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O lo'o fa'aalia ai se fa'asologa o ata e tolu i le taimi e tasi. Fa'aaoga fa'amau Muamua ma le Sosoo e fa'ase'e ai i ata e tolu i le taimi e tasi, pe fa'aaoga fa'amau ata i le pito i tua e fa'ase'e ai i ata e tolu i le taimi e tasi.
Sa saunia ni vaega silica porous e ala i le metotia sol-gel faatasi ai ma ni nai suiga e maua ai ni vaega lautele-pore. O nei vaega na maua mai i le N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) ma le styrene e ala i le reverse chain transfer-fragmentation (RAFT) polymerization e maua ai ni polyamides fa'apipi'i N-phenylmaleimide. O le vaega tumau o le Styrene (PMP). O koluma u'amea e le gaoia vaapiapi (100 × 1.8 mm le lautele i totonu) na fa'apipi'iina i se slurry packing. O le fa'atinoga chromatographic o le koluma PMP na iloiloina e vavae'ese ai se fa'afefiloi o peptides fa'apitoa e aofia ai peptides e lima (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) ma le tryptic hydrolyzate o le human serum albumin (HAS). I lalo o tulaga sili ona lelei o le elution, o le numera fa'ateorē o papatusi ma se fa'afefiloi o peptides na o'o atu i le 280,000 papatusi/sq.m. I le faʻatusatusaina o le faʻatinoga o le vavaeʻeseina o le koluma ua atiaʻe ma le koluma faapisinisi o le Ascentis Express RP-Amide, na matauina ai o le lelei o le vavaeʻeseina o le koluma PMP e sili atu nai lo le koluma faapisinisi i tulaga o le lelei o le vavaeʻeseina ma le foʻia o le faʻafitauli.
Ua avea le alamanuia o vailaʻau faʻapitoa ma se maketi faʻavaomalo ua faʻalauteleina faʻatasi ai ma le faʻateleina tele o le sea maketi i tausaga talu ai nei. Faatasi ai ma le tuputupu aʻe tele o le alamanuia o vailaʻau faʻapitoa1,2,3 o loʻo i ai se manaʻoga tele mo le auʻiliʻiliga o peptide ma porotini. I le faʻaopoopoga i le peptide faʻamoemoeina, e tele mea leaga e fausia i le taimi o le peptide synthesis, o lea e manaʻomia ai le faʻamamāina o chromatographic e maua ai le mama manaʻomia o le peptide. O le auʻiliʻiliga ma le faʻamatalaina o porotini i vai o le tino, aano, ma sela o se galuega faigata tele ona o le tele o ituaiga e ono mafai ona iloa o loʻo i ai i se faʻataʻitaʻiga e tasi. E ui o le mass spectrometry o se meafaigaluega aoga mo le faʻasologa o peptides ma porotini, afai o ia faʻataʻitaʻiga e faʻaofi saʻo i totonu o le mass spectrometer, o le a le faʻamalieina le vavaeʻeseina. E mafai ona foia lenei faʻafitauli e ala i le faia o le liquid chromatography (LC) aʻo leʻi faia le auʻiliʻiliga MS, lea o le a faʻaitiitia ai le aofaʻi o analytes e ulufale atu i le mass spectrometer i se taimi atofaina4,5,6. I se faʻaopoopoga, e mafai e analytes ona faʻapipiʻi i se vaega vaapiapi i le taimi o le vavaeʻeseina o le vaega vai, ma faʻapipiʻi ai nei analytes ma faʻateleina ai le maaleale o le iloa o le MS. Ua matuā alualu i luma le chromatography vai (LC) i le sefulu tausaga ua tuanaʻi ma ua avea ma metotia e faʻaaogaina lautele mo le auʻiliʻiliga o le proteomic7,8,9,10.
O le reverse-phase liquid chromatography (RP-LC) e faʻaaogaina lautele e faʻamamā ma vavaeʻese ai faʻafefiloi o peptides e faʻaaoga ai le octadecyl-modified silica (ODS) o le stationary phase11,12,13. Peitaʻi, ona o lo latou fausaga lavelave ma le natura amphoteric,14,15 e le mafai e RP stationary phases ona maua ai se vavaeʻesega faamalieina o peptides ma porotini. O le mea lea, o le suʻesuʻeina o peptides ma porotini ma ni vaega polar ma non-polar e manaʻomia ai ni stationary phases ua mamanuina faapitoa e fegalegaleai ma taofia ai nei analytes16. O le mixed chromatography, lea e ofoina atu ai fegalegaleaiga multimodal, e mafai ona avea ma se isi auala i le RP-LC mo le vavaeʻeseina o peptides, porotini, ma isi faʻafefiloi lavelave. E tele vaega tumau fefiloi na saunia ma o koluma na faʻatumuina i nei vaega tumau na faʻaaogaina e vavaeʻese ai peptides ma porotini17,18,19,20,21. Ona o le iai o vaega polar ma vaega non-polar, o vaega tumau fefiloi (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) e talafeagai mo le vavaeeseina o peptides ma porotini22,23,24,25,26,27,28. , o vaega tumau polar intercalated ma vaega polar covalently bonded e faaalia ai le lelei o le vavaeeseina ma le filifiliga tulaga ese mo analytes polar ma non-polar aua o le vavaeeseina e faalagolago i le fegalegaleaiga i le va o le analyte ma le vaega tumau Multimodal interactions 29,30,31,32. Talu ai nei, na maua ai e Zhang et al. 30 vaega tumau behenyl-terminated o polyamines ma vavaeeseina ma le manuia hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ma nisi o analytes. O le mea tumau polar embedded e iai vaega polar ma non-polar, o lea e mafai ai ona faʻaaogaina e vavaeʻese ai peptides ma porotini i vaega hydrophobic ma hydrophilic. O koluma polar inline (e pei o koluma C18 ma le amide inline) e maua i lalo o le igoa tau fefaʻatauaʻiga o koluma Ascentis Express RP-Amide, ae o nei koluma ua naʻo le faʻaaogaina mo le auʻiliʻiliga o le amine 33.
