Nature.com-এ আসার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ। আপনি এমন একটি ব্রাউজার সংস্করণ ব্যবহার করছেন যেখানে CSS সাপোর্ট সীমিত। সর্বোত্তম অভিজ্ঞতার জন্য, আমরা আপনাকে একটি হালনাগাদ ব্রাউজার ব্যবহার করার পরামর্শ দিচ্ছি (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে কম্প্যাটিবিলিটি মোড নিষ্ক্রিয় করুন)। এছাড়াও, নিরবচ্ছিন্ন সাপোর্ট নিশ্চিত করার জন্য, আমরা সাইটটি স্টাইল এবং জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই প্রদর্শন করছি।
একসাথে তিনটি স্লাইডের একটি ক্যারোসেল প্রদর্শন করে। একবারে তিনটি স্লাইডের মধ্যে দিয়ে যাওয়ার জন্য আগের এবং পরের বাটনগুলো ব্যবহার করুন, অথবা শেষে থাকা স্লাইডার বাটনগুলো ব্যবহার করে একবারে তিনটি স্লাইডের মধ্যে দিয়ে যান।
প্রশস্ত-ছিদ্রযুক্ত কণা পাওয়ার জন্য সল-জেল পদ্ধতিতে কিছু পরিবর্তন এনে ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণা প্রস্তুত করা হয়েছিল। এই কণাগুলোকে রিভার্স চেইন ট্রান্সফার-ফ্র্যাগমেন্টেশন (RAFT) পলিমারাইজেশনের মাধ্যমে এন-ফেনিলম্যালিইমাইড-মিথাইলভিনাইল আইসোসায়ানেট (PMI) এবং স্টাইরিন দিয়ে ডেরিভেটাইজ করে এন-ফেনিলম্যালিইমাইড ইন্টারক্যালেটেড পলিমাইড তৈরি করা হয়। স্টাইরিন (PMP) ছিল স্থির দশা। সরু ছিদ্রযুক্ত স্টেইনলেস স্টিলের কলাম (১০০ × ১.৮ মিমি অভ্যন্তরীণ ব্যাস) একটি স্লারি প্যাকিং দিয়ে ভরা হয়েছিল। পাঁচটি পেপটাইড (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu অ্যামিনো অ্যাসিড এনকেফ্যালিন) নিয়ে গঠিত কৃত্রিম পেপটাইডের একটি মিশ্রণ এবং মানব সিরাম অ্যালবুমিনের ট্রিপটিক হাইড্রোলাইজেট (HAS) পৃথক করার জন্য PMP কলামের ক্রোমাটোগ্রাফিক কার্যকারিতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। সর্বোত্তম এলুশন পরিস্থিতিতে, পেপটাইডের মিশ্রণসহ প্লেটের তাত্ত্বিক সংখ্যা প্রতি বর্গমিটারে ২৮০,০০০ প্লেটে পৌঁছেছিল। বাণিজ্যিক Ascentis Express RP-Amide কলামের সাথে উন্নত কলামটির পৃথকীকরণ কর্মক্ষমতা তুলনা করে দেখা গেছে যে, পৃথকীকরণ দক্ষতা এবং রেজোলিউশনের দিক থেকে PMP কলামটির পৃথকীকরণ কার্যকারিতা বাণিজ্যিক কলামটির চেয়ে উন্নত ছিল।
বায়োফার্মাসিউটিক্যাল শিল্প সাম্প্রতিক বছরগুলিতে বাজার শেয়ারে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধির সাথে একটি সম্প্রসারণশীল বৈশ্বিক বাজারে পরিণত হয়েছে। বায়োফার্মাসিউটিক্যাল শিল্পের এই বিস্ফোরক বৃদ্ধির সাথে সাথে¹,²,³ পেপটাইড এবং প্রোটিন বিশ্লেষণের ব্যাপক প্রয়োজন দেখা দিয়েছে। লক্ষ্য পেপটাইড ছাড়াও, পেপটাইড সংশ্লেষণের সময় বিভিন্ন অপদ্রব্য তৈরি হয়, তাই পেপটাইডের কাঙ্ক্ষিত বিশুদ্ধতা অর্জনের জন্য ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন প্রয়োজন। শরীরের তরল পদার্থ, কলা এবং কোষে প্রোটিনের বিশ্লেষণ এবং বৈশিষ্ট্য নির্ধারণ একটি অত্যন্ত কঠিন কাজ, কারণ একটি একক নমুনায় বিপুল সংখ্যক সম্ভাব্য সনাক্তযোগ্য প্রজাতি উপস্থিত থাকে। যদিও পেপটাইড এবং প্রোটিনের ক্রম নির্ধারণের জন্য ভর বর্ণালিবীক্ষণ (mass spectrometry) একটি কার্যকর সরঞ্জাম, যদি এই ধরনের নমুনা সরাসরি ভর বর্ণালিবীক্ষণ যন্ত্রে প্রবেশ করানো হয়, তবে পৃথকীকরণ অসন্তোষজনক হবে। ভর বর্ণালিবীক্ষণ (MS) বিশ্লেষণের আগে তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (LC) সম্পাদন করে এই সমস্যার সমাধান করা যেতে পারে, যা একটি নির্দিষ্ট সময়ে ভর বর্ণালিবীক্ষণ যন্ত্রে প্রবেশকারী বিশ্লেষ্য পদার্থের পরিমাণ হ্রাস করবে⁴,⁵,⁶। এছাড়াও, তরল দশা পৃথকীকরণের সময় বিশ্লেষ্য পদার্থগুলি একটি সংকীর্ণ অঞ্চলে ঘনীভূত হতে পারে, যার ফলে এই বিশ্লেষ্য পদার্থগুলি ঘনীভূত হয় এবং ভর বর্ণালিবীক্ষণ সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতা বৃদ্ধি পায়। গত দশকে লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (LC) উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত হয়েছে এবং প্রোটিওমিক বিশ্লেষণের জন্য এটি একটি বহুল ব্যবহৃত পদ্ধতিতে পরিণত হয়েছে7,8,9,10।
অক্টাডেসিল-মডিফায়েড সিলিকা (ODS)-কে স্থির দশা (stationary phase) হিসেবে ব্যবহার করে পেপটাইডের মিশ্রণকে বিশুদ্ধ ও পৃথক করার জন্য রিভার্স-ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (RP-LC) ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়¹¹,¹²,¹³। তবে, তাদের জটিল গঠন এবং উভধর্মী (amphoteric) প্রকৃতির কারণে,¹⁴,¹⁵ RP স্থির দশাগুলো পেপটাইড এবং প্রোটিনের সন্তোষজনক পৃথকীকরণ প্রদান করতে পারে না। তাই, পোলার এবং নন-পোলার খণ্ডাংশযুক্ত পেপটাইড এবং প্রোটিনের বিশ্লেষণের জন্য বিশেষভাবে ডিজাইন করা স্থির দশার প্রয়োজন হয়, যা এই অ্যানালাইটগুলোর সাথে মিথস্ক্রিয়া করে এবং সেগুলোকে ধরে রাখে¹⁶। মিশ্র ক্রোমাটোগ্রাফি, যা মাল্টিমোডাল মিথস্ক্রিয়া প্রদান করে, পেপটাইড, প্রোটিন এবং অন্যান্য জটিল মিশ্রণ পৃথক করার জন্য RP-LC-এর একটি বিকল্প হতে পারে। বিভিন্ন ধরনের মিশ্র স্থির দশা প্রস্তুত করা হয়েছে এবং এই স্থির দশা দ্বারা পূর্ণ কলামগুলো পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথক করতে ব্যবহৃত হয়েছে¹⁷,¹⁸,¹⁹,²⁰,²¹। পোলার এবং নন-পোলার গ্রুপের উপস্থিতির কারণে, মিশ্র মোড স্টেশনারি ফেজ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, পোলার