Matur nuwun kanggo ngunjungi Nature.com. Sampeyan nggunakake versi browser kanthi dhukungan CSS winates. Kanggo pengalaman paling apik, disaranake sampeyan nggunakake browser sing dianyari (utawa mateni Mode Kompatibilitas ing Internet Explorer). Kajaba iku, kanggo njamin dhukungan sing terus-terusan, kita nuduhake situs kasebut tanpa gaya lan JavaScript.
Nampilake carousel telung slide bebarengan. Gunakake tombol Sadurungé lan Sabanjure kanggo pindhah liwat telung minger bebarengan, utawa nggunakake tombol panggeser ing mburi kanggo pindhah liwat telung minger bebarengan.
Partikel silika keropos disiapake kanthi metode sol-gel kanthi sawetara modifikasi kanggo entuk partikel pori sing amba. Partikel-partikel kasebut diturunake karo N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) lan stirena liwat polimerisasi transfer-fragmentasi rantai terbalik (RAFT) kanggo ngasilake poliamida interkalasi N-phenylmaleimide. Styrene (PMP) fase diam. Kolom baja tahan karat sing sempit (diameter njero 100 × 1,8 mm) dikempalken nganggo kemasan slurry. Kinerja kromatografi kolom PMP dievaluasi kanggo misahake campuran peptida sintetik sing kasusun saka limang peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu asam amino enkephalin) lan tryptic hydrolyzate (HASrum serum manungsa). Ing kondisi elusi optimal, nomer teoritis saka piring karo campuran peptida tekan 280.000 piring / sq.m. Mbandhingake kinerja pamisahan kolom sing dikembangake karo kolom komersial Ascentis Express RP-Amide, diamati yen efisiensi pemisahan kolom PMP luwih unggul tinimbang kolom komersial babagan efisiensi lan resolusi pemisahan.
Industri biopharmaceutical wis dadi pasar global sing berkembang kanthi paningkatan pangsa pasar ing taun-taun pungkasan. Kanthi wutah mbledhos industri biopharmaceutical1,2,3 ana kabutuhan gedhe kanggo analisis peptida lan protein. Saliyane peptida target, macem-macem impurities dibentuk sajrone sintesis peptida, mula pemurnian kromatografi dibutuhake kanggo entuk kemurnian peptida sing dikarepake. Analisis lan karakterisasi protein ing cairan awak, jaringan, lan sel minangka tugas sing angel banget amarga akeh spesies sing bisa dideteksi ing sampel siji. Sanajan spektrometri massa minangka alat sing efektif kanggo ngurutake peptida lan protein, yen conto kasebut langsung dilebokake ing spektrometer massa, pemisahan kasebut bakal ora kepenak. Masalah iki bisa ditanggulangi kanthi nindakake kromatografi cair (LC) sadurunge analisis MS, sing bakal nyuda jumlah analit sing mlebu spektrometer massa ing wektu tartamtu4,5,6. Kajaba iku, analit bisa konsentrasi ing wilayah sing sempit sajrone pamisahan fase cair, saéngga konsentrasi analit kasebut lan nambah sensitivitas deteksi MS. Kromatografi cair (LC) wis maju sacara signifikan sajrone dasawarsa kepungkur lan wis dadi cara sing akeh digunakake kanggo analisis proteomik7,8,9,10.
