Nature.com сайтына кергәнегез өчен рәхмәт. Сез чикләнгән CSS ярдәме белән браузер версиясен кулланасыз. Иң яхшы тәҗрибә өчен без яңартылган браузерны кулланырга киңәш итәбез (яки Internet Explorer'та туры килү режимын сүндерегез). Моннан тыш, дәвамлы ярдәмне тәэмин итү өчен, без сайтны стильләр һәм JavaScriptсыз күрсәтәбез.
Берьюлы өч слайд карусельен күрсәтә. Алдагы һәм Киләсе төймәләрне берьюлы өч слайд аша күчерү өчен кулланыгыз, яки ахырда слайдер төймәләрен берьюлы өч слайд аша күчерегез.
Кисәк кремний кисәкчәләре киң күзәнәк кисәкчәләрен алу өчен кайбер модификацияләр белән сол-гель ысулы белән әзерләнгән. Бу кисәкчәләр N-фенилмалеймид-метилвинил изокянат (PMI) һәм стирол белән кире чылбыр күчерү-фрагментлаштыру (RAFT) полимеризациясе аша N-фенилмалеймид үзара полиамидлар чыгару өчен алынган. Стирол (PMP) стационар этап. Тар борычсыз корыч баганалар (100 × 1,8 мм эчке диаметр) пычрак төрү белән тутырылган. PMP баганасының хроматографик эшләнеше биш пептидтан торган синтетик пептидлар катнашмасын аеру өчен бәяләнде (Гли-Тир, Гли-Лей-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, Лев аминокислота энкефалин) һәм кеше серумы альбуминының триптик гидролизаты (HAS). Оптималь элитация шартларында пептидлар катнашлы тәлинкәләрнең теоретик саны 280,000 тәлинкә / кв.м.га җитте. Эшләнгән багананың аеру күрсәткечләрен коммерция Ascentis Express RP-Amide баганасы белән чагыштырганда, PMP баганасының аеру эффективлыгы аеру эффективлыгы һәм резолюциясе ягыннан коммерция баганасыннан өстенрәк булганы күзәтелде.
Биофармацевтика индустриясе соңгы елларда базар өлешенең сизелерлек артуы белән киңәя барган глобаль базарга әйләнде. Биофармацевтика сәнәгатенең шартлаучы үсеше белән 1,2,3 пептид һәм протеин анализы кирәк. Максатлы пептидка өстәп, пептид синтезы вакытында төрле пычраклар барлыкка килә, шуңа күрә пептидның чисталыгын алу өчен хроматографик чистарту таләп ителә. Тәндәге сыеклыкларда, тукымаларда, күзәнәкләрдә протеиннарны анализлау һәм характеризацияләү - бер үрнәктә булган потенциаль ачыклана торган төрләрнең күплеге аркасында бик катлаулы эш. Масса спектрометриясе пептидлар һәм протеиннарны эзләү өчен эффектив корал булса да, мондый үрнәкләр масса спектрометрына турыдан-туры кертелсә, аеру канәгатьләнерлек булмас. Бу проблеманы MS анализы алдыннан сыек хроматография (LC) ясап чишеп була, бу билгеле бер вакытта масса спектрометрына кергән аналитиклар күләмен киметәчәк 4,5,6. Моннан тыш, аналитиклар сыек фазаны аеру вакытында тар төбәктә туплана алалар, шуның белән бу аналитикларны туплыйлар һәм MS ачыклауның сизгерлеген арттыралар. Сыек хроматография (LC) соңгы ун елда сизелерлек алга китте һәм протеом анализы өчен киң кулланылган ысулга әйләнде7,8,9,10.
Кире фазалы сыек хроматография (RP-LC) октадецил-модификацияләнгән кремний (ODS) стационар этап буларак пептидларның катнашмаларын чистарту һәм аеру өчен киң кулланыла11,12,13. Ләкин, аларның катлаулы структурасы һәм амфотерик табигате аркасында, 14,15 РП стационар этаплар пептидлар һәм протеиннарның канәгатьләнерлек аерылуын тәэмин итә алмый. Шуңа күрә, пептидлар һәм протеиннарны поляр һәм поляр булмаган фрагментлар белән анализлау, бу аналитикларны үзара бәйләнештә тоту өчен, махсус эшләнгән стационар этапларны таләп итә16. Мультимодаль үзара бәйләнешне тәкъдим итүче катнаш хроматография, пептидларны, протеиннарны һәм башка катлаулы катнашмаларны аеру өчен RP-LC өчен альтернатива булырга мөмкин. Берничә катнаш типтагы стационар этаплар әзерләнде һәм бу стационар этаплар белән тутырылган баганалар пептидларны һәм протеиннарны аеру өчен кулланылды17,18,19,20,21. Поляр һәм поляр булмаган төркемнәр булганлыктан, катнаш режим стационар этаплар (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, поляр инкальация / RPLC) пептидлар һәм аксымнарны аеру өчен яраклы22,23,24,25,26,27,28. , ковалентлы бәйләнгән поляр төркемнәр белән поляр үзара бәйләнгән стационар этаплар яхшы аеру мөмкинлекләрен һәм поляр һәм поляр булмаган аналитиклар өчен уникаль сайлылыкны күрсәтәләр, чөнки аеру аналитик һәм стационар этап мультимодаль үзара бәйләнешкә бәйле 29,30,31,32. Күптән түгел, Чжан һәм башкалар. 30 полиаминнарның бехенил белән туктатылган стационар этапларын алдылар һәм углеводородлар, антидепрессантлар, флавоноидлар, нуклеозидлар, эстрогеннар һәм кайбер башка аналитикларны уңышлы аердылар. Поляр урнаштырылган стационар материалның поляр һәм поляр булмаган төркемнәре бар, шуңа күрә ул пептидларны һәм аксымнарны гидрофобик һәм гидрофилик өлешләргә аеру өчен кулланылырга мөмкин. Поляр сызык баганалары (мәсәлән, амид сызыгы булган C18 баганалары) сәүдә исеме астында Ascentis Express RP-Amide баганалары бар, ләкин бу баганалар бары тик 33 амин анализы өчен кулланылган.
