Nature.com پر جانے کا شکریہ۔ آپ محدود سی ایس ایس سپورٹ کے ساتھ براؤزر کا ورژن استعمال کر رہے ہیں۔ بہترین تجربے کے لیے، ہم تجویز کرتے ہیں کہ آپ ایک اپ ڈیٹ شدہ براؤزر استعمال کریں (یا انٹرنیٹ ایکسپلورر میں مطابقت موڈ کو غیر فعال کریں)۔ اس کے علاوہ، جاری تعاون کو یقینی بنانے کے لیے، ہم سائٹ کو بغیر اسٹائل اور جاوا اسکرپٹ کے دکھاتے ہیں۔
ایک ساتھ تین سلائیڈوں کا ایک carousel دکھاتا ہے۔ ایک وقت میں تین سلائیڈوں سے گزرنے کے لیے پچھلے اور اگلے بٹنوں کا استعمال کریں، یا ایک وقت میں تین سلائیڈوں سے گزرنے کے لیے آخر میں سلائیڈر بٹن استعمال کریں۔
غیر محفوظ سلکا کے ذرات کو سول جیل کے طریقہ کار سے وسیع تاکنا ذرات حاصل کرنے کے لیے کچھ ترمیم کے ساتھ تیار کیا گیا تھا۔ ان ذرات کو N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) اور اسٹائرین کے ذریعے ریورس چین ٹرانسفر فریگمنٹیشن (RAFT) پولیمرائزیشن کے ذریعے N-phenylmaleimide intercalated polyamides تیار کرنے کے لیے اخذ کیا گیا تھا۔ اسٹائرین (PMP) اسٹیشنری مرحلہ۔ تنگ بور کے سٹینلیس سٹیل کے کالم (100 × 1.8 ملی میٹر اندرونی قطر) سلری پیکنگ سے بھرے ہوئے تھے۔ پی ایم پی کالم کی کرومیٹوگرافک کارکردگی کا اندازہ مصنوعی پیپٹائڈس کے مرکب کو الگ کرنے کے لیے کیا گیا جس میں پانچ پیپٹائڈس شامل ہیں (گلی-ٹائر، گلی-لیو-ٹائر، گلی-گلی-ٹائر-آرگ، ٹائر-آئی-گلی-سیر-آرگ، لیو امینو ایسڈ اینکیفیلین سیفلین اور لیو امینو ایسڈ ٹرائی ہیومن ہائیڈرم سیفالین)۔ زیادہ سے زیادہ اخراج کے حالات میں، پیپٹائڈس کے مرکب والی پلیٹوں کی نظریاتی تعداد 280,000 پلیٹس/sq.m تک پہنچ گئی۔ ترقی یافتہ کالم کی علیحدگی کی کارکردگی کا تجارتی Ascentis Express RP-Amide کالم کے ساتھ موازنہ کرتے ہوئے، یہ دیکھا گیا کہ PMP کالم کی علیحدگی کی کارکردگی علیحدگی کی کارکردگی اور ریزولوشن کے لحاظ سے تجارتی کالم سے برتر تھی۔
بائیو فارماسیوٹیکل انڈسٹری حالیہ برسوں میں مارکیٹ شیئر میں نمایاں اضافے کے ساتھ ایک پھیلتی ہوئی عالمی مارکیٹ بن گئی ہے۔ بائیو فارماسیوٹیکل انڈسٹری 1,2,3 کی دھماکہ خیز ترقی کے ساتھ پیپٹائڈ اور پروٹین کے تجزیہ کی بہت زیادہ ضرورت ہے۔ ہدف پیپٹائڈ کے علاوہ، پیپٹائڈ کی ترکیب کے دوران مختلف نجاستیں بنتی ہیں، لہذا پیپٹائڈ کی مطلوبہ پاکیزگی حاصل کرنے کے لیے کرومیٹوگرافک پیوریفیکیشن کی ضرورت ہوتی ہے۔ ایک ہی نمونے میں موجود ممکنہ طور پر قابل شناخت پرجاتیوں کی بڑی تعداد کی وجہ سے جسمانی رطوبتوں، بافتوں اور خلیوں میں پروٹین کا تجزیہ اور خصوصیت ایک انتہائی مشکل کام ہے۔ اگرچہ ماس اسپیکٹومیٹری پیپٹائڈس اور پروٹین کو ترتیب دینے کا ایک مؤثر ذریعہ ہے، اگر اس طرح کے نمونے براہ راست ماس ​​اسپیکٹومیٹر میں داخل کیے جائیں تو علیحدگی غیر اطمینان بخش ہوگی۔ اس مسئلے کو MS تجزیہ سے پہلے مائع کرومیٹوگرافی (LC) کر کے حل کیا جا سکتا ہے، جو ایک مقررہ وقت پر ماس سپیکٹرو میٹر میں داخل ہونے والے تجزیہ کاروں کی مقدار کو کم کر دے گا 4,5,6۔ اس کے علاوہ، تجزیہ کار مائع مرحلے کی علیحدگی کے دوران ایک تنگ علاقے میں توجہ مرکوز کر سکتے ہیں، اس طرح ان تجزیہ کاروں کو مرتکز کیا جاتا ہے اور MS کا پتہ لگانے کی حساسیت میں اضافہ ہوتا ہے۔ مائع کرومیٹوگرافی (LC) نے پچھلی دہائی میں نمایاں طور پر ترقی کی ہے اور پروٹومک تجزیہ 7,8,9,10 کے لیے ایک وسیع پیمانے پر استعمال شدہ طریقہ بن گیا ہے۔
ریورس فیز مائع کرومیٹوگرافی (RP-LC) کو پیپٹائڈس کے مرکب کو صاف کرنے اور الگ کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے جس کا استعمال آکٹیڈیسیل-موڈیفائیڈ سلیکا (ODS) کو اسٹیشنری فیز 11,12,13 کے طور پر کیا جاتا ہے۔ تاہم، ان کی پیچیدہ ساخت اور امفوٹیرک نوعیت کی وجہ سے، 14,15 RP اسٹیشنری مراحل پیپٹائڈس اور پروٹین کی تسلی بخش علیحدگی فراہم نہیں کر سکتے۔ لہذا، قطبی اور غیر قطبی ٹکڑوں کے ساتھ پیپٹائڈس اور پروٹین کے تجزیے کے لیے خاص طور پر ڈیزائن کیے گئے اسٹیشنری مراحل کی ضرورت ہوتی ہے تاکہ ان تجزیوں کو باہم تعامل اور برقرار رکھا جا سکے۔ مخلوط کرومیٹوگرافی، جو ملٹی موڈل تعاملات پیش کرتی ہے، پیپٹائڈس، پروٹینز اور دیگر پیچیدہ مرکبات کو الگ کرنے کے لیے RP-LC کا متبادل ہو سکتی ہے۔ متعدد مخلوط قسم کے اسٹیشنری مراحل تیار کیے گئے تھے اور ان اسٹیشنری مراحل سے بھرے کالم پیپٹائڈس اور پروٹین کو الگ کرنے کے لیے استعمال کیے گئے تھے 17,18,19,20,21۔ قطبی اور غیر قطبی گروہوں کی موجودگی کی وجہ سے، مکسڈ موڈ سٹیشنری فیزز (WAX/RPLC، HILIC/RPLC، polar intercalation/RPLC) پیپٹائڈز اور پروٹینز 22,23,24,25,26,27,28 کی علیحدگی کے لیے موزوں ہیں۔ , covalently bonded قطبی گروپوں کے ساتھ قطبی انٹرکیلیٹڈ اسٹیشنری مراحل قطبی اور غیر قطبی تجزیہ کاروں کے لیے علیحدگی کی اچھی صلاحیتوں اور منفرد انتخاب کو ظاہر کرتے ہیں کیونکہ علیحدگی تجزیہ کار اور اسٹیشنری مرحلے کے درمیان تعامل پر منحصر ہے ملٹی موڈل تعاملات 29,30,31,32۔ حال ہی میں، Zhang et al. 30 نے پولی مائنز کے بیہینائل ختم شدہ اسٹیشنری فیزز حاصل کیے اور ہائیڈرو کاربن، اینٹی ڈپریسنٹس، فلیوونائڈز، نیوکلیوسائیڈز، ایسٹروجن اور کچھ دوسرے تجزیہ کاروں کو کامیابی سے الگ کیا۔ قطبی سرایت شدہ اسٹیشنری مواد میں قطبی اور غیر قطبی دونوں گروپ ہوتے ہیں، اس لیے اسے پیپٹائڈس اور پروٹینز کو ہائیڈروفوبک اور ہائیڈرو فیلک حصوں میں الگ کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ پولر ان لائن کالم (مثال کے طور پر، امائیڈ ان لائن کے ساتھ C18 کالم) تجارتی نام Ascentis Express RP-Amide کالم کے تحت دستیاب ہیں، لیکن یہ کالم صرف amine 33 کے تجزیہ کے لیے استعمال کیے گئے ہیں۔
موجودہ مطالعہ میں، پولر ایمبیڈنگ اسٹیشنری فیز (N-phenylmaleimide، embedding polystyrene) تیار کیا گیا تھا اور پیپٹائڈ علیحدگی اور Tryptic HSA کلیویج کے لیے اس کا جائزہ لیا گیا تھا۔ اسٹیشنری مرحلے کی تیاری کے لیے درج ذیل حکمت عملی استعمال کی گئی۔ غیر محفوظ سلکا کے ذرات ہماری پچھلی اشاعتوں میں بیان کردہ طریقہ کار کے مطابق تیار کیے گئے تھے، تیاری کی اسکیموں میں کچھ تبدیلیوں کے ساتھ، 31، 34، 35، 36، 37، 38، 39۔ یوریا، پولی تھیلین گلائکول (PEG)، TMOS اور ایکویوس ایسٹک ایسڈ کے تناسب کو بڑے سیلیکا حصے کے ساتھ حاصل کرنے کے لیے ایڈجسٹ کیا گیا تھا۔ دوم، ایک نیا phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ligand کی ترکیب کی گئی تھی اور اس کے اخذ کردہ سلیکا ذرات کو قطبی ایمبیڈڈ اسٹیشنری مراحل کی تیاری کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ حاصل شدہ سٹیشنری فیز کو ایک بہترین پیکنگ اسکیم کے مطابق سٹینلیس سٹیل کے کالم (اندرونی قطر 100 × 1.8 ملی میٹر) میں پیک کیا گیا تھا۔ کالم کی پیکنگ کو مکینیکل وائبریشن سے مدد ملتی ہے تاکہ کالم کے اندر یکساں پرت کو یقینی بنایا جا سکے۔ پیکڈ کالم کا اندازہ پانچ پیپٹائڈس (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، leucine-enkephalin peptide) پر مشتمل پیپٹائڈس کے مرکب کو الگ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ اور ہیومن سیرم البومین (HSA) کے ٹرپٹک ہائیڈروالیسیٹس۔ یہ دیکھا گیا کہ پیپٹائڈ مرکب اور HSA ٹرپٹک ڈائجسٹ اچھی ریزولوشن اور کارکردگی کے ساتھ الگ ہو گئے۔ PMP کالم کی علیحدگی کی کارکردگی کا موازنہ Ascentis Express RP-Amide کالم سے کیا گیا۔ یہ دیکھا گیا کہ پیپٹائڈس اور پروٹینز کی پی ایم پی کالم پر اچھی ریزولوشن اور اعلی علیحدگی کی کارکردگی ہے، اور پی ایم پی کالم کی علیحدگی کی کارکردگی Ascentis Express RP-Amide کالم سے زیادہ ہے۔
PEG (Polyethylene glycol)، یوریا، acetic acid، trimethoxyorthosilicate (TMOS)، trimethylchlorosilane (TMCS)، ٹرپسن، ہیومن سیرم البومین (HSA)، امونیم کلورائیڈ، یوریا، hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS)، methacryloxyorthosilicate (TMOS)، methacryloxylooxylane (HMDS) TEMPO، benzoyl peroxide (BPO)، acetonitrile (ACN) HPLC کے لیے، میتھانول، 2-propanol اور acetone۔ سگما-الڈرچ کمپنی (سینٹ لوئس، مسوری، امریکہ)۔
یوریا (8 جی)، پولی تھیلین گلائکول (8 جی) اور 0.01 این ایسٹک ایسڈ کے 8 ملی لیٹر کے مرکب کو 10 منٹ تک ہلایا گیا، اور آئس کولنگ کے تحت اس میں 24 ملی لیٹر ٹی ایم او ایس شامل کیا گیا۔ رد عمل کے مرکب کو 40 ° C پر 6 گھنٹے اور پھر 120 ° C پر 8 گھنٹے کے لئے سٹینلیس سٹیل کے آٹوکلیو میں گرم کیا گیا۔ پانی کو صاف کیا گیا تھا اور باقیات کو 70 ° C پر 12 گھنٹے تک خشک کیا گیا تھا۔ سوکھے نرم بلاکس کو ہموار طریقے سے پیس کر ایک تندور میں 550 ° C پر 12 گھنٹے کے لیے کیلائن کیا گیا تھا۔ ذرات کے سائز، تاکنا کے سائز اور سطح کے رقبے کی تولیدی صلاحیت کو جانچنے کے لیے تین بیچز تیار کیے گئے اور ان کی خصوصیت کی گئی۔
پولر گروپ اور پولی اسٹرین چینز کے لیے اسٹیشنری فیز۔ تیاری کا طریقہ کار ذیل میں بیان کیا گیا ہے۔
