Gratias tibi ago quod Nature.com invisisti. Versione navigatri uteris quae CSS sustinet limitatum. Pro optima experientia, commendamus ut navigatro recentiore utaris (aut Modum Compatibilitatis in Internet Explorer debilites). Praeterea, ut auxilium continuum praestemus, situm sine stylis et JavaScript monstramus.
Series trium diapositivarum simul ostendit. Utere bullis "Prior" et "Sequens" ad tres diapositivas simul movendas, vel bullis cursoribus in fine ad tres diapositivas simul movendas utere.
Particulae silicae porosae methodo sol-gel cum quibusdam modificationibus praeparatae sunt ad particulas poro lato obtinendas. Hae particulae cum N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanato (PMI) et styreno per polymerizationem fragmentationis translationis catenae inversae (RAFT) derivatae sunt ad polyamida N-phenylmaleimide intercalata producenda. Phasis stationaria styreni (PMP). Columnae chalybis inoxidabilis angusto diametro (100 × 1.8 mm diametro interno) impletione suspensoria impletae sunt. Effectus chromatographicus columnae PMP aestimatus est ad mixturam peptidum syntheticorum, constantem ex quinque peptidis (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu aminoacido enkephalino) et hydrolysato tryptico albuminis serici humani (HAS), separandam. Sub condicionibus elutionis optimis, numerus theoreticus laminarum cum mixtura peptidum 280,000 laminas/m² attigit. Comparando efficaciam separationis columnae evolutae cum columna commerciali Ascentis Express RP-Amide, observatum est efficaciam separationis columnae PMP superiorem esse columnae commerciali quod ad efficaciam separationis et resolutionem attinet.
Industria biopharmaceutica mercatus globalis crescens facta est, cum incremento significanti partis mercatus annis proximis. Cum incremento explosivo industriae biopharmaceuticae1,2,3, magna est necessitas analysis peptidorum et proteinorum. Praeter peptidum destinatum, variae impuritates formantur durante synthesi peptidi, ita purificatio chromatographica requiritur ad optatam puritatem peptidi obtinendam. Analysis et characterizatio proteinorum in humoribus corporis, textibus, et cellulis est negotium difficillimum propter magnum numerum specierum potentia detectabilium in uno exemplo praesentium. Quamquam spectrometria massae est instrumentum efficax ad peptida et proteina sequenda, si talia exempla directe in spectrometriam massae introducuntur, separatio non erit satisfactoria. Hoc problema solvi potest per chromatographiam liquidam (LC) ante analysin MS, quae quantitatem analytorum in spectrometriam massae tempore dato ingredientium minuet4,5,6. Praeterea, analyta in regione angusta durante separatione phasis liquidae concentrari possunt, ita haec analyta concentrando et sensibilitatem detectionis MS augendo. Chromatographia liquida (LC) per decennium proximum insigniter progressa est et methodus late adhibita ad analysin proteomicam facta est7,8,9,10.
Chromatographia liquida phasis inversae (RP-LC) late adhibetur ad mixturas peptidorum purificandas et separandas, silica octadecylo-modificata (ODS) ut phase stationaria utens11,12,13. Attamen, propter structuram complexam et naturam amphoteram,14,15 phases stationariae RP separationem peptidorum et proteinorum satisfacientem praebere non possunt. Ergo, analysis peptidorum et proteinorum cum fragmentis polaribus et non polaribus requirit phases stationarias specialiter designatas ad haec analyta interagendum et retinendum16. Chromatographia mixta, quae interactiones multimodales offert, potest esse alternativa RP-LC ad peptida, proteina, et alias mixturas complexas separandas. Plures phases stationariae generis mixti paratae sunt et columnae his phasibus stationariis repletae ad peptida et proteina separanda adhibitae sunt17,18,19,20,21. Propter praesentiam gregum polarium et non polarium, phases stationariae modi mixti (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, intercalatio polaris/RPLC) aptae sunt ad separationem peptidorum et proteinorum [22,23,24,25,26,27,28]. Phases stationariae polares intercalatae cum gregibus polaribus covalenter iunctis bonas facultates separationis et selectivitatem singularem pro analytis polaribus et non polaribus ostendunt, quia separatio pendet ab interactione inter analytum et phasim stationariam [Interactiones multimodales] [29,30,31,32]. Nuper, Zhang et al. [30] phases stationarias behenyl-terminatas polyaminarum obtinuerunt et feliciter hydrocarbona, antidepressiva, flavonoida, nucleosida, oestrogena, et alia analyta separaverunt. Materia stationaria polari inclusa et greges polares et non polares habet, ita adhiberi potest ad separanda peptida et proteina in partes hydrophobicas et hydrophilicas. Columnae polares inlineae (e.g., columnae C18 cum amido inlinea) sub nomine commerciali Ascentis Express RP-Amide columnae praesto sunt, sed hae columnae tantum ad analysin aminae 33 adhibitae sunt.
