Хвала вам што сте посетили Nature.com. Користите верзију прегледача са ограниченом CSS подршком. За најбоље искуство, препоручујемо вам да користите ажурирани прегледач (или да онемогућите режим компатибилности у Internet Explorer-у). Поред тога, како бисмо осигурали континуирану подршку, приказујемо сајт без стилова и JavaScript-а.
Приказује вртешку од три слајда одједном. Користите дугмад Претходно и Следеће да бисте се кретали кроз три слајда истовремено или користите клизаче на крају да бисте се кретали кроз три слајда одједном.
Порозне честице силицијум диоксида су припремљене сол-гел методом са неким модификацијама да би се добиле честице са широким порама. Ове честице су дериватизоване са N-фенилмалеимид-метилвинил изоцијанатом (PMI) и стиреном путем полимеризације са реверзним преносом ланца-фрагментацијом (RAFT) да би се добили полиамиди интеркалирани N-фенилмалеимидом. Стационарна фаза стирена (PMP). Колоне од нерђајућег челика уског пречника (унутрашњи пречник 100 × 1,8 mm) су биле напуњене суспензијом. Хроматографске перформансе PMP колоне су процењене ради раздвајања смеше синтетичких пептида која се састоји од пет пептида (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu аминокиселински енкефалин) и триптички хидролизат хуманог серумског албумина (HAS). Под оптималним условима елуције, теоријски број плоча са смешом пептида достигао је 280.000 плоча/м². Упоређујући перформансе раздвајања развијене колоне са комерцијалном Ascentis Express RP-Amide колоном, примећено је да је ефикасност раздвајања PMP колоне била супериорнија у односу на комерцијалну колону у погледу ефикасности раздвајања и резолуције.
Биофармацеутска индустрија је постала растуће глобално тржиште са значајним повећањем тржишног удела последњих година. Са експлозивним растом биофармацеутске индустрије1,2,3 постоји велика потреба за анализом пептида и протеина. Поред циљног пептида, током синтезе пептида се формирају разне нечистоће, па је потребно хроматографско пречишћавање да би се постигла жељена чистоћа пептида. Анализа и карактеризација протеина у телесним течностима, ткивима и ћелијама је изузетно изазован задатак због великог броја потенцијално детектабилних врста присутних у једном узорку. Иако је масена спектрометрија ефикасан алат за секвенцирање пептида и протеина, ако се такви узорци директно унесу у масени спектрометар, раздвајање ће бити незадовољавајуће. Овај проблем се може решити извођењем течне хроматографије (LC) пре MS анализе, што ће смањити количину аналита који улазе у масени спектрометар у датом тренутку4,5,6. Поред тога, аналити се могу концентрисати у уском региону током раздвајања течне фазе, чиме се ови аналити концентришу и повећава осетљивост MS детекције. Течна хроматографија (ЛЦ) је значајно напредовала током последње деценије и постала је широко коришћена метода за протеомску анализу7,8,9,10.
Течна хроматографија са обрнутом фазом (RP-LC) се широко користи за пречишћавање и раздвајање смеша пептида коришћењем октадецил-модификованог силицијум диоксида (ODS) као стационарне фазе11,12,13. Међутим, због своје сложене структуре и амфотерне природе,14,15 стационарне фазе RP не могу да обезбеде задовољавајуће раздвајање пептида и протеина. Стога, анализа пептида и протеина са поларним и неполарним фрагментима захтева посебно дизајниране стационарне фазе за интеракцију и задржавање ових аналита16. Мешовита хроматографија, која нуди мултимодалне интеракције, може бити алтернатива RP-LC за раздвајање пептида, протеина и других сложених смеша. Припремљено је неколико стационарних фаза мешовитог типа и колоне напуњене овим стационарним фазама коришћене су за раздвајање пептида и протеина17,18,19,20,21. Због присуства поларних и неполарних група, стационарне фазе мешовитог режима (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, поларна интеркалација/RPLC) су погодне за раздвајање пептида и протеина22,23,24,25,26,27,28. , поларне интеркалиране стационарне фазе са ковалентно везаним поларним групама показују добре могућности раздвајања и јединствену селективност за поларне и неполарне аналите, јер раздвајање зависи од интеракције између аналита и стационарне фазе. Мултимодалне интеракције 29,30,31,32. Недавно су Жанг и др. 30 добили стационарне фазе полиамина са бехенилним термином и успешно раздвојили угљоводонике, антидепресиве, флавоноиде, нуклеозиде, естрогене и неке друге аналите. Поларно уграђени стационарни материјал има и поларне и неполарне групе, тако да се може користити за раздвајање пептида и протеина на хидрофобне и хидрофилне делове. Поларне линијске колоне (нпр. C18 колоне са амидним уграђеним делом) доступне су под трговачким називом Ascentis Express RP-Amide колоне, али ове колоне су коришћене само за анализу амина 33.
