Matur nuwun sampun ngunjungi Nature.com. Panjenengan ngginakaken versi browser kanthi dhukungan CSS winates. Kanggo pengalaman paling apik, disaranake panjenengan ngginakaken browser ingkang sampun dianyari (utawi mateni Mode Kompatibilitas ing Internet Explorer). Salajengipun, kangge njamin dhukungan ingkang terus-terusan, kita nampilaken situs tanpa gaya lan JavaScript.
Nampilake korsel telung slide sekaligus. Gunakake tombol Sadurunge lan Sabanjure kanggo pindhah ing telung slide sekaligus, utawa gunakake tombol slider ing pungkasan kanggo pindhah ing telung slide sekaligus.
Partikel silika berpori disiapake kanthi metode sol-gel kanthi sawetara modifikasi kanggo entuk partikel pori-pori amba. Partikel-partikel iki diderivatisasi karo N-phenylmaleimide-metilvinil isosianat (PMI) lan stirena liwat polimerisasi transfer-fragmentasi rantai terbalik (RAFT) kanggo ngasilake poliamida interkalasi N-phenylmaleimide. Fase diam Stirena (PMP). Kolom baja tahan karat bore sempit (diameter njero 100 × 1,8 mm) dikemas nganggo kemasan bubur. Kinerja kromatografi kolom PMP dievaluasi kanggo misahake campuran peptida sintetik sing kasusun saka limang peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, asam amino Leu enkephalin) lan hidrolisat triptik albumin serum manungsa (HAS). Ing kahanan elusi optimal, jumlah teoretis piring kanthi campuran peptida tekan 280.000 piring/m². Nalika mbandhingaké kinerja pamisahan kolom sing dikembangake karo kolom Ascentis Express RP-Amide komersial, diamati yèn efisiensi pamisahan kolom PMP luwih unggul tinimbang kolom komersial ing babagan efisiensi lan resolusi pamisahan.
Industri biofarmasi wis dadi pasar global sing saya tambah kanthi peningkatan pangsa pasar sing signifikan ing taun-taun pungkasan. Kanthi pertumbuhan industri biofarmasi sing eksplosif1,2,3, ana kebutuhan gedhe kanggo analisis peptida lan protein. Saliyane peptida target, macem-macem rereged dibentuk sajrone sintesis peptida, mula pemurnian kromatografi dibutuhake kanggo entuk kemurnian peptida sing dikarepake. Analisis lan karakterisasi protein ing cairan awak, jaringan, lan sel minangka tugas sing angel banget amarga akeh spesies sing bisa dideteksi sing ana ing siji sampel. Sanajan spektrometri massa minangka alat sing efektif kanggo ngurutake peptida lan protein, yen sampel kasebut langsung dilebokake ing spektrometer massa, pamisahan kasebut ora bakal nyukupi. Masalah iki bisa diatasi kanthi nindakake kromatografi cair (LC) sadurunge analisis MS, sing bakal nyuda jumlah analit sing mlebu ing spektrometer massa ing wektu tartamtu4,5,6. Kajaba iku, analit bisa konsentrasi ing wilayah sing sempit sajrone pamisahan fase cair, saengga ngonsentrasi analit kasebut lan nambah sensitivitas deteksi MS. Kromatografi cair (LC) wis maju banget sajrone dasawarsa kepungkur lan wis dadi metode sing akeh digunakake kanggo analisis proteomik7,8,9,10.
