Nature.com ஐப் பார்வையிட்டதற்கு நன்றி. நீங்கள் வரையறுக்கப்பட்ட CSS ஆதரவுடன் கூடிய உலாவி பதிப்பைப் பயன்படுத்துகிறீர்கள். சிறந்த அனுபவத்திற்கு, புதுப்பிக்கப்பட்ட உலாவியைப் பயன்படுத்துமாறு பரிந்துரைக்கிறோம் (அல்லது Internet Explorer இல் இணக்கத்தன்மை பயன்முறையை முடக்கவும்). கூடுதலாக, தொடர்ச்சியான ஆதரவை உறுதிசெய்ய, ஸ்டைல்கள் மற்றும் ஜாவாஸ்கிரிப்ட் இல்லாமல் தளத்தைக் காட்டுகிறோம்.
ஒரே நேரத்தில் மூன்று ஸ்லைடுகளின் கேரோசலைக் காட்டுகிறது. ஒரே நேரத்தில் மூன்று ஸ்லைடுகளின் வழியாக நகர்த்த முந்தைய மற்றும் அடுத்த பொத்தான்களைப் பயன்படுத்தவும் அல்லது ஒரே நேரத்தில் மூன்று ஸ்லைடுகளின் வழியாக நகர்த்த இறுதியில் உள்ள ஸ்லைடர் பொத்தான்களைப் பயன்படுத்தவும்.
பரந்த-துளை துகள்களைப் பெறுவதற்காக சில மாற்றங்களுடன் சோல்-ஜெல் முறையால் நுண்துளை சிலிக்கா துகள்கள் தயாரிக்கப்பட்டன. இந்த துகள்கள் N-ஃபீனைல்மலேமைடு-மெத்தில்வினைல் ஐசோசயனேட் (PMI) மற்றும் ஸ்டைரீன் ஆகியவற்றைக் கொண்டு தலைகீழ் சங்கிலி பரிமாற்ற-துண்டு துகள் (RAFT) பாலிமரைசேஷன் மூலம் N-ஃபீனைல்மலேமைடு இடைக்கணிக்கப்பட்ட பாலிமைடுகளை உருவாக்கின. ஸ்டைரீன் (PMP) நிலையான கட்டம். குறுகிய துளை துருப்பிடிக்காத எஃகு நெடுவரிசைகள் (100 × 1.8 மிமீ உள் விட்டம்) ஒரு குழம்பு பொதியுடன் நிரம்பியிருந்தன. ஐந்து பெப்டைடுகள் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu அமினோ அமிலம் என்கெஃபாலின்) மற்றும் மனித சீரம் அல்புமினின் (HAS) டிரிப்டிக் ஹைட்ரோலைசேட் ஆகியவற்றைக் கொண்ட செயற்கை பெப்டைடுகளின் கலவையைப் பிரிக்க மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. உகந்த கரைப்பு நிலைமைகளின் கீழ், பெப்டைட்களின் கலவையுடன் கூடிய தட்டுகளின் கோட்பாட்டு எண்ணிக்கை 280,000 தட்டுகள்/சதுர மீட்டரை எட்டியது. உருவாக்கப்பட்ட நெடுவரிசையின் பிரிப்பு செயல்திறனை வணிக அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடுகையில், பிரிப்பு திறன் மற்றும் தெளிவுத்திறன் அடிப்படையில் PMP நெடுவரிசையின் பிரிப்பு திறன் வணிக நெடுவரிசையை விட உயர்ந்ததாக இருப்பது காணப்பட்டது.
சமீபத்திய ஆண்டுகளில் சந்தைப் பங்கில் குறிப்பிடத்தக்க அதிகரிப்புடன் உயிரி மருந்துத் தொழில் விரிவடைந்து வரும் உலகளாவிய சந்தையாக மாறியுள்ளது. உயிரி மருந்துத் துறையின் வெடிக்கும் வளர்ச்சியுடன்1,2,3 பெப்டைட் மற்றும் புரத பகுப்பாய்விற்கான அதிக தேவை உள்ளது. இலக்கு பெப்டைடுக்கு கூடுதலாக, பெப்டைட் தொகுப்பின் போது பல்வேறு அசுத்தங்கள் உருவாகின்றன, எனவே பெப்டைட்டின் விரும்பிய தூய்மையைப் பெற குரோமடோகிராஃபிக் சுத்திகரிப்பு தேவைப்படுகிறது. உடல் திரவங்கள், திசுக்கள் மற்றும் செல்களில் உள்ள புரதங்களின் பகுப்பாய்வு மற்றும் தன்மைப்படுத்தல் மிகவும் சவாலான பணியாகும், ஏனெனில் ஒரே மாதிரியில் அதிக எண்ணிக்கையிலான கண்டறியக்கூடிய இனங்கள் உள்ளன. பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களை வரிசைப்படுத்துவதற்கு மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி ஒரு பயனுள்ள கருவியாக இருந்தாலும், அத்தகைய மாதிரிகள் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டரில் நேரடியாக அறிமுகப்படுத்தப்பட்டால், பிரிப்பு திருப்தியற்றதாக இருக்கும். MS பகுப்பாய்விற்கு முன் திரவ குரோமடோகிராபி (LC) செய்வதன் மூலம் இந்த சிக்கலை தீர்க்க முடியும், இது ஒரு குறிப்பிட்ட நேரத்தில் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டருக்குள் நுழையும் பகுப்பாய்வுகளின் அளவைக் குறைக்கும்4,5,6. கூடுதலாக, திரவ நிலை பிரிப்பின் போது அனலிட்டுகள் ஒரு குறுகிய பகுதியில் செறிவூட்டப்படலாம், இதன் மூலம் இந்த அனலிட்கள் செறிவூட்டப்பட்டு MS கண்டறிதலின் உணர்திறனை அதிகரிக்கும். திரவ குரோமடோகிராபி (LC) கடந்த பத்தாண்டுகளில் கணிசமாக முன்னேறியுள்ளது மற்றும் புரோட்டியோமிக் பகுப்பாய்விற்கு பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் முறையாக மாறியுள்ளது7,8,9,10.
எதிர்-கட்ட திரவ குரோமடோகிராபி (RP-LC) என்பது ஆக்டாடெசில்-மாற்றியமைக்கப்பட்ட சிலிக்காவை (ODS) நிலையான கட்டமாகப் பயன்படுத்தி பெப்டைட்களின் கலவைகளை சுத்திகரித்து பிரிக்க பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது11,12,13. இருப்பினும், அவற்றின் சிக்கலான அமைப்பு மற்றும் ஆம்போடெரிக் தன்மை காரணமாக,14,15 RP நிலையான கட்டங்கள் பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் திருப்திகரமான பிரிப்பை வழங்க முடியாது. எனவே, துருவ மற்றும் துருவமற்ற துண்டுகளைக் கொண்ட பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் பகுப்பாய்விற்கு இந்த பகுப்பாய்வுகளை தொடர்பு கொள்ளவும் தக்கவைக்கவும் சிறப்பாக வடிவமைக்கப்பட்ட நிலையான கட்டங்கள் தேவைப்படுகின்றன16. மல்டிமாடல் இடைவினைகளை வழங்கும் கலப்பு குரோமடோகிராபி, பெப்டைடுகள், புரதங்கள் மற்றும் பிற சிக்கலான கலவைகளைப் பிரிப்பதற்கான RP-LC க்கு மாற்றாக இருக்கலாம். பல கலப்பு-வகை நிலையான கட்டங்கள் தயாரிக்கப்பட்டு, இந்த நிலையான கட்டங்களால் நிரப்பப்பட்ட நெடுவரிசைகள் பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களைப் பிரிக்கப் பயன்படுத்தப்பட்டன17,18,19,20,21. துருவ மற்றும் துருவமற்ற குழுக்கள் இருப்பதால், கலப்பு முறை நிலையான கட்டங்கள் (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, துருவ இடைக்கணிப்பு/RPLC) பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களைப் பிரிப்பதற்கு ஏற்றவை22,23,24,25,26,27,28. , கோவலன்ட்லி பிணைக்கப்பட்ட துருவக் குழுக்களுடன் கூடிய துருவ இடைக்கணிப்பு நிலையான கட்டங்கள் துருவ மற்றும் துருவமற்ற பகுப்பாய்விகளுக்கு நல்ல பிரிப்பு திறன்களையும் தனித்துவமான தேர்ந்தெடுப்பையும் காட்டுகின்றன, ஏனெனில் பிரிப்பு அனலைட் மற்றும் நிலையான கட்டத்திற்கு இடையிலான தொடர்புகளைப் பொறுத்தது மல்டிமோடல் இடைவினைகள்29,30,31,32. சமீபத்தில், ஜாங் மற்றும் பலர். 30 பாலிஅமைன்களின் பெஹெனில்-முடிக்கப்பட்ட நிலையான கட்டங்களைப் பெற்று வெற்றிகரமாக ஹைட்ரோகார்பன்கள், ஆண்டிடிரஸன்ட்கள், ஃபிளாவனாய்டுகள், நியூக்ளியோசைடுகள், ஈஸ்ட்ரோஜன்கள் மற்றும் வேறு சில பகுப்பாய்விகளைப் பெற்றனர். துருவ உட்பொதிக்கப்பட்ட நிலையான பொருள் துருவ மற்றும் துருவமற்ற குழுக்களைக் கொண்டுள்ளது, எனவே பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களை ஹைட்ரோபோபிக் மற்றும் ஹைட்ரோஃபிலிக் பகுதிகளாகப் பிரிக்க இதைப் பயன்படுத்தலாம். போலார் இன்லைன் நெடுவரிசைகள் (எ.கா., அமைடு இன்லைனுடன் கூடிய C18 நெடுவரிசைகள்) அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நெடுவரிசைகள் என்ற வர்த்தகப் பெயரில் கிடைக்கின்றன, ஆனால் இந்த நெடுவரிசைகள் அமீன் 33 இன் பகுப்பாய்விற்கு மட்டுமே பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளன.
