Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን። ውስን የCSS ድጋፍ ያለው የአሳሽ ስሪት እየተጠቀሙ ነው። ለተሻለ ተሞክሮ፣ የዘመነ አሳሽ እንዲጠቀሙ እንመክራለን (ወይም በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር ውስጥ የተኳኋኝነት ሁነታን እንዲያሰናክሉ)። በተጨማሪም፣ ቀጣይነት ያለው ድጋፍ ለማረጋገጥ፣ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን።
በአንድ ጊዜ የሶስት ስላይዶችን መዘውር ያሳያል። በአንድ ጊዜ ሶስት ስላይዶችን ለማለፍ የቀዳሚ እና የቀጣይ አዝራሮችን ይጠቀሙ፣ ወይም በአንድ ጊዜ ሶስት ስላይዶችን ለማለፍ በመጨረሻው ላይ ያሉትን የተንሸራታች አዝራሮች ይጠቀሙ።
ባለ ቀዳዳ ሲሊካ ቅንጣቶች በሶል-ጄል ዘዴ ተዘጋጅተው ሰፊ ቀዳዳ ቅንጣቶችን ለማግኘት አንዳንድ ማሻሻያዎችን አድርገዋል። እነዚህ ቅንጣቶች በN-phenylmaleemide-methylvinyl isocyanate (PMI) እና ስታይሪን በመጠቀም በተገላቢጦሽ ሰንሰለት ዝውውር-ፍሬግመንቴሽን (RAFT) ፖሊመሪዜሽን አማካኝነት ተወስደዋል። ስታይሪን (PMP) የማይንቀሳቀስ ደረጃ። ጠባብ ቦረቦረ አይዝጌ ብረት አምዶች (100 × 1.8 ሚሜ ውስጣዊ ዲያሜትር) በብሌንደር ማሸጊያ ተሞልተዋል። የPMP አምድ የክሮማቶግራፊ አፈጻጸም አምስት ፔፕታይዶችን (Gly-Tyr፣ Gly-Leu-Tyr፣ Gly-Gly-Tyr-Arg፣ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg፣ Leu አሚኖ አሲድ ኤንኬፋሊን) እና የሰው ሴረም አልቡሚን (HAS) የያዘውን ሰው ሰራሽ ፔፕታይዶች ድብልቅ ለመለየት ተገምግሟል። በተመቻቸ የማምለጫ ሁኔታዎች ውስጥ፣ የፔፕታይዶች ድብልቅ ያላቸው የቲዎሬቲካል ሳህኖች ብዛት 280,000 ሳህኖች/ስኩዌር ሜትር ደርሷል። የተገነባውን አምድ የመለያየት አፈጻጸም ከንግድ አስሴንቲስ ኤክስፕረስ አርፒ-አሚድ አምድ ጋር በማነፃፀር፣ የPMP አምድ የመለያየት ቅልጥፍና በመለያየት ቅልጥፍና እና ጥራት ረገድ ከንግድ አምድ የላቀ መሆኑን ተስተውሏል።
የባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ በቅርብ ዓመታት ውስጥ የገበያ ድርሻ በከፍተኛ ሁኔታ በመጨመሩ እያደገ የመጣ ዓለም አቀፍ ገበያ ሆኗል። የባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ 1,2,3 በከፍተኛ ፍጥነት እያደገ በመምጣቱ የፔፕታይድ እና የፕሮቲን ትንተና ከፍተኛ ፍላጎት አለ። ከዒላማው ፔፕታይድ በተጨማሪ የተለያዩ ቆሻሻዎች በፔፕታይድ ውህደት ወቅት ይፈጠራሉ፣ ስለዚህ የፔፕታይዱን ተፈላጊ ንፅህና ለማግኘት የክሮማቶግራፊ ጽዳት ያስፈልጋል። በሰውነት ፈሳሾች፣ ሕብረ ሕዋሳት እና ሴሎች ውስጥ ያሉ ፕሮቲኖችን መተንተን እና መለየት በአንድ ናሙና ውስጥ በሚገኙ ሊታወቁ የሚችሉ በርካታ ዝርያዎች ምክንያት እጅግ ፈታኝ ተግባር ነው። የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን ለመከተል ውጤታማ መሳሪያ ቢሆንም፣ እንደዚህ ያሉ ናሙናዎች በቀጥታ ወደ ጅምላ ስፔክትሮሜትር ከገቡ፣ መለያየቱ አጥጋቢ አይሆንም። ይህ ችግር በኤምኤስ ትንተና በፊት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (LC) በማከናወን ሊፈታ ይችላል፣ ይህም በተወሰነ ጊዜ ወደ ጅምላ ስፔክትሮሜትር የሚገቡትን አናሊቶች መጠን ይቀንሳል4,5,6። በተጨማሪም፣ አናሊቶች በፈሳሽ ደረጃ መለያየት ወቅት በጠባብ ክልል ውስጥ ማተኮር ይችላሉ፣ በዚህም እነዚህን አናሊቶች በማተኮር እና የኤምኤስ ምርመራ ስሜታዊነትን ይጨምራል። ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (LC) ባለፉት አስርት ዓመታት ውስጥ በከፍተኛ ሁኔታ እድገት አሳይቷል እና ለፕሮቲዮሚክ ትንተና በስፋት ጥቅም ላይ የዋለ ዘዴ ሆኗል7,8,9,10.
