Misaotra anao nitsidika ny Nature.com. Mampiasa dikan-tranonkala misy fanohanana CSS voafetra ianao. Ho an'ny traikefa tsara indrindra, manoro hevitra anao izahay hampiasa navigateur nohavaozina (na hanafoana ny Compatibility Mode ao amin'ny Internet Explorer). Ho fanampin'izany, mba hahazoana antoka fa mitohy ny fanohanana, dia asehonay ny tranonkala tsy misy styles sy JavaScript.
Mampiseho andian-tsary misy sary telo indray miaraka. Ampiasao ny bokotra "Previous" sy "Next" mba hifindrana amin'ny sary telo indray mandeha, na ampiasao ny bokotra "slider" eo amin'ny farany mba hifindrana amin'ny sary telo indray mandeha.
Nomanina tamin'ny fomba sol-gel ireo poti-silica misy lavaka misy lavaka miaraka amin'ny fanovana sasany mba hahazoana poti-javatra misy lavaka mivelatra. Ireo poti-javatra ireo dia nohavaozina tamin'ny N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) sy styrene tamin'ny alàlan'ny polymerization reverse chain transfer-fragmentation (RAFT) mba hamokarana polyamides intercalated N-phenylmaleimide. Ny dingana tsy mihetsika Styrene (PMP). Ireo tsanganana vy tsy misy harafesina tery (100 × 1.8 mm ny savaivony anatiny) dia nofonosina tamin'ny slurry packing. Nodinihina ny fahombiazan'ny tsanganana PMP tamin'ny chromatography mba hanasarahana ny fifangaroan'ny peptides sentetika misy peptides dimy (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) sy tryptic hydrolyzate an'ny albumin serum olombelona (HAS). Teo ambanin'ny fepetra elution tsara indrindra, ny isan'ny takelaka misy fifangaroan'ny peptides dia nahatratra takelaka 280,000/sq.m. Raha ampitahaina amin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide ara-barotra ny fahombiazan'ny fisarahana amin'ny tsanganana novolavolaina, dia hita fa tsara kokoa noho ny tsanganana ara-barotra ny fahombiazan'ny fisarahana sy ny famahana azy.
Niha-nitombo be ny tsena maneran-tany ho an'ny indostrian'ny biofarmaseutika, ary nitombo be ny tsena tato anatin'ny taona vitsivitsy. Miaraka amin'ny fitomboan'ny indostrian'ny biofarmaseutika1,2,3 dia tena ilaina ny famakafakana peptide sy proteinina. Ankoatra ny peptide kendrena, dia misy loto isan-karazany miforona mandritra ny fananganana peptide, ka ilaina ny fanadiovana chromatografika mba hahazoana ny fahadiovana irina amin'ny peptide. Ny famakafakana sy ny famaritana ny proteinina ao amin'ny tsiranoka, sela ary vatana dia asa sarotra dia sarotra noho ny habetsahan'ny karazana mety ho hita ao anaty santionany tokana. Na dia fitaovana mahomby amin'ny fandaminana ny peptide sy proteinina aza ny spectrometry faobe, raha ampidirina mivantana ao amin'ny spectrometer faobe ireo santionany ireo, dia tsy ho mahafa-po ny fisarahana. Azo vahana amin'ny alàlan'ny fanaovana chromatography ranoka (LC) ity olana ity alohan'ny famakafakana MS, izay hampihena ny habetsaky ny analyte miditra ao amin'ny spectrometer faobe amin'ny fotoana iray4,5,6. Ho fanampin'izany, ny analyte dia afaka mifantoka amin'ny faritra tery mandritra ny fisarahana dingana ranoka, ka mifantoka ireo analyte ireo ary mampitombo ny fahatsapana ny fahitana MS. Nandroso be ny chromatography ranoka (LC) nandritra ny folo taona lasa ary lasa fomba ampiasaina betsaka amin'ny fanadihadiana proteomika7,8,9,10.
Ny chromatography ranoka dingana mivadika (RP-LC) dia ampiasaina betsaka hanadiovana sy hanasarahana ny fifangaroan'ny peptides amin'ny fampiasana silica octadecyl-modified (ODS) ho dingana tsy mihetsika11,12,13. Na izany aza, noho ny rafitra sarotra sy ny toetra amphoterika,14,15 ny dingana tsy mihetsika RP dia tsy afaka manome fisarahana mahafa-po ny peptides sy proteinina. Noho izany, ny famakafakana ny peptides sy proteinina miaraka amin'ny sombin-javatra polar sy tsy polar dia mitaky dingana tsy mihetsika namboarina manokana mba hifandraisana sy hitazonana ireo analytes ireo16. Ny chromatography mifangaro, izay manolotra fifandraisana multimodal, dia mety ho safidy hafa amin'ny RP-LC amin'ny fanasarahana ny peptides, proteinina ary fifangaroana sarotra hafa. Nomanina ny dingana tsy mihetsika karazana mifangaro maromaro ary ny tsanganana feno ireo dingana tsy mihetsika ireo dia nampiasaina hanasarahana ny peptides sy proteinina17,18,19,20,21. Noho ny fisian'ny vondrona polar sy tsy polar, ny dingana tsy mihetsika amin'ny fomba mifangaro (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, intercalation polar/RPLC) dia mety amin'ny fanasarahana peptides sy proteinina22,23,24,25,26,27,28. , ny dingana tsy mihetsika amin'ny fomba polar intercalated miaraka amin'ny vondrona polar mifamatotra covalently dia mampiseho fahaiza-manasaraka tsara sy fifantenana miavaka ho an'ny analytes polar sy tsy polar satria ny fisarahana dia miankina amin'ny fifandraisana misy eo amin'ny analyte sy ny dingana tsy mihetsika. Fifandraisana multimodal 29,30,31,32. Vao haingana, Zhang et al. 30 dia nahazo dingana tsy mihetsika behenyl-terminated an'ny polyamines ary nanasaraka soa aman-tsara ny hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ary analytes hafa. Ny fitaovana tsy mihetsika polar embedded dia manana vondrona polar sy tsy polar, ka azo ampiasaina hanasarahana peptides sy proteinina ho faritra hydrophobic sy hydrophilic. Azo alaina amin'ny anarana ara-barotra hoe tsanganana Ascentis Express RP-Amide ireo tsanganana mifanitsy amin'ny polar (ohatra, tsanganana C18 misy mifanitsy amin'ny amide), saingy ireo tsanganana ireo dia nampiasaina tamin'ny famakafakana ny amine 33 ihany.