I le suʻesuʻega o loʻo iai nei, o se vaega tumau o le polar embedding (N-phenylmaleimide, embedding polystyrene) na saunia ma iloiloina mo le vavaeʻeseina o peptide ma le tryptic HSA cleavage. O le fuafuaga lenei na faʻaaogaina e saunia ai le vaega tumau. O vaega silica porous na saunia e tusa ai ma faiga na faʻamatalaina i a matou lomiga muamua, faʻatasi ai ma nisi o suiga i fuafuaga sauniuniga 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. O fua faatatau o le urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS ma le aqueous-acetic acid na fetuʻunaʻi e maua ai vaega silica ma pu tetele. Lona lua, o se phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ligand fou na faʻapipiʻiina ma o ona vaega silica na maua na faʻaaogaina e saunia ai vaega tumau polar embedded. O le vaega tumau na maua na faʻapipiʻiina i totonu o se koluma uʻamea e le gaoia (lapopoʻa i totonu 100 × 1.8 mm) e tusa ai ma se fuafuaga faʻapipiʻi faʻalelei. O le faʻapipiʻiina o le koluma e fesoasoani i le gatete faʻamekanika e faʻamautinoa ai se vaega tutusa i totonu o le koluma. Sa iloiloina le koluma ua fa'aputuina mo le vavae'eseina o se fa'afefiloi o peptides e aofia ai peptides e lima (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide). ma tryptic hydrolysates of human serum albumin (HSA). Sa matauina o le fa'afefiloi o peptide ma le HSA tryptic digest ua vavae'eseina ma le lelei ma le lelei. O le lelei o le vavae'eseina o le koluma PMP sa fa'atusatusa i le koluma Ascentis Express RP-Amide. Sa matauina o peptides ma porotini e lelei le fofo ma le maualuga o le lelei o le vavae'eseina i luga o le koluma PMP, ma o le lelei o le vavae'eseina o le koluma PMP e maualuga atu nai lo le koluma Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polyethylene glycol), urea, acetic acid, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, human serum albumin (HSA), ammonium chloride, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), methacryloyl chloride (MC), styrene, 4-hydroxy-TEMPO, benzoyl peroxide (BPO), acetonitrile (ACN) mo le HPLC, methanol, 2-propanol ma le acetone. Kamupani Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, ISA).
O se paluga o le urea (8 kalama), polyethylene glycol (8 kalama) ma le 8 ml o le 0.01 N. acetic acid na fa'agae'etia mo le 10 minute, ma fa'aopoopo i ai le 24 ml o le TMOS i lalo o le aisa. O le paluga tali na fa'avevela i le 40°C mo le 6 itula ona sosoo ai lea ma le 120°C mo le 8 itula i totonu o se autoclave u'amea e le gaoia. Na fa'amamago le vai ma fa'amago le toega i le 70°C mo le 12 itula. O poloka vaivai na fa'amagoina ma le lamolemole ma fa'apala i totonu o se ogaumu i le 550°C mo le 12 itula. E tolu vaega na saunia ma fa'ailoaina e fa'ata'ita'i ai le toe gaosia o le tele o vaega, le tele o pu ma le lautele o le fogaeleele.
Vaega polar ma le vaega tumau mo filifili polystyrene. O le faagasologa o le sauniuniga o loʻo faʻamatalaina i lalo.
O le N-phenylmaleimide (200 mg) ma le methyl vinyl isocyanate (100 mg) na fa'a'asu'uina i totonu o le toluene anhydrous, ona fa'aopoopo lea o le 0.1 ml o le 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) i totonu o le fagu fa'aola e maua ai se copolymer o le phenylmaleimide ma le methyl vinyl isocyanate (PMCP). ) Na fa'avevela le paluga i le 60°C mo le 3 itula, fa'amamā ma fa'amago i totonu o le ogaumu i le 40°C mo le 3 itula.