У овој студији, припремљена је поларно уграђена стационарна фаза (N-фенилмалеимид, уграђени полистирен) и процењена за раздвајање пептида и триптично разлагање HSA. Следећа стратегија је коришћена за припрему стационарне фазе. Порозне честице силицијум диоксида су припремљене према поступцима описаним у нашим претходним публикацијама, са неким променама у шемама припреме 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Односи урее, полиетилен гликола (PEG), TMOS и водено-сирћетне киселине су подешени да би се добиле честице силицијум диоксида са великим величинама пора. Друго, синтетисан је нови фенилмалеимид-метилвинил изоцијанатни лиганд и његове дериватизоване честице силицијум диоксида су коришћене за припрему поларно уграђених стационарних фаза. Добијена стационарна фаза је упакована у колону од нерђајућег челика (унутрашњи пречник 100 × 1,8 mm) према оптимизованој шеми паковања. Паковање колоне је потпомогнуто механичким вибрацијама како би се осигурао једноличан слој унутар колоне. Напуњена колона је процењена за раздвајање смеше пептида која се састоји од пет пептида (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, леуцин-енкефалин пептид) и триптичних хидролизата људског серумског албумина (HSA). Примећено је да се смеша пептида и триптични дигест HSA раздвајају са добром резолуцијом и ефикасношћу. Ефикасност раздвајања PMP колоне упоређена је са ефикасношћу Ascentis Express RP-Amide колоне. Примећено је да пептиди и протеини имају добру резолуцију и високу ефикасност раздвајања на PMP колони, а ефикасност раздвајања PMP колоне је већа од ефикасности раздвајања Ascentis Express RP-Amide колоне.
ПЕГ (полиетилен гликол), уреа, сирћетна киселина, триметоксиортосиликат (ТМОС), триметилхлоросилан (ТМЦС), трипсин, хумани серумски албумин (ХСА), амонијум хлорид, уреа, хексаметилметакрилоилдисилазан (ХМДС), метакрилоил хлорид (МЦ), стирен, 4-хидрокси-ТЕМПО, бензоил пероксид (БПО), ацетонитрил (АЦН) за ХПЛЦ, метанол, 2-пропанол и ацетон. Компанија Сигма-Олдрич (Сент Луис, Мисури, САД).
Смеша урее (8 г), полиетилен гликола (8 г) и 8 мл 0,01 N сирћетне киселине мешана је 10 минута, а затим је додато 24 мл ТМОС-а уз хлађење ледом. Реакциона смеша је загрејана на 40°C током 6 сати, а затим на 120°C током 8 сати у аутоклаву од нерђајућег челика. Вода је декантирана, а остатак је сушен на 70°C током 12 сати. Осушени меки блокови су глатко млевени и калцинисани у пећи на 550°C током 12 сати. Припремљене су и окарактерисане три серије како би се тестирала поновљивост величина честица, величине пора и површине.
Поларна група и стационарна фаза за полистиренске ланце. Поступак припреме је описан у наставку.
N-фенилмалеимид (200 мг) и метил винил изоцијанат (100 мг) су растворени у безводном толуену, а затим је у реакциону посуду додато 0,1 мл 2,2′-азоизобутиронитрила (AIBN) да би се добио кополимер фенилмалеимида и метил винил изоцијаната (PMCP). ) Смеша је загрејана на 60°C током 3 сата, филтрирана и сушена у рерни на 40°C током 3 сата.
Осушене честице силицијум диоксида (2 г) су дисперговане у сувом толуену (100 мл), мешане и сонициране 10 минута у тиквици са округлим дном од 500 мл. ПМЦП (10 мг) је растворен у толуену и додат кап по кап у реакциону тиквицу преко левка за додавање. Смеша је рефлуксована на 100°C током 8 сати, филтрирана, испрана ацетоном и сушена на 60°C током 3 сата. Затим су честице силицијум диоксида повезане са ПМЦП (100 г) растворене у толуену (200 мл), а 4-хидрокси-ТЕМПО (2 мл) је додат у присуству 100 μл дибутилтин дилаурата као катализатора. Смеша је мешана на 50°C током 8 сати, филтрирана и сушена на 50°C током 3 сата.
