Аквизицијата и дистрибуцијата на хранливи материи ги интегрираат карактеристиките на инсектите за барање храна и животниот тек. За да се компензираат недостатоците на специфични хранливи материи во различни животни фази, инсектите можат да ги добијат овие хранливи материи преку дополнително хранење, на пример, со хранење со секрети од 'рбетници во процес познат како барички. Комарецот Anopheles arabiani се чини дека е неухранет и затоа му се потребни хранливи материи и за метаболизам и за репродукција. Целта на ова истражување беше да се процени дали агитацијата на An. arabiensis врз урината од крава за аквизиција на хранливи материи ги подобрува карактеристиките на животниот тек.
Проверете дали е безбедно. arabiensis беше привлечен од мирисот на свежа, 24-часовна, 72-часовна и 168-часовна кравја урина, а женките кои бараат домаќин и кои се хранети со крв (48 часа по внесувањето крвен оброк) беа мерени во Y-цевчест олфактометар, а бремените женки беа оценети за тест за мрестење. Потоа беше употребена комбинирана хемиска и електрофизиолошка анализа за да се идентификуваат биоактивни соединенија во кравјата урина во сите четири возрасни класи. Синтетичките мешавини од биоактивни соединенија беа оценети во Y-цевчести и теренски испитувања. За да се испита кравјата урина и нејзиното главно соединение уреа што содржи азот како потенцијални дополнителни диети за вектори на маларија, беа мерени параметрите на хранење и карактеристиките на животниот тек. Беше оценета пропорцијата на женски комарци и количината на апсорбирана кравја урина и уреа. По хранењето, женките беа оценети за преживување, врзан лет и репродукција.
Барајте ја крвта и храната на домаќинот. Во лабораториски и теренски студии, Арапите биле привлечени од природниот и синтетичкиот мирис на свежа и зрела кравја урина. Бремените женки биле рамнодушни кон реакциите на кравја урина на местата за мрестење. Женките кои бараат домаќин и цицаат крв активно ја апсорбираат кравјата урина и уреа и ги распределуваат овие ресурси според компромисите во животниот тек како функција на физиолошката состојба за лет, преживување или репродукција.
Акумулација и дистрибуција на кравја урина кај Anopheles arabinis за подобрени карактеристики на животниот тек. Дополнителното хранење со кравја урина влијае директно на векторски капацитет преку зголемување на дневното преживување и густината на векторите, а индиректно преку менување на активноста на летот и затоа треба да се земе предвид во идните модели.
Стекнувањето и дистрибуцијата на хранливи материи ги интегрира карактеристиките на пребарувањето храна и животниот тек на инсектите [1,2,3]. Инсектите се способни да избираат и да стекнуваат храна и да вршат компензаторно хранење врз основа на достапноста на храна и потребите од хранливи материи [1, 3]. Распределбата на хранливите материи зависи од процесот на животниот тек и може да доведе до различни барања за квалитет и квантитет на исхраната во различните животни фази на инсектите [1, 2]. За да се компензираат недостатоците на специфични хранливи материи, инсектите можат да ги добијат овие хранливи материи преку дополнително хранење, како што е кал, разни измет и секрети на 'рбетници и мрши, процес познат како барички [2]. Иако првенствено се опишани различни видови пеперутки и молци, поилните дупки се јавуваат и кај други редови на инсекти, а привлекувањето и хранењето со овие видови ресурси може да има значителни ефекти врз здравјето и другите карактеристики на животниот тек [2, 4, 5, 6], 7]. Маларичниот комарец Anopheles gambiae sensu lato (sl) се појавува како „неухранет“ возрасен [8], па затоа наводнувањето може да игра важна улога во карактеристиките на неговиот животен тек, но ова однесување досега... беше запоставено. Употребата на агитација како средство за зголемување на внесот на хранливи материи во овој важен носач заслужува внимание бидејќи може да има важни епидемиолошки последици.