የተገላቢጦሽ-ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (RP-LC) እንደ ቋሚ ደረጃ 11,12,13 በመጠቀም የፔፕታይዶችን ድብልቆች ለማጥራት እና ለመለየት በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል። ሆኖም፣ ውስብስብ አወቃቀራቸው እና አምፎቴሪክ ባህሪያቸው ምክንያት፣ 14,15 የRP ቋሚ ደረጃዎች የፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን አጥጋቢ መለያየት ማቅረብ አይችሉም። ስለዚህ፣ የፖላር እና የፖላር ያልሆኑ ቁርጥራጮች ያላቸው የፔፕታይዶች እና ፕሮቲኖች ትንተና እነዚህን አናሊቶች ለመግባባት እና ለማቆየት በልዩ ሁኔታ የተነደፉ ቋሚ ደረጃዎችን ይፈልጋል። ባለብዙ ሞዳል መስተጋብርን የሚያቀርበው የተቀላቀለ ክሮማቶግራፊ፣ ፔፕታይዶችን፣ ፕሮቲኖችን እና ሌሎች ውስብስብ ድብልቆችን ለመለየት ከRP-LC አማራጭ ሊሆን ይችላል። በርካታ የተደባለቁ አይነት ቋሚ ደረጃዎች ተዘጋጅተው በእነዚህ ቋሚ ደረጃዎች የተሞሉ አምዶች ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን ለመለየት ጥቅም ላይ ውለዋል። የዋልታ እና የዋልታ ያልሆኑ ቡድኖች በመኖራቸው ምክንያት፣ የተደባለቀ ሁነታ የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች (WAX/RPLC፣ HILIC/RPLC፣ የዋልታ ኢንተርካሌሽን/RPLC) ለፔፕታይዶች እና ፕሮቲኖች መለያየት ተስማሚ ናቸው22,23,24,25,26,27,28.፣ ከዋልታ ጋር በተያያዙ የዋልታ ቡድኖች የተጠላለፉ የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች ለዋልታ እና ላልሆኑ አናሌቶች ጥሩ የመለያየት ችሎታዎችን እና ልዩ የመምረጥ ችሎታ ያሳያሉ ምክንያቱም መለያየት የሚወሰነው በአናሌቱ እና በቋሚ ደረጃ መካከል ባለው መስተጋብር ላይ ነው። በቅርቡ፣ ዣንግ እና ሌሎችም 30 ቤሄኒል የተቋረጡ የማይንቀሳቀሱ ፖሊአሚኖችን እና በተሳካ ሁኔታ የሃይድሮካርቦኖችን፣ ፀረ-ጭንቀትን፣ ፍሌቮኖይድስን፣ ኑክሊዮሳይዶችን፣ ኢስትሮጅኖችን እና ሌሎች አንዳንድ አናሌቶችን አግኝተዋል። የዋልታ ውስጥ የተከተተ የማይንቀሳቀሱ ቁሳቁሶች የዋልታ እና የዋልታ ያልሆኑ ቡድኖች አሏቸው፣ ስለዚህ ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን ወደ ሃይድሮፎቢክ እና ሃይድሮፊሊክ ክፍሎች ለመለየት ሊያገለግል ይችላል። የዋልታ መስመር አምዶች (ለምሳሌ፣ አሚድ መስመር ያላቸው የC18 አምዶች) በንግድ ስም Ascentis Express RP-Amide አምዶች ስር ይገኛሉ፣ ነገር ግን እነዚህ አምዶች ለአሚ 33 ትንተና ብቻ ጥቅም ላይ ውለዋል።
በአሁኑ ጥናት፣ የፖላር ኢሚዲንግ የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ (N-phenylmaleemide፣ embedding polystyrene) ለፔፕታይድ መለያየት እና ለትሪፕቲክ HSA ክሊቫጅ ተዘጋጅቶ ተገምግሟል። የሚከተለው ስትራቴጂ የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ ለማዘጋጀት ጥቅም ላይ ውሏል። ቀዳዳ ያላቸው የሲሊካ ቅንጣቶች በቀደሙት ህትመቶቻችን ላይ በተገለጹት ሂደቶች መሠረት ተዘጋጅተዋል፣ በዝግጅት መርሃ ግብሮች 31፣ 34፣ 35፣ 36፣ 37፣ 38፣ 39 ላይ አንዳንድ ለውጦች ተደርገዋል። የዩሪያ፣ የፖሊኢታይሊን ግላይኮል (PEG)፣ TMOS እና የውሃ-አሴቲክ አሲድ ጥምርታዎች ትላልቅ የቀዳዳ መጠኖች ያላቸው የሲሊካ ቅንጣቶችን ለማግኘት ተስተካክለዋል። በሁለተኛ ደረጃ፣ አዲስ የፌኒማሌሚድ-ሜቲልቪኒል ኢሶሲያኔት ሊጋንድ ተዋህዶ የተዋሃደ የሲሊካ ቅንጣቶች የፖላር የተዋሃደ የማይንቀሳቀስ ደረጃዎችን ለማዘጋጀት ጥቅም ላይ ውለዋል። የተገኘው የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ በተመቻቸ የማሸጊያ ዘዴ መሠረት በማይዝግ ብረት አምድ (ውስጣዊ ዲያሜትር 100 × 1.8 ሚሜ) ውስጥ ታሽጎ ነበር። የአምዱ ማሸጊያ በአምዱ ውስጥ አንድ ወጥ የሆነ ንብርብር እንዲኖር በሜካኒካል ንዝረት ይረዳል። የታሸገው አምድ አምስት ፔፕታይዶችን (Gly-Tyr፣ Gly-Leu-Tyr፣ Gly-Gly-Tyr-Arg፣ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg፣ Leucine-Enkephalin peptide) እና የሰው ሴረም አልቡሚን (HSA) ትራይፕቲክ ሃይድሮሊሴቶች ያካተቱ የፔፕታይዶች ድብልቅን ለመለየት ተገምግሟል። የፔፕታይድ ድብልቅ እና የHSA ትራይፕቲክ ዲጄስት በጥሩ ጥራት እና ቅልጥፍና ተለይተው ተስተውለዋል። የPMP አምድ የመለየት ብቃት ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ተነጻጽሯል። ፔፕታይዶች እና ፕሮቲኖች በPMP አምድ ላይ ጥሩ ጥራት እና ከፍተኛ የመለያየት ቅልጥፍና እንዳላቸው እና የPMP አምድ የመለየት ቅልጥፍና ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ከፍ ያለ መሆኑን ተስተውሏል።
PEG (ፖሊኢታይሊን ግላይኮል)፣ ዩሪያ፣ አሴቲክ አሲድ፣ ትሪሜቶክሲኦርቶሲሊኬት (TMOS)፣ ትሪሜቲልክሎሮሲላኔ (TMCS)፣ ትራይፕሲን፣ የሰው ሴረም አልቡሚን (HSA)፣ አሞኒየም ክሎራይድ፣ ዩሪያ፣ ሄክሳሜቲልሜታክሪሎይልዲስላዛኔ (ኤችኤምዲኤስ)፣ ሜታክሪሎይል ክሎራይድ (ኤምሲ)፣ ስታይሪን፣ 4-ሃይድሮክሲ-ቴምፖ፣ ቤንዞይል ፐርኦክሳይድ (ቢፒኦ)፣ አሴቶኒትሪል (ኤሲኤን) ለHPLC፣ ሜታኖል፣ 2-ፕሮፓኖል እና አሴቶን። ሲግማ-አልድሪች ኩባንያ (ሴንት ሉዊስ፣ ሚዙሪ፣ ዩኤስኤ)።
የዩሪያ (8 ግራም)፣ የፖሊኢታይሊን ግላይኮል (8 ግራም) እና 8 ሚሊ ሊትር 0.01 ኤን. አሴቲክ አሲድ ድብልቅ ለ10 ደቂቃዎች ተቀላቅሎ 24 ሚሊ ሊትር TMOS በበረዶ ማቀዝቀዣ ስር ተጨምሯል። የምላሽ ድብልቁ በ40°ሴ ለ6 ሰዓታት ከዚያም በ120°ሴ ለ8 ሰዓታት በማይዝግ ብረት አውቶክላቭ ውስጥ እንዲሞቅ ተደርጓል። ውሃው ተወግዶ ቅሪቶቹ በ70°ሴ ለ12 ሰዓታት እንዲደርቁ ተደርጓል። የደረቁ ለስላሳ ብሎኮች በ550°ሴ በምድጃ ውስጥ ለ12 ሰዓታት በተቀላጠፈ ሁኔታ ተፈጭተው በካልሲየም ተደርገዋል። የቅንጣት መጠኖችን፣ የቀዳዳውን መጠን እና የገጽታውን ስፋት እንደገና የማባዛት አቅምን ለመፈተሽ ሶስት ክፍሎች ተዘጋጅተው ተለይተው ተለይተዋል።