ইন্টারক্যালেশন/RPLC) পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথকীকরণের জন্য উপযুক্ত। সমযোজী বন্ধনে আবদ্ধ পোলার গ্রুপসহ পোলার ইন্টারক্যালেটেড স্টেশনারি ফেজগুলো পোলার এবং নন-পোলার অ্যানালাইটের জন্য ভালো পৃথকীকরণ ক্ষমতা এবং অনন্য নির্বাচনশীলতা দেখায়, কারণ পৃথকীকরণ অ্যানালাইট এবং স্টেশনারি ফেজের মধ্যেকার মিথস্ক্রিয়ার উপর নির্ভর করে (মাল্টিমোডাল ইন্টারঅ্যাকশন)। সম্প্রতি, ঝাং এবং তার সহকর্মীরা পলিঅ্যামাইনের বেহেনিল-টার্মিনেটেড স্টেশনারি ফেজ তৈরি করেছেন এবং সফলভাবে হাইড্রোকার্বন, অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট, ফ্ল্যাভোনয়েড, নিউক্লিওসাইড, ইস্ট্রোজেন এবং আরও কিছু অ্যানালাইট পৃথক করেছেন। পোলার এমবেডেড স্টেশনারি উপাদানে পোলার এবং নন-পোলার উভয় গ্রুপই থাকে, তাই এটি পেপটাইড এবং প্রোটিনকে হাইড্রোফোবিক এবং হাইড্রোফিলিক অংশে পৃথক করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। পোলার ইনলাইন কলাম (যেমন, অ্যামাইড ইনলাইন সহ C18 কলাম) Ascentis Express RP-Amide কলাম ট্রেড নামে পাওয়া যায়, কিন্তু এই কলামগুলি শুধুমাত্র অ্যামিন ৩৩-এর বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়েছে।
বর্তমান গবেষণায়, পেপটাইড পৃথকীকরণ এবং ট্রিপটিক এইচএসএ (HSA) বিভাজনের জন্য একটি পোলার এমবেডিং স্টেশনারি ফেজ (এন-ফিনাইলম্যালিইমাইড, এমবেডিং পলিস্টাইরিন) প্রস্তুত ও মূল্যায়ন করা হয়েছিল। স্টেশনারি ফেজটি প্রস্তুত করার জন্য নিম্নলিখিত কৌশলটি ব্যবহার করা হয়েছিল। আমাদের পূর্ববর্তী প্রকাশনাগুলিতে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণা প্রস্তুত করা হয়েছিল, তবে প্রস্তুতি স্কিম 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39-এ কিছু পরিবর্তন আনা হয়েছিল। বড় ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণা পাওয়ার জন্য ইউরিয়া, পলিইথিলিন গ্লাইকোল (PEG), TMOS এবং জলীয়-অ্যাসিটিক অ্যাসিডের অনুপাত সমন্বয় করা হয়েছিল। দ্বিতীয়ত, একটি নতুন ফিনাইলম্যালিইমাইড-মিথাইলভিনাইল আইসোসায়ানেট লিগ্যান্ড সংশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং এর ডেরিভেটাইজড সিলিকা কণা পোলার এমবেডেড স্টেশনারি ফেজ প্রস্তুত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। প্রাপ্ত স্টেশনারি ফেজটি একটি অপ্টিমাইজড প্যাকিং স্কিম অনুসারে একটি স্টেইনলেস স্টিল কলামে (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ × ১.৮ মিমি) প্যাক করা হয়েছিল। কলামের মধ্যে একটি অভিন্ন স্তর নিশ্চিত করার জন্য যান্ত্রিক কম্পনের মাধ্যমে কলামের প্যাকিংয়ে সহায়তা করা হয়। পাঁচটি পেপটাইড (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, লিউসিন-এনকেফ্যালিন পেপটাইড) এবং হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (HSA)-এর ট্রিপটিক হাইড্রোলাইসেট নিয়ে গঠিত একটি পেপটাইড মিশ্রণের পৃথকীকরণের জন্য প্যাকড কলামটি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। দেখা গেছে যে পেপটাইড মিশ্রণ এবং HSA ট্রিপটিক ডাইজেস্ট ভালো রেজোলিউশন এবং দক্ষতার সাথে পৃথক হয়েছে। PMP কলামের পৃথকীকরণ দক্ষতা Ascentis Express RP-Amide কলামের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। দেখা গেছে যে PMP কলামে পেপটাইড এবং প্রোটিনের ভালো রেজোলিউশন এবং উচ্চ পৃথকীকরণ দক্ষতা রয়েছে, এবং PMP কলামের পৃথকীকরণ দক্ষতা Ascentis Express RP-Amide কলামের চেয়ে বেশি।
পিইজি (পলিইথিলিন গ্লাইকোল), ইউরিয়া, অ্যাসিটিক অ্যাসিড, ট্রাইমিথোক্সিঅর্থোসিলিকেট (টিএমওএস), ট্রাইমিথাইলক্লোরোসিলেন (টিএমসিএস), ট্রিপসিন, হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (এইচএসএ), অ্যামোনিয়াম ক্লোরাইড, ইউরিয়া, হেক্সামিথাইলমিথ্যাক্রিলয়লডিসিলাজেন (এইচএমডিএস), মিথ্যাক্রিলয়ল ক্লোরাইড (এমসি), স্টাইরিন, ৪-হাইড্রোক্সি-টেম্পো, বেনজয়ল পারক্সাইড (বিপিও), এইচপিএলসি-এর জন্য অ্যাসিটোনাইট্রাইল (এসিএন), মিথানল, ২-প্রোপানল এবং অ্যাসিটোন। সিগমা-অলড্রিচ কোম্পানি (সেন্ট লুইস, মিসৌরি, ইউএসএ)।
ইউরিয়া (৮ গ্রাম), পলিইথিলিন গ্লাইকোল (৮ গ্রাম) এবং ৮ মিলি ০.০১ নরমাল অ্যাসিটিক অ্যাসিডের একটি মিশ্রণ ১০ মিনিট ধরে নাড়ানো হয় এবং বরফ-শীতল অবস্থায় এর সাথে ২৪ মিলি টিএমওএস (TMOS) যোগ করা হয়। বিক্রিয়া মিশ্রণটিকে একটি স্টেইনলেস স্টিল অটোক্লেভে প্রথমে ৪০° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ৬ ঘন্টা এবং তারপর ১২০° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ৮ ঘন্টা ধরে উত্তপ্ত করা হয়। জল ছেঁকে ফেলে দেওয়া হয় এবং অবশেষটিকে ৭০° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ১২ ঘন্টা ধরে শুকানো হয়। শুকনো নরম ব্লকগুলিকে মসৃণভাবে গুঁড়ো করে একটি ওভেনে ৫৫০° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ১২ ঘন্টা ধরে ক্যালসিন করা হয়। কণার আকার, ছিদ্রের আকার এবং পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফলের পুনরুৎপাদনযোগ্যতা পরীক্ষা করার জন্য তিনটি ব্যাচ প্রস্তুত ও বৈশিষ্ট্যযুক্ত করা হয়েছিল।
পলিস্টাইরিন শৃঙ্খলের জন্য পোলার গ্রুপ এবং স্থির দশা। এর প্রস্তুতি পদ্ধতি নিচে বর্ণনা করা হলো।