O fasi silica mago (2 g) na fa'asalalauina i totonu o le toluene mago (100 ml), fa'agae'etia ma fa'asusu mo le 10 minute i totonu o se fagu pito i lalo lapotopoto e 500 ml. O le PMCP (10 mg) na fa'afefiloi i totonu o le toluene ma fa'aopoopo i lalo i le fagu fa'agasolo e ala i se fa'asologa fa'aopoopo. O le paluga na toe fa'avevela i le 100°C mo le 8 itula, fa'amamā, fufulu i le acetone ma fa'amago i le 60°C mo le 3 itula. Ona fa'afefiloi lea o fasi silica e feso'ota'i ma le PMCP (100 g) i totonu o le toluene (200 ml), ma fa'aopoopo i ai le 4-hydroxy-TEMPO (2 ml) i le i ai o le 100 μl o le dibutyltin dilaurate o se mea fa'atupu fa'alavelave. O le paluga na fa'agae'etia i le 50°C mo le 8 itula, fa'amamā ma fa'amago i le 50°C mo le 3 itula.
O le Styrene (1 ml), benzoyl peroxide BPO (0.5 ml) ma fasi silica ua fa'apipi'i i le TEMPO-PMCP (1.5 g) na fa'asalalauina i le toluene ma fa'amamāina i le nitrogen. O le polymerization o le styrene na faia i le 100°C mo le 12 itula. O le oloa na maua na fufuluina i le methanol ma fa'amago i le po atoa i le 60°C. O le fa'atulagaga lautele o le tali atu o lo'o fa'aalia i le ata muamua.
Sa aveese le kasa o faʻataʻitaʻiga i le 393 K mo le 1 itula seʻia maua se mamafa o totoe e itiiti ifo i le 10–3 Torr. O le aofaʻi o le N2 na mitiia i le mamafa faʻatatau P/P0 = 0.99 na faʻaaogaina e fuafua ai le aofaʻi o pu. O le morphology o fasi silica mama ma fasi silica e fusifusia i le ligand na suʻesuʻeina e faʻaaoga ai se microscope electron scanning (Hitachi High Technologies, Tokyo, Iapani). O faʻataʻitaʻiga mago (silica mama ma fasi silica e fusifusia i le ligand) na tuʻu i luga o laʻau alumini e faʻaaoga ai le lipine kaponi. Na faʻaputuina le auro i luga o le faʻataʻitaʻiga e faʻaaoga ai se masini sputtering Q150T, ma se vaega Au e 5 nm le mafiafia na faʻaputuina i luga o le faʻataʻitaʻiga. O lenei mea e faʻaleleia atili ai le lelei o le faiga o le voltage maualalo ma maua ai le faʻasusu malulu lelei. Na faia le suʻesuʻega elemene e faʻaaoga ai se Thermo Electron (Waltham, MA, ISA) Flash EA1112 elemental composition analyzer. Na faʻaaoga se Malvern particle size analyzer (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 e maua ai le tufatufaina o le tele o fasi. O fasi silica e le'i ufiufiina ma fasi silica e fusifusia i le ligand (5 mg ta'itasi) na fa'asalalauina i le 5 ml o le isopropanol, fa'aosoina i le sonication mo le 10 minute, fa'agae'etia mo le 5 minute, ma tu'u i luga o se laulau opitika Mastersizer. O le au'ili'iliga o le Thermogravimetric e fa'atinoina i le fua faatatau o le 5 °C i le minute i le va o le vevela mai le 30 i le 800 °C.
O poutū u'amea e le gaoia ua laina i le alava tioata ma fua (ID 100 × 1.8 mm) na fa'apipi'iina e ala i le metotia o le fa'atumuina o le slurry e mulimuli i le faiga lava e tasi e pei ona i ai i le fa'asinomaga 31. O le poutū u'amea e le gaoia (ua laina i le tioata, ID 100 × 1 .8 mm) ma se auala e alu ese ai o lo'o i ai se frit 1 µm na fa'afeso'ota'i i se masini afifi slurry (Alltech Deerfield, IL, ISA). Saunia se fa'a'au'au o le vaega tumau e ala i le fa'a'au'au o le 150 mg o le vaega tumau i le 1.2 ml o le methanol ma fafaga i totonu o se koluma fa'aputu. Na fa'aaogaina le Methanol o le vaila'au fa'a'au'au slurry ma le vaila'au fa'atonutonu. Fa'apipi'i le koluma e ala i le fa'aogaina o se fa'asologa o le mamafa o le 100 MP mo le 10 minute, 80 MP mo le 15 minute, ma le 60 MP mo le 30 minute. O le faiga o le fa'apipi'iina na fa'aogaina ai ni vibrators koluma gas chromatography se lua (Alltech, Deerfield, IL, ISA) mo le gatete fa'amekanika e fa'amautinoa ai le fa'apipi'iina tutusa o le koluma. Tapuni le packer slurry ma fa'asa'oloto malie le mamafa e puipuia ai le fa'aleagaina o le manoa. Sa motusia le koluma mai le nozzle o le slurry ma sa fa'apipi'i se isi mea fa'apipi'i i le paipa ulufale ma fa'afeso'ota'i i le LC system e fa'ata'ita'i ai lona fa'agaioiga.