የፖሊስቲሪን ሰንሰለቶች የፖላር ቡድን እና የማይንቀሳቀስ ደረጃ። የዝግጅት ሂደቱ ከዚህ በታች ተብራርቷል።
ኤን-ፌኒልማሌሚድ (200 ሚ.ግ) እና ሜቲል ቪኒል ኢሶሲያኔት (100 ሚ.ግ) በአንሃይድሮስ ቶሉይን ውስጥ ተሟጠዋል፣ ከዚያም 0.1 ሚሊ ሊትር 2,2′-አዞይሶቡቲሮኒትሪል (AIBN) ወደ ምላሽ ሰጪው ብልቃጥ ተጨምሮ የፌኒልማሌሚድ እና ሜቲል ቪኒል ኢሶሲያኔት (PMCP) ኮፖሊመር ለማግኘት ተጨምሯል።) ድብልቁ በ60°ሴ ለ3 ሰዓታት ሞቆ፣ ተጣርቶ ለ3 ሰዓታት በ40°ሴ ምድጃ ውስጥ ደርቋል።
የደረቁ የሲሊካ ቅንጣቶች (2 ግራም) በደረቅ ቶሉኒን (100 ሚሊ ሊትር) ውስጥ ተበታትነው ለ10 ደቂቃ በ500 ሚሊ ሊትር ክብ የታችኛው ጠርሙስ ውስጥ ተቀላቅለው ሶኒኬሽን ተደርገዋል። PMCP (10 ሚ.ግ) በቶሉኒን ውስጥ ተሟጦ በመደመር ፈንጣጣ በኩል ወደ ምላሽ ፍላሹ ተጨምሯል። ድብልቁ በ100°ሴ ለ8 ሰዓታት ተፈትቶ፣ ተጣርቶ፣ በአሴቶን ታጥቦ ለ3 ሰዓታት በ60°ሴ ደርቋል። ከዚያም ከPMCP (100 ግራም) ጋር የተያያዙት የሲሊካ ቅንጣቶች በቶሉኒን (200 ሚሊ ሊትር) ውስጥ ተሟጠዋል፣ እና 4-ሃይድሮክሲ-TEMPO (2 ሚሊ ሊትር) እንደ ማነቃቂያ ተጨምሮበት 100 μl ዲቡቲልቲን ዲላውሬት ተጨምሯል። ድብልቁ በ50°ሴ ለ8 ሰዓታት ተቀላቅሎ በ50°ሴ ለ3 ሰዓታት ተደርቋል።
ስታይሪን (1 ሚሊ ሊትር)፣ ቤንዞይል ፐርኦክሳይድ BPO (0.5 ሚሊ ሊትር) እና ከ TEMPO-PMCP (1.5 ግራም) ጋር የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች በቶሉኒን ውስጥ ተበታትነው በናይትሮጅን ተጠርገዋል። የስታይሪን ፖሊሜራይዜሽን በ100°ሴ ለ12 ሰዓታት ተካሂዷል። የተገኘው ምርት በሜታኖል ታጥቦ በ60°ሴ በአንድ ሌሊት ደርቋል። የምላሹ አጠቃላይ ንድፍ በምስል አንድ ላይ ይታያል።
ናሙናዎቹ ከ10-3 ቶር ያነሰ የተረፈ ግፊት እስኪገኝ ድረስ ለ1 ሰዓት በ393 K ጋዞችን አስወግደዋል። አጠቃላይ የቀዳዳ መጠንን ለመወሰን በአንፃራዊ ግፊት P/P0 = 0.99 የተዋሃደ የN2 መጠን ጥቅም ላይ ውሏል። የንፁህ እና የሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች ሞርፎሎጂ በስካኒንግ ኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ (ሂታቺ ሃይ ቴክኖሎጂስ፣ ቶኪዮ፣ ጃፓን) ተመርምሯል። ደረቅ ናሙናዎች (ንፁህ ሲሊካ እና የሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች) በካርቦን ቴፕ በመጠቀም በአሉሚኒየም ዘንጎች ላይ ተቀምጠዋል። ወርቅ በናሙናው ላይ በQ150T ስፑተር ማድረጊያ መሳሪያ በመጠቀም ተቀምጧል፣ እና 5 nm ውፍረት ያለው የAu ንብርብር በናሙናው ላይ ተቀምጧል። ይህም የዝቅተኛ ቮልቴጅ ሂደትን ውጤታማነት ያሻሽላል እና ጥሩ ቀዝቃዛ መርጫ ይሰጣል። የኤለመንታል ትንተና የተከናወነው በThermo Electron (ዋልትሃም፣ ኤምኤ፣ ዩኤስኤ) ፍላሽ EA1112 ኤለመንታል ኮምፖዚሽን ተንታኝ ነው። የማልቨርን ቅንጣት መጠን ተንታኝ (ዎርሴስተርሻየር፣ ዩኬ) ማስተርስዘር 2000 የንጥረ ነገር መጠን ስርጭትን ለማግኘት ጥቅም ላይ ውሏል። ያልተሸፈኑ የሲሊካ ቅንጣቶች እና በሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች (እያንዳንዳቸው 5 ሚ.ግ.) በ5 ሚሊ ሊትር አይሶፕሮፓኖል ውስጥ ተበትነው ለ10 ደቂቃዎች በሶኒኬሽን ተጨምረው ለ5 ደቂቃዎች ተነቃቅተው በማስተርዘር ኦፕቲካል ቤንች ላይ ተቀምጠዋል። የቴርሞግራቪሜትሪክ ትንተና የሚከናወነው ከ30 እስከ 800 ዲግሪ ሴልሺየስ ባለው የሙቀት መጠን በደቂቃ 5 ዲግሪ ሴልሺየስ ነው።
በመስታወት ፋይበር የተሸፈኑ ጠባብ ቦረቦረ አይዝጌ ብረት አምዶች (ID 100 × 1.8 ሚሜ) ልክ እንደ ማጣቀሻ 31 ተመሳሳይ አሰራርን በመከተል በብሎክ ሙሌት ዘዴ ታሽገዋል። አይዝጌ ብረት አምድ (በመስታወት የተሸፈነ፣ ID 100 × 1.8 ሚሜ) እና 1 µm ፍሪት የያዘ መውጫ ከብሎክ ማሸጊያ ማሽን (Alltech Deerfield, IL, USA) ጋር ተገናኝቷል። 150 ሚ.ግ የማይንቀሳቀስ ደረጃን በ1.2 ሚሊ ሊትር ሜታኖል ውስጥ በማንጠልጠል እና ወደ ማጠራቀሚያ አምድ በማስገባት የቋሚ ደረጃ እገዳ ያዘጋጁ። ሜታኖል እንደ ብሎክ ሟሟት እና የመቆጣጠሪያ ሟሟት ጥቅም ላይ ውሏል። አምዱን ለ10 ደቂቃ 100 MP፣ ለ15 ደቂቃ 80 MP እና ለ30 ደቂቃ 60 MP የግፊት ቅደም ተከተል በመተግበር ያሽጉ። የማሸጊያ ሂደቱ ወጥ የሆነ የአምድ ማሸጊያ ለማረጋገጥ ሁለት የጋዝ ክሮማቶግራፊ አምድ ንዝረቶችን (Alltech, Deerfield, IL, USA) ለሜካኒካል ንዝረት ተጠቅሟል። የብሎክ ማሸጊያውን ይዝጉ እና በገመዱ ላይ ጉዳት እንዳይደርስ ግፊትን ቀስ ብለው ይልቀቁ። አምድ ከስሉሪ ኖዝል ተለያይቶ ሌላ መገጣጠሚያ ከመግቢያው ጋር ተያይዞ ከLC ሲስተም ጋር ተገናኝቶ አሠራሩን ለመፈተሽ ተችሏል።
ብጁ MLC የተገነባው በLC ፓምፕ (10AD Shimadzu፣ ጃፓን)፣ 50 nL መርፌ ዑደት (Valco (USA) C14 W.05)፣ የሜምብሬን ዲጋሰር (Shimadzu DGU-14A) እና UV-VIS ካፊላሪ መስኮት ነው። የመመርመሪያ መሳሪያ (UV-2075) እና በኢናሜል የተለበጠ ማይክሮኮም በመጠቀም ነው። ተጨማሪ የአምድ መስፋፋትን ውጤት ለመቀነስ በጣም ጠባብ እና አጭር የማገናኛ ቱቦዎችን ይጠቀሙ። አምዱን ከሞሉ በኋላ፣ በ1/16″ የሚቀንስ መጋጠሚያ መውጫ ላይ ካፊላሪ (50 µm id 365) ይጫኑ እና የሚቀንስ መጋጠሚያ ካፊላሪ (50 µm) ይጫኑ። የውሂብ አሰባሰብ እና ክሮማቶግራም ሂደት የሚከናወኑት ባለብዙ ክሮሞቶግራም ሶፍትዌርን በመጠቀም ነው። በ254 nm፣ የርዕሰ ጉዳይ ተንታኞች የ UV መምጠጥ በ0 ቁጥጥር ስር ውለዋል። የክሮማቶግራፊክ መረጃው OriginPro8 (Northampton, MA) በመጠቀም ተተነተነ።