Хәзерге тикшеренүдә поляр урнаштыру стационар этап (N-фенилмалеймид, полистиролны урнаштыру) пептидны аеру һәм триптик HSA ярылуы өчен бәяләнде. Стационар этапны әзерләү өчен түбәндәге стратегия кулланылды. Кисәк кремний кисәкчәләре алдагы басмаларыбызда тасвирланган процедуралар буенча әзерләнде, 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 схемаларында кайбер үзгәрешләр кертелде. Карбамид, полиэтилен гликол (PEG), TMOS һәм су-кисотик кислотасы зур кремний кисәкчәләре алу өчен көйләнде. Икенчедән, яңа фенилмалеймид-метилвинил изосянат лиган синтезланды һәм полярланган стационар этапларны әзерләү өчен аның кремний кисәкчәләре кулланылды. Алынган стационар этап оптимальләштерелгән төрү схемасы буенча дат басмаган корыч баганага (эчке диаметры 100 × 1,8 мм) тутырылган. Колоннаны төрү багана эчендә бердәм катламны тәэмин итү өчен механик тибрәнү ярдәмендә. Пакетланган багана биш пептидтан торган пептидлар катнашмасын аеру өчен бәяләнде (Глы-Тир, Гли-Лей-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, лейцин-энкефалин пептиды). һәм кеше зарарлы альбуминның триптик гидролизатлары (HSA). Пептид катнашмасы һәм HSA триптик ашказаны яхшы резолюция һәм эффективлык белән аерылганлыгы күзәтелде. PMP баганасының аеру эффективлыгы Ascentis Express RP-Amide баганасы белән чагыштырылды. Пептидлар һәм протеиннарның PMP баганасында яхшы резолюциясе һәм югары аеру эффективлыгы күзәтелде, һәм PMP баганасының аеру эффективлыгы Ascentis Express RP-Amide баганасына караганда югарырак.
PEG (полиэтилен гликол), карбамид, кисотик кислотасы, триметоксиортосиликат (ТМОС), триметилхлоросилан (TMCS), трипсин, кеше серумы альбумины (HSA), аммиак хлорид, карбамид, гексеметилметакрилойдисилазан (HMDS), метакрилоил хлорид пероксид (BPO), HPLC өчен ацетонитрил (ACN), метанол, 2-пропанол һәм ацетон. Сигма-Алдрич компаниясе (Сент-Луис, Миссури, АКШ).
Карбамид (8 г), полиэтилен гликол (8 г) һәм 8 мл 0,01 Н кислотасы кислотасы 10 минутка кайнатылды, һәм боз суыту астында аңа 24 мл ТМОС кушылды. Реакция катнашмасы 40 ° C температурада 6 сәгать, аннары 120 ° C датсыз корыч автоклавда 8 сәгать җылытылды. Су чистартылды һәм калдык 70 ° C ка 12 сәгать киптерелде. Кипкән йомшак блоклар шома җиргә салынган һәм 550 ° C мичтә 12 сәгать эчендә кальцинацияләнгән. Өч партия әзерләнде һәм кисәкчәләрнең зурлыгын, күзәнәк күләмен һәм өслек мәйданын кабатлау өчен характеристика бирелде.
Полистирол чылбырлары өчен поляр төркем һәм стационар этап. Әзерлек процедурасы түбәндә тасвирланган.
Н-фенилмалеймид (200 мг) һәм метил винил изосянат (100 мг) сусыз толуенда эретелде, аннары фенилмалеймид һәм метил винил изокян кополимерын алу өчен реакция флассасына 0,1 мл 2,2′-азоизобутиронитрил (AIBN) кушылды. ) Бу катнашма 60 ° C температурада 3 сәгать җылытылды, фильтрланды һәм 40 ° C мичтә 3 сәгать киптерелде.