N-phenylmaleimide (200 mg) اور methyl vinyl isocyanate (100 mg) کو anhydrous toluene میں تحلیل کیا گیا، اور پھر 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) کے 0.1 ملی لیٹر کو رد عمل کے فلاسک میں شامل کیا گیا تاکہ meylPynolimide is phenylpyanitemide (phenylMocyanate) کا کوپولیمر حاصل کیا جا سکے۔ ) مکسچر کو 60 ° C پر 3 گھنٹے تک گرم کیا گیا، فلٹر کیا گیا اور 40 ° C پر تندور میں 3 گھنٹے تک خشک کیا گیا۔
خشک سلکا کے ذرات (2 جی) کو خشک ٹولیون (100 ملی لیٹر) میں منتشر کیا گیا تھا، 500 ملی لیٹر کے گول نیچے فلاسک میں 10 منٹ تک ہلایا اور سونیکیٹ کیا گیا تھا۔ پی ایم سی پی (10 ملی گرام) کو ٹولین میں تحلیل کیا گیا تھا اور ایک اضافی فنل کے ذریعے رد عمل کے فلاسک میں ڈراپ وائز شامل کیا گیا تھا۔ مرکب کو 8 گھنٹے کے لیے 100 ° C پر ریفلکس کیا گیا، فلٹر کیا گیا، ایسیٹون سے دھویا گیا اور 60 ° C پر 3 گھنٹے تک خشک کیا گیا۔ پھر، پی ایم سی پی (100 جی) سے وابستہ سلیکا کے ذرات کو ٹولین (200 ملی لیٹر) میں تحلیل کر دیا گیا، اور 4-ہائیڈروکسی-ٹیمپو (2 ملی لیٹر) کو 100 μl ڈبیوٹیلٹن ڈائیلاوریٹ کی موجودگی میں ایک اتپریرک کے طور پر شامل کیا گیا۔ مرکب کو 50 ° C پر 8 گھنٹے تک ہلایا گیا، فلٹر کیا گیا اور 50 ° C پر 3 گھنٹے تک خشک کیا گیا۔
اسٹائرین (1 ملی لیٹر)، بینزوئیل پیرو آکسائیڈ بی پی او (0.5 ملی لیٹر) اور TEMPO-PMCP (1.5 جی) سے منسلک سلکا کے ذرات کو ٹولین میں منتشر کیا گیا اور نائٹروجن سے صاف کیا گیا۔ اسٹائرین کا پولیمرائزیشن 12 گھنٹے کے لئے 100 ° C پر کیا گیا تھا۔ نتیجے میں آنے والی مصنوعات کو میتھانول سے دھویا جاتا تھا اور رات بھر 60 ° C پر خشک کیا جاتا تھا۔ رد عمل کی عمومی اسکیم کو انجیر میں دکھایا گیا ہے۔ ایک
نمونوں کو 393 K پر 1 گھنٹہ کے لئے ڈیگاس کیا گیا جب تک کہ 10–3 ٹور سے کم کا بقایا دباؤ حاصل نہ ہوجائے۔ رشتہ دار دباؤ P/P0 = 0.99 پر جذب شدہ N2 کی مقدار کل تاکنا والیوم کا تعین کرنے کے لیے استعمال کی گئی تھی۔ سکیننگ الیکٹران مائیکروسکوپ (ہٹاچی ہائی ٹیکنالوجیز، ٹوکیو، جاپان) کا استعمال کرتے ہوئے خالص اور لیگنڈ سے منسلک سلیکا ذرات کی مورفولوجی کی جانچ کی گئی۔ کاربن ٹیپ کا استعمال کرتے ہوئے خشک نمونے (خالص سیلیکا اور لیگنڈ باؤنڈ سلیکا ذرات) ایلومینیم کی سلاخوں پر رکھے گئے تھے۔ Q150T سپٹرنگ ڈیوائس کا استعمال کرتے ہوئے نمونے پر سونا جمع کیا گیا تھا، اور نمونے پر 5 nm موٹی Au پرت جمع کی گئی تھی۔ یہ کم وولٹیج کے عمل کی کارکردگی کو بہتر بناتا ہے اور ٹھیک ٹھنڈا چھڑکاؤ فراہم کرتا ہے۔ عنصری تجزیہ تھرمو الیکٹران (والتھم، ایم اے، یو ایس اے) فلیش EA1112 عنصری کمپوزیشن اینالائزر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ ذرہ سائز کی تقسیم حاصل کرنے کے لیے مالورن پارٹیکل سائز اینالائزر (ورسٹر شائر، یو کے) ماسٹرزائزر 2000 استعمال کیا گیا تھا۔ انکوٹیڈ سلیکا پارٹیکلز اور لیگنڈ باؤنڈ سلیکا پارٹیکلز (5 ملی گرام ہر ایک) کو 5 ملی لیٹر آئسوپروپانول میں منتشر کیا گیا، 10 منٹ کے لیے سونیکیٹ کیا گیا، 5 منٹ تک مشتعل کیا گیا، اور ماسٹرزائزر آپٹیکل بینچ پر رکھا گیا۔ تھرموگراومیٹریک تجزیہ 30 سے ​​800 ° C کے درجہ حرارت کی حد میں 5 °C فی منٹ کی شرح سے کیا جاتا ہے۔
گلاس فائبر لائن والے تنگ بور کے سٹینلیس سٹیل کے کالم جس میں طول و عرض (ID 100 × 1.8 mm) تھے اسی طریقہ کار کے مطابق سلری فلنگ کے طریقہ کار سے پیک کیا گیا تھا جیسا کہ حوالہ 31 میں ہے۔ سٹینلیس سٹیل کا کالم (گلاس لائنڈ، ID 100 × 1.8 ملی میٹر) اور ایک فری µm پر مشتمل ایک آؤٹ لیٹ پر مشتمل تھا۔ پیکیجنگ مشین (Alltech Deerfield، IL، USA)۔ 1.2 ملی لیٹر میتھانول میں سٹیشنری فیز کے 150 ملی گرام کو معطل کر کے اور اسے ریزروائر کالم میں کھلا کر سٹیشنری فیز کی معطلی تیار کریں۔ میتھانول کو سلری سالوینٹ اور کنٹرول سالوینٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ 10 منٹ کے لیے 100 MP، 15 منٹ کے لیے 80 MP، اور 30 ​​منٹ کے لیے 60 MP کے دباؤ کی ترتیب کو لاگو کر کے کالم کو پیک کریں۔ پیکنگ کے عمل میں یکساں کالم کی پیکنگ کو یقینی بنانے کے لیے مکینیکل وائبریشن کے لیے دو گیس کرومیٹوگرافی کالم وائبریٹرز (Alltech، Deerfield، IL، USA) کا استعمال کیا گیا۔ سلری پیکر کو بند کریں اور سٹرنگ کو پہنچنے والے نقصان کو روکنے کے لیے آہستہ آہستہ دباؤ چھوڑیں۔ کالم کو سلری نوزل ​​سے منقطع کر دیا گیا تھا اور ایک اور فٹنگ کو ان لیٹ سے جوڑا گیا تھا اور اس کے آپریشن کو جانچنے کے لیے LC سسٹم سے منسلک کیا گیا تھا۔
