Nature.com сайтына кергәнегез өчен рәхмәт. Сез чикләнгән CSS ярдәме булган браузер версиясен кулланасыз. Иң яхшы тәҗрибә өчен, без сезгә яңартылган браузер кулланырга киңәш итәбез (яки Internet Explorer'да туры килүчәнлек режимын сүндерегез). Моннан тыш, даими ярдәмне тәэмин итү өчен, без сайтны стильләрсез һәм JavaScriptсыз күрсәтәбез.
Берьюлы өч слайдтан торган карусель күрсәтә. Берьюлы өч слайд аша күчү өчен "Алдагы" һәм "Киләсе" төймәләрен кулланыгыз, яисә берьюлы өч слайд аша күчү өчен ахырдагы слайдер төймәләрен кулланыгыз.
Күзәнәкле кремний диоксиды кисәкчәләре киң күзәнәкле кисәкчәләр алу өчен кайбер үзгәрешләр кертеп, золь-гель ысулы белән әзерләнде. Бу кисәкчәләр N-фенилмалеимид интеркалатланган полиамидлар алу өчен кире чылбырлы күчерү-фрагментация (RAFT) полимеризациясе аша N-фенилмалеимид белән дериватизацияләнде. Стирол (PMP) стационар фазасы. Тар диаметрлы дат басмас корыч колонналар (эчке диаметры 100 × 1,8 мм) суспензия белән тутырылган. PMP колоннасының хроматографик күрсәткечләре биш пептидтан (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu аминокислотасы энкефалин) һәм кеше сыворотка альбуминының (HAS) триптик гидролизатыннан торган синтетик пептидлар катнашмасын аеру өчен бәяләнде. Оптималь элюция шартларында пептидлар катнашмасы белән пластиналарның теоретик саны 280 000 пластина/кв.м га җитте. Эшләнгән колоннаның аеру күрсәткечләрен коммерция Ascentis Express RP-Amide колоннасы белән чагыштырганда, PMP колоннасының аеру нәтиҗәлелеге аеру нәтиҗәлелеге һәм чишелеше ягыннан коммерция колоннасыннан югарырак булуы күзәтелде.
Соңгы елларда биофармацевтика сәнәгате киңәюче глобаль базарга әйләнде, базар өлеше сизелерлек артты. Биофармацевтика сәнәгатенең кискен үсеше белән1,2,3 пептид һәм аксым анализына зур ихтыяҗ бар. Максатлы пептидтан тыш, пептид синтезы вакытында төрле катнашмалар барлыкка килә, шуңа күрә пептидның теләгән сафлыгын алу өчен хроматографик чистарту кирәк. Бер үрнәктә потенциаль рәвештә ачыкланырга мөмкин булган төрләрнең күп булуы аркасында тән сыеклыкларындагы, тукымаларда һәм күзәнәкләрдәге аксымнарны анализлау һәм характеристикалау бик катлаулы бурыч. Масса-спектрометрия пептидларны һәм аксымнарны секвенирлау өчен нәтиҗәле корал булса да, мондый үрнәкләр турыдан-туры масса-спектрометрга кертелсә, аеру канәгатьләнерлек булмаячак. Бу проблеманы MS анализы алдыннан сыек хроматография (LC) үткәрү юлы белән хәл итәргә мөмкин, бу билгеле бер вакытта масса-спектрометрга керүче аналитлар күләмен киметәчәк4,5,6. Моннан тыш, аналитлар сыек фаза аеру вакытында тар өлкәдә туплана ала, шуның белән бу аналитларны туплана һәм MS ачыклау сизгерлеген арттыра. Сыек хроматография (СХ) соңгы дистә ел эчендә шактый алга китте һәм протеомик анализ өчен киң кулланыла торган ысулга әйләнде7,8,9,10.
Кире фазалы сыек хроматография (RP-LC) стационар фаза буларак октадецил-модификацияләнгән кремний диоксидын (ODS) кулланып пептидлар катнашмаларын чистарту һәм аеру өчен киң кулланыла11,12,13. Ләкин, аларның катлаулы структурасы һәм амфотерик табигате аркасында14,15 RP стационар фазалары пептидлар һәм аксымнарны канәгатьләнерлек аеруны тәэмин итә алмый. Шуңа күрә, поляр һәм поляр булмаган фрагментлары булган пептидлар һәм аксымнарны анализлау өчен бу аналитларны үзара бәйләнештә тоту һәм саклап калу өчен махсус эшләнгән стационар фазалар кирәк16. Мультимодаль үзара бәйләнеш тәкъдим итүче катнаш хроматография пептидларны, аксымнарны һәм башка катлаулы катнашмаларны аеру өчен RP-LCга альтернатива була ала. Берничә катнаш типтагы стационар фазалар әзерләнде һәм бу стационар фазалар белән тутырылган колонкалар пептидларны һәм аксымнарны аеру өчен кулланылды17,18,19,20,21. Поляр һәм поляр булмаган төркемнәр булу сәбәпле, катнаш режимлы стационар фазалар (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, поляр интеркаляция/RPLC) пептидларны һәм аксымнарны аеру өчен яраклы22,23,24,25,26,27,28. , ковалент бәйләнешле поляр төркемнәре булган поляр интеркаляцияләнгән стационар фазалар яхшы аеру мөмкинлекләрен һәм поляр һәм поляр булмаган аналитлар өчен уникаль селективлыкны күрсәтә, чөнки аеру аналит һәм стационар фаза арасындагы үзара бәйләнешкә бәйле. Күпмодаль үзара бәйләнешләр 29,30,31,32. Күптән түгел Чжан һ.б. 30 полиаминнарның бегенил белән тәмамланган стационар фазаларын алдылар һәм углеводородларны, антидепрессантларны, флавоноидларны, нуклеозидларны, эстрогеннарны һәм башка кайбер аналитларны уңышлы аердылар. Поляр эченә урнаштырылган стационар материалның поляр һәм поляр булмаган төркемнәре бар, шуңа күрә аны пептидларны һәм аксымнарны гидрофоб һәм гидрофиль өлешләргә аеру өчен кулланырга мөмкин. Поляр сызыклы колонналар (мәсәлән, амидлы C18 колонналары) Ascentis Express RP-Amide колонналары сәүдә исеме астында сатыла, ләкин бу колонналар бары тик 33 аминын анализлау өчен генә кулланылган.