In hoc studio, phasis stationaria polaris inclusa (N-phenylmaleimidum, polystyrenum inclusum) praeparata est et ad separationem peptidorum et scissionem tryptici HSA aestimata. Sequens strategia ad phasim stationariam praeparandam adhibita est. Particulae silicae porosae secundum rationes in prioribus nostris publicationibus descriptas praeparatae sunt, cum quibusdam mutationibus in schematibus praeparationis 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Proportiones ureae, polyethyleni glycoli (PEG), TMOS et acidi aquosi-acetici adaptatae sunt ad particulas silicae cum magnis pororum magnitudinibus obtinendas. Deinde, novum ligandum phenylmaleimidum-methylvinyl isocyanatis synthesizatum est et eius particulae silicae derivatizatae ad phases stationarias polaris inclusas praeparandas adhibitae sunt. Phasis stationaria obtenta in columnam chalybis inoxidabilis (diametro interno 100 × 1.8 mm) secundum schema sarcinationis optimizatum compacta est. Sarcinatio columnae vibratione mechanica adiuvatur ad stratum uniforme intra columnam curandum. Columna compacta aestimata est ad separationem mixturae peptidorum, constantem ex quinque peptidis (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucin-enkephalin peptide) et hydrolysatis trypticis albuminis serici humani (HSA). Observatum est mixturam peptidorum et digestum trypticum HSA bona resolutione et efficacia separari. Efficacia separationis columnae PMP comparata est cum ea columnae Ascentis Express RP-Amide. Observatum est peptida et proteina bonam resolutionem et altam efficaciam separationis in columna PMP habere, et efficaciam separationis columnae PMP altiorem esse quam columnae Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polyethylenum glycolum), urea, acidum aceticum, trimethoxyorthosilicatum (TMOS), trimethylchlorosilanum (TMCS), trypsinum, albumina serorum humanorum (HSA), ammonium chloridum, urea, hexamethylmethacryloyldisilazanum (HMDS), methacryloylchloridum (MC), styrenum, 4-hydroxy-TEMPO, benzoylis peroxidum (BPO), acetonitrilum (ACN) pro HPLC, methanolum, 2-propanolum et acetonum. Societas Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA).
Mixtura ureae (8 g), polyethylene glycolis (8 g) et 8 ml acidi acetici 0.01 N per 10 minuta agitata est, et 24 ml TMOS sub refrigeratione glaciali additi sunt. Mixtura reactionis ad 40°C per 6 horas calefacta est, deinde ad 120°C per 8 horas in autoclave chalybis inoxidabilis. Aqua decantata est et residuum ad 70°C per 12 horas siccum est. Molles frusta siccata leniter trita et in furno ad 550°C per 12 horas calcinata sunt. Tres partes paratae et descriptae sunt ad reproducibilitatem magnitudinum particularum, magnitudinis pororum et areae superficialis probandam.
Grex polaris et phasis stationaria pro catenis polystyrenis. Ratio praeparationis infra describitur.
N-phenylmaleimidum (200 mg) et methylvinylisocyanas (100 mg) in tolueno anhydrico dissoluta sunt, deinde 0.1 ml 2,2′-azoisobutyronitrili (AIBN) in ampullam reactionis additum est ut copolymerum phenylmaleimidi et methylvinylisocyanatis (PMCP) obtineretur. ) Mixtura ad 60°C per 3 horas calefacta, filtrata et in furno ad 40°C per 3 horas siccata est.