LC پمپ (10AD Shimadzu, Japan)، 50 nL انجیکشن لوپ (Valco (USA) C14 W.05)، ایک جھلی ڈیگاسر (Shimadzu DGU-14A)، اور ایک UV-VIS کیپلیری ونڈو کے ساتھ ایک نمونہ لینے والا ایک حسب ضرورت MLC بنایا گیا تھا۔ ڈیٹیکٹر ڈیوائس (UV-2075) اور انامیلڈ مائکرو کالم۔ اضافی کالم کی توسیع کے اثر کو کم کرنے کے لیے بہت تنگ اور مختصر جڑنے والی ٹیوبیں استعمال کریں۔ کالم کو بھرنے کے بعد، 1/16″ کو کم کرنے والے جنکشن کے آؤٹ لیٹ پر ایک کیپلیری (50 µm id 365) انسٹال کریں اور کم کرنے والے جنکشن کی ایک کیپلیری (50 µm) انسٹال کریں۔ ڈیٹا اکٹھا کرنا اور کرومیٹوگرام پروسیسنگ Multichro 2000 سافٹ ویئر کے ذریعے کی جاتی ہے۔ 254 nm پر، مضامین کے تجزیہ کاروں کے UV جذب کو 0 پر مانیٹر کیا گیا۔ اوریجن پرو 8 (نارتھمپٹن، ایم اے) کا استعمال کرتے ہوئے کرومیٹوگرافک ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔
ہیومن سیرم البومین، لائوفیلائزڈ پاؤڈر، ≥ 96٪ (ایگروز جیل الیکٹروفورسس) 3 ملی گرام ٹرپسن (1.5 ملی گرام)، 4.0 ایم یوریا (1 ملی) اور 0.2 ایم امونیم بائی کاربونیٹ (1 ملی لیٹر) کے ساتھ ملایا گیا۔ محلول کو 10 منٹ تک ہلایا گیا اور 6 گھنٹے کے لیے 37 ° C پر پانی کے غسل میں رکھا گیا، پھر 0.1% TFA کے 1 ملی لیٹر سے بجھایا گیا۔ محلول کو فلٹر کریں اور 4°C سے نیچے اسٹور کریں۔
پی ایم پی کالم پر پیپٹائڈس اور ٹرپٹک ڈائجسٹ HSA کے مرکب کی علیحدگی کا الگ سے جائزہ لیا گیا۔ پیپٹائڈس اور HSA کے مرکب کے ٹرپٹک ہائیڈولیسس کو ایک PMP کالم سے الگ کریں اور نتائج کا موازنہ Ascentis Express RP-Amide کالم سے کریں۔ نظریاتی پلیٹوں کی تعداد کا حساب درج ذیل مساوات کا استعمال کرتے ہوئے کیا جاتا ہے:
پیور سلیکا پارٹیکلز اور لیگنڈ باؤنڈ سلیکا پارٹیکلز کی SEM امیجز کو شکل 2 میں دکھایا گیا ہے۔ خالص سلیکا پارٹیکلز (A, B) کی SEM امیجز ایک کروی شکل دکھاتی ہیں جس میں ذرات لمبے ہوتے ہیں یا ہمارے پچھلے مطالعات کے مقابلے میں فاسد ہم آہنگی رکھتے ہیں۔ لیگینڈ (C, D) سے جکڑے ہوئے سلیکا کے ذرات کی سطح خالص سلیکا ذرات کی نسبت ہموار ہوتی ہے، جس کی وجہ سیلیکا کے ذرات کی سطح کو ڈھانپنے والی پولی اسٹیرین چینز کی وجہ سے ہوسکتی ہے۔
خالص سلیکا ذرات (A, B) اور ligand کے پابند سلیکا ذرات (C, D) کے الیکٹران مائیکرو گرافس کو اسکین کرنا۔
خالص سلیکا ذرات اور ligand کے پابند سلیکا ذرات کی پارٹیکل سائز کی تقسیم تصویر 2. 3(A) میں دکھائی گئی ہے۔ والیومیٹرک پارٹیکل سائز ڈسٹری بیوشن منحنی خطوط سے پتہ چلتا ہے کہ کیمیائی ترمیم (تصویر 3A) کے بعد سیلیکا پارٹیکل کے سائز میں اضافہ ہوا ہے۔ موجودہ مطالعہ اور پچھلے مطالعہ سے سلکا پارٹیکل سائز ڈسٹری بیوشن ڈیٹا کا جدول 1(A) میں موازنہ کیا گیا ہے۔ PMP کا والیومیٹرک پارٹیکل سائز d(0.5) 3.36 µm تھا، اس کے مقابلے میں اشتہار (0.5) ویلیو 3.05 µm ہمارے پچھلے مطالعہ میں (پولیسٹیرین بانڈڈ سلیکا پارٹیکلز)34۔ رد عمل کے مرکب میں پی ای جی، یوریا، ٹی ایم او ایس اور ایسٹک ایسڈ کے تناسب میں تبدیلی کی وجہ سے، اس بیچ کی پارٹیکل سائز کی تقسیم ہمارے پچھلے مطالعے کے مقابلے میں کم تھی۔ پی ایم پی مرحلے کا ذرہ سائز پولی اسٹیرین باؤنڈ سلکا پارٹیکل فیز سے تھوڑا بڑا ہے جس کا ہم نے پہلے مطالعہ کیا تھا۔ اس کا مطلب یہ ہے کہ اسٹائرین کے ساتھ سلیکا کے ذرات کی سطح کے فنکشنلائزیشن نے سیلیکا کی سطح پر صرف پولی اسٹیرین پرت (0.97 µm) جمع کی، جبکہ PMP مرحلے میں پرت کی موٹائی 1.38 µm تھی۔
پارٹیکل سائز ڈسٹری بیوشن (A) اور پور سائز ڈسٹری بیوشن (B) خالص سلکا پارٹیکلز اور لیگنڈ باؤنڈ سلکا پارٹیکلز۔
اس مطالعے میں استعمال ہونے والے سیلیکا ذرات کا تاکنا سائز، تاکنا حجم اور سطح کا رقبہ جدول 1 (B) میں دکھایا گیا ہے۔ پیور سلکا پارٹیکلز اور لیگنڈ باؤنڈ سلیکا پارٹیکلز کے پی ایس ڈی پروفائلز کو انجیر میں دکھایا گیا ہے۔ 3(B)۔ نتائج ہمارے پچھلے مطالعے سے موازنہ تھے۔ خالص اور ligand کے پابند سلیکا ذرات کے تاکنے کے سائز بالترتیب 310 Å اور 241 Å تھے، جو اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ کیمیائی ترمیم کے بعد، تاکنا کے سائز میں 69 Å کی کمی واقع ہوئی ہے، جیسا کہ جدول 1 (B) میں دکھایا گیا ہے، اور شفٹ وکر کو تصویر میں دکھایا گیا ہے۔ سلیکا کا مخصوص سطح کا رقبہ جو کہ m1g1/6/m/1/6 ذرات کا مطالعہ کر سکتا ہے۔ ہمارا پچھلا مطالعہ (124 m2/g)۔ جیسا کہ جدول 1(B) میں دکھایا گیا ہے، کیمیائی ترمیم کے بعد سیلیکا ذرات کی سطح کا رقبہ (m2/g) بھی 116 m2/g سے کم ہو کر 105 m2/g ہو گیا۔
