Nature.com تي اچڻ لاءِ مهرباني. توهان محدود CSS سپورٽ سان برائوزر ورزن استعمال ڪري رهيا آهيو. بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي غير فعال ڪريو). ان کان علاوه، جاري سپورٽ کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسان سائيٽ کي اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ کان سواءِ ڏيکاريون ٿا.
هڪ ئي وقت ٽن سلائڊن جو ڪاروسيل ڏيکاري ٿو. هڪ ئي وقت ٽن سلائڊن مان گذرڻ لاءِ پوئين ۽ اڳيون بٽڻ استعمال ڪريو، يا هڪ ئي وقت ٽن سلائڊن مان گذرڻ لاءِ آخر ۾ سلائڊر بٽڻ استعمال ڪريو.
سوراخدار سليڪا ذرڙا سول-جيل طريقي سان ڪجهه ترميمن سان تيار ڪيا ويا ته جيئن وسيع-سوراخ ذرات حاصل ڪري سگهجن. انهن ذرڙن کي اين-فينائل ميليمائيڊ-ميٿيل ونائل آئوسوسائينٽ (PMI) ۽ اسٽائرين سان ريورس چين ٽرانسفر-فريگمينٽيشن (RAFT) پوليمرائيزيشن ذريعي N-فينائل ميليمائيڊ انٽرڪليٽڊ پوليامائيڊ پيدا ڪرڻ لاءِ حاصل ڪيو ويو. اسٽائرين (PMP) اسٽيشنري مرحلو. تنگ بور اسٽينلیس اسٽيل ڪالم (100 × 1.8 ملي ميٽر اندروني قطر) کي سلري پيڪنگ سان ڀريل هئا. پي ايم پي ڪالم جي ڪروميٽوگرافڪ ڪارڪردگي جو جائزو ورتو ويو ته جيئن مصنوعي پيپٽائڊس جي مرکب کي الڳ ڪري سگهجي جنهن ۾ پنج پيپٽائڊس (گلائي-ٽائر، گلائي-ليو-ٽائر، گلائي-گلائي-ٽائر-آرگ، ٽائر-آئل-گلائي-سر-آرگ، ليو امينو ايسڊ اينڪيفالين) ۽ انساني سيرم البومين (HAS) جي ٽرپٽڪ هائيڊولائيزيٽ شامل آهن. بهترين ايليوشن حالتن ۾، پيپٽائڊس جي ميلاپ سان پليٽن جو نظرياتي تعداد 280,000 پليٽون/اسڪوائر ميٽر تائين پهچي ويو. ترقي يافته ڪالمن جي علحدگي جي ڪارڪردگي جو ڪمرشل ايسنٽس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالمن سان مقابلو ڪندي، اهو ڏٺو ويو ته پي ايم پي ڪالمن جي علحدگي جي ڪارڪردگي علحدگي جي ڪارڪردگي ۽ ريزوليوشن جي لحاظ کان ڪمرشل ڪالمن کان بهتر هئي.
بايو فارماسوٽيڪل انڊسٽري هڪ وڌندڙ عالمي مارڪيٽ بڻجي چڪي آهي جنهن ۾ تازن سالن ۾ مارڪيٽ شيئر ۾ اهم واڌ ٿي آهي. بايو فارماسوٽيڪل انڊسٽري 1,2,3 جي ڌماڪيدار واڌ سان پيپٽائيڊ ۽ پروٽين جي تجزيي جي تمام گهڻي ضرورت آهي. ٽارگيٽ پيپٽائيڊ کان علاوه، پيپٽائيڊ جي جوڙجڪ دوران مختلف نجاستون ٺهنديون آهن، تنهن ڪري پيپٽائيڊ جي گهربل پاڪائي حاصل ڪرڻ لاءِ ڪروميٽوگرافڪ صفائي جي ضرورت آهي. جسم جي رطوبتن، ٽشوز ۽ سيلز ۾ پروٽين جو تجزيو ۽ خاصيت هڪ انتهائي چئلينجنگ ڪم آهي ڇاڪاڻ ته هڪ نموني ۾ وڏي تعداد ۾ امڪاني طور تي ڳولڻ لائق نسل موجود آهن. جيتوڻيڪ ماس اسپيڪٽروميٽري پيپٽائيڊس ۽ پروٽين کي ترتيب ڏيڻ لاءِ هڪ مؤثر اوزار آهي، جيڪڏهن اهڙا نمونا سڌو سنئون ماس اسپيڪٽروميٽر ۾ متعارف ڪرايا وڃن، ته علحدگي غير اطمينان بخش هوندي. هي مسئلو ايم ايس تجزيي کان اڳ مائع ڪروميٽوگرافي (ايل سي) ڪرڻ سان حل ڪري سگهجي ٿو، جيڪو هڪ ڏنل وقت تي ماس اسپيڪٽروميٽر ۾ داخل ٿيندڙ تجزيي جي مقدار کي گهٽائي ڇڏيندو 4,5,6. ان کان علاوه، تجزيي ڪندڙ مائع مرحلي جي علحدگي دوران هڪ تنگ علائقي ۾ مرڪوز ٿي سگهن ٿا، ان ڪري انهن تجزيي ڪندڙن کي مرڪوز ڪري سگهن ٿا ۽ ايم ايس جي ڳولا جي حساسيت کي وڌائي سگهن ٿا. گذريل ڏهاڪي دوران مائع ڪروميٽوگرافي (LC) تمام گهڻي ترقي ڪئي آهي ۽ پروٽومڪ تجزيو لاءِ وڏي پيماني تي استعمال ٿيندڙ طريقو بڻجي چڪو آهي 7,8,9,10.
ريورس فيز مائع ڪروميٽوگرافي (RP-LC) وڏي پيماني تي پيپٽائڊس جي مرکب کي صاف ڪرڻ ۽ الڳ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪئي ويندي آهي جيئن آڪٽاڊيسيل-موڊفائيڊ سليڪا (ODS) کي اسٽيشنري فيز 11,12,13 طور استعمال ڪيو ويندو آهي. جڏهن ته، انهن جي پيچيده ساخت ۽ ايمفوٽيرڪ نوعيت جي ڪري، 14,15 آر پي اسٽيشنري فيز پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي اطمينان بخش علحدگي فراهم نٿا ڪري سگهن. تنهن ڪري، پولر ۽ غير پولر ٽڪرن سان پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي تجزيي لاءِ خاص طور تي ٺهيل اسٽيشنري فيز جي ضرورت آهي ته جيئن انهن تجزين کي رابطي ۽ برقرار رکي سگهجي. مخلوط ڪروميٽوگرافي، جيڪا ملٽي موڊل انٽراڪشن پيش ڪري ٿي، پيپٽائڊس، پروٽين ۽ ٻين پيچيده مرکبن کي الڳ ڪرڻ لاءِ RP-LC جو متبادل ٿي سگهي ٿي. ڪيترائي مخلوط قسم جا اسٽيشنري فيز تيار ڪيا ويا ۽ انهن اسٽيشنري فيز سان ڀريل ڪالم پيپٽائڊس ۽ پروٽين کي الڳ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيا ويا 17,18,19,20,21. پولر ۽ غير پولر گروپن جي موجودگي جي ڪري، مخلوط موڊ اسٽيشنري فيز (WAX/RPLC، HILIC/RPLC، پولر انٽرڪاليشن/RPLC) پيپٽائڊس ۽ پروٽين 22,23,24,25,26,27,28 جي الڳ ٿيڻ لاءِ موزون آهن.، ڪوويلنٽلي بانڊڊ پولر گروپن سان پولر انٽرڪاليٽڊ اسٽيشنري فيز پولر ۽ نان پولر ايناليٽس لاءِ سٺي الڳ ٿيڻ جي صلاحيت ۽ منفرد چونڊ ڏيکارين ٿا ڇاڪاڻ ته الڳ ٿيڻ تجزيي ۽ اسٽيشنري فيز جي وچ ۾ رابطي تي منحصر آهي ملٽي موڊل انٽرڪشن 29,30,31,32. تازو، ژانگ ۽ ٻين 30 پوليامينز جا بيهينل ختم ٿيل اسٽيشنري فيز حاصل ڪيا ۽ هائيڊرو ڪاربن، اينٽي ڊيپريسنٽس، فلاوونائيڊز، نيوڪليوسائيڊس، ايسٽروجن، ۽ ڪجهه ٻين ايناليٽس کي ڪاميابي سان الڳ ڪيو. پولر ايمبيڊڊ اسٽيشنري مواد ۾ پولر ۽ غير پولر ٻئي گروپ آهن، تنهن ڪري ان کي پيپٽائڊس ۽ پروٽين کي هائيڊروفوبڪ ۽ هائيڊروفيلڪ حصن ۾ الڳ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو. پولر ان لائن ڪالم (مثال طور، ايمائيڊ ان لائن سان C18 ڪالم) ٽريڊ نالو ايسنٽيس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالم جي تحت موجود آهن، پر اهي ڪالم صرف امائن 33 جي تجزيي لاءِ استعمال ڪيا ويا آهن.