Внесот на азот кај возрасни женски комарци Anopheles е ограничен поради ниските калориски резерви што се носат од ларвалната фаза и неефикасното искористување на крвното брашно [9]. Женката Ann.gambiae sl обично го компензира ова со дополнување со дополнителни крвни оброци [10, 11], со што повеќе луѓе се изложени на ризик од заразување со болеста и ги изложуваат комарците на поголем ризик од предаторство. Алтернативно, комарците можат да користат дополнително хранење со екскрети од 'рбетници за да стекнат азотни соединенија што ја подобруваат адаптацијата и маневрирањето во летот, како што покажуваат други инсекти [2]. Во овој поглед, силната и посебна привлечност на еден од видовите браќа и сестри во рамките на An. Комплексот на видови од гамбискиот sl, Anopheles arabinis, свежа и зрела кравја урина [12,13,14], е интересен. Anopheles arabinis е опортунистички во своите преференции за домаќинот и е познато дека се дружи и се храни со говеда. Кравјата урина е ресурс богат со азотни соединенија, при што уреата сочинува 50-95% од вкупниот азот во свежата урина [15, 16]. Како што кравјата урина старее, микроорганизмите ги користат овие ресурси за да ја намалат комплексноста на азотните соединенија во рок од 24 часа [15]. Со брзото зголемување на амонијакот, поврзано со намалување на органскиот азот, алкалофилните микроорганизми (од кои многу произведуваат соединенија токсични за комарците) напредуваат [15], кои може да бидат женски. Ann.arabiensis е преференцијално привлечена од урина стара 24 часа или помалку [13, 14].
Во оваа студија, беа барани домаќини и крвно хранети комарци. За време на својот прв циклус на гонадотропини, arabiensis беше оценет за стекнување на азотни соединенија, вклучително и уреа, со мешање на урина. Потоа, беа спроведени серија експерименти за да се процени како женските комарци го распределуваат овој потенцијален ресурс на хранливи материи за подобрено преживување, репродукција и понатамошно барање храна. Конечно, беше оценет мирисот на свежа и стара кравја урина за да се утврди дали тие обезбедуваат сигурни индиции за домаќинот и крвно хранетиот комарец. Во нивното пребарување за овој потенцијален хранлив ресурс, arabiensis откри хемиски корелации зад забележаната диференцијална привлечност. Синтетичките мешавини од мириси на испарливи органски соединенија (VOC) идентификувани во 24-часовна стара урина беа дополнително оценети во теренски услови, проширувајќи ги резултатите добиени во лабораториски услови и демонстрирајќи го ефектот на мирисот на говедска урина врз различни физиолошки состојби. Привлечност на комарци. Добиените резултати потврдуваат дека An. arabiensis стекнува и дистрибуира азотни соединенија пронајдени во урината на 'рбетниците за да влијае на карактеристиките на животниот тек. Овие резултати се дискутираат во контекст на потенцијални епидемиолошки последици и како тие можат да се користат за надзор и контрола на вектори.
Anopheles arabicans (сој Dongola) беа одржувани на 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH и циклус светлина:темнина од 12:12 часа. Ларвите беа одгледувани во пластични послужавници (20 cm × 18 cm × 7 cm) исполнети со дестилирана вода и хранети со храна за риби Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE). Куклите беа собрани во чаши од 30 ml (Nolato Hertila, Åstorp, SE), а потоа префрлени во кафези Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Тајван) за да се овозможи излегување на возрасните единки. На возрасните им беше даден 10% раствор на сахароза ad libitum до 4 дена по појавувањето (dpe), по што на женките кои бараа домаќин им беше понудена храна непосредно пред експериментот или беа изгладнети преку ноќ со дестилирана вода пред експериментот, како што е опишано подолу. Женките што се користеа за експерименти со цевки за летање беа изгладнети само 4-6 часа со вода и... libitum. За да се подготват комарци што цицаат крв за последователни биолошки анализи, на 4 dpe женки им беше дадена дефибротична овчо крв (Håtunalab, Bro, SE) со користење на систем за мембранско хранење (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK). Целосно загушените женки потоа беа префрлени во индивидуални кафези и им беше дадена директно храна, како што е опишано подолу, или 10% сахароза ad libitum во тек на 3 дена пред експериментите опишани подолу. Последните женки беа користени за биолошки анализи во летечки цевки и префрлени во лабораторија, а потоа добија дестилирана вода ad libitum 4-6 часа пред експериментот.