Стирен (1 ml), бензоил пероксид BPO (0,5 ml) и честице силицијум диоксида везане за TEMPO-PMCP (1,5 g) су дисперговане у толуену и продуване азотом. Полимеризација стирена је спроведена на 100°C током 12 сати. Добијени производ је испран метанолом и сушен преко ноћи на 60°C. Општа шема реакције је приказана на слици један.
Узорци су дегасирани на 393 K током 1 сата док се није добио резидуални притисак мањи од 10–3 Torr. Количина N2 адсорбована при релативном притиску P/P0 = 0,99 коришћена је за одређивање укупне запремине пора. Морфологија чистих и лиганд-везаних честица силицијум диоксида испитана је помоћу скенирајућег електронског микроскопа (Hitachi High Technologies, Токио, Јапан). Суви узорци (чисти силицијум диоксид и честице силицијум диоксида везане за лиганд) постављени су на алуминијумске шипке помоћу угљеничне траке. Злато је нането на узорак помоћу уређаја за распршивање Q150T, а на узорак је нанет слој Au дебљине 5 nm. Ово побољшава ефикасност процеса ниског напона и обезбеђује фино хладно прскање. Елементарна анализа је извршена помоћу анализатора елементарног састава Thermo Electron (Waltham, MA, САД) Flash EA1112. За добијање расподеле величине честица коришћен је анализатор величине честица Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000. Необложене честице силицијум диоксида и честице силицијум диоксида везане за лиганд (5 мг свака) су дисперговане у 5 мл изопропанола, сонициране 10 минута, мешане 5 минута и стављене на оптичку клупу Mastersizer. Термогравиметријска анализа се спроводи брзином од 5 °C у минути у температурном опсегу од 30 до 800 °C.
Колоне од нерђајућег челика са уским пречником обложеним стакленим влакнима, димензија (УД 100 × 1,8 мм), су пуњене методом пуњења суспензијом, пратећи исти поступак као у референци 31. Колона од нерђајућег челика (обложена стаклом, УД 100 × 1,8 мм) и излаз који садржи фриту од 1 µм повезани су са машином за паковање суспензијом (Alltech Deerfield, IL, САД). Припремити суспензију стационарне фазе суспендовањем 150 мг стационарне фазе у 1,2 мл метанола и убацивањем у резервоарску колону. Метанол је коришћен као растварач за суспензију и контролни растварач. Напунити колону применом низа притиска од 100 MP током 10 минута, 80 MP током 15 минута и 60 MP током 30 минута. У процесу паковања коришћена су два вибратора за гасну хроматографију (Alltech, Deerfield, IL, САД) за механичке вибрације како би се осигурало равномерно паковање колоне. Затворити пакер за суспензију и полако отпустити притисак како би се спречило оштећење низа. Колона је одвојена од млазнице за суспензију, а други фитинг је причвршћен на улаз и повезан са LC системом како би се тестирао њен рад.
Прилагођени MLC је конструисан коришћењем LC пумпе (10AD Shimadzu, Јапан), узорковача са петљом за убризгавање од 50 nL (Valco (САД) C14 W.05), мембранског дегазера (Shimadzu DGU-14A) и UV-VIS капиларног прозора. Детекторски уређај (UV-2075) и емајлирана микроколона. Користите веома уске и кратке спојне цеви да бисте минимизирали ефекат додатног ширења колоне. Након пуњења колоне, инсталирајте капилар (50 µm уд 365) на излазу редукционог споја од 1/16″ и инсталирајте капилар (50 µm) редукционог споја. Прикупљање података и обрада хроматограма се врше помоћу софтвера Multichro 2000. На 254 nm, UV апсорбанција испитаних аналита је праћена на 0. Хроматографски подаци су анализирани коришћењем OriginPro8 (Northampton, MA).
Хумани серумски албумин, лиофилизовани прах, ≥ 96% (електрофореза на агарозном гелу) 3 mg помешан са трипсином (1,5 mg), 4,0 M уреом (1 ml) и 0,2 M амонијум бикарбонатом (1 ml). Раствор је мешан 10 минута и држан у воденом купатилу на 37°C током 6 сати, а затим је додато 1 ml 0,1% TFA. Филтрирати раствор и чувати на температури испод 4°C.