موجوده مطالعي ۾، پيپٽائڊ سيپريشن ۽ ٽرپٽڪ ايڇ ايس اي ڪليويج لاءِ هڪ پولر ايمبيڊنگ اسٽيشنري فيز (اين-فينائل ميليمائيڊ، ايمبيڊنگ پولسٽريئر) تيار ڪيو ويو ۽ جائزو ورتو ويو. اسٽيشنري فيز تيار ڪرڻ لاءِ هيٺ ڏنل حڪمت عملي استعمال ڪئي وئي. پورس سليڪا ذرات اسان جي پوئين اشاعتن ۾ بيان ڪيل طريقيڪار مطابق تيار ڪيا ويا، تياري جي اسڪيمن 31، 34، 35، 36، 37، 38، 39 ۾ ڪجهه تبديلين سان. يوريا، پوليٿيلين گلائڪول (PEG)، TMOS ۽ آبي-ايسيٽڪ ايسڊ جي تناسب کي وڏي سوراخ جي سائيز سان سليڪا ذرات حاصل ڪرڻ لاءِ ترتيب ڏنو ويو. ٻيو، هڪ نئون فينائل ميليمائيڊ-ميٿيل ونائل آئوسائنيٽ ليگنڊ سنٿيسائيز ڪيو ويو ۽ ان جي ڊيريويٽائيزڊ سليڪا ذرات کي پولر ايمبيڊڊ اسٽيشنري فيز تيار ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو. حاصل ڪيل اسٽيشنري فيز کي هڪ بهتر پيڪنگ اسڪيم جي مطابق اسٽينلیس اسٽيل ڪالم (اندروني قطر 100 × 1.8 ملي ميٽر) ۾ پيڪ ڪيو ويو. ڪالم جي پيڪنگ کي ميڪيڪل وائبريشن جي مدد سان ڪالم اندر هڪ يونيفارم پرت کي يقيني بڻايو ويندو آهي. پيڪ ٿيل ڪالم جو جائزو ورتو ويو پيپٽائڊس جي مرکب جي الڳ ٿيڻ لاءِ جنهن ۾ پنج پيپٽائڊس (گلائي-ٽائر، گلائي-ليو-ٽائر، گلائي-گلائي-ٽائر-آرگ، ٽائر-آئل-گلائي-سر-آرگ، ليوسين-اينڪيفالين پيپٽائڊ) شامل هئا. ۽ انساني سيرم البومين (HSA) جي ٽرپٽڪ هائيڊرولائيسيٽس. اهو ڏٺو ويو ته پيپٽائڊس مرکب ۽ HSA ٽرپٽڪ ڊائجسٽ سٺي ريزوليوشن ۽ ڪارڪردگي سان الڳ ٿي ويا. PMP ڪالم جي علحدگي جي ڪارڪردگي جو مقابلو Ascentis Express RP-Amide ڪالم سان ڪيو ويو. اهو ڏٺو ويو ته پيپٽائڊس ۽ پروٽين ۾ PMP ڪالم تي سٺي ريزوليوشن ۽ اعلي علحدگي جي ڪارڪردگي آهي، ۽ PMP ڪالم جي علحدگي جي ڪارڪردگي Ascentis Express RP-Amide ڪالم کان وڌيڪ آهي.
پي اي جي (پوليٿيلين گلائڪول)، يوريا، ايسٽڪ ايسڊ، ٽرائيميٿوڪسي اورٿوسيليڪيٽ (TMOS)، ٽرائيميٿيل ڪلوروسيلين (TMCS)، ٽرپسن، انساني سيرم البومين (HSA)، امونيم ڪلورائڊ، يوريا، هيڪساميٿيل ميٿاڪريلوئلڊسيلازان (HMDS)، ميٿاڪريلوئل ڪلورائڊ (MC)، اسٽائرين، 4-هائيڊروڪسي- ٽيمپو، بينزوئل پيرو آڪسائيڊ (BPO)، ايسٽونائيٽرائيل (ACN) HPLC لاءِ، ميٿانول، 2-پروپينول ۽ ايسٽون. سگما-الڊرچ ڪمپني (سينٽ لوئس، مسوري، آمريڪا).
يوريا (8 گرام)، پوليٿيلين گلائڪول (8 گرام) ۽ 0.01 اين ايڇ ايسٽڪ ايسڊ جي 8 ملي ليٽر کي 10 منٽن لاءِ هلايو ويو، ۽ ان ۾ 24 ملي ليٽر TMOS برف جي ٿڌي ڪرڻ هيٺ شامل ڪيو ويو. رد عمل واري مرکب کي 40 ° C تي 6 ڪلاڪن لاءِ ۽ پوءِ 120 ° C تي 8 ڪلاڪن لاءِ اسٽينلیس اسٽيل آٽو ڪليو ۾ گرم ڪيو ويو. پاڻي کي صاف ڪيو ويو ۽ باقيات کي 70 ° C تي 12 ڪلاڪن لاءِ سڪايو ويو. خشڪ نرم بلاڪن کي آساني سان پيس ڪيو ويو ۽ 550 ° C تي 12 ڪلاڪن لاءِ تندور ۾ ڪيلسائن ڪيو ويو. ذرات جي سائيز، سوراخ جي سائيز ۽ مٿاڇري جي علائقي جي ٻيهر پيداوار جي جانچ ڪرڻ لاءِ ٽي بيچ تيار ڪيا ويا ۽ خاصيت ڪئي وئي.
پولسٽريئر زنجيرن لاءِ پولر گروپ ۽ اسٽيشنري مرحلو. تياري جو طريقو هيٺ بيان ڪيو ويو آهي.
اين-فينائل ميليمائيڊ (200 ملي گرام) ۽ ميٿائل وينائل آئوسوسائينٽ (100 ملي گرام) کي اينهائيڊروس ٽوليوئن ۾ حل ڪيو ويو، ۽ پوءِ 0.1 ملي ليٽر 2,2′-ازوئيسوبوٽيرونائٽريل (AIBN) کي رد عمل واري فلاسڪ ۾ شامل ڪيو ويو ته جيئن فينائل ميليمائيڊ ۽ ميٿائل وينائل آئوسوسائينٽ (PMPC) جو ڪوپوليمر حاصل ڪري سگهجي. ) مرکب کي 60 ° C تي 3 ڪلاڪن لاءِ گرم ڪيو ويو، فلٽر ڪيو ويو ۽ 40 ° C تي 3 ڪلاڪن لاءِ تندور ۾ خشڪ ڪيو ويو.