Тестови за хранење беа користени за квантифицирање на потрошувачката на урина и уреа кај возрасна женка од расата Араб. На женките кои бараа домаќин и хранети со крв им беше дадена исхрана што содржеше 1% разредена свежа и зрела кравја урина, различни концентрации на уреа и две контроли (10% сахароза и вода) во тек на 48 часа. Дополнително, во исхраната беше додадена прехранбена боја (1 mg ml-1 ксилен цијанид FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Стокхолм, SE) и беше доставена во матрица 4 × 4 во микроцентрифугални цевки од 250 µl (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Слика 1A) Наполнете до работ (~300 µl). За да се избегне конкуренција помеѓу комарците и потенцијалните ефекти од бојата на бојата, ставете 10 комарци во голема Петриева шолја (12 cm во дијаметар и 6 cm во висина; Semadeni, Ostermundigen, CH; Слика 1A) во целосен мрак на 25 ± 2 cm °C и 65 ± 5% релативна влажност. Овие експерименти беа повторени 5 до 10 пати. По изложувањето на храна, комарците беа сместени на -20 °C до понатамошна анализа.
Побарајте говедска урина и уреа апсорбирани од домаќинот и женката што цица крв Anopheles arabianus. Во обидот за хранење (A), на женските комарци им беше дадена исхрана што се состоеше од свежа и зрела кравја урина, различни концентрации на уреа, сахароза (10%) и дестилирана вода (H2O). Женките што бараат домаќин (B) и хранети со крв (C) апсорбираа повеќе сахароза од која било друга тестирана исхрана. Забележете дека женките што бараат домаќин апсорбираа кравја урина од 72 часа помалку од кравја урина од 168 часа (B). Просечната вкупна содржина на азот (± стандардна девијација) во урината е претставена во вметнатиот дел. Женките што бараат домаќин (D, F) и женките што цицаат крв (E, G) апсорбираат уреа на начин зависен од дозата. Просечните вдишани волумени (D, E) со различни имиња на букви беа значително различни едни од други (еднонасочна ANOVA користејќи ја пост хок анализата на Туки; p < 0,05). Грешките претставуваат стандардна грешка на средната вредност (BE). Правата испрекината линија ја претставува логаритамската линеарна регресиона линија (F, G)
За да се ослободи апсорбираната храна, комарците беа индивидуално ставени во микроцентрифугални цевки од 1,5 ml што содржеа 230 µl дестилирана вода и ткивото беше раздробено со помош на толчник за еднократна употреба и безжичен мотор (VWR International, Lund, SE), по што следеше центрифугирање на 10 krpm во тек на 10 минути. Супернатантот (200 µl) беше префрлен во микроплоча со 96 бунари (Sigma-Aldrich) и апсорпцијата (λ620) беше одредена со помош на читач на микроплочи базиран на спектрофотометар (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Алтернативно, комарците беа мелени во 1 ml дестилирана вода, од кои 900 µl беа префрлени во кивета за спектрофотометриска анализа (λ620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). За да се квантифицира внесот преку исхраната, беше подготвена стандардна крива со сериско разредување за да се добие 0,2 µl до 2,4 µl од 1 mg ml-1. ксилен цијанид. Потоа, оптичката густина на познати концентрации на бои беше искористена за да се одреди количината на храна што ја проголтал секој комарец.
Податоците за волуменот беа анализирани со користење на еднонасочна анализа на варијанса (ANOVA), проследена со споредби по парови споредени од Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Линеарните регресиони анализи го опишаа внесот на уреа зависен од концентрацијата и ги споредија реакциите помеѓу комарците што бараат домаќин и комарците што цицаат крв (GraphPad Prism v8.0.0 за Mac, GraphPad Software, Сан Диего, Калифорнија, САД).
Приближно 20 µl примероци од урина од секоја возрасна група беа врзани на Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) и капсулирани во лимени капсули (8 mm × 5 mm). Капсулите беа вметнати во комората за согорување на CHNS/O анализатор (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, САД) за да се утврди содржината на азот во свежа и зрела урина според протоколот на производителот. Вкупниот азот (g N l-1) беше квантифициран врз основа на познати концентрации на уреа што се користат како стандард.