Particulae silicae siccatae (2 g) in tolueno sicco (100 ml) dispersae, agitatae et per 10 minuta in ampulla fundi rotundi 500 ml sonicatae sunt. PMCP (10 mg) in tolueno dissolutum et guttatim in ampullam reactionis per infundibulum additionale additum est. Mixtura ad 100°C per 8 horas refluxa, filtrata, acetono abluta et ad 60°C per 3 horas siccata est. Deinde, particulae silicae cum PMCP (100 g) associatae in tolueno (200 ml) dissolutae sunt, et 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) in praesentia 100 μl dibutyltin dilaurati ut catalysatoris additum est. Mixtura ad 50°C per 8 horas agitata, filtrata et ad 50°C per 3 horas siccata est.
Styrenum (1 ml), benzoyli peroxidum BPO (0.5 ml) et particulae silicae TEMPO-PMCP (1.5 g) adhaerentes in tolueno dispersae et nitrogenio purgatae sunt. Polymerizatio styreni ad 100°C per 12 horas peracta est. Productum inde ortum methanolo ablutum et per noctem ad 60°C siccatum est. Schema generale reactionis in figura prima ostenditur.
Exempla ad 393 K per horam unam gasis depurata sunt, donec pressio residua minor quam 10–3 Torr obtineretur. Quantitas N2 adsorpta ad pressionem relativam P/P0 = 0.99 adhibita est ad volumen pororum totum determinandum. Morphologia particularum silicae purae et ligando iunctae microscopio electronico perlustrante (Hitachi High Technologies, Tokyo, Iaponia) examinata est. Exempla sicca (silica pura et particulae silicae ligando iunctae) in virgis aluminii posita sunt, taenia carbonis utens. Aurum in exemplo depositum est, instrumento cathodico Q150T utens, et stratum Au 5 nm crassum in exemplo depositum est. Hoc efficientiam processus humilis tensionis emendat et aspersionem frigidam subtilem praebet. Analysis elementalis peracta est, instrumento Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 ad compositionem elementorum analysatore. Instrumentum Malvern magnitudinis particularum (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ad distributionem magnitudinis particularum obtinendam adhibitum est. Particulae silicae non obductae et particulae silicae ligando adstrictae (singulae 5 mg) in 5 ml isopropanoli dispersae, per 10 minuta sonicatae, per 5 minuta agitatae, et in mensa optica Mastersizer positae sunt. Analysis thermogravimetrica peragitur celeritate 5°C per minutum in ambitu temperaturae a 30 ad 800°C.
Columnae chalybis inoxidabilis, angusto diametro interno 100 × 1.8 mm, fibra vitrea obductae, methodo impletionis mixturae impletae sunt, eodem modo quo in exemplo 31. Columna chalybis inoxidabilis (vitre obducta, diametro interno 100 × 1.8 mm) et exitus frittum 1 µm continens machinae impletionis mixturae (Alltech Deerfield, IL, USA) connexae sunt. Suspensionem phasis stationariae para, 150 mg phasis stationariae in 1.2 ml methanoli suspendendo et in columnam reservatoriam immittendo. Methanolum ut solvens mixturae et solvens moderatorius adhibitum est. Columnam imple applicando seriem pressionis 100 MP per 10 min, 80 MP per 15 min, et 60 MP per 30 min. Processus impletionis duos vibratores columnae chromatographiae gasosae (Alltech, Deerfield, IL, USA) ad vibrationem mechanicam adhibuit, ut impletio columnae uniformis assicuraretur. Impletorem mixturae claude et pressionem lente remitte, ne filum laedatur. Columna a rostro pulmenti disiuncta est et aliud aptamentum ad introitum adnexum et systemati LC coniunctum est ad eius operationem probandam.
MLC constructum est utens antlia LC (10AD Shimadzu, Iaponia), sampling cum ansa injectionis 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), degassatore membranae (Shimadzu DGU-14A), et fenestra capillari UV-VIS. Instrumentum detectoris (UV-2075) et microcolumna smaltata. Tubulis connectivis angustissimis et brevibus utere ad effectum expansionis columnae additae minuendum. Post impletionem columnae, capillare (50 µm diameter 365) ad exitum iuncturae reducentis 1/16″ institue et capillare (50 µm) iuncturae reducentis institue. Collectio datorum et processus chromatogrammatis per programmate Multichro 2000 peraguntur. Ad 254 nm, absorptio UV analytorum subiectorum ad 0 monitorata est. Data chromatographica per OriginPro8 (Northampton, MA) analysata sunt.