Kromatografi cair fase terbalik (RP-LC) digunakake sacara wiyar kanggo nyuceni lan misahake campuran peptida nggunakake silika sing dimodifikasi oktadesil (ODS) minangka fase stasioner11,12,13. Nanging, amarga struktur sing kompleks lan sifat amfoterik,14,15 fase stasioner RP ora bisa nyedhiyakake pamisahan peptida lan protein sing marem. Mulane, analisis peptida lan protein kanthi fragmen polar lan non-polar mbutuhake fase stasioner sing dirancang khusus kanggo berinteraksi lan nahan analit kasebut16. Kromatografi campuran, sing nawakake interaksi multimodal, bisa dadi alternatif kanggo RP-LC kanggo misahake peptida, protein, lan campuran kompleks liyane. Sawetara fase stasioner tipe campuran disiapake lan kolom sing diisi fase stasioner iki digunakake kanggo misahake peptida lan protein17,18,19,20,21. Amarga anané gugus polar lan non-polar, fase stasioner mode campuran (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, interkalasi polar/RPLC) cocok kanggo misahake peptida lan protein22,23,24,25,26,27,28. , fase stasioner interkalasi polar kanthi gugus polar sing ikatan kovalen nuduhake kemampuan pamisahan sing apik lan selektivitas unik kanggo analit polar lan non-polar amarga pamisahan gumantung saka interaksi antarane analit lan fase stasioner. Interaksi multimodal 29,30,31,32. Bubar, Zhang et al. 30 entuk fase stasioner poliamina sing diakhiri behenyl lan kasil misahake hidrokarbon, antidepresan, flavonoid, nukleosida, estrogen, lan sawetara analit liyane. Bahan stasioner sing dipasang polar duwe gugus polar lan non-polar, saengga bisa digunakake kanggo misahake peptida lan protein dadi bagean hidrofobik lan hidrofilik. Kolom inline polar (contone, kolom C18 karo amida inline) kasedhiya kanthi jeneng dagang kolom Ascentis Express RP-Amide, nanging kolom iki mung digunakake kanggo analisis amina 33.
Ing panliten saiki, fase stasioner penyisipan polar (N-phenylmaleimide, polistirena penyisipan) disiapake lan dievaluasi kanggo pamisahan peptida lan pembelahan HSA triptik. Strategi ing ngisor iki digunakake kanggo nyiapake fase stasioner. Partikel silika berpori disiapake miturut prosedur sing diterangake ing publikasi sadurunge, kanthi sawetara owah-owahan ing skema persiapan 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Rasio urea, polietilen glikol (PEG), TMOS lan asam asetat banyu diatur kanggo entuk partikel silika kanthi ukuran pori gedhe. Kapindho, ligan fenilmaleimide-metilvinil isosianat anyar disintesis lan partikel silika turunan digunakake kanggo nyiyapake fase stasioner penyisipan polar. Fase stasioner sing dipikolehi dikemas menyang kolom baja tahan karat (diameter njero 100 × 1,8 mm) miturut skema pengepakan sing dioptimalake. Pengepakan kolom dibantu dening getaran mekanik kanggo njamin lapisan seragam ing kolom. Kolom sing wis dikemas dievaluasi kanggo misahake campuran peptida sing kasusun saka limang peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, peptida leusin-enkephalin), lan hidrolisat triptik albumin serum manungsa (HSA). Diamati yen campuran peptida lan digest triptik HSA dipisahake kanthi resolusi lan efisiensi sing apik. Efisiensi pamisahan kolom PMP dibandhingake karo kolom Ascentis Express RP-Amide. Diamati yen peptida lan protein duwe resolusi sing apik lan efisiensi pamisahan sing dhuwur ing kolom PMP, lan efisiensi pamisahan kolom PMP luwih dhuwur tinimbang kolom Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polietilen glikol), urea, asam asetat, trimetoksisiortosilikat (TMOS), trimetilklorosilan (TMCS), tripsin, albumin serum manungsa (HSA), amonium klorida, urea, heksametilmetakriloyldisilazane (HMDS), metakriloyl klorida (MC), stirena, 4-hidroksi-TEMPO, benzoil peroksida (BPO), asetonitril (ACN) kanggo HPLC, metanol, 2-propanol lan aseton. Perusahaan Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, AS).
Campuran urea (8 g), polietilen glikol (8 g) lan 8 ml asam asetat 0,01 N. diudhek suwene 10 menit, lan 24 ml TMOS ditambahake ing kono nalika didinginkan nganggo es. Campuran reaksi dipanasake ing suhu 40°C suwene 6 jam lan banjur ing suhu 120°C suwene 8 jam ing autoklaf stainless steel. Banyune didekantasi lan sisane dikeringake ing suhu 70°C suwene 12 jam. Blok alus sing wis garing digiling alus lan dikalsinasi ing oven ing suhu 550°C suwene 12 jam. Telung batch disiapake lan dikarakterisasi kanggo nguji reproduksibilitas ukuran partikel, ukuran pori, lan luas permukaan.
Gugus polar lan fase diam kanggo rantai polistirena. Prosedur persiapan diterangake ing ngisor iki.