தற்போதைய ஆய்வில், பெப்டைட் பிரிப்பு மற்றும் டிரிப்டிக் HSA பிளவுக்காக ஒரு துருவ உட்பொதித்தல் நிலையான கட்டம் (N-phenylmaleimide, உட்பொதித்தல் பாலிஸ்டிரீன்) தயாரிக்கப்பட்டு மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. நிலையான கட்டத்தைத் தயாரிக்க பின்வரும் உத்தி பயன்படுத்தப்பட்டது. தயாரிப்புத் திட்டங்கள் 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 இல் சில மாற்றங்களுடன், எங்கள் முந்தைய வெளியீடுகளில் விவரிக்கப்பட்டுள்ள நடைமுறைகளின்படி நுண்துளை சிலிக்கா துகள்கள் தயாரிக்கப்பட்டன. யூரியா, பாலிஎதிலீன் கிளைக்கால் (PEG), TMOS மற்றும் நீர்-அசிட்டிக் அமிலத்தின் விகிதங்கள் பெரிய துளை அளவுகள் கொண்ட சிலிக்கா துகள்களைப் பெற சரிசெய்யப்பட்டன. இரண்டாவதாக, ஒரு புதிய ஃபீனைல்மலேமைடு-மெத்தில்வினைல் ஐசோசயனேட் லிகண்ட் ஒருங்கிணைக்கப்பட்டு, அதன் வழித்தோன்றப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் துருவ உட்பொதிக்கப்பட்ட நிலையான கட்டங்களைத் தயாரிக்கப் பயன்படுத்தப்பட்டன. பெறப்பட்ட நிலையான கட்டம் ஒரு உகந்த பேக்கிங் திட்டத்தின் படி ஒரு துருப்பிடிக்காத எஃகு நெடுவரிசையில் (உள் விட்டம் 100 × 1.8 மிமீ) பேக் செய்யப்பட்டது. நெடுவரிசையின் பேக்கிங் இயந்திர அதிர்வு மூலம் நெடுவரிசைக்குள் ஒரு சீரான அடுக்கை உறுதி செய்ய உதவுகிறது. ஐந்து பெப்டைடுகளைக் கொண்ட பெப்டைடுகளின் கலவையைப் பிரிப்பதற்காக நிரம்பிய நெடுவரிசை மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide). மற்றும் மனித சீரம் அல்புமினின் (HSA) டிரிப்டிக் ஹைட்ரோலைசேட்டுகள். பெப்டைட் கலவை மற்றும் HSA டிரிப்டிக் டைஜஸ்ட் நல்ல தெளிவுத்திறன் மற்றும் செயல்திறனுடன் பிரிக்கப்பட்டதைக் காண முடிந்தது. PMP நெடுவரிசையின் பிரிப்பு திறன் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடப்பட்டது. PMP நெடுவரிசையில் பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்கள் நல்ல தெளிவுத்திறன் மற்றும் அதிக பிரிப்புத் திறனைக் கொண்டிருப்பதைக் காண முடிந்தது, மேலும் PMP நெடுவரிசையின் பிரிப்புத் திறன் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையை விட அதிகமாக உள்ளது.
PEG (பாலிஎதிலீன் கிளைக்கால்), யூரியா, அசிட்டிக் அமிலம், டிரைமெத்தாக்ஸிஆர்தோசிலிகேட் (TMOS), டிரைமெத்தில்குளோரோசிலேன் (TMCS), டிரிப்சின், மனித சீரம் அல்புமின் (HSA), அம்மோனியம் குளோரைடு, யூரியா, ஹெக்ஸாமெதில்மெதாக்ரிலாய்ல்டிசிலாசேன் (HMDS), மெத்தாக்ரிலாய்ல் குளோரைடு (MC), ஸ்டைரீன், 4-ஹைட்ராக்ஸி- TEMPO, பென்சாயில் பெராக்சைடு (BPO), HPLCக்கான அசிட்டோனிட்ரைல் (ACN), மெத்தனால், 2-புரோப்பனால் மற்றும் அசிட்டோன். சிக்மா-ஆல்ட்ரிச் நிறுவனம் (செயின்ட் லூயிஸ், மிசௌரி, அமெரிக்கா).
யூரியா (8 கிராம்), பாலிஎதிலீன் கிளைக்கால் (8 கிராம்) மற்றும் 0.01 நைட்ரஜன் அசிட்டிக் அமிலம் 8 மில்லி ஆகியவற்றின் கலவையை 10 நிமிடங்கள் கிளறி, ஐஸ்-குளிர்ச்சியின் கீழ் 24 மில்லி TMOS சேர்க்கப்பட்டது. வினைத்திறன் கலவை 40°C வெப்பநிலையில் 6 மணி நேரம் சூடாக்கப்பட்டு, பின்னர் 120°C வெப்பநிலையில் ஒரு துருப்பிடிக்காத எஃகு ஆட்டோகிளேவில் 8 மணி நேரம் சூடாக்கப்பட்டது. தண்ணீர் வடிகட்டப்பட்டு, எச்சங்கள் 70°C வெப்பநிலையில் 12 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டன. உலர்ந்த மென்மையான தொகுதிகள் சீராக அரைக்கப்பட்டு 550°C வெப்பநிலையில் ஒரு அடுப்பில் 12 மணி நேரம் சுத்தப்படுத்தப்பட்டன. துகள் அளவுகள், துளை அளவு மற்றும் மேற்பரப்பு பரப்பளவு ஆகியவற்றின் மறுஉருவாக்கத்தை சோதிக்க மூன்று தொகுதிகள் தயாரிக்கப்பட்டு வகைப்படுத்தப்பட்டன.
பாலிஸ்டிரீன் சங்கிலிகளுக்கான துருவக் குழு மற்றும் நிலையான கட்டம். தயாரிப்பு செயல்முறை கீழே விவரிக்கப்பட்டுள்ளது.
N-பீனைல்மலைமைடு (200 மி.கி) மற்றும் மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட் (100 மி.கி) ஆகியவை நீரற்ற டோலுயினில் கரைக்கப்பட்டு, பின்னர் 0.1 மில்லி 2,2′-அசோய்சோபியூட்டிரோனிட்ரைல் (AIBN) வினை பிளாஸ்கில் சேர்க்கப்பட்டு பீனைல்மலைமைடு மற்றும் மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட் (PMCP) ஆகியவற்றின் கோபாலிமரைப் பெறப்பட்டது. இந்தக் கலவையை 60°C வெப்பநிலையில் 3 மணி நேரம் சூடாக்கி, வடிகட்டி 40°C வெப்பநிலையில் 3 மணி நேரம் அடுப்பில் உலர்த்தப்பட்டது.