За да се процени ефектот на исхраната врз преживувањето на женките кои бараат домаќин и кои цицаат крв, комарците беа индивидуално сместени во големи Петриеви садови (12 см во дијаметар и 6 см во висина; Semadeni) со дупка покриена со мрежа во капакот (3 см во дијаметар) со за вентилација и снабдување со храна. Исхраната беше обезбедена директно по 4 dpe и вклучуваше 1% разредена свежа и зрела кравја урина, четири концентрации на уреа и две контроли, 10% сахароза и вода. Секоја диета беше пипетирана на забен тампон (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) вметнат во шприц од 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Гетеборг, SE), клипот беше отстранет и поставен на врвот на Петриевата чинија (слика 1).1A). Менувајте ја вашата исхрана секој ден. Одржувајте ја лабораторијата како што е опишано погоре. Преживеаните комарци беа броени двапати на ден, додека мртвите комарци беа отфрлани додека не умре последниот комарец (n = 40 по третман). Преживувањето на комарците хранети со различни диети беше статистички анализирано со користење на криви на преживување Каплан-Мајер и log-rank тестови. да се споредат споредбите на распределбата на преживувањето помеѓу диетите (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Летачка мелница за комарци по мерка базирана на Атисано и др.[17], изработена од проѕирни акрилни панели со дебелина од 5 mm (10 cm ширина x 10 cm должина x 10 cm висина) без предни и задни панели (Сл. 3: горе). Вртлив склоп со вертикална цевка направена од колона за гасна хроматографија (0,25 mm внатрешна ширина; 7,5 cm должина) со краеви залепени на игла за инсекти обесена помеѓу пар неодимиумски магнети на растојание од 9 cm. Хоризонтална цевка направена од истиот материјал (6,5 cm должина) ја преполовува вертикалната цевка за да формира врзана рака и рака што носи мало парче алуминиумска фолија како сигнал за прекинување на светлината.
Женките кои биле изгладнети 24 часа добиле горенаведената исхрана 30 минути пред ограничувањето. Целосно нахранетите женски комарци потоа биле индивидуално анестезирани на мраз 2-3 минути и прицврстени на иглички за инсекти со пчелин восок (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE), а потоа врзани за краците на хоризонталните цевки. Летачка мелница. Вртежите по лет биле снимени со специјално изработен логер на податоци, а потоа зачувани и прикажани со помош на софтверот PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Летачката мелница била сместена во просторија со климатска регулација (12 часа:12 часа, светлина:темна, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
За да се визуелизира моделот на активноста на летот, вкупното прелетувано растојание (m) и вкупниот број на последователни активности на летот беа пресметани на час во период од 24 часа. Покрај тоа, просечните растојанија прелетани од поединечни жени беа споредени низ третманите и анализирани со користење на еднонасочна ANOVA и пост-хок анализа на Туки (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), каде што просечното растојание се сметаше за зависна променлива, додека третманот е независен фактор. Дополнително, просечниот број на кругови се пресметува во интервали од 10 минути.
За да се процени ефектот на исхраната врз репродуктивните перформанси на An.arabiensis, шест женки (4 dpe) беа префрлени директно во кафези Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) по земањето крв, а потоа им беше дадена експерименталната исхрана 48 часа како што е опишано погоре. Потоа, исхраната беше отстранета и на третиот ден беа обезбедени чаши за мрестење (30 ml; Nolato Hertila) наполнети со 20 ml дестилирана вода, во траење од 48 часа, менувајќи ги на секои 24 часа. Секој режим на исхрана се повторува 20-50 пати. Јајцата беа броени и евидентирани за секој експериментален кафез. Подпримероци од јајца беа користени за да се процени просечната варијација на големината и должината на поединечните јајца (n ≥ 200 по диета) со помош на микроскоп Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) опремен со камера Leica (DFC) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., Германија). Останатите јајца беа чувани во климатизирана просторија под стандардни услови за одгледување 24 часа, а беше измерен и подпримерок од неодамна појавени ларви од прва фаза (n ≥ 200 по диета), како што е опишано погоре. Бројот на јајца и големината на јајцата и ларвите беа споредени помеѓу третманите и со користење на еднонасочна ANOVA и Tukey-ова post hoc анализа (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Испарливи материи од свежа (1 час по земањето мостри), 24 часа, 72 часа и 168 часа зрела урина беа собрани од примероци собрани од говеда од расата Зебу, Арси. За погодност, примероците од урина беа собрани рано наутро додека кравите сè уште беа во шталата. Примероци од урина беа собрани од 10 единки и 100-200 мл од секој примерок беа префрлени во индивидуални полиамидни кеси за печење (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) во 3 l полиамид со капак во буриња од винил хлорид пластика. Испарливи материи од секој примерок од говедска урина беа собрани или директно (свежо) или по созревање на собна температура во тек на 24 часа, 72 часа и 168 часа, т.е. секој примерок од урина беше репрезентативен за секоја возрасна група.
