Mèsi paske ou te vizite Nature.com. W ap itilize yon vèsyon navigatè ki gen sipò CSS limite. Pou pi bon eksperyans lan, nou rekòmande pou ou itilize yon navigatè ki ajou (oswa dezaktive Mòd Konpatibilite nan Internet Explorer). Anplis de sa, pou asire sipò kontinyèl, nou montre sit la san estil ak JavaScript.
Montre yon karousel twa diapozitiv alafwa. Sèvi ak bouton Presedan ak Pwochen yo pou deplase nan twa diapozitiv alafwa, oubyen sèvi ak bouton kurseur yo nan fen an pou deplase nan twa diapozitiv alafwa.
Yo te prepare patikil silica pore yo avèk metòd sol-jèl la avèk kèk modifikasyon pou jwenn patikil ki gen pò laj. Yo te derive patikil sa yo avèk N-fenilmaleimid-metilvinil izosyanat (PMI) ak stirèn atravè polimerizasyon transfè chèn envès-fragmantasyon (RAFT) pou pwodui poliamid entèkalan N-fenilmaleimid. Faz estasyonè stirèn (PMP). Yo te chaje kolòn asye pur etwat (100 × 1.8 mm dyamèt enteryè) avèk yon anbalaj sispansyon. Yo te evalye pèfòmans kromatografik kolòn PMP a pou separe yon melanj peptid sentetik ki gen senk peptid (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu asid amine ankefalin) ak idroliza triptik albumin serik imen (HAS). Anba kondisyon elisyon optimal, kantite teyorik plak ak yon melanj peptid te rive nan 280,000 plak/m². Lè yo konpare pèfòmans separasyon kolòn ki te devlope a ak kolòn komèsyal Ascentis Express RP-Amide la, yo te obsève ke efikasite separasyon kolòn PMP a te siperyè kolòn komèsyal la an tèm de efikasite separasyon ak rezolisyon.
Endistri byofamasetik la vin tounen yon mache mondyal k ap agrandi ak yon ogmantasyon siyifikatif nan pati nan mache a nan dènye ane yo. Avèk kwasans eksplozif endistri byofamasetik la1,2,3, gen yon gwo bezwen pou analiz peptid ak pwoteyin. Anplis peptid sib la, divès enpurte fòme pandan sentèz peptid la, kidonk pirifikasyon kromatografik nesesè pou jwenn pite peptid la vle a. Analiz ak karakterizasyon pwoteyin nan likid kòporèl, tisi ak selil se yon travay ki trè difisil akòz gwo kantite espès ki potansyèlman detektab ki prezan nan yon sèl echantiyon. Malgre ke espektwometri mas se yon zouti efikas pou sekansye peptid ak pwoteyin, si echantiyon sa yo entwodui dirèkteman nan espektwomèt mas la, separasyon an p ap satisfezan. Pwoblèm sa a ka rezoud lè w fè kromatografi likid (LC) anvan analiz MS, ki pral diminye kantite analit k ap antre nan espektwomèt mas la nan yon moman bay4,5,6. Anplis de sa, analit yo ka konsantre nan yon rejyon etwat pandan separasyon faz likid, kidonk konsantre analit sa yo epi ogmante sansiblite deteksyon MS la. Kromatografi likid (LC) te fè anpil pwogrè pandan dis dènye ane yo e li vin tounen yon metòd lajman itilize pou analiz pwoteyomik7,8,9,10.
Kromatografi likid faz envès (RP-LC) lajman itilize pou pirifye ak separe melanj peptid lè l sèvi avèk silica modifye ak oktadesil (ODS) kòm faz estasyonè11,12,13. Sepandan, akòz estrikti konplèks yo ak nati anfotè yo,14,15 faz estasyonè RP yo pa ka bay yon separasyon satisfezan peptid ak pwoteyin yo. Se poutèt sa, analiz peptid ak pwoteyin ki gen fragman polè ak non polè mande pou faz estasyonè ki fèt espesyalman pou kominike epi kenbe analit sa yo16. Kromatografi melanje, ki ofri entèraksyon multimodal, kapab yon altènativ a RP-LC pou separe peptid, pwoteyin, ak lòt melanj konplèks. Plizyè faz estasyonè tip melanje te prepare epi kolòn ki ranpli ak faz estasyonè sa yo te itilize pou separe peptid ak pwoteyin17,18,19,20,21. Akòz prezans gwoup polè ak non polè, faz estasyonè mòd melanje (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, entèkalasyon polè/RPLC) yo apwopriye pou separasyon peptid ak pwoteyin22,23,24,25,26,27,28. , faz estasyonè entèkale polè ak gwoup polè ki lye kovalan montre bon kapasite separasyon ak selektivite inik pou analit polè ak non polè paske separasyon depann de entèraksyon ki genyen ant analit la ak faz estasyonè a Entèraksyon multimodal 29,30,31,32. Dènyèman, Zhang et al. 30 te jwenn faz estasyonè poliamin ki fini ak behenyl epi yo te separe avèk siksè idrokarbur, antidepresè, flavonoid, nikleyozid, estwojèn, ak kèk lòt analit. Materyèl estasyonè entegre polè a gen tou de gwoup polè ak non polè, kidonk li ka itilize pou separe peptid ak pwoteyin an pati idrofob ak idrofil. Kolòn polè an liy (pa egzanp, kolòn C18 ak amid an liy) disponib sou non komèsyal kolòn Ascentis Express RP-Amide, men kolòn sa yo te sèlman itilize pou analiz amin 33.