Агымдагы тикшеренүдә полярлы урнаштыру стационар фазасы (N-фенилмалеимид, урнаштыру полистирол) әзерләнде һәм пептидларны аеру һәм триптик HSA бүленеше өчен бәяләнде. Стационар фазаны әзерләү өчен түбәндәге стратегия кулланылды. Күзәле кремний диоксиды кисәкчәләре безнең алдагы басмаларда тасвирланган процедуралар буенча әзерләнде, әзерләү схемаларында 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 үзгәрешләр кертелде. Зур күзәнәк зурлыктагы кремний диоксиды кисәкчәләрен алу өчен мочевина, полиэтиленгликоль (PEG), TMOS һәм сулы-серкә кислотасы нисбәтләре көйләнде. Икенчедән, яңа фенилмалеимид-метилвинилизоцианат лиганды синтезланды һәм аның туындысы булган кремний диоксиды кисәкчәләре полярлы урнаштыру стационар фазаларын әзерләү өчен кулланылды. Алынган стационар фаза оптимальләштерелгән урнаштыру схемасы буенча дат басмас корыч колоннага (эчке диаметры 100 × 1,8 мм) төрелде. Колоннаны урнаштыру механик тибрәнү ярдәмендә колонна эчендә бердәм катлам тәэмин ителә. Төрелгән колонка биш пептидтан (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, лейцин-энкефалин пептиды) һәм кеше сыворотка альбуминының (HSA) триптик гидролизатларыннан торган пептидлар катнашмасын аеру өчен бәяләнде. Пептид катнашмасы һәм HSA триптик дайджесты яхшы чишелеш һәм нәтиҗәлелек белән аерылганы күзәтелде. PMP колонкасының аеру нәтиҗәлелеге Ascentis Express RP-Amide колонкасы белән чагыштырылды. Пептидлар һәм аксымнарның PMP колонкасында яхшы чишелеш һәм югары аеру нәтиҗәлелеге булуы күзәтелде, һәм PMP колонкасының аеру нәтиҗәлелеге Ascentis Express RP-Amide колонкасыныкыннан югарырак.
PEG (полиэтиленгликоль), мочевина, сиркә кислотасы, триметоксиортосиликат (TMOS), триметилхлорсилан (TMCS), трипсин, кеше сывороткасы альбумины (HSA), аммоний хлориды, мочевина, гексаметилметакрилойлдисилазан (HMDS), метакрилойлхлорид (MC), стирол, 4-гидрокси-TEMPO, бензоил пероксиды (BPO), HPLC өчен ацетонитрил (ACN), метанол, 2-пропанол һәм ацетон. Sigma-Aldrich компаниясе (Сент-Луис, Миссури, АКШ).
Мочевина (8 г), полиэтиленгликоль (8 г) һәм 8 мл 0,01 Н сиркә кислотасы катнашмасы 10 минут дәвамында болгатылды, һәм боз астында суыту астында 24 мл TMOS өстәлде. Реакция катнашмасы 40°C температурада 6 сәгать, аннары 120°C температурада 8 сәгать дәвамында дат басмас корыч автоклавта җылытылды. Су декантланды, ә калдык 70°C температурада 12 сәгать киптерелде. Киптерелгән йомшак блоклар шома итеп тартылды һәм 550°C температурада мичтә 12 сәгать дәвамында кыздырылды. Кисәкчәләр зурлыгының, мәсамә зурлыгының һәм өслек мәйданының кабатланучанлыгын тикшерү өчен өч партия әзерләнде һәм характеристика ясалды.
Полистирол чылбырлары өчен поляр төркем һәм стационар фаза. Әзерләү процедурасы түбәндә тасвирлана.
N-фенилмалеимид (200 мг) һәм метилвинил изоцианат (100 мг) сусыз толуолда эретелде, аннары фенилмалеимид һәм метилвинил изоцианат (PMCP) сополимерын алу өчен реакция колбасына 0,1 мл 2,2′-азоиизобутиронитрил (AIBN) өстәлде. ) Катнашма 60°C температурада 3 сәгать җылытылды, фильтрланды һәм 40°C температурада мичтә 3 сәгать киптерелде.