خشڪ سليڪا ذرڙا (2 گرام) خشڪ ٽوليوين (100 ملي ليٽر) ۾ ورهايا ويا، 500 ملي ليٽر گول هيٺان فلاسڪ ۾ 10 منٽن لاءِ هلايا ويا ۽ سونيڪٽ ڪيا ويا. پي ايم سي پي (10 ملي گرام) ٽوليوين ۾ حل ڪيو ويو ۽ هڪ اضافي فنل ذريعي رد عمل فلاسڪ ۾ ڊراپ وائيز شامل ڪيو ويو. مرکب کي 8 ڪلاڪن لاءِ 100 ° C تي ريفلڪس ڪيو ويو، فلٽر ڪيو ويو، ايسٽون سان ڌويو ويو ۽ 60 ° C تي 3 ڪلاڪن لاءِ خشڪ ڪيو ويو. پوءِ، پي ايم سي پي (100 گرام) سان لاڳاپيل سليڪا ذرڙا ٽوليوين (200 ملي ليٽر) ۾ حل ڪيا ويا، ۽ 100 μl ڊبيوٽيليٽن ڊائلوريٽ جي موجودگي ۾ ڪيٽالسٽ جي طور تي ان ۾ 4-هائيڊروڪسي-ٽيمپو (2 ملي ليٽر) شامل ڪيو ويو. مرکب کي 8 ڪلاڪن لاءِ 50 ° C تي هلايو ويو، فلٽر ڪيو ويو ۽ 3 ڪلاڪن لاءِ 50 ° C تي خشڪ ڪيو ويو.
اسٽائرين (1 ملي ليٽر)، بينزول پيرو آڪسائيڊ بي پي او (0.5 ملي ليٽر) ۽ ٽيمپو-پي ايم سي پي (1.5 گرام) سان ڳنڍيل سليڪا ذرات کي ٽوليئن ۾ ورهايو ويو ۽ نائٽروجن سان صاف ڪيو ويو. اسٽائرين جي پوليمرائيزيشن 100 ° C تي 12 ڪلاڪن لاءِ ڪئي وئي. نتيجي ۾ پيدا ٿيندڙ پراڊڪٽ کي ميٿانول سان ڌوئي وئي ۽ رات جو 60 ° C تي سڪايو ويو. رد عمل جو عام منصوبو شڪل 1 ۾ ڏيکاريو ويو آهي.
نمونن کي 1 ڪلاڪ لاءِ 393 K تي ڊيگيس ڪيو ويو جيستائين 10-3 Torr کان گهٽ جو باقي دٻاءُ حاصل نه ڪيو ويو. ڪل سوراخ جي مقدار کي طئي ڪرڻ لاءِ نسبتي دٻاءُ P/P0 = 0.99 تي جذب ٿيل N2 جي مقدار استعمال ڪئي وئي. خالص ۽ ليگينڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن جي مورفولوجي کي اسڪيننگ اليڪٽران مائڪروسڪوپ (هٽاچي هاءِ ٽيڪنالاجيز، ٽوڪيو، جاپان) استعمال ڪندي جانچيو ويو. خشڪ نمونا (خالص سليڪا ۽ ليگينڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙا) ڪاربن ٽيپ استعمال ڪندي ايلومينيم راڊز تي رکيا ويا. Q150T اسپٽرنگ ڊيوائس استعمال ڪندي سون کي نموني تي جمع ڪيو ويو، ۽ نموني تي 5 nm ٿلهي Au پرت جمع ڪئي وئي. اهو گهٽ وولٽيج جي عمل جي ڪارڪردگي کي بهتر بڻائي ٿو ۽ باریک ٿڌي اسپرينگ فراهم ڪري ٿو. عنصري تجزيو ٿرمو اليڪٽران (والٿم، ايم اي، آمريڪا) فليش EA1112 عنصري ساخت تجزيه نگار استعمال ڪندي ڪيو ويو. ذري جي سائيز جي تقسيم حاصل ڪرڻ لاءِ مالورن پارٽيڪل سائيز تجزيه نگار (ورسٽرشائر، برطانيه) ماسٽرائزر 2000 استعمال ڪيو ويو. اڻ ڪوٽ ٿيل سليڪا ذرڙا ۽ ليگينڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙا (هر هڪ 5 ملي گرام) 5 ملي ليٽر آئسوپروپانول ۾ منتشر ڪيا ويا، 10 منٽن لاءِ سونيڪٽ ڪيو ويو، 5 منٽن لاءِ متحرڪ ڪيو ويو، ۽ ماسٽرائزر آپٽيڪل بينچ تي رکيو ويو. ٿرموگراويميٽرڪ تجزيو 30 کان 800 °C جي درجه حرارت جي حد ۾ 5 °C في منٽ جي شرح سان ڪيو ويندو آهي.
شيشي جي فائبر جي قطار واري تنگ بور اسٽينلیس اسٽيل ڪالمن کي طول و عرض (ID 100 × 1.8 mm) سان سلري فلنگ جي طريقي سان پيڪ ڪيو ويو هو جيئن ريفرنس 31 ۾ ڏنل آهي. اسٽينلیس اسٽيل ڪالمن (شيشي جي قطار واري، ID 100 × 1 .8 mm) ۽ هڪ آئوٽ ليٽ جنهن ۾ 1 µm فريٽ هجي، هڪ سلري پيڪنگ مشين (آل ٽيڪ ڊيئر فيلڊ، IL، USA) سان ڳنڍيل هو. اسٽيشنري فيز جي 150 ملي گرام کي 1.2 ملي ليٽر ميٿانول ۾ معطل ڪري ۽ ان کي رزروائر ڪالمن ۾ فيڊ ڪري اسٽيشنري فيز جو سسپنشن تيار ڪريو. ميٿانول کي سلري سالوينٽ ۽ ڪنٽرول سالوينٽ طور استعمال ڪيو ويو. 10 منٽن لاءِ 100 MP، 15 منٽن لاءِ 80 MP، ۽ 30 منٽن لاءِ 60 MP جو پريشر سيڪوئنس لاڳو ڪندي ڪالمن کي پيڪ ڪريو. پيڪنگ جي عمل ۾ ميڪيڪل وائبريشن لاءِ ٻه گيس ڪروميٽوگرافي ڪالمن وائبريٽر (آل ٽيڪ، ڊيئر فيلڊ، IL، USA) استعمال ڪيا ويا ته جيئن هڪجهڙائي واري ڪالمن جي پيڪنگ کي يقيني بڻائي سگهجي. سلري پيڪر کي بند ڪريو ۽ اسٽرنگ کي نقصان کان بچائڻ لاءِ دٻاءُ آهستي آهستي ڇڏي ڏيو. ڪالم کي سلري نوزل ​​کان ڌار ڪيو ويو ۽ هڪ ٻي فٽنگ انليٽ سان ڳنڍيل هئي ۽ ان جي آپريشن کي جانچڻ لاءِ ايل سي سسٽم سان ڳنڍيل هئي.