Nan etid aktyèl la, yo te prepare yon faz estasyonè polè entegre (N-fenilmaleimid, polistirèn entegre) epi evalye li pou separasyon peptid ak klivaj triptik HSA. Yo te itilize estrateji sa a pou prepare faz estasyonè a. Patikil silica pore yo te prepare dapre pwosedi ki dekri nan piblikasyon anvan nou yo, ak kèk chanjman nan plan preparasyon 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Yo te ajiste rapò ure, poliglikòl etilèn (PEG), TMOS ak asid akeuz-asetik pou jwenn patikil silica ak gwo gwosè pò. Dezyèmman, yo te sentetize yon nouvo ligand fenilmaleimid-metilvinil izosyanat epi yo te itilize patikil silica derive li yo pou prepare faz estasyonè polè entegre yo. Faz estasyonè yo te jwenn nan te chaje nan yon kolòn asye pur (dyamèt enteryè 100 × 1.8 mm) dapre yon plan anbalaj optimize. Anbalaj kolòn nan ede pa vibrasyon mekanik pou asire yon kouch inifòm nan kolòn nan. Yo te evalye kolòn ki te ranpli a pou separasyon yon melanj peptid ki gen senk peptid (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, peptid lesin-ankefalin) ak idroliza triptik albumin serik imen (HSA). Yo te obsève ke melanj peptid la ak dijès triptik HSA a te separe avèk bon rezolisyon ak efikasite. Yo te konpare efikasite separasyon kolòn PMP a ak sa ki nan kolòn Ascentis Express RP-Amide la. Yo te obsève ke peptid yo ak pwoteyin yo gen bon rezolisyon ak gwo efikasite separasyon sou kolòn PMP a, epi efikasite separasyon kolòn PMP a pi wo pase sa ki nan kolòn Ascentis Express RP-Amide la.
PEG (polietilèn glikòl), ure, asid asetik, trimetoksiotosilikat (TMOS), trimetilklorosilan (TMCS), tripsin, albumin serik imen (HSA), klori amonyòm, ure, egzametilmetakriloildisilazan (HMDS), klori metakriloil (MC), stiren, 4-idroksi-TEMPO, benzoil peroksid (BPO), asetonitril (ACN) pou HPLC, metanol, 2-propanol ak asetòn. Konpayi Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Etazini).
Yo te brase yon melanj ure (8 g), poliglikòl etilèn (8 g) ak 8 ml asid asetik 0.01 N pandan 10 minit, epi yo te ajoute 24 ml TMOS anba refwadisman glas. Yo te chofe melanj reyaksyon an a 40°C pandan 6 èdtan epi answit a 120°C pandan 8 èdtan nan yon otoklav asye pur. Yo te dekante dlo a epi yo te seche rezidi a a 70°C pandan 12 èdtan. Yo te moulen blòk mou seche yo san pwoblèm epi yo te kalsine yo nan yon fou a 550°C pandan 12 èdtan. Yo te prepare epi karakterize twa pakèt pou teste repwodiktibilite gwosè patikil yo, gwosè pò yo ak sifas yo.
Gwoup polè ak faz estasyonè pou chenn polistirèn. Pwosedi preparasyon an dekri anba a.