Раздвајање смеше пептида и триптинског дигеста HSA на PMP колони је процењено одвојено. Проверите триптичну хидролизу смеше пептида и HSA раздвојених PMP колоном и упоредите резултате са Ascentis Express RP-Amide колоном. Број теоријских плоча се израчунава помоћу следеће једначине:
СЕМ снимци честица чистог силицијум диоксида и честица силицијум диоксида везаних за лиганд приказани су на слици 2. СЕМ снимци честица чистог силицијум диоксида (А, Б) показују сферни облик у коме су честице издужене или имају неправилну симетрију у поређењу са нашим претходним студијама. Површина честица силицијум диоксида везаних за лиганд (Ц, Д) је глађа од површине честица чистог силицијум диоксида, што може бити последица полистиренских ланаца који прекривају површину честица силицијум диоксида.
Скенирајуће електронске микрографије честица чистог силицијум диоксида (А, Б) и честица силицијум диоксида везаних за лиганд (Ц, Д).
Расподела величине честица чистог силицијум диоксида и честица силицијум диоксида везаних за лиганд приказана је на слици 2.3(А). Криве расподеле величине честица волуметријске величине показале су да се величина честица силицијум диоксида повећала након хемијске модификације (слика 3А). Подаци о расподели величине честица силицијум диоксида из тренутне студије и претходне студије упоређени су у Табели 1(А). Волуметријска величина честица d(0,5) ПМП-а била је 3,36 µм, у поређењу са вредношћу ad(0,5) од 3,05 µм у нашој претходној студији (честице силицијум диоксида везане за полистирен)34. Због промене односа PEG-а, урее, TMOS-а и сирћетне киселине у реакционој смеши, расподела величине честица ове серије била је ужа у поређењу са нашом претходном студијом. Величина честица ПМП фазе је нешто већа од величине честица силицијум диоксида везаних за полистирен коју смо раније проучавали. То значи да је површинска функционализација честица силицијум диоксида стиреном депоновала само слој полистирена (0,97 µm) на површини силицијум диоксида, док је у PMP фази дебљина слоја била 1,38 µm.
Расподела величине честица (А) и расподела величине пора (Б) честица чистог силицијум диоксида и честица силицијум диоксида везаних за лиганд.
Величина пора, запремина пора и површина честица силицијум диоксида коришћених у овој студији приказане су у Табели 1 (Б). PSD профили чистих честица силицијум диоксида и честица силицијум диоксида везаних за лиганд приказани су на Слици 3 (Б). Резултати су били упоредиви са нашом претходном студијом34. Величине пора чистих и честица силицијум диоксида везаних за лиганд биле су 310 Å и 241 Å, респективно, што указује да се након хемијске модификације величина пора смањила за 69 Å, као што је приказано у Табели 1 (Б), а крива померања је приказана на Слици 3. Специфична површина честица силицијум диоксида у тренутној студији је 116 м²/г, што је упоредиво са нашом претходном студијом (124 м²/г). Као што је приказано у Табели 1 (Б), површина (м²/г) честица силицијум диоксида након хемијске модификације такође се смањила са 116 м²/г на 105 м²/г.
Резултати елементарне анализе стационарне фазе приказани су у Табели 2. Садржај угљеника у тренутној стационарној фази је 6,35%, што је ниже него у нашој претходној студији (честице силицијум диоксида повезане са полистиреном, 7,93%35 и 10,21%, респективно)42. Садржај угљеника у тренутној стационарној фази је испод, пошто су неки поларни лиганди као што су фенилмалеимид метил винил изоцијанат (PCMP) и 4-хидрокси-TEMPO коришћени поред стирена у припреми SP. Тежински проценат азота у тренутној стационарној фази је 2,21% у поређењу са 0,1735 и 0,85% у претходним студијама42. То значи да тренутна стационарна фаза има висок тежински проценат азота због фенилмалеимида. Слично томе, производи (4) и (5) имају садржај угљеника од 2,7% и 2,9%, респективно, док коначни производ (6) има садржај угљеника од 6,35%, као што је приказано у Табели 2. Термогравиметријска анализа (ТГА) је коришћена на стационарној фази ПМП-а за тестирање губитка тежине, а ТГА крива је приказана на Слици 4. ТГА крива показује губитак тежине од 8,6%, што је у доброј сагласности са садржајем угљеника (6,35%), пошто лиганди садрже не само C, већ и N, O и H.
