Nature.comను సందర్శించినందుకు ధన్యవాదాలు. మీరు పరిమిత CSS మద్దతు ఉన్న బ్రౌజర్ వెర్షన్‌ను ఉపయోగిస్తున్నారు. ఉత్తమ అనుభవం కోసం, మీరు అప్‌డేట్ చేయబడిన బ్రౌజర్‌ను ఉపయోగించాలని (లేదా ఇంటర్నెట్ ఎక్స్‌ప్లోరర్‌లో కంపాటిబిలిటీ మోడ్‌ను నిలిపివేయాలని) మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము. అదనంగా, నిరంతర మద్దతును నిర్ధారించడానికి, మేము సైట్‌ను స్టైల్స్ మరియు జావాస్క్రిప్ట్ లేకుండా చూపిస్తాము.
ఒకేసారి మూడు స్లయిడ్‌ల క్యారౌసెల్‌ను ప్రదర్శిస్తుంది. ఒకేసారి మూడు స్లయిడ్‌ల ద్వారా ముందుకు వెళ్లడానికి 'మునుపటి' మరియు 'తదుపరి' బటన్‌లను ఉపయోగించండి, లేదా చివరన ఉన్న స్లైడర్ బటన్‌లను ఉపయోగించి ఒకేసారి మూడు స్లయిడ్‌ల ద్వారా ముందుకు వెళ్లండి.
విశాలమైన రంధ్రాలు గల కణాలను పొందడానికి, సోల్-జెల్ పద్ధతిలో కొన్ని మార్పులతో సచ్ఛిద్ర సిలికా కణాలను తయారు చేశారు. ఈ కణాలను, రివర్స్ చైన్ ట్రాన్స్‌ఫర్-ఫ్రాగ్మెంటేషన్ (RAFT) పాలిమరైజేషన్ ద్వారా N-ఫినైల్‌మాలిమైడ్-మిథైల్‌వినైల్ ఐసోసైనెట్ (PMI) మరియు స్టైరీన్‌తో డెరివటైజ్ చేసి, N-ఫినైల్‌మాలిమైడ్ ఇంటర్‌కలేటెడ్ పాలిమైడ్‌లను ఉత్పత్తి చేశారు. స్టైరీన్ (PMP) స్థిర దశగా ఉపయోగించబడింది. సన్నని బోర్‌ గల స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్‌లను (100 × 1.8 మిమీ లోపలి వ్యాసం) స్లర్రీ ప్యాకింగ్‌తో నింపారు. ఐదు పెప్టైడ్‌లు (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu అమైనో ఆమ్లం ఎంకెఫాలిన్) మరియు హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HAS) యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైజేట్‌తో కూడిన సింథటిక్ పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడానికి PMP కాలమ్ యొక్క క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పనితీరును మూల్యాంకనం చేశారు. అనుకూలమైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో, పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమంతో కూడిన ప్లేట్ల సైద్ధాంతిక సంఖ్య చ.మీ.కు 280,000 ప్లేట్లకు చేరుకుంది. అభివృద్ధి చేయబడిన కాలమ్ యొక్క విభజన పనితీరును వాణిజ్యపరమైన అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో పోల్చినప్పుడు, విభజన సామర్థ్యం మరియు రిజల్యూషన్ పరంగా PMP కాలమ్ యొక్క విభజన సామర్థ్యం వాణిజ్య కాలమ్ కంటే ఉన్నతంగా ఉన్నట్లు గమనించబడింది.
బయోఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ ఇటీవలి సంవత్సరాలలో మార్కెట్ వాటాలో గణనీయమైన పెరుగుదలతో విస్తరిస్తున్న ప్రపంచ మార్కెట్‌గా మారింది. బయోఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ యొక్క విపరీతమైన వృద్ధితో1,2,3, పెప్టైడ్ మరియు ప్రోటీన్ విశ్లేషణకు గొప్ప అవసరం ఏర్పడింది. లక్షిత పెప్టైడ్‌తో పాటు, పెప్టైడ్ సంశ్లేషణ సమయంలో వివిధ మలినాలు ఏర్పడతాయి, కాబట్టి పెప్టైడ్ యొక్క కావలసిన స్వచ్ఛతను పొందడానికి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శుద్ధీకరణ అవసరం. ఒకే నమూనాలో గుర్తించదగిన అనేక రకాల పదార్థాలు ఉండటం వలన, శరీర ద్రవాలు, కణజాలాలు మరియు కణాలలో ప్రోటీన్ల విశ్లేషణ మరియు లక్షణీకరణ అత్యంత సవాలుతో కూడుకున్న పని. పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను సీక్వెన్సింగ్ చేయడానికి మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ ఒక సమర్థవంతమైన సాధనం అయినప్పటికీ, అటువంటి నమూనాలను నేరుగా మాస్ స్పెక్ట్రోమీటర్‌లోకి ప్రవేశపెడితే, విభజన అసంతృప్తికరంగా ఉంటుంది. MS విశ్లేషణకు ముందు లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC) చేయడం ద్వారా ఈ సమస్యను పరిష్కరించవచ్చు, ఇది ఒక నిర్దిష్ట సమయంలో మాస్ స్పెక్ట్రోమీటర్‌లోకి ప్రవేశించే విశ్లేష్యకాల పరిమాణాన్ని తగ్గిస్తుంది4,5,6. అదనంగా, లిక్విడ్ ఫేజ్ సెపరేషన్ సమయంలో విశ్లేష్యకాలు ఒక ఇరుకైన ప్రాంతంలో కేంద్రీకరించబడతాయి, తద్వారా ఈ విశ్లేష్యకాలను సాంద్రీకరించి MS డిటెక్షన్ యొక్క సున్నితత్వాన్ని పెంచుతుంది. గత దశాబ్దంలో లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC) గణనీయంగా అభివృద్ధి చెందింది మరియు ప్రోటీయోమిక్ విశ్లేషణకు విస్తృతంగా ఉపయోగించే పద్ధతిగా మారింది7,8,9,10.