Albuminum sericum humanum, pulvis lyophilizatus, ≥ 96% (electrophoresis in gel agarose), 3 mg mixtum cum trypsino (1.5 mg), urea 4.0 M (1 ml) et ammonii bicarbonato 0.2 M (1 ml). Solutio per 10 min agitata est et in balneo aquae ad 37°C per 6 h servata, deinde cum 1 ml TFA 0.1% extincta. Solutio filtrata et sub 4°C conservata.
Separatio mixturae peptidorum et HSA trypticae digestae in columna PMP separatim aestimata est. Hydrolysim trypticam mixturae peptidorum et HSA columna PMP separatae examina et eventus cum columna Ascentis Express RP-Amide compara. Numerus laminarum theoreticarum hac aequatione computatur:
Imagines SEM particularum silicae purae et particularum silicae ligando coniunctarum in Figura 2 monstrantur. Imagines SEM particularum silicae purae (A, B) formam sphaericam ostendunt in qua particulae elongatae sunt vel symmetriam irregularem habent, comparatae cum studiis nostris prioribus. Superficies particularum silicae a ligando coniunctarum (C, D) levior est quam particularum silicae purae, quod fortasse debetur catenis polystyreni superficiem particularum silicae tegentibus.
Micrographia electronica perlustrativa particularum silicae purae (A, B) et particularum silicae ligando iunctarum (C, D).
Distributio magnitudinis particularum particularum silicae purae et particularum silicae ligando iunctae in Figura 2.3(A) ostenditur. Curvae distributionis magnitudinis particularum volumetricae demonstraverunt magnitudinem particularum silicae post modificationem chemicam auctam esse (Figura 3A). Data distributionis magnitudinis particularum silicae ex studio praesenti et studio priori in Tabula 1(A) comparantur. Magnitudo particularum volumetrica d(0.5) PMP 3.36 µm erat, comparata cum valore ad(0.5) 3.05 µm in studio nostro priori (particulae silicae polystyreno iunctae)34. Propter mutationem in ratione PEG, ureae, TMOS et acidi acetici in mixtura reactionis, distributio magnitudinis particularum huius coetus angustior erat comparata cum studio nostro priori. Magnitudo particularum phasis PMP paulo maior est quam phasis particularum silicae polystyreno iunctae quam antea studiavimus. Hoc significat functionalizationem superficialem particularum silicae cum styreno tantum stratum polystyreni (0.97 µm) in superficie silicae deposuisse, dum in phase PMP crassitudo strati 1.38 µm erat.
Distributio magnitudinis particularum (A) et distributio magnitudinis pororum (B) particularum silicae purae et particularum silicae ligando iunctarum.
Magnitudo pororum, volumen pororum, et area superficialis particularum silicae in hoc studio adhibitarum in Tabula 1 (B) monstrantur. Formae PSD particularum silicae purae et particularum silicae ligando iunctarum in Figuris 3 (B) monstrantur. Resultata comparabilia erant studio nostro priori34. Magnitudines pororum particularum silicae purae et ligando iunctarum erant 310 Å et 241 Å respective, quod indicat post modificationem chemicam magnitudinem pororum 69 Å decrevisse, ut in Tabula 1 (B) monstratur, et curva translationis in Fig. Area superficialis specifica particularum silicae in studio praesenti est 116 m²/g, quae comparabilis est studio nostro priori (124 m²/g). Ut in Tabula 1 (B) monstratur, area superficialis (m²/g) particularum silicae post modificationem chemicam etiam decrevit a 116 m²/g ad 105 m²/g.