Kromatografi cair fase terbalik (RP-LC) akeh digunakake kanggo ngresiki lan misahake campuran peptida nggunakake silika sing dimodifikasi octadecyl (ODS) minangka fase stasioner11,12,13. Nanging, amarga struktur kompleks lan sifat amphoter, 14,15 RP fase stasioner ora bisa nyedhiyakake pamisahan peptida lan protein sing cukup. Mula, analisis peptida lan protein kanthi fragmen polar lan non-polar mbutuhake fase stasioner sing dirancang khusus kanggo interaksi lan nahan analit kasebut16. Kromatografi campuran, sing nawakake interaksi multimodal, bisa dadi alternatif kanggo RP-LC kanggo misahake peptida, protein, lan campuran kompleks liyane. Sawetara fase stasioner campuran disiapake lan kolom sing diisi karo fase stasioner iki digunakake kanggo misahake peptida lan protein17,18,19,20,21. Amarga anané gugus polar lan non-polar, fase stasioner mode campuran (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, interkalasi polar / RPLC) cocok kanggo pamisahan peptida lan protein22,23,24,25,26,27,28. , fase stasioner interkalasi polar kanthi gugus polar ikatan kovalen nuduhake kemampuan pamisahan sing apik lan selektivitas unik kanggo analit polar lan non-polar amarga pamisahan gumantung ing interaksi antarane analit lan fase stasioner Interaksi multimodal 29,30,31,32. Bubar, Zhang et al. 30 entuk fase stasioner poliamina sing diakhiri behenyl lan kasil misahake hidrokarbon, antidepresan, flavonoid, nukleosida, estrogen, lan sawetara analit liyane. Bahan stasioner sing dipasang ing polar duwe gugus polar lan non-polar, saengga bisa digunakake kanggo misahake peptida lan protein dadi bagean hidrofobik lan hidrofilik. Kolom inline polar (contone, kolom C18 karo inline amida) kasedhiya kanthi jeneng dagang kolom Ascentis Express RP-Amide, nanging kolom iki mung digunakake kanggo analisis amina 33.
Ing panaliten saiki, fase stasioner embedding polar (N-phenylmaleimide, embedding polystyrene) disiapake lan dievaluasi kanggo pamisahan peptida lan pembelahan HSA tryptic. Strategi ing ngisor iki digunakake kanggo nyiapake fase stasioner. Partikel silika keropos disiapake miturut prosedur sing diterangake ing publikasi sadurunge, kanthi sawetara owah-owahan ing skema persiapan 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Rasio urea, polietilen glikol (PEG), TMOS lan asam aqueous-acetic diatur kanggo entuk partikel ukuran silika kanthi ukuran pori gedhe. Kapindho, ligan phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate anyar disintesis lan partikel silika sing diturunake digunakake kanggo nyiapake fase stasioner polar. Fase stasioner sing dipikolehi dikemas menyang kolom baja tahan karat (diameter jero 100 × 1,8 mm) miturut skema pengepakan sing dioptimalake. Pengepakan kolom dibantu dening getaran mekanik kanggo njamin lapisan seragam ing kolom. Kolom sing dikemas dievaluasi kanggo pamisahan campuran peptida sing dumadi saka limang peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, peptida leucine-enkephalin). lan hidrolisat tryptic saka albumin serum manungsa (HSA). Diamati manawa campuran peptida lan pencernaan HSA tryptic dipisahake kanthi resolusi lan efisiensi sing apik. Efisiensi pamisahan kolom PMP dibandhingake karo kolom Ascentis Express RP-Amide. Diamati manawa peptida lan protein duwe resolusi sing apik lan efisiensi pemisahan sing dhuwur ing kolom PMP, lan efisiensi pemisahan kolom PMP luwih dhuwur tinimbang kolom Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polietilen glikol), urea, asam asetat, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimetilchlorosilane (TMCS), tripsin, albumin serum manungsa (HSA), amonium klorida, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), metacryloyl chloride (MC4-, BP4-Oxide), styrene, asetonitril (ACN) kanggo HPLC, metanol, 2-propanol lan aseton. Sigma-Aldrich Company (St. Louis, Missouri, USA).
Campuran urea (8 g), polietilen glikol (8 g) lan 8 ml 0,01 N. asam asetat diaduk nganti 10 menit, lan 24 ml TMOS ditambahake ing ngisor pendinginan es. Campuran reaksi dipanasake ing 40 ° C suwene 6 jam lan banjur ing 120 ° C suwene 8 jam ing autoklaf stainless steel. Banyu dibuwang lan ampas dikeringake ing suhu 70 ° C suwene 12 jam. Blok alus sing garing digiling kanthi lancar lan dikalsinasi ing oven kanthi suhu 550 ° C suwene 12 jam. Telung batch disiapake lan ditondoi kanggo nguji reproduksibilitas ukuran partikel, ukuran pori lan area permukaan.
Kelompok polar lan fase stasioner kanggo rantai polystyrene. Tata cara nyiapake diterangake ing ngisor iki.