Киптерелгән кремний диоксиды кисәкчәләре (2 г) коры толуолда (100 мл) эретелде, болгатылды һәм 500 мл түгәрәк төп колбада 10 минут дәвамында ультратавыш белән эшкәртелде. PMCP (10 мг) толуолда эретелде һәм өстәмә воронка аша реакция колбасына тамчылатып өстәлде. Катнашма 100°C температурада 8 сәгать дәвамында кире әйләндерелде, фильтрланды, ацетон белән юылды һәм 60°C температурада 3 сәгать дәвамында киптерелде. Аннары PMCP (100 г) белән бәйле кремний диоксиды кисәкчәләре толуолда (200 мл) эретелде, һәм катализатор буларак 100 мкл дибутилтин дилаураты катнашында 4-гидрокси-TEMPO (2 мл) өстәлде. Катнашма 50°C температурада 8 сәгать дәвамында болгатты, фильтрланды һәм 50°C температурада 3 сәгать дәвамында киптерелде.
Стирол (1 мл), бензоил пероксиды BPO (0,5 мл) һәм TEMPO-PMCP (1,5 г) белән тоташтырылган кремний диоксиды кисәкчәләре толуолда эретелгән һәм азот белән чистартылган. Стиролның полимерлашуы 100°C температурада 12 сәгать дәвамында башкарылган. Нәтиҗәдә барлыкка килгән продукт метанол белән юылган һәм 60°C температурада төнлә киптерелгән. Реакциянең гомуми схемасы беренче рәсемдә күрсәтелгән.
Үрнәкләр 393 К температурада 1 сәгать дәвамында 10–3 Торрдан кимрәк калдык басым алынганчы дегазацияләнде. P/P0 = 0,99 чагыштырма басымда адсорбцияләнгән N2 күләме гомуми мәсамә күләмен билгеләү өчен кулланылды. Саф һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләренең морфологиясе сканерлаучы электрон микроскоп (Hitachi High Technologies, Токио, Япония) ярдәмендә тикшерелде. Коры үрнәкләр (саф кремний һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләре) алюминий таякчыкларга углерод тасмасы ярдәмендә урнаштырылды. Q150T сиптерү җайланмасы ярдәмендә үрнәккә алтын салынды, ә 5 нм калынлыктагы Au катламы үрнәккә салынды. Бу түбән көчәнеш процессының нәтиҗәлелеген арттыра һәм нечкә салкын сиптерүне тәэмин итә. Элемент анализы Thermo Electron (Waltham, MA, АКШ) Flash EA1112 элемент состав анализаторы ярдәмендә үткәрелде. Кисәкчәләр зурлыгы бүленешен алу өчен Malvern кисәкчәләр зурлыгы анализаторы (Worcestershire, Бөекбритания) Mastersizer 2000 кулланылды. Капланмаган кремний диоксиды кисәкчәләре һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләре (һәрберсе 5 мг) 5 мл изопропанолда эретелде, 10 минут дәвамында ультратавыш белән эшкәртелде, 5 минут болгатылды һәм Mastersizer оптик эскәмиясенә куелды. Термогравиметрик анализ 30-800 °C температура диапазонында минутына 5 °C тизлектә үткәрелә.
Пыяла җепселләре белән капланган тар диаметрлы дат басмас корыч колонналар (ID 100 × 1,8 мм) 31 нче сылтамадагы процедурага туры китереп, шлам тутыру ысулы белән төрелде. Дат басмас корыч колонна (пыяла белән капланган, ID 100 × 1,8 мм) һәм 1 мкм фритлы чыгу урыны шлам төрү машинасына (Alltech Deerfield, IL, АКШ) тоташтырылды. Стационар фазаның суспензиясен 1,2 мл метанолда 150 мг стационар фазаны суспензияләп һәм аны резервуар колоннасына салып әзерләгез. Шлам эреткече һәм контроль эреткече буларак метанол кулланылды. Колоннаны 10 минутка 100 МП, 15 минутка 80 МП һәм 30 минутка 60 МП басым эзлеклелеге кулланып төрегез. Төрү процессында механик тибрәнү өчен ике газ хроматография колоннасы вибраторы (Alltech, Deerfield, IL, АКШ) кулланылды, колоннага тигез төрүне тәэмин итү өчен. Шлам төрү җайланмасын ябыгыз һәм җепкә зыян китермәсен өчен басымны әкрен генә төшерегез. Колонна шламлы насадкадан аерылды һәм аның эшләвен тикшерү өчен керү урынына тагын бер җайланма беркетелде һәм LC системасына тоташтырылды.
Махсус MLC LC насосы (10AD Shimadzu, Япония), 50 нл инъекция элмәге булган үрнәк алучы (Valco (USA) C14 W.05), мембраналы дегазатор (Shimadzu DGU-14A) һәм UV-VIS капилляр тәрәзәсе ярдәмендә төзелгән. Детектор җайланмасы (UV-2075) һәм эмаль белән капланган микроколонна. Өстәмә багана киңәюенең йогынтысын минимальләштерү өчен бик тар һәм кыска тоташтыручы торбалар кулланыгыз. Колоннаны тутырганнан соң, 1/16 дюймлы киметү тоташуының чыгу урынына капилляр (50 мкм id 365) урнаштырыгыз һәм киметү тоташуының капиллярын (50 мкм) урнаштырыгыз. Мәгълүмат җыю һәм хроматограмма эшкәртү Multichro 2000 программа тәэминаты ярдәмендә башкарыла. 254 нмда анализланучы матдәләрнең UV йотучанлыгы 0 градуста күзәтелде. Хроматографик мәгълүматлар OriginPro8 (Нортгемптон, MA) ярдәмендә анализланды.
