Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን። የተወሰነ የሲኤስኤስ ድጋፍ ያለው የአሳሽ ስሪት እየተጠቀሙ ነው። ለበለጠ ልምድ፣ የዘመነ አሳሽ እንድትጠቀም እንመክርሃለን (ወይም የተኳኋኝነት ሁነታን በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር አሰናክል)። በተጨማሪም, ቀጣይነት ያለው ድጋፍ ለማረጋገጥ, ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን.
በአንድ ጊዜ የሶስት ስላይዶችን ካርሶል ያሳያል። በአንድ ጊዜ በሶስት ስላይዶች ለመንቀሳቀስ የቀደመውን እና ቀጣይ ቁልፎችን ይጠቀሙ ወይም በመጨረሻው ላይ ያሉትን ተንሸራታቾች በአንድ ጊዜ በሶስት ስላይዶች ለማለፍ ይጠቀሙ።
የተቦረቦረ የሲሊካ ቅንጣቶች በሶል-ጄል ዘዴ ተዘጋጅተው አንዳንድ ማሻሻያዎችን ሰፊ ቀዳዳዎችን ለማግኘት. እነዚህ ቅንጣቶች N-phenylmaleimide intercalated polyamides ለማምረት በN-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) እና styrene በተገላቢጦሽ ሰንሰለት ማስተላለፊያ-ፍርስራሽ (RAFT) ፖሊሜራይዜሽን ተወስደዋል። Styrene (PMP) የማይንቀሳቀስ ደረጃ. ጠባብ ቦረቦረ አይዝጌ ብረት አምዶች (100 × 1.8 ሚሜ ውስጣዊ ዲያሜትር) በጥራጥሬ ማሸጊያ ተጭነዋል። የፒኤምፒ አምድ ክሮማቶግራፊ አፈጻጸም አምስት peptides (ጊሊ-ታይር፣ ግሊ-ሉ-ታይር፣ ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ፣ ታይር-ኢሌ-ግሊ-ሰር-አርግ፣ ሉ አሚኖ አሲድ ኤንኬፋሊን) እና የሰው ዘር አልበም ውስጥ ትሪፕቲክ ሃይድሮላይዜት ያካተተ ሰው ሠራሽ peptides ድብልቅን ለመለየት ተገምግሟል። በተመቻቸ elation ሁኔታዎች ውስጥ, peptides ድብልቅ ጋር የታርጋ ቲዮረቲካል ቁጥር 280,000 ፕሌትስ/ስኩዌር. የተገነባውን አምድ የመለያየት አፈጻጸም ከንግድ አሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር በማነፃፀር የፒኤምፒ አምድ የመለየት ብቃት በመለያየት ቅልጥፍና እና አፈታት ከንግድ አምድ የላቀ እንደነበር ተስተውሏል።
የባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ ከቅርብ ዓመታት ወዲህ በገቢያ ድርሻ ላይ ከፍተኛ ጭማሪ በማስመዝገብ እየሰፋ ያለ ዓለም አቀፍ ገበያ ሆኗል። በባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ ፈንጂ እድገት 1,2,3 የ peptide እና የፕሮቲን ትንተና በጣም አስፈላጊ ነው. ከዒላማው peptide በተጨማሪ በፔፕታይድ ውህደት ወቅት የተለያዩ ቆሻሻዎች ይፈጠራሉ, ስለዚህ የሚፈለገውን የፔፕታይድ ንፅህና ለማግኘት ክሮሞቶግራፊ ማጽዳት ያስፈልጋል. በሰውነት ፈሳሾች፣ ቲሹዎች እና ህዋሶች ውስጥ ያሉ ፕሮቲኖች ትንተና እና ባህሪ እጅግ በጣም ፈታኝ የሆነ ተግባር ነው ምክንያቱም በአንድ ናሙና ውስጥ ሊገኙ የሚችሉ በርካታ ዝርያዎች በብዛት ይገኛሉ። ምንም እንኳን የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ የ peptides እና ፕሮቲኖች ቅደም ተከተል ውጤታማ መሳሪያ ቢሆንም, እንደነዚህ ያሉ ናሙናዎች በጅምላ ስፔክትሮሜትር ውስጥ በቀጥታ ከገቡ, መለያየቱ አጥጋቢ አይሆንም. ይህ ችግር ከኤምኤስ ትንተና በፊት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (LC) በማከናወን ሊፈታ ይችላል ይህም በተወሰነ ጊዜ ውስጥ ወደ ጅምላ ስፔክትሮሜትር የሚገቡትን ትንታኔዎች መጠን ይቀንሳል4,5,6. በተጨማሪም ፣ በፈሳሽ ደረጃ መለያየት ወቅት ተንታኞች በጠባብ ክልል ውስጥ ማተኮር ይችላሉ ፣ በዚህም እነዚህን ትንታኔዎች በማተኮር እና MS የማወቅን ስሜት ይጨምራሉ። ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (LC) ባለፉት አስርት ዓመታት ውስጥ በከፍተኛ ደረጃ አድጓል እና ለፕሮቲዮሚክ ትንተና7,8,9,10 በስፋት ጥቅም ላይ የዋለ ዘዴ ሆኗል.