రివర్స్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (RP-LC) అనేది ఆక్టాడెసిల్-మాడిఫైడ్ సిలికా (ODS)ను స్థిర దశగా ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాలను శుద్ధి చేయడానికి మరియు వేరు చేయడానికి విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది¹¹,¹²,¹³. అయితే, వాటి సంక్లిష్ట నిర్మాణం మరియు ఉభయధర్మి స్వభావం కారణంగా,¹⁴,¹⁵ RP స్థిర దశలు పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను సంతృప్తికరంగా వేరు చేయలేవు. అందువల్ల, ధ్రువ మరియు అధ్రువ శకలాలు కలిగిన పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విశ్లేషణకు, ఈ విశ్లేష్యాలతో సంకర్షణ చెందడానికి మరియు వాటిని నిలుపుకోవడానికి ప్రత్యేకంగా రూపొందించిన స్థిర దశలు అవసరం¹⁶. బహుళరీతుల సంకర్షణలను అందించే మిశ్రమ క్రోమాటోగ్రఫీ, పెప్టైడ్‌లు, ప్రోటీన్‌లు మరియు ఇతర సంక్లిష్ట మిశ్రమాలను వేరు చేయడానికి RP-LCకి ప్రత్యామ్నాయంగా ఉంటుంది. అనేక మిశ్రమ-రకం స్థిర దశలు తయారు చేయబడ్డాయి మరియు ఈ స్థిర దశలతో నింపబడిన కాలమ్‌లు పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను వేరు చేయడానికి ఉపయోగించబడ్డాయి¹⁷,¹⁸,¹⁹,²⁰,²¹. ధ్రువ మరియు అధ్రువ సమూహాల ఉనికి కారణంగా, పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను వేరు చేయడానికి మిశ్రమ పద్ధతి స్థిర దశలు (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, పోలార్ ఇంటర్‌కలేషన్/RPLC) అనుకూలంగా ఉంటాయి22,23,24,25,26,27,28. సమయోజనీయ బంధం గల ధ్రువ సమూహాలతో కూడిన పోలార్ ఇంటర్‌కలేటెడ్ స్థిర దశలు మంచి విభజన సామర్థ్యాలను మరియు ధ్రువ, అధ్రువ విశ్లేష్యకాల పట్ల ప్రత్యేకమైన ఎంపికను చూపుతాయి, ఎందుకంటే విభజన అనేది విశ్లేష్యకం మరియు స్థిర దశ మధ్య పరస్పర చర్యపై ఆధారపడి ఉంటుంది (మల్టీమోడల్ ఇంటరాక్షన్స్)29,30,31,32. ఇటీవల, జాంగ్ మరియు ఇతరులు30 పాలిఅమైన్‌ల యొక్క బెహెనిల్-టెర్మినేటెడ్ స్థిర దశలను పొందారు మరియు హైడ్రోకార్బన్‌లు, యాంటీడిప్రెసెంట్లు, ఫ్లేవనాయిడ్లు, న్యూక్లియోసైడ్‌లు, ఈస్ట్రోజెన్‌లు మరియు కొన్ని ఇతర విశ్లేష్యకాలను విజయవంతంగా వేరు చేశారు. పోలార్ ఎంబెడెడ్ స్థిర పదార్థంలో ధ్రువ మరియు అధ్రువ సమూహాలు రెండూ ఉంటాయి, కాబట్టి దీనిని పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను హైడ్రోఫోబిక్ మరియు హైడ్రోఫిలిక్ భాగాలుగా వేరు చేయడానికి ఉపయోగించవచ్చు. పోలార్ ఇన్‌లైన్ కాలమ్‌లు (ఉదాహరణకు, అమైడ్ ఇన్‌లైన్‌తో కూడిన C18 కాలమ్‌లు) అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌లు అనే వాణిజ్య నామంతో అందుబాటులో ఉన్నాయి, కానీ ఈ కాలమ్‌లను అమైన్ 33 విశ్లేషణ కోసం మాత్రమే ఉపయోగించారు.
ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, పెప్టైడ్ విభజన మరియు ట్రిప్టిక్ HSA విచ్ఛేదనం కోసం ఒక ధ్రువ పొందుపరిచే స్థిర దశ (N-ఫినైల్‌మేలిమైడ్, పొందుపరిచిన పాలీస్టైరిన్) తయారు చేయబడింది మరియు మూల్యాంకనం చేయబడింది. స్థిర దశను తయారు చేయడానికి ఈ క్రింది వ్యూహం ఉపయోగించబడింది. మా మునుపటి ప్రచురణలలో వివరించిన పద్ధతుల ప్రకారం, తయారీ పథకాలలో 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 కొన్ని మార్పులతో సచ్ఛిద్ర సిలికా కణాలు తయారు చేయబడ్డాయి. పెద్ద రంధ్రాల పరిమాణం గల సిలికా కణాలను పొందడానికి యూరియా, పాలీఇథిలీన్ గ్లైకాల్ (PEG), TMOS మరియు జల-ఎసిటిక్ ఆమ్లం యొక్క నిష్పత్తులు సర్దుబాటు చేయబడ్డాయి. రెండవదిగా, ఒక కొత్త ఫినైల్‌మేలిమైడ్-మిథైల్‌వినైల్ ఐసోసైనెట్ లిగాండ్ సంశ్లేషణ చేయబడింది మరియు దాని ఉత్పన్న సిలికా కణాలను ధ్రువ పొందుపరిచిన స్థిర దశలను తయారు చేయడానికి ఉపయోగించారు. పొందిన స్థిర దశను ఒక ఆప్టిమైజ్డ్ ప్యాకింగ్ పథకం ప్రకారం స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్ (లోపలి వ్యాసం 100 × 1.8 మిమీ) లో ప్యాక్ చేయబడింది. కాలమ్ లోపల ఏకరీతి పొర ఉండేలా చూసేందుకు, యాంత్రిక కంపనం సహాయంతో కాలమ్‌ను ప్యాక్ చేస్తారు. ఐదు పెప్టైడ్‌లు (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఐల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్-ఎన్‌కెఫాలిన్ పెప్టైడ్) కలిగిన పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాన్ని మరియు హ్యూమన్ సీరం ఆల్బుమిన్ (HSA) యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైసేట్‌లను వేరు చేయడానికి ప్యాక్డ్ కాలమ్‌ను మూల్యాంకనం చేశారు. పెప్టైడ్ మిశ్రమం మరియు HSA ట్రిప్టిక్ డైజెస్ట్ మంచి రిజల్యూషన్ మరియు సామర్థ్యంతో వేరుపడినట్లు గమనించబడింది. PMP కాలమ్ యొక్క వేరుచేసే సామర్థ్యాన్ని అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో పోల్చారు. PMP కాలమ్‌పై పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లు మంచి రిజల్యూషన్ మరియు అధిక వేరుచేసే సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉన్నాయని, మరియు PMP కాలమ్ యొక్క వేరుచేసే సామర్థ్యం అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ కంటే ఎక్కువగా ఉందని గమనించబడింది.
PEG (పాలిఇథిలీన్ గ్లైకాల్), యూరియా, ఎసిటిక్ ఆమ్లం, ట్రైమెథాక్సీఆర్థోసిలికేట్ (TMOS), ట్రైమిథైల్‌క్లోరోసిలేన్ (TMCS), ట్రిప్సిన్, హ్యూమన్ సీరం ఆల్బుమిన్ (HSA), అమ్మోనియం క్లోరైడ్, యూరియా, హెక్సామిథైల్‌మెథాక్రైలోయిల్డైసిలాజేన్ (HMDS), మెథాక్రైలోయిల్ క్లోరైడ్ (MC), స్టైరీన్, 4-హైడ్రాక్సీ-టెంపో, బెంజోయిల్ పెరాక్సైడ్ (BPO), HPLC కోసం ఎసిటోనైట్రైల్ (ACN), మిథనాల్, 2-ప్రొపనాల్ మరియు ఎసిటోన్. సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్ కంపెనీ (సెయింట్ లూయిస్, మిస్సౌరీ, USA).
యూరియా (8 గ్రా), పాలిఇథిలీన్ గ్లైకాల్ (8 గ్రా) మరియు 8 మి.లీ 0.01 N ఎసిటిక్ ఆమ్లం మిశ్రమాన్ని 10 నిమిషాల పాటు కలిపి, దానికి మంచు శీతలీకరణ కింద 24 మి.లీ TMOSను జోడించారు. ఈ చర్య మిశ్రమాన్ని స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ ఆటోక్లేవ్‌లో 40°C వద్ద 6 గంటలు, ఆపై 120°C వద్ద 8 గంటలు వేడి చేశారు. నీటిని వేరు చేసి, అవశేషాన్ని 70°C వద్ద 12 గంటల పాటు ఆరబెట్టారు. ఆరబెట్టిన మెత్తని దిమ్మలను నునుపుగా రుబ్బి, ఓవెన్‌లో 550°C వద్ద 12 గంటల పాటు కాల్చారు. కణ పరిమాణాలు, రంధ్రాల పరిమాణం మరియు ఉపరితల వైశాల్యం యొక్క పునరుత్పత్తిని పరీక్షించడానికి మూడు విడతలను తయారు చేసి, వాటి లక్షణాలను నిర్ధారించారు.
పాలీస్టైరీన్ గొలుసుల కోసం ధ్రువ సమూహం మరియు స్థిర దశ. తయారీ విధానం క్రింద వివరించబడింది.