உலர்ந்த சிலிக்கா துகள்கள் (2 கிராம்) உலர்ந்த டோலுயினில் (100 மிலி) சிதறடிக்கப்பட்டு, 500 மிலி வட்ட அடிப்பகுதி கொண்ட பிளாஸ்கில் 10 நிமிடங்கள் கிளறி, ஒலி நீக்கம் செய்யப்பட்டன. PMCP (10 மிலி) டோலுயினில் கரைக்கப்பட்டு, கூடுதல் புனல் வழியாக வினை பிளாஸ்கில் சொட்டு சொட்டாக சேர்க்கப்பட்டது. கலவை 100°C இல் 8 மணி நேரம் ரிஃப்ளக்ஸ் செய்யப்பட்டு, வடிகட்டி, அசிட்டோனால் கழுவி, 60°C இல் 3 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது. பின்னர், PMCP (100 கிராம்) உடன் தொடர்புடைய சிலிக்கா துகள்கள் டோலுயினில் (200 மிலி) கரைக்கப்பட்டன, மேலும் 100 μl டைபியூட்டில்டின் டைலாரேட் வினையூக்கியாக இருப்பதால் 4-ஹைட்ராக்ஸி-டெம்போ (2 மிலி) அதில் சேர்க்கப்பட்டது. கலவை 50°C இல் 8 மணி நேரம் கிளறி, வடிகட்டி 50°C இல் 3 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது.
TEMPO-PMCP (1.5 கிராம்) உடன் இணைக்கப்பட்ட ஸ்டைரீன் (1 மிலி), பென்சாயில் பெராக்சைடு BPO (0.5 மிலி) மற்றும் சிலிக்கா துகள்கள் டோலுயினில் சிதறடிக்கப்பட்டு நைட்ரஜனுடன் சுத்திகரிக்கப்பட்டன. ஸ்டைரீனின் பாலிமரைசேஷன் 100°C இல் 12 மணி நேரம் மேற்கொள்ளப்பட்டது. இதன் விளைவாக வந்த தயாரிப்பு மெத்தனால் கழுவப்பட்டு 60°C இல் ஒரே இரவில் உலர்த்தப்பட்டது. எதிர்வினையின் பொதுவான திட்டம் படம் ஒன்றில் காட்டப்பட்டுள்ளது.
10–3 டோரருக்கும் குறைவான எஞ்சிய அழுத்தம் கிடைக்கும் வரை மாதிரிகள் 1 மணிநேரத்திற்கு 393 K இல் வாயு நீக்கம் செய்யப்பட்டன. ஒப்பீட்டு அழுத்தம் P/P0 = 0.99 இல் உறிஞ்சப்பட்ட N2 அளவு மொத்த துளை அளவை தீர்மானிக்கப் பயன்படுத்தப்பட்டது. ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி தூய மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் உருவவியல் ஆய்வு செய்யப்பட்டது (ஹிட்டாச்சி ஹை டெக்னாலஜிஸ், டோக்கியோ, ஜப்பான்). கார்பன் டேப்பைப் பயன்படுத்தி அலுமினிய கம்பிகளில் உலர்ந்த மாதிரிகள் (தூய சிலிக்கா மற்றும் லிகண்ட் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள்) வைக்கப்பட்டன. Q150T ஸ்பட்டரிங் சாதனத்தைப் பயன்படுத்தி மாதிரியில் தங்கம் வைக்கப்பட்டது, மேலும் 5 nm தடிமன் கொண்ட Au அடுக்கு மாதிரியில் வைக்கப்பட்டது. இது குறைந்த மின்னழுத்த செயல்முறையின் செயல்திறனை மேம்படுத்துகிறது மற்றும் சிறந்த குளிர் தெளிப்பை வழங்குகிறது. தெர்மோ எலக்ட்ரான் (வால்தம், MA, USA) ஃப்ளாஷ் EA1112 தனிம கலவை பகுப்பாய்வியைப் பயன்படுத்தி தனிம பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. துகள் அளவு பரவலைப் பெற மால்வெர்ன் துகள் அளவு பகுப்பாய்வி (வொர்செஸ்டர்ஷயர், UK) மாஸ்டர்சைசர் 2000 பயன்படுத்தப்பட்டது. பூசப்படாத சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைப்பு சிலிக்கா துகள்கள் (ஒவ்வொன்றும் 5 மி.கி) 5 மில்லி ஐசோபுரோபனாலில் சிதறடிக்கப்பட்டு, 10 நிமிடங்கள் சோனிகேட் செய்யப்பட்டு, 5 நிமிடங்கள் கிளறி, மாஸ்டர்சைசர் ஆப்டிகல் பெஞ்சில் வைக்கப்பட்டன. 30 முதல் 800 °C வரையிலான வெப்பநிலை வரம்பில் நிமிடத்திற்கு 5 °C என்ற விகிதத்தில் தெர்மோகிராவிமெட்ரிக் பகுப்பாய்வு மேற்கொள்ளப்படுகிறது.
கண்ணாடி இழை வரிசையாக அமைக்கப்பட்ட குறுகிய துளையிடப்பட்ட துருப்பிடிக்காத எஃகு தூண்கள், பரிமாணங்கள் (ID 100 × 1.8 மிமீ) குறிப்பு 31 இல் உள்ள அதே நடைமுறையைப் பின்பற்றி குழம்பு நிரப்பும் முறையால் பேக் செய்யப்பட்டன. துருப்பிடிக்காத எஃகு தூண் (கண்ணாடி வரிசையாக அமைக்கப்பட்டது, ID 100 × 1 .8 மிமீ) மற்றும் 1 µm ஃபிரிட் கொண்ட ஒரு அவுட்லெட் ஒரு குழம்பு பேக்கேஜிங் இயந்திரத்துடன் (ஆல்டெக் டீர்ஃபீல்ட், IL, USA) இணைக்கப்பட்டது. 1.2 மில்லி மெத்தனாலில் 150 மி.கி நிலையான கட்டத்தை இடைநிறுத்தி, அதை ஒரு நீர்த்தேக்க நெடுவரிசையில் செலுத்துவதன் மூலம் நிலையான கட்டத்தின் இடைநீக்கத்தைத் தயாரிக்கவும். மெத்தனால் குழம்பு கரைப்பான் மற்றும் கட்டுப்பாட்டு கரைப்பானாகப் பயன்படுத்தப்பட்டது. 10 நிமிடங்களுக்கு 100 MP, 15 நிமிடங்களுக்கு 80 MP மற்றும் 30 நிமிடங்களுக்கு 60 MP என்ற அழுத்த வரிசையைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் நெடுவரிசையை பேக் செய்யவும். சீரான நெடுவரிசை பேக்கிங்கை உறுதி செய்வதற்காக, பேக்கிங் செயல்முறை இயந்திர அதிர்வுக்காக இரண்டு வாயு குரோமடோகிராஃபி நெடுவரிசை அதிர்வுகளை (ஆல்டெக், டீர்ஃபீல்ட், IL, USA) பயன்படுத்தியது. சரத்திற்கு சேதம் ஏற்படுவதைத் தடுக்க குழம்பு பேக்கரை மூடி, அழுத்தத்தை மெதுவாக வெளியிடவும். அந்தக் குழாய் குழம்பு முனையிலிருந்து துண்டிக்கப்பட்டு, மற்றொரு பொருத்துதல் நுழைவாயிலுடன் இணைக்கப்பட்டு, அதன் செயல்பாட்டைச் சோதிக்க LC அமைப்புடன் இணைக்கப்பட்டது.