N-phenylmaleimide (200 mg) lan metil vinyl isocyanate (100 mg) dibubarake ing toluene anhydrous, lan banjur 0,1 ml 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ditambahake ing labu reaksi kanggo entuk kopolimer phenylmaleimide lan methylPMCP isocyanate. ) Campuran kasebut digawe panas ing 60 ° C suwene 3 jam, disaring lan garing ing oven kanthi suhu 40 ° C suwene 3 jam.
Pepe silika partikel (2 g) padha buyar ing toluene garing (100 ml), diudhek lan sonicated kanggo 10 menit ing 500 ml babak labu ngisor. PMCP (10 mg) dibubarake ing toluene lan ditambahake dropwise menyang labu reaksi liwat corong tambahan. Campuran kasebut refluks ing 100 ° C suwene 8 jam, disaring, dicuci nganggo aseton lan dikeringake ing suhu 60 ° C suwene 3 jam. Banjur, partikel silika sing digandhengake karo PMCP (100 g) dibubarake ing toluene (200 ml), lan 4-hidroksi-TEMPO (2 ml) ditambahake ing ngarsane 100 μl dibutyltin dilaurate minangka katalis. Campuran kasebut diaduk ing suhu 50 ° C suwene 8 jam, disaring lan garing ing suhu 50 ° C suwene 3 jam.
Styrene (1 ml), benzoil peroksida BPO (0,5 ml) lan partikel silika sing ditempelake ing TEMPO-PMCP (1,5 g) dibubarake ing toluene lan diresiki nganggo nitrogen. Polimerisasi stirena ditindakake ing 100 ° C suwene 12 jam. Produk sing diasilake dikumbah nganggo metanol lan dikeringake sewengi ing suhu 60 ° C. Skema umum reaksi ditampilake ing anjir. siji.
Sampel kasebut degassed ing 393 K suwene 1 jam nganti tekanan sisa kurang saka 10-3 Torr dijupuk. Jumlah N2 adsorbed ing tekanan relatif P / P0 = 0,99 digunakake kanggo nemtokake volume pori total. Morfologi partikel silika murni lan ligan ditliti nggunakake mikroskop elektron scanning (Hitachi High Technologies, Tokyo, Jepang). Sampel garing (silika murni lan partikel silika terikat ligan) dilebokake ing rod aluminium nggunakake pita karbon. Emas disimpen ing sampel nggunakake piranti sputtering Q150T, lan lapisan Au kandel 5 nm disimpen ing sampel. Iki nambah efisiensi proses voltase kurang lan nyedhiyakake uyuh kadhemen sing apik. Analisis unsur ditindakake kanthi nggunakake Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 analisa komposisi unsur. Penganalisa ukuran partikel Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 digunakake kanggo entuk distribusi ukuran partikel. Partikel silika uncoated lan partikel silika ligan-bound (5 mg saben) padha buyar ing 5 ml isopropanol, sonicated kanggo 10 menit, agitated kanggo 5 menit, lan diselehake ing bench optik Mastersizer. Analisis termogravimetri ditindakake kanthi kecepatan 5 °C saben menit ing sawetara suhu saka 30 nganti 800 °C.
Serat kaca dilapisi kolom baja tahan karat sempit kanthi dimensi (ID 100 × 1,8 mm) dikempalken kanthi cara ngisi slurry miturut prosedur sing padha karo referensi 31. Kolom baja tahan karat (dilapisi kaca, ID 100 × 1,8 mm) lan stopkontak sing ngemot frit 1 µm disambungake menyang mesin pengepakan slurry, De USA). Siapke suspensi fase stasioner kanthi nundha 150 mg fase stasioner ing 1,2 ml metanol lan dilebokake ing kolom reservoir. Metanol digunakake minangka pelarut slurry lan pelarut kontrol. Kemas kolom kanthi ngetrapake urutan tekanan 100 MP sajrone 10 menit, 80 MP sajrone 15 menit, lan 60 MP sajrone 30 menit. Proses pengepakan nggunakake rong vibrator kolom kromatografi gas (Alltech, Deerfield, IL, USA) kanggo geter mekanik kanggo njamin pengepakan kolom seragam. Nutup packer slurry lan ngeculake tekanan alon-alon kanggo nyegah karusakan ing senar. Kolom kasebut dicopot saka nozzle slurry lan fitting liyane dipasang ing inlet lan disambungake menyang sistem LC kanggo nyoba operasi.