Кипкән кремний кисәкчәләре (2 г) коры толуенда (100 мл) таралдылар, 500 мл түгәрәк төбендә 10 минутка кайнатылды һәм соникатланды. PMCP (10 мг) толуенда эретелде һәм өстәмә функция аша реакция флассасына тамчы тамчы кушылды. Бу катнашма 100 ° C температурада 8 сәгать чагылдырылды, фильтрланды, ацетон белән юылды һәм 60 ° C ка 3 сәгать киптерелде. Аннары, PMCP (100 г) белән бәйле кремний кисәкчәләре толуенда (200 мл) эретелде, һәм катализатор буларак 100 μл дибутилтин дилаураты булганда 4-гидрокси-ТЕМПО (2 мл) кушылды. Бу катнашма 50 ° C температурада 8 сәгать кайнатылды, фильтрланды һәм 50 ° C ка 3 сәгать киптерелде.
Стирол (1 мл), бензойл пероксиды BPO (0,5 мл) һәм TEMPO-PMCP (1,5 г) кушылган кремний кисәкчәләре толуенда таралдылар һәм азот белән чистартылды. Стиролны полимерлаштыру 100 ° C температурада 12 сәгать дәвамында башкарылды. Нәтиҗә ясалган продукт метанол белән юылган һәм төнлә 60 ° C ка киптерелгән. Реакциянең гомуми схемасы инҗирдә күрсәтелгән. бер.
3рнәкләр 393 К температурада 1 сәг. P2 P0 = 0.99 чагыштырмача басымда adsorbed N2 күләме гомуми күзәнәк күләмен билгеләү өчен кулланылды. Чиста һәм бәйләнешле кремний кисәкчәләренең морфологиясе сканерлау электрон микроскопы ярдәмендә тикшерелде (Hitachi High Technologies, Токио, Япония). Коры үрнәкләр (саф кремний һәм бәйләнгән кремний кисәкчәләре) углерод тасмасы ярдәмендә алюминий чыбыкларга урнаштырылды. Алтын Q150T чәчү җайланмасы ярдәмендә үрнәккә салынган, һәм үрнәккә 5 нм калынлыктагы Ау катламы салынган. Бу түбән көчәнеш процессының эффективлыгын яхшырта һәм яхшы салкын сиптерүне тәэмин итә. Элемент анализы Термо Электрон (Уолтам, MA, АКШ) Flash EA1112 элемент композиция анализаторы ярдәмендә башкарылды. Малверн кисәкчәләренең зурлыгы анализаторы (Ворчестершир, Бөекбритания) Mastersizer 2000 кисәкчәләрнең зурлыгын бүлү өчен кулланылды. Ябык булмаган кремний кисәкчәләре һәм бәйләнгән кремний кисәкчәләре (һәрберсе 5 мг) 5 мл изопропанолда таралдылар, 10 минутка соникалаштырылды, 5 минут агитацияләнде һәм мастеризатор оптик эскәмиясенә урнаштырылды. Термогравиметрик анализ минутына 5 ° C температурада 30дан 800 ° C га кадәр температурада үткәрелә.
Пыяла җепселле тезелгән корыч баганалар, үлчәмнәре (ID 100 × 1,8 мм), 31 нче сылтамадагы кебек үк, тутыру ысулы белән тутырылган. Датсыз корыч багана (пыяла тезелгән, ID 100 × 1 .8 мм) һәм 1 мм фрит булган розетка пычрак төрү машинасына тоташтырылган (Alltech Deerfield, IL, АКШ). 1,2 мл метанолда 150 мг стационар этапны туктатып, аны сусаклагыч баганасына ашатып, стационар этапны туктатырга әзерләгез. Метанол эретүче һәм контроль эретүче буларак кулланылган. Колоннаны 10 минутка 100 MP, 15 минутка 80 MP, 30 минутка 60 MP басым эзлеклелеген кулланып тутырыгыз. Управление процессында бердәм багана төрүен тәэмин итү өчен механик тибрәнү өчен ике газ хроматографиясе баганасы тибриторлары (Alltech, Deerfield, IL, АКШ) кулланылды. Пычрак пакетны ябып, чыбыкка зыян китермәс өчен басымны әкренләп җибәрегез. Колонка пычрактан өзелде һәм тагын бер җиһаз кертүгә бәйләнде һәм LC системасына тоташты, аның эшләвен сынау өчен.