২০০ মিলিগ্রাম এন-ফিনাইলম্যালিইমাইড এবং ১০০ মিলিগ্রাম মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট অনার্দ্র টলুইনে দ্রবীভূত করা হয়েছিল, এবং তারপরে ফিনাইলম্যালিইমাইড ও মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেটের একটি কোপলিমার (PMCP) পাওয়ার জন্য বিক্রিয়া ফ্লাস্কে ০.১ মিলি ২,২′-অ্যাজোআইসোবিউটিরোনাইট্রাইল (AIBN) যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটিকে ৬০°C তাপমাত্রায় ৩ ঘন্টা ধরে উত্তপ্ত করা হয়েছিল, ছেঁকে নেওয়া হয়েছিল এবং একটি ওভেনে ৪০°C তাপমাত্রায় ৩ ঘন্টা ধরে শুকানো হয়েছিল।
একটি ৫০০ মিলি গোলতল ফ্লাস্কে ২ গ্রাম শুকনো সিলিকা কণা ১০০ মিলি শুকনো টলুইনে ছড়িয়ে দিয়ে ১০ মিনিট ধরে নাড়ানো ও সনিকেশন করা হয়েছিল। পিএমসিপি (১০ মিলিগ্রাম) টলুইনে দ্রবীভূত করে একটি অ্যাডিশন ফানেলের মাধ্যমে ফোঁটা ফোঁটা করে বিক্রিয়া ফ্লাস্কে যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটিকে ১০০° সেলসিয়াসে ৮ ঘন্টা ধরে রিফ্লাক্স করা হয়েছিল, তারপর ছেঁকে, অ্যাসিটোন দিয়ে ধুয়ে ৬০° সেলসিয়াসে ৩ ঘন্টা ধরে শুকানো হয়েছিল। এরপর, পিএমসিপি-র সাথে যুক্ত ১০০ গ্রাম সিলিকা কণা ২০০ মিলি টলুইনে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং অনুঘটক হিসেবে ১০০ মাইক্রোলিটার ডাইবিউটিলটিন ডাইলোরেটের উপস্থিতিতে এর সাথে ২ মিলি ৪-হাইড্রক্সি-টেম্পো যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটিকে ৫০° সেলসিয়াসে ৮ ঘন্টা ধরে নাড়ানো হয়েছিল, তারপর ছেঁকে ৫০° সেলসিয়াসে ৩ ঘন্টা ধরে শুকানো হয়েছিল।
স্টাইরিন (১ মিলি), বেনজয়েল পারক্সাইড বিপিও (০.৫ মিলি) এবং টেম্পো-পিএমসিপি (TEMPO-PMCP)-এর সাথে সংযুক্ত সিলিকা কণা (১.৫ গ্রাম) টলুইনে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং নাইট্রোজেন দ্বারা পার্জ করা হয়েছিল। স্টাইরিনের পলিমারাইজেশন ১০০°C তাপমাত্রায় ১২ ঘন্টা ধরে সম্পন্ন করা হয়েছিল। উৎপন্ন পদার্থটিকে মিথানল দিয়ে ধুয়ে ৬০°C তাপমাত্রায় সারারাত ধরে শুকানো হয়েছিল। বিক্রিয়াটির সাধারণ স্কিম চিত্র একে দেখানো হয়েছে।
নমুনাগুলোকে ৩৯৩ কেলভিন তাপমাত্রায় ১ ঘণ্টা ধরে ডিগ্যাস করা হয়েছিল, যতক্ষণ না অবশিষ্ট চাপ ১০⁻³ টরের কম হয়। আপেক্ষিক চাপ P/P₀ = ০.৯৯-এ শোষিত N₂-এর পরিমাণ মোট ছিদ্রের আয়তন নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। বিশুদ্ধ এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণার গঠন একটি স্ক্যানিং ইলেকট্রন মাইক্রোস্কোপ (হিটাচি হাই টেকনোলজিস, টোকিও, জাপান) ব্যবহার করে পরীক্ষা করা হয়েছিল। শুষ্ক নমুনা (বিশুদ্ধ সিলিকা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণা) কার্বন টেপ ব্যবহার করে অ্যালুমিনিয়াম রডের উপর রাখা হয়েছিল। একটি Q150T স্পাটারিং ডিভাইস ব্যবহার করে নমুনার উপর সোনা জমা করা হয়েছিল এবং নমুনার উপর ৫ ন্যানোমিটার পুরু একটি Au স্তর জমা হয়েছিল। এটি নিম্ন ভোল্টেজ প্রক্রিয়ার কার্যকারিতা উন্নত করে এবং সূক্ষ্ম কোল্ড স্প্রেয়িং প্রদান করে। একটি থার্মো ইলেকট্রন (ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) ফ্ল্যাশ EA1112 এলিমেন্টাল কম্পোজিশন অ্যানালাইজার ব্যবহার করে মৌলীয় বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। কণার আকার বন্টন পাওয়ার জন্য একটি মালভার্ন পার্টিকল সাইজ অ্যানালাইজার (ওরচেস্টারশায়ার, ইউকে) মাস্টারসাইজার ২০০০ ব্যবহার করা হয়েছিল। আবরণহীন সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণা (প্রত্যেকটি ৫ মিলিগ্রাম) ৫ মিলি আইসোপ্রোপানলে ছড়িয়ে দেওয়া হয়, ১০ মিনিট ধরে সনিকেশন করা হয়, ৫ মিনিট ধরে নাড়ানো হয় এবং একটি মাস্টারসাইজার অপটিক্যাল বেঞ্চে রাখা হয়। থার্মোগ্র্যাভিমেট্রিক বিশ্লেষণ ৩০ থেকে ৮০০ °C তাপমাত্রার পরিসরে প্রতি মিনিটে ৫ °C হারে সম্পন্ন করা হয়।
রেফারেন্স ৩১-এ বর্ণিত একই পদ্ধতি অনুসরণ করে স্লারি ফিলিং পদ্ধতিতে গ্লাস ফাইবার লাইনিংযুক্ত সরু ছিদ্রযুক্ত স্টেইনলেস স্টিল কলাম (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ × ১.৮ মিমি) প্যাক করা হয়েছিল। একটি স্টেইনলেস স্টিল কলাম (গ্লাস লাইনিংযুক্ত, অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ × ১.৮ মিমি) এবং ১ মাইক্রোমিটার ফ্রিটযুক্ত একটি আউটলেট একটি স্লারি প্যাকেজিং মেশিনের (অলটেক ডিয়ারফিল্ড, আইএল, ইউএসএ) সাথে সংযুক্ত করা হয়েছিল। ১৫০ মিলিগ্রাম স্টেশনারি ফেজকে ১.২ মিলি মিথানলে সাসপেন্ড করে একটি রিজার্ভার কলামে প্রবেশ করিয়ে স্টেশনারি ফেজের একটি সাসপেনশন প্রস্তুত করা হয়। মিথানলকে স্লারি সলভেন্ট এবং কন্ট্রোল সলভেন্ট হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছিল। ১০ মিনিটের জন্য ১০০ এমপি, ১৫ মিনিটের জন্য ৮০ এমপি এবং ৩০ মিনিটের জন্য ৬০ এমপি-র একটি চাপ অনুক্রম প্রয়োগ করে কলামটি প্যাক করা হয়। প্যাকিং প্রক্রিয়ায় অভিন্ন কলাম প্যাকিং নিশ্চিত করার জন্য যান্ত্রিক কম্পনের উদ্দেশ্যে দুটি গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি কলাম ভাইব্রেটর (অলটেক, ডিয়ারফিল্ড, আইএল, ইউএসএ) ব্যবহার করা হয়েছিল। স্ট্রিং-এর ক্ষতি রোধ করতে স্লারি প্যাকারটি বন্ধ করুন এবং ধীরে ধীরে চাপ মুক্ত করুন। এর কার্যকারিতা পরীক্ষা করার জন্য কলামটিকে স্লারি নজল থেকে সংযোগ বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং ইনলেটে আরেকটি ফিটিং সংযুক্ত করে এলসি সিস্টেমের সাথে যুক্ত করা হয়েছিল।