اسٹیشنری مرحلے کے ابتدائی تجزیہ کے نتائج ٹیبل میں پیش کیے گئے ہیں۔ 2. موجودہ سٹیشنری مرحلے کا کاربن مواد 6.35% ہے، جو ہمارے پچھلے مطالعہ سے کم ہے (پولی اسٹیرین سے منسلک سلیکا ذرات، بالترتیب 7.93%35 اور 10.21%) SP کی تیاری میں اسٹائرین کے علاوہ 4-hydroxy-TEMPO کا استعمال کیا گیا ہے۔ موجودہ سٹیشنری مرحلے میں نائٹروجن کا وزن 2.21% ہے جو پچھلے مطالعات میں 0.1735 اور 0.85% تھا۔ اس کا مطلب یہ ہے کہ موجودہ سٹیشنری فیز میں فینیلملیمائیڈ کی وجہ سے نائٹروجن کا وزن زیادہ ہے۔ اسی طرح، مصنوعات (4) اور (5) میں بالترتیب 2.7% اور 2.9% کاربن کا مواد ہوتا ہے، جب کہ حتمی مصنوعات (6) میں کاربن کا مواد 6.35% ہوتا ہے، جیسا کہ جدول 2 میں دکھایا گیا ہے۔ وزن میں کمی کی جانچ کرنے کے لیے PMP کے اسٹیشنری مرحلے پر تھرموگراومیٹریک تجزیہ (TGA) استعمال کیا گیا تھا، اور TGA وکر کا وزن کم کرنے کا TGA وکر ظاہر ہوتا ہے۔ 8.6%، جو کاربن کے مواد (6.35%) کے ساتھ اچھے معاہدے میں ہے، کیونکہ لیگنڈس میں نہ صرف C، بلکہ N، O اور H بھی ہوتے ہیں۔
ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate کو اس کے قطبی phenylmaleimide اور vinylisocyanate گروپوں کی وجہ سے سلکا کے ذرات کی سطح کو تبدیل کرنے کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔ Vinyl isocyanate گروپس زندہ بنیاد پرست پولیمرائزیشن کے ذریعہ اسٹائرین کے ساتھ مزید رد عمل ظاہر کرسکتے ہیں۔ دوسری وجہ ایک ایسے گروپ کو داخل کرنا ہے جس کا تجزیہ کار کے ساتھ اعتدال پسند تعامل ہو اور تجزیہ کار اور اسٹیشنری مرحلے کے درمیان کوئی مضبوط الیکٹرو اسٹاٹک تعامل نہ ہو، کیونکہ فینیلملیمائڈ موئیٹی کا عام پی ایچ پر کوئی ورچوئل چارج نہیں ہوتا ہے۔ اسٹیشنری مرحلے کی قطبیت کو اسٹائرین کی زیادہ سے زیادہ مقدار اور فری ریڈیکل پولیمرائزیشن کے رد عمل کے وقت سے کنٹرول کیا جاسکتا ہے۔ رد عمل کا آخری مرحلہ (فری ریڈیکل پولیمرائزیشن) اہم ہے کیونکہ یہ اسٹیشنری مرحلے کی قطبیت کو تبدیل کرتا ہے۔ ان اسٹیشنری مراحل میں کاربن کے مواد کو جانچنے کے لیے عنصری تجزیہ کیا گیا۔ یہ دیکھا گیا ہے کہ اسٹائرین کی مقدار اور رد عمل کے وقت میں اضافہ اسٹیشنری مرحلے کے کاربن مواد کو بڑھاتا ہے اور اس کے برعکس۔ اسٹائرین کے مختلف ارتکاز کے ساتھ تیار کردہ SPs میں مختلف کاربن بوجھ ہوتے ہیں۔ اسی طرح، یہ سٹیشنری مراحل سٹینلیس سٹیل کے کالموں پر رکھے گئے تھے اور ان کی کرومیٹوگرافک خصوصیات (سلیکٹیوٹی، ریزولوشن، این ویلیو، وغیرہ) کو چیک کیا گیا تھا۔ ان تجربات کی بنیاد پر، PMP سٹیشنری مرحلے کی تیاری کے لیے ایک بہترین ساخت کا انتخاب کیا گیا تاکہ کنٹرول شدہ قطبیت اور تجزیہ کار کی اچھی برقراری فراہم کی جا سکے۔
موبائل مرحلے کی صلاحیت کا استعمال کرتے ہوئے پیپٹائڈس کے پانچ مرکبات (گلی-ٹائر، گلی-لیو-ٹائر، گلی-گلی-ٹائر-آرگ، ٹائر-آئی-گلی-سیر-آرگ، لیوسین-اینکیفالن) کے تجزیہ کے لیے پی ایم پی کالم کا بھی جائزہ لیا گیا۔ 60/40 (v/v) ACN/پانی (0.1% TFA) 80 μl/منٹ کی بہاؤ کی شرح پر۔ زیادہ سے زیادہ اخراج کے حالات (200,000 پلیٹس/m) کے تحت، نظریاتی پلیٹوں کی تعداد (N) فی کالم (100 × 1.8 ملی میٹر) 20,000 ± 100 ہے۔ تین PMP کالموں کے لیے N قدریں جدول 3 میں دکھائی گئی ہیں اور کرومیٹوگرامس کو FAig میں دکھایا گیا ہے۔ ایک پی ایم پی کالم پر تیز بہاؤ کی شرح (700 µl/منٹ) پر تیز تجزیہ، ایک منٹ کے اندر پانچ پیپٹائڈز نکالے گئے، بہترین N ویلیو 13,500 ± 330 فی کالم (100 x 1.8 ملی میٹر قطر)، 135,000 پلیٹس (m.5 Fig/m.B) کے برابر۔ تولیدی صلاحیت کو جانچنے کے لیے ایک ہی سائز کے تین کالم (اندرونی قطر 100 x 1.8 ملی میٹر) پی ایم پی اسٹیشنری مرحلے کے تین مختلف بیچوں سے بھرے گئے تھے۔ تجزیہ کاروں کو ہر کالم پر ایک ہی ٹیسٹ مکسچر کو الگ کر کے ریکارڈ کیا گیا تھا جس میں زیادہ سے زیادہ اخراج کے حالات، نظریاتی پلیٹوں کی تعداد N، اور برقرار رکھنے کا وقت استعمال کیا گیا تھا۔ PMP کالموں کے لیے تولیدی صلاحیت کا ڈیٹا ٹیبل 4 میں دکھایا گیا ہے۔ PMP کالم کی تولیدی صلاحیت بہت کم %RSD اقدار کے ساتھ اچھی طرح سے منسلک ہے جیسا کہ جدول 3 میں دکھایا گیا ہے۔
پی ایم پی کالم (B) اور ایک Ascentis Express RP-Amide کالم (A) پر پیپٹائڈ مکسچر کی علیحدگی، موبائل فیز 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)، PMP کالم کے طول و عرض (100 x 1.8 ملی میٹر id)، تجزیہ Elution order of 2-Yr)، compoundly (Gly-Leu-Tyr)، 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)، 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) اور 5 ( leucic acid enkephalin)۔