የተገላቢጦሽ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (RP-LC) በ octadecyl-modified silica (ODS) እንደ ቋሚ ደረጃ11፣12፣13 በመጠቀም የ peptides ውህዶችን ለማጣራት እና ለመለየት በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል። ነገር ግን፣ በውስብስብ አወቃቀራቸው እና አምፖተሪክ ባህሪያቸው፣14,15 RP ቋሚ ደረጃዎች የፔፕቲድ እና ​​ፕሮቲኖችን አጥጋቢ መለያየት ማቅረብ አይችሉም። ስለዚህ የፔፕቲድ እና ​​ፕሮቲኖችን ከዋልታ እና ከዋልታ ያልሆኑ ፍርስራሾች ጋር ለመተንተን በልዩ ሁኔታ የተነደፉ የማይንቀሳቀስ ደረጃዎችን ይፈልጋል መስተጋብር እና እነዚህን ትንታኔዎች ለማቆየት16። የመልቲሞዳል መስተጋብርን የሚያቀርበው ቅይጥ ክሮማቶግራፊ የ peptides, ፕሮቲን እና ሌሎች ውስብስብ ድብልቆችን ለመለየት ከ RP-LC አማራጭ ሊሆን ይችላል. በርካታ የተቀላቀሉ አይነት ቋሚ ደረጃዎች ተዘጋጅተው በእነዚህ ቋሚ ደረጃዎች የተሞሉ ዓምዶች peptides እና ፕሮቲኖችን ለመለየት ጥቅም ላይ ውለዋል17,18,19,20,21. የዋልታ እና የዋልታ ያልሆኑ ቡድኖች በመኖራቸው ድብልቅ ሁነታ ቋሚ ደረጃዎች (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC) ለ peptides እና ፕሮቲኖች 22,23,24,25,26,27,28 ለመለየት ተስማሚ ናቸው. , የዋልታ intercalated የማይንቀሳቀስ ደረጃዎች covalently ትስስር ዋልታ ቡድኖች ጋር ጥሩ መለያየት ችሎታዎች እና የዋልታ እና ዋልታ ላልሆኑ የዋልታ ተንታኞች ልዩ selectivity ያሳያሉ ምክንያቱም መለያየት ወደ analyte እና የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ Multimodal መስተጋብር 29,30,31,32 መካከል ያለውን መስተጋብር ላይ የተመካ ነው. በቅርብ ጊዜ, Zhang et al. 30 የ polyamines መካከል behenyl-የተቋረጠ ቋሚ ደረጃዎች እና በተሳካ ሁኔታ hydrocarbons, antydepressantы, flavonoids, nucleosides, ኢስትሮጅን, እና አንዳንድ ሌሎች analytov መለየት. የዋልታ የተገጠመ የማይንቀሳቀስ ቁሳቁስ ሁለቱም የዋልታ እና የዋልታ ያልሆኑ ቡድኖች ስላሉት peptides እና ፕሮቲኖችን ወደ ሃይድሮፎቢክ እና ሃይድሮፊሊክ ክፍሎች ለመለየት ሊያገለግል ይችላል። የዋልታ መስመር አምዶች (ለምሳሌ C18 አምዶች ከአሚድ ኢንላይን ጋር) በንግድ ስም Ascentis Express RP-Amide columns ስር ይገኛሉ ነገርግን እነዚህ አምዶች ለአሚን 33 ትንታኔ ብቻ ጥቅም ላይ ውለዋል።
አሁን ባለው ጥናት የዋልታ መክተት የማይንቀሳቀስ ደረጃ (N-phenylmaleimide, inembed polystyrene) ተዘጋጅቶ ለ peptide መለያየት እና ለ tryptic HSA ስንጥቅ ተገምግሟል። የቋሚ ደረጃውን ለማዘጋጀት የሚከተለው ስልት ጥቅም ላይ ውሏል. በቀደሙት ህትመቶቻችን ውስጥ በተገለጹት ሂደቶች መሰረት የተቦረቦሩ የሲሊካ ቅንጣቶች ተዘጋጅተዋል, አንዳንድ የዝግጅት መርሃግብሮች 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. የዩሪያ, ፖሊ polyethylene glycol (PEG), TMOS እና aqueous-acetic acid ሬሾዎች ከሲሊካ ቅንጣቶች ጋር ተስተካክለዋል. በሁለተኛ ደረጃ፣ አዲስ የ phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ligand ተፈጥሯል እና በውስጡም የተገኙት የሲሊካ ቅንጣቶች የዋልታ የተከተቱ ቋሚ ደረጃዎችን ለማዘጋጀት ጥቅም ላይ ውለዋል። የተገኘው የማይንቀሳቀስ ደረጃ በተመቻቸ የማሸጊያ እቅድ መሰረት ወደ አይዝጌ ብረት አምድ (ውስጣዊ ዲያሜትር 100 × 1.8 ሚሜ) ተጭኗል። በአምዱ ውስጥ አንድ ወጥ የሆነ ንብርብር ለማረጋገጥ የዓምዱ ማሸጊያው በሜካኒካዊ ንዝረት በመታገዝ ነው. የታሸገው አምድ አምስት peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide) ያካተተ peptides ቅልቅል ለመለየት ተገምግሟል. እና tryptic hydrolysates የሰዎች የሴረም አልቡሚን (HSA). የፔፕታይድ ድብልቅ እና የኤችኤስኤ ትሪፕቲክ መፍጨት በጥሩ ጥራት እና ቅልጥፍና ሲለያዩ ተስተውለዋል። የ PMP አምድ መለያየት ቅልጥፍና ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ተነጻጽሯል። በ PMP አምድ ላይ peptides እና ፕሮቲኖች ጥሩ ጥራት እና ከፍተኛ የመለየት ብቃት እንዳላቸው ተስተውሏል, እና የ PMP አምድ የመለየት ቅልጥፍና ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ከፍ ያለ ነው.
ፒኢጂ (ፖሊ polyethylene glycol)፣ ዩሪያ፣ አሴቲክ አሲድ፣ ትሪሜትቶክሲኦርቶሲሊኬት (TMOS)፣ ትሪሜቲል ክሎሮሲላን (TMCS)፣ ትራይፕሲን፣ የሰው ሴረም አልቡሚን (ኤችኤስኤ)፣ አሞኒየም ክሎራይድ፣ ዩሪያ፣ ሄክሳሜቲል ሜታክሪሎይልዲሳላዛኔ (ኤችኤምዲኤስ)፣ ሜታክሪሎይል ክሎራይድ (ኤም.ሲ.ኤም.ኤም.ኤም.ኤም.ኤም.ፒ.ኦ.) ሃይድሬንዞይሬድዮሳይድ acetonitrile (ACN) ለ HPLC, methanol, 2-propanol እና acetone. ሲግማ-አልድሪች ኩባንያ (ሴንት ሉዊስ, ሚዙሪ, አሜሪካ).
የዩሪያ ቅልቅል (8 ግራም), ፖሊ polyethylene glycol (8 g) እና 8 ml 0.01 N. አሴቲክ አሲድ ለ 10 ደቂቃዎች ተነሳ, እና 24 ml TMOS በበረዶ ማቀዝቀዣ ውስጥ ተጨምሯል. የምላሹ ድብልቅ በ 40 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ለ 6 ሰአታት ከዚያም በ 120 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለ 8 ሰዓታት በማይዝግ ብረት አውቶክላቭ ውስጥ ይሞቃል. ውሃው ተጥሏል እና ቅሪቱ በ 70 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለ 12 ሰአታት ደርቋል. የደረቁ ለስላሳ ብሎኮች ያለችግር ተፈጭተው በ 550 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ባለው ምድጃ ውስጥ ለ 12 ሰአታት ተቀርፀዋል ። የቅንጣት መጠኖችን፣ የቀዳዳ መጠንን እና የገጽታ አካባቢን እንደገና መባዛትን ለመፈተሽ ሶስት ባች ተዘጋጅተው ተለይተው ይታወቃሉ።
የዋልታ ቡድን እና የማይንቀሳቀስ ደረጃ ለ polystyrene ሰንሰለቶች። የዝግጅቱ ሂደት ከዚህ በታች ተብራርቷል.