N-fenilmaleimida (200 mg) lan metil vinil isosianat (100 mg) dilarutake ing toluena anhidrat, banjur 0,1 ml 2,2′-azoisobutironitrile (AIBN) ditambahake menyang labu reaksi kanggo entuk kopolimer fenilmaleimida lan metil vinil isosianat (PMCP). Campuran kasebut dipanasake ing suhu 60°C suwene 3 jam, disaring lan dikeringake ing oven ing suhu 40°C suwene 3 jam.
Partikel silika garing (2 g) disebar ing toluena garing (100 ml), diaduk lan disonikasi sajrone 10 menit ing labu dasar bunder 500 ml. PMCP (10 mg) dilarutake ing toluena lan ditambahake tetes demi tetes menyang labu reaksi liwat corong tambahan. Campuran kasebut direfluks ing suhu 100°C sajrone 8 jam, disaring, dicuci nganggo aseton lan dikeringake ing suhu 60°C sajrone 3 jam. Banjur, partikel silika sing ana gandhengane karo PMCP (100 g) dilarutake ing toluena (200 ml), lan 4-hidroksi-TEMPO (2 ml) ditambahake ing kono kanthi anané 100 μl dibutiltin dilaurat minangka katalis. Campuran kasebut diaduk ing suhu 50°C sajrone 8 jam, disaring lan dikeringake ing suhu 50°C sajrone 3 jam.
Stirena (1 ml), benzoil peroksida BPO (0,5 ml) lan partikel silika sing ditempelake ing TEMPO-PMCP (1,5 g) disebarake ing toluena lan diresiki nganggo nitrogen. Polimerisasi stirena ditindakake ing suhu 100°C sajrone 12 jam. Produk sing diasilake dikumbah nganggo metanol lan dikeringake sewengi ing suhu 60°C. Skema umum reaksi kasebut dituduhake ing gambar siji.
Sampel-sampel kasebut didegas ing suhu 393 K sajrone 1 jam nganti tekanan residual kurang saka 10–3 Torr dipikolehi. Jumlah N2 sing diserap ing tekanan relatif P/P0 = 0,99 digunakake kanggo nemtokake volume pori total. Morfologi partikel silika murni lan sing kaiket ligan ditliti nggunakake mikroskop elektron pindai (Hitachi High Technologies, Tokyo, Jepang). Sampel garing (partikel silika murni lan sing kaiket ligan) dilebokake ing batang aluminium nggunakake pita karbon. Emas diendapkan ing sampel nggunakake piranti sputtering Q150T, lan lapisan Au kandel 5 nm diendapkan ing sampel. Iki nambah efisiensi proses tegangan rendah lan nyedhiyakake penyemprotan adhem sing apik. Analisis unsur ditindakake nggunakake penganalisis komposisi unsur Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112. Penganalisis ukuran partikel Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 digunakake kanggo entuk distribusi ukuran partikel. Partikel silika sing ora dilapisi lan partikel silika sing kaiket ligan (saben 5 mg) disebarake ing 5 ml isopropanol, disonikasi sajrone 10 menit, diaduk sajrone 5 menit, lan diselehake ing meja optik Mastersizer. Analisis termogravimetri ditindakake kanthi kecepatan 5 °C saben menit ing kisaran suhu saka 30 nganti 800 °C.
Kolom baja tahan karat bore sempit sing dilapisi serat kaca kanthi dimensi (ID 100 × 1,8 mm) dikemas kanthi metode pengisian bubur miturut prosedur sing padha karo ing referensi 31. Kolom baja tahan karat (dilapisi kaca, ID 100 × 1,8 mm) lan stopkontak sing ngemot frit 1 µm disambungake menyang mesin pengemas bubur (Alltech Deerfield, IL, USA). Siapke suspensi fase diam kanthi nggantungake 150 mg fase diam ing 1,2 ml metanol lan dilebokake ing kolom reservoir. Metanol digunakake minangka pelarut bubur lan pelarut kontrol. Kemas kolom kanthi ngetrapake urutan tekanan 100 MP sajrone 10 menit, 80 MP sajrone 15 menit, lan 60 MP sajrone 30 menit. Proses pengemasan nggunakake rong vibrator kolom kromatografi gas (Alltech, Deerfield, IL, USA) kanggo getaran mekanik kanggo njamin pengemasan kolom sing seragam. Tutup pengemas bubur lan lepaskan tekanan alon-alon kanggo nyegah kerusakan ing senar. Kolom kasebut dicopot saka nozzle slurry lan fitting liyane dipasang ing inlet lan disambungake menyang sistem LC kanggo nguji operasine.