LC насос (10AD Шимадзу, Япония), 50 nL инъекция әйләнәсе (Валко (АКШ) C14 W.05), мембрана дегассеры (Шимадзу DGU-14A) һәм UV-VIS капиллярлы тәрәзә ярдәмендә махсус MLC төзелгән. Детектор җайланмасы (UV-2075) һәм эмаль микроколум. Өстәмә багананың киңәю эффектын киметү өчен бик тар һәм кыска тоташтыргыч трубалар кулланыгыз. Колоннаны тутырганнан соң, 1/16 ″ кыскарту чыганагына капилляр (50 µm id 365) урнаштырыгыз һәм кыскарту юлының капиллярын (50 µm) урнаштырыгыз. Мәгълүмат җыю һәм хроматограмма эшкәртү Multichro 2000 программасы ярдәмендә башкарыла. 254 нм тизлектә, субъект аналитикларының UV сеңдерелүе 0 күзәтелде. Хроматографик мәгълүматлар OriginPro8 (Нортгемптон, MA) ярдәмендә анализланды.
Кеше серумы альбумин, лиофилизацияләнгән порошок, ≥ 96% (агароза гели электрофорезы) 3 мг трипсин (1,5 мг), 4,0 М карбамид (1 мл) һәм 0,2 М аммиак биарбонаты (1 мл) белән кушылган. Чишелеш 10 минутка кайнатылды һәм 37 ° C су ваннасында 6 сәг., Аннары 1 мл 0,1% TFA белән сүндерелде. Чишелешне фильтрлагыз һәм 4 ° C астыннан саклагыз.
PMP баганасында пептидлар һәм триптик ашкайнату HSA катнашмасының аерылуы аерым бәяләнде. PMP баганасы белән аерылган пептидлар һәм HSA катнашмасының триптик гидролизын тикшерегез һәм нәтиҗәләрне Ascentis Express RP-Amide баганасы белән чагыштырыгыз. Теоретик тәлинкәләр саны түбәндәге тигезләмә ярдәмендә исәпләнә:
Чиста кремний кисәкчәләренең SEM образлары һәм бәйләнгән кремний кисәкчәләре 2-нче рәсемдә күрсәтелгән. Чиста кремний кисәкчәләренең SEM рәсемнәре сферик форманы күрсәтәләр, анда кисәкчәләр озынрак яки тәртипсез симметриягә ия. Лиганд (C, D) белән бәйләнгән кремний кисәкчәләренең өслеге саф кремний кисәкчәләренә караганда йомшак, бу кремний кисәкчәләре өслеген каплаган полистирол чылбырлары аркасында булырга мөмкин.
Чиста кремний кисәкчәләренең электрон микрографларын (А, В) һәм бәйләнгән кремний кисәкчәләрен (С, Д) сканерлау.
Чиста кремний кисәкчәләренең һәм лиганд белән бәйләнгән кремний кисәкчәләренең зурлыгы бүленеше 2 нче рәсемдә күрсәтелгән. 3 (А). Күләм кисәкчәләренең зурлыгы тарату кәкреләре кремний кисәкчәләренең зурлыгы химик модификациядән соң артканын күрсәттеләр (3A рәсем). Агымдагы өйрәнүдән һәм алдагы өйрәнүдән кремний кисәкчәләренең зурлыгы тарату мәгълүматлары 1 таблицада (А) чагыштырыла. ПМПның күләмле кисәкчәләрнең зурлыгы d (0,5) 3,36 мм булган, алдагы өйрәнүебездә (полистирол белән бәйләнгән кремний кисәкчәләре) реклама (0,5) бәясе 3,05 мм. Реакция катнашмасында PEG, карбамид, ТМОС һәм кисотик кислотаның нисбәтенең үзгәрүе аркасында, бу партиянең кисәкчәләр күләме бүленеше алдагы өйрәнүебез белән чагыштырганда таррак иде. PMP фазасының кисәкчәләр күләме без элек өйрәнгән полистирол белән бәйләнгән кремний кисәкчәләре фазасына караганда бераз зуррак. Димәк, кремний кисәкчәләренең стирол белән функциональләшүе кремний өслегендә полистирол катламын (0,97 мм) гына урнаштырган, PMP фазасында катлам калынлыгы 1,38 мм булган.
Чиста кремний кисәкчәләренең һәм бәйләнешле кремний кисәкчәләренең кисәкчәләр күләмен бүлү (А) һәм күзәнәк зурлыгы бүленеше.
Бу тикшеренүдә кулланылган кремний кисәкчәләренең күзәнәк күләме, күзәнәк күләме, өслеге мәйданы 1 (В) таблицасында күрсәтелгән. Чиста кремний кисәкчәләренең PSD профильләре һәм бәйләнгән кремний кисәкчәләре Рәсемнәрдә күрсәтелгән. 3 (В). Нәтиҗә безнең алдагы өйрәнү белән чагыштырыла иде34. Чиста һәм бәйләнгән кремний кисәкчәләренең күзәнәк зурлыклары тиешенчә 310 Å һәм 241 were булган, бу химик модификациядән соң күзәнәкнең күләме 69 Å кимегәнен күрсәтә, 1 таблицада (В) күрсәтелгәнчә, смена сызыгы Рәсемдә күрсәтелгән. 1 (В) таблицасында күрсәтелгәнчә, химик модификациядән соң кремний кисәкчәләренең өслек мәйданы (m2 / g) шулай ук ​​116 м2 / г дан 105 м2 / гга кадәр кимеде.