N-phenylmaleimide (200 mg) እና methyl vinyl isocyanate (100 mg) anhydrous toluene ውስጥ ይቀልጣሉ ከዚያም 0.1 ሚሊ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) phenylmaleimCPide አንድ copolymer ለማግኘት እና phenylmaleimCPide እና methyl methyl istvinyl (PM) methyl ist. ) ድብልቁ በ 60 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 3 ሰአታት ይሞቃል, ተጣርቶ በ 40 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 3 ሰዓታት በምድጃ ውስጥ ይደርቃል.
የደረቁ የሲሊካ ቅንጣቶች (2 ግ) በደረቅ ቶሉኢን (100 ሚሊ ሊትር) ውስጥ ተበታትነው, በ 500 ሚሊር ክብ የታችኛው ጠርሙስ ውስጥ ለ 10 ደቂቃዎች ተነሳሱ እና ተጠርተዋል. PMCP (10 ሚ.ግ.) በቶሉይን ውስጥ ተፈትቷል እና በተጨመረው ፋኑል በኩል ጠብታ አቅጣጫ ወደ ምላሹ ብልጭታ ተጨምሯል። ድብልቁ በ 100 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 8 ሰአታት እንደገና ይሞላል, ተጣርቶ, በአቴቶን ታጥቦ በ 60 ° ሴ ለ 3 ሰዓታት ይደርቃል. ከዚያም ከPMCP (100 ግራም) ጋር የተያያዙት የሲሊካ ቅንጣቶች በቶሉይን (200 ሚሊ ሊትር) ውስጥ ይሟሟቸዋል, እና 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) በ 100 μl የዲቡቲልቲን ዲላራሬት እንደ ማነቃቂያ ውስጥ ተጨምረዋል. ድብልቁ በ 50 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 8 ሰአታት, ተጣርቶ በ 50 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለ 3 ሰዓታት ይደርቃል.
Styrene (1 ml), ቤንዞይል ፐሮክሳይድ BPO (0.5 ml) እና ከ TEMPO-PMCP (1.5 ግ) ጋር የተጣበቁ የሲሊካ ቅንጣቶች በቶሉይን ውስጥ ተበታትነው በናይትሮጅን ተጠርገዋል. የስታይሬን ፖሊመርዜሽን በ 100 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 12 ሰአታት ተከናውኗል. የተገኘው ምርት በሜታኖል ታጥቦ በ 60 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ በአንድ ምሽት ደርቋል. የምላሹ አጠቃላይ እቅድ በ fig. አንድ ።
ናሙናዎቹ ከ 10-3 ቶር ያነሰ የተረፈ ግፊት እስኪገኝ ድረስ በ 393 ኪ.ሜትር ለ 1 ሰአት ተወስደዋል. የ N2 መጠን በአንፃራዊ ግፊት P/P0 = 0.99 የጠቅላላውን ቀዳዳ መጠን ለመወሰን ጥቅም ላይ ይውላል. የንፁህ እና ሊንጋድ-የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች ሞርፎሎጂ በኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan) በመጠቀም ተፈትሸዋል. የካርቦን ቴፕ በመጠቀም በአሉሚኒየም ዘንጎች ላይ ደረቅ ናሙናዎች (የተጣራ የሲሊካ እና የሊጋንድ ሲሊካ ቅንጣቶች) ተቀምጠዋል. ወርቅ በናሙናው ላይ Q150T የሚተፋ መሳሪያ በመጠቀም ተቀምጧል፣ እና 5 nm ውፍረት ያለው Au ንብርብር በናሙናው ላይ ተቀምጧል። ይህ ዝቅተኛ የቮልቴጅ ሂደትን ውጤታማነት ያሻሽላል እና ጥሩ ቀዝቃዛ መርጨትን ያቀርባል. የኤሌሜንታል ትንተና የተካሄደው Thermo Electron (ዋልታም, ኤምኤ, ዩኤስኤ) ፍላሽ EA1112 ኤሌሜንታል ጥንቅር ተንታኝ በመጠቀም ነው። የማልቨርን ቅንጣት መጠን analyzer (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ቅንጣት መጠን ስርጭት ለማግኘት ጥቅም ላይ ውሏል. ያልተሸፈኑ የሲሊካ ቅንጣቶች እና በሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች (5 ሚሊ ግራም እያንዳንዳቸው) በ 5 ml isopropanol ውስጥ ተበታትነው, ለ 10 ደቂቃዎች በሶኒኬድ, ለ 5 ደቂቃዎች ተንቀጠቀጡ እና በማስተርስዘር ኦፕቲካል አግዳሚ ወንበር ላይ ተቀምጠዋል. ቴርሞግራቪሜትሪክ ትንተና በደቂቃ በ 5 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ከ 30 እስከ 800 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ባለው የሙቀት መጠን ውስጥ ይካሄዳል.
የመስታወት ፋይበር ጠባብ ቦረቦረ አይዝጌ ብረት ዓምዶች ልኬት (መታወቂያ 100 × 1.8 ሚሜ) በማጣቀሻ 31 ተመሳሳይ አሰራር በመከተል በቆሻሻ አሞላል ዘዴ ተጭነዋል። በ 1.2 ሚሊ ሜትር ሜታኖል ውስጥ 150 ሚ.ግ የማይንቀሳቀስ ደረጃን በማገድ እና ወደ ማጠራቀሚያ ዓምድ ውስጥ በመመገብ የቋሚ ደረጃውን እገዳ ያዘጋጁ. ሜታኖል እንደ ፈሳሽ ሟሟ እና መቆጣጠሪያ ሟሟ ጥቅም ላይ ይውላል። የግፊት ቅደም ተከተል 100 ሜፒ ለ 10 ደቂቃ ፣ 80 ሜፒ ለ 15 ደቂቃ እና 60 ሜፒ ለ 30 ደቂቃ በመጫን ዓምዱን ያሽጉ። የማሸጊያው ሂደት አንድ ወጥ የሆነ የአምድ ማሸግ ለማረጋገጥ ሁለት የጋዝ ክሮማቶግራፊ አምድ ንዝረትን (Alltech, Deerfield, IL, USA) ለሜካኒካዊ ንዝረት ተጠቅሟል. በሕብረቁምፊው ላይ ጉዳት እንዳይደርስ የጭስ ማውጫውን ይዝጉ እና ግፊቱን በቀስታ ይልቀቁ። ዓምዱ ከስሉሪ ኖዝል ጋር ተለያይቷል እና ሌላ መግጠሚያ ከመግቢያው ጋር ተያይዟል እና ከ LC ሲስተም ጋር ተገናኝቷል አሰራሩን ለመፈተሽ።
ብጁ MLC የተሰራው በኤልሲ ፓምፕ (10AD ሺማድዙ፣ ጃፓን))፣ የ50 nL መርፌ ምልልስ (ቫልኮ (ዩኤስኤ) C14 W.05)፣ የሜምፕል ደጋሰር (ሺማድዙ DGU-14A) እና የUV-VIS ካፊላሪ መስኮት ያለው ናሙና አቅራቢ ነው። መፈለጊያ መሳሪያ (UV-2075) እና የተለጠፈ ማይክሮኮል ተጨማሪ የአምድ መስፋፋትን ውጤት ለመቀነስ በጣም ጠባብ እና አጭር ማያያዣ ቱቦዎችን ይጠቀሙ። ዓምዱን ከሞሉ በኋላ በ1/16 ኢንች መገንጠያ መስቀለኛ መንገድ ላይ ካፒላሪ (50 µm id 365) ይጫኑ እና የሚቀንስ መስቀለኛ መንገድ ካፒላሪ (50 μm) ይጫኑ። የመረጃ አሰባሰብ እና ክሮማቶግራም ሂደት የሚከናወነው መልቲክሮ 2000 ሶፍትዌርን በመጠቀም ነው። በ 254 nm የርእሶች ተንታኞች የ UV ን መሳብ በ 0. Chromatographic ውሂብ OriginPro8 (Northampton, MA) በመጠቀም ተንትነዋል.