Yo te fonn N-fenilmaleimid (200 mg) ak metil vinil izosyanat (100 mg) nan toluèn anid, epi answit yo te ajoute 0.1 ml 2,2′-azoizobutironitril (AIBN) nan flakon reyaksyon an pou jwenn yon kopolime fenilmaleimid ak metil vinil izosyanat (PMCP). ) Yo te chofe melanj lan a 60°C pandan 3 èdtan, yo te filtre l epi yo te seche l nan yon fou a 40°C pandan 3 èdtan.
Patikil silica sèch yo (2 g) te dispèse nan toluèn sèch (100 ml), yo te brase epi yo te sonike pandan 10 minit nan yon flakon wonn 500 ml. PMCP (10 mg) te fonn nan toluèn epi yo te ajoute l gout pa gout nan flakon reyaksyon an atravè yon antonwa adisyon. Melanj lan te refli nan 100°C pandan 8 èdtan, yo te filtre l, yo te lave l ak asetòn epi yo te seche l nan 60°C pandan 3 èdtan. Apre sa, patikil silica ki asosye ak PMCP (100 g) yo te fonn nan toluèn (200 ml), epi yo te ajoute 4-idwoksi-TEMPO (2 ml) ladan l an prezans 100 μl dilaurat dibutilten kòm yon katalis. Melanj lan te brase nan 50°C pandan 8 èdtan, yo te filtre l epi yo te seche l nan 50°C pandan 3 èdtan.
Stirene (1 ml), peroksid benzoil BPO (0.5 ml) ak patikil silica ki tache ak TEMPO-PMCP (1.5 g) te dispèse nan toluèn epi yo te pirifye ak azòt. Polimerizasyon stirene a te fèt a 100°C pandan 12 èdtan. Pwodwi ki te sòti a te lave ak metanòl epi li te seche pandan tout lannwit lan a 60°C. Figi youn montre schèma jeneral reyaksyon an.
Yo te degaze echantiyon yo a 393 K pandan 1 èdtan jiskaske yo te jwenn yon presyon rezidyèl mwens pase 10–3 Torr. Yo te itilize kantite N2 ki te adsorbe a presyon relatif P/P0 = 0.99 pou detèmine volim total pò a. Yo te egzamine mòfoloji patikil silica pi ak lye ak ligand yo lè l sèvi avèk yon mikwoskòp elektwonik optik (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japon). Yo te mete echantiyon sèk (silica pi ak patikil silica lye ak ligand) sou baton aliminyòm lè l sèvi avèk tep kabòn. Yo te depoze lò sou echantiyon an lè l sèvi avèk yon aparèy pulverizasyon Q150T, epi yo te depoze yon kouch Au 5 nm epè sou echantiyon an. Sa amelyore efikasite pwosesis ba vòltaj la epi li bay yon flite frèt byen file. Yo te fè analiz elemantè a lè l sèvi avèk yon analizè konpozisyon elemantè Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112. Yo te itilize yon analizè gwosè patikil Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 pou jwenn distribisyon gwosè patikil la. Patikil silica ki pa kouvri yo ak patikil silica ki lye ak ligand (5 mg chak) te dispèse nan 5 ml izopropanol, sonike pandan 10 minit, ajite pandan 5 minit, epi mete sou yon ban optik Mastersizer. Analiz tèmogravimetrik la te fèt nan yon vitès 5 °C pa minit nan yon seri tanperati ant 30 ak 800 °C.
Kolòn asye pur etwat aliyen ak fib vè ak dimansyon (ID 100 × 1.8 mm) yo te ranpli ak metòd ranpli sispansyon an swivan menm pwosedi a tankou nan referans 31. Kolòn asye pur (aliyen ak vè, ID 100 × 1.8 mm) ak yon sòti ki gen yon frit 1 µm te konekte ak yon machin anbalaj sispansyon (Alltech Deerfield, IL, USA). Prepare yon sispansyon faz estasyonè a lè w sispann 150 mg nan faz estasyonè a nan 1.2 ml metanòl epi mete l nan yon kolòn rezèvwa. Metanòl te itilize kòm solvan sispansyon an ak solvan kontwòl la. Ranje kolòn nan lè w aplike yon sekans presyon 100 MP pandan 10 min, 80 MP pandan 15 min, ak 60 MP pandan 30 min. Pwosesis anbalaj la te itilize de vibratè kolòn kromatografi gaz (Alltech, Deerfield, IL, USA) pou vibrasyon mekanik pou asire yon anbalaj inifòm nan kolòn nan. Fèmen machin anbalaj sispansyon an epi lage presyon an dousman pou anpeche domaj nan fisèl la. Yo te dekonekte kolòn nan ak bouch sispansyon an epi yo te tache yon lòt ekipman nan admisyon an epi konekte li ak sistèm LC a pou teste fonksyònman li.