একটি এলসি পাম্প (10AD শিমাজু, জাপান), ৫০ ন্যানোলিটার ইনজেকশন লুপসহ একটি স্যাম্পলার (ভ্যালকো (ইউএসএ) C14 W.05), একটি মেমব্রেন ডিগ্যাসার (শিমাজু DGU-14A), এবং একটি ইউভি-ভিআইএস ক্যাপিলারি উইন্ডো ব্যবহার করে একটি কাস্টম এমএলসি তৈরি করা হয়েছিল। ডিটেক্টর ডিভাইস (UV-2075) এবং এনামেলযুক্ত মাইক্রোকলাম। অতিরিক্ত কলাম প্রসারণের প্রভাব কমানোর জন্য খুব সরু এবং ছোট সংযোগকারী টিউব ব্যবহার করুন। কলামটি পূরণ করার পর, ১/১৬″ রিডিউসিং জাংশনের আউটলেটে একটি ক্যাপিলারি (৫০ µm id ৩৬৫) স্থাপন করুন। মাল্টিক্রো ২০০০ সফটওয়্যার ব্যবহার করে ডেটা সংগ্রহ এবং ক্রোমাটোগ্রাম প্রক্রিয়াকরণ করা হয়। ২৫৪ nm-এ, আলোচ্য অ্যানালাইটগুলোর ইউভি অ্যাবজর্বেন্স পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রাফিক ডেটা অরিজিনপ্রো৮ (নর্থহ্যাম্পটন, এমএ) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন, লাইওফিলাইজড পাউডার, ≥ ৯৬% (অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস) ৩ মিলিগ্রাম, ট্রিপসিন (১.৫ মিলিগ্রাম), ৪.০ মোলার ইউরিয়া (১ মিলি) এবং ০.২ মোলার অ্যামোনিয়াম বাইকার্বোনেট (১ মিলি)-এর সাথে মেশানো হলো। দ্রবণটি ১০ মিনিট ধরে নাড়ানো হলো এবং ৩৭° সেলসিয়াস তাপমাত্রার ওয়াটার বাথে ৬ ঘণ্টা রাখা হলো, তারপর ১ মিলি ০.১% টিএফএ দিয়ে প্রশমিত করা হলো। দ্রবণটি ফিল্টার করে ৪° সেলসিয়াসের নিচে সংরক্ষণ করুন।
একটি PMP কলামে পেপটাইড এবং ট্রিপটিক ডাইজেস্ট HSA-এর মিশ্রণের পৃথকীকরণ আলাদাভাবে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। একটি PMP কলাম দ্বারা পৃথকীকৃত পেপটাইড এবং HSA-এর মিশ্রণের ট্রিপটিক হাইড্রোলাইসিস পরীক্ষা করুন এবং ফলাফলগুলি একটি Ascentis Express RP-Amide কলামের সাথে তুলনা করুন। নিম্নলিখিত সমীকরণ ব্যবহার করে তাত্ত্বিক প্লেটের সংখ্যা গণনা করা হয়:
চিত্র ২-এ বিশুদ্ধ সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণার SEM চিত্র দেখানো হয়েছে। বিশুদ্ধ সিলিকা কণার (A, B) SEM চিত্রে একটি গোলাকার আকৃতি দেখা যায়, যেখানে আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় কণাগুলো দীর্ঘায়িত অথবা এদের প্রতিসাম্য অনিয়মিত। লিগ্যান্ড দ্বারা আবদ্ধ সিলিকা কণার (C, D) পৃষ্ঠতল বিশুদ্ধ সিলিকা কণার চেয়ে মসৃণতর, যার কারণ হতে পারে সিলিকা কণার পৃষ্ঠতলকে আবৃত করে থাকা পলিস্টাইরিন শৃঙ্খল।
বিশুদ্ধ সিলিকা কণা (A, B) এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণার (C, D) স্ক্যানিং ইলেকট্রন মাইক্রোগ্রাফ।
বিশুদ্ধ সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণার কণার আকার বন্টন চিত্র ২.৩(ক)-তে দেখানো হয়েছে। আয়তনিক কণার আকার বন্টন রেখাচিত্রগুলো দেখিয়েছে যে রাসায়নিক পরিবর্তনের পর সিলিকা কণার আকার বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র ৩ক)। বর্তমান গবেষণা এবং পূর্ববর্তী গবেষণা থেকে প্রাপ্ত সিলিকা কণার আকার বন্টনের তথ্য সারণি ১(ক)-তে তুলনা করা হয়েছে। PMP-এর আয়তনিক কণার আকার d(0.5) ছিল ৩.৩৬ µm, যেখানে আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় (পলিস্টাইরিন-আবদ্ধ সিলিকা কণা)³⁴-এর ad(0.5) মান ছিল ৩.০৫ µm। বিক্রিয়া মিশ্রণে PEG, ইউরিয়া, TMOS এবং অ্যাসিটিক অ্যাসিডের অনুপাতের পরিবর্তনের কারণে, এই ব্যাচের কণার আকার বন্টন আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় সংকীর্ণ ছিল। PMP দশার কণার আকার, আমাদের পূর্বে অধ্যয়ন করা পলিস্টাইরিন-আবদ্ধ সিলিকা কণা দশার চেয়ে সামান্য বড়। এর অর্থ হলো, স্টাইরিন দ্বারা সিলিকা কণার পৃষ্ঠতলীয় কার্যকারীকরণের ফলে সিলিকার পৃষ্ঠে কেবল একটি পলিস্টাইরিন স্তর (০.৯৭ µm) জমা হয়েছিল, যেখানে PMP পর্যায়ে স্তরটির পুরুত্ব ছিল ১.৩৮ µm।
বিশুদ্ধ সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণার কণার আকার বন্টন (A) এবং ছিদ্রের আকার বন্টন (B)।
এই গবেষণায় ব্যবহৃত সিলিকা কণাগুলির ছিদ্রের আকার, ছিদ্রের আয়তন এবং পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল সারণি ১ (খ)-তে দেখানো হয়েছে। বিশুদ্ধ সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণাগুলির পিএসডি প্রোফাইল চিত্র ৩(খ)-তে দেখানো হয়েছে। ফলাফলগুলি আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণা³⁴-এর সাথে তুলনীয় ছিল। বিশুদ্ধ এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণাগুলির ছিদ্রের আকার ছিল যথাক্রমে ৩১০ Å এবং ২৪১ Å, যা নির্দেশ করে যে রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে ছিদ্রের আকার ৬৯ Å হ্রাস পেয়েছে, যেমনটি সারণি ১ (খ)-তে দেখানো হয়েছে, এবং শিফট কার্ভটি চিত্রে দেখানো হয়েছে। বর্তমান গবেষণায় সিলিকা কণাগুলির নির্দিষ্ট পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল হল ১১৬ মি²/গ্রাম, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার (১২৪ মি²/গ্রাম) সাথে তুলনীয়। সারণি ১(খ)-তে যেমন দেখানো হয়েছে, রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে সিলিকা কণাগুলির পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল (মি²/গ্রাম) ১১৬ মি²/গ্রাম থেকে কমে ১০৫ মি²/গ্রাম হয়েছে।