የሰው ሴረም አልቡሚን, lyophilized ዱቄት, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg ትራይፕሲን (1.5 mg), 4.0 M ዩሪያ (1 ሚሊ) እና 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ሚሊ) ጋር የተቀላቀለ. መፍትሄው ለ 10 ደቂቃዎች ተነሳ እና በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ በውሃ መታጠቢያ ውስጥ ለ 6 ሰአታት ይቆያል, ከዚያም በ 1 ml 0.1% TFA ይሟጠጣል. መፍትሄውን ያጣሩ እና ከ 4 ° ሴ በታች ያከማቹ.
በ PMP አምድ ላይ የ peptides እና tryptic digest HSA ቅልቅል መለየት ለብቻው ተገምግሟል። የ peptides እና HSA ድብልቅ በፒኤምፒ አምድ ተለያይተው ያለውን ትራይፕቲክ ሃይድሮላይዜሽን ይፈትሹ እና ውጤቱን ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ያወዳድሩ። የንድፈ ሐሳብ ሰሌዳዎች ቁጥር በሚከተለው ቀመር ይሰላል፡
የንፁህ የሲሊካ ቅንጣቶች እና የሲሊካ ቅንጣቶች የሴኤም ምስሎች በስእል 2 ይታያሉ። ሴም የንፁህ የሲሊካ ቅንጣቶች (A, B) ምስሎች ከቀደምት ጥናቶቻችን ጋር ሲነፃፀሩ ቅንጣቶች የሚረዝሙበት ወይም መደበኛ ያልሆነ ሲሜትሪ ያላቸውን ክብ ቅርጽ ያሳያሉ። በሊንዳድ (ሲ, ዲ) የታሰረው የሲሊካ ቅንጣቶች ገጽታ ከንጹህ የሲሊቲክ ቅንጣቶች የበለጠ ለስላሳ ነው, ይህም የሲሊቲክ ቅንጣቶችን በሚሸፍነው የ polystyrene ሰንሰለቶች ምክንያት ሊሆን ይችላል.
የንፁህ የሲሊካ ቅንጣቶችን (A፣ B) እና ligand የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶችን (ሲ፣ ዲ) ኤሌክትሮን ማይክሮግራፎችን በመቃኘት ላይ።
የንጹህ የሲሊካ ቅንጣቶች እና በሊጋንድ-የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች ቅንጣቢ መጠን ስርጭት በስእል 2. 3 (A). የቮልሜትሪክ ቅንጣቢ መጠን ማከፋፈያ ኩርባዎች የሲሊካ ቅንጣት ከኬሚካላዊ ለውጥ በኋላ እንደጨመረ አሳይቷል (ምስል 3A). አሁን ካለው ጥናት እና ያለፈው ጥናት የሲሊካ ቅንጣት መጠን ስርጭት መረጃ በሰንጠረዥ 1 (A) ውስጥ ተነጻጽሯል። የPMP የድምጽ መጠን d(0.5) 3.36 µm ነበር፣ ከማስታወቂያ(0.5) ዋጋ 3.05 µm ባለፈው ጥናታችን (polystyrene bonded silica particles)34። በምላሽ ቅይጥ ውስጥ የPEG፣ ዩሪያ፣ ቲኤምኦኤስ እና አሴቲክ አሲድ ጥምርታ በመቀየሩ የዚህ ባች ቅንጣት ስርጭት ካለፈው ጥናታችን ጋር ሲነፃፀር ጠባብ ነበር። የPMP ደረጃ ቅንጣት መጠን ቀደም ብለን ካጠናነው ከ polystyrene የታሰረ ሲሊካ ቅንጣት ምዕራፍ ትንሽ ይበልጣል። ይህ ማለት የሲሊካ ቅንጣቶችን ከስታይሪን ጋር መተግበር በሲሊካ ወለል ላይ የ polystyrene ንብርብር (0.97 µm) ብቻ ሲቀመጥ በፒኤምፒ ደረጃ የንብርብሩ ውፍረት 1.38 µm ነበር።
የንፁህ የሲሊካ ቅንጣቶች እና የሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች ቅንጣቢ መጠን ስርጭት (A) እና የፔሮ መጠን ስርጭት (B)።
በዚህ ጥናት ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉት የሲሊካ ቅንጣቶች መጠን፣ የቀዳዳ መጠን እና የገጽታ ስፋት በሰንጠረዥ 1 (ለ) ላይ ይታያል። የ PSD የንፁህ የሲሊካ ቅንጣቶች እና በ ligand-የተጠረዙ የሲሊካ ቅንጣቶች በምስል ውስጥ ይታያሉ. 3 (ለ) ውጤቶቹ ካለፈው ጥናት34 ጋር ይነጻጸራሉ። የንፁህ እና ሊንጋድ-የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች 310 Å እና 241 Å በቅደም ተከተል 310 Å እና 241 Å ሲሆኑ ይህም ከኬሚካላዊ ለውጥ በኋላ በሠንጠረዥ 1 (ለ) ላይ እንደሚታየው የቦረቦሩ መጠን በ 69 Å ቀንሷል እና የ shift ጥምዝ በምስል ላይ ይታያል. የሲሊካ ቅንጣቶች ልዩ የገጽታ ስፋት, አሁን ባለው ጥናት ውስጥ m211 ያለው ጥናት ነው. (124 m2/ግ)። በሰንጠረዥ 1 (ለ) ላይ እንደሚታየው የኬሚካላዊ ለውጥ ከተደረገ በኋላ የሲሊካ ቅንጣቶች የንጣፍ ስፋት (m2 / g) ከ 116 m2 / g ወደ 105 m2 / g ቀንሷል.