MLC khusus digawe nggunakake pompa LC (10AD Shimadzu, Jepang), sampler kanthi loop injeksi 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), degasser membran (Shimadzu DGU-14A), lan jendela kapiler UV-VIS. Piranti detektor (UV-2075) lan mikrokolom enamel. Gunakake tabung penghubung sing sempit banget lan cendhak kanggo nyuda efek ekspansi kolom tambahan. Sawise ngisi kolom, pasang kapiler (50 µm id 365) ing outlet sambungan reduksi 1/16″ lan pasang kapiler (50 µm) saka sambungan reduksi. Pengumpulan data lan pangolahan kromatogram ditindakake nggunakake piranti lunak Multichro 2000. Ing 254 nm, absorbansi UV saka analit subjek dipantau ing 0. Data kromatografi dianalisis nggunakake OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin serum manungsa, bubuk liofilisasi, ≥ 96% (elektroforesis gel agarose) 3 mg dicampur karo tripsin (1,5 mg), 4,0 M urea (1 ml) lan 0,2 M amonium bikarbonat (1 ml). Larutan kasebut diaduk suwene 10 menit lan disimpen ing bak banyu ing suhu 37°C suwene 6 jam, banjur didinginkan nganggo 1 ml 0,1% TFA. Saring larutan kasebut lan simpen ing ngisor 4°C.
Pamisahan campuran peptida lan HSA digest triptik ing kolom PMP dievaluasi kanthi kapisah. Priksa hidrolisis triptik saka campuran peptida lan HSA sing dipisahake dening kolom PMP lan bandhingake asil karo kolom Ascentis Express RP-Amide. Jumlah pelat teoretis diitung nggunakake persamaan ing ngisor iki:
Gambar SEM partikel silika murni lan partikel silika sing kaiket ligan dituduhake ing Gambar 2. Gambar SEM partikel silika murni (A, B) nuduhake bentuk bunder ing ngendi partikel kasebut dawa utawa duwe simetri sing ora teratur dibandhingake karo panliten sadurunge. Permukaan partikel silika sing kaiket dening ligan (C, D) luwih alus tinimbang partikel silika murni, sing bisa uga amarga rantai polistirena sing nutupi permukaan partikel silika.
Mikrograf elektron pindai saka partikel silika murni (A, B) lan partikel silika sing kaiket ligan (C, D).
Distribusi ukuran partikel partikel silika murni lan partikel silika sing kaiket ligan dituduhake ing Gambar 2.3(A). Kurva distribusi ukuran partikel volumetrik nuduhake yen ukuran partikel silika mundhak sawise modifikasi kimia (Gambar 3A). Data distribusi ukuran partikel silika saka panliten saiki lan panliten sadurunge dibandhingake ing Tabel 1(A). Ukuran partikel volumetrik d(0.5) saka PMP yaiku 3,36 µm, dibandhingake karo nilai ad(0.5) 3,05 µm ing panliten sadurunge (partikel silika sing kaiket polistirena)34. Amarga owah-owahan rasio PEG, urea, TMOS lan asam asetat ing campuran reaksi, distribusi ukuran partikel batch iki luwih sempit dibandhingake karo panliten sadurunge. Ukuran partikel fase PMP rada luwih gedhe tinimbang fase partikel silika sing kaiket polistirena sing wis ditliti sadurunge. Iki tegese fungsionalisasi permukaan partikel silika karo stirena mung ngendapke lapisan polistirena (0,97 µm) ing permukaan silika, dene ing fase PMP kekandelan lapisan kasebut yaiku 1,38 µm.
Distribusi ukuran partikel (A) lan distribusi ukuran pori (B) partikel silika murni lan partikel silika sing kaiket ligan.