O se MLC fa'apitoa na fausia e fa'aaoga ai se pamu LC (10AD Shimadzu, Iapani), se sampler ma se tui fa'asolo 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), se membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), ma se fa'amalama capillary UV-VIS. Masini su'esu'e (UV-2075) ma se microcolumn enamelled. Faaaoga ni paipa feso'ota'i e matua vaapiapi ma pupuu e fa'aitiitia ai le a'afiaga o le fa'alauteleina o le koluma fa'aopoopo. A uma ona fa'atumu le koluma, fa'apipi'i se capillary (50 µm id 365) i le faitoto'a o le 1/16″ reducing junction ma fa'apipi'i se capillary (50 µm) o le reducing junction. O le aoina o fa'amaumauga ma le fa'agasologa o chromatogram e fa'atinoina e fa'aaoga ai le polokalama Multichro 2000. I le 254 nm, o le UV absorbance o mataupu na su'esu'eina na mata'ituina i le 0. O fa'amaumauga chromatographic na au'ili'iliina e fa'aaoga ai le OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin o le toto o le tagata, pauta lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg ua palu faatasi ma le trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 ml) ma le 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ml). Sa fa'agae'e le vaila'au mo le 10 minute ma tu'u i totonu o se vai ta'ele i le 37°C mo le 6 itula, ona fa'amālū lea i le 1 ml o le 0.1% TFA. Fa'amamā le vaila'au ma teu i lalo ifo o le 4°C.
O le vavaeʻeseina o se faʻafefiloi o peptides ma le tryptic digest HSA i luga o se koluma PMP sa iloiloina eseese. Siaki le tryptic hydrolysis o se faʻafefiloi o peptides ma le HSA ua vaeluaina e se koluma PMP ma faʻatusatusa taunuuga i se koluma Ascentis Express RP-Amide. O le aofaʻi o theoretical plates e fuafuaina e faʻaaoga ai le fua faʻatatau lenei:
O ata SEM o fasi silica mama ma fasi silica e fusifusia i le ligand o loʻo faʻaalia i le Ata 2. O ata SEM o fasi silica mama (A, B) o loʻo faʻaalia ai se foliga lapotopoto lea e faʻaloloa ai fasi pe leai foi se tutusa pe a faʻatusatusa i a matou suʻesuʻega na muamua atu. O le fogāeleele o fasi silica e fusifusia e le ligand (C, D) e sili atu le lamolemole nai lo fasi silica mama, lea atonu e mafua mai i filifili polystyrene o loʻo ufiufi ai le fogāeleele o fasi silica.
O ata eletise su'esu'eina o vaega silica mama (A, B) ma vaega silica e fusifusia i le ligand (C, D).
O le tufatufaina o le tele o le vaega o vaega silica mama ma vaega silica e fusifusia i le ligand o loʻo faʻaalia i le Ata 2. 3(A). O le faasologa o le tufatufaina o le tele o vaega o loʻo faʻaalia ai le faʻateleina o le tele o le vaega silica ina ua maeʻa le suiga o vailaʻau (Ata 3A). O faʻamatalaga o le tufatufaina o le tele o vaega silica mai le suʻesuʻega o loʻo iai nei ma le suʻesuʻega talu ai o loʻo faʻatusatusa i le Laulau 1(A). O le tele o le vaega d(0.5) o le PMP e 3.36 µm, pe a faʻatusatusa i le tau o le ad(0.5) o le 3.05 µm i la matou suʻesuʻega talu ai (polystyrene bonded silica particles)34. Ona o le suiga i le fua faatatau o le PEG, urea, TMOS ma le acetic acid i le paluga tali, o le tufatufaina o le tele o vaega o lenei vaega sa vaapiapi pe a faʻatusatusa i la matou suʻesuʻega talu ai. O le tele o vaega o le vaega PMP e laʻititi teisi nai lo le vaega o le polystyrene bound silica particle na matou suʻesuʻeina muamua. O lona uiga o le fa'atinoina o le fogāeleele o fasi silica ma le styrene na na'o se vaega polystyrene (0.97 µm) na fa'aputuina i luga o le fogāeleele silica, ae i le vaega PMP o le mafiafia o le vaega e 1.38 µm.
O le tufatufaina atu o le tele o vaega (A) ma le tufatufaina atu o le tele o pu (B) o vaega silica mama ma vaega silica e fusifusia i le ligand.
O le tele o pu, le voluma o pu, ma le lautele o le pito i luga o fasi silica na faʻaaogaina i lenei suʻesuʻega o loʻo faʻaalia i le Laulau 1 (B). O faʻamatalaga PSD o fasi silica mama ma fasi silica e fusifusia i le ligand o loʻo faʻaalia i Ata 3(B). O taunuuga e tutusa ma la matou suʻesuʻega muamua34. O le tele o pu o fasi silica mama ma fasi silica e fusifusia i le ligand e 310 Å ma le 241 Å, i le faasologa, o loʻo faʻaalia ai ina ua maeʻa le suiga faʻakemikolo, na faʻaitiitia le tele o pu i le 69 Å, e pei ona faʻaalia i le Laulau 1 (B), ma o le shift curve o loʻo faʻaalia i le Ata. O le lautele patino o le pito i luga o fasi silica i le suʻesuʻega o loʻo iai nei e 116 m2/g, lea e tutusa ma la matou suʻesuʻega muamua (124 m2/g). E pei ona faʻaalia i le Laulau 1(B), o le lautele o le pito i luga (m2/g) o fasi silica ina ua maeʻa le suiga faʻakemikolo na faʻaitiitia foʻi mai le 116 m2/g i le 105 m2/g.