የቋሚ ደረጃ ኤሌሜንታል ትንተና ውጤቶች በሰንጠረዥ ውስጥ ቀርበዋል. 2. የአሁኑ የጽህፈት መሳሪያ የካርቦን ይዘት 6.35% ነው, ይህም ከቀደምት ጥናታችን ያነሰ ነው (የሲሊካ ቅንጣቶች ከ polystyrene, 7.93% 35 እና 10.21%, በቅደም ተከተል) 42. እንደ phenylmaleimide እና methyl-tevinyl acid 42. የፖላር ligands እንደ phenylmaleimide እና ፒሲኦክሲድ 42. በ SP ዝግጅት ውስጥ ከ styrene በተጨማሪ ጥቅም ላይ ውሏል. የናይትሮጅን የክብደት መቶኛ አሁን ባለው የማይንቀሳቀስ ደረጃ 2.21% ከ 0.1735 እና 0.85% ጋር ሲነጻጸር 42. ይህ ማለት አሁን ያለው የማይንቀሳቀስ ደረጃ በ phenylmaleimide ምክንያት ከፍተኛ ክብደት ያለው ናይትሮጅን መቶኛ አለው ማለት ነው። በተመሳሳይም ምርቶች (4) እና (5) የካርቦን ይዘት 2.7% እና 2.9% ሲሆኑ የመጨረሻው ምርት (6) የካርቦን ይዘት 6.35% ሲኖረው በሰንጠረዥ 2 ላይ እንደሚታየው Thermogravimetric analysis (TGA) በ PMP ቋሚ ደረጃ ላይ ጥቅም ላይ ውሏል ክብደት መቀነስ እና የ TGA ጥምዝ በስእል 8 ውስጥ ጥሩ ክብደት ያሳያል. ከካርቦን ይዘት (6.35%) ጋር ስምምነት, ምክንያቱም ሊንዶች ሲ ብቻ ሳይሆን N, O እና H ጭምር ይይዛሉ.
ሊጋንድ ፊኒልማሌይሚድ-ሜቲልቪኒል ኢሶሲያኔት የሲሊካ ቅንጣቶችን ገጽታ ለማሻሻል የተመረጠ ነው ምክንያቱም በፖላር ፌኒልማሌይሚድ እና በቪኒሊሶሲያኔት ቡድኖች ምክንያት። Vinyl isocyanate ቡድኖች ሕያው አክራሪ ፖሊሜራይዜሽን በማድረግ ከስታይሪን ጋር የበለጠ ምላሽ ሊሰጡ ይችላሉ። ሁለተኛው ምክንያት የ phenylmaleimide moiety በተለመደው ፒኤች ላይ ምንም ምናባዊ ክፍያ ስለሌለው ከአናላይት ጋር መጠነኛ መስተጋብር ያለው እና በአናላይት እና በቋሚ ደረጃ መካከል ጠንካራ ኤሌክትሮስታቲክ ግንኙነት የሌለው ቡድን ማስገባት ነው። የጽህፈት ቤቱ የፖላራይት መጠን በጥሩ የ styrene መጠን እና በነጻ ራዲካል ፖሊሜራይዜሽን ምላሽ ጊዜ ቁጥጥር ሊደረግበት ይችላል። የምላሹ የመጨረሻ ደረጃ (ነጻ ራዲካል ፖሊሜራይዜሽን) የቋሚ ደረጃውን ዋልታነት ስለሚቀይር ወሳኝ ነው። በእነዚህ ቋሚ ደረጃዎች ውስጥ ያለውን የካርቦን ይዘት ለመፈተሽ የንጥረ ነገሮች ትንተና ተካሂዷል. የስታይሬን መጠን መጨመር እና የግብረ-መልስ ጊዜ የቋሚ ደረጃውን የካርቦን ይዘት እና በተቃራኒው እንደሚጨምር ተስተውሏል. በተለያየ የስታይሪን ክምችት የሚዘጋጁ ኤስፒዎች የተለያዩ የካርበን ጭነቶች አሏቸው። በተመሳሳይ፣ እነዚህ ቋሚ ደረጃዎች ከማይዝግ ብረት የተሰሩ ዓምዶች ላይ ተቀምጠዋል እና ክሮሞቶግራፊያዊ ባህሪያቶቻቸው (ምርጫ፣ ጥራት፣ N እሴት፣ ወዘተ) ተረጋግጠዋል። በእነዚህ ሙከራዎች ላይ በመመርኮዝ ቁጥጥር የሚደረግበት ፖሊነት እና የትንታኔውን ጥሩ ማቆየት ለ PMP ቋሚ ደረጃ ዝግጅት የተመቻቸ ጥንቅር ተመርጧል።
የፒኤምፒ አምድ የሞባይል ደረጃን አቅም በመጠቀም አምስት የ peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) ለመተንተን ተገምግሟል. 60/40 (ቁ/ቁ) ኤሲኤን/ውሃ (0.1% TFA) በ80 µl/ደቂቃ ፍሰት ፍጥነት። በጥሩ ሁኔታ (200,000 ፕሌትስ / ሜ) የቲዎሬቲካል ሰሌዳዎች ቁጥር (N) በአንድ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ) 20,000 ± 100 ነው. ለሶስቱ PMP አምዶች የ N ዋጋዎች በሰንጠረዥ 3 ውስጥ ይታያሉ እና ክሮሞግራም በስእል 5A ውስጥ ይታያሉ. ፈጣን ትንተና በከፍተኛ የፍሰት መጠን (700 µl/ደቂቃ) በፒኤምፒ አምድ ላይ አምስት peptides በአንድ ደቂቃ ውስጥ ወጣ፣ እጅግ በጣም ጥሩ N ዋጋ 13,500 ± 330 በአንድ አምድ (100 x 1.8 ሚሜ ዲያሜትር)፣ ከ 135,000 ፕሌቶች/ ሜትር ጋር እኩል የሆነ (ምስል 5B)። ተመሳሳይ መጠን ያላቸው ሦስት ዓምዶች (የውስጥ ዲያሜትር 100 x 1.8 ሚሜ) በሦስት የተለያዩ የ PMP ቋሚ ደረጃዎች ተሞልተው እንደገና መራባትን ለመፈተሽ. በእያንዳንዱ አምድ ላይ ተመሳሳዩን የፍተሻ ቅይጥ በመለየት ለእያንዳንዱ አምድ ተንታኞች ተመሳሳዩን የመለጠጥ ሁኔታዎችን፣ የቲዎሬቲካል ፕሌቶች N እና የማቆያ ጊዜን በመጠቀም ተመዝግበዋል። የPMP አምዶች የመባዛት መረጃ በሰንጠረዥ 4 ውስጥ ይታያል።
በፒኤምፒ አምድ (B) እና Ascentis Express RP-Amide አምድ (A) ላይ የፔፕታይድ ውህዶችን መለየት፣ የሞባይል ደረጃ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)፣ PMP አምድ ልኬቶች (100 x 1.8 ሚሜ መታወቂያ)፣ ትንተና የኤሉሽን ውህዶች ቅደም ተከተል፡ 1 (ጊሊ-ታይር)፣ - 2-ጊሊ (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) እና 5 (leucic acid enkephalin).