ஒரு தனிப்பயன் MLC ஒரு LC பம்ப் (10AD Shimadzu, ஜப்பான்), 50 nL ஊசி வளையம் (Valco (USA) C14 W.05) கொண்ட ஒரு மாதிரி, ஒரு சவ்வு டிகாசர் (Shimadzu DGU-14A) மற்றும் ஒரு UV-VIS கேபிலரி சாளரத்தைப் பயன்படுத்தி கட்டமைக்கப்பட்டது. டிடெக்டர் சாதனம் (UV-2075) மற்றும் எனாமல் பூசப்பட்ட மைக்ரோகோலம். கூடுதல் நெடுவரிசை விரிவாக்கத்தின் விளைவைக் குறைக்க மிகவும் குறுகிய மற்றும் குறுகிய இணைக்கும் குழாய்களைப் பயன்படுத்தவும். நெடுவரிசையை நிரப்பிய பிறகு, 1/16″ குறைக்கும் சந்திப்பின் வெளியீட்டில் ஒரு கேபிலரி (50 µm ஐடி 365) ஐ நிறுவவும், குறைக்கும் சந்திப்பின் ஒரு கேபிலரி (50 µm) ஐ நிறுவவும். தரவு சேகரிப்பு மற்றும் குரோமடோகிராம் செயலாக்கம் மல்டிக்ரோ 2000 மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி செய்யப்படுகிறது. 254 nm இல், பொருள் பகுப்பாய்வுகளின் UV உறிஞ்சுதல் 0 இல் கண்காணிக்கப்பட்டது. குரோமடோகிராஃபிக் தரவு OriginPro8 (Northampton, MA) ஐப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.
மனித சீரம் அல்புமின், லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தூள், ≥ 96% (அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ்) 3 மி.கி. டிரிப்சின் (1.5 மி.கி), 4.0 மி.கி. யூரியா (1 மி.லி.) மற்றும் 0.2 மி.கி. அம்மோனியம் பைகார்பனேட் (1 மி.லி.) ஆகியவற்றுடன் கலக்கப்பட்டது. கரைசலை 10 நிமிடங்கள் கிளறி, 37°C வெப்பநிலையில் 6 மணி நேரம் தண்ணீர் குளியல் ஒன்றில் வைத்து, பின்னர் 1 மி.லி. 0.1% TFA உடன் தணிக்கவும். கரைசலை வடிகட்டி 4°C க்கு கீழே சேமிக்கவும்.
ஒரு PMP நெடுவரிசையில் பெப்டைடுகள் மற்றும் டிரிப்டிக் டைஜஸ்ட் HSA கலவையைப் பிரிப்பது தனித்தனியாக மதிப்பிடப்பட்டது. PMP நெடுவரிசையால் பிரிக்கப்பட்ட பெப்டைடுகள் மற்றும் HSA கலவையின் டிரிப்டிக் நீராற்பகுப்பைச் சரிபார்த்து, முடிவுகளை Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடவும். கோட்பாட்டுத் தகடுகளின் எண்ணிக்கை பின்வரும் சமன்பாட்டைப் பயன்படுத்தி கணக்கிடப்படுகிறது:
தூய சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் SEM படங்கள் படம் 2 இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. தூய சிலிக்கா துகள்களின் (A, B) SEM படங்கள், நமது முந்தைய ஆய்வுகளுடன் ஒப்பிடும்போது துகள்கள் நீளமாக அல்லது ஒழுங்கற்ற சமச்சீர் கொண்ட கோள வடிவத்தைக் காட்டுகின்றன. லிகண்டால் (C, D) பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு தூய சிலிக்கா துகள்களை விட மென்மையானது, இது சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பை உள்ளடக்கிய பாலிஸ்டிரீன் சங்கிலிகள் காரணமாக இருக்கலாம்.
தூய சிலிக்கா துகள்கள் (A, B) மற்றும் லிகண்ட் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (C, D) ஆகியவற்றின் எலக்ட்ரான் நுண்வரைபடங்களை ஸ்கேன் செய்தல்.
தூய சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவு பரவல் படம் 2. 3(A) இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு சிலிக்கா துகள் அளவு அதிகரித்ததை அளவீட்டு துகள் அளவு பரவல் வளைவுகள் காட்டின (படம் 3A). தற்போதைய ஆய்வு மற்றும் முந்தைய ஆய்வின் சிலிக்கா துகள் அளவு பரவல் தரவு அட்டவணை 1(A) இல் ஒப்பிடப்பட்டுள்ளது. PMP இன் அளவீட்டு துகள் அளவு d(0.5) 3.36 µm ஆக இருந்தது, இது எங்கள் முந்தைய ஆய்வில் (பாலிஸ்டிரீன் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள்) 34 இல் ad(0.5) மதிப்பு 3.05 µm உடன் ஒப்பிடும்போது. எதிர்வினை கலவையில் PEG, யூரியா, TMOS மற்றும் அசிட்டிக் அமிலத்தின் விகிதத்தில் ஏற்பட்ட மாற்றத்தின் காரணமாக, இந்த தொகுப்பின் துகள் அளவு பரவல் எங்கள் முந்தைய ஆய்வை விட குறுகியதாக இருந்தது. PMP கட்டத்தின் துகள் அளவு, நாம் முன்பு ஆய்வு செய்த பாலிஸ்டிரீன் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள் கட்டத்தை விட சற்று பெரியது. இதன் பொருள், ஸ்டைரீனுடன் சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு செயல்பாட்டுத்தன்மை சிலிக்கா மேற்பரப்பில் ஒரு பாலிஸ்டிரீன் அடுக்கை (0.97 µm) மட்டுமே படியச் செய்தது, அதே நேரத்தில் PMP கட்டத்தில் அடுக்கு தடிமன் 1.38 µm ஆக இருந்தது.
தூய சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவு பரவல் (A) மற்றும் துளை அளவு பரவல் (B).
இந்த ஆய்வில் பயன்படுத்தப்படும் சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவு, துளை அளவு மற்றும் மேற்பரப்பு பகுதி அட்டவணை 1 (B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. தூய சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் PSD சுயவிவரங்கள் படம் 3 (B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. முடிவுகள் எங்கள் முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடத்தக்கவை34. தூய மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவுகள் முறையே 310 Å மற்றும் 241 Å ஆகும், இது வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு, அட்டவணை 1 (B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி துளை அளவு 69 Å குறைந்துள்ளது என்பதைக் குறிக்கிறது, மேலும் ஷிப்ட் வளைவு படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளது. தற்போதைய ஆய்வில் சிலிக்கா துகள்களின் குறிப்பிட்ட மேற்பரப்பு பகுதி 116 மீ2/கிராம் ஆகும், இது எங்கள் முந்தைய ஆய்வுக்கு (124 மீ2/கிராம்) ஒப்பிடத்தக்கது. அட்டவணை 1 (B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு பகுதி (மீ2/கிராம்) 116 மீ2/கிராமிலிருந்து 105 மீ2/கிராமாக குறைந்தது.
நிலையான கட்டத்தின் தனிம பகுப்பாய்வின் முடிவுகள் அட்டவணை 2 இல் வழங்கப்பட்டுள்ளன. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் உள்ளடக்கம் 6.35% ஆகும், இது எங்கள் முந்தைய ஆய்வை விட குறைவாக உள்ளது (பாலிஸ்டிரீனுடன் தொடர்புடைய சிலிக்கா துகள்கள், முறையே 7.93%35 மற்றும் 10.21%) 42. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் உள்ளடக்கம் கீழே உள்ளது, ஏனெனில் SP தயாரிப்பில் ஸ்டைரீனுடன் கூடுதலாக ஃபீனைல்மலேமைடு மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட் (PCMP) மற்றும் 4-ஹைட்ராக்ஸி-TEMPO போன்ற சில துருவ லிகண்டுகள் பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளன. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தில் நைட்ரஜனின் எடை சதவீதம் முந்தைய ஆய்வுகளில் 0.1735 மற்றும் 0.85% உடன் ஒப்பிடும்போது 2.21% ஆகும். இதன் பொருள் தற்போதைய நிலையான கட்டத்தில் ஃபீனைல்மலேமைடு காரணமாக நைட்ரஜனின் அதிக எடை சதவீதம் உள்ளது. இதேபோல், தயாரிப்புகள் (4) மற்றும் (5) முறையே 2.7% மற்றும் 2.9% கார்பன் உள்ளடக்கத்தைக் கொண்டுள்ளன, அதே நேரத்தில் இறுதி தயாரிப்பு (6) 6.35% கார்பன் உள்ளடக்கத்தைக் கொண்டுள்ளது, இது அட்டவணை 2 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. எடை இழப்பை சோதிக்க PMP இன் நிலையான கட்டத்தில் தெர்மோகிராவிமெட்ரிக் பகுப்பாய்வு (TGA) பயன்படுத்தப்பட்டது, மேலும் TGA வளைவு படம் 4 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. TGA வளைவு 8.6% எடை இழப்பைக் காட்டுகிறது, இது கார்பன் உள்ளடக்கத்துடன் (6.35%) நல்ல உடன்பாட்டில் உள்ளது, ஏனெனில் லிகண்ட்களில் C மட்டுமல்ல, N, O மற்றும் H ஆகியவையும் உள்ளன.
சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பை மாற்றியமைக்க லிகண்ட் ஃபீனைல்மலேமைடு-மெத்தில்வினைல் ஐசோசயனேட் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது, ஏனெனில் அதன் துருவ ஃபீனைல்மலேமைடு மற்றும் வினைலிசோசயனேட் குழுக்கள் உள்ளன. வினைல் ஐசோசயனேட் குழுக்கள் ஸ்டைரீனுடன் உயிருள்ள ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷன் மூலம் மேலும் வினைபுரிய முடியும். இரண்டாவது காரணம், அனலைட்டுடன் மிதமான தொடர்புகளைக் கொண்ட ஒரு குழுவைச் செருகுவதாகும், மேலும் அனலைட்டுக்கும் நிலையான கட்டத்திற்கும் இடையில் வலுவான மின்னியல் தொடர்புகள் இல்லை, ஏனெனில் ஃபீனைல்மலேமைடு பகுதிக்கு சாதாரண pH இல் மெய்நிகர் கட்டணம் இல்லை. நிலையான கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை ஸ்டைரீனின் உகந்த அளவு மற்றும் ஃப்ரீ ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷனின் எதிர்வினை நேரம் மூலம் கட்டுப்படுத்தலாம். நிலையான கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை (ஃப்ரீ ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷன்) நிலையான கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை மாற்றுவதால், எதிர்வினையின் இறுதி படி (ஃப்ரீ ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷன்) முக்கியமானது. இந்த நிலையான கட்டங்களில் கார்பன் உள்ளடக்கத்தை சரிபார்க்க தனிம பகுப்பாய்வு மேற்கொள்ளப்பட்டது. ஸ்டைரீனின் அளவையும் எதிர்வினை நேரத்தையும் அதிகரிப்பது நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் உள்ளடக்கத்தை அதிகரிக்கிறது மற்றும் நேர்மாறாகவும். ஸ்டைரீனின் வெவ்வேறு செறிவுகளுடன் தயாரிக்கப்பட்ட SPகள் வெவ்வேறு கார்பன் சுமைகளைக் கொண்டுள்ளன. இதேபோல், இந்த நிலையான கட்டங்கள் துருப்பிடிக்காத எஃகு தூண்களில் வைக்கப்பட்டு அவற்றின் குரோமடோகிராஃபிக் பண்புகள் (தேர்வுத்திறன், தெளிவுத்திறன், N மதிப்பு, முதலியன) சரிபார்க்கப்பட்டன. இந்த சோதனைகளின் அடிப்படையில், கட்டுப்படுத்தப்பட்ட துருவமுனைப்பு மற்றும் பகுப்பாய்வின் நல்ல தக்கவைப்பை வழங்க PMP நிலையான கட்டத்தைத் தயாரிப்பதற்கான உகந்த கலவை தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது.
மொபைல் கட்டத்தின் திறனைப் பயன்படுத்தி ஐந்து பெப்டைட்களின் கலவைகளின் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) பகுப்பாய்விற்காக PMP நெடுவரிசையும் மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. 80 µl/min ஓட்ட விகிதத்தில் 60/40 (v/v) ACN/நீர் (0.1% TFA). உகந்த நீக்குதல் நிலைமைகளின் கீழ் (200,000 தட்டுகள்/மீ), ஒரு நெடுவரிசைக்கு (100 × 1.8 மிமீ) கோட்பாட்டுத் தகடுகளின் எண்ணிக்கை (N) 20,000 ± 100 ஆகும். மூன்று PMP நெடுவரிசைகளுக்கான N மதிப்புகள் அட்டவணை 3 இல் காட்டப்பட்டுள்ளன மற்றும் குரோமடோகிராம்கள் படம் 5A இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. ஒரு PMP நெடுவரிசையில் அதிக ஓட்ட விகிதத்தில் (700 µl/நிமிடம்) வேகமான பகுப்பாய்வு, ஒரு நிமிடத்திற்குள் ஐந்து பெப்டைடுகள் நீக்கப்பட்டன, ஒரு நெடுவரிசைக்கு 13,500 ± 330 என்ற சிறந்த N மதிப்பு (100 x 1.8 மிமீ விட்டம்), 135,000 தட்டுகள்/மீட்டருக்கு சமம் (படம் 5B). மறுஉருவாக்கத்தை சோதிக்க ஒரே அளவிலான மூன்று நெடுவரிசைகள் (உள் விட்டம் 100 x 1.8 மிமீ) PMP நிலையான கட்டத்தின் மூன்று வெவ்வேறு தொகுதிகளால் நிரப்பப்பட்டன. உகந்த நீக்குதல் நிலைமைகள், கோட்பாட்டுத் தகடுகளின் எண்ணிக்கை N மற்றும் தக்கவைப்பு நேரம் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி ஒவ்வொரு நெடுவரிசையிலும் ஒரே சோதனை கலவையைப் பிரிப்பதன் மூலம் ஒவ்வொரு நெடுவரிசைக்கும் பகுப்பாய்வுகள் பதிவு செய்யப்பட்டன. PMP நெடுவரிசைகளுக்கான மறுஉருவாக்கத் தரவு அட்டவணை 4 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. PMP நெடுவரிசையின் மறுஉருவாக்கம் அட்டவணை 3 இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி மிகக் குறைந்த %RSD மதிப்புகளுடன் நன்கு தொடர்புடையது.
ஒரு PMP நெடுவரிசை (B) மற்றும் ஒரு Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசை (A) ஆகியவற்றில் பெப்டைட் கலவைகளைப் பிரித்தல், மொபைல் கட்டம் 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP நெடுவரிசை பரிமாணங்கள் (100 x 1.8 மிமீ ஐடி), பகுப்பாய்வு சேர்மங்களின் நீக்க வரிசை: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) மற்றும் 5 (leucic அமிலம் enkephalin).
மனித சீரம் அல்புமினின் டிரிப்டிக் ஹைட்ரோலைசேட்டை HPLC பிரிப்பதற்காக ஒரு PMP நெடுவரிசை (உள் விட்டம் 100 x 1.8 மிமீ) மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. படம் 6 இல் உள்ள குரோமடோகிராம் மாதிரிகள் மிகச் சிறந்த தெளிவுத்திறனுடன் நன்கு பிரிக்கப்பட்டுள்ளன என்பதைக் காட்டுகிறது. HSA தீர்வுகள் 100 μl/நிமிட ஓட்ட விகிதம், 70/30 அசிட்டோனிட்ரைல்/நீர் மற்றும் 0.1% TFA இன் மொபைல் கட்டம் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. குரோமடோகிராமில் (படம் 6) காட்டப்பட்டுள்ளபடி, HSA இன் பிளவு 17 சிகரங்களாகப் பிரிக்கப்பட்டது, இது 17 பெப்டைடுகளுக்கு ஒத்திருக்கிறது. HSA ஹைட்ரோலைசேட்டிலிருந்து தனிப்பட்ட சிகரங்களின் பிரிப்பு செயல்திறன் கணக்கிடப்பட்டது மற்றும் மதிப்புகள் அட்டவணை 5 இல் காட்டப்பட்டுள்ளன.