O fa'ai'uga o le su'esu'ega elemene o le vaega tumau o lo'o tu'uina atu i le Laulau. 2. O le aofa'i o le kaponi o le vaega tumau o lo'o iai nei e 6.35%, lea e maualalo ifo nai lo la matou su'esu'ega muamua (silica particles e feso'ota'i ma le polystyrene, 7.93%35 ma le 10.21%, i le fa'asologa) 42. O le aofa'i o le kaponi o le vaega tumau o lo'o iai nei o lo'o i lalo, talu ai o nisi o ligands polar e pei o le phenylmaleimide methyl vinyl isocyanate (PCMP) ma le 4-hydroxy-TEMPO ua fa'aaogaina fa'aopoopo i le styrene i le sauniuniga o le SP. O le pasene mamafa o le nitrogen i le vaega tumau o lo'o iai nei e 2.21% pe a fa'atusatusa i le 0.1735 ma le 0.85% i su'esu'ega muamua42. O lona uiga o le vaega tumau o lo'o iai nei e maualuga le pasene mamafa o le nitrogen ona o le phenylmaleimide. E fa'apena fo'i, o oloa (4) ma le (5) e iai le aofa'i o le kaponi e 2.7% ma le 2.9%, i le fa'asologa, ae o le oloa mulimuli (6) e iai le aofa'i o le kaponi e 6.35%, e pei ona fa'aalia i le Laulau 2. Sa fa'aaogaina le au'ili'iliga o le Thermogravimetric (TGA) i le vaega tumau o le PMP e fa'ata'ita'i ai le pa'u o le mamafa, ma o le pi'o o le TGA o lo'o fa'aalia i le Ata 4. O le pi'o o le TGA o lo'o fa'aalia ai le pa'u o le mamafa e 8.6%, lea e ogatasi lelei ma le aofa'i o le kaponi (6.35%), talu ai o lo'o iai i totonu o ligands e le gata o le C, ae fa'apea fo'i ma le N, O ma le H.
O le ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate na filifilia e suia ai le fogāeleele o fasi silica ona o ona vaega polar phenylmaleimide ma vinylisocyanate. E mafai e vaega vinyl isocyanate ona toe tali atu ma le styrene e ala i le ola o le radical polymerization. O le mafuaʻaga lona lua o le faʻaofiina lea o se vaega e iai fegalegaleaiga feololo ma le analyte ma e leai ni fegalegaleaiga eletise malosi i le va o le analyte ma le vaega tumau, talu ai o le vaega phenylmaleimide e leai se totogi faʻapitoa i le pH masani. O le polarity o le vaega tumau e mafai ona pulea e le aofaʻi sili ona lelei o le styrene ma le taimi tali atu o le free radical polymerization. O le laʻasaga mulimuli o le tali atu (free radical polymerization) e taua tele aua e suia ai le polarity o le vaega tumau. Na faia le suʻesuʻega elemene e siaki ai le aofaʻi o le carbon i nei vaega tumau. Ua matauina o le faʻateleina o le aofaʻi o le styrene ma le taimi tali atu e faʻateleina ai le aofaʻi o le carbon o le vaega tumau ma le faʻafeagai. O SPs na saunia i le tele eseese o le styrene e iai uta carbon eseese. I se tulaga tutusa, o nei vaega tumau sa tuu i luga o pou u'amea e le gaoia ma sa siakiina o latou uiga chromatographic (selectivity, resolution, N value, ma isi). E faavae i luga o nei faataitaiga, o se tuufaatasiga sili ona lelei mo le sauniuniga o le vaega tumau PMP sa filifilia ina ia maua ai le polarity pulea ma le taofia lelei o le analyte.