Yo te konstwi yon MLC pèsonalize lè l sèvi avèk yon ponp LC (10AD Shimadzu, Japon), yon echantiyonè ak yon bouk enjeksyon 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), yon degazè manbràn (Shimadzu DGU-14A), ak yon fenèt kapilè UV-VIS. Yo te itilize yon aparèy detektè (UV-2075) ak yon mikwokolòn emaye. Yo te itilize tib koneksyon ki trè etwat ak kout pou minimize efè ekspansyon adisyonèl kolòn nan. Apre yo fin ranpli kolòn nan, enstale yon kapilè (50 µm id 365) nan sòti jonksyon reduktè 1/16″ la epi enstale yon kapilè (50 µm) nan jonksyon reduktè a. Yo te kolekte done yo ak trete kromatogram nan lè l sèvi avèk lojisyèl Multichro 2000 la. A 254 nm, yo te kontwole absòbans UV sibstans yo te analize a 0. Yo te analize done kromatograf yo lè l sèvi avèk OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin serik imen, poud liofilize, ≥ 96% (elektroforèz jèl agaroz) 3 mg melanje ak tripsin (1.5 mg), 4.0 M ure (1 ml) ak 0.2 M bikabonat amonyòm (1 ml). Solisyon an te brase pandan 10 minit epi li te kenbe nan yon beny dlo a 37°C pandan 6 èdtan, answit li te retire likid la ak 1 ml 0.1% TFA. Filtre solisyon an epi estoke l anba 4°C.
Yo te evalye separasyon yon melanj peptid ak HSA dijere triptik sou yon kolòn PMP separeman. Tcheke idwoliz triptik yon melanj peptid ak HSA separe pa yon kolòn PMP epi konpare rezilta yo ak yon kolòn Ascentis Express RP-Amide. Yo kalkile kantite plak teyorik yo lè l sèvi avèk ekwasyon sa a:
Imaj SEM patikil silica pi ak patikil silica ki lye ak ligand yo montre nan Figi 2. Imaj SEM patikil silica pi (A, B) yo montre yon fòm esferik kote patikil yo long oswa gen simetri iregilye konpare ak etid anvan nou yo. Sifas patikil silica ki lye ak ligand lan (C, D) pi lis pase sa ki nan patikil silica pi, sa ki ka akòz chenn polistirèn ki kouvri sifas patikil silica yo.
Mikwografi elektwonik optik patikil silica pi (A, B) ak patikil silica lye ak ligand (C, D).
Distribisyon gwosè patikil patikil silica pi ak patikil silica lye ak ligand yo montre nan Fig. 2. 3(A). Koub distribisyon gwosè patikil volimèt yo montre ke gwosè patikil silica a ogmante apre modifikasyon chimik la (Fig. 3A). Done distribisyon gwosè patikil silica ki soti nan etid aktyèl la ak etid anvan an konpare nan Tablo 1(A). Gwosè patikil volimèt d(0.5) PMP a te 3.36 µm, konpare ak valè ad(0.5) 3.05 µm nan etid anvan nou an (patikil silica lye ak polistirèn)34. Akòz chanjman nan rapò PEG, ure, TMOS ak asid asetik nan melanj reyaksyon an, distribisyon gwosè patikil pakèt sa a te pi etwat konpare ak etid anvan nou an. Gwosè patikil faz PMP a yon ti kras pi gwo pase faz patikil silica lye ak polistirèn ke nou te etidye pi bonè. Sa vle di ke fonksyonalizasyon sifas patikil silica yo ak styrene depoze sèlman yon kouch polistyrene (0.97 µm) sou sifas silica a, alòske nan faz PMP a epesè kouch la te 1.38 µm.
Distribisyon gwosè patikil (A) ak distribisyon gwosè pò (B) patikil silica pi ak patikil silica lye ak ligand.
Gwosè pò yo, volim pò yo, ak sifas patikil silica yo itilize nan etid sa a yo montre nan Tablo 1 (B). Pwofil PSD patikil silica pi yo ak patikil silica ki lye ak ligand yo montre nan Figi 3 (B). Rezilta yo te konparab ak etid anvan nou an34. Gwosè pò patikil silica pi ak lye ak ligand yo te 310 Å ak 241 Å, respektivman, sa ki endike ke apre modifikasyon chimik la, gwosè pò a te diminye pa 69 Å, jan yo montre nan Tablo 1 (B), epi koub chanjman an montre nan Figi 1. Sifas espesifik patikil silica yo nan etid aktyèl la se 116 m2/g, ki konparab ak etid anvan nou an (124 m2/g). Jan yo montre nan Tablo 1 (B), sifas (m2/g) patikil silica yo apre modifikasyon chimik la te diminye tou soti nan 116 m2/g pou rive nan 105 m2/g.