Кеше сыворотка альбумины, лиофилизацияләнгән порошок, ≥ 96% (агароза геле электрофорезы) 3 мг трипсин (1,5 мг), 4,0 М мочевина (1 мл) һәм 0,2 М аммоний бикарбонаты (1 мл) белән кушылган. Эремә 10 минут болгатылган һәм 37°C температурада 6 сәгать су мунчасында тотылган, аннары 1 мл 0,1% TFA белән сүндерелгән. Эремәне фильтрлагыз һәм 4°C тан түбән температурада саклагыз.
ПМП колонкасында пептидлар һәм триптик дайджест HSA катнашмасын аеру аерым бәяләнде. ПМП колонкасы белән аерылган пептидлар һәм HSA катнашмасының триптик гидролизын тикшерегез һәм нәтиҗәләрне Ascentis Express RP-Amide колонкасы белән чагыштырыгыз. Теоретик пластиналар саны түбәндәге тигезләмә ярдәмендә исәпләнә:
Саф кремний диоксиды кисәкчәләренең һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләренең SEM рәсемнәре 2 нче рәсемдә күрсәтелгән. Саф кремний диоксиды кисәкчәләренең (A, B) SEM рәсемнәре, безнең алдагы тикшеренүләр белән чагыштырганда, кисәкчәләрнең озынча яки тигез булмаган симметрияле булган сферик форманы күрсәтә. Лиганд (C, D) белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләренең өслеге саф кремний диоксиды кисәкчәләренекенә караганда шомарак, бу кремний диоксиды кисәкчәләренең өслеген каплаган полистирол чылбырлары белән бәйле булырга мөмкин.
Саф кремний диоксиды кисәкчәләренең (A, B) һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләренең (C, D) сканерлаучы электрон микрографияләре.
Саф кремний диоксиды кисәкчәләренең һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләренең кисәкчәләр зурлыгы бүленеше 2 нче рәсемдә күрсәтелгән. 3(A). Күләмле кисәкчәләр зурлыгы бүленеше кәкреләре химик модификациядән соң кремний диоксиды кисәкчәләре зурлыгы артканлыгын күрсәтте (3А рәсем). Хәзерге тикшеренүдән һәм алдагы тикшеренүдән алынган кремний диоксиды кисәкчәләре зурлыгы бүленеше мәгълүматлары 1(A) таблицасында чагыштырыла. PMPның күләмле кисәкчәләр зурлыгы d(0.5) 3.36 мкм тәшкил итте, безнең алдагы тикшеренүдәге ad(0.5) кыйммәте 3.05 мкм иде (полистирол белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләре)34. Реакция катнашмасында PEG, мочевина, TMOS һәм сиркә кислотасы нисбәте үзгәрү сәбәпле, бу партиянең кисәкчәләр зурлыгы бүленеше безнең алдагы тикшеренүгә караганда таррак булды. PMP фазасының кисәкчәләр зурлыгы без элек өйрәнгән полистирол белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләре фазасыннан бераз зуррак. Бу кремний диоксиды кисәкчәләренең стирол белән өслек функциональләшүе кремний диоксиды өслегенә полистирол катламы гына (0,97 мкм) урнаштырган дигәнне аңлата, ә PMP фазасында катлам калынлыгы 1,38 мкм булган.
Саф кремний кисәкчәләренең һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләренең кисәкчәләр зурлыгы бүленеше (A) һәм мәсамә зурлыгы бүленеше (B).
Бу тикшеренүдә кулланылган кремний диоксиды кисәкчәләренең тишек зурлыгы, тишек күләме һәм өслек мәйданы 1 нче таблицада (B) күрсәтелгән. Саф кремний диоксиды кисәкчәләренең һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләренең PSD профильләре 3(B) рәсемнәрендә күрсәтелгән. Нәтиҗәләр безнең алдагы тикшеренү белән чагыштырырлык иде34. Саф һәм лиганд белән бәйләнгән кремний диоксиды кисәкчәләренең тишек зурлыклары 310 Å һәм 241 Å тәшкил итте, бу химик модификациядән соң тишек зурлыгы 69 Å га кимегәнен күрсәтә, 1 нче таблицада (B) күрсәтелгәнчә, ә күчеш кәкресе рәсемдә күрсәтелгән. Хәзерге тикшеренүдә кремний диоксиды кисәкчәләренең чагыштырма өслек мәйданы 116 м2/г тәшкил итә, бу безнең алдагы тикшеренү белән чагыштырырлык (124 м2/г). 1(B) таблицада күрсәтелгәнчә, химик модификациядән соң кремний диоксиды кисәкчәләренең өслек мәйданы (м2/г) да 116 м2/г дан 105 м2/г га кадәр кимегән.