HSA டிரிப்டிக் ஹைட்ரோலைசேட்டுகள் ஒரு PMP நெடுவரிசையில் (உள் விட்டம் 100 x 1.8 மிமீ), ஓட்ட விகிதம் (100 μl/நிமிடம்), மொபைல் கட்டம் 60/40 அசிட்டோனிட்ரைல்/நீர் மற்றும் 0.1% TFA ஆகியவற்றில் பிரிக்கப்பட்டன.
இங்கு L என்பது நெடுவரிசை நீளம், η என்பது நகரும் கட்டத்தின் பாகுத்தன்மை, ΔP என்பது நெடுவரிசையின் பின் அழுத்தம், மற்றும் u என்பது நகரும் கட்டத்தின் நேரியல் வேகம். PMP நெடுவரிசையின் ஊடுருவல் 2.5 × 10–14 மீ2, ஓட்ட விகிதம் 25 µl/நிமிடம், 60/40 v/v பயன்படுத்தப்பட்டது. ACN/நீர். PMP நெடுவரிசையின் ஊடுருவல் (ID 100 × 1.8 மிமீ) நமது முந்தைய Ref.34 ஆய்வைப் போன்றது. மேலோட்டமாக நுண்துளை துகள்களால் நிரப்பப்பட்ட ஒரு நெடுவரிசையின் ஊடுருவல் 1.7×10 .6 µm, 5 µm துகள்களுக்கு 2.5×10-14 மீ2 ஆகும். எனவே, PMP கட்டத்தின் ஊடுருவல் 5 μm அளவுள்ள கோர்-ஷெல் துகள்களின் ஊடுருவலைப் போன்றது.
இங்கு Wx என்பது குளோரோஃபார்மால் நிரப்பப்பட்ட நெடுவரிசையின் நிறை, Wy என்பது மெத்தனால் நிரப்பப்பட்ட நெடுவரிசையின் நிறை, மற்றும் ρ என்பது கரைப்பானின் அடர்த்தி. மெத்தனால் (ρ = 0.7866) மற்றும் குளோரோஃபார்மின் (ρ = 1.484) அடர்த்தி. சிலிக்கா-C18 துகள் நெடுவரிசையின் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி)34 மற்றும் நாம் முன்னர் ஆய்வு செய்த C18-யூரியா31 நெடுவரிசையின் மொத்த போரோசிட்டி முறையே 0.63 மற்றும் 0.55 ஆகும். இதன் பொருள் யூரியா லிகண்டுகளின் இருப்பு நிலையான கட்டத்தின் ஊடுருவலைக் குறைக்கிறது. மறுபுறம், PMP நெடுவரிசையின் மொத்த போரோசிட்டி (உள் விட்டம் 100 × 1.8 மிமீ) 0.60 ஆகும். C18 பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களால் நிரம்பிய நெடுவரிசைகளை விட PMP நெடுவரிசைகள் குறைவான ஊடுருவக்கூடியவை, ஏனெனில் C18 வகை நிலையான கட்டங்களில் C18 லிகண்டுகள் சிலிக்கா துகள்களுடன் நேரியல் சங்கிலிகளில் இணைக்கப்பட்டுள்ளன, அதே நேரத்தில் பாலிஸ்டிரீன் வகை நிலையான கட்டங்களில் துகள்களைச் சுற்றி ஒப்பீட்டளவில் தடிமனான பாலிமர் உருவாகிறது. அடுக்கு A. ஒரு பொதுவான பரிசோதனையில், நெடுவரிசை போரோசிட்டி பின்வருமாறு கணக்கிடப்படுகிறது:
படம் 7A இல், B, PMP நெடுவரிசை (id 100 x 1.8 மிமீ) மற்றும் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசை (id 100 x 1.8 மிமீ) ஆகியவற்றிற்கான வான் டீம்டர் வரைபடங்களை, அதே நீக்குதல் நிலைமைகளின் கீழ், இரண்டு நெடுவரிசைகளிலும் 60/40 ACN/H2O மற்றும் 0 .1% TFA 20 µl/min முதல் 800 µl/min வரை காட்டுகிறது. உகந்த ஓட்ட விகிதத்தில் (80 µl/min) குறைந்தபட்ச HETP மதிப்புகள் PMP நெடுவரிசை மற்றும் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசைக்கு முறையே 2.6 µm மற்றும் 3.9 µm ஆகும். HETP மதிப்புகள், PMP நெடுவரிசையின் (100 x 1.8 மிமீ ஐடி) பிரிப்பு திறன் வணிக ரீதியாக கிடைக்கக்கூடிய Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையை (100 x 1.8 மிமீ ஐடி) விட மிக அதிகமாக இருப்பதைக் காட்டுகின்றன. படம் 7(A) இல் உள்ள வான் டீம்டர் வரைபடம், நமது முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடும்போது அதிகரிக்கும் ஓட்டத்துடன் N மதிப்பில் குறைவு கணிசமாக அதிகமாக இல்லை என்பதைக் காட்டுகிறது. அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடும்போது PMP நெடுவரிசையின் (id 100 × 1.8 மிமீ) அதிக பிரிப்பு திறன் மேம்படுத்தப்பட்ட துகள் வடிவம் மற்றும் அளவு மற்றும் தற்போதைய வேலையில் பயன்படுத்தப்படும் அதிநவீன நெடுவரிசை பேக்கிங் நடைமுறையை அடிப்படையாகக் கொண்டது34.
(A) 0.1% TFA உடன் 60/40 ACN/H2O இல் PMP நெடுவரிசையில் (id 100 x 1.8 மிமீ) பெறப்பட்ட வான் டீம்டர் வரைபடத் திட்டம் (HETP vs. மொபைல் கட்ட நேரியல் வேகம்). (B) 0.1% TFA உடன் 60/40 ACN/H2O இல் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையில் (id 100 x 1.8 மிமீ) பெறப்பட்ட வான் டீம்டர் வரைபடத் திட்டம் (HETP vs. மொபைல் கட்ட நேரியல் வேகம்).
உயர் செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராஃபியில், செயற்கை பெப்டைடுகள் மற்றும் மனித சீரம் அல்புமின் (HSA) டிரிப்டிக் ஹைட்ரோலைசேட் கலவையைப் பிரிப்பதற்காக இடைக்கணிக்கப்பட்ட பாலிஸ்டிரீனின் ஒரு துருவ நிலையான கட்டம் தயாரிக்கப்பட்டு மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. பெப்டைட் கலவைகளுக்கான PMP நெடுவரிசைகளின் குரோமடோகிராஃபிக் செயல்திறன் பிரிப்பு திறன் மற்றும் தெளிவுத்திறன் அடிப்படையில் சிறப்பாக உள்ளது. PMP நெடுவரிசைகளின் மேம்பட்ட பிரிப்பு திறன் சிலிக்கா துகள் அளவு மற்றும் துளை அளவு, நிலையான கட்டங்களின் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட தொகுப்பு மற்றும் சிக்கலான நெடுவரிசை பேக்கிங் பொருட்கள் போன்ற பல காரணங்களால் ஏற்படுகிறது. அதிக பிரிப்பு செயல்திறனுடன் கூடுதலாக, இந்த நிலையான கட்டத்தின் மற்றொரு நன்மை அதிக ஓட்ட விகிதங்களில் குறைந்த நெடுவரிசை பின்புற அழுத்தம் ஆகும். PMP நெடுவரிசைகள் மிகவும் இனப்பெருக்கம் செய்யக்கூடியவை மற்றும் பெப்டைட்களின் கலவைகள் மற்றும் பல்வேறு புரதங்களின் டிரிப்டிக் செரிமானத்தை பகுப்பாய்வு செய்யப் பயன்படுத்தலாம். திரவ குரோமடோகிராஃபியில் இயற்கை பொருட்கள், மருத்துவ தாவரங்களின் சாறுகள் மற்றும் காளான்களிலிருந்து உயிரியல் ரீதியாக செயல்படும் சேர்மங்களைப் பிரிப்பதற்கு இந்த நெடுவரிசையைப் பயன்படுத்த நாங்கள் உத்தேசித்துள்ளோம். எதிர்காலத்தில், புரதங்கள் மற்றும் மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பிரிப்பதற்கும் PMP நெடுவரிசைகள் மதிப்பீடு செய்யப்படும்.