Rezilta analiz elemantè faz estasyonè a prezante nan Tablo 2. Kontni kabòn nan faz estasyonè aktyèl la se 6.35%, ki pi ba pase nan etid anvan nou an (patikil silica ki asosye avèk polistirèn, 7.93%35 ak 10.21%, respektivman) 42. Kontni kabòn nan faz estasyonè aktyèl la anba a, piske kèk ligand polè tankou fenilmaleimid metil vinil izosyanat (PCMP) ak 4-idroksi-TEMPO yo te itilize anplis stirèn nan preparasyon SP. Pousantaj pwa azòt nan faz estasyonè aktyèl la se 2.21% konpare ak 0.1735 ak 0.85% nan etid anvan yo42. Sa vle di ke faz estasyonè aktyèl la gen yon pousantaj pwa azòt ki wo akòz fenilmaleimid la. Menm jan an tou, pwodwi (4) ak (5) yo gen yon kontni kabòn 2.7% ak 2.9% respektivman, alòske pwodwi final la (6) gen yon kontni kabòn 6.35%, jan yo montre nan Tablo 2. Yo te itilize analiz tèmogravimetrik (TGA) sou faz estasyonè PMP a pou teste pèt pwa, epi koub TGA a montre nan Figi 4. Koub TGA a montre yon pèt pwa 8.6%, ki an bon akò ak kontni kabòn nan (6.35%), piske ligand yo pa sèlman genyen C, men tou N, O ak H.
Yo te chwazi ligand fenilmaleimid-metilvinil izosyanat la pou modifye sifas patikil silica yo poutèt gwoup polè fenilmaleimid ak vinilisyanat li yo. Gwoup izosyanat vinil yo ka reyaji plis avèk estirèn pa polimerizasyon radikal vivan. Dezyèm rezon an se pou mete yon gwoup ki gen entèraksyon modere avèk analit la epi ki pa gen okenn entèraksyon elektwostatik fò ant analit la ak faz estasyonè a, piske pati fenilmaleimid la pa gen okenn chaj vityèl nan pH nòmal. Polarite faz estasyonè a ka kontwole pa kantite optimal estirèn ak tan reyaksyon polimerizasyon radikal lib la. Dènye etap reyaksyon an (polimerizasyon radikal lib) enpòtan paske li chanje polarite faz estasyonè a. Yo te fè analiz elemantè pou tcheke kontni kabòn nan faz estasyonè sa yo. Yo te obsève ke ogmante kantite estirèn ak tan reyaksyon an ogmante kontni kabòn nan faz estasyonè a epi vis vèsa. SP ki prepare avèk diferan konsantrasyon estirèn gen diferan chaj kabòn. Menm jan an tou, yo te mete faz estasyonè sa yo sou kolòn asye pur epi yo te verifye karakteristik kromatografik yo (selektivite, rezolisyon, valè N, elatriye). Baze sou eksperyans sa yo, yo te chwazi yon konpozisyon optimize pou preparasyon faz estasyonè PMP a pou bay polarite kontwole ak bon retansyon analit la.
Yo te evalye kolòn PMP a tou pou analiz senk melanj peptid (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, lesin-enkefalin) lè l sèvi avèk kapasite faz mobil lan. 60/40 (v/v) ACN/dlo (0.1% TFA) nan yon vitès koule 80 µl/min. Anba kondisyon elisyon optimal (200,000 plak/m), kantite plak teorik (N) pou chak kolòn (100 × 1.8 mm) se 20,000 ± 100. Valè N pou twa kolòn PMP yo montre nan Tablo 3 epi kwomatogram yo montre nan Figi 5A. Analiz rapid nan yon vitès koule ki wo (700 µl/min) sou yon kolòn PMP, senk peptid te elimine nan yon minit, ekselan valè N 13,500 ± 330 pa kolòn (100 x 1.8 mm dyamèt), ekivalan a 135,000 plak/m (Fig. 5B). Twa kolòn menm gwosè a (dyamèt enteryè 100 x 1.8 mm) te ranpli ak twa pakèt diferan faz estasyonè PMP pou teste repwodiktibilite a. Analit yo te anrejistre pou chak kolòn lè yo te separe menm melanj tès la sou chak kolòn lè l sèvi avèk kondisyon elisyon optimal, kantite plak teyorik N, ak tan retansyon. Done repwodiktibilite pou kolòn PMP yo montre nan Tablo 4. Repwodiktibilite kolòn PMP a te korele byen ak valè %RSD ki trè ba jan yo montre nan Tablo 3.