Стационар этапны элементаль анализлау нәтиҗәләре таблицада китерелгән. 2. Хәзерге стационар этапның углерод күләме 6,35% тәшкил итә, бу безнең алдагы тикшерүебезгә караганда түбәнрәк (полистирол белән бәйләнгән кремний кисәкчәләре, тиешенчә, 7,93% 35 һәм 10,21%) 42. Түбәндәге стационар этапның углерод эчтәлеге, чөнки фенилмалеймид метил винил изокянат (PCMP) һәм 4-гидрокси әзерләүдә кулланылган. Азотның хәзерге стационар этаптагы авырлыгы 2,21% тәшкил итә, алдагы тикшеренүләрдә 0,1735 һәм 0,85%. Димәк, хәзерге стационар этапта фенилмалеймид аркасында азотның зур авырлыгы бар. Нәкъ шулай ук ​​(4) һәм (5) продуктларның углерод күләме 2,7% һәм 2,9% тәшкил итә, соңгы продукт (6) 6,35% тәшкил итә, 2 нче таблицада күрсәтелгәнчә. Термогравиметрик анализ (TGA) PMP стационар этабында авырлыкны киметү өчен кулланылган, һәм TGA кәкресе 4% рәсемдә күрсәтелгән. лигандларда С кына түгел, N, O һәм H да бар.
Лиганд фенилмалеймид-метилвинил изокянат кремний кисәкчәләренең өслеген үзгәртү өчен сайланган, поляр фенилмалеймид һәм винилисокянат төркемнәре аркасында. Винил изокянат төркемнәре стирол белән тере радикаль полимеризация ярдәмендә реакция ясый ала. Икенче сәбәп - аналитик белән уртача үзара бәйләнештә булган һәм аналитик белән стационар этап арасында көчле электростатик үзара тәэсир итмәгән төркем кертү, чөнки фенилмалеймидның гадәти pHда виртуаль корылмасы юк. Стационар этапның полярлыгы оптималь күләмдә стирол һәм ирекле радикал полимеризациянең реакция вакыты белән идарә ителергә мөмкин. Реакциянең соңгы адымы (ирекле радикаль полимеризация) бик мөһим, чөнки ул стационар этапның полярлыгын үзгәртә. Бу стационар этапларда углерод күләмен тикшерү өчен элемент анализы үткәрелде. Стирол күләмен һәм реакция вакытын арттыру стационар фазаның углерод күләмен һәм киресенчә артуын күзәттеләр. Төрле концентрацияле стирол белән әзерләнгән СПлар төрле углерод йөкләренә ия. Шулай ук, бу стационар этаплар дат басмаган корыч баганаларга урнаштырылды һәм аларның хроматографик характеристикалары (сайлап алу, резолюция, N кыйммәте һ.б.) тикшерелде. Бу экспериментларга нигезләнеп, контроль поляритны һәм аналитикны яхшы саклап калу өчен, PMP стационар фазасын әзерләү өчен оптимальләштерелгән композиция сайланды.
ПМП баганасы шулай ук ​​биш катнаш пептидны анализлау өчен бәяләнде (Гли-Тир, Гли-Лей-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, лейцин-энкефалин) күчмә фазаның сыйдырышлыгын кулланып. 60/40 (v / v) ACN / су (0,1% TFA) 80 µл / мин. Оптималь элитация шартларында (200,000 тәлинкә / м), баганага теоретик тәлинкәләр саны (100 × 1,8 мм) 20,000 ± 100. Өч PMP баганасы өчен N кыйммәтләре 3 таблицада һәм хроматограммалар 5A рәсемдә күрсәтелгән. PMP баганасында югары агым тизлегендә (700 µл / мин) тиз анализ, бер пептид бер минут эчендә сузылды, баганага 13,500 ± 330 (диаметры 100 x 1,8 мм), 135,000 тәлинкә / мга тигез (5Б рәсем). Бер үк зурлыктагы өч багана (эчке диаметры 100 х 1,8 мм) репродуктивлыкны сынау өчен PMP стационар этапның өч төрле партиясе белән тутырылды. Аналитиклар һәр багана өчен бер үк сынау катнашмасын оптималь элитация шартларын, N теоретик тәлинкәләр саны һәм тоту вакытын кулланып язылды. PMP баганалары өчен репродуктивлык мәгълүматлары 4 таблицада күрсәтелгән. PMP баганасының репродуктивлыгы 3% таблицада күрсәтелгәнчә бик түбән RSD кыйммәтләре белән яхшы корреляцияләнгән.