N-ఫినైల్‌మలేమైడ్ (200 mg) మరియు మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనెట్ (100 mg) లను నిర్జల టోలుయీన్‌లో కరిగించి, ఆ తర్వాత ఫినైల్‌మలేమైడ్ మరియు మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనెట్ (PMCP) యొక్క కోపాలిమర్‌ను పొందడానికి రియాక్షన్ ఫ్లాస్క్‌కు 0.1 ml 2,2′-అజోఐసోబ్యూటిరోనైట్రైల్ (AIBN) ను కలిపారు. ఈ మిశ్రమాన్ని 60°C వద్ద 3 గంటల పాటు వేడి చేసి, వడపోసి, 40°C వద్ద ఓవెన్‌లో 3 గంటల పాటు ఆరబెట్టారు.
ఎండబెట్టిన సిలికా కణాలను (2 గ్రా) 500 మి.లీ గుండ్రని అడుగు ఉన్న ఫ్లాస్క్‌లో పొడి టోలుయీన్ (100 మి.లీ)లో కలిపి, 10 నిమిషాల పాటు కలియబెట్టి, సోనికేట్ చేశారు. PMCP (10 మి.గ్రా)ను టోలుయీన్‌లో కరిగించి, అడిషన్ ఫన్నల్ ద్వారా చుక్కల చుక్కలుగా రియాక్షన్ ఫ్లాస్క్‌కు చేర్చారు. ఈ మిశ్రమాన్ని 100°C వద్ద 8 గంటల పాటు రిఫ్లక్స్ చేసి, వడపోసి, అసిటోన్‌తో కడిగి, 60°C వద్ద 3 గంటల పాటు ఆరబెట్టారు. ఆ తర్వాత, PMCPతో ఉన్న సిలికా కణాలను (100 గ్రా) టోలుయీన్ (200 మి.లీ)లో కరిగించి, ఉత్ప్రేరకంగా 100 μl డైబ్యూటిల్టిన్ డైలారేట్ సమక్షంలో దానికి 4-హైడ్రాక్సీ-టెంపో (2 మి.లీ)ను చేర్చారు. ఈ మిశ్రమాన్ని 50°C వద్ద 8 గంటల పాటు కలియబెట్టి, వడపోసి, 50°C వద్ద 3 గంటల పాటు ఆరబెట్టారు.
స్టైరీన్ (1 మి.లీ), బెంజోయిల్ పెరాక్సైడ్ BPO (0.5 మి.లీ) మరియు TEMPO-PMCP కి జోడించబడిన సిలికా కణాలను (1.5 గ్రా) టోలుయీన్‌లో కలిపి, నైట్రోజన్‌తో శుద్ధి చేశారు. స్టైరీన్ పాలిమరైజేషన్‌ను 100°C వద్ద 12 గంటల పాటు నిర్వహించారు. ఫలితంగా వచ్చిన ఉత్పత్తిని మెథనాల్‌తో కడిగి, 60°C వద్ద రాత్రంతా ఆరబెట్టారు. ఈ చర్య యొక్క సాధారణ పథకం పటం ఒకటిలో చూపబడింది.
10–3 టార్ కంటే తక్కువ అవశేష పీడనం వచ్చేవరకు నమూనాలను 393 K వద్ద 1 గంట పాటు డీగ్యాస్ చేశారు. మొత్తం రంధ్రాల ఘనపరిమాణాన్ని నిర్ధారించడానికి, P/P0 = 0.99 సాపేక్ష పీడనం వద్ద శోషించబడిన N2 పరిమాణాన్ని ఉపయోగించారు. స్వచ్ఛమైన మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల స్వరూపాన్ని స్కానింగ్ ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోస్కోప్ (హిటాచీ హై టెక్నాలజీస్, టోక్యో, జపాన్) ఉపయోగించి పరిశీలించారు. పొడి నమూనాలను (స్వచ్ఛమైన సిలికా మరియు లిగాండ్ బౌండ్ సిలికా కణాలు) కార్బన్ టేప్ ఉపయోగించి అల్యూమినియం రాడ్లపై ఉంచారు. Q150T స్పుటరింగ్ పరికరాన్ని ఉపయోగించి నమూనాపై బంగారాన్ని డిపాజిట్ చేశారు, మరియు నమూనాపై 5 nm మందంతో Au పొరను డిపాజిట్ చేశారు. ఇది తక్కువ వోల్టేజ్ ప్రక్రియ యొక్క సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరుస్తుంది మరియు చక్కటి కోల్డ్ స్ప్రేయింగ్‌ను అందిస్తుంది. థర్మో ఎలక్ట్రాన్ (వాల్థమ్, MA, USA) ఫ్లాష్ EA1112 ఎలిమెంటల్ కంపోజిషన్ ఎనలైజర్‌ను ఉపయోగించి మూలకాల విశ్లేషణ నిర్వహించబడింది. కణ పరిమాణ పంపిణీని పొందడానికి మాల్వెర్న్ పార్టికల్ సైజ్ ఎనలైజర్ (వోర్సెస్టర్‌షైర్, UK) మాస్టర్‌సైజర్ 2000 ఉపయోగించబడింది. పూత లేని సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాలను (ఒక్కొక్కటి 5 mg) 5 ml ఐసోప్రొపనాల్‌లో విక్షేపించి, 10 నిమిషాల పాటు సోనికేట్ చేసి, 5 నిమిషాల పాటు కదిలించి, మాస్టర్‌సైజర్ ఆప్టికల్ బెంచ్‌పై ఉంచారు. 30 నుండి 800 °C ఉష్ణోగ్రత పరిధిలో నిమిషానికి 5 °C చొప్పున థర్మోగ్రావిమెట్రిక్ విశ్లేషణ నిర్వహించబడుతుంది.
రిఫరెన్స్ 31లో ఉన్న అదే విధానాన్ని అనుసరించి, స్లర్రీ ఫిల్లింగ్ పద్ధతి ద్వారా (ID 100 × 1.8 mm) కొలతలు గల గ్లాస్ ఫైబర్ లైన్డ్ నారో బోర్ స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్‌లను ప్యాక్ చేశారు. స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్ (గ్లాస్ లైన్డ్, ID 100 × 1.8 mm) మరియు 1 µm ఫ్రిట్ కలిగిన ఒక అవుట్‌లెట్‌ను స్లర్రీ ప్యాకేజింగ్ మెషీన్‌కు (ఆల్‌టెక్ డీర్‌ఫీల్డ్, IL, USA) అనుసంధానించారు. 1.2 ml మెథనాల్‌లో 150 mg స్టేషనరీ ఫేజ్‌ను సస్పెండ్ చేసి, దానిని ఒక రిజర్వాయర్ కాలమ్‌లోకి ఫీడ్ చేయడం ద్వారా స్టేషనరీ ఫేజ్ సస్పెన్షన్‌ను సిద్ధం చేయండి. మెథనాల్‌ను స్లర్రీ సాల్వెంట్‌గా మరియు కంట్రోల్ సాల్వెంట్‌గా ఉపయోగించారు. 10 నిమిషాల పాటు 100 MP, 15 నిమిషాల పాటు 80 MP, మరియు 30 నిమిషాల పాటు 60 MP అనే పీడన క్రమాన్ని వర్తింపజేయడం ద్వారా కాలమ్‌ను ప్యాక్ చేయండి. ఏకరీతి కాలమ్ ప్యాకింగ్‌ను నిర్ధారించడానికి, ఈ ప్యాకింగ్ ప్రక్రియలో యాంత్రిక కంపనం కోసం రెండు గ్యాస్ క్రోమాటోగ్రఫీ కాలమ్ వైబ్రేటర్‌లను (ఆల్‌టెక్, డీర్‌ఫీల్డ్, IL, USA) ఉపయోగించారు. స్ట్రింగ్‌కు నష్టం జరగకుండా నివారించడానికి స్లర్రీ ప్యాకర్‌ను మూసివేసి, ఒత్తిడిని నెమ్మదిగా విడుదల చేయండి. కాలమ్‌ను స్లర్రీ నాజిల్ నుండి వేరు చేసి, దాని పనితీరును పరీక్షించడానికి ఇన్‌లెట్‌కు మరొక ఫిట్టింగ్‌ను జోడించి LC సిస్టమ్‌కు అనుసంధానించారు.