Tao amin'ny fanadihadiana ankehitriny, dia nomanina sy nojerena ny dingana tsy mihetsika amin'ny alalan'ny fampidirana pôla (N-phenylmaleimide, polystyrene fampidirana) ho an'ny fisarahana peptide sy ny fizarazarana HSA tryptic. Ity paikady manaraka ity no nampiasaina hanomanana ny dingana tsy mihetsika. Ny poti-silica porous dia nomanina araka ny fomba voalaza tao amin'ny boky navoakanay teo aloha, miaraka amin'ny fanovana sasany amin'ny tetika fanomanana 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Ny tahan'ny urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS ary asidra aqueous-acetic dia nohavaozina mba hahazoana poti-silica manana habe mason-koditra lehibe. Faharoa, ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate vaovao no namboarina ary ny poti-silica derivatized dia nampiasaina hanomanana ny dingana tsy mihetsika amin'ny alalan'ny fampidirana pôla. Ny dingana tsy mihetsika azo dia nofonosina tao anaty tsanganana vy tsy misy harafesina (savaivony anatiny 100 × 1.8 mm) araka ny tetika famonosana nohatsaraina. Ny famonosana ny tsanganana dia ampian'ny hovitrovitra mekanika mba hahazoana sosona mitovy ao anatin'ny tsanganana. Nojerena ny fisarahan'ny fangaro peptide misy peptide dimy (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide), ary tryptic hydrolysates an'ny albumin'ny serum olombelona (HSA). Hita fa nisaraka tsara ny fangaro peptide sy ny HSA tryptic digest. Noharina tamin'ny an'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide ny fahombiazan'ny fisarahan'ny tsanganana PMP. Hita fa tsara ny famahana ny peptide sy ny proteinina ary avo ny fahombiazan'ny fisarahan'ny tsanganana PMP, ary ambony noho ny an'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide ny fahombiazan'ny fisarahan'ny tsanganana PMP.
PEG (polyethylene glycol), urea, asidra asetika, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, albumin'ny serum olombelona (HSA), klôro ammonium, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), klôro methacryloyl (MC), styrene, 4-hydroxy-TEMPO, benzoyl peroxide (BPO), acetonitrile (ACN) ho an'ny HPLC, methanol, 2-propanol ary acetone. Orinasa Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Etazonia).
Nohetsehina nandritra ny 10 minitra ny fangaroan'ny urea (8 g), polyethylene glycol (8 g) ary asidra asetika 0.01 N. 8 ml, ary nampiana TMOS 24 ml tao anatiny tamin'ny alalan'ny fampangatsiahana amin'ny ranomandry. Nafanaina tamin'ny 40°C nandritra ny 6 ora ny fangaro ary avy eo tamin'ny 120°C nandritra ny 8 ora tao anaty autoclave vy tsy misy harafesina. Nararaka ny rano ary nohamainina tamin'ny 70°C nandritra ny 12 ora ny ambiny. Nototoina moramora ireo sakana malefaka maina ary nokapohina tao anaty lafaoro tamin'ny 550°C nandritra ny 12 ora. Nisy andiany telo nomanina sy nohamarinina mba hitsapana ny fahafahan'ny haben'ny poti-javatra mamerina, ny haben'ny mason-koditra ary ny velaran'ny velarany.
Vondrona pôlar sy dingana tsy mihetsika ho an'ny rojo polystyrene. Hazavaina etsy ambany ny fomba fanomanana.
Nolevonina tao anaty toluene tsy misy rano ny N-phenylmaleimide (200 mg) sy ny methyl vinyl isocyanate (100 mg), ary avy eo dia nampiana 0.1 ml ny 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) tao anaty tavoara fanaovana fihetsiketsehana mba hahazoana copolymer an'ny phenylmaleimide sy methyl vinyl isocyanate (PMCP). ) Nafanaina tamin'ny 60°C nandritra ny 3 ora ny fangaro, nosivana ary nohamainina tao anaty lafaoro tamin'ny 40°C nandritra ny 3 ora.