Ukuran pori, volume pori, lan luas permukaan partikel silika sing digunakake ing panliten iki dituduhake ing Tabel 1 (B). Profil PSD partikel silika murni lan partikel silika sing kaiket ligan dituduhake ing Gambar 3(B). Asil kasebut bisa dibandhingake karo panliten sadurunge34. Ukuran pori partikel silika murni lan sing kaiket ligan yaiku 310 Å lan 241 Å, masing-masing, nuduhake yen sawise modifikasi kimia, ukuran pori mudhun 69 Å, kaya sing dituduhake ing Tabel 1 (B), lan kurva pergeseran dituduhake ing Gambar. Luas permukaan spesifik partikel silika ing panliten saiki yaiku 116 m2/g, sing bisa dibandhingake karo panliten sadurunge (124 m2/g). Kaya sing dituduhake ing Tabel 1(B), luas permukaan (m2/g) partikel silika sawise modifikasi kimia uga mudhun saka 116 m2/g dadi 105 m2/g.
Asil analisis unsur fase diam dituduhake ing Tabel. 2. Kandungan karbon fase diam saiki yaiku 6,35%, sing luwih murah tinimbang ing panliten sadurunge (partikel silika sing ana gandhengane karo polistirena, 7,93%35 lan 10,21%) 42. Kandungan karbon fase diam saiki ing ngisor iki, amarga sawetara ligan polar kayata fenilmaleimida metil vinil isosianat (PCMP) lan 4-hidroksi-TEMPO wis digunakake saliyane stirena ing persiapan SP. Persentase bobot nitrogen ing fase diam saiki yaiku 2,21% dibandhingake karo 0,1735 lan 0,85% ing panliten sadurunge 42. Iki tegese fase diam saiki duwe persentase bobot nitrogen sing dhuwur amarga fenilmaleimida. Semono uga, produk (4) lan (5) nduweni kandungan karbon 2,7% lan 2,9%, dene produk pungkasan (6) nduweni kandungan karbon 6,35%, kaya sing dituduhake ing Tabel 2. Analisis termogravimetri (TGA) digunakake ing fase stasioner PMP kanggo nguji penurunan bobot, lan kurva TGA dituduhake ing Gambar 4. Kurva TGA nuduhake penurunan bobot 8,6%, sing cocog karo kandungan karbon (6,35%), amarga ligan ora mung ngandhut C, nanging uga N, O lan H.
Ligan fenilaleimida-metilvinil isosianat dipilih kanggo ngowahi permukaan partikel silika amarga gugus fenilaleimida lan vinilisosianat polar. Gugus vinil isosianat bisa reaksi luwih lanjut karo stirena kanthi polimerisasi radikal urip. Alesan kapindho yaiku kanggo nglebokake gugus sing duwe interaksi moderat karo analit lan ora ana interaksi elektrostatik sing kuwat antarane analit lan fase stasioner, amarga gugus fenilaleimida ora duwe muatan virtual ing pH normal. Polaritas fase stasioner bisa dikontrol dening jumlah stirena sing optimal lan wektu reaksi polimerisasi radikal bebas. Langkah pungkasan saka reaksi (polimerisasi radikal bebas) penting banget amarga ngganti polaritas fase stasioner. Analisis unsur ditindakake kanggo mriksa kandungan karbon ing fase stasioner iki. Wis diamati manawa nambah jumlah stirena lan wektu reaksi nambah kandungan karbon fase stasioner lan kosok balene. SP sing disiapake kanthi konsentrasi stirena sing beda duwe beban karbon sing beda. Semono uga, fase diam iki diselehake ing kolom baja tahan karat lan karakteristik kromatografi (selektivitas, resolusi, nilai N, lan liya-liyane) dicenthang. Adhedhasar eksperimen kasebut, komposisi sing dioptimalake kanggo nyiapake fase diam PMP dipilih kanggo nyedhiyakake polaritas sing dikontrol lan retensi analit sing apik.