স্থির দশার মৌলিক বিশ্লেষণের ফলাফল সারণি ২-এ উপস্থাপন করা হয়েছে। বর্তমান স্থির দশার কার্বনের পরিমাণ ৬.৩৫%, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার (পলিস্টাইরিনের সাথে যুক্ত সিলিকা কণা, যথাক্রমে ৭.৯৩%³⁵ এবং ১০.২১%)⁴² তুলনায় কম। বর্তমান স্থির দশার কার্বনের পরিমাণ কম হওয়ার কারণ হলো, এসপি (SP) প্রস্তুতিতে স্টাইরিনের পাশাপাশি ফিনাইলম্যালিইমাইড মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট (PCMP) এবং ৪-হাইড্রক্সি-টেম্পো (4-hydroxy-TEMPO)-এর মতো কিছু পোলার লিগ্যান্ড ব্যবহার করা হয়েছে। বর্তমান স্থির দশায় নাইট্রোজেনের ওজন শতাংশ হলো ২.২১%, যেখানে পূর্ববর্তী গবেষণায়⁴² এর পরিমাণ ছিল ০.১৭³⁵ এবং ০.৮৫%। এর অর্থ হলো, ফিনাইলম্যালিইমাইডের উপস্থিতির কারণে বর্তমান স্থির দশায় নাইট্রোজেনের ওজন শতাংশ বেশি। একইভাবে, উৎপাদ (4) এবং (5)-এর কার্বনের পরিমাণ যথাক্রমে 2.7% এবং 2.9%, যেখানে চূড়ান্ত উৎপাদ (6)-এর কার্বনের পরিমাণ 6.35%, যা সারণি 2-এ দেখানো হয়েছে। ওজন হ্রাস পরীক্ষা করার জন্য PMP-এর স্থির দশার উপর থার্মোগ্রাভিমেট্রিক বিশ্লেষণ (TGA) ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং TGA বক্ররেখাটি চিত্র 4-এ দেখানো হয়েছে। TGA বক্ররেখাটি 8.6% ওজন হ্রাস দেখায়, যা কার্বনের পরিমাণের (6.35%) সাথে ভালভাবে সামঞ্জস্যপূর্ণ, কারণ লিগ্যান্ডগুলিতে কেবল C নয়, N, O এবং H-ও রয়েছে।
সিলিকা কণার পৃষ্ঠতল পরিবর্তন করার জন্য ফিনাইলম্যালিইমাইড-মিথাইলভিনাইল আইসোসায়ানেট লিগ্যান্ডটি বেছে নেওয়া হয়েছিল, কারণ এতে পোলার ফিনাইলম্যালিইমাইড এবং ভিনাইলআইসোসায়ানেট গ্রুপ রয়েছে। ভিনাইল আইসোসায়ানেট গ্রুপগুলো লিভিং র‍্যাডিক্যাল পলিমারাইজেশনের মাধ্যমে স্টাইরিনের সাথে আরও বিক্রিয়া করতে পারে। দ্বিতীয় কারণটি হলো এমন একটি গ্রুপ যুক্ত করা, যার অ্যানালাইটের সাথে মাঝারি ধরনের মিথস্ক্রিয়া রয়েছে এবং অ্যানালাইট ও স্থির দশার মধ্যে কোনো শক্তিশালী স্থিরবৈদ্যুতিক মিথস্ক্রিয়া নেই, যেহেতু স্বাভাবিক pH-এ ফিনাইলম্যালিইমাইড অংশে কোনো ভার্চুয়াল চার্জ থাকে না। স্টাইরিনের সর্বোত্তম পরিমাণ এবং মুক্ত র‍্যাডিক্যাল পলিমারাইজেশনের বিক্রিয়ার সময় দ্বারা স্থির দশার পোলারিটি নিয়ন্ত্রণ করা যায়। বিক্রিয়ার চূড়ান্ত ধাপ (মুক্ত র‍্যাডিক্যাল পলিমারাইজেশন) অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ, কারণ এটি স্থির দশার পোলারিটি পরিবর্তন করে। এই স্থির দশাগুলোতে কার্বনের পরিমাণ পরীক্ষা করার জন্য মৌলীয় বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। এটি পরিলক্ষিত হয়েছে যে, স্টাইরিনের পরিমাণ এবং বিক্রিয়ার সময় বাড়ালে স্থির দশার কার্বনের পরিমাণ বাড়ে এবং এর বিপরীতটিও ঘটে। স্টাইরিনের বিভিন্ন ঘনত্ব দিয়ে প্রস্তুত স্থির দশাগুলোতে কার্বনের পরিমাণ ভিন্ন ভিন্ন হয়। একইভাবে, এই স্থির দশাগুলোকে স্টেইনলেস স্টিলের কলামে স্থাপন করা হয়েছিল এবং এদের ক্রোমাটোগ্রাফিক বৈশিষ্ট্য (নির্বাচনশীলতা, পৃথকীকরণ, N মান, ইত্যাদি) পরীক্ষা করা হয়েছিল। এই পরীক্ষাগুলোর উপর ভিত্তি করে, বিশ্লেষ্য পদার্থের নিয়ন্ত্রিত পোলারিটি এবং ভালো ধারণক্ষমতা নিশ্চিত করার জন্য PMP স্থির দশা প্রস্তুতির একটি অনুকূলিত গঠন নির্বাচন করা হয়েছিল।
মোবাইল ফেজ ৬০/৪০ (v/v) ACN/পানি (০.১% TFA) ব্যবহার করে ৮০ µl/min প্রবাহ হারে পাঁচটি পেপটাইড মিশ্রণের (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, লিউসিন-এনকেফ্যালিন) বিশ্লেষণের জন্য PMP কলামটিও মূল্যায়ন করা হয়েছিল। সর্বোত্তম এলুশন শর্তে (২০০,০০০ প্লেট/মি), প্রতি কলামে (১০০ × ১.৮ মিমি) তাত্ত্বিক প্লেটের সংখ্যা (N) হলো ২০,০০০ ± ১০০। তিনটি PMP কলামের জন্য N-এর মান সারণি ৩-এ দেখানো হয়েছে এবং ক্রোমাটোগ্রামগুলো চিত্র ৫A-তে দেখানো হয়েছে। একটি PMP কলামে উচ্চ প্রবাহ হারে (৭০০ µl/min) দ্রুত বিশ্লেষণ করা হয়, এক মিনিটের মধ্যে পাঁচটি পেপটাইড ইলিউটেড হয়, প্রতি কলামে (১০০ x ১.৮ মিমি ব্যাস) N-এর চমৎকার মান পাওয়া যায় ১৩,৫০০ ± ৩৩০, যা ১,৩৫,০০০ প্লেট/মি-এর সমতুল্য (চিত্র ৫বি)। পুনরুৎপাদনযোগ্যতা পরীক্ষা করার জন্য একই আকারের (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ x ১.৮ মিমি) তিনটি কলামে PMP স্থির দশার তিনটি ভিন্ন ব্যাচ ভরা হয়েছিল। প্রতিটি কলামে সর্বোত্তম ইলিউশন শর্ত, তাত্ত্বিক প্লেটের সংখ্যা N এবং রিটেনশন টাইম ব্যবহার করে একই পরীক্ষার মিশ্রণকে পৃথক করে অ্যানালাইটগুলো রেকর্ড করা হয়েছিল। PMP কলামগুলোর পুনরুৎপাদনযোগ্যতার তথ্য সারণি ৪-এ দেখানো হয়েছে। সারণি ৩-এ যেমন দেখানো হয়েছে, PMP কলামের পুনরুৎপাদনযোগ্যতা অত্যন্ত কম %RSD মানের সাথে ভালোভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল।
একটি PMP কলাম (B) এবং একটি Ascentis Express RP-Amide কলাম (A)-তে পেপটাইড মিশ্রণের পৃথকীকরণ, মোবাইল ফেজ ৬০/৪০ ACN/H2O (TFA ০.১%), PMP কলামের মাপ (১০০ x ১.৮ মিমি id), বিশ্লেষণ। যৌগসমূহের এলুশনের ক্রম: ১ (Gly-Tyr), ২ (Gly-Leu-Tyr), ৩ (Gly-Gly-Tyr-Arg), ৪ (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) এবং ৫ (লিউসিক অ্যাসিড এনকেফ্যালিন)।