ஃபீல்ட், ஜே.கே., யூர்பி, எம்.ஆர்., லாவ், ஜே., தோகர்சன், எச். & பீட்டர்சன், பி. தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராபி பெப்டைட் பிரிப்பு அமைப்புகள் பற்றிய விசாரணை பகுதி I: நெடுவரிசை குணாதிசயத்திற்கான ஒரு நெறிமுறையின் வளர்ச்சி. ஃபீல்ட், ஜே.கே., யூர்பி, எம்.ஆர்., லாவ், ஜே., தோகர்சன், எச். & பீட்டர்சன், பி. தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராபி பெப்டைட் பிரிப்பு அமைப்புகள் பற்றிய விசாரணை பகுதி I: நெடுவரிசை குணாதிசயத்திற்கான ஒரு நெறிமுறையின் வளர்ச்சி.ஃபீல்ட், ஜே.கே., ஓவர்பி, எம்.ஆர்., லாவ், ஜே., டோகர்சன், எச்., மற்றும் பீட்டர்சன், பி. தலைகீழ்-கட்ட குரோமடோகிராஃபி மூலம் பெப்டைட் பிரிப்பு அமைப்புகளின் ஆய்வு, பகுதி I: நெடுவரிசை சிறப்பியல்புக்கான ஒரு நெறிமுறையை உருவாக்குதல். ஃபீல்ட், ஜே.கே., யூர்பி, எம்.ஆர்., லாவ், ஜே., தோகர்சன், எச். & பீட்டர்சன், பி. தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராபி பெப்டைட் பிரிப்பு அமைப்புகள் பற்றிய ஆய்வு பகுதி I: நெடுவரிசை பண்புகளுக்கான ஒரு நெறிமுறையின் உருவாக்கம். ஃபீல்ட், ஜே.கே., யூர்பி, எம்.ஆர்., லாவ், ஜே., தோகர்சன், எச். & பீட்டர்சன், பி. தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராபி பெப்டைட் பிரிப்பு அமைப்புகள் பற்றிய ஆய்வு பகுதி I: நெடுவரிசை பண்புகளுக்கான ஒரு நெறிமுறையின் உருவாக்கம்.ஃபீல்ட், ஜே.கே., ஓவர்பி, எம்.ஆர்., லாவ், ஜே., டோகர்சன், எச்., மற்றும் பீட்டர்சன், பி. தலைகீழ்-கட்ட குரோமடோகிராஃபி மூலம் பெப்டைட் பிரிப்பு அமைப்புகளின் ஆய்வு, பகுதி I: நெடுவரிசை சிறப்பியல்புக்கான ஒரு நெறிமுறையை உருவாக்குதல்.ஜே.色谱法。 1603,113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
கோமஸ், பி. மற்றும் பலர். தொற்று நோய்களுக்கான சிகிச்சைக்காக மேம்படுத்தப்பட்ட செயலில் உள்ள பெப்டைடுகளை உருவாக்குவதற்கான முறைகள். உயிரி தொழில்நுட்பம். சாதனைகள் 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
வ்லீகே, பி., லிசோவ்ஸ்கி, வி., மார்டினெஸ், ஜே. & க்ரெஸ்ட்சாடிஸ்கி, எம். செயற்கை சிகிச்சை பெப்டைடுகள்: அறிவியல் மற்றும் சந்தை. வ்லீகே, பி., லிசோவ்ஸ்கி, வி., மார்டினெஸ், ஜே. & க்ரெஸ்ட்சாடிஸ்கி, எம். செயற்கை சிகிச்சை பெப்டைடுகள்: அறிவியல் மற்றும் சந்தை.வ்லீஜ் பி, லிசோவ்ஸ்கி வி, மார்டினெஸ் ஜே மற்றும் கிரெசாட்டிஸ்கி எம். செயற்கை சிகிச்சை பெப்டைடுகள்: அறிவியல் மற்றும் சந்தை.வ்லீஜ் பி, லிசோவ்ஸ்கி வி, மார்டினெஸ் ஜே மற்றும் க்ரெசாட்ஸ்கி எம். செயற்கை சிகிச்சை பெப்டைடுகள்: அறிவியல் மற்றும் சந்தை. மருந்து கண்டுபிடிப்பு. இன்று 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
ஸீ, எஃப்., ஸ்மித், ஆர்.டி & ஷென், ஒய். மேம்பட்ட புரோட்டியோமிக் திரவ குரோமடோகிராபி. ஸீ, எஃப்., ஸ்மித், ஆர்.டி & ஷென், ஒய். மேம்பட்ட புரோட்டியோமிக் திரவ குரோமடோகிராபி.F., Smith RD மற்றும் Shen Yu ஆகியோரைப் பார்க்கவும். மேம்பட்ட புரோட்டியோமிக் திரவ நிறமூர்த்தவியல். Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. மேம்பட்ட புரத கலவை 液相色谱。F., Smith RD மற்றும் Shen Yu ஆகியோரைப் பார்க்கவும். மேம்பட்ட புரோட்டியோமிக் திரவ நிறமூர்த்தவியல்.ஜே. குரோமடோகிராபி. ஏ 1261, 78–90 (2012).
லியு, டபிள்யூ. மற்றும் பலர். மேம்பட்ட திரவ குரோமடோகிராபி-மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி பரந்த அடிப்படையிலான வளர்சிதை மாற்றவியல் மற்றும் புரோட்டியோமிக்ஸ் ஆகியவற்றை இணைக்க முடியும். ஆசனவாய். சிம். ஆக்டா 1069, 89–97 (2019).
செஸ்நட், எஸ்.எம் & சாலிஸ்பரி, ஜே.ஜே. மருந்து வளர்ச்சியில் UHPLC இன் பங்கு. செஸ்நட், எஸ்.எம் & சாலிஸ்பரி, ஜே.ஜே. மருந்து வளர்ச்சியில் UHPLC இன் பங்கு.செஸ்நட், எஸ்.எம் மற்றும் சாலிஸ்பரி, ஜே.ஜே. மருந்து வளர்ச்சியில் UHPLC இன் பங்கு.செஸ்நட், எஸ்.எம் மற்றும் சாலிஸ்பரி, ஜே.ஜே. மருந்து வளர்ச்சியில் UHPLC இன் பங்கு. ஜே. செப்ட் சயின்ஸ். 30(8), 1183–1190 (2007).
வு, என். & கிளாசென், ஏஎம். வேகமான பிரிப்புகளுக்கான அல்ட்ராஹை பிரஷர் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் அடிப்படை மற்றும் நடைமுறை அம்சங்கள். வு, என். & கிளாசென், ஏஎம். வேகமான பிரிப்புகளுக்கான அல்ட்ராஹை பிரஷர் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் அடிப்படை மற்றும் நடைமுறை அம்சங்கள்.வு, என். மற்றும் கிளாசென், ஏ.எம். விரைவான பிரிப்புக்கான உயர் அழுத்த திரவ நிறமூர்த்தத்தின் அடிப்படை மற்றும் நடைமுறை அம்சங்கள். வு, என். & கிளாசன், AM வு, என். & கிளாசென், ஏஎம் விரைவான பிரிப்புக்கான அதி-உயர் அழுத்த திரவ நிறமூர்த்தத்தின் அடிப்படை மற்றும் நடைமுறை அம்சங்கள்.வு, என். மற்றும் கிளாசென், ஏ.எம். விரைவான பிரிப்புக்கான உயர் அழுத்த திரவ நிறமூர்த்தத்தின் அடிப்படை மற்றும் நடைமுறை அம்சங்கள்.ஜே. செப். சயின்ஸ். 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
ரென், எஸ்.ஏ & டெச்செலிட்செஃப், பி. மருந்து மேம்பாட்டில் அல்ட்ரா-செயல்திறன் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பயன்பாடு. ரென், எஸ்.ஏ & டெச்செலிட்செஃப், பி. மருந்து மேம்பாட்டில் அல்ட்ரா-செயல்திறன் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பயன்பாடு.ரென், எஸ்.ஏ மற்றும் செலிஷெஃப், பி. மருந்து மேம்பாட்டில் மிக உயர்ந்த செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பயன்பாடு. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 ரென், எஸ்ஏ & டெச்செலிட்செஃப், பி.ரென், எஸ்.ஏ மற்றும் செலிஷெஃப், பி. மருந்து வளர்ச்சியில் அல்ட்ரா-செயல்திறன் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பயன்பாடு.ஜே. குரோமடோகிராபி. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
கு, எச். மற்றும் பலர். என்டோவைரஸ் 71 இன் திறமையான சுத்திகரிப்புக்காக உயர் உள் கட்டத்துடன் கூடிய எண்ணெய்-நீர் குழம்பிலிருந்து பெறப்பட்ட ஒரு ஒற்றைக்கல் மேக்ரோபோரஸ் ஹைட்ரோஜெல். வேதியியல். திட்டம். ஜர்னல் 401, 126051 (2020).