የሰው ሴረም አልቡሚን፣ ሊዮፊላይዝድ ዱቄት፣ ≥ 96% (አጋሮዝ ጄል ኤሌክትሮፎሬሲስ) 3 ሚ.ግ ከትራይፕሲን (1.5 ሚ.ግ)፣ 4.0 ሚ.ግ ዩሪያ (1 ሚሊ ሊትር) እና 0.2 ሚ.ግ አሞኒየም ባይካርቦኔት (1 ሚሊ ሊትር) ጋር ተቀላቅሎ። መፍትሄው ለ10 ደቂቃዎች ተቀላቅሎ በ37°ሴ ውስጥ በውሃ መታጠቢያ ውስጥ ለ6 ሰዓታት ተይዟል፣ ከዚያም በ1 ሚሊ ሊትር 0.1% TFA ታጥቧል። መፍትሄውን አጣርተው ከ4°ሴ በታች ባለው የሙቀት መጠን ያስቀምጡ።
የፔፕታይዶች እና የትራይፕቲክ ዳይጀስት HSA ድብልቅ በPMP አምድ ላይ መለየት ለየብቻ ተገምግሟል። የፔፕታይዶች እና የHSA ድብልቅ በPMP አምድ የተለዩትን የትራይፕቲክ ሃይድሮሊሲስ ይፈትሹ እና ውጤቶቹን ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ያወዳድሩ። የቲዎሬቲካል ሳህኖች ብዛት የሚሰላው በሚከተለው እኩልታ ነው፡
የንፁህ ሲሊካ ቅንጣቶች እና የሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች የSEM ምስሎች በስእል 2 ላይ ይታያሉ። የንፁህ ሲሊካ ቅንጣቶች (A፣ B) የSEM ምስሎች ከቀደምት ጥናቶቻችን ጋር ሲነፃፀሩ ቅንጣቶቹ የተራዘሙ ወይም መደበኛ ያልሆነ ሲሜትሪ ያላቸው ክብ ቅርጽ ያሳያሉ። በሊጋንድ (C፣ D) የታሰሩት የሲሊካ ቅንጣቶች ገጽታ ከንፁህ ሲሊካ ቅንጣቶች ይልቅ ለስላሳ ነው፣ ይህም የሲሊካ ቅንጣቶችን ወለል የሚሸፍኑ የፖሊስቲሪን ሰንሰለቶች ሊሆኑ ይችላሉ።
የንፁህ የሲሊካ ቅንጣቶች (A፣ B) እና የሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች (C፣ D) የኤሌክትሮን ማይክሮግራፎችን መቃኘት።
የንፁህ የሲሊካ ቅንጣቶች እና የሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች የቅንጣት መጠን ስርጭት በምስል 2. 3(A) ላይ ይታያል። የቮልሜትሪክ ቅንጣት መጠን ስርጭት ኩርባዎች የሲሊካ ቅንጣት መጠን ከኬሚካል ማሻሻያ በኋላ እንደጨመረ አሳይተዋል (ምስል 3A)። ከአሁኑ ጥናት እና ከቀደመው ጥናት የተገኘው የሲሊካ ቅንጣት መጠን ስርጭት መረጃ በሰንጠረዥ 1(A) ውስጥ ተነጻጽሯል። የPMP የእሳተ ገሞራ ቅንጣት መጠን d(0.5) 3.36 µm ነበር፣ በቀደመው ጥናታችን (ፖሊስቲሪን የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች)34 ላይ ከነበረው የአድ(0.5) እሴት ጋር ሲነጻጸር። በምላሽ ድብልቅ ውስጥ ባለው የPEG፣ የዩሪያ፣ የTMOS እና የአሴቲክ አሲድ ጥምርታ ለውጥ ምክንያት፣ የዚህ ባች የእሴት መጠን ስርጭት ከቀዳሚው ጥናታችን ጋር ሲነጻጸር ጠባብ ነበር። የPMP ደረጃ የእሴት መጠን ቀደም ብለን ካጠናነው የፖሊስቲሪን የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣት ምዕራፍ ትንሽ ከፍ ያለ ነው። ይህ ማለት ስታይሪን ያላቸው የሲሊካ ቅንጣቶች የወለል ተግባራዊነት በሲሊካ ወለል ላይ የፖሊስቲሪን ንብርብር (0.97 µm) ብቻ ይቀመጣል፣ በPMP ደረጃ ደግሞ የንብርብሩ ውፍረት 1.38 µm ነበር።
የንፁህ ሲሊካ ቅንጣቶች እና የሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች የቅንጣት መጠን ስርጭት (A) እና የቀዳዳ መጠን ስርጭት (B)።
በዚህ ጥናት ውስጥ ጥቅም ላይ የዋሉት የሲሊካ ቅንጣቶች የቀዳዳ መጠን፣ የቀዳዳ መጠን እና የገጽታ ስፋት በሰንጠረዥ 1 (ለ) ውስጥ ይታያሉ። የንፁህ ሲሊካ ቅንጣቶች እና የሊጋንድ-የተሳሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች የPSD መገለጫዎች በምስል 3(ለ) ውስጥ ይታያሉ። ውጤቶቹ ከቀደመው ጥናታችን ጋር ተመሳሳይ ነበሩ። የንፁህ እና የሊጋንድ-የተሳሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች የቀዳዳ መጠኖች በቅደም ተከተል 310 Å እና 241 Å ነበሩ፣ ይህም በኬሚካል ማሻሻያ በኋላ የቀዳዳው መጠን በሰንጠረዥ 1 (ለ) ላይ እንደሚታየው በ69 Å ቀንሷል፣ እና የፈረቃ ኩርባ በምስል ላይ ይታያል። በአሁኑ ጥናት ውስጥ የሲሊካ ቅንጣቶች የተወሰነ የገጽታ ስፋት 116 μ2/g ሲሆን ይህም ከቀደመው ጥናታችን (124 μ2/g) ጋር ተመሳሳይ ነው። በሰንጠረዥ 1(ለ) ላይ እንደሚታየው፣ ከኬሚካል ማሻሻያ በኋላ የሲሊካ ቅንጣቶች የገጽታ ስፋት (m2/g) ከ116 μ2/g ወደ 105 μ2/g ቀንሷል።
የቋሚ ደረጃው የኤለመንታል ትንተና ውጤቶች በሰንጠረዥ ውስጥ ቀርበዋል። 2. የአሁኑ የማይንቀሳቀስ ደረጃ የካርቦን ይዘት 6.35% ሲሆን ይህም ከቀደመው ጥናታችን ያነሰ ነው (ከፖሊስቲሪን ጋር የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች፣ በቅደም ተከተል 7.93%35 እና 10.21%) 42. እንደ ፌኒልማሌሚድ ሜቲል ቪኒል ኢሶሲያኔት (PCMP) እና 4-ሃይድሮክሲ-TEMPO ያሉ አንዳንድ የዋልታ ሊጋንድዎች ከስታይሪን በተጨማሪ ጥቅም ላይ ውለዋል። በአሁኑ የማይንቀሳቀስ ደረጃ ውስጥ ያለው የናይትሮጅን ክብደት መቶኛ በቀደሙት ጥናቶች ከ0.1735 እና 0.85% ጋር ሲነጻጸር 2.21% ነው። ይህ ማለት የአሁኑ የማይንቀሳቀስ ደረጃ በፌኒልማሌሚድ ምክንያት ከፍተኛ የናይትሮጅን ክብደት መቶኛ አለው ማለት ነው። በተመሳሳይ፣ ምርቶች (4) እና (5) በቅደም ተከተል 2.7% እና 2.9% የካርቦን ይዘት አላቸው፣ የመጨረሻው ምርት (6) ደግሞ 6.35% የካርቦን ይዘት አለው፣ በሰንጠረዥ 2 ላይ እንደሚታየው። የክብደት መቀነሻን ለመፈተሽ በPMP ቋሚ ደረጃ ላይ የቴርሞግራቪሜትሪክ ትንተና (TGA) ጥቅም ላይ ውሏል፣ እና የTGA ኩርባ በስእል 4 ላይ ይታያል። የTGA ኩርባ 8.6% የክብደት መቀነስ ያሳያል፣ ይህም ከካርቦን ይዘት (6.35%) ጋር በጥሩ ሁኔታ የሚስማማ ነው፣ ምክንያቱም ሊጋንዶች C ን ብቻ ሳይሆን N፣ O እና Hንም ይይዛሉ።