এইচপিএলসি (HPLC) পদ্ধতিতে হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিনের ট্রিপটিক হাইড্রোলাইজেট পৃথকীকরণের জন্য একটি পিএমপি (PMP) কলাম (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ x ১.৮ মিমি) মূল্যায়ন করা হয়েছিল। চিত্র ৬-এর ক্রোমাটোগ্রামটি দেখায় যে নমুনাগুলি খুব ভালো রেজোলিউশন সহ ভালোভাবে পৃথক হয়েছে। এইচএসএ (HSA) দ্রবণগুলি ১০০ μl/min প্রবাহ হার, ৭০/৩০ অ্যাসিটোনাইট্রাইল/পানির একটি মোবাইল ফেজ এবং ০.১% টিএফএ (TFA) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রামে (চিত্র ৬) যেমন দেখানো হয়েছে, এইচএসএ-এর ক্লিভেজ ১৭টি পিকে বিভক্ত হয়েছিল, যা ১৭টি পেপটাইডের সাথে সঙ্গতিপূর্ণ। এইচএসএ হাইড্রোলাইজেট থেকে প্রতিটি পিকের পৃথকীকরণ দক্ষতা গণনা করা হয়েছিল এবং মানগুলি সারণি ৫-এ দেখানো হয়েছে।
এইচএসএ ট্রিপটিক হাইড্রোলাইসেটগুলোকে একটি পিএমপি কলামে (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ x ১.৮ মিমি), ১০০ মাইক্রোলিটার/মিনিট প্রবাহ হার, ৬০/৪০ অ্যাসিটোনাইট্রাইল/পানি মোবাইল ফেজ এবং ০.১% টিএফএ ব্যবহার করে পৃথক করা হয়েছিল।
যেখানে L হলো কলামের দৈর্ঘ্য, η হলো সচল দশার সান্দ্রতা, ΔP হলো কলামের পশ্চাৎচাপ, এবং u হলো সচল দশার রৈখিক বেগ। PMP কলামের ভেদ্যতা ছিল 2.5 × 10–14 m2, প্রবাহের হার ছিল 25 µl/min, এবং 60/40 v/v অনুপাতে ACN/পানি ব্যবহার করা হয়েছিল। PMP কলামের (অভ্যন্তরীণ ব্যাস 100 × 1.8 মিমি) ভেদ্যতা আমাদের পূর্ববর্তী রেফারেন্স 34 গবেষণার অনুরূপ ছিল। পৃষ্ঠীয়ভাবে ছিদ্রযুক্ত কণা দ্বারা পূর্ণ একটি কলামের ভেদ্যতা হলো 1.7×10 .6 µm, এবং 5 µm কণার জন্য 2.5×10-14 m2 43। অতএব, PMP দশার ভেদ্যতা 5 μm আকারের কোর-শেল কণার ভেদ্যতার অনুরূপ।
যেখানে Wx হলো ক্লোরোফর্ম দ্বারা পূর্ণ কলামের ভর, Wy হলো মিথানল দ্বারা পূর্ণ কলামের ভর, এবং ρ হলো দ্রাবকের ঘনত্ব। মিথানলের ঘনত্ব (ρ = ০.৭৮৬৬) এবং ক্লোরোফর্মের ঘনত্ব (ρ = ১.৪৮৪)। সিলিকা-C18 কণা কলামের (১০০ × ১.৮ মিমি অভ্যন্তরীণ ব্যাস)³⁴ এবং আমাদের পূর্বে অধ্যয়ন করা C18-ইউরিয়া³¹ কলামের মোট ছিদ্রতা ছিল যথাক্রমে ০.৬৩ এবং ০.৫৫। এর অর্থ হলো, ইউরিয়া লিগ্যান্ডের উপস্থিতি স্থির দশার ভেদ্যতা হ্রাস করে। অন্যদিকে, PMP কলামের (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ × ১.৮ মিমি) মোট ছিদ্রতা হলো ০.৬০। PMP কলামগুলি C18 আবদ্ধ সিলিকা কণা দ্বারা প্যাক করা কলামের তুলনায় কম ভেদ্য, কারণ C18 ধরণের স্থির দশায় C18 লিগ্যান্ডগুলি রৈখিক শৃঙ্খলে সিলিকা কণাগুলির সাথে সংযুক্ত থাকে, যেখানে পলিস্টাইরিন ধরণের স্থির দশায় কণাগুলির চারপাশে একটি অপেক্ষাকৃত পুরু পলিমার স্তর A গঠিত হয়। একটি সাধারণ পরীক্ষায়, কলামের ছিদ্রতা নিম্নরূপ গণনা করা হয়:
চিত্র ৭এ, বি-তে একটি পিএমপি কলাম (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ x ১.৮ মিমি) এবং একটি অ্যাসেন্টিস এক্সপ্রেস আরপি-অ্যামাইড কলামের (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ x ১.৮ মিমি) জন্য ভ্যান ডিমটার প্লট দেখানো হয়েছে। উভয় কলামে একই এলুশন শর্ত, অর্থাৎ ৬০/৪০ এসিএন/এইচ২ও এবং ০.১% টিএফএ ব্যবহার করে ২০ µl/min থেকে ৮০০ µl/min প্রবাহ হারে এই প্লটগুলো পাওয়া গেছে। সর্বোত্তম প্রবাহ হারে (৮০ µl/min) পিএমপি কলামের জন্য সর্বনিম্ন HETP মান ছিল ২.৬ µm এবং অ্যাসেন্টিস এক্সপ্রেস আরপি-অ্যামাইড কলামের জন্য ছিল ৩.৯ µm। HETP মানগুলো থেকে বোঝা যায় যে, পিএমপি কলামের (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ x ১.৮ মিমি) পৃথকীকরণ দক্ষতা বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ অ্যাসেন্টিস এক্সপ্রেস আরপি-অ্যামাইড কলামের (অভ্যন্তরীণ ব্যাস ১০০ x ১.৮ মিমি) চেয়ে অনেক বেশি। চিত্র ৭(A)-তে ভ্যান ডিমটার গ্রাফ দেখায় যে, আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় প্রবাহ বৃদ্ধির সাথে N মানের হ্রাস উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি নয়। Ascentis Express RP-Amide কলামের তুলনায় PMP কলামের (id 100 × 1.8 mm) উচ্চতর পৃথকীকরণ দক্ষতা বর্তমান গবেষণায় ব্যবহৃত উন্নত কণার আকৃতি ও আকার এবং অত্যাধুনিক কলাম প্যাকিং পদ্ধতির উপর ভিত্তি করে নির্ধারিত হয়েছে।
(A) 0.1% TFA সহ 60/40 ACN/H2O দ্রবণে একটি PMP কলামে (অভ্যন্তরীণ ব্যাস 100 x 1.8 মিমি) প্রাপ্ত ভ্যান ডিমটার প্লট (HETP বনাম মোবাইল ফেজের রৈখিক বেগ)। (B) 0.1% TFA সহ 60/40 ACN/H2O দ্রবণে একটি Ascentis Express RP-Amide কলামে (অভ্যন্তরীণ ব্যাস 100 x 1.8 মিমি) প্রাপ্ত ভ্যান ডিমটার প্লট (HETP বনাম মোবাইল ফেজের রৈখিক বেগ)।
ইন্টারক্যালেটেড পলিস্টাইরিনের একটি পোলার স্থির দশা প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফিতে কৃত্রিম পেপটাইডের মিশ্রণ এবং মানব সিরাম অ্যালবুমিনের (HSA) ট্রিপটিক হাইড্রোলাইজেট পৃথকীকরণের জন্য এর কার্যকারিতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। পেপটাইড মিশ্রণের জন্য PMP কলামের ক্রোমাটোগ্রাফিক কার্যকারিতা পৃথকীকরণ দক্ষতা এবং রেজোলিউশনের দিক থেকে চমৎকার। PMP কলামের এই উন্নত পৃথকীকরণ দক্ষতার বেশ কিছু কারণ রয়েছে, যেমন সিলিকা কণার আকার ও ছিদ্রের আকার, স্থির দশার নিয়ন্ত্রিত সংশ্লেষণ এবং জটিল কলাম প্যাকিং উপকরণ। উচ্চ পৃথকীকরণ দক্ষতার পাশাপাশি, এই স্থির দশার আরেকটি সুবিধা হলো উচ্চ প্রবাহ হারে কলামের কম ব্যাক প্রেশার। PMP কলামগুলো অত্যন্ত পুনরুৎপাদনযোগ্য এবং পেপটাইডের মিশ্রণ ও বিভিন্ন প্রোটিনের ট্রিপটিক ডাইজেশন বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। আমরা লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফিতে প্রাকৃতিক পণ্য, ঔষধি উদ্ভিদ এবং মাশরুমের নির্যাস থেকে জৈব-সক্রিয় যৌগ পৃথকীকরণের জন্য এই কলামটি ব্যবহার করতে চাই। ভবিষ্যতে, প্রোটিন এবং মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি পৃথকীকরণের জন্যও PMP কলামের কার্যকারিতা মূল্যায়ন করা হবে।
