Vliege P، Lisowski V، Martinez J ۋە Chreschatyski M. سۈنئىي داۋالاش پېپتىدلىرى: پەن ۋە بازار.Vliege P، Lisowski V، Martinez J ۋە Khreschatsky M. سۈنئىي داۋالاش پېپتىدلىرى: ئىلىم-پەن ۋە بازار. دورا بايقاش. بۈگۈن 15 (1–2)، 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ئىلغار پروتېئومىك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ئىلغار پروتېئومىك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى.F.، Smith RD ۋە Shen Yu نىڭ ئىلغار پروتېئومىك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىگە قاراڭ. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ئىلغار ئاقسىل تەركىبى 液相色谱。F.، Smith RD ۋە Shen Yu نىڭ ئىلغار پروتېئومىك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىگە قاراڭ.J. خروماتوگرافىيە. A 1261، 78–90 (2012).
لىيۇ، ۋ. قاتارلىقلار. ئىلغار سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى-ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى كەڭ دائىرىلىك مېتابولومىك ۋە پروتېئومىكىنى بىرلەشتۈرەلەيدۇ. ئانۇس. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
چېسنۇت، SM ۋە سالىسبۇرى، JJ UHPLC نىڭ دورىگەرلىك تەرەققىياتىدىكى رولى. چېسنۇت، SM ۋە سالىسبۇرى، JJ UHPLC نىڭ دورىگەرلىك تەرەققىياتىدىكى رولى.چېسنۇت، SM ۋە سالىسبۇرى، JJ UHPLC نىڭ دورىگەرلىك تەرەققىياتىدىكى رولى.چېسنۇت، SM ۋە سالىسبۇرى، JJ UHPLC نىڭ دورا تەرەققىياتىدىكى رولى. J. Sept Science. 30(8)، 1183–1190 (2007).
ۋۇ، ن. ۋە كلاۋسېن، AM تېز ئايرىش ئۈچۈن ئۇلترا يۇقىرى بېسىملىق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنىڭ ئاساسىي ۋە ئەمەلىي جەھەتلىرى. ۋۇ، ن. ۋە كلاۋسېن، AM تېز ئايرىش ئۈچۈن ئۇلترا يۇقىرى بېسىملىق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنىڭ ئاساسىي ۋە ئەمەلىي جەھەتلىرى.ۋۇ، ن. ۋە كلاۋسېن، AM تېز ئايرىش ئۈچۈن يۇقىرى بېسىملىق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنىڭ ئاساسىي ۋە ئەمەلىي جەھەتلىرى. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 ۋۇ، ن. ۋە كلاۋسېن، AM تېز ئايرىش ئۈچۈن ئۇلترا يۇقىرى بېسىملىق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنىڭ ئاساسىي ۋە ئەمەلىي جەھەتلىرى.ۋۇ، ن. ۋە كلاۋسېن، AM تېز ئايرىش ئۈچۈن يۇقىرى بېسىملىق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنىڭ ئاساسىي ۋە ئەمەلىي جەھەتلىرى.J. September. Science. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. دورا تەرەققىياتىدا ئۇلترا ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنى ئىشلىتىش. Wren, SA & Tchelitcheff, P. دورا تەرەققىياتىدا ئۇلترا ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنى ئىشلىتىش.رېن، SA ۋە چېلىشېف، پ. دورىگەرلىك تەرەققىياتىدا ئۇلترا يۇقىرى ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنى ئىشلىتىش. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 ۋرېن، SA ۋە چېلىتچېف، پ.رېن، SA ۋە چېلىشېف، پ. دورا تەرەققىياتىدا ئۇلترا ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنىڭ قوللىنىلىشى.J. خروماتوگرافىيە. 1119(1-2)، 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
گۇ، خ. قاتارلىقلار. ئېنتېروۋىرۇس 71 نى ئۈنۈملۈك تازىلاش ئۈچۈن يۇقىرى ئىچكى باسقۇچلۇق ماي-سۇ ئېمۇلسىيەسىدىن ئېلىنغان مونولىت ماكرو تۆشۈكلۈك گىدروگېل. خىمىيىلىك. تۈر. ژۇرنال 401، 126051 (2020).
شى، ي.، شياڭ، ر.، خورۋات، س. ۋە ۋىلكىنس، ج.ا. سۇيۇق خروماتوگرافىيەنىڭ پروتېئومىكادىكى رولى. شى، ي.، شياڭ، ر.، خورۋات، س. ۋە ۋىلكىنس، ج.ا. سۇيۇق خروماتوگرافىيەنىڭ پروتېئومىكادىكى رولى.شى، ي.، شياڭ، ر.، خورۋات، س. ۋە ۋىلكىنس، ج.ا. سۇيۇق خروماتوگرافىيەنىڭ پروتېئومىكادىكى رولى. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAشى، ي.، شياڭ، ر.، خورۋات، س. ۋە ۋىلكىنس، ج.ا. سۇيۇق خروماتوگرافىيەنىڭ پروتېئومىكادىكى رولى.J. خروماتوگرافىيە. A 1053 (1-2)، 27-36 (2004).