هڪ ڪسٽم ايم ايل سي هڪ ايل سي پمپ (10AD شيماڊزو، جاپان)، هڪ سيمپلر سان 50 اين ايل انجيڪشن لوپ (ويلڪو (آمريڪا) سي 14 ڊبليو.05)، هڪ ميمبرين ڊيگاسر (شيماڊزو ڊي جي يو-14 اي)، ۽ هڪ يو وي آءِ ايس ڪيپيلري ونڊو استعمال ڪندي ٺاهيو ويو. ڊيٽيڪٽر ڊيوائس (يو وي-2075) ۽ ايناميلڊ مائڪرو ڪالمن. اضافي ڪالمن جي توسيع جي اثر کي گھٽ ڪرڻ لاءِ تمام تنگ ۽ مختصر ڪنيڪٽنگ ٽيوب استعمال ڪريو. ڪالمن کي ڀرڻ کان پوءِ، 1/16″ ريڊيوسنگ جنڪشن جي آئوٽ ليٽ تي هڪ ڪيپيلري (50 µm id 365) انسٽال ڪريو ۽ ريڊيوسنگ جنڪشن جو ڪيپيلري (50 µm) انسٽال ڪريو. ڊيٽا گڏ ڪرڻ ۽ ڪروميٽوگرام پروسيسنگ ملٽي ڪرو 2000 سافٽ ويئر استعمال ڪندي ڪئي ويندي آهي. 254 اين ايم تي، مضمونن جي تجزين جي يو وي جذب جي نگراني 0 تي ڪئي وئي. ڪروميٽوگرافڪ ڊيٽا جو تجزيو OriginPro8 (نارٿمپٽن، ايم اي) استعمال ڪندي ڪيو ويو.
انساني سيرم البومين، لائوفيلائيزڊ پائوڊر، ≥ 96٪ (اگروز جيل اليڪٽروفورسس) 3 ملي گرام ٽرپسن (1.5 ملي گرام)، 4.0 ملي گرام يوريا (1 ملي) ۽ 0.2 ملي گرام امونيم بائي ڪاربونيٽ (1 ملي) سان ملايو ويو. محلول کي 10 منٽن لاءِ هلايو ويو ۽ 37 ° C تي 6 ڪلاڪن لاءِ پاڻي جي غسل ۾ رکيو ويو، پوءِ 0.1٪ TFA جي 1 ملي ليٽر سان آرام ڪيو ويو. محلول کي فلٽر ڪريو ۽ 4 ° C کان هيٺ ذخيرو ڪريو.
پي ايم پي ڪالم تي پيپٽائڊس ۽ ٽرپٽڪ ڊائجسٽ ايڇ ايس اي جي ميلاپ جي الڳ الڳ تشخيص ڪئي وئي. پي ايم پي ڪالم ذريعي الڳ ٿيل پيپٽائڊس ۽ ايڇ ايس اي جي ميلاپ جي ٽرپٽڪ هائيڊولائيزيشن کي چيڪ ڪريو ۽ نتيجن جو مقابلو ايسينٽس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالم سان ڪريو. نظرياتي پليٽن جو تعداد هيٺ ڏنل مساوات استعمال ڪندي ڳڻيو ويندو آهي:
خالص سليڪا ذرڙن ۽ ليگنڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن جون SEM تصويرون شڪل 2 ۾ ڏيکاريل آهن. خالص سليڪا ذرڙن (A، B) جون SEM تصويرون هڪ گول شڪل ڏيکارين ٿيون جنهن ۾ ذرڙا ڊگھا آهن يا اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ غير منظم هم آهنگي رکن ٿيون. ليگنڊ (C، D) سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري خالص سليڪا ذرڙن جي ڀيٽ ۾ هموار آهي، جيڪا شايد سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري کي ڍڪيندڙ پولسٽريئر زنجيرن جي ڪري هجي.
خالص سليڪا ذرڙن (A، B) ۽ ليگنڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن (C، D) جي اليڪٽران مائڪروگرافس کي اسڪين ڪرڻ.
خالص سليڪا ذرڙن ۽ ليگنڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن جي پارٽيڪل سائيز ورڇ شڪل 2. 3(A) ۾ ڏيکاريل آهي. ووليوميٽرڪ پارٽيڪل سائيز ورڇ وکر ڏيکاريا ته ڪيميائي ترميم کان پوءِ سليڪا ذرڙن جي سائيز ۾ اضافو ٿيو (شڪل 3A). موجوده مطالعي ۽ پوئين مطالعي مان سليڪا پارٽيڪل سائيز ورڇ ڊيٽا جو مقابلو ٽيبل 1(A) ۾ ڪيو ويو آهي. PMP جو ووليوميٽرڪ پارٽيڪل سائيز d(0.5) 3.36 µm هو، اسان جي پوئين مطالعي ۾ 3.05 µm جي ad(0.5) قدر جي مقابلي ۾ (پولي اسٽائرين بانڊڊ سليڪا ذرات)34. رد عمل جي مرکب ۾ PEG، يوريا، TMOS ۽ ايسٽڪ ايسڊ جي تناسب ۾ تبديلي جي ڪري، هن بيچ جي پارٽيڪل سائيز ورڇ اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ تنگ هئي. PMP مرحلي جو پارٽيڪل سائيز پولسٽريئر پابند سليڪا ذرڙن جي مرحلي کان ٿورو وڏو آهي جيڪو اسان اڳ ۾ پڙهيو هو. ان جو مطلب آهي ته اسٽائرين سان سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري جي ڪم ڪرڻ سان سليڪا جي مٿاڇري تي صرف پولسٽريئرين جي هڪ پرت (0.97 µm) جمع ٿي، جڏهن ته PMP مرحلي ۾ پرت جي ٿولهه 1.38 µm هئي.
خالص سليڪا ذرڙن ۽ ليگنڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن جي پارٽيڪل سائيز ورڇ (A) ۽ پوئر سائيز ورڇ (B).
هن مطالعي ۾ استعمال ٿيندڙ سليڪا ذرڙن جي سوراخ جي سائيز، سوراخ جي مقدار، ۽ مٿاڇري واري ايراضي جدول 1 (B) ۾ ڏيکاريل آهي. خالص سليڪا ذرڙن ۽ ليگنڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن جا PSD پروفائل شڪل 3 (B) ۾ ڏيکاريل آهن. نتيجا اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ هئا 34. خالص ۽ ليگنڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن جا سوراخ جي سائيز ترتيب وار 310 Å ۽ 241 Å هئا، جيڪو ظاهر ڪري ٿو ته ڪيميائي ترميم کان پوءِ، سوراخ جي سائيز ۾ 69 Å گهٽتائي آئي، جيئن جدول 1 (B) ۾ ڏيکاريل آهي، ۽ شفٽ وکر شڪل ۾ ڏيکاريل آهي. موجوده مطالعي ۾ سليڪا ذرڙن جو مخصوص مٿاڇري وارو علائقو 116 m2/g آهي، جيڪو اسان جي پوئين مطالعي (124 m2/g) سان مقابلو ڪرڻ لائق آهي. جيئن جدول 1 (B) ۾ ڏيکاريل آهي، ڪيميائي ترميم کان پوءِ سليڪا ذرڙن جو مٿاڇري وارو علائقو (m2/g) پڻ 116 m2/g کان گهٽجي 105 m2/g ٿي ويو.