ఒక LC పంప్ (10AD షిమాడ్జు, జపాన్), 50 nL ఇంజెక్షన్ లూప్‌తో కూడిన ఒక శాంప్లర్ (వాల్కో (USA) C14 W.05), ఒక మెంబ్రేన్ డీగ్యాసర్ (షిమాడ్జు DGU-14A), మరియు ఒక UV-VIS కేశనాళిక విండోను ఉపయోగించి ఒక కస్టమ్ MLC నిర్మించబడింది. డిటెక్టర్ పరికరం (UV-2075) మరియు ఎనామెల్డ్ మైక్రోకాలమ్. అదనపు కాలమ్ వ్యాకోచం ప్రభావాన్ని తగ్గించడానికి చాలా సన్నని మరియు పొట్టి కనెక్టింగ్ ట్యూబ్‌లను ఉపయోగించండి. కాలమ్‌ను నింపిన తర్వాత, 1/16″ రిడ్యూసింగ్ జంక్షన్ యొక్క అవుట్‌లెట్ వద్ద ఒక కేశనాళికను (50 µm id 365) మరియు రిడ్యూసింగ్ జంక్షన్ వద్ద ఒక కేశనాళికను (50 µm) ఇన్‌స్టాల్ చేయండి. మల్టీక్రో 2000 సాఫ్ట్‌వేర్‌ను ఉపయోగించి డేటా సేకరణ మరియు క్రోమాటోగ్రామ్ ప్రాసెసింగ్ నిర్వహించబడతాయి. 254 nm వద్ద, విశ్లేషించబడే పదార్థాల UV శోషణను 0 వద్ద పర్యవేక్షించారు. క్రోమాటోగ్రాఫిక్ డేటాను ఆరిజిన్‌ప్రో8 (నార్తాంప్టన్, MA) ఉపయోగించి విశ్లేషించారు.
హ్యూమన్ సీరం ఆల్బుమిన్, లైయోఫిలైజ్డ్ పౌడర్, ≥ 96% (అగరోస్ జెల్ ఎలక్ట్రోఫోరెసిస్) 3 mg ను ట్రిప్సిన్ (1.5 mg), 4.0 M యూరియా (1 ml) మరియు 0.2 M అమ్మోనియం బైకార్బోనేట్ (1 ml) తో కలిపారు. ఈ ద్రావణాన్ని 10 నిమిషాల పాటు కలిపి, 37°C వద్ద వాటర్ బాత్‌లో 6 గంటల పాటు ఉంచారు, ఆ తర్వాత 1 ml 0.1% TFA తో చర్యను ఆపారు. ద్రావణాన్ని వడపోసి, 4°C కంటే తక్కువ ఉష్ణోగ్రతలో నిల్వ చేయండి.
PMP కాలమ్‌పై పెప్టైడ్‌లు మరియు ట్రిప్టిక్ డైజెస్ట్ HSA మిశ్రమం యొక్క విభజనను విడిగా మూల్యాంకనం చేశారు. PMP కాలమ్ ద్వారా వేరు చేయబడిన పెప్టైడ్‌లు మరియు HSA మిశ్రమం యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైసిస్‌ను తనిఖీ చేయండి మరియు ఫలితాలను అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో పోల్చండి. సైద్ధాంతిక ప్లేట్ల సంఖ్యను కింది సమీకరణాన్ని ఉపయోగించి లెక్కిస్తారు:
శుద్ధ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్ బంధిత సిలికా కణాల SEM చిత్రాలు పటం 2లో చూపబడ్డాయి. శుద్ధ సిలికా కణాల (A, B) SEM చిత్రాలు గోళాకార రూపాన్ని చూపుతున్నాయి, దీనిలో కణాలు మా మునుపటి అధ్యయనాలతో పోలిస్తే పొడవుగా లేదా క్రమరహిత సౌష్టవాన్ని కలిగి ఉన్నాయి. లిగాండ్‌తో బంధించబడిన సిలికా కణాల (C, D) ఉపరితలం శుద్ధ సిలికా కణాల కంటే నునుపుగా ఉంది, దీనికి కారణం సిలికా కణాల ఉపరితలాన్ని కప్పి ఉంచే పాలీస్టైరిన్ గొలుసులు కావచ్చు.
స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాల (A, B) మరియు లిగాండ్ బంధిత సిలికా కణాల (C, D) స్కానింగ్ ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోగ్రాఫ్‌లు.
శుద్ధ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల కణ పరిమాణ పంపిణీని పటం 2. 3(A)లో చూపించారు. ఘనపరిమాణ కణ పరిమాణ పంపిణీ వక్రాలు రసాయన మార్పు తర్వాత సిలికా కణ పరిమాణం పెరిగిందని చూపించాయి (పటం 3A). ప్రస్తుత అధ్యయనం మరియు మునుపటి అధ్యయనం నుండి వచ్చిన సిలికా కణ పరిమాణ పంపిణీ డేటాను పట్టిక 1(A)లో పోల్చారు. PMP యొక్క ఘనపరిమాణ కణ పరిమాణం d(0.5) 3.36 µmగా ఉంది, దీనిని మా మునుపటి అధ్యయనంలోని (పాలీస్టైరీన్ బంధిత సిలికా కణాలు)34 ad(0.5) విలువ 3.05 µmతో పోల్చారు. చర్య మిశ్రమంలో PEG, యూరియా, TMOS మరియు ఎసిటిక్ ఆమ్లం నిష్పత్తిలో మార్పు కారణంగా, మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే ఈ బ్యాచ్ యొక్క కణ పరిమాణ పంపిణీ ఇరుకైనదిగా ఉంది. PMP దశ యొక్క కణ పరిమాణం, మేము ఇంతకు ముందు అధ్యయనం చేసిన పాలీస్టైరీన్ బంధిత సిలికా కణ దశ కంటే కొద్దిగా పెద్దదిగా ఉంది. దీని అర్థం ఏమిటంటే, స్టైరీన్‌తో సిలికా కణాల ఉపరితల ఫంక్షనలైజేషన్ సిలికా ఉపరితలంపై కేవలం పాలీస్టైరీన్ పొరను (0.97 µm) మాత్రమే నిక్షేపించింది, అయితే PMP దశలో పొర మందం 1.38 µmగా ఉంది.
శుద్ధ సిలికా కణాల మరియు లిగాండ్ బంధిత సిలికా కణాల కణ పరిమాణ పంపిణీ (A) మరియు రంధ్ర పరిమాణ పంపిణీ (B).
ఈ అధ్యయనంలో ఉపయోగించిన సిలికా కణాల రంధ్ర పరిమాణం, రంధ్ర ఘనపరిమాణం మరియు ఉపరితల వైశాల్యం పట్టిక 1 (B)లో చూపబడ్డాయి. స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల PSD ప్రొఫైల్‌లు చిత్రాలు 3(B)లో చూపబడ్డాయి. ఫలితాలు మా మునుపటి అధ్యయనం34తో పోల్చదగినవిగా ఉన్నాయి. స్వచ్ఛమైన మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల రంధ్ర పరిమాణాలు వరుసగా 310 Å మరియు 241 Åగా ఉన్నాయి, ఇది రసాయన మార్పు తర్వాత రంధ్ర పరిమాణం 69 Å తగ్గిందని సూచిస్తుంది, ఇది పట్టిక 1 (B)లో చూపబడింది మరియు షిఫ్ట్ కర్వ్ చిత్రంలో చూపబడింది. ప్రస్తుత అధ్యయనంలో సిలికా కణాల నిర్దిష్ట ఉపరితల వైశాల్యం 116 m2/g, ఇది మా మునుపటి అధ్యయనం (124 m2/g)తో పోల్చదగినది. పట్టిక 1(B)లో చూపిన విధంగా, రసాయన మార్పు తర్వాత సిలికా కణాల ఉపరితల వైశాల్యం (m2/g) కూడా 116 m2/g నుండి 105 m2/gకి తగ్గింది.