Лиганд фенилмалеимид-метилвинил изоцијанат је изабран за модификацију површине честица силицијум диоксида због својих поларних фенилмалеимидних и винилизоцијанатних група. Винилизоцијанатне групе могу даље реаговати са стиреном путем живе радикалне полимеризације. Други разлог је уметање групе која има умерене интеракције са аналитом и нема јаке електростатичке интеракције између аналита и стационарне фазе, пошто фенилмалеимидни део нема виртуелно наелектрисање при нормалном pH. Поларитет стационарне фазе може се контролисати оптималном количином стирена и временом реакције полимеризације слободних радикала. Завршни корак реакције (полимеризација слободних радикала) је критичан јер мења поларитет стационарне фазе. Елементарна анализа је спроведена да би се проверио садржај угљеника у овим стационарним фазама. Примећено је да повећање количине стирена и времена реакције повећава садржај угљеника у стационарној фази и обрнуто. SP припремљени са различитим концентрацијама стирена имају различито оптерећење угљеником. Слично томе, ове стационарне фазе су стављене на колоне од нерђајућег челика и проверене су њихове хроматографске карактеристике (селективност, резолуција, N вредност, итд.). На основу ових експеримената, изабран је оптимизован састав за припрему стационарне фазе ПМП-а како би се обезбедила контролисана поларност и добро задржавање аналита.
ПМП колона је такође процењена за анализу пет смеша пептида (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, леуцин-енкефалин) користећи капацитет мобилне фазе 60/40 (v/v) ACN/вода (0,1% TFA) при брзини протока од 80 µl/min. Под оптималним условима елуције (200.000 плоча/m²), број теоријских плоча (N) по колони (100 × 1,8 mm) је 20.000 ± 100. Вредности N за три ПМП колоне су приказане у Табели 3, а хроматограми су приказани на Слици 5A. Брза анализа при великој брзини протока (700 µl/min) на PMP колони, пет пептида елуирано у року од једног минута, одлична N вредност од 13.500 ± 330 по колони (пречник 100 x 1,8 mm), што је еквивалентно 135.000 плоча/m (Сл. 5B). Три колоне исте величине (унутрашњи пречник 100 x 1,8 mm) су напуњене са три различите серије PMP стационарне фазе ради тестирања репродуктивности. Аналити су забележени за сваку колону одвајањем исте тест смеше на свакој колони користећи оптималне услове елуције, број теоријских плоча N и време задржавања. Подаци о репродуктивности за PMP колоне су приказани у Табели 4. Репродуктивност PMP колоне је добро корелирала са веома ниским вредностима %RSD као што је приказано у Табели 3.
Раздвајање пептидних смеша на PMP колони (Б) и Ascentis Express RP-Amide колони (А), мобилна фаза 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), димензије PMP колоне (100 x 1,8 mm унутрашњи пречник), анализа. Редослед елуирања једињења: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) и 5 ​​(леуцинска киселина енкефалин).
ПМП колона (унутрашњи пречник 100 x 1,8 mm) је процењена за раздвајање триптинског хидролизата хуманог серумског албумина помоћу HPLC. Хроматограм на слици 6 показује да су узорци добро раздвојени са веома добром резолуцијом. Раствори HSA су анализирани коришћењем брзине протока од 100 μl/min, мобилне фазе 70/30 ацетонитрил/вода и 0,1% TFA. Разлагање HSA је подељено на 17 пикова, као што је приказано на хроматограму (слика 6), што одговара 17 пептида. Ефикасност раздвајања појединачних пикова од HSA хидролизата је израчуната и вредности су приказане у табели 5.
Триптички хидролизати HSA су раздвојени на PMP колони (унутрашњи пречник 100 x 1,8 mm), брзина протока (100 μl/min), мобилна фаза 60/40 ацетонитрил/вода и 0,1% TFA.