Naparitaka tao anaty toluene maina (100 ml) ireo poti-silica maina (2 g), nafangaro ary nohamainina nandritra ny 10 minitra tao anaty tavoara boribory 500 ml. Ny PMCP (10 mg) dia natsonika tao anaty toluene ary nampiana tsikelikely tao anaty tavoara tamin'ny alalan'ny "funnel" fanampiny. Naverina nafanaina tamin'ny 100°C nandritra ny 8 ora ny fangaro, nosivanaina, nosasana tamin'ny acétone ary nohamainina tamin'ny 60°C nandritra ny 3 ora. Avy eo, ireo poti-silica mifandray amin'ny PMCP (100 g) dia natsonika tao anaty toluene (200 ml), ary nampiana tao anatiny ny 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) teo anatrehan'ny dibutyltin dilaurate 100 μl ho toy ny katalista. Nafangaro tamin'ny 50°C nandritra ny 8 ora ny fangaro, nosivanaina ary nohamainina tamin'ny 50°C nandritra ny 3 ora.
Naparitaka tao anaty toluene ny styrene (1 ml), ny benzoyl peroxide BPO (0.5 ml) ary ny poti-silica mifamatotra amin'ny TEMPO-PMCP (1.5 g) ary nodiovina tamin'ny azota. Natao tamin'ny 100°C nandritra ny 12 ora ny polymerization ny styrene. Nosasana tamin'ny methanol ny vokatra azo ary nohamainina nandritra ny alina tamin'ny 60°C. Aseho amin'ny sary 1 ny tetika ankapobeny amin'ny fihetsiketsehana.
Nesorina tamin'ny 393 K nandritra ny 1 ora ireo santionany mandra-pahazoana tsindry sisa tavela latsaky ny 10–3 Torr. Ny habetsaky ny N2 voatsindrona tamin'ny tsindry mifandraika P/P0 = 0.99 dia nampiasaina mba hamaritana ny haben'ny mason-koditra manontolo. Nodinihina tamin'ny alalan'ny mikroskopia elektrôna scanning (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japon) ny endriky ny poti-silica madio sy mifamatotra amin'ny ligand. Napetraka teo amin'ny tsorakazo aliminioma ny santionany maina (silica madio sy poti-silica mifamatotra amin'ny ligand) tamin'ny fampiasana karbônina. Napetraka teo amin'ny santionany ny volamena tamin'ny alalan'ny fitaovana Q150T sputtering, ary napetraka teo amin'ny santionany ny sosona Au 5 nm matevina. Izany dia manatsara ny fahombiazan'ny dingana ambany voltase ary manome famafazana mangatsiaka tsara. Natao tamin'ny alalan'ny mpandinika ny firafitry ny singa Thermo Electron (Waltham, MA, Etazonia) Flash EA1112 ny fanadihadiana ny singa. Nampiasaina ny mpandinika ny haben'ny poti-javatra Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 mba hahazoana ny fizarana haben'ny poti-javatra. Naparitaka tao anaty isopropanol 5 ml ny poti-silica tsy voarakotra sy ny poti-silica mifamatotra amin'ny ligand (5 mg avy), nojerena nandritra ny 10 minitra, nohozongozonina nandritra ny 5 minitra, ary napetraka teo amin'ny dabilio optika Mastersizer. Ny fanadihadiana thermogravimetric dia atao amin'ny tahan'ny 5 °C isan-minitra amin'ny mari-pana eo anelanelan'ny 30 sy 800 °C.
Andry vy tsy misy harafesina tery misy sosona fibre fitaratra (ID 100 × 1.8 mm) no nofonosina tamin'ny fomba famenoana slurry araka ny fomba voalaza ao amin'ny referansa 31. Ny andry vy tsy misy harafesina (voarakotra fitaratra, ID 100 × 1.8 mm) sy ny fivoahana misy frit 1 µm dia nampifandraisina tamin'ny milina famonosana slurry (Alltech Deerfield, IL, Etazonia). Manomàna fampiatoana ny dingana tsy mihetsika amin'ny alàlan'ny fampiatoana 150 mg ny dingana tsy mihetsika ao anaty methanol 1.2 ml ary ampidirina ao anaty andry fitahirizana. Ny methanol dia nampiasaina ho solvent slurry sy solvent fanaraha-maso. Fonosy ny andry amin'ny alàlan'ny fampiharana tsindry 100 MP mandritra ny 10 minitra, 80 MP mandritra ny 15 minitra, ary 60 MP mandritra ny 30 minitra. Ny dingana famonosana dia nampiasa vibrator tsanganana chromatography entona roa (Alltech, Deerfield, IL, Etazonia) ho an'ny hovitrovitra mekanika mba hahazoana antoka fa fonosana tsanganana mitovy. Akombony ny fonosana slurry ary avoahy miadana ny tsindry mba hisorohana ny fahasimbana amin'ny kofehy. Nesorina tamin'ny fantsona fampidirana slurry ny tsanganana ary nisy fitaovana hafa napetaka tamin'ny fidirana ary nampifandraisina tamin'ny rafitra LC mba hitsapana ny fiasany.