ሊጋንድ ፌኒልማሌሚድ-ሜቲልቪኒል ኢሶሲያኔት የተመረጠው በፖላር ፌኒልማሌሚድ እና በቪኒሊሶሲያኔት ቡድኖች ምክንያት የሲሊካ ቅንጣቶችን ገጽታ ለማሻሻል ነው። የቪኒል ኢሶሲያኔት ቡድኖች በህያው ራዲካል ፖሊመሪዜሽን ከስታይሪን ጋር የበለጠ ምላሽ ሊሰጡ ይችላሉ። ሁለተኛው ምክንያት ከ አናላይት ጋር መካከለኛ መስተጋብር ያለው እና በአናላይት እና በቋሚ ደረጃ መካከል ጠንካራ ኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር የሌለው ቡድን ማስገባት ነው፣ ምክንያቱም የፌኒልማሌሚድ ክፍል በመደበኛ ፒኤች ምንም ምናባዊ ክፍያ የለውም። የቋሚ ደረጃው ፖላሪቲ በተመቻቸ የስታይሪን መጠን እና በነጻ ራዲካል ፖሊመሪዜሽን የምላሽ ጊዜ ሊቆጣጠር ይችላል። የምላሽ የመጨረሻው ደረጃ (ፍሪ ራዲካል ፖሊመሪዜሽን) የቋሚ ደረጃውን ፖላሪቲ ስለሚቀይር ወሳኝ ነው። በእነዚህ ቋሚ ደረጃዎች ውስጥ የካርቦን ይዘትን ለመፈተሽ የኤለመንታል ትንተና ተካሂዷል። የስታይሪን መጠን እና የምላሽ ጊዜ መጨመር የቋሚ ደረጃውን የካርቦን ይዘት እንደሚጨምር እና በተቃራኒው እንደሚጨምር ታይቷል። በተለያዩ የስታይሪን ክምችት የተዘጋጁ SPዎች የተለያዩ የካርቦን ጭነቶች አሏቸው። በተመሳሳይ፣ እነዚህ የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች በአይዝጌ ብረት አምዶች ላይ ተቀምጠዋል እና የክሮማቶግራፊ ባህሪያቸው (ምርጫ፣ ጥራት፣ የN እሴት፣ ወዘተ) ተፈትሸዋል። በእነዚህ ሙከራዎች ላይ በመመስረት፣ የ PMP የማይንቀሳቀሱ ምዕራፍ ዝግጅት የተመቻቸ ቅንብር ተመርጧል፣ ይህም ቁጥጥር የሚደረግበት ፖላሪቲ እና የትንታኔውን ጥሩ ማቆየት ለማቅረብ ነው።
የPMP አምድ በሞባይል ደረጃ አቅም በመጠቀም አምስት የፔፕታይዶች (Gly-Tyr፣ Gly-Leu-Tyr፣ Gly-Gly-Tyr-Arg፣ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg፣ Leucine-Enkephalin) ድብልቆችን ለመተንተን ተገምግሟል። 60/40 (v/v) ACN/water (0.1% TFA) በ80 µl/ደቂቃ የፍሰት ፍጥነት። በተመቻቸ የልቀት ሁኔታዎች (200,000 ሳህኖች/ሜ)፣ በአንድ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ) የቲዎሬቲካል ሳህኖች ብዛት (N) 20,000 ± 100 ነው። ለሶስቱ PMP አምዶች የN እሴቶች በሰንጠረዥ 3 ውስጥ ይታያሉ እና ክሮማቶግራሞቹ በምስል 5A ውስጥ ይታያሉ። በPMP አምድ ላይ በከፍተኛ የፍሰት ፍጥነት (700 µl/ደቂቃ) ፈጣን ትንተና፣ አምስት ፔፕታይዶች በአንድ ደቂቃ ውስጥ ይወጣሉ፣ በአንድ አምድ 13,500 ± 330 የሆነ እጅግ በጣም ጥሩ የN እሴት (100 x 1.8 ሚሜ ዲያሜትር)፣ ከ135,000 ሳህኖች/ሜ ጋር እኩል ነው (ምስል 5ለ)። ተመሳሳይ መጠን ያላቸው ሶስት አምዶች (ውስጣዊ ዲያሜትር 100 x 1.8 ሚሜ) የመራባት ችሎታን ለመፈተሽ በሦስት የተለያዩ የPMP ቋሚ ደረጃ ስብስቦች ተሞልተዋል። ለእያንዳንዱ አምድ ተንታኞች በእያንዳንዱ አምድ ላይ ተመሳሳይ የሙከራ ድብልቅን በተመቻቸ የማውጣት ሁኔታዎች፣ የቲዎሬቲካል ሳህኖች ብዛት N እና የማቆያ ጊዜን በመጠቀም ተመዝግበዋል። ለPMP አምዶች የመራባት መረጃ በሰንጠረዥ 4 ውስጥ ይታያል። የPMP አምድ የመራባት አቅም በሰንጠረዥ 3 ላይ እንደሚታየው በጣም ዝቅተኛ ከሆነ %RSD እሴቶች ጋር በጥሩ ሁኔታ ተዛምዷል።
የፔፕታይድ ድብልቆችን በPMP አምድ (B) እና በአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ (A)፣ በሞባይል ደረጃ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)፣ የPMP አምድ ልኬቶች (100 x 1.8 ሚሜ መታወቂያ) ላይ መለየት፣ ትንተና የውህዶች የመልቀቂያ ቅደም ተከተል፡ 1 (Gly-Tyr)፣ 2 (Gly-Leu-Tyr)፣ 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)፣ 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) እና 5 (Leucic acid enkephalin)።
የሰው ሴረም አልቡሚን ትራይፕቲክ ሃይድሮላይዛት በHPLC ለመለየት የPMP አምድ (ውስጣዊ ዲያሜትር 100 x 1.8 ሚሜ) ተገምግሟል። በምስል 6 ላይ ያለው ክሮማቶግራም እንደሚያሳየው ናሙናዎቹ በጣም ጥሩ ጥራት ባለው መልኩ የተለያዩ ናቸው። የHSA መፍትሄዎች የተተነተኑት 100 μl/ደቂቃ የፍሰት መጠን፣ 70/30 አሴቶኒትሪል/ውሃ እና 0.1% TFA የሆነ የሞባይል ደረጃን በመጠቀም ነው። የHSA መቆራረጥ በክሮማቶግራም (ምስል 6) ላይ እንደሚታየው በ17 ጫፎች ተከፍሏል፣ ይህም ከ17 ​​ፔፕታይዶች ጋር ይዛመዳል። የግለሰብ ጫፎች ከHSA ሃይድሮላይዛት የመለየት ቅልጥፍናዎች ተሰልተው እሴቶቹ በሠንጠረዥ 5 ላይ ይታያሉ።
የኤችኤስኤ ትራይፕቲክ ሃይድሮሊሳቶች በፒኤምፒ አምድ (ውስጣዊ ዲያሜትር 100 x 1.8 ሚሜ)፣ የፍሰት መጠን (100 μl/ደቂቃ)፣ የሞባይል ደረጃ 60/40 አሴቶኒትሪል/ውሃ እና 0.1% TFA ላይ ተለያይተዋል።
L የአምዱ ርዝመት ሲሆን፣ η የሞባይል ደረጃ viscosity ሲሆን፣ ΔP የአምዱ የኋላ ግፊት ሲሆን፣ u ደግሞ የሞባይል ደረጃ መስመራዊ ፍጥነት ነው። የPMP አምድ መተላለፊያ 2.5 × 10–14 m2 ነበር፣ የፍሰት መጠኑ 25 µl/ደቂቃ ነበር፣ 60/40 v/v ጥቅም ላይ ውሏል። ACN/ውሃ። የPMP አምድ መተላለፊያ (ID 100 × 1.8 ሚሜ) ከቀዳሚው የማጣቀሻ 34 ጥናታችን ጋር ተመሳሳይ ነበር። በላዩ ላይ በተሸፈኑ ቅንጣቶች የተሞላ አምድ መተላለፊያ 1.7 × 10 .6 µm፣ ለ5 µm ቅንጣቶች 2.5 × 10-14 m2 ነው። ስለዚህ፣ የPMP ደረጃ መተላለፊያ 5 μm መጠን ካላቸው የኮር-ሼል ቅንጣቶች መተላለፊያ ጋር ተመሳሳይ ነው።