где је L дужина колоне, η вискозност мобилне фазе, ΔP је повратни притисак колоне, а u је линеарна брзина мобилне фазе. Пропустљивост PMP колоне била је 2,5 × 10–14 м2, брзина протока је била 25 µl/min, коришћено је 60/40 v/v. ACN/вода. Пропустљивост PMP колоне (ID 100 × 1,8 mm) била је слична оној из наше претходне студије Ref.34. Пропустљивост колоне испуњене површински порозним честицама је 1,7×10,6 µm, 2,5×10-14 м2 за честице од 5 µm43. Стога је пропустљивост PMP фазе слична пропустљивости честица језгро-љуска величине 5 μm.
где је Wx маса колоне напуњене хлороформом, Wy је маса колоне напуњене метанолом, а ρ је густина растварача. Густина метанола (ρ = 0,7866) и хлороформа (ρ = 1,484). Укупна порозност колоне са честицама силицијум диоксида-C18 (100 × 1,8 mm унутрашњи пречник)34 и наше претходно проучаване колоне C18-уреа31 била је 0,63 и 0,55, респективно. То значи да присуство лиганда урее смањује пропустљивост стационарне фазе. С друге стране, укупна порозност PMP колоне (унутрашњи пречник 100 × 1,8 mm) је 0,60. PMP колоне су мање пропустљиве од колона напуњених честицама силицијум диоксида везаним за C18, јер су у стационарним фазама типа C18 лиганди C18 везани за честице силицијум диоксида у линеарним ланцима, док се у стационарним фазама типа полистирена око честица формира релативно дебели полимер. слој А. У типичном експерименту, порозност колоне се израчунава на следећи начин:
На слици 7А и Б приказани су Ван Демтерови дијаграми за ПМП колону (унутрашњи пречник 100 x 1,8 мм) и Асценстис Експрес РП-Амид колону (унутрашњи пречник 100 x 1,8 мм) под истим условима елуције, 60/40 ACN/H2O и 0,1% TFA од 20 µl/min до 800 µl/min на обе колоне. Минималне вредности ХЕТП-а при оптималној брзини протока (80 µl/min) биле су 2,6 µm и 3,9 µm за ПМП колону и Асценстис Експрес РП-Амид колону, респективно. Вредности ХЕТП-а показују да је ефикасност раздвајања ПМП колоне (унутрашњи пречник 100 x 1,8 мм) много већа од ефикасности комерцијално доступне Асценстис Експрес РП-Амид колоне (унутрашњи пречник 100 x 1,8 мм). Ван Демтеров графикон на слици 7(А) показује да смањење вредности N није значајно веће са повећањем протока у поређењу са нашом претходном студијом. Већа ефикасност раздвајања PMP колоне (уд 100 × 1,8 mm) у поређењу са Ascentis Express RP-Amide колоном заснива се на побољшаном облику и величини честица и софистицираном поступку паковања колоне који се користи у тренутном раду34.
(А) Ван Демтеров дијаграм (HETP у односу на линеарну брзину мобилне фазе) добијен на PMP колони (унутрашњи пречник 100 x 1,8 mm) у 60/40 ACN/H2O са 0,1% TFA. (Б) Ван Демтеров дијаграм (HETP у односу на линеарну брзину мобилне фазе) добијен на Ascentis Express RP-Amide колони (унутрашњи пречник 100 x 1,8 mm) у 60/40 ACN/H2O са 0,1% TFA.
Поларна стационарна фаза интеркалираног полистирена је припремљена и процењена за раздвајање смеше синтетичких пептида и триптинског хидролизата хуманог серумског албумина (HSA) у течној хроматографији високих перформанси. Хроматографске перформансе PMP колона за смеше пептида су одличне у погледу ефикасности раздвајања и резолуције. Побољшана ефикасност раздвајања PMP колона је последица неколико разлога као што су величина честица силицијум диоксида и величина пора, контролисана синтеза стационарних фаза и сложени материјали за паковање колоне. Поред високе ефикасности раздвајања, још једна предност ове стационарне фазе је низак повратни притисак у колони при високим брзинама протока. PMP колоне су високо репродуцибилне и могу се користити за анализу смеша пептида и триптинске дигестије различитих протеина. Намеравамо да користимо ову колону за раздвајање биоактивних једињења из природних производа, екстраката лековитих биљака и печурака у течној хроматографији. У будућности ће PMP колоне такође бити процењене за раздвајање протеина и моноклонских антитела.