స్థిర దశ యొక్క మూలక విశ్లేషణ ఫలితాలు పట్టిక 2లో ఇవ్వబడ్డాయి. ప్రస్తుత స్థిర దశలో కార్బన్ శాతం 6.35%, ఇది మా మునుపటి అధ్యయనంలో (పాలిస్టైరీన్‌తో అనుబంధించబడిన సిలికా కణాలు, వరుసగా 7.93%35 మరియు 10.21%) 42 కంటే తక్కువ. SP తయారీలో స్టైరీన్‌తో పాటు ఫినైల్‌మేలిమైడ్ మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనెట్ (PCMP) మరియు 4-హైడ్రాక్సీ-టెంపో వంటి కొన్ని ధ్రువ లిగాండ్‌లను ఉపయోగించినందున, ప్రస్తుత స్థిర దశలో కార్బన్ శాతం తక్కువగా ఉంది. ప్రస్తుత స్థిర దశలో నత్రజని బరువు శాతం 2.21% కాగా, మునుపటి అధ్యయనాలలో ఇది 0.1735 మరియు 0.85%42గా ఉంది. దీని అర్థం, ఫినైల్‌మేలిమైడ్ కారణంగా ప్రస్తుత స్థిర దశలో నత్రజని బరువు శాతం ఎక్కువగా ఉంది. అదేవిధంగా, ఉత్పత్తులు (4) మరియు (5) వరుసగా 2.7% మరియు 2.9% కార్బన్ కంటెంట్‌ను కలిగి ఉన్నాయి, అయితే తుది ఉత్పత్తి (6) 6.35% కార్బన్ కంటెంట్‌ను కలిగి ఉంది, ఇది పట్టిక 2లో చూపబడింది. బరువు నష్టాన్ని పరీక్షించడానికి PMP యొక్క స్థిర దశపై థర్మోగ్రావిమెట్రిక్ విశ్లేషణ (TGA) ఉపయోగించబడింది మరియు TGA వక్రరేఖ చిత్రం 4లో చూపబడింది. TGA వక్రరేఖ 8.6% బరువు నష్టాన్ని చూపిస్తుంది, ఇది కార్బన్ కంటెంట్ (6.35%)తో బాగా సరిపోలుతుంది, ఎందుకంటే లిగాండ్‌లు C మాత్రమే కాకుండా N, O మరియు H లను కూడా కలిగి ఉంటాయి.
సిలికా కణాల ఉపరితలాన్ని సవరించడానికి, ఫినైల్‌మాలిమైడ్-మిథైల్‌వినైల్ ఐసోసయనేట్ అనే లిగాండ్‌ను ఎంచుకున్నారు, ఎందుకంటే దీనికి ధ్రువ స్వభావం గల ఫినైల్‌మాలిమైడ్ మరియు వినైల్ ఐసోసయనేట్ సమూహాలు ఉన్నాయి. వినైల్ ఐసోసయనేట్ సమూహాలు లివింగ్ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్ ద్వారా స్టైరీన్‌తో మరింతగా చర్య జరపగలవు. రెండవ కారణం, విశ్లేష్యంతో మితమైన పరస్పర చర్యలు జరిపే ఒక సమూహాన్ని చేర్చడం, మరియు విశ్లేష్యానికి, స్థిర దశకు మధ్య బలమైన స్థిర విద్యుత్ పరస్పర చర్యలు లేకుండా చేయడం. ఎందుకంటే సాధారణ pH వద్ద ఫినైల్‌మాలిమైడ్ భాగానికి వర్చువల్ చార్జ్ ఉండదు. స్థిర దశ యొక్క ధ్రువణతను, స్టైరీన్ యొక్క సరైన పరిమాణం మరియు ఫ్రీ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్ యొక్క చర్య సమయం ద్వారా నియంత్రించవచ్చు. చర్య యొక్క చివరి దశ (ఫ్రీ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్) చాలా కీలకమైనది, ఎందుకంటే ఇది స్థిర దశ యొక్క ధ్రువణతను మారుస్తుంది. ఈ స్థిర దశలలోని కార్బన్ పరిమాణాన్ని తనిఖీ చేయడానికి మూలక విశ్లేషణ నిర్వహించబడింది. స్టైరీన్ పరిమాణాన్ని మరియు చర్య సమయాన్ని పెంచినప్పుడు స్థిర దశలోని కార్బన్ పరిమాణం పెరుగుతుందని, మరియు దీనికి విరుద్ధంగా జరుగుతుందని గమనించబడింది. వివిధ స్టైరీన్ గాఢతలతో తయారు చేయబడిన SPలు వేర్వేరు కార్బన్ పరిమాణాలను కలిగి ఉంటాయి. అదేవిధంగా, ఈ స్థిర దశలను స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్‌లపై ఉంచి, వాటి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ లక్షణాలను (ఎంపిక సామర్థ్యం, ​​రిజల్యూషన్, N విలువ మొదలైనవి) తనిఖీ చేశారు. ఈ ప్రయోగాల ఆధారంగా, నియంత్రిత ధ్రువణతను మరియు విశ్లేష్యకం యొక్క మంచి నిలుపుదలను అందించడానికి, PMP స్థిర దశ తయారీ కోసం ఒక ఆప్టిమైజ్డ్ కూర్పును ఎంచుకున్నారు.
మొబైల్ ఫేజ్ సామర్థ్యాన్ని ఉపయోగించి ఐదు పెప్టైడ్ మిశ్రమాల (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఐల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్-ఎన్‌కెఫాలిన్) విశ్లేషణ కోసం PMP కాలమ్‌ను కూడా మూల్యాంకనం చేశారు. 60/40 (v/v) ACN/నీరు (0.1% TFA) ను 80 µl/min ప్రవాహ రేటు వద్ద ఉపయోగించారు. సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో (200,000 ప్లేట్లు/మీ), ప్రతి కాలమ్‌కు (100 × 1.8 మిమీ) సిద్ధాంతపరమైన ప్లేట్ల సంఖ్య (N) 20,000 ± 100. మూడు PMP కాలమ్‌ల కోసం N విలువలు పట్టిక 3లో చూపబడ్డాయి మరియు క్రోమాటోగ్రామ్‌లు చిత్రం 5Aలో చూపబడ్డాయి. PMP కాలమ్‌పై అధిక ప్రవాహ రేటు (700 µl/min) వద్ద వేగవంతమైన విశ్లేషణలో, ఐదు పెప్టైడ్‌లు ఒక నిమిషంలోనే ఎల్యూట్ అయ్యాయి, ప్రతి కాలమ్‌కు (100 x 1.8 mm వ్యాసం) 13,500 ± 330 అద్భుతమైన N విలువ లభించింది, ఇది 135,000 ప్లేట్స్/మీ²కు సమానం (పటం 5B). పునరుత్పత్తిని పరీక్షించడానికి, ఒకే పరిమాణంలో (లోపలి వ్యాసం 100 x 1.8 mm) ఉన్న మూడు కాలమ్‌లను, PMP స్టేషనరీ ఫేజ్ యొక్క మూడు వేర్వేరు బ్యాచ్‌లతో నింపారు. సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులు, సిద్ధాంతపరమైన ప్లేట్ల సంఖ్య N, మరియు రిటెన్షన్ సమయాన్ని ఉపయోగించి, ప్రతి కాలమ్‌పై ఒకే పరీక్ష మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడం ద్వారా ప్రతి కాలమ్‌కు సంబంధించిన ఎనలైట్‌లను నమోదు చేశారు. PMP కాలమ్‌ల పునరుత్పత్తి డేటా పట్టిక 4లో చూపబడింది. పట్టిక 3లో చూపిన విధంగా, PMP కాలమ్ యొక్క పునరుత్పత్తి చాలా తక్కువ %RSD విలువలతో బాగా సహసంబంధం కలిగి ఉంది.