Nisy MLC namboarina manokana natao tamin'ny fampiasana paompy LC (10AD Shimadzu, Japon), santionany misy tadivavarana tsindrona 50 nL (Valco (Etazonia) C14 W.05), mpanala gazy membrane (Shimadzu DGU-14A), ary varavarankely kapila UV-VIS. Fitaovana mpitsikilo (UV-2075) ary tsanganana kely misy enamel. Ampiasao fantsona mampitohy tery sy fohy mba hampihenana ny vokatry ny fanitarana tsanganana fanampiny. Rehefa avy mameno ny tsanganana, dia apetraho eo amin'ny fivoahan'ny fihaonan-dalana mampihena 1/16″ ny kapila (50 µm id 365) ary apetraho eo amin'ny fihaonan-dalana mampihena 1/16″ ny kapila (50 µm). Ny fanangonana angon-drakitra sy ny fanodinana chromatogram dia atao amin'ny fampiasana ny rindrambaiko Multichro 2000. Amin'ny 254 nm, ny fidiran'ny UV amin'ny fanadihadiana natao dia nojerena tamin'ny 0. Ny angon-drakitra chromatography dia nohadihadiana tamin'ny fampiasana ny OriginPro8 (Northampton, MA).
Albuminina avy amin'ny sérum olombelona, ​​vovoka lyophilized, ≥ 96% (electrophoresis gel agarose) 3 mg afangaro amin'ny trypsin (1.5 mg), urea 4.0 M (1 ml) ary bikarbonate ammonium 0.2 M (1 ml). Nohetsehina nandritra ny 10 minitra ny vahaolana ary notehirizina tao anaty rano fandroana tamin'ny 37°C nandritra ny 6 ora, avy eo dia novonoina tamin'ny 1 ml an'ny 0.1% TFA. Tantano ny vahaolana ary tehirizo ambanin'ny 4°C.
Nodinihina misaraka ny fisarahan'ny peptides sy ny tryptic digest HSA amin'ny tsanganana PMP. Jereo ny hydrolysis tryptic an'ny fangaroan'ny peptides sy ny HSA nosarahin'ny tsanganana PMP ary ampitahao amin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide ny valiny. Kajy amin'ny fampiasana ity raikipohy manaraka ity ny isan'ny takelaka teorika:
Aseho amin'ny Sary 2 ny sarin'ny SEM an'ny poti silika madio sy ny poti silika mifamatotra amin'ny ligand. Ny sarin'ny SEM an'ny poti silika madio (A, B) dia mampiseho endrika boribory izay lava na tsy mitovy ny simetria raha oharina amin'ny fanadihadiana nataonay teo aloha. Malemy kokoa noho ny an'ny poti silika madio ny velaran'ny poti silika mifamatotra amin'ny ligand (C, D), izay mety ho vokatry ny rojo polystyrene mandrakotra ny velaran'ny poti silika.
Mikrografy elektrôna scanning an'ny poti silika madio (A, B) sy ny poti silika mifamatotra amin'ny ligand (C, D).
Aseho amin'ny Sary 2.3(A) ny fizarazarana haben'ny poti-javatra amin'ny poti-javatra silika madio sy ny poti-javatra silika mifamatotra amin'ny ligand. Ny fiolahana fizarazarana haben'ny poti-javatra volumetrika dia naneho fa nitombo ny haben'ny poti-javatra silika taorian'ny fanovana simika (Sary 3A). Ny angon-drakitra fizarazarana haben'ny poti-javatra silika avy amin'ny fanadihadiana ankehitriny sy ny fanadihadiana teo aloha dia ampitahaina amin'ny Tabilao 1(A). Ny haben'ny poti-javatra volumetrika d(0.5) an'ny PMP dia 3.36 µm, raha oharina amin'ny sandan'ny ad(0.5) 3.05 µm tamin'ny fanadihadiana teo aloha (poti-javatra silika mifamatotra amin'ny polystyrene)34. Noho ny fiovan'ny tahan'ny PEG, urea, TMOS ary asidra asetika ao amin'ny fangaroan'ny fihetsika, dia tery kokoa ny fizarazarana haben'ny poti-javatra amin'ity andiany ity raha oharina amin'ny fanadihadiana teo aloha. Ny haben'ny poti-javatra amin'ny dingana PMP dia somary lehibe kokoa noho ny an'ny dingana poti-javatra silika mifamatotra amin'ny polystyrene izay nodinihinay teo aloha. Midika izany fa ny fiasan'ny velaran'ny poti-silica miaraka amin'ny styrene dia nametraka sosona polystyrene (0.97 µm) fotsiny teo amin'ny velaran'ny silica, raha toa kosa ka 1.38 µm ny hatevin'ny sosona tamin'ny dingana PMP.
Fizarana haben'ny poti (A) sy fizarana haben'ny mason-koditra (B) an'ny poti silika madio sy ny poti silika mifamatotra amin'ny ligand.
Aseho ao amin'ny Tabilao 1 (B) ny haben'ny mason-koditra, ny haben'ny mason-koditra, ary ny velaran'ny velaran'ny poti-silica ampiasaina amin'ity fandalinana ity. Aseho ao amin'ny Sary 3(B) ny mombamomba ny PSD an'ny poti-silica madio sy ny poti-silica mifamatotra amin'ny ligand. Mitovy amin'ny fandalinana teo aloha ny valiny34. Ny haben'ny mason-koditra amin'ny poti-silica madio sy mifamatotra amin'ny ligand dia 310 Å sy 241 Å, tsirairay avy, izay manondro fa taorian'ny fanovana simika, dia nihena 69 Å ny haben'ny mason-koditra, araka ny aseho ao amin'ny Tabilao 1 (B), ary ny fiolahana fiovana dia aseho amin'ny Sary. Ny velaran'ny velaran'ny poti-silica amin'ity fandalinana ity dia 116 m2/g, izay azo ampitahaina amin'ny fandalinana teo aloha (124 m2/g). Araka ny aseho ao amin'ny Tabilao 1(B), ny velaran'ny velaran'ny poti-silica (m2/g) taorian'ny fanovana simika dia nihena ihany koa avy amin'ny 116 m2/g ho 105 m2/g.