ایک PMP کالم (اندرونی قطر 100 x 1.8 ملی میٹر) HPLC کے ذریعہ انسانی سیرم البومین کے ٹرپٹک ہائیڈرولائزیٹ کو الگ کرنے کے لئے جانچا گیا تھا۔ شکل 6 میں کرومیٹوگرام سے پتہ چلتا ہے کہ نمونے بہت اچھی ریزولوشن کے ساتھ اچھی طرح سے الگ ہیں۔ HSA حلوں کا تجزیہ 100 μl/min کی بہاؤ کی شرح، 70/30 acetonitrile/water کے موبائل مرحلے اور 0.1% TFA کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ HSA کی کلیویج کو 17 چوٹیوں میں تقسیم کیا گیا تھا، جیسا کہ کرومیٹوگرام (تصویر 6) میں دکھایا گیا ہے، جو 17 پیپٹائڈس کے مطابق ہے۔ HSA ہائیڈرولائزیٹ سے انفرادی چوٹیوں کی علیحدگی کی افادیت کا حساب لگایا گیا تھا اور اقدار کو جدول 5 میں دکھایا گیا ہے۔
PMP کالم (اندرونی قطر 100 x 1.8 mm)، بہاؤ کی شرح (100 μl/min)، موبائل فیز 60/40 acetonitrile/water، اور 0.1% TFA پر HSA ٹرپٹک ہائیڈرولیسٹس کو الگ کیا گیا تھا۔
جہاں L کالم کی لمبائی ہے، η موبائل مرحلے کی viscosity ہے، ΔP کالم کا پچھلا دباؤ ہے، اور u موبائل مرحلے کی لکیری رفتار ہے۔ PMP کالم کی پارگمیتا 2.5 × 10–14 m2 تھی، بہاؤ کی شرح 25 µl/min تھی، 60/40 v/v استعمال کی گئی تھی۔ ACN/پانی۔ PMP کالم (ID 100 × 1.8 mm) کی پارگمیتا ہمارے پچھلے Ref.34 مطالعہ کی طرح تھی۔ سطحی طور پر غیر محفوظ ذرات سے بھرے کالم کی پارگمیتا 1.7×10 .6 µm، 5 µm ذرات کے لیے 2.5×10-14 m2 ہے43۔ لہذا، PMP مرحلے کی پارگمیتا 5 μm کے سائز کے ساتھ کور شیل ذرات کی پارگمیتا کی طرح ہے۔
جہاں Wx کلوروفارم سے بھرے کالم کا ماس ہے، Wy میتھانول سے بھرے کالم کا ماس ہے، اور ρ سالوینٹ کی کثافت ہے۔ میتھانول کی کثافت (ρ = 0.7866) اور کلوروفارم (ρ = 1.484)۔ سلیکا-C18 پارٹیکل کالم (100 × 1.8 ملی میٹر ID) 34 اور ہمارے پہلے مطالعہ شدہ C18-urea31 کالم کی کل پورسٹی بالترتیب 0.63 اور 0.55 تھی۔ اس کا مطلب یہ ہے کہ یوریا لیگنڈس کی موجودگی اسٹیشنری مرحلے کی پارگمیتا کو کم کرتی ہے۔ دوسری طرف، PMP کالم (اندرونی قطر 100 × 1.8 ملی میٹر) کی کل پورسٹی 0.60 ہے۔ PMP کالم C18 پابند سلکا ذرات سے بھرے کالموں کے مقابلے میں کم پارگمی ہوتے ہیں کیونکہ C18 قسم کے سٹیشنری مراحل میں C18 ligands لکیری زنجیروں میں سلیکا کے ذرات سے منسلک ہوتے ہیں، جبکہ پولی سٹیرین قسم کے سٹیشنری مراحل میں ذرات کے گرد نسبتاً موٹا پولیمر بنتا ہے۔ تہہ A۔ ایک عام تجربے میں، کالم کی پورسٹی کا حساب اس طرح کیا جاتا ہے:
انجیر پر۔ 7A, B ایک PMP کالم (id 100 x 1.8 mm) اور ایک Ascentis Express RP-Amide کالم (id 100 x 1.8 mm) کے لیے اسی ایلیوشن حالات کے تحت 60/40 ACN/H2O اور 0.1% TFA 20µl/m/l/min دونوں پر دکھاتا ہے۔ کالم بہترین بہاؤ کی شرح (80 µl/min) پر کم از کم HETP قدریں PMP کالم اور Ascentis Express RP-Amide کالم کے لیے بالترتیب 2.6 µm اور 3.9 µm تھیں۔ HETP قدریں ظاہر کرتی ہیں کہ PMP کالم (100 x 1.8 mm id) کی علیحدگی کی کارکردگی تجارتی طور پر دستیاب Ascentis Express RP-Amide کالم (100 x 1.8 mm id) سے کہیں زیادہ ہے۔ تصویر 7(A) میں وین ڈیمٹر گراف ظاہر کرتا ہے کہ ہمارے پچھلے مطالعہ کے مقابلے میں بڑھتے ہوئے بہاؤ کے ساتھ N قدر میں کمی نمایاں طور پر زیادہ نہیں ہے۔ Ascentis Express RP-Amide کالم کے مقابلے PMP کالم (id 100 × 1.8 mm) کی اعلی علیحدگی کی کارکردگی بہتر ذرہ کی شکل اور سائز اور موجودہ کام میں استعمال ہونے والے نفیس کالم پیکنگ کے طریقہ کار پر مبنی ہے۔
(A) وین ڈیمٹر پلاٹ (HETP بمقابلہ موبائل فیز لکیری رفتار) 0.1% TFA کے ساتھ 60/40 ACN/H2O میں PMP کالم (id 100 x 1.8 mm) پر حاصل کیا گیا۔ (B) وین ڈیمٹر پلاٹ (HETP بمقابلہ موبائل فیز لکیری رفتار) 0.1% TFA کے ساتھ 60/40 ACN/H2O میں Ascentis Express RP-Amide کالم (id 100 x 1.8 mm) پر حاصل کیا گیا۔
اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی میں مصنوعی پیپٹائڈس اور ہیومن سیرم البومین (HSA) کے ٹرپٹک ہائیڈولائزیٹ کے مرکب کو الگ کرنے کے لیے انٹرکیلیٹڈ پولی اسٹرین کا ایک قطبی اسٹیشنری مرحلہ تیار اور جانچا گیا تھا۔ پیپٹائڈ مکسچر کے لیے پی ایم پی کالموں کی کرومیٹوگرافک کارکردگی علیحدگی کی کارکردگی اور ریزولوشن کے لحاظ سے بہترین ہے۔ PMP کالموں کی علیحدگی کی بہتر کارکردگی کئی وجوہات کی وجہ سے ہے جیسے کہ سیلیکا پارٹیکل سائز اور پور سائز، سٹیشنری فیزز کی کنٹرولڈ ترکیب، اور کالم پیکنگ کے پیچیدہ مواد۔ اعلی علیحدگی کی کارکردگی کے علاوہ، اس سٹیشنری مرحلے کا ایک اور فائدہ اعلی بہاؤ کی شرح پر کم کالم بیک پریشر ہے۔ پی ایم پی کالم انتہائی تولیدی ہوتے ہیں اور پیپٹائڈس کے مرکب اور مختلف پروٹینوں کے ٹرپٹک ہاضمے کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیے جا سکتے ہیں۔ ہم اس کالم کو قدرتی مصنوعات، دواؤں کے پودوں کے نچوڑ اور مائع کرومیٹوگرافی میں مشروم سے بایو ایکٹیو مرکبات کی علیحدگی کے لیے استعمال کرنے کا ارادہ رکھتے ہیں۔ مستقبل میں، پروٹین اور مونوکلونل اینٹی باڈیز کی علیحدگی کے لیے PMP کالموں کا بھی جائزہ لیا جائے گا۔