Separasyon melanj peptid sou yon kolòn PMP (B) ak yon kolòn Ascentis Express RP-Amide (A), faz mobil 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), dimansyon kolòn PMP (100 x 1.8 mm id), analiz Lòd elisyon konpoze yo: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ak 5 (ankefalin asid lesirik).
Yo te evalye yon kolòn PMP (dyamèt enteryè 100 x 1.8 mm) pou separasyon idroliza triptik albumin serik imen an pa HPLC. Kromatogram nan Figi 6 la montre ke echantiyon yo byen separe ak yon trè bon rezolisyon. Yo te analize solisyon HSA yo lè l sèvi avèk yon to koule 100 μl/min, yon faz mobil 70/30 asetonitril/dlo ak 0.1% TFA. Yo te divize klivaj HSA a an 17 pik, jan yo montre nan kromatogram nan (Fig. 6), ki koresponn ak 17 peptid. Yo te kalkile efikasite separasyon pik endividyèl yo nan idroliza HSA a epi valè yo montre nan Tablo 5.
Idroliza triptik HSA yo te separe sou yon kolòn PMP (dyamèt enteryè 100 x 1.8 mm), vitès koule (100 μl/min), faz mobil 60/40 asetonitril/dlo, ak 0.1% TFA.
Kote L se longè kolòn nan, η se viskozite faz mobil lan, ΔP se presyon dèyè kolòn nan, epi u se vitès lineyè faz mobil lan. Pèmeyabilite kolòn PMP a te 2.5 × 10–14 m2, to koule a te 25 µl/min, yo te itilize 60/40 v/v. ACN/dlo. Pèmeyabilite kolòn PMP a (ID 100 × 1.8 mm) te sanble ak sa ki nan etid Ref.34 anvan nou an. Pèmeyabilite yon kolòn ki ranpli ak patikil ki pore sifasyalman se 1.7×10 .6 µm, 2.5×10-14 m2 pou patikil 5 µm43. Se poutèt sa, pèmeyabilite faz PMP a sanble ak pèmeyabilite patikil nwayo-kokiy ki gen yon gwosè 5 μm.
Kote Wx se mas kolòn ki ranpli ak klorofòm, Wy se mas kolòn ki ranpli ak metanòl, epi ρ se dansite solvan an. Dansite metanòl (ρ = 0.7866) ak klorofòm (ρ = 1.484). Porosit total kolòn patikil silica-C18 la (100 × 1.8 mm ID)34 ak kolòn C18-ure31 nou te etidye deja a te 0.63 ak 0.55, respektivman. Sa vle di ke prezans ligand ure yo diminye pèmeyabilite faz estasyonè a. Nan lòt men an, porosit total kolòn PMP a (dyamèt enteryè 100 × 1.8 mm) se 0.60. Kolòn PMP yo mwens pèmeyab pase kolòn ki chaje ak patikil silica lye ak C18 paske nan faz estasyonè tip C18 ligand C18 yo tache ak patikil silica yo nan chenn lineyè, alòske nan faz estasyonè tip polistirèn, yon polimè relativman epè fòme alantou patikil yo. kouch A. Nan yon eksperyans tipik, yo kalkile porosit kolòn nan jan sa a:
Nan figi 7A ak 7B yo montre graf Van Deemter pou yon kolòn PMP (id 100 x 1.8 mm) ak yon kolòn Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) anba menm kondisyon elisyon yo, 60/40 ACN/H2O ak 0.1% TFA 20 µl/min rive 800 µl/min sou tou de kolòn yo. Valè HETP minimòm yo nan to koule optimal la (80 µl/min) te 2.6 µm ak 3.9 µm pou kolòn PMP a ak kolòn Ascentis Express RP-Amide a, respektivman. Valè HETP yo montre ke efikasite separasyon kolòn PMP a (100 x 1.8 mm id) pi wo pase sa ki nan kolòn Ascentis Express RP-Amide ki disponib nan komès la (100 x 1.8 mm id). Grafik van Deemter nan Fig. 7(A) a montre ke diminisyon nan valè N lan pa siyifikativman pi wo lè koule a ogmante konpare ak etid anvan nou an. Pi gwo efikasite separasyon kolòn PMP a (id 100 × 1.8 mm) konpare ak kolòn Ascentis Express RP-Amide la baze sou amelyorasyon fòm ak gwosè patikil yo ak pwosedi sofistike anbalaj kolòn ki itilize nan travay aktyèl la34.