Aseho ao amin'ny Tabilao 2 ny valin'ny fanadihadiana singa momba ny dingana tsy mihetsika. Ny votoatin'ny karbônina amin'ny dingana tsy mihetsika ankehitriny dia 6.35%, izay ambany noho ny tamin'ny fanadihadiana teo aloha (potiky silika mifandray amin'ny polystyrene, 7.93%35 sy 10.21%, tsirairay avy) 42. Ny votoatin'ny karbônina amin'ny dingana tsy mihetsika ankehitriny dia etsy ambany, satria ny ligand polar sasany toy ny phenylmaleimide methyl vinyl isocyanate (PCMP) sy 4-hydroxy-TEMPO dia nampiasaina ho fanampin'ny styrene tamin'ny fanomanana SP. Ny isan-jaton'ny lanjan'ny azota amin'ny dingana tsy mihetsika ankehitriny dia 2.21% raha oharina amin'ny 0.1735 sy 0.85% tamin'ny fanadihadiana teo aloha 42. Midika izany fa ny dingana tsy mihetsika ankehitriny dia manana isan-jaton'ny lanjan'ny azota avo lenta noho ny phenylmaleimide. Toy izany koa, ny vokatra (4) sy (5) dia manana votoatin'ny karbônina 2.7% sy 2.9% tsirairay avy, raha toa kosa ny vokatra farany (6) dia manana votoatin'ny karbônina 6.35%, araka ny aseho amin'ny Tabilao 2. Nampiasaina tamin'ny dingana tsy mihetsika amin'ny PMP ny fanadihadiana thermogravimetric (TGA) mba hitsapana ny fihenan-danja, ary ny fiolahana TGA dia aseho amin'ny Sary 4. Ny fiolahana TGA dia mampiseho fihenan-danja 8.6%, izay mifanaraka tsara amin'ny votoatin'ny karbônina (6.35%), satria ny ligands dia tsy ahitana C ihany, fa koa N, O ary H.
Ny ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate dia nofidina hanovana ny velaran'ny poti-silica noho ny vondrona phenylmaleimide sy vinylisocyanate polar ao aminy. Ny vondrona vinyl isocyanate dia afaka mihetsika bebe kokoa amin'ny styrene amin'ny alàlan'ny polymerization radical velona. Ny antony faharoa dia ny fampidirana vondrona izay manana fifandraisana antonony amin'ny analyte ary tsy misy fifandraisana elektrostatika matanjaka eo amin'ny analyte sy ny dingana tsy mihetsika, satria ny ampahany phenylmaleimide dia tsy manana fiampangana virtoaly amin'ny pH ara-dalàna. Ny polarity amin'ny dingana tsy mihetsika dia azo fehezina amin'ny alàlan'ny habetsahan'ny styrene tsara indrindra sy ny fotoana fiasan'ny polymerization radical afaka. Ny dingana farany amin'ny fihetsika (polymerization radical afaka) dia tena ilaina satria manova ny polarity amin'ny dingana tsy mihetsika. Natao ny fanadihadiana singa mba hijerena ny votoatin'ny karbônina amin'ireo dingana tsy mihetsika ireo. Voamarika fa ny fampitomboana ny habetsahan'ny styrene sy ny fotoana fiasana dia mampitombo ny votoatin'ny karbônina amin'ny dingana tsy mihetsika ary ny mifamadika amin'izany. Ny SP voaomana amin'ny fifantohana styrene samihafa dia manana enta-mavesatra karbônina samihafa. Toy izany koa, ireo dingana tsy mihetsika ireo dia napetraka teo amin'ny tsanganana vy tsy misy harafesina ary nojerena ny toetrany chromatografika (selectivity, resolution, N value, sns.). Mifototra amin'ireo andrana ireo, dia nofidiana ny fangaro nohatsaraina ho an'ny fanomanana ny dingana tsy mihetsika PMP mba hanomezana polarity voafehy sy fitazonana tsara ny analyte.