Resultata analysis elementorum phasis stationariae in Tabula 2 exhibentur. Contentum carbonii phasis stationariae praesentis est 6.35%, quod minus est quam in studio nostro priori (particulae silicae cum polystyreno consociatae, 7.93%35 et 10.21%, respective)42. Contentum carbonii phasis stationariae praesentis infra, cum nonnulla liganda polaria, ut phenylmaleimide methyl vinyl isocyanas (PCMP) et 4-hydroxy-TEMPO, praeter styrenum in praeparatione SP adhibita sint. Percentatio ponderis nitrogenii in phasi stationaria praesenti est 2.21% comparata cum 0.1735 et 0.85% in studiis prioribus42. Hoc significat phasim stationariam praesentem habere magnam percentationem ponderis nitrogenii propter phenylmaleimide. Similiter, producta (4) et (5) contentum carbonis 2.7% et 2.9% respective habent, dum productum finale (6) contentum carbonis 6.35% habet, ut in Tabula 2 demonstratur. Analysis thermogravimetrica (TGA) in phase stationaria PMP adhibita est ad probandam deminutionem ponderis, et curva TGA in Figura 4 ostenditur. Curva TGA deminutionem ponderis 8.6% ostendit, quae bene congruit cum contento carbonis (6.35%), cum liganda non solum C, sed etiam N, O et H contineant.
Ligandum phenylmaleimid-methylvinylisocyanas electum est ad superficiem particularum silicae modificandam propter greges polares phenylmaleimidi et vinylisocyanatis. Greges vinylisocyanatis ulterius cum styreno per polymerisationem radicalem vivam reagere possunt. Altera causa est inserere gregem qui interactiones moderatas cum analyto habet et nullas interactiones electrostaticas fortes inter analytum et phasim stationariam, cum pars phenylmaleimidi nullam virtualem caricam ad pH normalem habeat. Polaritas phasis stationariae regi potest per optimam quantitatem styreni et tempus reactionis polymerisationis radicalis liberi. Gradus finalis reactionis (polymerisationem radicalis liberi) criticus est quia polaritatem phasis stationariae mutat. Analysis elementalis peracta est ad contentum carbonii in his phasibus stationariis inspiciendum. Observatum est auctum quantitatem styreni et tempus reactionis contentum carbonii phasis stationariae augere et vice versa. SP cum diversis concentrationibus styreni praeparatae diversa onera carbonii habent. Similiter, hae phases stationariae in columnas chalybis inoxidabilis positae sunt et earum proprietates chromatographicae (selectivitatem, resolutionem, valorem N, etc.) examinatae sunt. His experimentis innixae, compositio optima ad praeparationem phasis stationariae PMP electa est, ut polaritas moderata et bona retentio analyti praeberetur.
Columna PMP etiam aestimata est ad analysin quinque mixturarum peptidorum (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucinum-enkephalinum) utens capacitate phasis mobilis. 60/40 (v/v) ACN/aqua (0.1% TFA) ad fluxum 80 µl/min. Sub condicionibus elutionis optimis (200,000 laminae/m²), numerus laminarum theoreticarum (N) per columnam (100 × 1.8 mm) est 20,000 ± 100. Valores N pro tribus columnis PMP in Tabula 3 et chromatogrammata in Figura 5A monstrantur. Analysis celeris magno fluxus celeritate (700 µl/min) in columna PMP, quinque peptida intra unum minutum eluta, valor N optimus 13,500 ± 330 per columnam (100 x 1.8 mm diametro), aequivalens 135,000 laminis/m² (Fig. 5B). Tres columnae eiusdem magnitudinis (diametro interno 100 x 1.8 mm) tribus diversis partibus phasis stationariae PMP impletae sunt ad reproducibilitatem probandam. Analyta pro unaquaque columna notata sunt separando eandem mixturam probandam in unaquaque columna, utens condicionibus elutionis optimalibus, numero laminarum theoreticarum N, et tempore retentionis. Data reproducibilitatis pro columnis PMP in Tabula 4 monstrantur. Reproducibilitas columnae PMP bene correlata est cum valoribus %RSD infimis, ut in Tabula 3 demonstratur.
Separatio mixturarum peptidicarum in columna PMP (B) et columna Ascentis Express RP-Amide (A), phasis mobilis 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), dimensiones columnae PMP (100 x 1.8 mm diameter), analysis Ordo elutionis compositorum: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) et 5 (acidum leucicum enkephalinum).