የፒኤምፒ አምድ (የውስጥ ዲያሜትር 100 x 1.8 ሚሜ) የሰው ሴረም አልቡሚንን ትሪፕቲክ ሃይድሮላይዜት በ HPLC ለመለየት ተገምግሟል። በስእል 6 ላይ ያለው ክሮሞግራም እንደሚያሳየው ናሙናዎቹ በጣም ጥሩ በሆነ ጥራት በደንብ ተለያይተዋል. የኤችኤስኤ መፍትሄዎች የ 100 μl / ደቂቃ ፍሰት መጠን, የሞባይል ደረጃ 70/30 acetonitrile / ውሃ እና 0.1% TFA በመጠቀም ተንትነዋል. በ chromatogram (ምስል 6) ላይ እንደሚታየው የ HSA ክሊቭጅ በ 17 ጫፎች ተከፍሏል, ከ 17 peptides ጋር ይዛመዳል. ከኤችኤስኤ ሃይድሮላይዜድ የግለሰባዊ ከፍታዎች የመለየት ቅልጥፍና የተሰላ ሲሆን እሴቶቹ በሰንጠረዥ 5 ውስጥ ይታያሉ።
HSA tryptic hydrolysates በ PMP አምድ (የውስጥ ዲያሜትር 100 x 1.8 ሚሜ) ፣ የፍሰት መጠን (100 μl / ደቂቃ) ፣ የሞባይል ደረጃ 60/40 አሴቶኒትሪል / ውሃ እና 0.1% TFA ተለያይተዋል።
L የአምዱ ርዝመት ሲሆን η የተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃው viscosity ነው ፣ ΔP የአምዱ የኋላ ግፊት ነው ፣ እና u የሞባይል ደረጃ መስመራዊ ፍጥነት ነው። የPMP አምድ የመተላለፊያ አቅም 2.5 × 10-14 m2፣ የፍሰቱ መጠን 25 µl/ደቂቃ ነበር፣ 60/40 v/v ጥቅም ላይ ውሏል። ኤሲኤን/ውሃ የ PMP አምድ (መታወቂያ 100 × 1.8 ሚሜ) የመተጣጠፍ ችሎታ ከቀዳሚው Ref.34 ጥናት ጋር ተመሳሳይ ነው። ላይ ላዩን ባለ ቀዳዳ ቅንጣቶች የተሞላ የአንድ አምድ የመተላለፊያ አቅም 1.7×10 .6 µm፣ 2.5×10-14 m2 ለ 5µm ቅንጣቶች43 ነው። ስለዚህ, የፒኤምፒ ደረጃ መተላለፍ ከ 5 μm መጠን ጋር ከኮር-ሼል ቅንጣቶች ጋር ተመሳሳይ ነው.
Wx በክሎሮፎርም የተሞላው የአምዱ ብዛት፣ ዋይ በሜታኖል የተሞላው የአምድ ብዛት፣ እና ρ የሟሟው ጥግግት ነው። የሜታኖል ጥግግት (ρ = 0.7866) እና ክሎሮፎርም (ρ = 1.484)። አጠቃላይ የሲሊካ-C18 ቅንጣት አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) 34 እና ቀደም ሲል ያጠናቸው C18-urea31 አምድ 0.63 እና 0.55 በቅደም ተከተል። ይህ ማለት የዩሪያ ማያያዣዎች መኖራቸው የቋሚ ደረጃውን የመተጣጠፍ ችሎታ ይቀንሳል. በሌላ በኩል የፒኤምፒ አምድ (ውስጣዊው ዲያሜትር 100 × 1.8 ሚሜ) አጠቃላይ 0.60 ነው. የፒኤምፒ አምዶች በ C18 የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች ከታሸጉ አምዶች ያነሱ ናቸው ምክንያቱም በ C18 ዓይነት የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች C18 ligands ከሲሊካ ቅንጣቶች ጋር በመስመራዊ ሰንሰለቶች ውስጥ ተያይዘዋል ፣ በ polystyrene ዓይነት የማይንቀሳቀስ ደረጃዎች ደግሞ በአንጻራዊነት ወፍራም ፖሊመር በቅንጦቹ ዙሪያ ይመሰረታል። ንብርብር A. በተለመደው ሙከራ ውስጥ, የዓምድ ምሰሶነት እንደሚከተለው ይሰላል:
በለስ ላይ. 7A፣ B ቫን ዴምተር ለፒኤምፒ አምድ (መታወቂያ 100 x 1.8 ሚሜ) እና የአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ (መታወቂያ 100 x 1.8 ሚሜ) በተመሳሳይ የማብራሪያ ሁኔታዎች፣ 60/40 ACN/H2O እና 0 .1% TFA 20 µl/min በሁለቱም µl/ደቂቃ ያሳያል። ለፒኤምፒ አምድ እና Ascentis Express RP-Amide አምድ በተመቻቸ የፍሰት መጠን (80 µl/min) ዝቅተኛው የHETP ዋጋዎች 2.6 μm እና 3.9 μm ነበሩ። የHETP ዋጋዎች እንደሚያሳዩት የPMP አምድ (100 x 1.8 ሚሜ መታወቂያ) የመለየት ቅልጥፍና በንግድ ከሚገኘው Ascentis Express RP-Amide አምድ (100 x 1.8 ሚሜ መታወቂያ) በጣም የላቀ ነው። በስእል 7 (A) ላይ ያለው የቫን ዴምተር ግራፍ እንደሚያሳየው የ N ዋጋ መቀነስ ከቀዳሚው ጥናታችን ጋር ሲነፃፀር እየጨመረ በሚመጣው ፍሰት በጣም ከፍ ያለ አይደለም. የ PMP አምድ (መታወቂያ 100 × 1.8 ሚሜ) ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ሲነፃፀር ከፍ ያለ የመለየት ቅልጥፍና በተሻሻለው የንጥል ቅርጽ እና መጠን እና አሁን ባለው ስራ34 ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው የተራቀቀ የአምድ ማሸግ ሂደት ላይ የተመሰረተ ነው።
(A) ቫን ዴምተር ሴራ (HETP vs. የሞባይል ደረጃ መስመራዊ ፍጥነት) በፒኤምፒ አምድ (መታወቂያ 100 x 1.8 ሚሜ) በ60/40 ACN/H2O ከ0.1% TFA ጋር። (ለ) ቫን ዴምተር ፕላስተር (HETP ከሞባይል ደረጃ መስመራዊ ፍጥነት) በአሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ (መታወቂያ 100 x 1.8 ሚሜ) በ60/40 ACN/H2O ከ0.1% TFA ጋር የተገኘ።
ከፍተኛ አፈጻጸም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ የሰው ሰራሽ peptides እና tryptic hydrolyzate የሰው ሴረም አልቡሚን (HSA) ድብልቅን ለመለየት የዋልታ የማይንቀሳቀስ ደረጃ intercalated polystyrene ተዘጋጅቶ ተገምግሟል። ለ peptide ድብልቅ የ PMP አምዶች ክሮማቶግራፊ አፈፃፀም በመለያየት ቅልጥፍና እና በመፍታት ረገድ በጣም ጥሩ ነው። የተሻሻለው የፒኤምፒ አምዶች የመለየት ቅልጥፍና በበርካታ ምክንያቶች የተነሳ እንደ ሲሊካ ቅንጣት መጠን እና ቀዳዳ መጠን፣ የቋሚ ደረጃዎች ቁጥጥር ውህደት እና ውስብስብ የአምድ ማሸጊያ ቁሳቁሶች። ከከፍተኛ መለያየት ቅልጥፍና በተጨማሪ የዚህ የማይንቀሳቀስ ደረጃ ሌላው ጥቅም ዝቅተኛ የአምድ የኋላ ግፊት በከፍተኛ ፍሰት መጠን ነው። የፒኤምፒ አምዶች በጣም ሊባዙ የሚችሉ ናቸው እና የተለያዩ ፕሮቲኖችን የፔፕቲድ እና ​​ትሪፕቲክ መፈጨት ድብልቅን ለመተንተን ሊያገለግሉ ይችላሉ። ይህንን አምድ ባዮአክቲቭ ውህዶችን ከተፈጥሯዊ ምርቶች ፣ ከመድኃኒት ዕፅዋት እና እንጉዳይ በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ለመለየት ልንጠቀምበት እንፈልጋለን። ለወደፊቱ, የ PMP አምዶች ፕሮቲኖችን እና ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላትን ለመለየት ይገመገማሉ.