PMP కాలమ్ (B) మరియు అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ (A) పై పెప్టైడ్ మిశ్రమాల విభజన, మొబైల్ ఫేజ్ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP కాలమ్ కొలతలు (100 x 1.8 mm id), విశ్లేషణ సమ్మేళనాల ఎల్యూషన్ క్రమం: 1 (గ్లై-టైర్), 2 (గ్లై-ల్యూ-టైర్), 3 (గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్), 4 (టైర్-ఐల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్) మరియు 5 (ల్యూసిక్ యాసిడ్ ఎన్‌కెఫాలిన్).
HPLC ద్వారా హ్యూమన్ సీరం ఆల్బుమిన్ యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైజేట్‌ను వేరు చేయడానికి ఒక PMP కాలమ్ (లోపలి వ్యాసం 100 x 1.8 మిమీ) మూల్యాంకనం చేయబడింది. పటం 6లోని క్రోమాటోగ్రామ్, నమూనాలు చాలా మంచి రిజల్యూషన్‌తో చక్కగా వేరు చేయబడ్డాయని చూపిస్తుంది. HSA ద్రావణాలను 100 μl/min ప్రవాహ రేటు, 70/30 ఎసిటోనైట్రిల్/నీరు మరియు 0.1% TFA కలిగిన మొబైల్ ఫేజ్‌ను ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. క్రోమాటోగ్రామ్ (పటం 6)లో చూపిన విధంగా, HSA యొక్క విచ్ఛేదనం 17 పెప్టైడ్‌లకు అనుగుణంగా 17 శిఖరాలుగా విభజించబడింది. HSA హైడ్రోలైజేట్ నుండి ప్రతి శిఖరం యొక్క వేరుచేసే సామర్థ్యాలు లెక్కించబడ్డాయి మరియు ఆ విలువలు పట్టిక 5లో చూపబడ్డాయి.
HSA ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైసేట్‌లను PMP కాలమ్ (లోపలి వ్యాసం 100 x 1.8 మిమీ), ప్రవాహ రేటు (100 μl/min), మొబైల్ ఫేజ్ 60/40 ఎసిటోనైట్రిల్/నీరు, మరియు 0.1% TFA ఉపయోగించి వేరు చేశారు.
ఇక్కడ L అనేది కాలమ్ పొడవు, η అనేది మొబైల్ ఫేజ్ యొక్క స్నిగ్ధత, ΔP అనేది కాలమ్ యొక్క బ్యాక్ ప్రెజర్, మరియు u అనేది మొబైల్ ఫేజ్ యొక్క రేఖీయ వేగం. PMP కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత 2.5 × 10–14 m2, ప్రవాహ రేటు 25 µl/min, 60/40 v/v ఉపయోగించబడింది. ACN/నీరు. PMP కాలమ్ (ID 100 × 1.8 mm) యొక్క పారగమ్యత మా మునుపటి Ref.34 అధ్యయనంలో ఉన్నదానితో సమానంగా ఉంది. ఉపరితలంపై రంధ్రాలు గల కణాలతో నింపబడిన కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత 1.7×10 .6 µm, 5 µm కణాలకు 2.5×10-14 m243. అందువల్ల, PMP ఫేజ్ యొక్క పారగమ్యత 5 μm పరిమాణం గల కోర్-షెల్ కణాల పారగమ్యతతో సమానంగా ఉంటుంది.
ఇక్కడ Wx అనేది క్లోరోఫామ్‌తో నింపిన కాలమ్ యొక్క ద్రవ్యరాశి, Wy అనేది మెథనాల్‌తో నింపిన కాలమ్ యొక్క ద్రవ్యరాశి, మరియు ρ అనేది ద్రావణి యొక్క సాంద్రత. మెథనాల్ (ρ = 0.7866) మరియు క్లోరోఫామ్ (ρ = 1.484) యొక్క సాంద్రత. సిలికా-C18 పార్టికల్ కాలమ్ (100 × 1.8 మిమీ ID)34 మరియు మేము గతంలో అధ్యయనం చేసిన C18-యూరియా31 కాలమ్ యొక్క మొత్తం పోరోసిటీ వరుసగా 0.63 మరియు 0.55గా ఉంది. దీని అర్థం యూరియా లిగాండ్‌ల ఉనికి స్థిర దశ యొక్క పారగమ్యతను తగ్గిస్తుంది. మరోవైపు, PMP కాలమ్ (లోపలి వ్యాసం 100 × 1.8 మిమీ) యొక్క మొత్తం పోరోసిటీ 0.60గా ఉంది. C18 బంధిత సిలికా కణాలతో నింపబడిన కాలమ్‌ల కంటే PMP కాలమ్‌లు తక్కువ పారగమ్యతను కలిగి ఉంటాయి, ఎందుకంటే C18 రకం స్థిర దశలలో C18 లిగాండ్‌లు సిలికా కణాలకు సరళ గొలుసులలో జతచేయబడి ఉంటాయి, అయితే పాలీస్టైరిన్ రకం స్థిర దశలలో కణాల చుట్టూ సాపేక్షంగా మందపాటి పాలిమర్ పొర A ఏర్పడుతుంది. ఒక సాధారణ ప్రయోగంలో, కాలమ్ పోరోసిటీని ఈ క్రింది విధంగా లెక్కిస్తారు:
పటం 7A, B లలో, ఒకే రకమైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో (60/40 ACN/H2O మరియు 0.1% TFA, రెండు కాలమ్‌లపై నిమిషానికి 20 µl నుండి 800 µl/min వరకు) ఒక PMP కాలమ్ (id 100 x 1.8 mm) మరియు ఒక అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ (id 100 x 1.8 mm) కొరకు వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్‌లు చూపబడ్డాయి. సరైన ప్రవాహ రేటు (80 µl/min) వద్ద కనిష్ట HETP విలువలు PMP కాలమ్‌కు 2.6 µm మరియు అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌కు 3.9 µm గా ఉన్నాయి. HETP విలువలు PMP కాలమ్ (100 x 1.8 mm id) యొక్క విభజన సామర్థ్యం వాణిజ్యపరంగా లభించే అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ (100 x 1.8 mm id) కంటే చాలా ఎక్కువగా ఉందని చూపిస్తున్నాయి. Fig. 7(A)లోని వాన్ డీమ్టర్ గ్రాఫ్ మన మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే ప్రవాహం పెరిగేకొద్దీ N విలువలో తగ్గుదల గణనీయంగా ఎక్కువగా లేదని చూపిస్తుంది. అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో పోలిస్తే PMP కాలమ్ (id 100 × 1.8 mm) యొక్క అధిక విభజన సామర్థ్యం, ​​ప్రస్తుత పనిలో ఉపయోగించిన మెరుగైన కణ ఆకారం మరియు పరిమాణం మరియు అధునాతన కాలమ్ ప్యాకింగ్ విధానంపై ఆధారపడి ఉంటుంది34.