فیلڈ، JK، Euerby، MR، Lau، J.، Thøgersen، H. & Petersson، P. الٹ فیز کرومیٹوگرافی پیپٹائڈ سیپریشن سسٹمز میں انویسٹی گیشن حصہ I: کالم کی خصوصیت کے لیے ایک پروٹوکول کی ترقی۔ فیلڈ، JK، Euerby، MR، Lau، J.، Thøgersen، H. & Petersson، P. الٹ فیز کرومیٹوگرافی پیپٹائڈ سیپریشن سسٹمز کی تحقیقات حصہ I: کالم کی خصوصیت کے لیے ایک پروٹوکول کی ترقی۔فیلڈ، جے کے، اووربی، ایم آر، لاؤ، جے، ٹوگرسن، ایچ، اور پیٹرسن، پی. ریورس فیز کرومیٹوگرافی کے ذریعے پیپٹائڈ سیپریشن سسٹمز کی تحقیقات، حصہ I: کالم کی خصوصیت کے لیے ایک پروٹوکول تیار کرنا۔ فیلڈ، JK، Euerby، MR، Lau، J.، Thøgersen، H. & Petersson، P. الٹ فیز کرومیٹوگرافی پیپٹائڈ سیپریشن سسٹمز کی تحقیقات حصہ I: کالم کی خصوصیات کے لیے ایک پروٹوکول کی ترقی۔ فیلڈ، JK، Euerby، MR، Lau، J.، Thøgersen، H. & Petersson، P. الٹ فیز کرومیٹوگرافی پیپٹائڈ سیپریشن سسٹمز کی تحقیقات حصہ I: کالم کی خصوصیات کے لیے ایک پروٹوکول کی ترقی۔فیلڈ، جے کے، اووربی، ایم آر، لاؤ، جے، ٹوگرسن، ایچ، اور پیٹرسن، پی. ریورس فیز کرومیٹوگرافی کے ذریعے پیپٹائڈ سیپریشن سسٹمز کی تحقیقات، حصہ I: کالم کی خصوصیت کے لیے ایک پروٹوکول تیار کرنا۔J.色谱法. 1603,113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)۔
Gomez، B. et al. متعدی بیماریوں کے علاج کے لیے بہتر فعال پیپٹائڈس بنانے کے طریقے۔ بائیو ٹیکنالوجی. کامیابیاں 36(2)، 415–429۔ https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)۔
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: Science and market. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: Science and market.Vliege P، Lisowski V، Martinez J اور Chreschatyski M. مصنوعی علاج پیپٹائڈس: سائنس اور مارکیٹ۔Vliege P، Lisowski V، Martinez J اور Khreschatsky M. Synthetic therapeutic peptides: Science and market. منشیات کی دریافت. آج 15 (1–2)، 40–56۔ https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)۔
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography.ایف، سمتھ آر ڈی اور شین یو دیکھیں۔ اعلی درجے کی پروٹومک مائع کرومیٹوگرافی۔ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ایڈوانسڈ پروٹین کمپوزیشن 液相色谱.ایف، سمتھ آر ڈی اور شین یو دیکھیں۔ اعلی درجے کی پروٹومک مائع کرومیٹوگرافی۔J. کرومیٹوگرافی A 1261، 78–90 (2012)۔
Liu, W. et al. اعلی درجے کی مائع کرومیٹوگرافی-ماس اسپیکٹومیٹری وسیع پیمانے پر میٹابولومکس اور پروٹومکس کو یکجا کرنے کے قابل ہے۔ مقعد چم ایکٹا 1069، 89–97 (2019)۔
Chesnut, SM & Salisbury, JJ فارماسیوٹیکل ڈویلپمنٹ میں UHPLC کا کردار۔ Chesnut, SM & Salisbury, JJ فارماسیوٹیکل ڈویلپمنٹ میں UHPLC کا کردار۔Chesnut, SM اور Salisbury, JJ فارماسیوٹیکل ڈویلپمنٹ میں UHPLC کا کردار۔Chesnut, SM اور Salisbury, JJ منشیات کی نشوونما میں UHPLC کا کردار۔ J. ستمبر سائنس 30(8)، 1183–1190 (2007)۔
وو، این اور کلازن، اے ایم تیز رفتار علیحدگی کے لیے الٹرا ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی کے بنیادی اور عملی پہلو۔ وو، این اور کلازن، اے ایم تیز رفتار علیحدگی کے لیے الٹرا ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی کے بنیادی اور عملی پہلو۔وو، این اور کلوزن، اے ایم تیز رفتار علیحدگی کے لیے ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی کے بنیادی اور عملی پہلو۔ Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面۔ وو، این اور کلازن، اے ایم تیز رفتار علیحدگی کے لیے الٹرا ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی کے بنیادی اور عملی پہلو۔وو، این اور کلوزن، اے ایم تیز رفتار علیحدگی کے لیے ہائی پریشر مائع کرومیٹوگرافی کے بنیادی اور عملی پہلو۔J. ستمبر سائنس 30(8)، 1167–1182۔ https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)۔