ፊልድ፣ JK፣ Euerby፣ MR፣ Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ወደ የተገለበጠ ደረጃ ክሮማቶግራፊ የፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ምርመራ ክፍል 1፡ የአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ማዘጋጀት። ፊልድ፣ JK፣ Euerby፣ MR፣ Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ወደ የተገለበጠ ደረጃ ክሮማቶግራፊ የፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ምርመራ ክፍል 1፡ የአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ማዘጋጀት።ፊልድ፣ ጄኬ፣ ኦወርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች እና ፒተርሰን፣ ፒ. የፔፕታይድ መለያየት ሲስተምስ በተገላቢጦሽ-ደረጃ ክሮማቶግራፊ፣ ክፍል አንድ፡ የአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ማዘጋጀት። ፊልድ፣ JK፣ Euerby፣ MR፣ Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ወደ የተገለበጠ ደረጃ ክሮማቶግራፊ የፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ምርመራ ክፍል 1፡ የአምድ ባህሪያት ፕሮቶኮል ማዘጋጀት። ፊልድ፣ JK፣ Euerby፣ MR፣ Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ወደ የተገለበጠ ደረጃ ክሮማቶግራፊ የፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ምርመራ ክፍል 1፡ የአምድ ባህሪያት ፕሮቶኮል ማዘጋጀት።ፊልድ፣ ጄኬ፣ ኦወርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች እና ፒተርሰን፣ ፒ. የፔፕታይድ መለያየት ሲስተምስ በተገላቢጦሽ-ደረጃ ክሮማቶግራፊ፣ ክፍል አንድ፡ የአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ማዘጋጀት።ጄ.色谱法። 1603፣113-129። https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)።
ጎሜዝ፣ ቢ እና ሌሎች ለተላላፊ በሽታዎች ሕክምና የተሻሻሉ ንቁ peptides የመፍጠር ዘዴዎች. ባዮቴክኖሎጂ. ስኬቶች 36(2)፣ 415–429 https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)።
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. ሠራሽ ቴራፒዩቲክ peptides: ሳይንስ እና ገበያ. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. ሠራሽ ቴራፒዩቲክ peptides: ሳይንስ እና ገበያ.Vliege P፣ Lisowski V፣ Martinez J እና Chreschatyski M. ሠራሽ ቴራፒዩቲክ peptides፡ ሳይንስ እና ገበያ።Vliege P፣ Lisowski V፣ Martinez J እና Khreschatsky M. ሠራሽ ቴራፒዩቲክ peptides፡ ሳይንስ እና ገበያ። የመድሃኒት ግኝት. ዛሬ 15 (1–2)፣ 40–56 https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)።
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ.F.፣ Smith RD እና Shen Yu ይመልከቱ። የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ. Xie፣ F.፣ Smith፣ RD & Shen፣ Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie፣ F.፣ Smith፣ RD & Shen፣ Y. የላቀ የፕሮቲን ቅንብር።F.፣ Smith RD እና Shen Yu ይመልከቱ። የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ.ጄ. Chromatography. አ 1261፣ 78–90 (2012)።
ሊዩ, ደብሊው እና ሌሎች. የላቀ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ-mass spectrometry ሰፊ-ተኮር ሜታቦሎሚክስ እና ፕሮቲዮቲክስን ማዋሃድ ይችላል. ፊንጢጣ. ቺም. Acta 1069፣ 89–97 (2019)
Chesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC በፋርማሲዩቲካል ልማት ውስጥ ያለው ሚና። Chesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC በፋርማሲዩቲካል ልማት ውስጥ ያለው ሚና።Chesnut, SM እና Salisbury, JJ UHPLC በፋርማሲዩቲካል ልማት ውስጥ ያለው ሚና።Chesnut, SM እና Salisbury, JJ UHPLC በመድሃኒት እድገት ውስጥ ያለው ሚና. ጄ. ሴፕት ሳይንስ. 30(8)፣ 1183–1190 (2007)።
Wu፣ N. & Clausen፣ AM ለፈጣን መለያየት የ ultrahigh pressure ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች። Wu፣ N. & Clausen፣ AM ለፈጣን መለያየት የ ultrahigh pressure ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች።Wu, N. እና Clausen, AM ለፈጣን መለያየት ከፍተኛ ግፊት ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች. Wu፣ N. & Clausen፣ AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM ለፈጣን መለያየት እጅግ በጣም ከፍተኛ ግፊት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች።Wu, N. እና Clausen, AM ለፈጣን መለያየት ከፍተኛ ግፊት ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች.ጄ. ሴፕቴ ሳይንስ. 30(8)፣ 1167–1182። https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)።
Wren, SA እና Tchelitcheff, P. በመድኃኒት ልማት ውስጥ እጅግ በጣም አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አጠቃቀም። Wren, SA እና Tchelitcheff, P. በመድኃኒት ልማት ውስጥ እጅግ በጣም አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አጠቃቀም።Ren, SA እና Chelischeff, P. በመድኃኒት ልማት ውስጥ እጅግ በጣም ከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊን መጠቀም. Wren፣ SA & Tchelitcheff፣ P.超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren፣ SA እና Tchelitcheff፣ P.Ren, SA እና Chelischeff, P. በመድሀኒት ልማት ውስጥ እጅግ በጣም ጥሩ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ማመልከቻ.ጄ. Chromatography. 1119 (1-2)፣ 140-146። https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)።