اسٽيشنري مرحلي جي عنصري تجزيي جا نتيجا جدول 2 ۾ پيش ڪيا ويا آهن. موجوده اسٽيشنري مرحلي جو ڪاربن مواد 6.35٪ آهي، جيڪو اسان جي پوئين مطالعي کان گهٽ آهي (پولي اسٽائرين سان لاڳاپيل سليڪا ذرات، ترتيب وار 7.93٪ 35 ۽ 10.21٪) 42. هيٺ ڏنل موجوده اسٽيشنري مرحلي جو ڪاربن مواد، ڇاڪاڻ ته ڪجهه پولر ليگنڊ جهڙوڪ فينائل ميليمائيڊ ميٿائل وينائل آئوسوسائينٽ (PCMP) ۽ 4-هائيڊروڪسي-ٽيمپو کي SP جي تياري ۾ اسٽائرين کان علاوه استعمال ڪيو ويو آهي. موجوده اسٽيشنري مرحلي ۾ نائٽروجن جو وزن سيڪڙو 2.21٪ آهي جڏهن ته پوئين مطالعي ۾ 0.1735 ۽ 0.85٪ آهي. ان جو مطلب آهي ته موجوده اسٽيشنري مرحلي ۾ فينائل ميليمائيڊ جي ڪري نائٽروجن جو وزن سيڪڙو وڌيڪ آهي. ساڳئي طرح، پراڊڪٽس (4) ۽ (5) ۾ ڪاربن جو مقدار ترتيب وار 2.7٪ ۽ 2.9٪ آهي، جڏهن ته آخري پراڊڪٽ (6) ۾ ڪاربن جو مقدار 6.35٪ آهي، جيئن ٽيبل 2 ۾ ڏيکاريل آهي. وزن گھٽائڻ جي جانچ لاءِ PMP جي اسٽيشنري مرحلي تي ٿرموگراويميٽرڪ تجزيو (TGA) استعمال ڪيو ويو، ۽ TGA وکر شڪل 4 ۾ ڏيکاريل آهي. TGA وکر 8.6٪ وزن گھٽائڻ ڏيکاري ٿو، جيڪو ڪاربن جي مواد (6.35٪) سان سٺي موافقت ۾ آهي، ڇاڪاڻ ته ليگنڊس ۾ نه رڳو C، پر N، O ۽ H پڻ شامل آهن.
سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري کي تبديل ڪرڻ لاءِ ليگنڊ فينائل ميليمائيڊ-ميٿيل ونائل آئسوسائينٽ کي چونڊيو ويو ڇاڪاڻ ته ان جي پولر فينائل ميليمائيڊ ۽ وينائل آئسوسائينٽ گروپن جي ڪري. وينائل آئسوسائينٽ گروپ اسٽائرين سان وڌيڪ رد عمل ڪري سگهن ٿا زنده ريڊيڪل پوليمرائيزيشن ذريعي. ٻيو سبب هڪ اهڙو گروپ داخل ڪرڻ آهي جنهن جو تجزيه نگار سان معتدل تعامل هجي ۽ تجزيه نگار ۽ اسٽيشنري مرحلي جي وچ ۾ ڪو مضبوط اليڪٽرو اسٽيٽڪ تعامل نه هجي، ڇاڪاڻ ته فينائل ميليمائيڊ جي حصي ۾ عام پي ايڇ تي ڪو به ورچوئل چارج نه هوندو آهي. اسٽيشنري مرحلي جي قطبيت کي اسٽائرين جي بهترين مقدار ۽ فري ريڊيڪل پوليمرائيزيشن جي رد عمل جي وقت ذريعي ڪنٽرول ڪري سگهجي ٿو. رد عمل جو آخري مرحلو (فري ريڊيڪل پوليمرائيزيشن) اهم آهي ڇاڪاڻ ته اهو اسٽيشنري مرحلي جي قطبيت کي تبديل ڪري ٿو. انهن اسٽيشنري مرحلن ۾ ڪاربن جي مواد کي جانچڻ لاءِ عنصري تجزيو ڪيو ويو. اهو ڏٺو ويو آهي ته اسٽائرين جي مقدار ۽ رد عمل جي وقت کي وڌائڻ سان اسٽيشنري مرحلي جي ڪاربن جي مواد ۾ اضافو ٿئي ٿو ۽ ان جي برعڪس. اسٽائرين جي مختلف ڪنسنٽريشن سان تيار ڪيل ايس پيز ۾ مختلف ڪاربن لوڊ هوندا آهن. ساڳئي طرح، انهن اسٽيشنري مرحلن کي اسٽينلیس اسٽيل ڪالمن تي رکيو ويو ۽ انهن جي ڪروميٽوگرافڪ خاصيتن (چونڊ، ريزوليوشن، اين ويليو، وغيره) جي جانچ ڪئي وئي. انهن تجربن جي بنياد تي، پي ايم پي اسٽيشنري مرحلي جي تياري لاءِ هڪ بهتر ڪيل جوڙجڪ چونڊيو ويو ته جيئن ڪنٽرول ٿيل قطبيت ۽ تجزيي جي سٺي برقراري مهيا ڪري سگهجي.
موبائل فيز جي گنجائش استعمال ڪندي پيپٽائڊس جي پنجن مرکبن (گلائي-ٽائر، گلائي-ليو-ٽائر، گلائي-گلائي-ٽائر-آرگ، ٽائر-آئل-گلائي-سر-آرگ، ليوسين-اينڪيفالين) جي تجزيي لاءِ پي ايم پي ڪالم جو پڻ جائزو ورتو ويو. 60/40 (v/v) ACN/پاڻي (0.1% TFA) 80 µl/منٽ جي وهڪري جي شرح تي. بهترين ايليوشن حالتن (200,000 پليٽون/m) جي تحت، نظرياتي پليٽن (N) جو تعداد في ڪالم (100 × 1.8 ملي ميٽر) 20,000 ± 100 آهي. ٽن پي ايم پي ڪالمن لاءِ N قدر جدول 3 ۾ ڏيکاريا ويا آهن ۽ ڪروميٽوگرام شڪل 5A ۾ ڏيکاريا ويا آهن. هڪ پي ايم پي ڪالم تي تيز وهڪري جي شرح (700 µl/منٽ) تي تيز تجزيو، هڪ منٽ اندر پنج پيپٽائڊس ايلوٽ ڪيا ويا، بهترين اين ويليو 13,500 ± 330 في ڪالم (100 x 1.8 ملي ميٽر قطر)، 135,000 پليٽس/ ميٽر جي برابر (شڪل 5B). ساڳئي سائيز جا ٽي ڪالم (اندروني قطر 100 x 1.8 ملي ميٽر) پي ايم پي اسٽيشنري فيز جي ٽن مختلف بيچن سان ڀريل هئا ته جيئن پيداوار جي صلاحيت کي جانچيو وڃي. هر ڪالم لاءِ تجزيا رڪارڊ ڪيا ويا هر ڪالم تي ساڳئي ٽيسٽ مرکب کي الڳ ڪندي بهترين ايليوشن حالتن، نظرياتي پليٽس N جي تعداد، ۽ برقرار رکڻ جي وقت کي استعمال ڪندي. پي ايم پي ڪالمن لاءِ ريپروڊيڪبلٽي ڊيٽا ٽيبل 4 ۾ ڏيکاريل آهي. پي ايم پي ڪالمن جي ريپروڊيڪبلٽي تمام گهٽ %RSD قدرن سان سٺي نموني سان لاڳاپيل آهي جيئن ٽيبل 3 ۾ ڏيکاريل آهي.
پي ايم پي ڪالم (بي) ۽ ايسينٽس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالم (اي) تي پيپٽائيڊ مرکبن جي الڳ ٿيڻ، موبائل فيز 60/40 اي سي اين/ايڇ 2 او (ٽي ايف اي 0.1٪)، پي ايم پي ڪالم جي طول و عرض (100 x 1.8 ملي ميٽر آئي ڊي)، تجزيو مرڪبن جي ايليوشن آرڊر: 1 (گلائي-ٽائر)، 2 (گلائي-ليو-ٽائر)، 3 (گلائي-گلائي-ٽائر-آرگ)، 4 (ٽائر-آئل-گلائي-سر-آرگ) ۽ 5 (ليوسڪ ايسڊ اينڪيفالين).