MLC adat dibangun kanthi nggunakake pompa LC (10AD Shimadzu, Jepang), sampler kanthi loop injeksi 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), degasser membran (Shimadzu DGU-14A), lan jendela kapiler UV-VIS. Piranti detektor (UV-2075) lan microcolumn enamelled. Gunakake tabung sambungan sing sempit lan cendhak kanggo nyuda efek ekspansi kolom tambahan. Sawise ngisi kolom, pasang kapiler (50 µm id 365) ing stopkontak persimpangan 1/16″ lan pasang kapiler (50 µm) saka persimpangan pengurangan. Pangumpulan data lan pangolahan kromatogram ditindakake nggunakake piranti lunak Multichro 2000. Ing 254 nm, penyerapan UV saka analit subyek dipantau ing 0. Data kromatografi dianalisis nggunakake OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin serum manungsa, bubuk lyophilized, ≥ 96% (elektroforesis gel agarose) 3 mg dicampur karo tripsin (1,5 mg), 4,0 M urea (1 ml) lan 0,2 M amonium bikarbonat (1 ml). Solusi kasebut diaduk nganti 10 menit lan disimpen ing adus banyu ing suhu 37 ° C suwene 6 jam, banjur dipateni kanthi 1 ml TFA 0,1%. Saring solusi lan simpen ing ngisor 4 ° C.
Pemisahan campuran peptida lan tryptic digest HSA ing kolom PMP dievaluasi kanthi kapisah. Priksa hidrolisis tryptic saka campuran peptida lan HSA sing dipisahake dening kolom PMP lan mbandhingake asil karo kolom Ascentis Express RP-Amide. Jumlah piring teoretis diwilang nggunakake persamaan ing ngisor iki:
Gambar SEM partikel silika murni lan partikel silika terikat ligan ditampilake ing Gambar 2. Gambar SEM partikel silika murni (A, B) nuduhake wangun bunder sing partikel kasebut elongated utawa duwe simetri ora duwe aturan baku dibandhingake karo pasinaon sadurunge. Lumahing partikel silika sing kaiket ligan (C, D) luwih alus tinimbang partikel silika murni, sing bisa uga amarga rantai polistirena sing nutupi permukaan partikel silika.
Mikrograf elektron scanning partikel silika murni (A, B) lan partikel silika terikat ligan (C, D).
Distribusi ukuran partikel partikel silika murni lan partikel silika terikat ligan dituduhake ing Gambar 2. 3(A). Kurva distribusi ukuran partikel volumetrik nuduhake yen ukuran partikel silika mundhak sawise modifikasi kimia (Gbr. 3A). Data distribusi ukuran partikel silika saka panliten saiki lan panliten sadurunge dibandhingake ing Tabel 1(A). Ukuran partikel volumetrik d(0,5) PMP yaiku 3,36 µm, dibandhingake karo nilai ad(0,5) 3,05 µm ing panliten sadurunge (partikel silika berikat polistirena)34. Amarga owah-owahan rasio PEG, urea, TMOS lan asam asetat ing campuran reaksi, distribusi ukuran partikel saka kumpulan iki luwih sempit tinimbang sinau sadurunge. Ukuran partikel fase PMP luwih gedhe tinimbang fase partikel silika sing diikat polistirena sing kita sinau sadurunge. Iki tegese fungsionalisasi permukaan partikel silika kanthi stirena mung disimpen ing lapisan polistirena (0,97 µm) ing permukaan silika, dene ing fase PMP ketebalan lapisan 1,38 µm.
Distribusi ukuran partikel (A) lan distribusi ukuran pori (B) partikel silika murni lan partikel silika terikat ligan.