За собирање на испарливи материи од горниот простор, беше користен систем со затворена јамка за циркулација на гасен поток филтриран со активен јаглен (100 ml min-1) низ полиамидна кеса до адсорпциската колона во тек на 2,5 часа со користење на дијафрагмна вакуум пумпа (KNF Neuberger, Фрајбург, Германија). Како контрола, собирањето на гас од горниот простор беше извршено од празна полиамидна кеса. Адсорпциската колона беше направена од тефлонски цевки (5,5 cm x 3 mm id) што содржеа 35 mg Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, САД) помеѓу приклучоци од стаклена волна. Пред употреба, колоната беше исплакната со 1 ml редистилиран n-хексан (Merck, Darmstadt, Германија) и 1 ml пентан (99,0% чист растворувач GC степен, Sigma Aldrich). Адсорбираните испарливи материи беа елуирани со 400 μl пентан. Колекциите од горниот простор беа собрани, а потоа складирани на -20°C додека не се користат за понатамошна анализа.
Однесувачките реакции на An кои бараат домаќин и кои јадат крв. Испарливи екстракти од Headspace собрани од свежа, 24-часовна, 72-часовна и 168-часовна урина беа анализирани за испарливи екстракти од комарци Arabidopsis со помош на олфактометар со права стаклена цевка [18]. Експериментите беа спроведени за време на ZT 13-15, периодот на врв на активноста на An за барање дом. Arab [19]. Олфактометар со стаклена цевка (80 cm × 9,5 cm id) беше осветлен со 3 ± 1 lx црвена светлина одозгора. Проток на воздух филтриран со јаглен и навлажнет (25 ± 2 °C, 65 ± 2% релативна влажност) го помина биолошкиот тест со 30 cm s-1. Воздухот се пренесува низ серија мрежи од не'рѓосувачки челик, создавајќи ламинарен проток и униформна структура на пердув. Дозатор за забни тампони (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), суспендиран од калем од 5 cm на наветрен крај на олфактометарот, со промени на стимулаторот на секои 5 минути. За анализа, 10 μl од секој екстракт од headspace, разреден 1:10, беше користен како стимул. Еднаква количина на пентан беше користена како контрола. Поединечни комарци кои бараат домаќин или цицаат крв беа сместени во индивидуални кафези за ослободување 2-3 часа пред почетокот на експериментот. Кафезот за ослободување беше поставен на страната на олфактомерот што се движи надолу по ветерот, а на комарците им беше дозволено да се аклиматизираат 1 минута, а потоа вентилот-пеперутка на кафезот беше отворен за ослободување. Привлечноста кон третманот или контролата беше анализирана како дел од комарците кои дојдоа во контакт со изворот во рок од 5 минути од ослободувањето. Секој испарлив екстракт од headspace и контрола беа реплицирани најмалку 30 пати, а за да се избегнат ефектите од кој било еден ден, ист број на третмани и контроли беа тестирани на секој експериментален ден. Одговорите на барање од домаќин и хранети со крв Ans.Arabic наспроти headspace сетови беа анализирани со номинална логистичка регресија проследена со парни споредби за непарни соодноси (JMP Pro, v14.0.0, SAS Институт Инк.).
Одговор на мрестење на Ан. Екстрактите од главообразниот простор од свежа и зрела кравја урина беа анализирани во кафези од расата Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Пластични чаши (30 mL; Nolato Hertila) наполнети со 20 mL дестилирана вода обезбедија супстрат за мрестење и беа поставени во спротивни агли на кафезот, на растојание од 24 cm. Чашите за третман беа прилагодени со 10 μl од секој екстракт од главообразниот простор со разредување 1:10. Еднаква количина пентан беше употребена за прилагодување на контролната чаша. Чашите за третман и контролните чаши беа разменети помеѓу секој експеримент за контрола на ефектите на положбата. Десет женки хранети со крв беа пуштени во експериментални кафези во ZT 9-11 и јајцата во чашите беа изброени 24 часа подоцна. Формулата за пресметување на индексот на мрестење е: (бројот на јајца положени во чашата за третман - бројот на јајца положени во контролната чаша) / (вкупниот број на положени јајца). Секој третман беше повторен 8 пати.