Wx በክሎሮፎርም የተሞላው የአምድ ክብደት ሲሆን Wy በሜታኖል የተሞላው የአምድ ክብደት ሲሆን ρ ደግሞ የመሟሟቱ ጥግግት ነው። የሜታኖል ጥግግት (ρ = 0.7866) እና ክሎሮፎርም (ρ = 1.484)። የሲሊካ-C18 ቅንጣት አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ)34 እና ቀደም ሲል የተማርነው C18-urea31 አምድ አጠቃላይ ቀዳዳ በቅደም ተከተል 0.63 እና 0.55 ነበር። ይህ ማለት የዩሪያ ሊጋንድ መኖር የቋሚ ደረጃውን ዘልቆ መግባትን ይቀንሳል ማለት ነው። በሌላ በኩል የPMP አምድ አጠቃላይ ቀዳዳ (ውስጣዊ ዲያሜትር 100 × 1.8 ሚሜ) 0.60 ነው። የPMP አምዶች በC18 የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች ከተሞሉ አምዶች ያነሰ ሊገቡ የሚችሉ ናቸው ምክንያቱም በC18 አይነት የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች C18 ሊጋንድ በመስመራዊ ሰንሰለቶች ውስጥ ከሲሊካ ቅንጣቶች ጋር ተያይዘዋል፣ በፖሊስቲሪን አይነት የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች ደግሞ በአንፃራዊነት ወፍራም ፖሊመር በቅንጣቶቹ ዙሪያ ይፈጠራል። ንብርብር ሀ. በተለመደው ሙከራ፣ የአምድ ቀዳዳ እንደሚከተለው ይሰላል፡
በምስል 7A ላይ፣ B በተመሳሳይ የውጪ ሁኔታዎች ስር ለPMP አምድ (id 100 x 1.8 ሚሜ) እና ለአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ (id 100 x 1.8 ሚሜ) የቫን ዲምተር ንድፎችን ያሳያል፣ በሁለቱም አምዶች ላይ ከ60/40 ACN/H2O እና 0 .1% TFA ከ20 µl/ደቂቃ እስከ 800 µl/ደቂቃ። ዝቅተኛው የHETP እሴቶች ለPMP አምድ እና ለአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ በቅደም ተከተል 2.6 µm እና 3.9 µm ነበሩ። የHETP እሴቶች እንደሚያሳዩት የPMP አምድ (100 x 1.8 ሚሜ መታወቂያ) የመለያየት ቅልጥፍና በንግድ ላይ ከሚገኘው የአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ (100 x 1.8 ሚሜ መታወቂያ) በጣም ከፍ ያለ ነው። በምስል 7(A) ላይ ያለው የቫን ዴምተር ግራፍ እንደሚያሳየው የN እሴት መቀነስ ከቀደመው ጥናታችን ጋር ሲነጻጸር እየጨመረ በመጣው ፍሰት በእጅጉ ከፍ ያለ አይደለም። የPMP አምድ (id 100 × 1.8 ሚሜ) ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amid አምድ ጋር ሲነጻጸር ከፍ ያለ የመለያየት ውጤታማነት የተመሰረተው በተሻሻለው የቅንጣት ቅርፅ እና መጠን እና በአሁኑ ስራ34 ውስጥ ጥቅም ላይ በሚውለው ውስብስብ የአምድ ማሸጊያ ሂደት ላይ ነው።
(ሀ) በ60/40 ACN/H2O በ0.1% TFA በ60/40 ACN/H2O በ100 x 1.8 ሚሜ በPMP አምድ ላይ የተገኘ የቫን ዴምተር ሴራ (HETP ከሞባይል ፌዝ መስመራዊ ፍጥነት ጋር ሲነጻጸር)። (ለ) በ60/40 ACN/H2O በ0.1% TFA በ60/40 ACN/H2O ላይ የተገኘ የቫን ዴምተር ሴራ (HETP ከሞባይል ፌዝ መስመራዊ ፍጥነት ጋር ሲነጻጸር)።
ከፍተኛ አፈጻጸም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ ሰው ሰራሽ ፔፕታይዶች እና የሰው ሴረም አልቡሚን (HSA) ትራይፕቲክ ሃይድሮላይዛት ድብልቅን ለመለየት የዋልታ ቋሚ ምዕራፍ ተዘጋጅቶ ተገምግሟል። ለፔፕታይድ ድብልቆች የPMP አምዶች ክሮማቶግራፊ አፈፃፀም በመለያየት ቅልጥፍና እና ጥራት ረገድ በጣም ጥሩ ነው። የPMP አምዶች የተሻሻለው የመለያየት ቅልጥፍና እንደ ሲሊካ ቅንጣት መጠን እና ቀዳዳ መጠን፣ የቋሚ ደረጃዎች ቁጥጥር የሚደረግበት ውህደት እና ውስብስብ የአምድ ማሸጊያ ቁሳቁሶች ባሉ በርካታ ምክንያቶች ምክንያት ነው። ከከፍተኛ የመለያየት ቅልጥፍና በተጨማሪ፣ የዚህ የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ ሌላ ጥቅም በከፍተኛ ፍሰት መጠን ዝቅተኛ የአምድ የኋላ ግፊት ነው። የPMP አምዶች በከፍተኛ ሁኔታ ሊባዙ የሚችሉ ሲሆኑ የፔፕታይዶችን ድብልቅ እና የተለያዩ ፕሮቲኖችን ትራይፕቲክ መፈጨት ለመተንተን ሊያገለግሉ ይችላሉ። ይህንን አምድ ከተፈጥሮ ምርቶች ባዮአክቲቭ ውህዶችን፣ የመድኃኒት ተክሎችን እና እንጉዳዮችን በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ለመለየት ለመጠቀም አስበናል። ወደፊት፣ የPMP አምዶች ለፕሮቲኖች እና ለሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት መለያየትም ይገመገማሉ።
ፊልድ፣ ጄኬ፣ ዩርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች. እና ፒተርሰን፣ ፒ. በተገላቢጦሽ የደረጃ ክሮማቶግራፊ ፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ላይ የሚደረግ ምርመራ ክፍል 1፡ ለአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ማዘጋጀት። ፊልድ፣ ጄኬ፣ ዩርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች. እና ፒተርሰን፣ ፒ. በተገላቢጦሽ የደረጃ ክሮማቶግራፊ ፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ላይ የተደረገ ምርመራ ክፍል 1፡ ለአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ማዘጋጀት።ፊልድ፣ ጄኬ፣ ኦወርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች.፣ እና ፒተርሰን፣ ፒ. የፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶችን በተገላቢጦሽ ክሮማቶግራፊ መመርመር፣ ክፍል 1፡ የአምድ ባህሪን ለማጎልበት ፕሮቶኮል ማዘጋጀት። ፊልድ፣ ጄኬ፣ ዩርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች. እና ፒተርሰን፣ ፒ. በተገላቢጦሽ የደረጃ ክሮማቶግራፊ ፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ላይ የተደረገ ምርመራ ክፍል 1፡ ለአምድ ባህሪያት የፕሮቶኮል ልማት። ፊልድ፣ ጄኬ፣ ዩርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች. እና ፒተርሰን፣ ፒ. በተገላቢጦሽ የደረጃ ክሮማቶግራፊ ፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ላይ የተደረገ ምርመራ ክፍል 1፡ ለአምድ ባህሪያት የፕሮቶኮል ልማት።ፊልድ፣ ጄኬ፣ ኦወርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች.፣ እና ፒተርሰን፣ ፒ. የፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶችን በተገላቢጦሽ ክሮማቶግራፊ መመርመር፣ ክፍል 1፡ የአምድ ባህሪን ለማጎልበት ፕሮቶኮል ማዘጋጀት።ጄ.色谱法። 1603፣113-129። https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)።