ጉ, ኤች እና ሌሎች. የኢንትሮቫይረስን ውጤታማ በሆነ መንገድ ለማፅዳት ከፍተኛ የውስጥ ደረጃ ካለው ዘይት-ውሃ emulsion የተገኘ አንድ ሞኖሊቲክ ማክሮፖረስ ሀይድሮጄል 71. ኬሚካል። ፕሮጀክት. ጆርናል 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. & Wilkins, JA የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በፕሮቲዮቲክስ ውስጥ ያለው ሚና. Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. & Wilkins, JA የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በፕሮቲዮቲክስ ውስጥ ያለው ሚና.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. እና Wilkins, JA በፕሮቲዮቲክስ ውስጥ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና. ሺ፣ Y.፣ Xiang፣ R.፣ Horvath፣ C. & Wilkins፣ JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 ሺ፣ Y.፣ Xiang፣ R.፣ Horvath፣ C. & Wilkins፣ JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. እና Wilkins, JA በፕሮቲዮቲክስ ውስጥ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና.ጄ. Chromatography. አ 1053 (1-2)፣ 27-36 (2004)።
ፈቄቴ፣ ኤስ.፣ ቩተይ፣ ጄ.-ኤል. & Guillarme, D. በተገላቢጦሽ-ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የሕክምና peptides እና ፕሮቲኖች መለያየት ላይ አዲስ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች። & Guillarme, D. በተገላቢጦሽ-ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የሕክምና peptides እና ፕሮቲኖች መለያየት ላይ አዲስ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች። & ጊላርሜ፣ ዲ. обращенной фазой: теория и приложения. & Guillarme, D. ቴራፒዩቲካል peptides እና ፕሮቲኖች በግልባጭ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መለያየት ላይ አዳዲስ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች። & ጊላርሜ፣ ዲ. & ጊላርሜ፣ ዲ.እና Guillarmé, D. ቴራፒዩቲካል peptides እና ፕሮቲኖች በተገላቢጦሽ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የመለየት አዳዲስ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አተገባበር።ጄ. ፋርም ባዮሜዲካል ሳይንስ. ፊንጢጣ. 69፣ 9-27 (2012)።
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC የ RP-RP-HPLC ስርዓትን በመጠቀም የ peptides ባለ ሁለት-ልኬት መለያየት በመጀመሪያ እና ሁለተኛ መለያየት ልኬቶች የተለያየ ፒኤች. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC የ RP-RP-HPLC ስርዓትን በመጠቀም የ peptides ባለ ሁለት-ልኬት መለያየት በመጀመሪያ እና ሁለተኛ መለያየት ልኬቶች የተለያየ ፒኤች.Gilar M., Olivova P., Dali AE እና Gebler JK የ RP-RP-HPLC ስርዓትን በአንደኛው እና በሁለተኛው የመለየት ልኬቶች የተለያየ ፒኤች በመጠቀም የ peptides ሁለት-ልኬት መለያየት.Gilar M., Olivova P., Dali AE እና Gebler JK የ RP-RP-HPLC ስርዓትን በመጠቀም በአንደኛው እና በሁለተኛ ደረጃ መለያየት ልኬቶች ውስጥ የተለያዩ ፒኤች እሴቶችን በመጠቀም የ peptides ባለ ሁለት-ልኬት መለያየት። ጄ. ሴፕት ሳይንስ. 28 (14)፣ 1694-1703 (2005)።
Fellitti, S. et al. ሙሉ በሙሉ ባለ ቀዳዳ እና ላዩን ባለ ቀዳዳ የC18 ቅንጣቶች ከ2µm ያነሱ የታሸጉ ከፍተኛ አፈጻጸም ያላቸውን ክሮማቶግራፊ አምዶች የጅምላ ዝውውር እና የእንቅስቃሴ ባህሪን መመርመር። ጄ. ሴፕት ሳይንስ. 43 (9–10)፣ 1737–1745 (2020)።
Piovesana, S. et al. የዕፅዋት ባዮአክቲቭ peptides መነጠል፣ መለየት እና ማረጋገጥ የቅርብ ጊዜ አዝማሚያዎች እና የትንታኔ ፈተናዎች። ፊንጢጣ. የፍጥረት ፊንጢጣ. ኬሚካል. 410 (15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)።
ሙለር፣ ጄቢ እና ሌሎች የሕይወት መንግሥት የፕሮቲን መልክዓ ምድር። ተፈጥሮ 582 (7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)።
De Luca, K. et al. የድህረ-ህክምና ቴራፒዩቲክ peptides በዝግጅት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ. ሞለኪውሎች (ባዝል፣ ስዊዘርላንድ) 26(15)፣ 4688 (2021)
ያንግ፣ Y. & Geng፣ X. የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች አፕሊኬሽኑ። ያንግ፣ Y. & Geng፣ X. የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች አፕሊኬሽኑ።ያንግ፣ ዩ. እና Geng, X. የተቀላቀለ ሁነታ ክሮሞግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች አተገባበር. ያንግ፣ Y. & Geng፣ X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 ያንግ፣ Y. & Geng፣ X. የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና በባዮፖሊመርስ ውስጥ ያለው አተገባበር።ያንግ፣ ዩ. እና ጂን፣ X. የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች አተገባበር።ጄ. Chromatography. አ 1218(49)፣ 8813–8825 (2011)።