Columna PMP (diametro interno 100 x 1.8 mm) ad separationem hydrolyzati tryptici albuminis serici humani per HPLC aestimata est. Chromatogramma in Figura 6 ostendit exempla bene separata esse cum optima resolutione. Solutiones HSA analysatae sunt utens fluxu 100 μl/min, phase mobili 70/30 acetonitrili/aquae et 0.1% TFA. Scissio HSA in 17 cacumina divisa est, ut in chromatogrammate (Figura 6) monstratur, 17 peptidibus respondentibus. Efficaciae separationis cacuminum singularum ab hydrolyzato ​​HSA calculatae sunt et valores in Tabula 5 monstrantur.
Hydrolysata tryptica HSA in columna PMP (diametro interno 100 x 1.8 mm), fluxu (100 μl/min), phase mobili 60/40 acetonitrili/aqua, et 0.1% TFA separata sunt.
ubi L est longitudo columnae, η est viscositas phasis mobilis, ΔP est pressio posterior columnae, et u est velocitas linearis phasis mobilis. Permeabilitas columnae PMP erat 2.5 × 10–14 m2, fluxus erat 25 µl/min, 60/40 v/v adhibitum est. ACN/aqua. Permeabilitas columnae PMP (ID 100 × 1.8 mm) similis erat ei studii nostri prioris Ref.34. Permeabilitas columnae repletae particulis superficialiter porosis est 1.7×10⁻⁶ m2 pro particulis 5 µm43. Ergo, permeabilitas phasis PMP similis est permeabilitati particularum nucleo-corticali cum magnitudine 5 μm.
Ubi Wx est massa columnae chloroformio repletae, Wy est massa columnae methanolo repletae, et ρ est densitas solventis. Densitas methanolis (ρ = 0.7866) et chloroformii (ρ = 1.484). Porositas totalis columnae silicae-C18 particularum (100 × 1.8 mm ID)34 et columnae nostrae C18-urea31 antea investigatae erat 0.63 et 0.55, respective. Hoc significat praesentiam ligandorum ureae permeabilitatem phasis stationariae reducere. Ex altera parte, porositas totalis columnae PMP (diametros interior 100 × 1.8 mm) est 0.60. Columnae PMP minus permeabiles sunt quam columnae particulis silicae C18 ligatis repletae quia in phasibus stationariis generis C18 ligamina C18 particulis silicae in catenis linearibus adhaerent, dum in phasibus stationariis generis polystyreni polymerum relative crassum circa particulas formatur. Stratum A. In experimento typico, porositas columnae sic computatur:
In figuris 7A et B delineationes Van Deemter pro columna PMP (diametro interiore 100 x 1.8 mm) et columna Ascentis Express RP-Amide (diametro interiore 100 x 1.8 mm) sub iisdem condicionibus elutionis, 60/40 ACN/H2O et 0.1% TFA 20 µl/min ad 800 µl/min in ambabus columnis, monstrantur. Minimi valores HETP ad optimam ratem fluxus (80 µl/min) erant 2.6 µm et 3.9 µm pro columna PMP et columna Ascentis Express RP-Amide, respective. Valores HETP ostendunt efficaciam separationis columnae PMP (100 x 1.8 mm diametro interiore) multo maiorem esse quam columnae Ascentis Express RP-Amide commercialiter praesto (100 x 1.8 mm diametro interiore). Diagramma van Deemter in Figura 7(A) ostendit decrementum valoris N non significanter maius esse cum crescente fluxu comparatum cum studio nostro priori. Efficacia separationis altior columnae PMP (id 100 × 1.8 mm) comparata columnae Ascentis Express RP-Amide fundatur in forma et magnitudine particularum emendata et in processu impletionis columnae perpolito, quod in opere praesenti adhibitum est34.
(A) Diagramma Van Deemter (HETP contra velocitatem linearem phasis mobilis) obtentum in columna PMP (id 100 x 1.8 mm) in 60/40 ACN/H2O cum 0.1% TFA. (B) Diagramma Van Deemter (HETP contra velocitatem linearem phasis mobilis) obtentum in columna Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) in 60/40 ACN/H2O cum 0.1% TFA.