Kolom PMP uga dievaluasi kanggo analisis limang campuran peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leusin-enkephalin) nggunakake kapasitas fase gerak. 60/40 (v/v) ACN/banyu (0,1% TFA) kanthi laju aliran 80 µl/menit. Ing kahanan elusi optimal (200.000 piring/m), jumlah piring teoretis (N) saben kolom (100 × 1,8 mm) yaiku 20.000 ± 100. Nilai N kanggo telung kolom PMP dituduhake ing Tabel 3 lan kromatogram dituduhake ing Gambar 5A. Analisis cepet kanthi laju aliran dhuwur (700 µl/menit) ing kolom PMP, limang peptida dielusi sajrone sakmenit, nilai N sing apik banget yaiku 13.500 ± 330 saben kolom (diameter 100 x 1,8 mm), padha karo 135.000 piring/m (Gambar 5B). Telung kolom kanthi ukuran sing padha (diameter njero 100 x 1,8 mm) diisi karo telung batch fase stasioner PMP sing beda kanggo nguji reprodusibilitas. Analit dicathet kanggo saben kolom kanthi misahake campuran uji sing padha ing saben kolom nggunakake kahanan elusi optimal, jumlah piring teoritis N, lan wektu retensi. Data reprodusibilitas kanggo kolom PMP dituduhake ing Tabel 4. Reprodusibilitas kolom PMP berkorelasi apik karo nilai %RSD sing sithik banget kaya sing dituduhake ing Tabel 3.
Pamisahan campuran peptida ing kolom PMP (B) lan kolom Ascentis Express RP-Amide (A), fase gerak 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), dimensi kolom PMP (100 x 1,8 mm id), analisis Urutan elusi senyawa: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) lan 5 (enkephalin asam leusat).
Kolom PMP (diameter njero 100 x 1,8 mm) dievaluasi kanggo pamisahan hidrolisat triptik saka albumin serum manungsa nganggo HPLC. Kromatogram ing Gambar 6 nuduhake yen sampel kasebut dipisahake kanthi apik kanthi resolusi sing apik banget. Larutan HSA dianalisis nggunakake laju aliran 100 μl/menit, fase gerak 70/30 asetonitril/banyu lan 0,1% TFA. Pembelahan HSA dipérang dadi 17 puncak, kaya sing dituduhake ing kromatogram (Gambar 6), sing cocog karo 17 peptida. Efisiensi pamisahan puncak individu saka hidrolisat HSA diitung lan nilaine dituduhake ing Tabel 5.
Hidrolisat triptik HSA dipisahake ing kolom PMP (diameter njero 100 x 1,8 mm), laju aliran (100 μl/menit), fase gerak 60/40 asetonitril/banyu, lan 0,1% TFA.
ing ngendi L minangka dawa kolom, η minangka viskositas fase gerak, ΔP minangka tekanan balik kolom, lan u minangka kecepatan linier fase gerak. Permeabilitas kolom PMP yaiku 2,5 × 10–14 m2, laju aliran yaiku 25 µl/menit, 60/40 v/v digunakake. ACN/banyu. Permeabilitas kolom PMP (ID 100 × 1,8 mm) padha karo panliten Ref.34 sadurunge. Permeabilitas kolom sing diisi partikel berpori superfisial yaiku 1,7 × 10 .6 µm, 2,5 × 10-14 m2 kanggo partikel 5 µm43. Mulane, permeabilitas fase PMP padha karo permeabilitas partikel inti-cangkang kanthi ukuran 5 μm.
ing ngendi Wx minangka massa kolom sing diisi kloroform, Wy minangka massa kolom sing diisi metanol, lan ρ minangka kapadhetan pelarut. Kapadhetan metanol (ρ = 0,7866) lan kloroform (ρ = 1,484). Porositas total kolom partikel silika-C18 (100 × 1,8 mm ID)34 lan kolom C18-urea31 sing wis ditliti sadurunge yaiku 0,63 lan 0,55. Iki tegese anané ligan urea nyuda permeabilitas fase stasioner. Ing sisih liya, porositas total kolom PMP (diameter njero 100 × 1,8 mm) yaiku 0,60. Kolom PMP kurang permeabel tinimbang kolom sing dikemas karo partikel silika sing kaiket C18 amarga ing fase stasioner tipe C18, ligan C18 dipasang ing partikel silika ing rantai linier, dene ing fase stasioner tipe polistirena, polimer sing relatif kandel dibentuk ing sekitar partikel. lapisan A. Ing eksperimen khas, porositas kolom diitung kaya ing ngisor iki:
Ing gambar 7A, B nuduhake plot Van Deemter kanggo kolom PMP (id 100 x 1,8 mm) lan kolom Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1,8 mm) ing kondisi elusi sing padha, 60/40 ACN/H2O lan 0 .1% TFA 20 µl/menit nganti 800 µl/menit ing loro kolom kasebut. Nilai HETP minimal ing laju aliran optimal (80 µl/menit) yaiku 2,6 µm lan 3,9 µm kanggo kolom PMP lan kolom Ascentis Express RP-Amide. Nilai HETP nuduhake yen efisiensi pamisahan kolom PMP (100 x 1,8 mm id) luwih dhuwur tinimbang kolom Ascentis Express RP-Amide sing kasedhiya sacara komersial (100 x 1,8 mm id). Grafik van Deemter ing Gambar 7(A) nuduhake yen penurunan nilai N ora luwih dhuwur sacara signifikan kanthi nambah aliran dibandhingake karo panliten sadurunge. Efisiensi pamisahan kolom PMP sing luwih dhuwur (id 100 × 1,8 mm) dibandhingake karo kolom Ascentis Express RP-Amide adhedhasar bentuk lan ukuran partikel sing luwih apik lan prosedur pengepakan kolom sing canggih sing digunakake ing karya saiki34.