Ukuran pori, volume pori, lan luas permukaan partikel silika sing digunakake ing panliten iki ditampilake ing Tabel 1 (B). Profil PSD partikel silika murni lan partikel silika terikat ligan ditampilake ing Fig. 3 (B). Asil kasebut bisa dibandhingake karo panliten sadurunge34. Ukuran pori saka partikel silika murni lan ligan-bound padha 310 Å lan 241 Å, nuduhake yen sawise modifikasi kimia, ukuran pori suda dening 69 Å, minangka ditampilake ing Tabel 1 (B), lan kurva shift ditampilake ing Fig. Area lumahing tartamtu saka partikel silika ing sinau saiki kita 116 m2 (116 m2). m2/g). Kaya sing dituduhake ing Tabel 1 (B), area permukaan (m2 / g) partikel silika sawise modifikasi kimia uga mudhun saka 116 m2 / g dadi 105 m2 / g.
Asil analisis unsur fase stasioner ditampilake ing Tabel. 2. Isi karbon saka fase stasioner saiki yaiku 6,35%, sing luwih murah tinimbang ing panliten sadurunge (partikel silika sing ana gandhengane karo polistirena, masing-masing 7,93% 35 lan 10,21%) 42. Isi karbon saka fase stasioner saiki ing ngisor iki, amarga sawetara ligan polar kayata phenylmaleimide methylMP-vinil isocyanate lan O4-PC digunakake minangka tambahan methylMP vinil isocyanate. styrene ing preparation saka SP. Persentase bobot nitrogen ing fase stasioner saiki yaiku 2,21% dibandhingake karo 0,1735 lan 0,85% ing studi sadurunge42. Iki tegese fase stasioner saiki nduweni persentase bobot nitrogen sing dhuwur amarga phenylmaleimide. Kajaba iku, produk (4) lan (5) duwe kandungan karbon masing-masing 2,7% lan 2,9%, dene produk akhir (6) nduweni kandungan karbon 6,35%, kaya sing dituduhake ing Tabel 2. Analisis termogravimetri (TGA) digunakake ing fase stasioner PMP kanggo nguji bobot awak, lan kurva TGA ditampilake ing Gambar 6. sing cocog karo kandungan karbon (6,35%), amarga ligan ora mung ngemot C, nanging uga N, O lan H.
Ligan phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate dipilih kanggo ngowahi permukaan partikel silika amarga gugus polar phenylmaleimide lan vinylisocyanate. Gugus isosianat vinil bisa luwih bereaksi karo stirena kanthi polimerisasi radikal sing urip. Alesan kapindho yaiku nglebokake klompok sing duwe interaksi moderat karo analit lan ora ana interaksi elektrostatik sing kuat antarane analit lan fase stasioner, amarga bagean phenylmaleimide ora duwe muatan virtual ing pH normal. Polaritas fase stasioner bisa dikontrol kanthi jumlah stirena sing optimal lan wektu reaksi polimerisasi radikal bebas. Langkah pungkasan saka reaksi (polimerisasi radikal bebas) penting amarga ngganti polaritas fase stasioner. Analisis unsur ditindakake kanggo mriksa kandungan karbon ing fase stasioner kasebut. Wis diamati yen nambah jumlah stirena lan wektu reaksi nambah isi karbon fase stasioner lan kosok balene. SP sing disiapake kanthi konsentrasi stirena sing beda duwe beban karbon sing beda. Kajaba iku, fase stasioner iki dilebokake ing kolom baja tahan karat lan karakteristik kromatografi (selektifitas, resolusi, nilai N, lan liya-liyane) dicenthang. Adhedhasar eksperimen kasebut, komposisi sing dioptimalake kanggo nyiapake fase stasioner PMP dipilih kanggo nyedhiyakake polaritas sing dikontrol lan retensi analit sing apik.
Kolom PMP uga dievaluasi kanggo analisis limang campuran peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) nggunakake kapasitas fase seluler. 60/40 (v/v) ACN/banyu (0,1% TFA) kanthi laju aliran 80 µl/min. Ing kondisi elusi optimal (200.000 piring / m), jumlah piring teoritis (N) saben kolom (100 × 1,8 mm) yaiku 20.000 ± 100. Nilai N kanggo telung kolom PMP ditampilake ing Tabel 3 lan kromatogram ditampilake ing Gambar 5A. Analisis cepet ing tingkat aliran dhuwur (700 µl / min) ing kolom PMP, limang peptida eluted ing siji menit, nilai N banget 13.500 ± 330 saben kolom (diameteripun 100 x 1.8 mm), padha karo 135.000 piring / m (Fig. 5B). Telung kolom kanthi ukuran sing padha (diameter jero 100 x 1,8 mm) diisi karo telung macem-macem fase stasioner PMP kanggo nguji reproduksibilitas. Analit dicathet kanggo saben kolom kanthi misahake campuran tes sing padha ing saben kolom kanthi nggunakake kondisi elusi optimal, jumlah piring teoritis N, lan wektu retensi. Data reproduksibilitas kolom PMP ditampilake ing Tabel 4. Reproduksibilitas kolom PMP ana hubungane kanthi apik karo nilai %RSD sing sithik banget kaya sing ditampilake ing Tabel 3.