(A) Graf Van Deemter (HETP vs. vitès lineyè faz mobil) jwenn sou yon kolòn PMP (id 100 x 1.8 mm) nan 60/40 ACN/H2O ak 0.1% TFA. (B) Graf Van Deemter (HETP vs vitès lineyè faz mobil) jwenn sou yon kolòn Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) nan 60/40 ACN/H2O ak 0.1% TFA.
Yo te prepare epi evalye yon faz estasyonè polè nan polistirèn entèkalan pou separasyon yon melanj peptid sentetik ak idroliza triptik albumin serik imen (HSA) nan kromatografi likid pèfòmans segondè. Pèfòmans kromatografik kolòn PMP yo pou melanj peptid yo ekselan an tèm de efikasite separasyon ak rezolisyon. Amelyorasyon efikasite separasyon kolòn PMP yo akòz plizyè rezon tankou gwosè patikil silica ak gwosè pò, sentèz kontwole faz estasyonè yo, ak materyèl konplèks anbalaj kolòn yo. Anplis efikasite separasyon segondè a, yon lòt avantaj faz estasyonè sa a se presyon kontwo kolòn ki ba a nan gwo to koule. Kolòn PMP yo trè repwodiktib epi yo ka itilize pou analize melanj peptid ak dijesyon triptik divès pwoteyin. Nou gen entansyon itilize kolòn sa a pou separasyon konpoze byoaktif nan pwodwi natirèl, ekstrè plant medsin ak dyondyon nan kromatografi likid. Nan lavni, yo pral evalye kolòn PMP yo tou pou separasyon pwoteyin ak antikò monoklonal yo.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Envestigasyon sou sistèm separasyon peptid kwomatografi faz envèse pati I: Devlopman yon pwotokòl pou karakterizasyon kolòn. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Envestigasyon sou sistèm separasyon peptid kwomatografi faz envèse pati I: Devlopman yon pwotokòl pou karakterizasyon kolòn.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ak Petersson, P. Envestigasyon sou Sistèm Separasyon Peptid pa Kromatografi Faz Envès, Pati I: Devlope yon Pwotokòl pou Karakterizasyon Kolòn. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Envestigasyon sou sistèm separasyon peptid kwomatografi faz envèse pati I: Devlopman yon pwotokòl pou karakteristik kolòn. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Envestigasyon sou sistèm separasyon peptid kwomatografi faz envèse pati I: Devlopman yon pwotokòl pou karakteristik kolòn.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ak Petersson, P. Envestigasyon sou Sistèm Separasyon Peptid pa Kromatografi Faz Envès, Pati I: Devlope yon Pwotokòl pou Karakterizasyon Kolòn.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
Gomez, B. et al. Metòd pou kreye peptid aktif amelyore pou tretman maladi enfeksyon. Biotechnology. Achievements 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. ak Khrestchatisky, M. Peptid terapetik sentetik: Syans ak mache. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. ak Khrestchatisky, M. Peptid terapetik sentetik: Syans ak mache.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ak Chreschatyski M. Peptid terapetik sentetik: syans ak mache.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ak Khreschatsky M. Peptid terapetik sentetik: syans ak mache. dekouvèt dwòg. Jodi a 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD ak Shen, Y. Kromatografi likid pwoteyomik avanse. Xie, F., Smith, RD ak Shen, Y. Kromatografi likid pwoteyomik avanse.Gade F., Smith RD ak Shen Yu. Kromatografi likid pwoteyomik avanse. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Konpozisyon pwoteyin avanse 液相色谱。Gade F., Smith RD ak Shen Yu. Kromatografi likid pwoteyomik avanse.J. Kromatografi. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Kromatografi likid avanse ak espektwometri mas kapab konbine metabolomik ak pwoteyomik ki baze sou laj. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM ak Salisbury, JJ Wòl UHPLC nan devlopman famasetik. Chesnut, SM ak Salisbury, JJ Wòl UHPLC nan devlopman famasetik.Chesnut, SM ak Salisbury, JJ Wòl UHPLC nan devlopman famasetik.Chesnut, SM ak Salisbury, JJ Wòl UHPLC nan devlopman dwòg. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. ak Clausen, AM Aspè fondamantal ak pratik kromatografi likid presyon ultra wo pou separasyon rapid. Wu, N. ak Clausen, AM Aspè fondamantal ak pratik kromatografi likid presyon ultra wo pou separasyon rapid.Wu, N. ak Clausen, AM Aspè fondamantal ak pratik nan kromatografi likid presyon wo pou separasyon rapid. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. ak Clausen, AM Aspè debaz ak pratik nan kromatografi likid ultra-wo presyon pou separasyon rapid.Wu, N. ak Clausen, AM Aspè fondamantal ak pratik nan kromatografi likid presyon wo pou separasyon rapid.J. Sept. Science. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Itilizasyon kromatografi likid ultra-pèfòmans nan devlopman famasetik. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Itilizasyon kromatografi likid ultra-pèfòmans nan devlopman famasetik.Ren, SA ak Chelischeff, P. Itilizasyon kromatografi likid ultra pèfòmans nan devlopman famasetik. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA ak Tchelitcheff, P.Ren, SA ak Chelischeff, P. Aplikasyon kromatografi likid ultra-pèfòmans nan devlopman dwòg.J. Kromatografi. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Yon idrojèl makroporoz monolitik sòti nan yon emilsyon lwil-nan-dlo ak yon faz entèn ki wo pou pirifikasyon efikas enterovirus 71. Pwojè Chimik. Journal 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Wòl kromatografi likid nan pwoteyomik. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Wòl kromatografi likid nan pwoteyomik.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ak Wilkins, JA Wòl kromatografi likid nan pwoteyomik. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ak Wilkins, JA Wòl kromatografi likid nan pwoteyomik.J. Kromatografi. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Nouvo tandans nan separasyon kromatografik likid faz envèse nan peptid ak pwoteyin terapetik: Teyori ak aplikasyon. & Guillarme, D. Nouvo tandans nan separasyon kromatografik likid faz envèse nan peptid ak pwoteyin terapetik: Teyori ak aplikasyon. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жомощью жомфических с обращенной фазой: теория и приложения. & Guillarme, D. Nouvo tandans nan separasyon peptid ak pwoteyin terapetik pa kromatografi likid faz envès: teyori ak aplikasyon. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 ak Guillarme, D.ak Guillarmé, D. Nouvo tandans nan separasyon peptid ak pwoteyin ki ka geri pa kromatografi likid faz envès: teyori ak aplikasyon.J. Pharm. Syans byomedikal. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Separasyon peptid bidimensyonèl lè l sèvi avèk sistèm RP-RP-HPLC ak diferan pH nan premye ak dezyèm dimansyon separasyon yo. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Separasyon peptid bidimensyonèl lè l sèvi avèk sistèm RP-RP-HPLC ak diferan pH nan premye ak dezyèm dimansyon separasyon yo.Gilar M., Olivova P., Dali AE ak Gebler JK Separasyon peptid bidimensyonèl lè l sèvi avèk sistèm RP-RP-HPLC la ak diferan pH nan premye ak dezyèm dimansyon separasyon yo.Gilar M., Olivova P., Dali AE ak Gebler JK Separasyon peptid bidimensyonèl lè l sèvi avèk diferan valè pH nan premye ak dezyèm dimansyon separasyon yo lè l sèvi avèk sistèm RP-RP-HPLC la. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Envestigasyon sou transfè mas ak karakteristik sinetik kolòn kromatografi pèfòmans segondè ki chaje ak patikil C18 ki totalman pore ak sifasyalman pore ki pi piti pase 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Tandans resan ak defi analiz nan izolasyon, idantifikasyon ak validasyon peptid byoaktif plant yo. anus. Creature anal. Chemical. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Peyizaj pwoteyomik wayòm lavi a. Nature 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. Tretman apre peptid terapetik yo pa kromatografi likid preparatif. Molecules (Basel, Swis) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. ak Geng, X. Kromatografi mòd melanje ak aplikasyon li yo nan byopolimè. Yang, Y. ak Geng, X. Kromatografi mòd melanje ak aplikasyon li yo nan byopolimè.Yang, Yu. ak Geng, X. Kromatografi mòd melanje ak aplikasyon li nan byopolimè. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. ak Geng, X. Kromatografi mòd melanje ak aplikasyon li nan byopolimè.Yang, Yu. ak Gene, X. Kromatografi mòd melanje ak aplikasyon li nan byopolimè.J. Kromatografi. Yon 1218(49), 8813–8825 (2011).