(A) 0.1% TFA తో 60/40 ACN/H2O లో PMP కాలమ్ (id 100 x 1.8 mm) పై పొందిన వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్ (HETP వర్సెస్ మొబైల్ ఫేజ్ లీనియర్ వెలాసిటీ). (B) 0.1% TFA తో 60/40 ACN/H2O లో అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ (id 100 x 1.8 mm) పై పొందిన వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్ (HETP వర్సెస్ మొబైల్ ఫేజ్ లీనియర్ వెలాసిటీ).
హై పర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో సింథటిక్ పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాన్ని మరియు హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HSA) యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైజేట్‌ను వేరు చేయడానికి, ఇంటర్‌కలేటెడ్ పాలీస్టైరిన్‌తో కూడిన ఒక పోలార్ స్టేషనరీ ఫేజ్‌ను తయారు చేసి, మూల్యాంకనం చేయడం జరిగింది. పెప్టైడ్ మిశ్రమాల కోసం PMP కాలమ్‌ల క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పనితీరు, వేరుచేసే సామర్థ్యం మరియు రిజల్యూషన్ పరంగా అద్భుతంగా ఉంది. PMP కాలమ్‌ల మెరుగైన వేరుచేసే సామర్థ్యానికి సిలికా కణ పరిమాణం మరియు రంధ్రాల పరిమాణం, స్టేషనరీ ఫేజ్‌ల నియంత్రిత సంశ్లేషణ, మరియు సంక్లిష్టమైన కాలమ్ ప్యాకింగ్ మెటీరియల్స్ వంటి అనేక కారణాలు ఉన్నాయి. అధిక వేరుచేసే సామర్థ్యంతో పాటు, అధిక ఫ్లో రేట్ల వద్ద తక్కువ కాలమ్ బ్యాక్ ప్రెజర్ ఉండటం ఈ స్టేషనరీ ఫేజ్ యొక్క మరొక ప్రయోజనం. PMP కాలమ్‌లు అధిక పునరుత్పత్తి సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉంటాయి మరియు పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాలను, అలాగే వివిధ ప్రోటీన్‌ల ట్రిప్టిక్ డైజెషన్‌ను విశ్లేషించడానికి ఉపయోగించవచ్చు. లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో సహజ ఉత్పత్తులు, ఔషధ మొక్కల సారాలు మరియు పుట్టగొడుగుల నుండి బయోయాక్టివ్ సమ్మేళనాలను వేరు చేయడానికి ఈ కాలమ్‌ను ఉపయోగించాలని మేము భావిస్తున్నాము. భవిష్యత్తులో, ప్రోటీన్‌లు మరియు మోనోక్లోనల్ యాంటీబాడీలను వేరు చేయడానికి కూడా PMP కాలమ్‌లను మూల్యాంకనం చేయడం జరుగుతుంది.
ఫీల్డ్, జె.కె., యూర్‌బై, ఎం.ఆర్., లా, జె., థోగర్సెన్, హెచ్. & పీటర్సన్, పి. రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పెప్టైడ్ విభజన వ్యవస్థలపై పరిశోధన భాగం I: కాలమ్ లక్షణీకరణ కోసం ఒక ప్రోటోకాల్ అభివృద్ధి. ఫీల్డ్, జె.కె., యూర్‌బై, ఎం.ఆర్., లా, జె., థోగర్సెన్, హెచ్. & పీటర్సన్, పి. రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పెప్టైడ్ విభజన వ్యవస్థలపై పరిశోధన భాగం I: కాలమ్ లక్షణీకరణ కోసం ఒక ప్రోటోకాల్ అభివృద్ధి.ఫీల్డ్, జె.కె., ఓవర్‌బై, ఎం.ఆర్., లా, జె., టోగర్సెన్, హెచ్., మరియు పీటర్సన్, పి. రివర్స్-ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా పెప్టైడ్ విభజన వ్యవస్థల పరిశోధన, భాగం I: కాలమ్ లక్షణీకరణ కోసం ఒక ప్రోటోకాల్‌ను అభివృద్ధి చేయడం. ఫీల్డ్, జె.కె., యూర్‌బై, ఎం.ఆర్., లా, జె., థోగర్సెన్, హెచ్. & పీటర్సన్, పి. రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పెప్టైడ్ విభజన వ్యవస్థలపై పరిశోధన భాగం I: కాలమ్ లక్షణాల కోసం ఒక ప్రోటోకాల్ అభివృద్ధి. ఫీల్డ్, జె.కె., యూర్‌బై, ఎం.ఆర్., లా, జె., థోగర్సెన్, హెచ్. & పీటర్సన్, పి. రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పెప్టైడ్ విభజన వ్యవస్థలపై పరిశోధన భాగం I: కాలమ్ లక్షణాల కోసం ఒక ప్రోటోకాల్ అభివృద్ధి.ఫీల్డ్, జె.కె., ఓవర్‌బై, ఎం.ఆర్., లా, జె., టోగర్సెన్, హెచ్., మరియు పీటర్సన్, పి. రివర్స్-ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా పెప్టైడ్ విభజన వ్యవస్థల పరిశోధన, భాగం I: కాలమ్ లక్షణీకరణ కోసం ఒక ప్రోటోకాల్‌ను అభివృద్ధి చేయడం.J.色谱法。 1603,113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
గోమెజ్, బి. మరియు ఇతరులు. అంటు వ్యాధుల చికిత్స కోసం మెరుగైన క్రియాశీల పెప్టైడ్‌లను సృష్టించే పద్ధతులు. బయోటెక్నాలజీ. అచీవ్‌మెంట్స్ 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
వ్లీఘే, పి., లిసోవ్స్కీ, వి., మార్టినెజ్, జె. & ఖ్రెస్ట్‌చాటిస్కీ, ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్‌లు: సైన్స్ మరియు మార్కెట్. వ్లీఘే, పి., లిసోవ్స్కీ, వి., మార్టినెజ్, జె. & ఖ్రెస్ట్‌చాటిస్కీ, ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్‌లు: సైన్స్ మరియు మార్కెట్.వ్లీజ్ పి, లిసోవ్స్కీ వి, మార్టినెజ్ జె మరియు క్రెస్చాటిస్కీ ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్లు: సైన్స్ మరియు మార్కెట్.వ్లీజ్ పి, లిసోవ్స్కీ వి, మార్టినెజ్ జె మరియు ఖ్రెషాట్స్కీ ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్స్: సైన్స్ మరియు మార్కెట్. డ్రగ్ డిస్కవరీ. టుడే 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
క్సీ, ఎఫ్., స్మిత్, ఆర్.డి. & షెన్, వై. అధునాతన ప్రోటీయోమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ. క్సీ, ఎఫ్., స్మిత్, ఆర్.డి. & షెన్, వై. అధునాతన ప్రోటీయోమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ.F., స్మిత్ RD మరియు షెన్ యు చూడండి. అధునాతన ప్రోటీయోమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ. Xie, F., స్మిత్, RD & షెన్, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., స్మిత్, RD & షెన్, Y. అధునాతన ప్రోటీన్ కూర్పు 液相色谱。F., స్మిత్ RD మరియు షెన్ యు చూడండి. అధునాతన ప్రోటీయోమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ. ఎ 1261, 78–90 (2012).
లియు, W. మరియు ఇతరులు. అధునాతన లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ విస్తృత-ఆధారిత మెటాబోలోమిక్స్ మరియు ప్రోటీయోమిక్స్‌ను కలపగలదు. అనస్. చిమ్. ఆక్టా 1069, 89–97 (2019).
చెస్నట్, SM & సాలిస్‌బరీ, JJ ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర. చెస్నట్, SM & సాలిస్‌బరీ, JJ ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర.చెస్నట్, SM మరియు సాలిస్‌బరీ, JJ ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర.చెస్నట్, SM మరియు సాలిస్‌బరీ, JJ ఔషధ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర. J. సెప్ట్ సైన్స్. 30(8), 1183–1190 (2007).