ஷி, ஒய்., சியாங், ஆர்., ஹார்வத், சி. & வில்கின்ஸ், ஜேஏ. புரோட்டியோமிக்ஸில் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பங்கு. ஷி, ஒய்., சியாங், ஆர்., ஹார்வத், சி. & வில்கின்ஸ், ஜேஏ. புரோட்டியோமிக்ஸில் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பங்கு.ஷி, ஒய்., சியாங், ஆர்., ஹார்வத், சி. மற்றும் வில்கின்ஸ், ஜே. புரோட்டியோமிக்ஸில் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பங்கு. ஷி, ஒய்., சியாங், ஆர்., ஹார்வாத், சி. & வில்கின்ஸ், ஜேஏ 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 ஷி, ஒய்., சியாங், ஆர்., ஹார்வாத், சி. & வில்கின்ஸ், ஜே.ஏஷி, ஒய்., சியாங், ஆர்., ஹார்வத், சி. மற்றும் வில்கின்ஸ், ஜே. புரோட்டியோமிக்ஸில் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பங்கு.ஜே. குரோமடோகிராபி. ஏ 1053 (1-2), 27-36 (2004).
ஃபெகெட், எஸ்., வுடே, ஜே.-எல். & குய்லர்மே, டி. சிகிச்சை பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் தலைகீழ்-கட்ட திரவ குரோமடோகிராஃபிக் பிரிப்புகளில் புதிய போக்குகள்: கோட்பாடு மற்றும் பயன்பாடுகள். & குய்லர்மே, டி. சிகிச்சை பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் தலைகீழ்-கட்ட திரவ குரோமடோகிராஃபிக் பிரிப்புகளில் புதிய போக்குகள்: கோட்பாடு மற்றும் பயன்பாடுகள். & கில்லர்ம், டி. நோவி டெண்டன்சிஸ் வ ராஸ்டெலெனி டெராபெவ்டிசெஸ்கி பெப்டிடோவ் மற்றும் பெல்கோவ்ஸ் போமோஷ்யூஸ் ஜிட்கோஸ்ட்னோ ஒப்ராஷென்னோய் ஃபேசோய்: டோரியா மற்றும் ப்ரிலோஜெனியா. & குய்லர்மே, டி. தலைகீழ் கட்ட திரவ குரோமடோகிராபி மூலம் சிகிச்சை பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களைப் பிரிப்பதில் புதிய போக்குகள்: கோட்பாடு மற்றும் பயன்பாடுகள். & கில்லர்ம், டி. & குய்லர்மே, டி.மற்றும் கில்லர்மே, டி. தலைகீழ் கட்ட திரவ குரோமடோகிராபி மூலம் சிகிச்சை பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களைப் பிரிப்பதில் புதிய போக்குகள்: கோட்பாடு மற்றும் பயன்பாடுகள்.ஜே. பார்ம். பயோமெடிக்கல் சயின்ஸ். ஆசனவாய். 69, 9–27 (2012).
கிலார், எம்., ஒலிவோவா, பி., டேலி, ஏஇ & கெப்லர், ஜேசி. முதல் மற்றும் இரண்டாவது பிரிப்பு பரிமாணங்களில் வெவ்வேறு pH மதிப்புகளுடன் RP-RP-HPLC அமைப்பைப் பயன்படுத்தி பெப்டைட்களின் இரு பரிமாண பிரிப்பு. கிலார், எம்., ஒலிவோவா, பி., டேலி, ஏஇ & கெப்லர், ஜேசி. முதல் மற்றும் இரண்டாவது பிரிப்பு பரிமாணங்களில் வெவ்வேறு pH மதிப்புகளுடன் RP-RP-HPLC அமைப்பைப் பயன்படுத்தி பெப்டைட்களின் இரு பரிமாண பிரிப்பு.கிலார் எம்., ஒலிவோவா பி., டாலி ஏஇ மற்றும் கெப்லர் ஜேகே. முதல் மற்றும் இரண்டாவது பிரிப்பு பரிமாணங்களில் வெவ்வேறு pH மதிப்புகளுடன் RP-RP-HPLC அமைப்பைப் பயன்படுத்தி பெப்டைட்களின் இரு பரிமாணப் பிரிப்பு.கிலார் எம்., ஒலிவோவா பி., டாலி ஏஇ மற்றும் கெப்லர் ஜேகே. ஆர்பி-ஆர்பி-ஹெச்பிஎல்சி அமைப்பைப் பயன்படுத்தி முதல் மற்றும் இரண்டாவது பிரிப்பு பரிமாணங்களில் வெவ்வேறு pH மதிப்புகளைப் பயன்படுத்தி பெப்டைட்களின் இரு பரிமாணப் பிரிப்பு. ஜே. செப்டம்பர் சயின்ஸ். 28 (14), 1694–1703 (2005).
ஃபெல்லிட்டி, எஸ். மற்றும் பலர். 2 µm ஐ விட சிறியதாக முழுமையாக நுண்துளைகள் மற்றும் மேலோட்டமாக நுண்துளைகள் கொண்ட C18 துகள்களால் நிரம்பிய உயர் செயல்திறன் கொண்ட குரோமடோகிராஃபி நெடுவரிசைகளின் நிறை பரிமாற்றம் மற்றும் இயக்கவியல் பண்புகள் பற்றிய ஆய்வு. ஜே. செப்டம்பர் அறிவியல். 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
பியோவேசனா, எஸ். மற்றும் பலர். தாவர உயிரியல் ரீதியாக செயல்படும் பெப்டைட்களை தனிமைப்படுத்துதல், அடையாளம் காணுதல் மற்றும் சரிபார்ப்பதில் சமீபத்திய போக்குகள் மற்றும் பகுப்பாய்வு சவால்கள். ஆசனவாய். உயிரின ஆசனவாய். வேதியியல். 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
முல்லர், ஜே.பி. மற்றும் பலர். வாழ்க்கை ராஜ்யத்தின் புரோட்டியோமிக் நிலப்பரப்பு. நேச்சர் 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
டி லூகா, கே. மற்றும் பலர். தயாரிப்பு திரவ குரோமடோகிராபி மூலம் சிகிச்சை பெப்டைட்களின் பிந்தைய சிகிச்சை. மூலக்கூறுகள் (பாசல், சுவிட்சர்லாந்து) 26(15), 4688 (2021).
யாங், ஒய். & ஜெங், எக்ஸ். கலப்பு-முறை நிறமூர்த்தவியல் மற்றும் பயோபாலிமர்களுக்கான அதன் பயன்பாடுகள். யாங், ஒய். & ஜெங், எக்ஸ். கலப்பு-முறை நிறமூர்த்தவியல் மற்றும் பயோபாலிமர்களுக்கான அதன் பயன்பாடுகள்.யாங், யூ. மற்றும் ஜெங், எக்ஸ். கலப்பு முறை குரோமடோகிராபி மற்றும் பயோபாலிமர்களுக்கான அதன் பயன்பாடு. யாங், ஒய். & ஜெங், எக்ஸ். 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 யாங், ஒய். & ஜெங், எக்ஸ். கலப்பு முறை குரோமடோகிராபி மற்றும் பயோபாலிமர்களில் அதன் பயன்பாடு.யாங், யூ. மற்றும் ஜீன், எக்ஸ். கலப்பு முறை குரோமடோகிராபி மற்றும் பயோபாலிமர்களில் அதன் பயன்பாடு.ஜே. குரோமடோகிராபி. ஏ 1218(49), 8813–8825 (2011).