HPLC پاران انساني سيرم البومين جي ٽرپٽڪ هائيڊولائيزيٽ جي الڳ ٿيڻ لاءِ هڪ PMP ڪالم (اندروني قطر 100 x 1.8 ملي ميٽر) جو جائزو ورتو ويو. شڪل 6 ۾ ڪروميٽوگرام ڏيکاري ٿو ته نمونا تمام سٺي ريزوليوشن سان چڱي طرح الڳ ٿيل آهن. HSA حلن جو تجزيو 100 μl/منٽ جي وهڪري جي شرح، 70/30 ايسٽونائيٽريل/پاڻي جي موبائل مرحلي ۽ 0.1٪ TFA استعمال ڪندي ڪيو ويو. HSA جي ڪليويج کي 17 چوٽين ۾ ورهايو ويو، جيئن ڪروميٽوگرام (شڪل 6) ۾ ڏيکاريل آهي، 17 پيپٽائڊس جي مطابق. HSA هائيڊولائيزيٽ کان انفرادي چوٽين جي الڳ ٿيڻ جي ڪارڪردگي جو حساب ڪيو ويو ۽ قدر جدول 5 ۾ ڏيکاريا ويا آهن.
HSA ٽرپٽڪ هائيڊرولائيسيٽس کي PMP ڪالم (اندروني قطر 100 x 1.8 ملي ميٽر)، وهڪري جي شرح (100 μl/منٽ)، موبائل فيز 60/40 ايسٽونائيٽرائيل/پاڻي، ۽ 0.1٪ TFA تي الڳ ڪيو ويو.
جتي L ڪالمن جي ڊيگهه آهي، η موبائل مرحلي جي ويسڪوسيٽي آهي، ΔP ڪالمن جو پوئين دٻاءُ آهي، ۽ u موبائل مرحلي جي لڪير واري رفتار آهي. PMP ڪالمن جي پارگميتا 2.5 × 10–14 m2 هئي، وهڪري جي شرح 25 µl/منٽ هئي، 60/40 v/v استعمال ڪيو ويو. ACN/پاڻي. PMP ڪالمن جي پارگميتا (ID 100 × 1.8 mm) اسان جي پوئين Ref.34 مطالعي جي برابر هئي. سطحي طور تي سوراخ ٿيل ذرڙن سان ڀريل ڪالمن جي پارگميتا 1.7×10 .6 µm آهي، 5 µm ذرڙن لاءِ 2.5×10-14 m2 آهي43. تنهن ڪري، PMP مرحلي جي پارگميتا 5 μm جي سائيز سان ڪور-شيل ذرڙن جي پارگميتا جي برابر آهي.
جتي Wx ڪلوروفارم سان ڀريل ڪالم جو ماس آهي، Wy ميٿانول سان ڀريل ڪالم جو ماس آهي، ۽ ρ محلول جي کثافت آهي. ميٿانول جي کثافت (ρ = 0.7866) ۽ ڪلوروفارم (ρ = 1.484). سليڪا-C18 پارٽيڪل ڪالم (100 × 1.8 ملي ميٽر ID)34 ۽ اسان جي اڳ ۾ مطالعي ڪيل C18-urea31 ڪالم جي ڪل پورسيٽي ترتيب وار 0.63 ۽ 0.55 هئي. ان جو مطلب آهي ته يوريا ليگنڊز جي موجودگي اسٽيشنري فيز جي پارگميتا کي گھٽائي ٿي. ٻئي طرف، PMP ڪالم جي ڪل پورسيٽي (اندروني قطر 100 × 1.8 ملي ميٽر) 0.60 آهي. PMP ڪالم C18 پابند سليڪا ذرڙن سان ڀريل ڪالمن جي ڀيٽ ۾ گهٽ پارگميتا آهن ڇاڪاڻ ته C18 قسم جي اسٽيشنري مرحلن ۾ C18 ليگنڊز سليڪا ذرڙن سان لڪير واري زنجيرن ۾ ڳنڍيل آهن، جڏهن ته پولسٽريئر قسم جي اسٽيشنري مرحلن ۾ ذرڙن جي چوڌاري هڪ نسبتا ٿلهو پوليمر ٺهيل آهي. پرت الف. هڪ عام تجربي ۾، ڪالمن جي پورسيٽي جو حساب هن ريت ڪيو ويندو آهي:
شڪل 7A، B ۾، ساڳئي ايليوشن حالتن هيٺ PMP ڪالم (id 100 x 1.8 mm) ۽ Ascentis Express RP-Amide ڪالم (id 100 x 1.8 mm) لاءِ وان ڊيمٽر پلاٽ ڏيکاريا ويا آهن، ٻنهي ڪالمن تي 60/40 ACN/H2O ۽ 0 .1% TFA 20 µl/min کان 800 µl/min تائين. بهترين وهڪري جي شرح (80 µl/min) تي گهٽ ۾ گهٽ HETP قدر PMP ڪالم ۽ Ascentis Express RP-Amide ڪالم لاءِ ترتيب وار 2.6 µm ۽ 3.9 µm هئا. HETP قدر ڏيکارين ٿا ته PMP ڪالم (100 x 1.8 mm id) جي علحدگي جي ڪارڪردگي تجارتي طور تي دستياب Ascentis Express RP-Amide ڪالم (100 x 1.8 mm id) کان تمام گهڻي آهي. شڪل 7(A) ۾ وين ڊيمٽر گراف ڏيکاري ٿو ته N قدر ۾ گهٽتائي اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ وڌندڙ وهڪري سان خاص طور تي وڌيڪ نه آهي. ايسينٽس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالم جي مقابلي ۾ پي ايم پي ڪالم (id 100 × 1.8 ملي ميٽر) جي اعليٰ علحدگي جي ڪارڪردگي بهتر ذرڙي جي شڪل ۽ سائيز ۽ موجوده ڪم ۾ استعمال ٿيندڙ نفيس ڪالم پيڪنگ جي طريقيڪار تي ٻڌل آهي34.
(الف) وان ڊيمٽر پلاٽ (HETP بمقابلہ موبائل فيز لڪير ويلوسيٽي) هڪ PMP ڪالم (id 100 x 1.8 mm) تي 60/40 ACN/H2O ۾ 0.1% TFA سان حاصل ڪيو ويو. (ب) وان ڊيمٽر پلاٽ (HETP بمقابلہ موبائل فيز لڪير ويلوسيٽي) هڪ Ascentis Express RP-Amide ڪالم (id 100 x 1.8 mm) تي 60/40 ACN/H2O ۾ 0.1% TFA سان حاصل ڪيو ويو.