Стационар фазаның элемент анализы нәтиҗәләре 2 нче таблицада күрсәтелгән. Агымдагы стационар фазаның углерод күләме 6,35% тәшкил итә, бу безнең алдагы тикшеренүгә караганда түбәнрәк (полистирол белән бәйле кремний диоксиды кисәкчәләре, тиешенчә 7,93%35 һәм 10,21%) 42. Агымдагы стационар фазаның углерод күләме түбәнрәк, чөнки SP әзерләүдә стиролдан тыш, фенилмалеимид метилвинил изоцианат (PCMP) һәм 4-гидрокси-TEMPO кебек кайбер поляр лигандлар кулланылган. Агымдагы стационар фазадагы азотның авырлык проценты 2,21% тәшкил итә, алдагы тикшеренүләрдәге 0,1735 һәм 0,85% белән чагыштырганда42. Бу агымдагы стационар фазада фенилмалеимид аркасында азотның югары авырлык проценты булуын аңлата. Шулай ук, (4) һәм (5) продуктларында углерод күләме 2,7% һәм 2,9% тәшкил итә, ә соңгы продуктта (6) углерод күләме 6,35% тәшкил итә, бу 2 нче таблицада күрсәтелгән. PMP стационар фазасында авырлыкны югалтуны тикшерү өчен термогравиметрик анализ (TGA) кулланылды, һәм TGA кәкресе 4 нче рәсемдә күрсәтелгән. TGA кәкресе 8,6% авырлык югалтуын күрсәтә, бу углерод күләме белән (6,35%) яхшы туры килә, чөнки лигандларда C гына түгел, ә N, O һәм H да бар.
Лиганд фенилмалеимид-метилвинилизоцианат кремний диоксиды кисәкчәләренең өслеген үзгәртү өчен сайланган, чөнки аның поляр фенилмалеимид һәм винилизоцианат төркемнәре бар. Винил изоцианат төркемнәре тере радикаль полимеризация ярдәмендә стирол белән реакциягә керә ала. Икенче сәбәп - аналит белән уртача үзара бәйләнеше булган һәм аналит белән стационар фаза арасында көчле электростатик үзара бәйләнеше булмаган төркемне кертү, чөнки фенилмалеимид өлешенең нормаль рН дәрәҗәсендә виртуаль заряды юк. Стационар фазаның полярлыгын стиролның оптималь күләме һәм ирекле радикаль полимеризация реакция вакыты белән контрольдә тотарга мөмкин. Реакциянең соңгы этабы (ирекле радикаль полимеризация) бик мөһим, чөнки ул стационар фазаның полярлыгын үзгәртә. Бу стационар фазаларда углерод күләмен тикшерү өчен элементаль анализ үткәрелде. Стирол күләмен һәм реакция вакытын арттыру стационар фазаның углерод күләмен арттыра һәм киресенчә. Стиролның төрле концентрацияләре белән әзерләнгән SPлар төрле углерод йөкләмәләренә ия. Шулай ук, бу стационар фазалар дат басмас корыч колонналарга урнаштырылды һәм аларның хроматографик үзенчәлекләре (сайлаучанлык, чишелеш, N кыйммәте һ.б.) тикшерелде. Бу тәҗрибәләр нигезендә, контрольдә тотылган полярлыкны һәм аналитның яхшы саклануын тәэмин итү өчен PMP стационар фазасын әзерләү өчен оптимальләштерелгән состав сайланды.
PMP колонкасы шулай ук ​​мобиль фаза сыйдырышлыгын кулланып, биш пептид катнашмасын (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, лейцин-энкефалин) анализлау өчен бәяләнде. 60/40 (v/v) ACN/су (0,1% TFA) 80 мкл/мин агым тизлегендә. Оптималь элюция шартларында (200,000 пластина/м), бер колоннага (100 × 1,8 мм) теоретик пластиналар саны (N) 20,000 ± 100 тәшкил итә. Өч PMP колонкасы өчен N кыйммәтләре 3 нче таблицада, ә хроматограммалар 5А рәсемдә күрсәтелгән. PMP колонкасында югары агым тизлегендә (700 мкл/мин) тиз анализ, бер минут эчендә биш пептид элюцияләнде, һәр колонка өчен 13 500 ± 330 N кыйммәте (диаметры 100 x 1,8 мм), 135 000 пластина/м га тигез (5B рәсем). Бер үк зурлыктагы өч колонка (эчке диаметры 100 x 1,8 мм) PMP стационар фазасының өч төрле партиясе белән тутырылды, кабатланучанлыкны тикшерү өчен. Аналитлар һәр колонка өчен бер үк сынау катнашмасын оптималь элюция шартларын, теоретик пластиналар саны N һәм саклау вакытын кулланып аерып язып алынды. PMP колонкалары өчен кабатланучанлык мәгълүматлары 4 нче таблицада күрсәтелгән. PMP колонкасының кабатланучанлыгы 3 нче таблицада күрсәтелгәнчә бик түбән %RSD кыйммәтләре белән яхшы корреляцияләнде.
ПМП колонкасында (B) һәм Ascentis Express RP-Amide колонкасында (A) пептид катнашмаларын аеру, күчмә фаза 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), ПМП колонкасының үлчәмнәре (100 x 1,8 мм id), анализ Кушылмаларның элюция тәртибе: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) һәм 5 (лейцин кислотасы энкефалин).
Кеше сыворотка альбуминының триптик гидролизатын HPLC ярдәмендә аеру өчен PMP колонкасы (эчке диаметры 100 x 1,8 мм) бәяләнде. 6 нчы рәсемдәге хроматограмма үрнәкләрнең бик яхшы аеру белән яхшы аерылганлыгын күрсәтә. HSA эремәләре 100 мкл/мин агым тизлеге, 70/30 ацетонитрил/суның күчмә фазасы һәм 0,1% TFA кулланып анализланды. HSA бүленеше хроматограммада күрсәтелгәнчә (6 нчы рәсем) 17 пикка бүленде, бу 17 пептидка туры килә. HSA гидролизатыннан аерым пикларның аеру нәтиҗәлелеге исәпләнде һәм кыйммәтләр 5 нче таблицада күрсәтелгән.