فېكېتې، س.، ۋۇتېي، ج.-ل. & Guillarme, D. داۋالاش پېپتىدلىرى ۋە ئاقسىللارنى تەتۈر باسقۇچلۇق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەلىك ئايرىشتىكى يېڭى يۈزلىنىشلەر: نەزەرىيە ۋە قوللىنىشلار. & Guillarme, D. داۋالاش پېپتىدلىرى ۋە ئاقسىللارنى تەتۈر باسقۇچلۇق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەلىك ئايرىشتىكى يېڭى يۈزلىنىشلەر: نەزەرىيە ۋە قوللىنىشلار. & گىللارمې ، D. & Guillarme, D. تەتۈر باسقۇچلۇق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى ئارقىلىق داۋالاش پېپتىدلىرى ۋە ئاقسىللارنى ئايرىشتىكى يېڭى يۈزلىنىشلەر: نەزەرىيە ۋە قوللىنىشلار. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 ۋە گىلارمې، د.ۋە گىلارمې، د. تەتۈر باسقۇچلۇق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى ئارقىلىق داۋالاش پېپتىدلىرى ۋە ئاقسىللارنى ئايرىشتىكى يېڭى يۈزلىنىشلەر: نەزەرىيە ۋە قوللىنىشلار.J. Pharm. بىئومېدىتسىنا ئىلمى. ئانۇس. 69، 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC بىرىنچى ۋە ئىككىنچى ئايرىش ئۆلچىمىدىكى pH قىممىتى ئوخشىمايدىغان RP-RP-HPLC سىستېمىسى ئارقىلىق پېپتىدلارنى ئىككى ئۆلچەملىك ئايرىش. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC بىرىنچى ۋە ئىككىنچى ئايرىش ئۆلچىمىدىكى pH قىممىتى ئوخشىمايدىغان RP-RP-HPLC سىستېمىسى ئارقىلىق پېپتىدلارنى ئىككى ئۆلچەملىك ئايرىش.گىلار م.، ئولىۋوۋا پ.، دالى AE ۋە گېبلېر JK بىرىنچى ۋە ئىككىنچى ئايرىش ئۆلچىمىدىكى pH قىممىتى ئوخشىمايدىغان RP-RP-HPLC سىستېمىسى ئارقىلىق پېپتىدلارنى ئىككى ئۆلچەملىك ئايرىش.گىلار م.، ئولىۋوۋا پ.، دالى AE ۋە گېبلېر JK RP-RP-HPLC سىستېمىسى ئارقىلىق بىرىنچى ۋە ئىككىنچى ئايرىش ئۆلچىمىدىكى ئوخشىمايدىغان pH قىممىتىنى ئىشلىتىپ پېپتىدلارنى ئىككى ئۆلچەملىك ئايرىش. J. Sept Science. 28 (14)، 1694–1703 (2005).
Fellitti، S. قاتارلىقلار. 2 µm دىن كىچىك تولۇق تۆشۈكلۈك ۋە يۈزەكى تۆشۈكلۈك C18 زەررىچىلىرى بىلەن تولدۇرۇلغان يۇقىرى ئۈنۈملۈك خروماتوگرافىيە تۈۋرۈكلىرىنىڭ ماسسا يۆتكىلىشى ۋە كىنېتىكىلىق خۇسۇسىيەتلىرىنى تەكشۈرۈش. J. Sept Science. 43 (9–10)، 1737–1745 (2020).
پىئوۋېسانا، س. قاتارلىقلار. ئۆسۈملۈك بىئوئاكتىپ پېپتىدلىرىنى ئايرىش، ئېنىقلاش ۋە جەزملەشتۈرۈشتىكى يېقىنقى يۈزلىنىشلەر ۋە ئانالىز خىرىسلىرى. ئانان. ئانان جانلىق. خىمىيىلىك. 410(15)، 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
مۇللېر، JB قاتارلىقلار. ھاياتلىق پادىشاھلىقىنىڭ پروتېئومىك مەنزىرىسى. تەبىئەت 582 (7813)، 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
دې لۇكا، ك. قاتارلىقلار. تەييارلاش سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى ئارقىلىق داۋالاش پېپتىدلىرىنى داۋالاشتىن كېيىنكى ئۇسۇل. مولېكۇلا (بازېل، شىۋىتسارىيە) 26(15)، 4688 (2021).
ياڭ، ي. ۋە گېڭ، خ. ئارىلاشما ھالەتتىكى خروماتوگرافىيە ۋە ئۇنىڭ بىئوپولىمېرلارغا قوللىنىلىشى. ياڭ، ي. ۋە گېڭ، خ. ئارىلاشما ھالەتتىكى خروماتوگرافىيە ۋە ئۇنىڭ بىئوپولىمېرلارغا قوللىنىلىشى.ياڭ، يۈ ۋە گېڭ، X. ئارىلاشما ھالەتتىكى خروماتوگرافىيە ۋە ئۇنىڭ بىئوپولىمېرلارغا قوللىنىلىشى. ياڭ ، Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 ياڭ، ي. ۋە گېڭ، خ. ئارىلاشما ھالەتتىكى خروماتوگرافىيە ۋە ئۇنىڭ بىئوپولىمېرلاردا قوللىنىلىشى.ياڭ، يۈ ۋە گېنې، X. ئارىلاشما ھالەتتىكى خروماتوگرافىيە ۋە ئۇنىڭ بىئوپولىمېرلارغا قوللىنىلىشى.J. خروماتوگرافىيە. A 1218(49)، 8813–8825 (2011).