Филд, ЈК, Ојерби, МР, Лау, Ј., Тегерсен, Х. и Петерсон, П. Истраживање система за раздвајање пептида обрнуто-фазном хроматографијом, део I: Развој протокола за карактеризацију колоне. Филд, ЈК, Ојерби, МР, Лау, Ј., Тегерсен, Х. и Петерсон, П. Истраживање система за раздвајање пептида обрнуто-фазном хроматографијом, део I: Развој протокола за карактеризацију колоне.Филд, ЈК, Оверби, МР, Лау, Ј., Тогерсен, Х. и Петерсон, П. Истраживање система за раздвајање пептида помоћу реверзно-фазне хроматографије, Део I: Развој протокола за карактеризацију колоне. Филд, ЈК, Ојерби, МР, Лау, Ј., Тегерсен, Х. и Петерсон, П. Истраживање система за раздвајање пептида обрнуто-фазном хроматографијом, део I: Развој протокола за карактеристике колоне. Филд, ЈК, Ојерби, МР, Лау, Ј., Тегерсен, Х. и Петерсон, П. Истраживање система за раздвајање пептида обрнуто-фазном хроматографијом, део I: Развој протокола за карактеристике колоне.Филд, ЈК, Оверби, МР, Лау, Ј., Тогерсен, Х. и Петерсон, П. Истраживање система за раздвајање пептида помоћу реверзно-фазне хроматографије, Део I: Развој протокола за карактеризацију колоне.Ј.色谱法。 1603, 113-129。 хттпс://дои.орг/10.1016/ј.цхрома.2019.05.038(2019)。
Гомез, Б. и др. Методе за стварање побољшаних активних пептида за лечење заразних болести. Биотехнологија. Достигнућа 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Влиге, П., Лисовски, В., Мартинез, Ј. и Хрестчатиски, М. Синтетички терапеутски пептиди: наука и тржиште. Влиге, П., Лисовски, В., Мартинез, Ј. и Хрестчатиски, М. Синтетички терапеутски пептиди: наука и тржиште.Влиге П, Лисовски В, Мартинез Ј и Хресчатиски М. Синтетички терапеутски пептиди: наука и тржиште.Влиге П, Лисовски В, Мартинез Ј и Крешацки М. Синтетички терапеутски пептиди: наука и тржиште. откриће лекова. Данас 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Сје, Ф., Смит, Р. Д. и Шен, Ј. Напредна протеомска течна хроматографија. Сје, Ф., Смит, Р. Д. и Шен, Ј. Напредна протеомска течна хроматографија.Видети Ф., Смит РД и Шен Ју. Напредна протеомска течна хроматографија. Ксие, Ф., Смитх, РД & Схен, И. 高级蛋白质组液相色谱。 Ксие, Ф., Смитх, РД & Схен, И. Напредни састав протеина 液相色谱。Видети Ф., Смит РД и Шен Ју. Напредна протеомска течна хроматографија.J. Chromatography. A 1261, 78–90 (2012).
Лиу, В. и др. Напредна течна хроматографија-масена спектрометрија је у стању да комбинује широко засновану метаболомику и протеомику. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Чеснут, С.М. и Салисбери, Џ.Џ. Улога UHPLC-а у фармацеутском развоју. Чеснут, С.М. и Салисбери, Џ.Џ. Улога UHPLC-а у фармацеутском развоју.Чеснут, СМ и Салисбери, ЈЈ Улога UHPLC-а у фармацеутском развоју.Чеснат, С.М. и Салисбери, Џ.Џ. Улога UHPLC-а у развоју лекова. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Ву, Н. и Клаузен, АМ Фундаментални и практични аспекти течне хроматографије ултрависоког притиска за брза раздвајања. Ву, Н. и Клаузен, АМ Фундаментални и практични аспекти течне хроматографије ултрависоког притиска за брза раздвајања.Ву, Н. и Клаузен, АМ Фундаментални и практични аспекти течне хроматографије високог притиска за брзо раздвајање. Ву, Н. & Цлаусен, АМ 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Ву, Н. и Клаузен, АМ Основни и практични аспекти течне хроматографије ултрависоког притиска за брзо раздвајање.Ву, Н. и Клаузен, АМ Фундаментални и практични аспекти течне хроматографије високог притиска за брзо раздвајање.J. Sept. Science. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Врен, СА и Челичев, П. Употреба ултра-перформансне течне хроматографије у фармацеутском развоју. Врен, СА и Челичев, П. Употреба ултра-перформансне течне хроматографије у фармацеутском развоју.Рен, СА и Челишеф, П. Употреба ултрависоко ефикасне течне хроматографије у фармацеутском развоју. Врен, СА & Тцхелицхефф, П. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Рен, СА и Челичев, П.Рен, СА и Челишеф, П. Примена ултра-перформансне течне хроматографије у развоју лекова.Ј. Хроматографија. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Гу, Х. и др. Монолитни макропорозни хидрогел изведен из емулзије уље у води са високим садржајем унутрашње фазе за ефикасно пречишћавање ентеровируса 71. Chemical. project. Journal 401, 126051 (2020).