Wren, SA & Tchelitcheff, P. فارماسیوٹیکل ڈویلپمنٹ میں الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی کا استعمال۔ Wren, SA & Tchelitcheff, P. فارماسیوٹیکل ڈویلپمنٹ میں الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی کا استعمال۔Ren, SA اور Chelischeff, P. فارماسیوٹیکل ڈیولپمنٹ میں الٹرا ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی کا استعمال۔ Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. Wren، SA اور Tchelitcheff، P.رین، SA اور Chelischeff، P. منشیات کی نشوونما میں الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی کا اطلاق۔J. کرومیٹوگرافی 1119(1-2)، 140-146۔ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)۔
Gu، H. et al. ایک یک سنگی میکرو پورس ہائیڈروجیل جو تیل میں پانی کے ایملشن سے اخذ کیا گیا ہے جس میں انٹرو وائرس کی موثر صفائی کے لیے اعلیٰ داخلی مرحلہ ہے 71۔ کیمیکل۔ پروجیکٹ جرنل 401، 126051 (2020)۔
Shi, Y., Xiang, R. Horváth, C. & Wilkins, JA پروٹومکس میں مائع کرومیٹوگرافی کا کردار۔ Shi, Y., Xiang, R. Horváth, C. & Wilkins, JA پروٹومکس میں مائع کرومیٹوگرافی کا کردار۔شی، وائی، ژیانگ، آر، ہورواتھ، سی اور ولکنز، جے اے پروٹومکس میں مائع کرومیٹوگرافی کا کردار۔ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用. Shi, Y., Xiang, R. Horváth, C. & Wilkins, JAشی، وائی، ژیانگ، آر، ہورواتھ، سی اور ولکنز، جے اے پروٹومکس میں مائع کرومیٹوگرافی کا کردار۔J. کرومیٹوگرافی A 1053 (1-2)، 27-36 (2004)۔
Fekete, S. Vutey, J.-L. & Guillarme, D. علاج کے پیپٹائڈس اور پروٹین کے ریورسڈ فیز مائع کرومیٹوگرافک علیحدگی میں نئے رجحانات: تھیوری اور ایپلی کیشنز۔ & Guillarme, D. علاج کے پیپٹائڈس اور پروٹین کے ریورسڈ فیز مائع کرومیٹوگرافک علیحدگی میں نئے رجحانات: تھیوری اور ایپلی کیشنز۔ & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматограбращи стоматографи: ٹیوریا اور پریلوجینیا۔ & Guillarme, D. ریورس فیز مائع کرومیٹوگرافی کے ذریعے علاج کے پیپٹائڈس اور پروٹینز کی علیحدگی میں نئے رجحانات: تھیوری اور ایپلی کیشنز۔ & Guillarme، D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用. اور Guillarme، D.اور Guillarmé, D. ریورس فیز مائع کرومیٹوگرافی کے ذریعے علاج کے پیپٹائڈس اور پروٹین کی علیحدگی میں نئے رجحانات: تھیوری اور ایپلی کیشنز۔جے فارم۔ بائیو میڈیکل سائنس۔ مقعد 69، 9–27 (2012)۔
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC پہلی اور دوسری علیحدگی کے طول و عرض میں مختلف pH کے ساتھ RP-RP-HPLC سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے پیپٹائڈس کی دو جہتی علیحدگی۔ Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC پہلی اور دوسری علیحدگی کے طول و عرض میں مختلف pH کے ساتھ RP-RP-HPLC سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے پیپٹائڈس کی دو جہتی علیحدگی۔Gilar M., Olivova P., Dali AE اور Gebler JK پہلی اور دوسری علیحدگی کے طول و عرض میں مختلف pH کے ساتھ RP-RP-HPLC نظام کا استعمال کرتے ہوئے پیپٹائڈس کی دو جہتی علیحدگی۔Gilar M., Olivova P., Dali AE اور Gebler JK RP-RP-HPLC نظام کا استعمال کرتے ہوئے پہلی اور دوسری علیحدگی کے طول و عرض میں مختلف pH اقدار کا استعمال کرتے ہوئے پیپٹائڈس کی دو جہتی علیحدگی۔ J. ستمبر سائنس 28 (14)، 1694–1703 (2005)۔
Fellitti، S. et al. 2 µm سے چھوٹے مکمل طور پر غیر محفوظ اور سطحی طور پر غیر محفوظ C18 ذرات سے بھرے اعلی کارکردگی والے کرومیٹوگرافی کالموں کی بڑے پیمانے پر منتقلی اور حرکی خصوصیات کی تحقیقات۔ J. ستمبر سائنس 43 (9–10)، 1737–1745 (2020)۔
Piovesana، S. et al. پلانٹ بائیو ایکٹیو پیپٹائڈس کی تنہائی، شناخت اور توثیق میں حالیہ رجحانات اور تجزیاتی چیلنجز۔ مقعد مخلوق مقعد. کیمیکل۔ 410(15)، 3425-3444۔ https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)۔
مولر، جے بی وغیرہ۔ زندگی کی بادشاہی کا پروٹومک لینڈ اسکیپ۔ فطرت 582 (7813)، 592–596۔ https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)۔
ڈی لوکا، K. et al. تیاری کے مائع کرومیٹوگرافی کے ذریعہ علاج کے بعد پیپٹائڈس کا علاج۔ مالیکیولز (بیسل، سوئٹزرلینڈ) 26(15)، 4688 (2021)۔
یانگ، وائی اور گینگ، ایکس مکسڈ موڈ کرومیٹوگرافی اور بائیو پولیمر پر اس کا اطلاق۔ یانگ، وائی اور گینگ، ایکس مکسڈ موڈ کرومیٹوگرافی اور بائیو پولیمر پر اس کا اطلاق۔یانگ، یو. اور گینگ، ایکس مکسڈ موڈ کرومیٹوگرافی اور بائیو پولیمر پر اس کا اطلاق۔ Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用. یانگ، وائی اور گینگ، ایکس مکسڈ موڈ کرومیٹوگرافی اور بائیو پولیمر میں اس کا اطلاق۔یانگ، یو. اور جین، X. مکسڈ موڈ کرومیٹوگرافی اور بائیو پولیمر پر اس کا اطلاق۔J. کرومیٹوگرافی A 1218(49)، 8813–8825 (2011)۔