HSA триптик гидролизатлары PMP колонкасында (эчке диаметры 100 x 1,8 мм), агым тизлеге (100 мкл/мин), хәрәкәтчән фаза 60/40 ацетонитрил/су һәм 0,1% TFAда аерылды.
монда L - колонна озынлыгы, η - күчмә фазаның ябышлыгы, ΔP - колоннаның кире басымы, һәм u - күчмә фазаның сызыклы тизлеге. PMP колоннасының үткәрүчәнлеге 2,5 × 10–14 м2, агым тизлеге 25 мкл/мин, 60/40 v/v кулланылган. ACN/су. PMP колоннасының үткәрүчәнлеге (ID 100 × 1,8 мм) безнең алдагы 34 нче сылтама тикшеренүенә охшаш иде. Өслекле күзәнәкле кисәкчәләр белән тутырылган колоннаның үткәрүчәнлеге 1,7 × 10 0,6 мкм, 5 мкм кисәкчәләр өчен 2,5 × 10-14 м2 тәшкил итә43. Шуңа күрә PMP фазасының үткәрүчәнлеге 5 мкм зурлыктагы үзәк-кабык кисәкчәләренең үткәрүчәнлегенә охшаш.
монда Wx - хлороформ белән тутырылган колонна массасы, Wy - метанол белән тутырылган колонна массасы, ә ρ - эреткечнең тыгызлыгы. Метанол тыгызлыгы (ρ = 0.7866) һәм хлороформ тыгызлыгы (ρ = 1.484). Кремний-C18 кисәкчәләре колоннасының (100 × 1.8 мм ID)34 һәм безнең алдан өйрәнгән C18-мочевина31 колоннасының гомуми күзәнәклелеге 0.63 һәм 0.55 тәшкил итте. Бу мочевина лигандлары булуы стационар фазаның үткәрүчәнлеген киметә дигән сүз. Икенче яктан, PMP колоннасының гомуми күзәнәклелеге (эчке диаметры 100 × 1.8 мм) 0.60 тәшкил итә. PMP колонналары C18 белән бәйләнгән кремний кисәкчәләре белән тутырылган колонналарга караганда аз үткәрүчән, чөнки C18 тибындагы стационар фазаларда C18 лигандлары кремний кисәкчәләренә сызыклы чылбырлар белән тоташкан, ә полистирол тибындагы стационар фазаларда кисәкчәләр тирәсендә чагыштырмача калын полимер барлыкка килә. А катламы. Гадәти экспериментта багананың мәсамәлелеге түбәндәгечә исәпләнә:
7А, В рәсемнәрендә PMP колонкасы (id 100 x 1.8 мм) һәм Ascentis Express RP-Amide колонкасы (id 100 x 1.8 мм) өчен бер үк элюция шартларында, ике колонкада да 60/40 ACN/H2O һәм 0,1% TFA 20 мкл/мин - 800 мкл/мин шартларында Ван Деемтер графиклары күрсәтелгән. Оптималь агым тизлегендә (80 мкл/мин) минималь HETP кыйммәтләре PMP колонкасы һәм Ascentis Express RP-Amide колонкасы өчен 2,6 мкм һәм 3,9 мкм тәшкил иткән. HETP кыйммәтләре PMP колонкасының (100 x 1,8 мм id) аерылу нәтиҗәлелегенең коммерциядә сатыла торган Ascentis Express RP-Amide колонкасына (100 x 1,8 мм id) караганда күпкә югарырак булуын күрсәтә. 7(А) рәсемдәге ван Деемтер графигы күрсәткәнчә, N кыйммәтенең кимүе, безнең алдагы тикшеренү белән чагыштырганда, агым артканда сизелерлек югары түгел. Ascentis Express RP-Amide колоннасы белән чагыштырганда, PMP колоннасының югарырак аеру нәтиҗәлелеге (id 100 × 1,8 мм) кисәкчәләр формасының һәм зурлыгының яхшыруына, шулай ук ​​хәзерге эштә кулланылган катлаулы колонна тутыру процедурасына нигезләнгән34.
(A) 0,1% TFA белән 60/40 ACN/H2O эчендә PMP баганасында (id 100 x 1,8 мм) алынган Ван Димтер графигы (HETP vs. мобиль фаза сызыкча тизлеге). (B) 0,1% TFA белән 60/40 ACN/H2O эчендә Ascentis Express RP-Amide баганасында (id 100 x 1,8 мм) алынган Ван Димтер графигы (HETP vs. мобиль фаза сызыкча тизлеге).