Sa iloiloina fo'i le koluma PMP mo le au'ili'iliga o fa'afefiloi e lima o peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) e fa'aaoga ai le gafatia o le vaega feavea'i. 60/40 (v/v) ACN/vai (0.1% TFA) i le fua fa'atatau o le 80 µl/min. I lalo o tulaga sili ona lelei o le elution (200,000 plates/m), o le aofa'i o plates theoretical (N) i le koluma ta'itasi (100 × 1.8 mm) e 20,000 ± 100. O tau N mo koluma PMP e tolu o lo'o fa'aalia i le Laulau 3 ma o chromatograms o lo'o fa'aalia i le Ata 5A. Su'esu'ega vave i le saoasaoa maualuga o le tafe (700 µl/min) i luga o le koluma PMP, e lima peptides na fa'amamāina i totonu o le minute e tasi, tau sili ona lelei o le N e 13,500 ± 330 i le koluma (100 x 1.8 mm le lautele), e tutusa ma le 135,000 plates/m (Ata 5B). E tolu koluma e tutusa le tele (lapopo'a i totonu 100 x 1.8 mm) na fa'atumuina i ni vaega eseese se tolu o le vaega tumau o le PMP e fa'ata'ita'i ai le toe gaosia. Na fa'amaumauina au'ili'iliga mo koluma ta'itasi e ala i le vaevaeina o le paluga fa'ata'ita'i tutusa i koluma ta'itasi e fa'aaoga ai tulaga sili ona lelei o le elution, numera o plates theoretical N, ma le taimi e taofia ai. O fa'amaumauga o le toe gaosia mo koluma PMP o lo'o fa'aalia i le Laulau 4. O le toe gaosia o le koluma PMP e feso'ota'i lelei ma tau maualalo o le %RSD e pei ona fa'aalia i le Laulau 3.
Vavaeeseina o paluga peptide i luga o le koluma PMP (B) ma le koluma Ascentis Express RP-Amide (A), vaega feaveaʻi 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), fua o le koluma PMP (100 x 1.8 mm id), auiliiliga Faasologa o le Elution o mea faʻaputu: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ma le 5 (leucic acid enkephalin).
O se koluma PMP (lapopo'a i totonu 100 x 1.8 mm) na iloiloina mo le vavaeeseina o le tryptic hydrolyzate o le human serum albumin e ala i le HPLC. O le chromatogram i le Ata 6 o lo'o fa'aalia ai o fa'ata'ita'iga ua vaeluaina lelei ma se iugafono lelei tele. Na iloiloina fofo HSA e fa'aaoga ai le fua fa'atatau o le tafe o le 100 μl/min, o le vaega feavea'i o le 70/30 acetonitrile/vai ma le 0.1% TFA. O le tipiina o le HSA na vaevaeina i ni tumutumu e 17, e pei ona fa'aalia i le chromatogram (Ata 6), e tutusa ma peptide e 17. O le lelei o le vavae'eseina o tumutumu ta'itasi mai le HSA hydrolyzate na fuafuaina ma o lo'o fa'aalia tau i le Laulau 5.
Sa vaevaeina HSA tryptic hydrolysates i luga o le koluma PMP (lapopo'a i totonu 100 x 1.8 mm), fua fa'atatau o le tafe (100 μl/min), vaega feavea'i 60/40 acetonitrile/vai, ma le 0.1% TFA.
lea o le L o le umi o le koluma, o le η o le viscosity o le vaega feaveaʻi, o le ΔP o le back pressure o le koluma, ma o le u o le linear velocity o le vaega feaveaʻi. O le permeability o le koluma PMP e 2.5 × 10–14 m2, o le fua faatatau o le tafe e 25 µl/min, na faʻaaogaina le 60/40 v/v. ACN/vai. O le permeability o le koluma PMP (ID 100 × 1.8 mm) e tutusa ma le matou suʻesuʻega muamua Ref.34. O le permeability o se koluma ua tumu i ni vaega porous e 1.7 × 10 .6 µm, 2.5 × 10-14 m2 mo vaega e 5 µm43. O le mea lea, o le permeability o le vaega PMP e tutusa ma le permeability o vaega autu-shell e 5 μm le lapoʻa.
lea o le Wx o le mamafa o le koluma ua faʻatumuina i le chloroform, o le Wy o le mamafa o le koluma ua faʻatumuina i le methanol, ma o le ρ o le mafiafia o le solvent. Mafiafia o le methanol (ρ = 0.7866) ma le chloroform (ρ = 1.484). O le porosity atoa o le koluma o le silica-C18 particle (100 × 1.8 mm ID)34 ma le matou koluma C18-urea31 na suʻesuʻeina muamua e 0.63 ma le 0.55, i le faasologa. O lona uiga o le iai o urea ligands e faʻaitiitia ai le permeability o le stationary phase. I le isi itu, o le porosity atoa o le koluma PMP (inner diameter 100 × 1.8 mm) e 0.60. E itiiti le permeability o koluma PMP nai lo koluma ua faʻatumuina i silica particles ua fusifusia i le C18 aua i le ituaiga C18 stationary phases, o le C18 ligands e faʻapipiʻi i silica particles i ni linear chains, ae i le ituaiga polystyrene stationary phases e fausia ai se polymer mafiafia e siʻomia ai particles. vaega A. I se faʻataʻitaʻiga masani, o le porosity o le koluma e fuafuaina e pei ona taua i lalo:
I le ata 7A, B o loʻo faʻaalia ai ata o Van Deemter mo se koluma PMP (id 100 x 1.8 mm) ma se koluma Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) i lalo o tulaga tutusa o le elution, 60/40 ACN/H2O ma le 0 .1% TFA 20 µl/min i le 800 µl/min i koluma uma e lua. O tau maualalo o le HETP i le fua faatatau sili ona lelei o le tafe (80 µl/min) o le 2.6 µm ma le 3.9 µm mo le koluma PMP ma le koluma Ascentis Express RP-Amide, i le faasologa lava lea. O tau o le HETP o loʻo faʻaalia ai o le lelei o le vavaeʻeseina o le koluma PMP (100 x 1.8 mm id) e sili atu le maualuga nai lo le koluma Ascentis Express RP-Amide o loʻo maua faapisinisi (100 x 1.8 mm id). O le kalafi van Deemter i le Ata 7(A) o loʻo faʻaalia ai o le faʻaitiitia o le tau N e le o se mea maualuga tele i le faʻateleina o le tafe pe a faʻatusatusa i la matou suʻesuʻega muamua. O le maualuga o le lelei o le vavaeʻeseina o le koluma PMP (id 100 × 1.8 mm) pe a faʻatusatusa i le koluma Ascentis Express RP-Amide e faʻavae i luga o le foliga ma le tele o vaega ma le faiga faigata o le faʻapipiʻiina o koluma o loʻo faʻaaogaina i galuega o loʻo iai nei34.