اعليٰ ڪارڪردگي واري مائع ڪروميٽوگرافي ۾ مصنوعي پيپٽائڊس ۽ انساني سيرم البومين (HSA) جي ٽرپٽڪ هائيڊولائيزيٽ جي مرکب کي الڳ ڪرڻ لاءِ انٽرڪليٽيڊ پولسٽريئرين جو هڪ پولر اسٽيشنري مرحلو تيار ڪيو ويو ۽ جائزو ورتو ويو. پيپٽائڊ مرکبن لاءِ پي ايم پي ڪالمن جي ڪروميٽوگرافڪ ڪارڪردگي الڳ ڪرڻ جي ڪارڪردگي ۽ ريزوليوشن جي لحاظ کان بهترين آهي. پي ايم پي ڪالمن جي بهتر الڳ ڪرڻ جي ڪارڪردگي ڪيترن ئي سببن جي ڪري آهي جهڙوڪ سليڪا پارٽيڪل سائيز ۽ پور سائيز، اسٽيشنري مرحلن جي ڪنٽرول ٿيل سنٿيسس، ۽ پيچيده ڪالمن پيڪنگ مواد. اعليٰ الڳ ڪرڻ جي ڪارڪردگي کان علاوه، هن اسٽيشنري مرحلي جو هڪ ٻيو فائدو تيز وهڪري جي شرح تي گهٽ ڪالمن جي پٺڀرائي دٻاءُ آهي. پي ايم پي ڪالمن انتهائي ٻيهر پيدا ٿيندڙ آهن ۽ پيپٽائڊس جي مرکب ۽ مختلف پروٽين جي ٽرپٽڪ هضم جو تجزيو ڪرڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجن ٿا. اسان هن ڪالمن کي قدرتي شين، دوائن جي ٻوٽن جي عرق ۽ مشروم جي مائع ڪروميٽوگرافي ۾ بايو ايڪٽو مرکبات جي الڳ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪرڻ جو ارادو رکون ٿا. مستقبل ۾، پي ايم پي ڪالمن جو پروٽين ۽ مونوڪلونل اينٽي باڊيز جي الڳ ڪرڻ لاءِ پڻ جائزو ورتو ويندو.
فيلڊ، جي ڪي، يوربي، ايم آر، لاؤ، جي، ٿوگرسن، ايڇ ۽ پيٽرسن، پي. ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي پيپٽائيڊ سيپريشن سسٽم جي جاچ حصو I: ڪالمن جي خاصيت لاءِ هڪ پروٽوڪول جي ترقي. فيلڊ، جي ڪي، يوربي، ايم آر، لاؤ، جي، ٿوگرسن، ايڇ ۽ پيٽرسن، پي. ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي پيپٽائيڊ سيپريشن سسٽم جي تحقيق حصو I: ڪالمن جي ڪردار نگاري لاءِ هڪ پروٽوڪول جي ترقي.فيلڊ، جي ڪي، اووربي، ايم آر، لاؤ، جي.، ٽوگرسن، ايڇ.، ۽ پيٽرسن، پي. ريورس فيز ڪروميٽوگرافي ذريعي پيپٽائيڊ سيپريشن سسٽم جي جاچ، حصو I: ڪالمن جي ڪردار نگاري لاءِ هڪ پروٽوڪول تيار ڪرڻ. فيلڊ، جي ڪي، يوربي، ايم آر، لاؤ، جي.، ٿوگرسن، ايڇ. ۽ پيٽرسن، پي. ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي پيپٽائيڊ سيپريشن سسٽم جي تحقيق حصو I: ڪالمن جي خاصيتن لاءِ هڪ پروٽوڪول جي ترقي. فيلڊ، جي ڪي، يوربي، ايم آر، لاؤ، جي.، ٿوگرسن، ايڇ. ۽ پيٽرسن، پي. ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي پيپٽائيڊ سيپريشن سسٽم جي تحقيق حصو I: ڪالمن جي خاصيتن لاءِ هڪ پروٽوڪول جي ترقي.فيلڊ، جي ڪي، اووربي، ايم آر، لاؤ، جي.، ٽوگرسن، ايڇ.، ۽ پيٽرسن، پي. ريورس فيز ڪروميٽوگرافي ذريعي پيپٽائيڊ سيپريشن سسٽم جي جاچ، حصو I: ڪالمن جي ڪردار نگاري لاءِ هڪ پروٽوڪول تيار ڪرڻ.J.色谱法. 1603، 113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
گومز، بي. وغيره. متعدي بيمارين جي علاج لاءِ بهتر فعال پيپٽائڊس ٺاهڻ جا طريقا. بايو ٽيڪنالاجي. ڪاميابيون 36(2)، 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
وِليگهي، پي.، ليسووسڪي، وي.، مارٽينز، جي. ۽ ڪرسٽچيٽسڪي، ايم. مصنوعي علاج وارا پيپٽائڊس: سائنس ۽ مارڪيٽ. وِليگهي، پي.، ليسووسڪي، وي.، مارٽينز، جي. ۽ ڪرسٽچيٽسڪي، ايم. مصنوعي علاج وارا پيپٽائڊس: سائنس ۽ مارڪيٽ.ويليج پي، ليسووسڪي وي، مارٽينز جي ۽ ڪرسچيٽسڪي ايم. مصنوعي علاج وارا پيپٽائڊس: سائنس ۽ مارڪيٽ.ويليج پي، ليسووسڪي وي، مارٽينز جي ۽ خريچٽسڪي ايم. مصنوعي علاج وارا پيپٽائڊس: سائنس ۽ مارڪيٽ. دوا جي دريافت. اڄ 15 (1-2)، 40-56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
زئي، ايف.، سمٿ، آر ڊي ۽ شين، وائي. ايڊوانسڊ پروٽومڪ مائع ڪروميٽوگرافي. زئي، ايف.، سمٿ، آر ڊي ۽ شين، وائي. ايڊوانسڊ پروٽومڪ مائع ڪروميٽوگرافي.ڏسو ايف.، سمٿ آر ڊي ۽ شين يو. ايڊوانسڊ پروٽومڪ مائع ڪروميٽوگرافي. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced protein composition 液相色谱.ڏسو ايف.، سمٿ آر ڊي ۽ شين يو. ايڊوانسڊ پروٽومڪ مائع ڪروميٽوگرافي.جي. ڪروميٽوگرافي. اي 1261، 78-90 (2012).
ليو، ڊبليو. وغيره. ترقي يافته مائع ڪروميٽوگرافي-ماس اسپيڪٽروميٽري وسيع بنيادن تي ميٽابولومڪس ۽ پروٽومڪس کي گڏ ڪرڻ جي قابل آهي. مقعد. چيم. ايڪٽا 1069، 89-97 (2019).
چيسنوٽ، ايس ايم ۽ سالسبري، جي جي دواسازي جي ترقي ۾ يو ايڇ پي ايل سي جو ڪردار. چيسنوٽ، ايس ايم ۽ سالسبري، جي جي دواسازي جي ترقي ۾ يو ايڇ پي ايل سي جو ڪردار.چيسنوٽ، ايس ايم ۽ سالسبري، جي جي دواسازي جي ترقي ۾ يو ايڇ پي ايل سي جو ڪردار.چيسنوٽ، ايس ايم ۽ سالسبري، جي جي دوا جي ترقي ۾ يو ايڇ پي ايل سي جو ڪردار. جي. سيپٽمبر سائنس. 30(8)، 1183–1190 (2007).