ጎሜዝ፣ ቢ. እና ሌሎችም። ለተላላፊ በሽታዎች ሕክምና የተሻሻሉ ንቁ ፔፕታይዶችን የመፍጠር ዘዴዎች። ባዮቴክኖሎጂ። ስኬቶች 36(2)፣ 415–429። https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)።
ቪሊጌ፣ ፒ.፣ ሊሶቭስኪ፣ ቪ.፣ ማርቲኔዝ፣ ጄ. እና ክሬስትቻቲስኪ፣ ኤም. ሲንተቲክ ቴራፒዩቲክ ፔፕታይዶች፡ ሳይንስ እና ገበያ። ቪሊጌ፣ ፒ.፣ ሊሶቭስኪ፣ ቪ.፣ ማርቲኔዝ፣ ጄ. እና ክሬስትቻቲስኪ፣ ኤም. ሲንተቲክ ቴራፒዩቲክ ፔፕታይዶች፡ ሳይንስ እና ገበያ።ቪሊጅ ፒ፣ ሊሶቭስኪ ቪ፣ ማርቲኔዝ ጄ እና ክሬስቻቲስኪ ኤም. ሲንተቲክ ቴራፒዩቲክ ፔፕታይዶች፡ ሳይንስ እና ገበያ።ቪሊጅ ፒ፣ ሊሶቭስኪ ቪ፣ ማርቲኔዝ ጄ እና ክረስቻትስኪ ኤም። ሰው ሰራሽ የሕክምና ፔፕታይዶች፡ ሳይንስ እና ገበያ። የመድኃኒት ግኝት። ዛሬ 15 (1–2)፣ 40–56። https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)።
ዢ፣ ኤፍ.፣ ስሚዝ፣ አርዲ እና ሼን፣ ዋይ። የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ። ዢ፣ ኤፍ.፣ ስሚዝ፣ አርዲ እና ሼን፣ ዋይ። የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ።ኤፍ.፣ ስሚዝ አርዲ እና ሼን ዩን ይመልከቱ። የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ። Xie፣ F.፣ Smith፣ RD & Shen፣ Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie፣ F.፣ Smith፣ RD & Shen፣ Y. የላቀ የፕሮቲን ቅንብር።ኤፍ.፣ ስሚዝ አርዲ እና ሼን ዩን ይመልከቱ። የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ።ጄ. ክሮማቶግራፊ። ኤ 1261፣ 78–90 (2012)።
ሊዩ፣ ደብሊው. እና ሌሎችም። የላቀ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ-ጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ሰፊ-ተኮር ሜታቦሎሚክስ እና ፕሮቲዮሚክስን ማዋሃድ ይችላል። ፊንጢጣ። ቺም። አክታ 1069፣ 89–97 (2019)።
Chesnut, SM & Salisbury, JJ የUHPLC በፋርማሲዩቲካል ልማት ውስጥ ያለው ሚና። Chesnut, SM & Salisbury, JJ የUHPLC በፋርማሲዩቲካል ልማት ውስጥ ያለው ሚና።ቼዝነት፣ ኤስኤም እና ሳሊስበሪ፣ ጄጄ የUHPLC በመድኃኒት ልማት ውስጥ ያለው ሚና።ቼዝነት፣ ኤስኤም እና ሳሊስበሪ፣ ጄጄ የUHPLC በመድኃኒት ልማት ውስጥ ያለው ሚና። ጄ. ሴፕቴምበር ሳይንስ። 30(8)፣ 1183–1190 (2007)።
Wu, N. & Clausen, AM ለፈጣን መለያየት እጅግ በጣም ከፍተኛ ግፊት ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች። Wu, N. & Clausen, AM ለፈጣን መለያየት እጅግ በጣም ከፍተኛ ግፊት ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች።Wu, N. እና Clausen, AM ለፈጣን መለያየት የከፍተኛ ግፊት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች። Wu፣ N. & Clausen፣ AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM ለፈጣን መለያየት እጅግ በጣም ከፍተኛ ግፊት ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች።Wu, N. እና Clausen, AM ለፈጣን መለያየት የከፍተኛ ግፊት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች።ጄ. ሴፕቴምበር. ሳይንስ. 30(8)፣ 1167–1182። https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)።
ሬን፣ ኤስኤ እና ቼሊቼፍ፣ ፒ. በመድኃኒት ልማት ውስጥ እጅግ በጣም ጥሩ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አጠቃቀም። ሬን፣ ኤስኤ እና ቼሊቼፍ፣ ፒ. በመድኃኒት ልማት ውስጥ እጅግ በጣም ጥሩ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አጠቃቀም።ሬን፣ ኤስኤ እና ቼሊሼፍ፣ ፒ. በመድኃኒት ልማት ውስጥ እጅግ በጣም ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አጠቃቀም። Wren፣ SA & Tchelitcheff፣ P.超高效液相色谱在药物开发中的应用。 ሬን፣ ኤስኤ እና ቼሊቼፍ፣ ፒ.ሬን፣ ኤስኤ እና ቼሊሼፍ፣ ፒ. በመድኃኒት ልማት ውስጥ እጅግ በጣም ጥሩ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አተገባበር።ጄ. ክሮማቶግራፊ። 1119(1-2)፣ 140-146። https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)።
ጉ፣ ኤች. እና ሌሎችም። ኢንቴሮቫይረስን ውጤታማ በሆነ መንገድ ለማጽዳት ከፍተኛ ውስጣዊ ደረጃ ያለው ከዘይት-ውስጥ-ውስጥ ኢሙልሽን የተገኘ ሞኖሊቲክ ማክሮፖረስ ሃይድሮጄል። ኬሚካል. ፕሮጀክት። ጆርናል 401፣ 126051 (2020)።