Югары нәтиҗәле сыек хроматографиядә синтетик пептидлар һәм кеше сыворотка альбуминының (HSA) триптик гидролизаты катнашмасын аеру өчен интеркалатланган полистиролның поляр стационар фазасы әзерләнде һәм бәяләнде. Пептид катнашмалары өчен PMP колонкаларының хроматографик күрсәткечләре аеру нәтиҗәлелеге һәм чишелеше ягыннан бик яхшы. PMP колонкаларының аеру нәтиҗәлелегенең яхшыруы берничә сәбәп белән бәйле, мәсәлән, кремний кисәкчәләре зурлыгы һәм мәса зурлыгы, стационар фазаларның контрольдә тотылган синтезы һәм катлаулы колонка төргәкләү материаллары. Югары аеру нәтиҗәлелегеннән тыш, бу стационар фазаның тагын бер өстенлеге - югары агым тизлегендә колонканың түбән кире басымы. PMP колонкалары югары кабатланырлык һәм пептидлар катнашмаларын һәм төрле аксымнарның триптик эшкәртүен анализлау өчен кулланылырга мөмкин. Без бу колонканы табигый продуктлардан, дару үсемлекләре экстрактларыннан һәм гөмбәләр экстрактларыннан биоактив кушылмаларны аеру өчен сыек хроматографиядә кулланырга ниятлибез. Киләчәктә PMP колонкалары аксымнарны һәм моноклональ антитәнчекләрне аеру өчен дә бәяләнәчәк.
Филд, Дж.К., Эуэрби, М.Р., Лау, Дж., Тогерсен, Х. һәм Петерссон, П. Кире фазалы хроматография пептидларын аеру системаларын тикшерү I өлеш: Колонна характеристикасы өчен протокол эшләү. Филд, Дж.К., Эуэрби, М.Р., Лау, Дж., Тогерсен, Х. һәм Петерссон, П. Кире фазалы хроматография пептидларын аеру системаларын тикшерү I өлеш: Колонна характеристикасы өчен протокол эшләү.Филд, Дж.К., Оверби, М.Р., Лау, Дж., Тогерсен, Х., һәм Петерссон, П. Пептидларны аеру системаларын кире фазалы хроматография ярдәмендә тикшерү, I өлеш: Багана характеристикасы өчен протокол эшләү. Филд, Дж.К., Эуэрби, М.Р., Лау, Дж., Тогерсен, Х. һәм Петерссон, П. Кире фазалы хроматография пептид аеру системаларын тикшерү I өлеш: Колонна характеристикалары өчен протокол эшләү. Филд, Дж.К., Эуэрби, М.Р., Лау, Дж., Тогерсен, Х. һәм Петерссон, П. Кире фазалы хроматография пептид аеру системаларын тикшерү I өлеш: Колонна характеристикалары өчен протокол эшләү.Филд, Дж.К., Оверби, М.Р., Лау, Дж., Тогерсен, Х., һәм Петерссон, П. Пептидларны аеру системаларын кире фазалы хроматография ярдәмендә тикшерү, I өлеш: Багана характеристикасы өчен протокол эшләү.J. 色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
Гомес, Б. һ.б. Йогышлы авыруларны дәвалау өчен яхшыртылган актив пептидлар булдыру ысуллары. Биотехнология. Наиҗәләр 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Влиеге, П., Лисовски, В., Мартинес, Дж. һәм Хрестчатиский, М. Синтетик терапевтик пептидлар: Фән һәм базар. Влиеге, П., Лисовски, В., Мартинес, Дж. һәм Хрестчатиский, М. Синтетик терапевтик пептидлар: Фән һәм базар.Влиеге П, Лисовски В, Мартинес Дж һәм Хрещатиски М. Синтетик терапевтик пептидлар: фән һәм базар.Влиеге П, Лисовски В, Мартинес Дж һәм Хрещацкий М. Синтетик терапевтик пептидлар: фән һәм базар. Даруларны ачу. Бүгенге көндә 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Сие, Ф., Смит, РД һәм Шен, Ю. Алга киткән протеом сыек хроматографиясе. Сие, Ф., Смит, РД һәм Шен, Ю. Алга киткән протеом сыек хроматографиясе.Карагыз Ф., Смит РД һәм Шен Ю. Алга киткән протеом сыек хроматографиясе. Си, Ф., Смит, RD & Шен, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Си, Ф., Смит, РД & Шен, Y. Алдынгы протеин составы 液相色谱。Карагыз Ф., Смит РД һәм Шен Ю. Алга киткән протеом сыек хроматографиясе.Хроматография журналы. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. һ.б. Алга киткән сыек хроматография-масса спектрометриясе киң нигезле метаболомиканы һәм протеомиканы берләштерә ала. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Чеснат, С.М. һәм Солсбери, Дж.Дж. Фармацевтика үсешендә UHPLC роле. Чеснат, С.М. һәм Солсбери, Дж.Дж. Фармацевтика үсешендә UHPLC роле.Чеснат, С.М. һәм Солсбери, Дж.Дж. Фармацевтика үсешендә UHPLC роле.Чеснат, С.М. һәм Солсбери, Дж.Дж. Дарулар эшләүдә UHPLC роле. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Ву, Н. һәм Клаузен, А.М. Тиз аеру өчен югары басымлы сыек хроматографиянең төп һәм гамәли аспектлары. Ву, Н. һәм Клаузен, А.М. Тиз аеру өчен югары басымлы сыек хроматографиянең төп һәм гамәли аспектлары.Ву, Н. һәм Клаузен, А.М. Тиз аеру өчен югары басымлы сыек хроматографиясенең төп һәм гамәли аспектлары. Ву, Н. & Клаузен, АМ 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Ву, Н. һәм Клаузен, А.М. Тиз аеру өчен ультра югары басымлы сыек хроматографиясенең төп һәм гамәли аспектлары.Ву, Н. һәм Клаузен, А.М. Тиз аеру өчен югары басымлы сыек хроматографиясенең төп һәм гамәли аспектлары.J. Сентябрь. Фән. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Рен, С.А. һәм Челитчефф, П. Фармацевтика өлкәсендә ультра нәтиҗәле сыек хроматография куллану. Рен, С.А. һәм Челитчефф, П. Фармацевтика өлкәсендә ультра нәтиҗәле сыек хроматография куллану.Рен, С.А. һәм Челишефф, П. Фармацевтика өлкәсендә югары нәтиҗәле сыек хроматография куллану. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Рен, С.А. һәм Челитчефф, П.Рен, С.А. һәм Челишефф, П. Дарулар эшләүдә ультра нәтиҗәле сыек хроматографиясен куллану.Хроматография журналы. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Гу, Х. һ.б. Энтеровирус 71не нәтиҗәле чистарту өчен югары эчке фазалы май-су эмульсиясеннән алынган монолит макропорист гидрогель. Химик. проекты. Journal 401, 126051 (2020).