ফিল্ড, জে.কে., ইউয়ারবি, এম.আর., লাউ, জে., থোর্গারসেন, এইচ. ও পিটারসন, পি.। রিভার্সড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি পেপটাইড পৃথকীকরণ সিস্টেম বিষয়ক অনুসন্ধান পর্ব ১: কলাম বৈশিষ্ট্য নিরূপণের জন্য একটি প্রোটোকলের উন্নয়ন। ফিল্ড, জে.কে., ইউয়ারবি, এম.আর., লাউ, জে., থোর্গারসেন, এইচ. ও পিটারসন, পি.। রিভার্সড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি পেপটাইড পৃথকীকরণ সিস্টেম বিষয়ক অনুসন্ধান পর্ব ১: কলাম বৈশিষ্ট্য নিরূপণের জন্য একটি প্রোটোকলের উন্নয়ন।ফিল্ড, জে.কে., ওয়েরবি, এম.আর., লাউ, জে., টোগারসেন, এইচ., এবং পিটারসন, পি.। রিভার্স-ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা পেপটাইড পৃথকীকরণ সিস্টেমের অনুসন্ধান, পর্ব ১: কলাম বৈশিষ্ট্যায়নের জন্য একটি প্রোটোকল প্রণয়ন। ফিল্ড, জে.কে., ইউয়ারবি, এম.আর., লাউ, জে., থোর্গারসেন, এইচ. ও পিটারসন, পি.। রিভার্সড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি পেপটাইড পৃথকীকরণ সিস্টেম বিষয়ক অনুসন্ধান পর্ব ১: কলামের বৈশিষ্ট্য নিরূপণের জন্য একটি প্রোটোকল প্রণয়ন। ফিল্ড, জে.কে., ইউয়ারবি, এম.আর., লাউ, জে., থোর্গারসেন, এইচ. ও পিটারসন, পি.। রিভার্সড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি পেপটাইড পৃথকীকরণ সিস্টেম বিষয়ক অনুসন্ধান পর্ব ১: কলামের বৈশিষ্ট্য নিরূপণের জন্য একটি প্রোটোকল প্রণয়ন।ফিল্ড, জে.কে., ওয়েরবি, এম.আর., লাউ, জে., টোগারসেন, এইচ., এবং পিটারসন, পি.। রিভার্স-ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা পেপটাইড পৃথকীকরণ সিস্টেমের অনুসন্ধান, পর্ব ১: কলাম বৈশিষ্ট্যায়নের জন্য একটি প্রোটোকল প্রণয়ন।J.色谱法. 1603,113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)৷
গোমেজ, বি. এট আল. সংক্রামক রোগের চিকিৎসার জন্য উন্নত সক্রিয় পেপটাইড তৈরির পদ্ধতি। বায়োটেকনোলজি। অ্যাচিভমেন্টস 36(2), 415–429। https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)।
ভ্লিঘে, পি., লিসোস্কি, ভি., মার্টিনেজ, জে. এবং ক্রেস্টচ্যাটিস্কি, এম.। সংশ্লেষিত চিকিৎসাগত পেপটাইড: বিজ্ঞান ও বাজার। ভ্লিঘে, পি., লিসোস্কি, ভি., মার্টিনেজ, জে. এবং ক্রেস্টচ্যাটিস্কি, এম.। সংশ্লেষিত চিকিৎসাগত পেপটাইড: বিজ্ঞান ও বাজার।ভ্লিগে পি, লিসোস্কি ভি, মার্টিনেজ জে এবং ক্রেসচাটিস্কি এম। সংশ্লেষিত চিকিৎসাগত পেপটাইড: বিজ্ঞান ও বাজার।ভ্লিগে পি, লিসোস্কি ভি, মার্টিনেজ জে এবং ক্রেসচাটস্কি এম। সিন্থেটিক থেরাপিউটিক পেপটাইড: বিজ্ঞান এবং বাজার। ড্রাগ ডিসকভারি টুডে 15 (1–2), 40–56। https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)।
শি, এফ., স্মিথ, আরডি এবং শেন, ওয়াই.। অ্যাডভান্সড প্রোটিওমিক লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি। শি, এফ., স্মিথ, আরডি এবং শেন, ওয়াই.। অ্যাডভান্সড প্রোটিওমিক লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি।সি এফ., স্মিথ আরডি এবং শেন ইউ। অ্যাডভান্সড প্রোটিওমিক লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি। Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. উন্নত প্রোটিন রচনা 液相色谱.সি এফ., স্মিথ আরডি এবং শেন ইউ। অ্যাডভান্সড প্রোটিওমিক লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি।জে. ক্রোমাটোগ্রাফি. এ ১২৬১, ৭৮–৯০ (২০১২)।
লিউ, ডব্লিউ. এট আল. উন্নত লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-মাস স্পেকট্রোমেট্রি ব্যাপকভিত্তিক মেটাবোলোমিক্স এবং প্রোটিওমিক্সকে একত্রিত করতে সক্ষম। অ্যানাস. চিম. অ্যাক্টা ১০৬৯, ৮৯–৯৭ (২০১৯)।
চেসনাট, এস এম এবং স্যালিসবারি, জে জে ঔষধ উন্নয়নে ইউএইচপিএলসি-এর ভূমিকা। চেসনাট, এস এম এবং স্যালিসবারি, জে জে ঔষধ উন্নয়নে ইউএইচপিএলসি-এর ভূমিকা।চেসনাট, এস এম এবং স্যালিসবারি, জে জে ঔষধ উন্নয়নে ইউএইচপিএলসি-র ভূমিকা।চেসনাট, এস এম এবং স্যালিসবারি, জে জে ঔষধ উন্নয়নে UHPLC-এর ভূমিকা। জে. সেপ্ট সায়েন্স। 30(8), 1183–1190 (2007)।
উ, এন. এবং ক্লাউসেন, এএম. দ্রুত পৃথকীকরণের জন্য অতি উচ্চচাপ তরল ক্রোমাটোগ্রাফির মৌলিক ও ব্যবহারিক দিকসমূহ। উ, এন. এবং ক্লাউসেন, এএম. দ্রুত পৃথকীকরণের জন্য অতি উচ্চচাপ তরল ক্রোমাটোগ্রাফির মৌলিক ও ব্যবহারিক দিকসমূহ।উ, এন. এবং ক্লাউসেন, এএম. দ্রুত পৃথকীকরণের জন্য উচ্চচাপ তরল ক্রোমাটোগ্রাফির মৌলিক ও ব্যবহারিক দিকসমূহ। Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面। উ, এন. এবং ক্লাউসেন, এএম. দ্রুত পৃথকীকরণের জন্য অতি-উচ্চ চাপ তরল ক্রোমাটোগ্রাফির মৌলিক ও ব্যবহারিক দিকসমূহ।উ, এন. এবং ক্লাউসেন, এএম. দ্রুত পৃথকীকরণের জন্য উচ্চচাপ তরল ক্রোমাটোগ্রাফির মৌলিক ও ব্যবহারিক দিকসমূহ।জে. সেপ্ট. সায়েন্স. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