వు, ఎన్. & క్లాసెన్, ఎ.ఎం. వేగవంతమైన విభజనల కోసం అల్ట్రాహై ప్రెజర్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు. వు, ఎన్. & క్లాసెన్, ఎ.ఎం. వేగవంతమైన విభజనల కోసం అల్ట్రాహై ప్రెజర్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు.వు, ఎన్. మరియు క్లాసెన్, ఎ.ఎం. వేగవంతమైన విభజన కోసం అధిక పీడన ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు. వు, N. & క్లాసెన్, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 వు, ఎన్. & క్లాసెన్, ఎ.ఎం. వేగవంతమైన విభజన కోసం అల్ట్రా-హై ప్రెజర్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు.వు, ఎన్. మరియు క్లాసెన్, ఎ.ఎం. వేగవంతమైన విభజన కోసం అధిక పీడన ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు.జె. సెప్ట్. సైన్స్. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
రెన్, SA & చెలిచెఫ్, P. ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో అల్ట్రా-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ వాడకం. రెన్, SA & చెలిచెఫ్, P. ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో అల్ట్రా-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ వాడకం.రెన్, SA మరియు చెలిషెఫ్, P. ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో అల్ట్రా హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ వినియోగం. రెన్, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 రెన్, SA & చెలిట్చెఫ్, P.రెన్, SA మరియు చెలిషెఫ్, P. ఔషధ అభివృద్ధిలో అల్ట్రా-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క అనువర్తనం.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
గు, హెచ్. మరియు ఇతరులు. ఎంటెరోవైరస్ 71 యొక్క సమర్థవంతమైన శుద్ధీకరణ కోసం అధిక అంతర్గత దశతో ఆయిల్-ఇన్-వాటర్ ఎమల్షన్ నుండి ఉద్భవించిన ఒక మోనోలిథిక్ మాక్రోపోరస్ హైడ్రోజెల్. కెమికల్. ప్రాజెక్ట్. జర్నల్ 401, 126051 (2020).
షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వాత్, సి. & విల్కిన్స్, జె.ఎ. ప్రోటీయోమిక్స్‌లో లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర. షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వాత్, సి. & విల్కిన్స్, జె.ఎ. ప్రోటీయోమిక్స్‌లో లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర.షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వాత్, సి. మరియు విల్కిన్స్, జె.ఎ. ప్రోటీయోమిక్స్‌లో లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర. షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వత్, సి. & విల్కిన్స్, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 షి, Y., జియాంగ్, R., హోర్వాత్, C. & విల్కిన్స్, JAషి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వాత్, సి. మరియు విల్కిన్స్, జె.ఎ. ప్రోటీయోమిక్స్‌లో లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ. ఎ 1053 (1-2), 27-36 (2004).
ఫెకెటే, ఎస్., వుటే, జె.-ఎల్. & గిల్లార్మ్, డి. చికిత్సా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల రివర్స్డ్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రాఫిక్ విభజనలలో కొత్త పోకడలు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు. & గిల్లార్మ్, డి. చికిత్సా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల రివర్స్డ్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రాఫిక్ విభజనలలో కొత్త పోకడలు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు. & గిల్లర్మే, D. నోవి టెండెనిక్స్ మరియు ర్యాజ్‌డెలెనీ టెరాపెవ్టిచెస్కిహ్ పెప్టిడోవ్ మరియు బెల్కోవ్ స్ పోమోషింగ్ జిడ్కోస్ట్నో ఒబ్రాషెన్నోయ్ ఫాజోయ్: థెయోరియా మరియు приложения. & గిల్లార్మ్, డి. రివర్స్ ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా చికిత్సా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విభజనలో కొత్త పోకడలు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & గిల్లార్మ్, డి.మరియు గిల్లార్మే, డి. రివర్స్ ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా చికిత్సా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విభజనలో కొత్త పోకడలు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు.జె. ఫార్మ్. బయోమెడికల్ సైన్స్. అనస్. 69, 9–27 (2012).
గిలార్, ఎం., ఒలివోవా, పి., డాలీ, ఏఈ & గెబ్లర్, జేసీ మొదటి మరియు రెండవ విభజన డైమెన్షన్‌లలో వేర్వేరు pH లతో RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల ద్విమితీయ విభజన. గిలార్, ఎం., ఒలివోవా, పి., డాలీ, ఏఈ & గెబ్లర్, జేసీ మొదటి మరియు రెండవ విభజన డైమెన్షన్‌లలో వేర్వేరు pH లతో RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల ద్విమితీయ విభజన.గిలార్ ఎం., ఒలివోవా పి., డాలీ ఏఈ మరియు గెబ్లర్ జేకే మొదటి మరియు రెండవ విభజన డైమెన్షన్‌లలో వేర్వేరు pH లతో RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల ద్విమితీయ విభజన.గిలార్ M., ఒలివోవా P., డాలీ AE మరియు గెబ్లర్ JK RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి మొదటి మరియు రెండవ విభజన కొలతలలో విభిన్న pH విలువలను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల ద్విమితీయ విభజన. J. సెప్ట్ సైన్స్. 28 (14), 1694–1703 (2005).
ఫెల్లిట్టి, ఎస్. మరియు ఇతరులు. 2 µm కంటే చిన్నవైన పూర్తిగా రంధ్రాలు గల మరియు ఉపరితలంపై రంధ్రాలు గల C18 కణాలతో నింపబడిన హై-పెర్ఫార్మెన్స్ క్రోమాటోగ్రఫీ కాలమ్‌ల యొక్క ద్రవ్య బదిలీ మరియు గతిశాస్త్ర లక్షణాల పరిశోధన. జె. సెప్ట్ సైన్స్. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
పియోవెసానా, ఎస్. మరియు ఇతరులు. మొక్కల జీవక్రియాశీల పెప్టైడ్‌ల ఐసోలేషన్, ఐడెంటిఫికేషన్ మరియు వాలిడేషన్‌లో ఇటీవలి పోకడలు మరియు విశ్లేషణాత్మక సవాళ్లు. క్రియేచర్ అనల్. కెమికల్. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
ముల్లర్, JB మరియు ఇతరులు. జీవరాజ్యం యొక్క ప్రోటీయోమిక్ ల్యాండ్‌స్కేప్. నేచర్ 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
డి లూకా, కె. మరియు ఇతరులు. ప్రిపరేటివ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా చికిత్సా పెప్టైడ్‌ల పోస్ట్-ట్రీట్‌మెంట్. మాలిక్యూల్స్ (బాసెల్, స్విట్జర్లాండ్) 26(15), 4688 (2021).
యాంగ్, వై. & గెంగ్, ఎక్స్. మిక్స్‌డ్-మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు బయోపాలిమర్‌లకు దాని అనువర్తనాలు. యాంగ్, వై. & గెంగ్, ఎక్స్. మిక్స్‌డ్-మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు బయోపాలిమర్‌లకు దాని అనువర్తనాలు.యాంగ్, యు. మరియు గెంగ్, ఎక్స్. మిశ్రమ మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు బయోపాలిమర్లకు దాని అనువర్తనం. యాంగ్, Y. & గెంగ్, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 యాంగ్, వై. & గెంగ్, ఎక్స్. మిశ్రమ మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు బయోపాలిమర్లలో దాని అనువర్తనం.యాంగ్, యు. మరియు జీన్, ఎక్స్. మిశ్రమ మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు బయోపాలిమర్లకు దాని అనువర్తనం.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ. ఎ 1218(49), 8813–8825 (2011).