(A) Plot Van Deemter (HETP vs. kecepatan linier fase gerak) sing dipikolehi ing kolom PMP (id 100 x 1,8 mm) ing 60/40 ACN/H2O kanthi 0,1% TFA. (B) Plot Van Deemter (HETP vs kecepatan linier fase gerak) sing dipikolehi ing kolom Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1,8 mm) ing 60/40 ACN/H2O kanthi 0,1% TFA.
Fase stasioner polar saka polistirena interkalasi wis disiapake lan dievaluasi kanggo misahake campuran peptida sintetik lan hidrolisat triptik albumin serum manungsa (HSA) ing kromatografi cair kinerja dhuwur. Kinerja kromatografi kolom PMP kanggo campuran peptida apik banget ing babagan efisiensi lan resolusi pamisahan. Efisiensi pamisahan kolom PMP sing luwih apik amarga sawetara alasan kayata ukuran partikel silika lan ukuran pori, sintesis fase stasioner sing dikontrol, lan bahan pengepakan kolom sing kompleks. Saliyane efisiensi pamisahan sing dhuwur, kauntungan liyane saka fase stasioner iki yaiku tekanan balik kolom sing kurang ing tingkat aliran sing dhuwur. Kolom PMP bisa direproduksi kanthi apik lan bisa digunakake kanggo nganalisis campuran peptida lan pencernaan triptik saka macem-macem protein. Kita duwe niat kanggo nggunakake kolom iki kanggo misahake senyawa bioaktif saka produk alami, ekstrak tanduran obat lan jamur ing kromatografi cair. Ing mangsa ngarep, kolom PMP uga bakal dievaluasi kanggo misahake protein lan antibodi monoklonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigasi sistem pamisahan peptida kromatografi fase terbalik bagean I: Pangembangan protokol kanggo karakterisasi kolom. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigasi sistem pamisahan peptida kromatografi fase terbalik bagean I: Pangembangan protokol kanggo karakterisasi kolom.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., lan Petersson, P. Investigasi Sistem Pamisahan Peptida kanthi Kromatografi Fase-Balik, Bagian I: Ngembangake Protokol kanggo Karakterisasi Kolom. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigasi sistem pamisahan peptida kromatografi fase terbalik bagean I: Pangembangan protokol kanggo karakteristik kolom. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigasi sistem pamisahan peptida kromatografi fase terbalik bagean I: Pangembangan protokol kanggo karakteristik kolom.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., lan Petersson, P. Investigasi Sistem Pamisahan Peptida kanthi Kromatografi Fase-Balik, Bagian I: Ngembangake Protokol kanggo Karakterisasi Kolom.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. Cara kanggo nggawe peptida aktif sing luwih apik kanggo perawatan penyakit infeksi. Bioteknologi. Prestasi 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida terapeutik sintetis: Ilmu pengetahuan lan pasar. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida terapeutik sintetis: Ilmu pengetahuan lan pasar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J lan Chreschatyski M. Peptida terapeutik sintetis: ilmu pengetahuan lan pasar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J lan Khreschatsky M. Peptida terapeutik sintetis: ilmu pengetahuan lan pasar. panemuan obat. Dina iki 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi cair proteomik lanjut. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi cair proteomik lanjut.Deloken F., Smith RD lan Shen Yu. Kromatografi cair proteomik tingkat lanjut. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Komposisi protein lanjutan 液相色谱。Deloken F., Smith RD lan Shen Yu. Kromatografi cair proteomik tingkat lanjut.J. Kromatografi. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Kromatografi cair-spektrometri massa canggih bisa nggabungake metabolomik lan proteomik berbasis luas. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Perané UHPLC ing pangembangan farmasi. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Perané UHPLC ing pangembangan farmasi.Chesnut, SM lan Salisbury, JJ Perané UHPLC ing pangembangan farmasi.Chesnut, SM lan Salisbury, JJ Perané UHPLC ing pangembangan obat. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan ultra dhuwur kanggo pamisahan cepet. Wu, N. & Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan ultra dhuwur kanggo pamisahan cepet.Wu, N. lan Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis saka kromatografi cair tekanan dhuwur kanggo pamisahan kanthi cepet. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan ultra-tinggi kanggo pamisahan kanthi cepet.Wu, N. lan Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis saka kromatografi cair tekanan dhuwur kanggo pamisahan kanthi cepet.J. Sept. Ilmu Pengetahuan. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Panggunaan kromatografi cair kinerja ultra ing pangembangan farmasi. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Panggunaan kromatografi cair kinerja ultra ing pangembangan farmasi.Ren, SA lan Chelischeff, P. Panggunaan kromatografi cair kinerja ultra dhuwur ing pangembangan farmasi. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA lan Chelischeff, P. Aplikasi kromatografi cair kinerja ultra ing pangembangan obat.J. Kromatografi. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Hidrogel makropori monolitik sing asale saka emulsi lenga-ing-banyu kanthi fase internal sing dhuwur kanggo pemurnian enterovirus sing efisien 71. Proyek kimia. Jurnal 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Perané kromatografi cair ing proteomik. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Perané kromatografi cair ing proteomik.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. lan Wilkins, JA Perané kromatografi cair ing proteomik. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. lan Wilkins, JA Perané kromatografi cair ing proteomik.J. Kromatografi. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Tren anyar ing pamisahan kromatografi cair fase terbalik saka peptida lan protein terapeutik: Teori lan aplikasi. & Guillarme, D. Tren anyar ing pamisahan kromatografi cair fase terbalik saka peptida lan protein terapeutik: Teori lan aplikasi. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографира хроматографира теория lan приложения. & Guillarme, D. Tren anyar ing pamisahan peptida lan protein terapeutik kanthi kromatografi cair fase terbalik: teori lan aplikasi. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.lan Guillarmé, D. Tren anyar ing pamisahan peptida lan protein terapeutik kanthi kromatografi cair fase terbalik: teori lan aplikasi.J. Pharm. Ilmu Biomedis. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Pamisahan peptida rong dimensi nggunakake sistem RP-RP-HPLC kanthi pH sing beda ing dimensi pamisahan pertama lan kapindho. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Pamisahan peptida rong dimensi nggunakake sistem RP-RP-HPLC kanthi pH sing beda ing dimensi pamisahan pertama lan kapindho.Gilar M., Olivova P., Dali AE lan Gebler JK Pamisahan peptida rong dimensi nggunakake sistem RP-RP-HPLC kanthi pH sing beda ing dimensi pamisahan pisanan lan kapindho.Gilar M., Olivova P., Dali AE lan Gebler JK Pamisahan peptida rong dimensi nggunakake nilai pH sing beda ing dimensi pamisahan pisanan lan kapindho nggunakake sistem RP-RP-HPLC. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Investigasi transfer massa lan karakteristik kinetik kolom kromatografi kinerja dhuwur sing dikemas karo partikel C18 sing keropos lan keropos superfisial sing luwih cilik tinimbang 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Tren anyar lan tantangan analitis ing isolasi, identifikasi, lan validasi peptida bioaktif tanduran. anus. Makhluk anal. Kimia. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Lanskap proteomik saka kerajaan urip. Nature 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. Perawatan pasca-peptida terapeutik kanthi kromatografi cair preparatif. Molekul (Basel, Swiss) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasine kanggo biopolimer. Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasine kanggo biopolimer.Yang, Yu. lan Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasine kanggo biopolimer. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasine ing biopolimer.Yang, Yu. lan Gene, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasine kanggo biopolimer.J. Kromatografi. A 1218(49), 8813–8825 (2011).