ሺ፣ ዋይ.፣ ዢያንግ፣ አር.፣ ሆርቫዝ፣ ሲ. እና ዊልኪንስ፣ ጄኤ በፕሮቲዮሚክስ ውስጥ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና። ሺ፣ ዋይ.፣ ዢያንግ፣ አር.፣ ሆርቫዝ፣ ሲ. እና ዊልኪንስ፣ ጄኤ በፕሮቲዮሚክስ ውስጥ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና።ሺ፣ ዋይ.፣ ዢያንግ፣ አር.፣ ሆርቫዝ፣ ሲ. እና ዊልኪንስ፣ ጄኤ በፕሮቲኖሚክስ ውስጥ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና። ሺ፣ Y.፣ Xiang፣ R.፣ Horvath፣ C. & Wilkins፣ JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 ሺ፣ Y.፣ Xiang፣ R.፣ Horvath፣ C. & Wilkins፣ JAሺ፣ ዋይ.፣ ዢያንግ፣ አር.፣ ሆርቫዝ፣ ሲ. እና ዊልኪንስ፣ ጄኤ በፕሮቲኖሚክስ ውስጥ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና።ጄ. ክሮማቶግራፊ። ኤ 1053 (1-2)፣ 27-36 (2004)።
ፌኬቴ፣ ኤስ.፣ ቩቴይ፣ ጄ.-ኤል. እና ጉላርሜ፣ ዲ. የሕክምና ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን በተገላቢጦሽ ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊያዊ መለያየት ላይ አዳዲስ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች። እና ጉላርሜ፣ ዲ. የሕክምና ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን በተገላቢጦሽ ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊያዊ መለያየት ላይ አዳዲስ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች። & ጊላርሜ፣ ዲ. обращенной фазой: теория и приложения. እና ጉላርሜ፣ ዲ. የሕክምና ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን በተገላቢጦሽ ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በመለየት ረገድ አዳዲስ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች። & ጊላርሜ፣ ዲ. እና ጊላርሜ፣ ዲ.እና ጊላርሜ፣ ዲ. የሕክምና ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን በተገላቢጦሽ ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በመለየት ረገድ አዳዲስ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች።ጄ. ፋርም። ባዮሜዲካል ሳይንስ። ፊንጢጣ። 69፣ 9–27 (2012)።
ጂላር፣ ኤም.፣ ኦሊቮቫ፣ ፒ.፣ ዳሊ፣ ኤኢ እና ጌብለር፣ ጄሲ የፔፕታይዶችን ባለ ሁለት አቅጣጫዊ መለያየት በአንደኛው እና በሁለተኛው የመለያየት ልኬቶች ውስጥ የተለያየ ፒኤች ያለው የRP-RP-HPLC ስርዓት በመጠቀም። ጂላር፣ ኤም.፣ ኦሊቮቫ፣ ፒ.፣ ዳሊ፣ ኤኢ እና ጌብለር፣ ጄሲ የፔፕታይዶችን ባለ ሁለት አቅጣጫዊ መለያየት በአንደኛው እና በሁለተኛው የመለያየት ልኬቶች ውስጥ የተለያየ ፒኤች ያለው የRP-RP-HPLC ስርዓት በመጠቀም።ጂላር ኤም.፣ ኦሊቮቫ ፒ.፣ ዳሊ ኤኢ እና ገብለር ጄኬ በመጀመሪያው እና በሁለተኛው የመለያየት ልኬቶች ውስጥ የተለያየ ፒኤች ያለው የ RP-RP-HPLC ስርዓትን በመጠቀም የፔፕታይዶች ባለ ሁለት ገጽታ መለያየት።ጂላር ኤም.፣ ኦሊቮቫ ፒ.፣ ዳሊ ኤኢ እና ገብለር ጄኬ በ RP-RP-HPLC ስርዓት በመጠቀም በመጀመሪያው እና በሁለተኛው የመለያየት ልኬቶች ውስጥ የተለያዩ የፒኤች እሴቶችን በመጠቀም የፔፕታይዶች ባለ ሁለት ገጽታ መለያየት። ጄ. ሴፕቴምበር ሳይንስ። 28 (14)፣ 1694–1703 (2005)።
ፌሊቲ፣ ኤስ. እና ሌሎችም። ከ2 µm ያነሱ ሙሉ በሙሉ ቀዳዳ ያላቸው እና በላዩ ላይ ቀዳዳ ያላቸው የC18 ቅንጣቶች የተሞሉ ከፍተኛ አፈጻጸም ያላቸው የክሮማቶግራፊ አምዶች የጅምላ ዝውውር እና የኪነቲክ ባህሪያትን መመርመር። ጄ. ሴፕቴምበር ሳይንስ። 43 (9–10)፣ 1737–1745 (2020)።
ፒዮቬሳና፣ ኤስ. እና ሌሎችም። በእፅዋት ባዮአክቲቭ ፔፕታይዶች መለየት፣ መለየት እና ማረጋገጥ ላይ የቅርብ ጊዜ አዝማሚያዎች እና የትንታኔ ተግዳሮቶች። ፊንጢጣ። ፍጡር ፊንጢጣ። ኬሚካል። 410(15)፣ 3425-3444። https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)።
ሙለር፣ ጄቢ እና ሌሎችም። የሕይወት መንግሥት ፕሮቲዮሚክ መልክዓ ምድር። ተፈጥሮ 582 (7813)፣ 592–596። https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)።
ደ ሉካ፣ ኬ. እና ሌሎችም። በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አማካኝነት የሕክምና ፔፕታይዶችን ከህክምና በኋላ። ሞለኪውሎች (ባሴል፣ ስዊዘርላንድ) 26(15)፣ 4688 (2021)።
ያንግ፣ ዋይ እና ጌንግ፣ ኤክስ። የተቀላቀለ-ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች ያለው አተገባበር። ያንግ፣ ዋይ እና ጌንግ፣ ኤክስ። የተቀላቀለ-ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች ያለው አተገባበር።ያንግ፣ ዩ. እና ጄንግ፣ ኤክስ. የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች ያለው አተገባበር። ያንግ፣ Y. & Geng፣ X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 ያንግ፣ ዋይ እና ጌንግ፣ ኤክስ። የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና በባዮፖሊመሮች ውስጥ ያለው አተገባበር።ያንግ፣ ዩ. እና ጂን፣ ኤክስ። የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች ያለው አተገባበር።ጄ. ክሮማቶግራፊ። ኤ 1218(49)፣ 8813–8825 (2011)።