Nodinihina ihany koa ny tsanganana PMP ho an'ny famakafakana fangaro peptide dimy (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) amin'ny fampiasana ny fahafahan'ny dingana finday. 60/40 (v/v) ACN/rano (0.1% TFA) amin'ny tahan'ny fikorianan'ny 80 µl/min. Eo ambanin'ny fepetra elution tsara indrindra (200,000 takelaka/m), ny isan'ny takelaka teorika (N) isaky ny tsanganana (100 × 1.8 mm) dia 20,000 ± 100. Ny sandan'ny N ho an'ny tsanganana PMP telo dia aseho amin'ny Tabilao 3 ary ny chromatograms dia aseho amin'ny Sary 5A. Fanadihadiana haingana amin'ny tahan'ny fikorianan'ny rano avo (700 µl/min) amin'ny tsanganana PMP, peptide dimy noesorina tao anatin'ny iray minitra, sanda N tsara dia tsara 13,500 ± 330 isaky ny tsanganana (100 x 1.8 mm ny savaivony), mitovy amin'ny takelaka 135,000/m (Sary 5B). Andry telo mitovy habe (savaivony anatiny 100 x 1.8 mm) no nofenoina andiany telo samihafa amin'ny dingana tsy mihetsika PMP mba hitsapana ny fahafaha-mamerina. Noraisina an-tsoratra ho an'ny tsanganana tsirairay ny analyte tamin'ny alàlan'ny fanasarahana ny fangaro fitsapana mitovy amin'ny tsanganana tsirairay amin'ny alàlan'ny fampiasana fepetra elution tsara indrindra, ny isan'ny takelaka teorika N, ary ny fotoana fitazonana. Aseho ao amin'ny Tabilao 4 ny angon-drakitra momba ny fahafaha-mamerina ho an'ny tsanganana PMP. Ny fahafaha-mamerina ny tsanganana PMP dia mifandray tsara amin'ny sanda %RSD ambany dia ambany araka ny aseho ao amin'ny Tabilao 3.
Fanasarahana ny fangaroan'ny peptide amin'ny tsanganana PMP (B) sy ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide (A), dingana finday 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), refy tsanganana PMP (100 x 1.8 mm id), famakafakana Filaharan'ny elution an'ny fitambarana: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ary 5 (asidra leucic enkephalin).
Nodinihina tamin'ny alalan'ny HPLC ny tsanganana PMP (savaivony anatiny 100 x 1.8 mm). Ny chromatogram ao amin'ny Sary 6 dia mampiseho fa misaraka tsara ireo santionany ary tena tsara ny famaha azy. Nodinihina tamin'ny fampiasana tahan'ny fikorianan'ny 100 μl/min, dingana finday 70/30 acetonitrile/rano ary 0.1% TFA ny vahaolana HSA. Nozaraina ho tendrony 17 ny fanapahana ny HSA, araka ny aseho amin'ny chromatogram (Sary 6), mifanaraka amin'ny peptide 17. Nokajiana ny fahombiazan'ny fisarahana ireo tendrony tsirairay avy amin'ny hydrolyzate HSA ary aseho amin'ny Tabilao 5 ny sandany.
Nosarahina teo amin'ny tsanganana PMP (savaivony anatiny 100 x 1.8 mm), ny tahan'ny fikorianan'ny rano (100 μl/min), ny dingana finday 60/40 acetonitrile/rano, ary ny 0.1% TFA ireo hydrolysate triptika HSA.
izay L ny halavan'ny tsanganana, η ny viscosity-n'ny dingana finday, ΔP ny tsindry miverina amin'ny tsanganana, ary u ny hafainganam-pandehan'ny dingana finday. Ny fahafahan'ny tsanganana PMP miditra dia 2.5 × 10–14 m2, ny tahan'ny fikorianan'ny rano dia 25 µl/min, 60/40 v/v no nampiasaina. ACN/rano. Ny fahafahan'ny tsanganana PMP miditra (ID 100 × 1.8 mm) miditra dia mitovy amin'ny an'ny fandalinanay Ref.34 teo aloha. Ny fahafahan'ny tsanganana feno poti-javatra misy lavaka dia 1.7 × 10 .6 µm, 2.5 × 10-14 m2 ho an'ny poti-javatra 5 µm43. Noho izany, ny fahafahan'ny dingana PMP miditra dia mitovy amin'ny fahafahan'ny poti-javatra misy akorandriaka fototra 5 μm.
izay Wx ny lanjan'ny tsanganana feno klôrofôrma, Wy ny lanjan'ny tsanganana feno methanol, ary ρ ny hakitroky ny solvent. Hakitroky ny methanol (ρ = 0.7866) sy ny klôrofôrma (ρ = 1.484). Ny porosity manontolo amin'ny tsanganana poti silika-C18 (100 × 1.8 mm ID)34 sy ny tsanganana C18-urea31 izay nodinihinay teo aloha dia 0.63 sy 0.55. Midika izany fa ny fisian'ny ligand urea dia mampihena ny permeability ny dingana tsy mihetsika. Etsy ankilany, ny porosity manontolo amin'ny tsanganana PMP (savaivony anatiny 100 × 1.8 mm) dia 0.60. Tsy dia permeable loatra ny tsanganana PMP raha oharina amin'ny tsanganana feno poti silika mifamatotra amin'ny C18 satria amin'ny dingana tsy mihetsika karazana C18 dia mifamatotra amin'ny poti silika amin'ny rojo linear ny ligand C18, raha amin'ny dingana tsy mihetsika karazana polystyrene kosa dia misy polymer matevina miforona manodidina ny poti. sosona A. Amin'ny andrana mahazatra, ny porosity an'ny tsanganana dia kajy toy izao manaraka izao:
Ao amin'ny sary 7A, B dia asehoy ny sary Van Deemter ho an'ny tsanganana PMP (id 100 x 1.8 mm) sy tsanganana Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) eo ambanin'ny fepetra elution mitovy, 60/40 ACN/H2O ary 0 .1% TFA 20 µl/min hatramin'ny 800 µl/min amin'ny tsanganana roa. Ny sandan'ny HETP farany ambany indrindra amin'ny tahan'ny fikorianan'ny rano tsara indrindra (80 µl/min) dia 2.6 µm sy 3.9 µm ho an'ny tsanganana PMP sy ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide. Ny sandan'ny HETP dia mampiseho fa ny fahombiazan'ny fisarahana amin'ny tsanganana PMP (100 x 1.8 mm id) dia ambony lavitra noho ny an'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide (100 x 1.8 mm id) azo vidiana eny an-tsena. Ny grafika van Deemter ao amin'ny Sary 7(A) dia mampiseho fa ny fihenan'ny sandan'ny N dia tsy dia avo loatra miaraka amin'ny fitomboan'ny fikorianan'ny rano raha oharina amin'ny fanadihadiana nataonay teo aloha. Ny fahombiazan'ny fisarahana ambony kokoa amin'ny tsanganana PMP (id 100 × 1.8 mm) raha oharina amin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide dia mifototra amin'ny endrika sy haben'ny poti-javatra nohatsaraina ary ny fomba fiasa sarotra amin'ny famonosana tsanganana ampiasaina amin'ny asa ankehitriny34.