وو، اين. ۽ ڪلوسن، اي ايم تيز علحدگي لاءِ الٽرا هاءِ پريشر مائع ڪروميٽوگرافي جا بنيادي ۽ عملي پهلو. وو، اين. ۽ ڪلوسن، اي ايم تيز علحدگي لاءِ الٽرا هاءِ پريشر مائع ڪروميٽوگرافي جا بنيادي ۽ عملي پهلو.وو، اين. ۽ ڪلوسن، اي ايم تيزيءَ سان علحدگي لاءِ هاءِ پريشر مائع ڪروميٽوگرافي جا بنيادي ۽ عملي پهلو. وو، اين ۽ ڪلاسن، ايم 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面. وو، اين ۽ ڪلوسن، اي ايم تيز علحدگي لاءِ الٽرا هاءِ پريشر مائع ڪروميٽوگرافي جا بنيادي ۽ عملي پهلو.وو، اين. ۽ ڪلوسن، اي ايم تيزيءَ سان علحدگي لاءِ هاءِ پريشر مائع ڪروميٽوگرافي جا بنيادي ۽ عملي پهلو.جي. سيپٽمبر سائنس. 30(8)، 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
رين، ايس اي ۽ ٽيچيلچيف، پي. دواسازي جي ترقي ۾ الٽرا پرفارمنس مائع ڪروميٽوگرافي جو استعمال. رين، ايس اي ۽ ٽيچيلچيف، پي. دواسازي جي ترقي ۾ الٽرا پرفارمنس مائع ڪروميٽوگرافي جو استعمال.رين، ايس اي ۽ چيليشف، پي. دواسازي جي ترقي ۾ الٽرا هاءِ پرفارمنس مائع ڪروميٽوگرافي جو استعمال. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. رين، ايس اي ۽ چيليچف، پي.رين، ايس اي ۽ چيليشف، پي. دوا جي ترقي ۾ الٽرا پرفارمنس مائع ڪروميٽوگرافي جو استعمال.جي. ڪروميٽوگرافي. 1119(1-2)، 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
گو، ايڇ. وغيره. هڪ مونوليٿڪ ميڪروپورس هائيڊروجيل جيڪو تيل ۾ پاڻي جي ايمولشن مان نڪتل آهي جنهن ۾ انٽرو وائرس 71 جي موثر صفائي لاءِ هڪ اعليٰ اندروني مرحلي سان. ڪيميڪل. پروجيڪٽ. جرنل 401، 126051 (2020).
شي، وائي، شيانگ، آر، هوروٿ، سي ۽ ولڪنز، جي اي پروٽومڪس ۾ مائع ڪروميٽوگرافي جو ڪردار. شي، وائي، شيانگ، آر، هوروٿ، سي ۽ ولڪنز، جي اي پروٽومڪس ۾ مائع ڪروميٽوگرافي جو ڪردار.شي، وائي، شيانگ، آر، هورواٿ، سي ۽ ولڪنز، جي اي پروٽومڪس ۾ مائع ڪروميٽوگرافي جو ڪردار. شي، Y.، Xiang، R.، Horváth، C. & Wilkins، JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用. شي، يو، جيانگ، آر، هوروٿ، سي ۽ ولڪنز، جيشي، وائي، شيانگ، آر، هورواٿ، سي ۽ ولڪنز، جي اي پروٽومڪس ۾ مائع ڪروميٽوگرافي جو ڪردار.جي. ڪروميٽوگرافي. اي 1053 (1-2)، 27-36 (2004).
فيڪيٽ، ايس.، ووٽي، جي.-ايل. ۽ گيلرمي، ڊي. علاج واري پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي ريورسڊ فيز مائع ڪروميٽوگرافڪ الڳ ڪرڻ ۾ نوان رجحان: نظريو ۽ ايپليڪيشنون. ۽ گيلرمي، ڊي. علاج واري پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي ريورسڊ فيز مائع ڪروميٽوگرافڪ الڳ ڪرڻ ۾ نوان رجحان: نظريو ۽ ايپليڪيشنون. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографи стоматографи: ٽيوريا ۽ پرلوجينيا. ۽ گيلرمي، ڊي. ريورس فيز مائع ڪروميٽوگرافي ذريعي علاج واري پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي الڳ ٿيڻ ۾ نوان رجحان: نظريو ۽ ايپليڪيشنون. & Guillarme، D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用. ۽ گيلارم، ڊي.۽ گلارمي، ڊي. ريورس فيز مائع ڪروميٽوگرافي ذريعي علاج واري پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي الڳ ٿيڻ ۾ نوان رجحان: نظريو ۽ ايپليڪيشنون.جي. فارم. بايوميڊيڪل سائنس. مقعد. 69، 9–27 (2012).
گيلر، ايم.، اوليووا، پي.، ڊيلي، اي اي ۽ گيبلر، جي سي پهرين ۽ ٻئي علحدگي جي طول و عرض ۾ مختلف پي ايڇ سان آر پي-آر پي-ايڇ پي ايل سي سسٽم استعمال ڪندي پيپٽائڊس جي ٻه طرفي علحدگي. گيلر، ايم.، اوليووا، پي.، ڊيلي، اي اي ۽ گيبلر، جي سي پهرين ۽ ٻئي علحدگي جي طول و عرض ۾ مختلف پي ايڇ سان آر پي-آر پي-ايڇ پي ايل سي سسٽم استعمال ڪندي پيپٽائڊس جي ٻه طرفي علحدگي.گيلر ايم.، اوليووا پي.، ڊالي اي اي ۽ گبلر جي ڪي پيپٽائڊس جي ٻٽي-dimensional separation RP-RP-HPLC سسٽم استعمال ڪندي پهرين ۽ ٻئي separation dimensions ۾ مختلف pH سان.گيلر ايم.، اوليووا پي.، ڊالي اي اي ۽ گبلر جي ڪي آر پي-آر پي-ايڇ پي ايل سي سسٽم استعمال ڪندي پهرين ۽ ٻئي علحدگي جي طول و عرض ۾ مختلف پي ايڇ قدرن کي استعمال ڪندي پيپٽائڊس جي ٻه طرفي علحدگي. جي. سيپٽمبر سائنس. 28 (14)، 1694–1703 (2005).
فيليٽي، ايس. وغيره. 2 µm کان ننڍا مڪمل طور تي سوراخدار ۽ سطحي طور تي سوراخدار C18 ذرات سان ڀريل اعليٰ ڪارڪردگي واري ڪروميٽوگرافي ڪالمن جي ماس ٽرانسفر ۽ حرڪي خاصيتن جي جاچ. جي. سيپٽمبر سائنس. 43 (9-10)، 1737-1745 (2020).
پيوويسانا، ايس. وغيره. ٻوٽن جي حياتياتي فعال پيپٽائڊس جي الڳ ٿيڻ، سڃاڻپ ۽ تصديق ۾ تازيون رجحانات ۽ تجزياتي چئلينج. مقعد. مخلوق مقعد. ڪيميڪل. 410(15)، 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
مولر، جي بي ۽ ٻيا. زندگي جي بادشاهت جو پروٽومڪ نظارو. فطرت 582 (7813)، 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
ڊي لوڪا، ڪي. وغيره. تياري واري مائع ڪروميٽوگرافي ذريعي علاج واري پيپٽائڊس جو پوسٽ-ٽريٽمينٽ. ماليڪيولز (بيسل، سوئٽزرلينڊ) 26(15)، 4688 (2021).
يانگ، وائي ۽ گينگ، ايڪس. مڪسڊ موڊ ڪروميٽوگرافي ۽ بايوپوليمر تي ان جا استعمال. يانگ، وائي ۽ گينگ، ايڪس. مڪسڊ موڊ ڪروميٽوگرافي ۽ بايوپوليمر تي ان جا استعمال.يانگ، يو ۽ گينگ، ايڪس. مڪسڊ موڊ ڪروميٽوگرافي ۽ بايوپوليمر تي ان جو استعمال. يانگ، يو ۽ گينگ، ايڪس 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用. يانگ، وائي ۽ گينگ، ايڪس. مڪسڊ موڊ ڪروميٽوگرافي ۽ بايوپوليمر ۾ ان جو استعمال.يانگ، يو. ۽ جين، ايڪس. مڪسڊ موڊ ڪروميٽوگرافي ۽ بايوپوليمر تي ان جو استعمال.جي. ڪروميٽوگرافي. اي 1218(49)، 8813–8825 (2011).