ПМП баганасында пептид катнашмаларын аеру (B) һәм Ascentis Express RP-Amide баганасы (A), мобиль фаза 60/40 ACN / H2O (TFA 0,1%), PMP баганасы үлчәмнәре (100 x 1.8 мм id), кушылмаларның элитация тәртибе: 1 (Глы-Тир), 2 (Глы-Лей-Тир), 3 (Глы-Арлы) (Тир-Иле-Гли-Сер-Арг) һәм 5 (лейк кислотасы энкефалин).
PMP баганасы (эчке диаметры 100 x 1,8 мм) HPLC тарафыннан кеше серум альбомының триптик гидролизатын аеру өчен бәяләнде. 6-нчы рәсемдәге хроматограмма үрнәкләрнең бик яхшы резолюция белән аерылганын күрсәтә. HSA чишелешләре 100 μl / мин агым тизлеге, 70/30 ацетонитрил / су мобиль фазасы һәм 0,1% TFA ярдәмендә анализланды. Хроматограммада күрсәтелгәнчә (6-нчы рәсем) 17 пептидка туры килгән HSA ярылуы 17 иң югарыга бүленде. Аерым чокырларның HSA гидролизатыннан аеру эффективлыгы исәпләнде һәм кыйммәтләр 5 таблицада күрсәтелде.
HSA триптик гидролизатлары PMP баганасында (эчке диаметры 100 x 1,8 мм), агым тизлеге (100 μл / мин), күчмә фаза 60/40 ацетонитрил / су, һәм 0,1% TFA белән аерылды.
монда L - багана озынлыгы, η - мобиль фазаның ябышлыгы, ΔP - багананың арткы басымы, ә u - күчмә фазаның сызыклы тизлеге. PMP баганасының үткәрүчәнлеге 2,5 × 10–14 м2, агым тизлеге 25 µл / мин, 60/40 v / v кулланылды. ACN / су. PMP баганасының үткәрүчәнлеге (ID 100 × 1,8 мм) безнең элеккеге Ref.34 өйрәнүенә охшаган. Өстән тыш күзәнәк кисәкчәләр белән тутырылган багананың үткәрүчәнлеге 1,7 × 10 .6 мм, 5 мм кисәкчәләр өчен 2,5 × 10-14 м2. Шуңа күрә, PMP фазасының үткәрүчәнлеге 5 мм зурлыктагы үзәк-кабык кисәкчәләренең үткәрүчәнлегенә охшаш.
монда Wx - хлороформа белән тутырылган багана массасы, Wy - метанол белән тутырылган багана массасы, һәм ρ - эретүче тыгызлыгы. Метанол тыгызлыгы (ρ = 0.7866) һәм хлороформ (ρ = 1.484). Силикат-C18 кисәкчәләр баганасының гомуми күзәнәклеге (100 × 1,8 мм ID) 34 һәм безнең элек өйрәнелгән C18-карбамид 31 баганасы тиешенчә 0,63 һәм 0,55 иде. Димәк, карбамид лигандлары булу стационар этапның үткәрүчәнлеген киметә. Икенче яктан, PMP баганасының гомуми күзәнәклеге (эчке диаметры 100 × 1,8 мм) 0,60. PMP баганалары C18 бәйләнгән кремний кисәкчәләре белән тутырылган баганаларга караганда азрак үткәрелә, чөнки C18 тибындагы стационар этапларда C18 лигандлары кремний кисәкчәләренә сызыклы чылбырларда тоташтырыла, ә полистирол тибындагы стационар этапларда кисәкчәләр тирәсендә чагыштырмача калын полимер барлыкка килә. катлам A. Типик экспериментта багананың күзәнәклеге түбәндәгечә исәпләнә:
Инҗирдә. 7A, B PMP баганасы (id 100 x 1,8 мм) һәм Ascentis Express RP-Amide баганасы (id 100 x 1.8 мм), 60/40 ACN / H2O һәм 0 .1% TFA 20 µl / мин - 800 µl / мин. Оптималь агым тизлегендә минималь HETP кыйммәтләре (80 µл / мин) PMP баганасы һәм Ascentis Express RP-Amide баганасы өчен 2,6 мм һәм 3,9 мм булган. HETP кыйммәтләре шуны күрсәтә: PMP баганасының аеру эффективлыгы (100 x 1,8 мм id) коммерциядә булган Ascentis Express RP-Amide баганасына караганда (100 x 1.8 мм id) күпкә югарырак. 7 нче рәсемдә (A) ван Демтер графигы күрсәтә, N кыйммәтенең кимүе алдагы өйрәнү белән чагыштырганда агымның артуы белән сизелерлек зур түгел. PMP баганасының аерылу эффективлыгы (id 100 × 1,8 мм) Ascentis Express RP-Amide баганасы белән чагыштырганда, кисәкчәләрнең формасы һәм күләме яхшырган һәм хәзерге эштә кулланылган катлаулы багана төрү процедурасына нигезләнгән34.