Ши, Ю., Сян, Р., Хорват, К. һәм Вилкинс, ДЖА. Протеомикада сыек хроматографиянең роле. Ши, Ю., Сян, Р., Хорват, К. һәм Вилкинс, ДЖА. Протеомикада сыек хроматографиянең роле.Ши, Ю., Сян, Р., Хорват, К. һәм Уилкинс, ДЖА. Протеомикада сыек хроматографиянең роле. Ши, Y .., Сян, Р., Хорват, С. & Вилкинс, ЯА 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Ши, Y .., Сян, Р., Хорват, С. & Вилкинс, ЯАШи, Ю., Сян, Р., Хорват, К. һәм Уилкинс, ДЖА. Протеомикада сыек хроматографиянең роле.Хроматография журналы. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Фекете, С., Вутей, Дж.-Л. & Гийарм, Д. Терапевтик пептидлар һәм аксымнарны кире фазалы сыек хроматографик аерудагы яңа тенденцияләр: теория һәм куллану. & Гийарм, Д. Терапевтик пептидлар һәм аксымнарны кире фазалы сыек хроматографик аерудагы яңа тенденцияләр: теория һәм куллану. & Гилларме, Д. & Гийарм, Д. Кире фазалы сыек хроматография ярдәмендә терапевтик пептидларны һәм аксымнарны аеруның яңа тенденцияләре: теория һәм куллану. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 һәм Гилярм, Д.һәм Гийарме, Д. Кире фазалы сыек хроматография ярдәмендә терапевтик пептидларны һәм аксымнарны аеруның яңа тенденцияләре: теория һәм кушымталар.J. Pharm. Биомедицина фәне. анус. 69, 9–27 (2012).
Гилар, М., Оливова, П., Дэйли, А.Э. һәм Геблер, Дж.К. Беренче һәм икенче аеру үлчәмнәрендә төрле рН булган RP-RP-HPLC системасын кулланып пептидларны ике үлчәмле аеру. Гилар, М., Оливова, П., Дэйли, А.Э. һәм Геблер, Дж.К. Беренче һәм икенче аеру үлчәмнәрендә төрле рН булган RP-RP-HPLC системасын кулланып пептидларны ике үлчәмле аеру.Гилар М., Оливова П., Дали А.Е. һәм Геблер Дж.К. Беренче һәм икенче аеру үлчәмнәрендә төрле рН булган RP-RP-HPLC системасын кулланып пептидларны ике үлчәмле аеру.Гилар М., Оливова П., Дали А.Е. һәм Геблер Дж.К. RP-RP-HPLC системасын кулланып, беренче һәм икенче аеру үлчәмнәрендә төрле рН кыйммәтләрен кулланып пептидларны ике үлчәмле аеру. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Феллитти, С. һ.б. 2 мкм дан кечерәк тулы күзәнәкле һәм өслек күзәнәкле C18 кисәкчәләре белән тутырылган югары нәтиҗәле хроматография колонкаларының масса күчерү һәм кинетик үзенчәлекләрен тикшерү. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Пиовесана, С. һ.б. Үсемлек биоактив пептидларын изоляцияләү, идентификацияләү һәм валидацияләүдәге соңгы тенденцияләр һәм аналитик кыенлыклар. анус. Аналь җан ияләре. Химик. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Мюллер, Дж.Б. һ.б. Тереклек патшалыгының протеомик пейзажы. Табигать 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
Де Лука, К. һ.б. Терапевтик пептидларны препаратив сыек хроматография ярдәмендә эшкәртүдән соң. Molecules (Базель, Швейцария) 26(15), 4688 (2021).
Ян, Ю. һәм Генг, Х. Катнаш режимлы хроматография һәм аның биополимерларга кулланылышы. Ян, Ю. һәм Генг, Х. Катнаш режимлы хроматография һәм аның биополимерларга кулланылышы.Ян, Ю. һәм Генг, Х. Катнаш режимлы хроматография һәм аны биополимерларга куллану. Янг, Й. & Генг, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Ян, Ю. һәм Генг, Х. Катнаш режимлы хроматография һәм аны биополимерларда куллану.Янг, Ю. һәм Джин, Х. Катнаш режимлы хроматография һәм аны биополимерларга куллану.Хроматография журналы. A 1218(49), 8813–8825 (2011).