(A) Tetika Van Deemter (HETP vs. hafainganam-pandeha linear an'ny dingana finday) azo tamin'ny tsanganana PMP (id 100 x 1.8 mm) tao anaty 60/40 ACN/H2O misy 0.1% TFA. (B) Tetika Van Deemter (HETP vs. hafainganam-pandeha linear an'ny dingana finday) azo tamin'ny tsanganana Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) tao anaty 60/40 ACN/H2O misy 0.1% TFA.
Nomanina sy nojerena ny dingana tsy mihetsika amin'ny polystyrene intercalated mba hanasarahana ny fifangaroan'ny peptides sentetika sy ny hydrolyzate tryptic an'ny albumin'ny serum olombelona (HSA) amin'ny alàlan'ny chromatography liquide avo lenta. Ny fahombiazan'ny chromatography an'ny tsanganana PMP ho an'ny fifangaroan'ny peptide dia tena tsara raha ny amin'ny fahombiazan'ny fisarahana sy ny famahana azy. Ny fahombiazan'ny fisarahana nohatsaraina amin'ny tsanganana PMP dia noho ny antony maro toy ny haben'ny poti silica sy ny haben'ny mason-koditra, ny fananganana voafehy ny dingana tsy mihetsika, ary ny fitaovana fonosana tsanganana sarotra. Ankoatra ny fahombiazan'ny fisarahana avo lenta, ny tombony iray hafa amin'ity dingana tsy mihetsika ity dia ny tsindry ambany amin'ny tsanganana amin'ny tahan'ny fikorianan'ny rano avo. Azo averina averina ny tsanganana PMP ary azo ampiasaina handinihana ny fifangaroan'ny peptides sy ny fandevonan-kanina tryptic an'ny proteinina isan-karazany. Mikasa ny hampiasa ity tsanganana ity izahay mba hanasarahana ireo akora bioactive avy amin'ny vokatra voajanahary, ny fitrandrahana zavamaniry fanafody ary ny holatra amin'ny chromatography liquide. Amin'ny ho avy, ny tsanganana PMP dia hojerena ihany koa amin'ny fanasarahana ny proteinina sy ny antikôra monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Fanadihadiana momba ny rafitra fisarahana peptide amin'ny chromatography dingana mivadika fizarana I: Fampivoarana protocole ho an'ny famaritana ny tsanganana. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Fanadihadiana momba ny rafitra fisarahana peptide amin'ny chromatography dingana mivadika fizarana I: Fampivoarana protocole ho an'ny famaritana ny tsanganana.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ary Petersson, P. Fanadihadiana ny Rafitra Fisarahana Peptide amin'ny alàlan'ny Chromatography Mivadika, Fizarana I: Famolavolana Protocol ho an'ny Famaritana ny Tsanganana. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Fanadihadiana momba ny rafitra fisarahana peptide amin'ny chromatography dingana mivadika fizarana I: Fampivoarana protocole ho an'ny toetran'ny tsanganana. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Fanadihadiana momba ny rafitra fisarahana peptide amin'ny chromatography dingana mivadika fizarana I: Fampivoarana protocole ho an'ny toetran'ny tsanganana.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ary Petersson, P. Fanadihadiana ny Rafitra Fisarahana Peptide amin'ny alàlan'ny Chromatography Mivadika, Fizarana I: Famolavolana Protocol ho an'ny Famaritana ny Tsanganana.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. Fomba famoronana peptide mavitrika nohatsaraina ho an'ny fitsaboana aretina mifindra. Bioteknolojia. Zava-bita 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptide fitsaboana sentetika: Siansa sy tsena. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptide fitsaboana sentetika: Siansa sy tsena.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ary Chreschatyski M. Peptide fitsaboana sentetika: siansa sy tsena.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ary Khreschatsky M. Peptide fitsaboana sentetika: siansa sy tsena. Fahitana fanafody. Androany 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografia ranoka proteomika mandroso. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografia ranoka proteomika mandroso.Jereo F., Smith RD sy Shen Yu. Kromatografia ranoka proteomika mandroso. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Famoronana proteinina mandroso 液相色谱。Jereo F., Smith RD sy Shen Yu. Kromatografia ranoka proteomika mandroso.J. Kromatôgrafia. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Ny chromatography ranoka mandroso-spectrometry faobe dia afaka mampifangaro metabolomika sy proteomika midadasika. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ny anjara asan'ny UHPLC amin'ny fampandrosoana ny fanafody. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ny anjara asan'ny UHPLC amin'ny fampandrosoana ny fanafody.Chesnut, SM sy Salisbury, JJ Ny anjara asan'ny UHPLC amin'ny fampandrosoana ny fanafody.Chesnut, SM sy Salisbury, JJ Ny anjara asan'ny UHPLC amin'ny fampivoarana fanafody. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny chromatography ranoka amin'ny tsindry avo lenta ho an'ny fisarahana haingana. Wu, N. & Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny chromatography ranoka amin'ny tsindry avo lenta ho an'ny fisarahana haingana.Wu, N. sy Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny chromatography ranoka avo lenta ho an'ny fisarahana haingana. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny chromatography ranoka amin'ny tsindry avo lenta ho an'ny fisarahana haingana.Wu, N. sy Clausen, AM Lafiny fototra sy azo ampiharina amin'ny chromatography ranoka avo lenta ho an'ny fisarahana haingana.J. Sept. Siansa. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Fampiasana chromatography ranoka ultra-performance amin'ny fampandrosoana fanafody. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Fampiasana chromatography ranoka ultra-performance amin'ny fampandrosoana fanafody.Ren, SA sy Chelischeff, P. Ny fampiasana chromatography ranoka avo lenta amin'ny fampandrosoana fanafody. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA sy Chelischeff, P. Fampiharana ny chromatography ranoka ultra-performance amin'ny fampivoarana fanafody.J. Kromatôgrafia. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Hidrogel monolithic macroporous avy amin'ny emulsion menaka-ao anaty rano miaraka amin'ny dingana anatiny avo lenta ho an'ny fanadiovana mahomby ny enterovirus 71. Chemical. tetikasa. Journal 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ny anjara asan'ny chromatography ranoka amin'ny proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ny anjara asan'ny chromatography ranoka amin'ny proteomics.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ary Wilkins, JA Ny anjara asan'ny chromatography ranoka amin'ny proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ary Wilkins, JA Ny anjara asan'ny chromatography ranoka amin'ny proteomics.J. Kromatôgrafia. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Fironana vaovao amin'ny fisarahana peptide sy proteinina ara-pahasalamana amin'ny alalan'ny chromatography ranoka dingana mivadika: Teoria sy fampiharana. & Guillarme, D. Fironana vaovao amin'ny fisarahana peptide sy proteinina ara-pahasalamana amin'ny alalan'ny chromatography ranoka dingana mivadika: Teoria sy fampiharana. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографира хроматографира теория и приложения. & Guillarme, D. Fironana vaovao amin'ny fanasarahana ny peptides sy proteinina ara-pahasalamana amin'ny alàlan'ny chromatography ranoka dingana mivadika: teoria sy fampiharana. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.ary Guillarmé, D. Fironana vaovao amin'ny fanasarahana ny peptides sy proteinina fitsaboana amin'ny alàlan'ny chromatography ranoka dingana mivadika: teoria sy fampiharana.J. Pharm. Siansa Biomedika. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Fisarahana peptide roa refy mampiasa rafitra RP-RP-HPLC misy pH samihafa amin'ny refy fisarahana voalohany sy faharoa. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Fisarahana peptide roa refy mampiasa rafitra RP-RP-HPLC misy pH samihafa amin'ny refy fisarahana voalohany sy faharoa.Gilar M., Olivova P., Dali AE ary Gebler JK Fisarahana peptide roa refy mampiasa ny rafitra RP-RP-HPLC miaraka amin'ny pH samihafa amin'ny refy fisarahana voalohany sy faharoa.Gilar M., Olivova P., Dali AE ary Gebler JK Fisarahana peptide roa refy amin'ny fampiasana sanda pH samihafa amin'ny refy fisarahana voalohany sy faharoa amin'ny fampiasana ny rafitra RP-RP-HPLC. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Fanadihadiana momba ny famindrana lanja sy ny toetran'ny kinetika amin'ny tsanganana chromatography avo lenta feno poti-C18 misy porous tanteraka sy misy porous ambonin'ny zavatra kely kokoa noho ny 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Fironana vao haingana sy fanamby ara-analytika amin'ny fanasarahana, famantarana ary fanamarinana ny peptide bioactive an'ny zavamaniry. anus. Zavaboary anal. Chemical. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Tontolo iainana proteomika an'ny fanjakan'ny fiainana. Nature 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. Fitsaboana aorian'ny peptide fitsaboana amin'ny alàlan'ny chromatography ranoka fanomanana. Molecules (Basel, Soisa) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kromatografia fomba mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymer. Yang, Y. & Geng, X. Kromatografia fomba mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymer.Yang, Yu. sy Geng, X. Kromatografia fomba mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymer. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Kromatografia fomba mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymer.Yang, Yu. sy Gene, X. Kromatografia fomba mifangaro sy ny fampiharana azy amin'ny biopolymer.J. Kromatôgrafia. A 1218(49), 8813–8825 (2011).