Ши, Ј., Сјанг, Р., Хорват, К. и Вилкинс, ЈА Улога течне хроматографије у протеомици. Ши, Ј., Сјанг, Р., Хорват, К. и Вилкинс, ЈА Улога течне хроматографије у протеомици.Ши, Ј., Сјанг, Р., Хорват, К. и Вилкинс, ЈА Улога течне хроматографије у протеомици. Схи, И., Ксианг, Р., Хорватх, Ц. & Вилкинс, ЈА 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Схи, И., Ксианг, Р., Хорватх, Ц. & Вилкинс, ЈАШи, Ј., Сјанг, Р., Хорват, К. и Вилкинс, ЈА Улога течне хроматографије у протеомици.Ј. Хроматографија. А 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Фекете, С., Вутеј, Ж.-Л. & Guillarme, D. Нови трендови у сепарацијама терапеутских пептида и протеина обрнуто-фазном течном хроматографијом: Теорија и примене. & Guillarme, D. Нови трендови у сепарацијама терапеутских пептида и протеина обрнуто-фазном течном хроматографијом: Теорија и примене. & Гуилларме, Д. Новие тенденции в разделении терапеутических пептидов и белков с помосьу жидкостној хроматографии с обрасенниј фазој: теориа и приложениа. & Guillarme, D. Нови трендови у раздвајању терапеутских пептида и протеина помоћу течне хроматографије са обрнутом фазом: теорија и примене. & Гуилларме, Д. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Гиљарме, Д.и Гиларме, Д. Нови трендови у раздвајању терапеутских пептида и протеина помоћу течне хроматографије са обрнутом фазом: теорија и примене.J. Pharm. Biomedical Science. anus. 69, 9–27 (2012).
Гилар, М., Оливова, П., Дејли, А.Е. и Геблер, ЈЦ. Дводимензионално раздвајање пептида коришћењем RP-RP-HPLC система са различитим pH у првој и другој димензији раздвајања. Гилар, М., Оливова, П., Дејли, А.Е. и Геблер, ЈЦ. Дводимензионално раздвајање пептида коришћењем RP-RP-HPLC система са различитим pH у првој и другој димензији раздвајања.Гилар М., Оливова П., Дали АЕ и Геблер ЈК Дводимензионално раздвајање пептида коришћењем RP-RP-HPLC система са различитим pH у првој и другој димензији раздвајања.Гилар М., Оливова П., Дали АЕ и Геблер ЈК Дводимензионално раздвајање пептида коришћењем различитих pH вредности у првој и другој димензији раздвајања коришћењем RP-RP-HPLC система. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Фелити, С. и др. Истраживање преноса масе и кинетичких карактеристика колона високоефикасне хроматографије напуњених потпуно порозним и површински порозним C18 честицама мањим од 2 µm. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Пиовесана, С. и др. Недавни трендови и аналитички изазови у изолацији, идентификацији и валидацији биљних биоактивних пептида. anus. Creature anal. Chemical. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Милер, ЈБ и др. Протеомски пејзаж царства живота. Nature 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
Де Лука, К. и др. Накнадни третман терапијских пептида препаративном течном хроматографијом. Molecules (Базел, Швајцарска) 26(15), 4688 (2021).
Јанг, Ј. и Генг, Кс. Мешовита хроматографија и њена примена на биополимере. Јанг, Ј. и Генг, Кс. Мешовита хроматографија и њена примена на биополимере.Јанг, Ју. и Генг, X. Мешана хроматографија и њена примена на биополимере. Ианг, И. & Генг, Кс. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Јанг, Ј. и Генг, Кс. Мешана хроматографија и њена примена у биополимерима.Јанг, Ју. и Џин, X. Мешана хроматографија и њена примена на биополимере.Ј. Хроматографија. А 1218(49), 8813–8825 (2011).