(А) Ван Демтер сюжеты (HETP vs. мобиль фазалы сызыклы тизлек) PMP баганасында (id 100 x 1.8 мм) 60/40 ACN / H2O белән 0,1% TFA белән алынган. (B) Van Deemter сюжеты (HETP мобиль фаза сызыклы тизлеккә каршы) Ascentis Express RP-Amide баганасында (id 100 x 1.8 мм) 60/40 ACN / H2O белән 0,1% TFA белән алынган.
Бер-берсенә бәйләнгән полистиролның поляр стационар фазасы югары синтетик пептидлар һәм кеше зарарлы альбомин (HSA) триптик гидролизаты катнашмасын аеру өчен әзерләнде һәм бәяләнде. Пептид катнашмалары өчен PMP баганаларының хроматографик эшләнеше аеру эффективлыгы һәм резолюциясе ягыннан бик яхшы. PMP баганаларының аерылу эффективлыгы кремний кисәкчәләренең зурлыгы һәм күзәнәк күләме, стационар этапларның контроль синтезы һәм катлаулы багана төрү материаллары кебек берничә сәбәп аркасында килеп чыга. Separгары аеру эффективлыгына өстәп, бу стационар этапның тагын бер өстенлеге - югары агым темпларында түбән багана басымы. PMP баганалары бик репродуктив һәм пептидлар һәм төрле протеиннарның триптик ашказаны катнашмаларын анализлау өчен кулланыла ала. Бу багананы биоактив кушылмаларны табигый продуктлардан, дару үләннәре һәм гөмбәләрнең сыек хроматографиядән аеру өчен кулланырга уйлыйбыз. Киләчәктә PMP баганалары шулай ук ​​протеиннарны һәм моноклональ антителаларны аеру өчен бәяләнәчәк.
Кыр, ДжК, Эверби, М.Р., Лау, Дж., Тøгерсен, Х. & Питерсон, П. Кыр, ДжК, Эверби, М.Р., Лау, Дж., Тøгерсен, Х. & Питерсон, П.Филд, ДжК, Оверби, М.Р., Лау, Дж., Тогерсен, Х., һәм Питерсон, П. Кыр, ДжК, Эверби, М.Р., Лау, Дж., Тøгерсен, Х. & Питерсон, П. Кыр, ДжК, Эверби, М.Р., Лау, Дж., Тøгерсен, Х. & Питерсон, П.Филд, ДжК, Оверби, М.Р., Лау, Дж., Тогерсен, Х., һәм Питерсон, П.J. 色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
Гомес, Б. һ.б. Йогышлы авыруларны дәвалау өчен яхшыртылган актив пептидлар булдыру ысуллары. Биотехнология. Уңышлар 36 (2), 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Влиеге, П., Лисовски, В., Мартинес, Дж. & Хрестчатиский, М. Синтетик терапевтик пептидлар: Фән һәм базар. Влиеге, П., Лисовски, В., Мартинес, Дж. & Хрестчатиский, М. Синтетик терапевтик пептидлар: Фән һәм базар.Влиеге П, Лисовски V, Мартинес Дж һәм Чресчатски М. Синтетик терапевтик пептидлар: фән һәм базар.Влиеге П, Лисовски V, Мартинес Дж һәм Хресшатский М. Синтетик терапевтик пептидлар: фән һәм базар. наркотиклар табу. Бүген 15 (1-2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Си, Ф., Смит, RD & Шен, Y. Алга киткән протеомик сыек хроматография. Си, Ф., Смит, RD & Шен, Y. Алга киткән протеомик сыек хроматография.Ф., Смит RD һәм Шен Yu кара. Алга киткән протеомик сыек хроматография. Си, Ф., Смит, RD & Шен, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Си, Ф., Смит, РД & Шен, Y. Алдынгы протеин составы 液相色谱。Ф., Смит RD һәм Шен Yu кара. Алга киткән протеомик сыек хроматография.Дж. Хрестоматия. 1261, 78–90 (2012).
Лю, В. һ.б. Алга киткән сыек хроматография-масса спектрометрия киң нигезле метаболомика һәм протеомиканы берләштерә ала. анус. Хим. Acta 1069, 89–97 (2019).
Чеснут, СМ & Солсбери, Дж. Фармацевтика үсешендә UHPLC роле. Чеснут, СМ & Солсбери, Дж. Фармацевтика үсешендә UHPLC роле.Чеснут, СМ һәм Солсбери, Дж. Фармацевтика үсешендә UHPLC роле.Чеснут, СМ һәм Солсбери, Дж. Наркотиклар үсешендә UHPLC роле. Фән. 30 (8), 1183–1190 (2007).