রেন, এসএ এবং চেলিচেফ, পি। ঔষধ উন্নয়নে আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির ব্যবহার। রেন, এসএ এবং চেলিচেফ, পি। ঔষধ উন্নয়নে আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির ব্যবহার।রেন, এসএ এবং চেলিশেফ, পি। ঔষধ উন্নয়নে আল্ট্রা হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির ব্যবহার। Wren, SA এবং Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. রেন, এসএ এবং চেলিচেফ, পি।রেন, এসএ এবং চেলিশেফ, পি। ঔষধ উন্নয়নে আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির প্রয়োগ।জে. ক্রোমাটোগ্রাফি। 1119(1-2), 140-146। https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)।
গু, এইচ. প্রমুখ। এন্টারোভাইরাস ৭১-এর কার্যকর পরিশোধনের জন্য উচ্চ অভ্যন্তরীণ দশাবিশিষ্ট একটি তেল-জলে ইমালশন থেকে প্রাপ্ত একশিলা ম্যাক্রোপোরাস হাইড্রোজেল। রাসায়নিক প্রকল্প জার্নাল ৪০১, ১২৬০৫১ (২০২০)।
শি, ওয়াই., জিয়াং, আর., হোরভাথ, সি. এবং উইলকিন্স, জে.এ. প্রোটিওমিক্সে লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির ভূমিকা। শি, ওয়াই., জিয়াং, আর., হোরভাথ, সি. এবং উইলকিন্স, জে.এ. প্রোটিওমিক্সে লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির ভূমিকা।শি, ওয়াই., জিয়াং, আর., হোরভাথ, সি. এবং উইলকিন্স, জে.এ. প্রোটিওমিক্সে লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির ভূমিকা। Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用। Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAশি, ওয়াই., জিয়াং, আর., হোরভাথ, সি. এবং উইলকিন্স, জে.এ. প্রোটিওমিক্সে লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির ভূমিকা।জে. ক্রোমাটোগ্রাফি। এ 1053 (1-2), 27-36 (2004)।
ফেকাতে, এস., ভুতে, জে.-এল. গিলার্ম, ডি. চিকিৎসাগত পেপটাইড এবং প্রোটিনের রিভার্সড-ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফিক পৃথকীকরণে নতুন প্রবণতা: তত্ত্ব এবং প্রয়োগ। গিলার্ম, ডি. চিকিৎসাগত পেপটাইড এবং প্রোটিনের রিভার্সড-ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফিক পৃথকীকরণে নতুন প্রবণতা: তত্ত্ব এবং প্রয়োগ। & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматограбращи стоматографи: তেওরিয়া এবং приложения. গিলার্ম, ডি. রিভার্স ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা থেরাপিউটিক পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথকীকরণের নতুন প্রবণতা: তত্ত্ব এবং প্রয়োগ। এবং গুইলারমে, ডি. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用. এবং গিলার্ম, ডি।এবং গিলার্মে, ডি. রিভার্স ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা থেরাপিউটিক পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথকীকরণে নতুন প্রবণতা: তত্ত্ব এবং প্রয়োগ।জে. ফার্ম. বায়োমেডিকেল সায়েন্স. অ্যানাস. ৬৯, ৯–২৭ (২০১২)।
গিলার, এম., অলিভোভা, পি., ডেলি, এ.ই. এবং গেবলার, জে.সি. প্রথম এবং দ্বিতীয় পৃথকীকরণ মাত্রায় ভিন্ন পিএইচ ব্যবহার করে আরপি-আরপি-এইচপিএলসি সিস্টেমের মাধ্যমে পেপটাইডের দ্বি-মাত্রিক পৃথকীকরণ। গিলার, এম., অলিভোভা, পি., ডেলি, এ.ই. এবং গেবলার, জে.সি. প্রথম এবং দ্বিতীয় পৃথকীকরণ মাত্রায় ভিন্ন পিএইচ ব্যবহার করে আরপি-আরপি-এইচপিএলসি সিস্টেমের মাধ্যমে পেপটাইডের দ্বি-মাত্রিক পৃথকীকরণ।গিলার এম., অলিভোভা পি., ডালি এ.ই. এবং গেবলার জে.কে. প্রথম ও দ্বিতীয় পৃথকীকরণ মাত্রায় ভিন্ন ভিন্ন pH ব্যবহার করে RP-RP-HPLC সিস্টেমের মাধ্যমে পেপটাইডের দ্বি-মাত্রিক পৃথকীকরণ।গিলার এম., অলিভোভা পি., ডালি এ.ই. এবং গেবলার জে.কে. আরপি-আরপি-এইচপিএলসি সিস্টেম ব্যবহার করে প্রথম এবং দ্বিতীয় পৃথকীকরণ মাত্রায় বিভিন্ন পিএইচ মান ব্যবহার করে পেপটাইডের দ্বি-মাত্রিক পৃথকীকরণ। জে. সেপ্ট সায়েন্স। 28 (14), 1694–1703 (2005)।
ফেলিত্তি, এস. এট আল. ২ µm-এর চেয়ে ছোট সম্পূর্ণ ছিদ্রযুক্ত এবং উপরিভাগে ছিদ্রযুক্ত C18 কণা দ্বারা প্যাক করা উচ্চ-কর্মক্ষমতা ক্রোমাটোগ্রাফি কলামের ভর স্থানান্তর এবং গতিবিদ্যাগত বৈশিষ্ট্যের অনুসন্ধান। জে. সেপ্ট সায়েন্স. 43 (9–10), 1737–1745 (2020)।
পিওভেসানা, এস. এট আল. উদ্ভিদের জৈব-সক্রিয় পেপটাইডের পৃথকীকরণ, সনাক্তকরণ এবং বৈধকরণের সাম্প্রতিক প্রবণতা এবং বিশ্লেষণাত্মক চ্যালেঞ্জ। অ্যানাস. ক্রিয়েচার অ্যানাল. কেমিক্যাল. 410(15), 3425-3444। https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)।
মুলার, জেবি এট আল। জীবন রাজ্যের প্রোটিওমিক ল্যান্ডস্কেপ। নেচার 582 (7813), 592–596। https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)।
ডি লুকা, কে. এট আল. প্রস্তুতিমূলক তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা থেরাপিউটিক পেপটাইডের পোস্ট-ট্রিটমেন্ট। মলিকিউলস (বেসেল, সুইজারল্যান্ড) 26(15), 4688 (2021)।
ইয়াং, ওয়াই. এবং গেং, এক্স. মিশ্র-মোড ক্রোমাটোগ্রাফি এবং জৈব-পলিমারে এর প্রয়োগ। ইয়াং, ওয়াই. এবং গেং, এক্স. মিশ্র-মোড ক্রোমাটোগ্রাফি এবং জৈব-পলিমারে এর প্রয়োগ।ইয়াং, ইউ. এবং গেং, এক্স. মিশ্র মোড ক্রোমাটোগ্রাফি এবং জৈবপলিমারে এর প্রয়োগ। ইয়াং, ওয়াই এবং গেং, এক্স. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用. ইয়াং, ওয়াই. এবং গেং, এক্স. মিশ্র মোড ক্রোমাটোগ্রাফি এবং জৈবপলিমারে এর প্রয়োগ।ইয়াং, ইউ. এবং জিন, এক্স. মিশ্র মোড ক্রোমাটোগ্রাফি এবং জৈবপলিমারে এর প্রয়োগ।জে. ক্রোমাটোগ্রাফি। এ 1218(49), 8813–8825 (2011)।