Pemisahan campuran peptida ing kolom PMP (B) lan kolom Ascentis Express RP-Amide (A), fase gerak 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), dimensi kolom PMP (100 x 1,8 mm id), analisis Urutan elusi senyawa: 1 (Gly-Tyr), 3-U (Gly-Tyr) (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) lan 5 (enkephalin asam leucic).
Kolom PMP (diameter jero 100 x 1.8 mm) dievaluasi kanggo pamisahan hidrolisat tryptic albumin serum manungsa dening HPLC. Kromatogram ing Figure 6 nuduhake yen sampel dipisahake kanthi resolusi sing apik banget. Solusi HSA dianalisis kanthi nggunakake laju aliran 100 μl / min, fase seluler 70/30 asetonitril / banyu lan 0,1% TFA. Pembelahan HSA dipérang dadi 17 puncak, kaya sing ditampilake ing kromatogram (Gambar 6), cocog karo 17 peptida. Efisiensi pamisahan puncak individu saka hidrolisat HSA diitung lan nilai kasebut ditampilake ing Tabel 5.
Hidrolisat tryptic HSA dipisahake ing kolom PMP (diameter njero 100 x 1,8 mm), laju aliran (100 μl / min), fase gerak 60/40 asetonitril / banyu, lan 0,1% TFA.
ing ngendi L yaiku dawa kolom, η minangka viskositas fase gerak, ΔP minangka tekanan mburi kolom, lan u minangka kecepatan linier fase gerak. Permeabilitas kolom PMP yaiku 2,5 × 10-14 m2, laju aliran 25 µl / min, 60/40 v / v digunakake. ACN / banyu. Permeabilitas kolom PMP (ID 100 × 1.8 mm) padha karo sinau Ref.34 sadurunge. Permeabilitas kolom sing diisi partikel superfisial keropos yaiku 1,7 × 10 ,6 µm, 2,5 × 10-14 m2 kanggo partikel 5 µm43. Mulane, permeabilitas fase PMP padha karo permeabilitas partikel cangkang inti kanthi ukuran 5 μm.
ing ngendi Wx yaiku massa kolom sing diisi kloroform, Wy yaiku massa kolom sing diisi metanol, lan ρ minangka kerapatan pelarut. Kapadhetan metanol (ρ = 0,7866) lan kloroform (ρ = 1,484). Porositas total kolom partikel silika-C18 (ID 100 × 1,8 mm)34 lan kolom C18-urea31 sing wis diteliti sadurunge yaiku 0,63 lan 0,55. Iki tegese anané ligan urea nyuda permeabilitas fase stasioner. Ing sisih liya, porositas total kolom PMP (diameter jero 100 × 1,8 mm) yaiku 0,60. Kolom PMP kurang permeabel tinimbang kolom sing dikemas karo partikel silika terikat C18 amarga ing fase stasioner tipe C18 ligan C18 ditempelake ing partikel silika ing rantai linear, nalika ing fase stasioner jinis polistirena dibentuk polimer sing relatif kandel ing saubengé partikel. lapisan A. Ing eksperimen khas, porositas kolom diitung kaya ing ngisor iki:
Ing anjir. 7A, B nuduhake plot Van Deemter kanggo kolom PMP (id 100 x 1,8 mm) lan kolom Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1,8 mm) ing kondisi elusi sing padha, 60/40 ACN/H2O lan 0 .1% TFA 20 µl/min nganti 80 µl/min kanggo loro kolom. Nilai HETP minimal ing tingkat aliran optimal (80 µl/min) yaiku 2.6 µm lan 3.9 µm kanggo kolom PMP lan kolom Ascentis Express RP-Amide. Nilai HETP nuduhake yen efisiensi pamisahan kolom PMP (100 x 1.8 mm id) luwih dhuwur tinimbang kolom Ascentis Express RP-Amide sing kasedhiya ing komersial (100 x 1.8 mm id). Graf van Deemter ing Fig.. 7 (A) nuduhake yen nyuda ing Nilai N ora Ngartekno luwih karo nambah aliran dibandhingake kita sinau sadurungé. Efisiensi pamisahan sing luwih dhuwur saka kolom PMP (id 100 × 1,8 mm) dibandhingake karo kolom Ascentis Express RP-Amide adhedhasar wangun lan ukuran partikel sing luwih apik lan prosedur pengepakan kolom canggih sing digunakake ing karya saiki34.