Phasis stationaria polaris polystyreni intercalati praeparata et aestimata est ad separationem mixturae peptidorum syntheticorum et hydrolyzati tryptici albuminis serici humani (HSA) in chromatographia liquida altae efficaciae. Efficacia chromatographica columnarum PMP pro mixturis peptidorum excellit quoad efficientiam separationis et resolutionem. Efficacia separationis emendata columnarum PMP debetur pluribus de causis, ut magnitudine particularum silicae et magnitudine pororum, synthesis moderata phasium stationariarum, et materiis complexis ad columnas implendas. Praeter efficaciam separationis altam, aliud commodum huius phasis stationariae est pressio inversa columnae humilis ad altas velocitates fluxus. Columnae PMP sunt valde reproducibiles et adhiberi possunt ad mixturas peptidorum et digestionem trypticam variarum proteinarum analysandam. Hanc columnam ad separationem compositorum bioactivorum a productis naturalibus, extractis plantarum medicinalium et fungorum in chromatographia liquida uti intendimus. In futuro, columnae PMP etiam ad separationem proteinorum et anticorporum monoclonalium aestimabuntur.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigatio systematum separationis peptidorum per chromatographiam phasis inversae pars I: Elaboratio protocolli ad characterizationem columnae. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigatio systematum separationis peptidorum per chromatographiam phasis inversae pars I: Elaboratio protocolli ad characterizationem columnae.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., et Petersson, P. Investigatio Systematum Separationis Peptidorum per Chromatographiam Phasis Reversae, Pars I: Elaboratio Protocolli ad Characterizationem Columnae. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigatio systematum separationis peptidorum per chromatographiam phasis inversae pars I: Elaboratio protocolli pro characteristicis columnae. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigatio systematum separationis peptidorum per chromatographiam phasis inversae pars I: Elaboratio protocolli pro characteristicis columnae.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., et Petersson, P. Investigatio Systematum Separationis Peptidorum per Chromatographiam Phasis Reversae, Pars I: Elaboratio Protocolli ad Characterizationem Columnae.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
Gomez, B. et al. Methodi ad peptida activa emendata creanda ad morbos contagiosos curandos. *Biotechnology. Achievements* 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida therapeutica synthetica: Scientia et mercatus. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida therapeutica synthetica: Scientia et mercatus.Vliege P, Lisowski V, Martinez J et Chreschatyski M. Peptida therapeutica synthetica: scientia et mercatus.Vliege P, Lisowski V, Martinez J et Khreschatsky M. Peptida therapeutica synthetica: scientia et mercatus. Inventio medicamentorum. Hodie 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD et Shen, Y. Chromatographia liquida proteomica provecta. Xie, F., Smith, RD et Shen, Y. Chromatographia liquida proteomica provecta.Vide F., Smith RD et Shen Yu. Chromatographia liquida proteomica provecta. XIe, F., Smith, RD & Shen, Y. XIe, F., Smith, RD & Sen, Y. Provectus interdum compositioneVide F., Smith RD et Shen Yu. Chromatographia liquida proteomica provecta.J. Chromatographia. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Chromatographia liquida provecta cum spectrometria massae metabolomicam et proteomicam latam coniungere potest. *Anus*. Acta Chim. 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM et Salisbury, JJ. Munus UHPLC in evolutione pharmaceutica. Chesnut, SM et Salisbury, JJ. Munus UHPLC in evolutione pharmaceutica.Chesnut, SM et Salisbury, JJ. Munus UHPLC in evolutione pharmaceutica.Chesnut, SM et Salisbury, JJ. Munus UHPLC in evolutione medicamentorum. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. et Clausen, AM. Aspectus fundamentales et practici chromatographiae liquidae pressionis ultraaltae ad separationes celeres. Wu, N. et Clausen, AM. Aspectus fundamentales et practici chromatographiae liquidae pressionis ultraaltae ad separationes celeres.Wu, N. et Clausen, AM. Aspectus fundamentales et practici chromatographiae liquidae altae pressionis ad separationem rapidam. Wu, N. & Clausen, AM Wu, N. et Clausen, AM. Aspectus fundamentales et practici chromatographiae liquidae sub pressione ultra-altissima ad separationem rapidam.Wu, N. et Clausen, AM. Aspectus fundamentales et practici chromatographiae liquidae altae pressionis ad separationem rapidam.