Ву, Н. & Клаузен, AM Тиз аерылу өчен ультра югары басымлы сыек хроматографиянең төп һәм практик аспектлары. Ву, Н. & Клаузен, AM Тиз аерылу өчен ультра югары басымлы сыек хроматографиянең төп һәм практик аспектлары.Ву, Н. һәм Клаузен, AM Тиз аерылу өчен югары басымлы сыек хроматографиянең төп һәм практик аспектлары. Ву, Н. & Клаузен, АМ 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Ву, Н. & Клаузен, АМ тиз аерылу өчен ультра югары басымлы сыек хроматографиянең төп һәм практик аспектлары.Ву, Н. һәм Клаузен, AM Тиз аерылу өчен югары басымлы сыек хроматографиянең төп һәм практик аспектлары.Фән. 30 (8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Фармацевтика үсешендә ультра эшлекле сыек хроматографияне куллану. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Фармацевтика үсешендә ультра эшлекле сыек хроматографияне куллану.Ren, SA һәм Chelischeff, P. Фармацевтика үсешендә ультра югары җитештерүчән сыек хроматографияне куллану. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA һәм Chelischeff, P. Наркотиклар үсешендә ультра эшлекле сыек хроматографияне куллану.Дж. Хрестоматия. 1119 (1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Гу, Х. һ.б. Монолит макропороз гидрогел нефть-судагы эмульсиядән алынган, энтеровирусны эффектив чистарту өчен югары эчке этап белән 71. Химик. проект. Журнал 401, 126051 (2020).
Ши, Y .., Сян, Р., Хорват, С. & Вилкинс, ЯА Протеомикада сыек хроматографиянең роле. Ши, Y .., Сян, Р., Хорват, С. & Вилкинс, ЯА Протеомикада сыек хроматографиянең роле.Ши, Y .., Сян, Р., Хорват, С. һәм Вилкинс, ЯА Протеомикада сыек хроматографиянең роле. Ши, Y .., Сян, Р., Хорват, С. & Вилкинс, ЯА 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Ши, Y .., Сян, Р., Хорват, С. & Вилкинс, ЯАШи, Y .., Сян, Р., Хорват, С. һәм Вилкинс, ЯА Протеомикада сыек хроматографиянең роле.Дж. Хрестоматия. 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Фекете, С., Вутей, Дж. & Guillarme, D. Терапевтик пептидлар һәм протеиннарның кире фазалы сыек хроматографик аерылышуларының яңа тенденцияләре: теория һәм кулланмалар. & Guillarme, D. Терапевтик пептидлар һәм протеиннарның кире фазалы сыек хроматографик аерылышуларының яңа тенденцияләре: теория һәм кулланмалар. & Гилларме, Д. & Guillarme, D. Терапевтик пептидларны һәм протеиннарны кире фазалы сыек хроматография белән аеруның яңа тенденцияләре: теория һәм кулланмалар. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Гиллар, Д.һәм Гилларме, Д. Терапевтик пептидларны һәм протеиннарны кире фазалы сыек хроматография белән аеруның яңа тенденцияләре: теория һәм кулланмалар.Дж. Фарм. Биомедицина фәннәре. анус. 69, 9–27 (2012).
Гилар, М., Оливова, П. Гилар, М., Оливова, П.Гилар М., Оливова П, Дали А.Е һәм Геблер ДжК Беренче һәм икенче аеру үлчәмнәрендә төрле pH булган RP-RP-HPLC системасы ярдәмендә пептидларны ике үлчәмле аеру.Гилар М., Оливова П, Дали А.Е һәм Геблер ДжК РП-РП-HPLC системасы ярдәмендә беренче һәм икенче аеру үлчәмнәрендә төрле pH кыйммәтләрен кулланып пептидларны ике үлчәмле аеру. Фән. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Феллитти, С. һ.б. 2 ммнан кечерәк тулы күзәнәкле һәм өстән тыш күзәнәкле C18 кисәкчәләре белән тутырылган югары җитештерүчән хроматография баганаларының массалы күчерелүен һәм кинетик үзенчәлекләрен тикшерү. Фән. 43 (9-10), 1737–1745 (2020).
Пиовесана, С. һ.б. Соңгы тенденцияләр һәм аналитик проблемалар үсемлек биоактив пептидларны изоляцияләү, ачыклау һәм раслау. анус. Анал. Химик. 410 (15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Мюллер, Дж.Б. һ.б. Тормыш патшалыгының протеомик пейзажы. Табигать 582 (7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
Де Люка, К. һ.б. Терапевтик пептидларны әзерләнгән сыек хроматография белән дәвалау. Молекулалар (Базель, Швейцария) 26 (15), 4688 (2021).
Ян, Y. & Geng, X. Катнаш режимлы хроматография һәм аның биополимерларга кулланылышы. Ян, Y. & Geng, X. Катнаш режимлы хроматография һәм аның биополимерларга кулланылышы.Ян, Yu. һәм Geng, X. Катнаш режим хроматографиясе һәм аны биополимерларга куллану. Янг, Й. & Генг, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Ян, Y. & Geng, X. Катнаш режим хроматографиясе һәм аны биополимерларда куллану.Ян, Yu. һәм Ген, X. Катнаш режим хроматографиясе һәм аны биополимерларга куллану.Дж. Хрестоматия. 1218 (49), 8813–8825 (2011).