(A) plot Van Deemter (HETP vs. mobile phase linear velocity) dijupuk ing kolom PMP (id 100 x 1,8 mm) ing 60/40 ACN / H2O karo 0,1% TFA. (B) plot Van Deemter (HETP versus mobile phase linear velocity) dijupuk ing kolom Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1,8 mm) ing 60/40 ACN / H2O karo 0,1% TFA.
Fase stasioner polar saka polystyrene interkalasi disiapake lan dievaluasi kanggo misahake campuran peptida sintetik lan hidrolisat tryptic albumin serum manungsa (HSA) ing kromatografi cair kinerja dhuwur. Kinerja kromatografi kolom PMP kanggo campuran peptida apik banget babagan efisiensi lan resolusi pamisahan. Efisiensi pamisahan kolom PMP sing luwih apik amarga sawetara alasan kayata ukuran partikel silika lan ukuran pori, sintesis fase stasioner sing dikontrol, lan bahan pengepakan kolom sing kompleks. Saliyane efisiensi pamisahan sing dhuwur, kauntungan liyane saka fase stasioner iki yaiku tekanan bali kolom sing kurang ing tingkat aliran sing dhuwur. Kolom PMP bisa direproduksi banget lan bisa digunakake kanggo nganalisa campuran peptida lan pencernaan tryptic saka macem-macem protein. Kita arep nggunakake kolom iki kanggo misahake senyawa bioaktif saka produk alami, ekstrak tanduran obat lan jamur ing kromatografi cair. Ing mangsa ngarep, kolom PMP uga bakal dievaluasi kanggo pamisahan protein lan antibodi monoklonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation menyang sistem pamisahan peptida kromatografi fase mbalikke part I: Pangembangan protokol kanggo karakterisasi kolom. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation menyang sistem pamisahan peptida kromatografi fase mbalikke part I: Pangembangan protokol kanggo karakterisasi kolom.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., lan Petersson, P. Investigation of Peptide Separation Systems by Reverse-Phase Chromatography, Part I: Ngembangake Protokol kanggo Karakterisasi Kolom. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation menyang sistem pamisahan peptida kromatografi fase mbalikke part I: Pangembangan protokol kanggo karakteristik kolom. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigation menyang sistem pamisahan peptida kromatografi fase mbalikke part I: Pangembangan protokol kanggo karakteristik kolom.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., lan Petersson, P. Investigation of Peptide Separation Systems by Reverse-Phase Chromatography, Part I: Ngembangake Protokol kanggo Karakterisasi Kolom.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. Cara nggawe peptida aktif sing luwih apik kanggo perawatan penyakit infèksius. Bioteknologi. Prestasi 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida terapeutik sintetis: Ilmu lan pasar. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida terapeutik sintetis: Ilmu lan pasar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J lan Chreschatyski M. Peptida terapeutik sintetis: ilmu lan pasar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J lan Khreschatsky M. Peptida terapeutik sintetis: ilmu lan pasar. panemuan tamba. Dina iki 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi cair proteomik lanjut. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi cair proteomik lanjut.Deleng F., Smith RD lan Shen Yu. Kromatografi Cairan Proteomik Lanjut. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Komposisi protein lanjutan 液相色谱。Deleng F., Smith RD lan Shen Yu. Kromatografi Cairan Proteomik Lanjut.J. Kromatografi. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Spektrometri massa kromatografi cair sing canggih bisa nggabungake metabolomik lan proteomik sing amba. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peranan UHPLC ing pangembangan farmasi. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peranan UHPLC ing pangembangan farmasi.Chesnut, SM lan Salisbury, JJ Peranan UHPLC ing pangembangan farmasi.Chesnut, SM lan Salisbury, JJ Peranan UHPLC ing pangembangan obat. J. Septya Ilmu. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan ultrahigh kanggo pamisahan cepet. Wu, N. & Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan ultrahigh kanggo pamisahan cepet.Wu, N. lan Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan dhuwur kanggo pamisahan kanthi cepet. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan ultra-dhuwur kanggo pamisahan kanthi cepet.Wu, N. lan Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan dhuwur kanggo pamisahan kanthi cepet.J. Septian Ilmu. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Panggunaan kromatografi cair ultra-kinerja ing pangembangan farmasi. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Panggunaan kromatografi cair ultra-kinerja ing pangembangan farmasi.Ren, SA lan Chelischeff, P. Panggunaan kromatografi Cairan kinerja ultra dhuwur ing pembangunan pharmaceutical. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA lan Chelischeff, P. Aplikasi kromatografi cair ultra-kinerja ing pangembangan obat.J. Kromatografi. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Hidrogel macroporous monolitik sing asalé saka emulsi lenga-ing-banyu kanthi fase internal dhuwur kanggo pemurnian enterovirus sing efisien 71. Kimia. proyek. Jurnal 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peran kromatografi cair ing proteomik. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peran kromatografi cair ing proteomik.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. lan Wilkins, JA Peran kromatografi cair ing proteomik. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. lan Wilkins, JA Peran kromatografi cair ing proteomik.J. Kromatografi. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Tren anyar ing pamisahan kromatografi cair fase terbalik saka peptida lan protein terapeutik: Teori lan aplikasi. & Guillarme, D. Tren anyar ing pamisahan kromatografi cair fase terbalik saka peptida lan protein terapeutik: Teori lan aplikasi. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографира хроматографира теория lan приложения. & Guillarme, D. Tren anyar ing pamisahan peptida terapeutik lan protein dening kromatografi cair fase mbalikke: teori lan aplikasi. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.lan Guillarmé, D. Tren anyar ing pamisahan peptida terapeutik lan protein kanthi kromatografi cair fase mbalikke: teori lan aplikasi.J. Pharm. Ilmu Biomedik. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Pemisahan peptida rong dimensi nggunakake sistem RP-RP-HPLC kanthi pH beda ing dimensi pamisahan pisanan lan kapindho. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Pemisahan peptida rong dimensi nggunakake sistem RP-RP-HPLC kanthi pH beda ing dimensi pamisahan pisanan lan kapindho.Gilar M., Olivova P., Dali AE lan Gebler JK Pemisahan peptida rong dimensi nggunakake sistem RP-RP-HPLC kanthi pH beda ing dimensi pamisahan pisanan lan kaloro.Gilar M., Olivova P., Dali AE lan Gebler JK Pemisahan peptida rong dimensi nggunakake nilai pH sing beda ing dimensi pamisahan pisanan lan kaloro nggunakake sistem RP-RP-HPLC. J. Septya Ilmu. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Penyelidikan babagan transfer massa lan karakteristik kinetik kolom kromatografi kinerja dhuwur sing dikemas kanthi partikel C18 keropos lan superfisial keropos sing luwih cilik tinimbang 2 µm. J. Septya Ilmu. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Tren anyar lan tantangan analitis ing isolasi, identifikasi, lan validasi peptida bioaktif tanduran. anus. Dubur makhluk. Kimia. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Landskap proteomik saka karajan urip. Alam 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. Pasca-perawatan peptida terapeutik kanthi kromatografi cair preparatif. Molekul (Basel, Swiss) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasi kanggo biopolimer. Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasi kanggo biopolimer.Yang, Yu. lan Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasi kanggo biopolimer. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasi ing biopolimer.Yang, Yu. lan Gene, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasi kanggo biopolimer.J. Kromatografi. A 1218(49), 8813–8825 (2011).