*J. Sept. Scientia* 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA et Tchelitcheff, P. Usus chromatographiae liquidae ultra-efficacitatis in evolutione pharmaceutica. Wren, SA et Tchelitcheff, P. Usus chromatographiae liquidae ultra-efficacitatis in evolutione pharmaceutica.Ren, SA et Chelischeff, P. Usus chromatographiae liquidae ultra-altissimae perfunctionis in evolutione pharmaceutica. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Wren, SA et Tchelitcheff, P.Ren, SA et Chelischeff, P. Applicatio chromatographiae liquidae ultra-performantis in evolutione medicamentorum.J. Chromatographia. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Hydrogel macroporosum monolithicum, ex emulsione olei in aqua derivatum, cum phase interna alta, ad purificationem efficientem enterovirus 71. *Chemical project*. Journal 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA. Munus chromatographiae liquidae in proteomica. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA. Munus chromatographiae liquidae in proteomica.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. et Wilkins, JA. Munus chromatographiae liquidae in proteomica. Shi, Y., Xiang, R. Horváth, C. & Wilkins, JA Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. et Wilkins, JA. Munus chromatographiae liquidae in proteomica.J. Chromatographia. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. (or, more literally: ...Vutey, J.-L.) & Guillarme, D. Novae inclinationes in separationibus chromatographicis liquidis phasis inversae peptidum et proteinorum therapeuticorum: Theoria et applicationes. & Guillarme, D. Novae inclinationes in separationibus chromatographicis liquidis phasis inversae peptidum et proteinorum therapeuticorum: Theoria et applicationes. & Guillarme, D. овые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью идкостнот раааснотг раааснотой раааов азой: теория и приложения. & Guillarme, D. Novae inclinationes in separatione peptidum therapeuticorum et proteinorum per chromatographiam liquidam phasis inversae: theoria et applicationes. & Guillarme, D. & Guillarme, D.et Guillarmé, D. Novae inclinationes in separatione peptidum therapeuticorum et proteinorum per chromatographiam liquidam phasis inversae: theoria et applicationes.J. Pharm. Scientia Biomedica. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC. Separatio bidimensionalis peptidum utens systemate RP-RP-HPLC cum pH diverso in prima et secunda dimensione separationis. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC. Separatio bidimensionalis peptidum utens systemate RP-RP-HPLC cum pH diverso in prima et secunda dimensione separationis.Gilar M., Olivova P., Dali AE et Gebler JK. Separatio bidimensionalis peptidum utens systemate RP-RP-HPLC cum pH diverso in prima et secunda dimensione separationis.Gilar M., Olivova P., Dali AE et Gebler JK. Separatio bidimensionalis peptidorum utens diversis valoribus pH in prima et secunda dimensione separationis utens systemate RP-RP-HPLC. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Investigatio translationis massae et proprietatum cineticarum columnarum chromatographicarum altae efficaciae, particulis C18 plene porosis et superficialiter porosis minoribus quam 2 µm repletis. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. *Recentes inclinationes et provocationes analyticae in isolatione, identificatione, et validatione peptidum bioactivorum plantarum*. *Anus*. *Creature Anal*. *Chemica*. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Protomica regni vitae. *Natura* 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. *Post-curationem peptidorum therapeuticorum per chromatographiam liquidam praeparativam*. *Molecules* (Basel, Helvetia) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. et Geng, X. Chromatographia modi mixti et applicationes eius ad biopolymera. Yang, Y. et Geng, X. Chromatographia modi mixti et applicationes eius ad biopolymera.Yang, Yu. et Geng, X. Chromatographia modi mixti et eius applicatio ad biopolymera. Yang, Y. & Geng, X. Yang, Y. et Geng, X. Chromatographia modi mixti et eius applicatio in biopolymeris.Yang, Yu. et Gene, X. Chromatographia modi mixti et eius applicatio ad biopolymera.J. Chromatographia. A 1218(49), 8813–8825 (2011).