(A) O le ata o le Van Deemter (HETP vs. saoasaoa fa'asolosolo o le vaega feavea'i) na maua i luga o le koluma PMP (id 100 x 1.8 mm) i le 60/40 ACN/H2O ma le 0.1% TFA. (B) O le ata o le Van Deemter (HETP vs. saoasaoa fa'asolosolo o le vaega feavea'i) na maua i luga o le koluma Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) i le 60/40 ACN/H2O ma le 0.1% TFA.
Sa saunia ma iloiloina se vaega tumau polar o le polystyrene intercalated mo le vavaeeseina o se paluga o peptides synthetic ma le tryptic hydrolyzate o le human serum albumin (HSA) i le high performance liquid chromatography. O le faatinoga chromatographic o koluma PMP mo paluga peptide e sili ona lelei i tulaga o le lelei o le vavaeeseina ma le fofo. O le faaleleia atili o le lelei o le vavaeeseina o koluma PMP e mafua mai i ni mafuaaga se tele e pei o le tele o le silica particle ma le tele o pu, le pulea o le synthesis o vaega tumau, ma mea faigata o le afifiina o koluma. I le faaopoopo atu i le lelei maualuga o le vavaeeseina, o le isi lelei o lenei vaega tumau o le maualalo o le mamafa o le koluma i le maualuga o le tafe. O koluma PMP e matua mafai ona toe gaosia ma e mafai ona faaaogaina e iloilo ai paluga o peptides ma le tryptic digestion o polotini eseese. Matou te fuafua e faaaoga lenei koluma mo le vavaeeseina o vailaau bioactive mai oloa masani, extracts o laau faafomai ma pulouaitu i le liquid chromatography. I le lumanai, o le a iloiloina foi koluma PMP mo le vavaeeseina o polotini ma monoclonal antibodies.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Su'esu'ega i totonu o faiga vavae'ese peptide o le reversed phase chromatography vaega I: Atina'eina o se protocol mo le fa'ailoaina o koluma. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Su'esu'ega i totonu o faiga vavae'ese peptide o le reversed phase chromatography vaega I: Atina'eina o se protocol mo le fa'ailoaina o le koluma.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ma Petersson, P. Suʻesuʻega o Faiga Vavaeeseina o Peptide e ala i le Chromatography Faʻafeagai, Vaega I: Atiinaʻeina o se Faʻatulagaga mo Faʻailogaina o le Koluma. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Su'esu'ega i totonu o faiga vavae'ese peptide o le reversed phase chromatography vaega I: Atina'eina o se protocol mo uiga o le koluma. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Su'esu'ega i totonu o faiga vavae'ese peptide o le reversed phase chromatography vaega I: Atina'eina o se protocol mo uiga o le koluma.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ma Petersson, P. Suʻesuʻega o Faiga Vavaeeseina o Peptide e ala i le Chromatography Faʻafeagai, Vaega I: Atiinaʻeina o se Faʻatulagaga mo Faʻailogaina o le Koluma.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. ma isi. Metotia mo le fatuina o peptides aoga ua faaleleia mo le togafitia o faamai pipisi. Biotechnology. Achievements 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptide fa'apitoa mo togafitiga: Saienisi ma maketi. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptide fa'apitoa mo togafitiga: Saienisi ma maketi.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ma Chreschatyski M. Peptides fa'apitoa fa'afoma'i: saienisi ma maketi.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ma Khreschatsky M. Peptide fa'apitoa mo togafitiga: saienisi ma maketi. sailiga o vaila'au. I le asō 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Chromatography vai proteomic fa'atekonolosi maualuga. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Chromatography vai proteomic fa'atekonolosi maualuga.Tagai F., Smith RD ma Shen Yu. Chromatography vai proteomic maualuluga. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced protein composition 液相色谱。Tagai F., Smith RD ma Shen Yu. Chromatography vai proteomic maualuluga.J. Chromatography. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. E mafai e le advanced liquid chromatography-mass spectrometry ona tu'ufa'atasia le metabolomics lautele ma le proteomics. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Le matafaioi a le UHPLC i le atinaʻeina o vailaʻau. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Le matafaioi a le UHPLC i le atinaʻeina o vailaʻau.Chesnut, SM ma Salisbury, JJ Le matafaioi a le UHPLC i le atinaʻeina o vailaʻau.Chesnut, SM ma Salisbury, JJ Le matafaioi a le UHPLC i le atina'eina o vaila'au. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Vaega taua ma aoga o le chromatography vai maualuga tele mo le vavave o le vavae'eseina. Wu, N. & Clausen, AM Vaega taua ma aoga o le chromatography vai maualuga tele mo le vavave o le vavae'eseina.Wu, N. ma Clausen, AM Vaega taua ma aoga o le chromatography vai maualuga le mamafa mo le vavave ona vavae ese. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Vaega faavae ma aoga o le chromatography vai e matua maualuga le mamafa mo le vavave ona vavae ese.Wu, N. ma Clausen, AM Vaega taua ma aoga o le chromatography vai maualuga le mamafa mo le vavave ona vavae ese.J. Sept. Saienisi. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Fa'aaogāina o le ultra-performance liquid chromatography i le atina'eina o vaila'au. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Fa'aaogāina o le ultra-performance liquid chromatography i le atina'eina o vaila'au.Ren, SA ma Chelischeff, P. Le fa'aaogaina o le ultra high performance liquid chromatography i le atina'eina o vaila'au. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA ma Chelischeff, P. Fa'aaogāina o le ultra-performance liquid chromatography i le atina'eina o vaila'au.J. Chromatography. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. O se hydrogel monolithic macroporous e maua mai i se emulsion suauu-i-le-vai ma se vaega maualuga i totonu mo le faamamaina lelei o le enterovirus 71. Chemical. poloketi. Journal 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Le matafaioi o le chromatography vai i le proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Le matafaioi o le chromatography vai i le proteomics.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ma Wilkins, JA Le matafaioi o le chromatography vai i le proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ma Wilkins, JA Le matafaioi o le chromatography vai i le proteomics.J. Chromatography. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Aga fou i le vavaeʻeseina o peptides ma porotini vailaʻau i le chromatography vai faʻafesagaʻi: Aʻoaʻoga ma faʻaoga. & Guillarme, D. Aga fou i le vavaeʻeseina o peptides ma porotini vailaʻau i le chromatography vai faʻafesagaʻi: Aʻoaʻoga ma faʻaoga. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографира хроматографира: теория и приложения. & Guillarme, D. Aga fou i le vavaeeseina o peptides ma porotini fa'afoma'i e ala i le reverse phase liquid chromatography: a'oa'oga ma fa'aoga. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.ma Guillarmé, D. Aga fou i le vavaeeseina o peptides ma porotini fa'afoma'i e ala i le reverse phase liquid chromatography: a'oa'oga ma fa'aoga.J. Pharm. Saienisi Fa'afoma'i Fa'aola. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Vavae'eseina fa'alua-vaega o peptides e fa'aaoga ai le faiga RP-RP-HPLC ma le pH eseese i fua fa'atatau muamua ma lona lua o le vavae'eseina. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Vavae'eseina fa'alua-vaega o peptides e fa'aaoga ai le faiga RP-RP-HPLC ma le pH eseese i fua fa'atatau muamua ma lona lua o le vavae'eseina.Gilar M., Olivova P., Dali AE ma Gebler JK Vavae'eseina fa'alua-vaega o peptides e fa'aaoga ai le faiga RP-RP-HPLC ma pH eseese i le fua muamua ma le lona lua o le vavae'eseina.Gilar M., Olivova P., Dali AE ma Gebler JK Vaevaega lua-vaega o peptides e faʻaaogaina ai tau pH eseese i le fua muamua ma le lona lua o le vavaeʻeseina e faʻaaoga ai le faiga RP-RP-HPLC. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Su'esu'ega o le fesiitaiga o le tele ma uiga fa'atino o koluma chromatography maualuga-fa'atinoga ua fa'atumuina i vaega C18 e atoatoa le porous ma e superficial porous e la'ititi ifo i le 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Aga masani lata mai ma luʻitau faʻataʻitaʻi i le vavaeʻeseina, faʻailoaina, ma le faʻamaoniaina o peptides bioactive o laʻau. anus. Mea ola anal. Chemical. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB ma isi. Va'aiga fa'a-proteomic o le malo o le ola. Natura 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. ma isi. Togafitiga pe a uma ona faia ni peptide fa'amalolo e ala i le chromatography vai sauniuni. Molecules (Basel, Sueteselani) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography ma ona fa'aoga i biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography ma ona fa'aoga i biopolymers.Yang, Yu. ma Geng, X. Mixed mode chromatography ma lona fa'aoga i biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Mixed mode chromatography ma lona fa'aoga i biopolymers.Yang, Yu. ma Gene, X. Mixed mode chromatography ma lona fa'aoga i biopolymers.J. Chromatography. A 1218(49), 8813–8825 (2011).