Анализата со гасна хроматографска анализа и детекција на шема на електронски антени (GC-EAD) на женката An.arabiensis беше извршена како што беше претходно опишано [20]. Накратко, свежите испарливи екстракти од хедпросторот беа одвоени со помош на Agilent Technologies 6890 GC (Санта Клара, Калифорнија, САД) опремена со HP-5 колона (30 m × 0,25 mm id, 0,25 μm дебелина на филмот, Agilent Technologies). и стареење на урина. Водородот беше користен како мобилна фаза со просечна линеарна брзина на проток од 45 cm s-1. Секој примерок (2 μl) беше инјектиран 30 секунди во режим без разделување со влезна температура од 225 °C. Температурата на GC печката беше програмирана од 35 °C (задржување од 3 минути) до 300 °C (задржување од 10 минути) на 10 °C min-1. Во GC разделувачот на ефлуент, беа додадени 4 psi азот и разделени 1:1 во Gerstel 3D/2 крст со низок мртов волумен (Gerstel, Mülheim, DE) помеѓу детекторот за јонизација на пламен и EAD. Капиларот на GC ефлуент за EAD беше пропуштен низ Gerstel ODP-2 преносна линија, која ја следи температурата на GC печката плус 5 °C, во стаклена цевка (10 cm × 8 mm), каде што беше измешан со филтриран со јаглерод, навлажнет воздух (1,5 l min-1). Антената беше поставена 0,5 см од излезот на цевката. Секој поединечен комарец претставувал една копија, а за комарците што бараат домаќин, биле извршени најмалку три копија на примероци од урина од секоја возраст.
Идентификација на биоактивни соединенија во колекции на свежа и стара говедска урина со употреба на комбиниран GC и масен спектрометар (GC-MS; 6890 GC и 5975 MS; Agilent Technologies) за да се предизвикаат антенски одговори во GC-EAD анализата, која работи во режим на јонизација со електронски удар на 70 eV. GC беше опремен со капиларна колона од фузиран силициум диоксид обложена со HP-5MS UI (внатрешен дијаметар од 60 m × 0,25 mm, дебелина на филмот од 0,25 μm) со употреба на хелиум како мобилна фаза со просечна линеарна брзина на проток од 35 cm s-1. Примерок од 2 μl беше инјектиран со користење на истите поставки на инјекторот и температура на печката како и за GC-EAD анализата. Соединенијата беа идентификувани врз основа на нивното време на задржување (Коват индекс) и масени спектри во споредба со прилагодената библиотека и библиотеката NIST14 (Agilent). Идентификуваните соединенија беа потврдени со инјектирање на автентични стандарди (Дополнителна датотека 1: Табела S2). За квантификација, хептил ацетат (10 ng, 99,8% хемиска чистота, Aldrich) беше инјектиран како надворешен стандард.
Оценување на ефикасноста на синтетичка мешавина од мириси што се состои од биоактивни соединенија идентификувани во свежа и стара урина Ans.arabiensis што бара домаќин и цица крв, користејќи го истиот олфактометар и протокол како погоре. Синтетичките мешавини го имитираа составот и пропорциите на соединенијата во мешани испарливи екстракти од свежа, 24-часовна, 48-часовна, 72-часовна и 168-часовна стара урина (Слика 5D-G; Дополнителна датотека 1: Табела S2). За анализа, користете 10 μl од разредување од 1:100 од целосно синтетичката мешавина, со вкупна стапка на ослободување што се движи од приближно 140-2400 ng h-1, за проценка на привлечноста за домаќинот и комарците што цицаат крв. Потоа, тестот се изведува на комплетни мешавини, во кои се отстрануваат субтрактивните мешавини од единечни соединенија од комплетната мешавина. Одговорите на барање од домаќинот и хранети со крв Ans.Arab наспроти синтетичките и субтрактивните мешавини беа анализирани со номинална логистичка регресија проследена со парни споредби за непарни соодноси (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
За да се процени дали кравјата урина може да послужи како сигнал за живеалиште на малариски комарци, свежа и стара кравја урина, собрана како што е опишано погоре, и вода беа ставени во кофи со мрежа од 3 литри (100 ml) и поставени во стапици за мамки за домаќини. (BG-HDT верзија; BioGents, Регенсбург, Германија). Десет стапици поставени на растојание од 50 метри една од друга на пасиште, 400 метри од селската заедница (Силеј, Етиопија, 5°53'24''N, 37°29'24''E) и без добиток, на постојани места за размножување и села. Пет стапици беа загревани за да се симулира присуството на домаќин, додека пет стапици беа оставени незагреани. Секоја локација за третман се ротираше секоја ноќ вкупно пет ноќи. Бројот на комарци заробени во стапици намамени со урина од различни возрасти беше спореден со користење на логистичка регресија со бета биномна распределба (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Во село ендемично за маларија во близина на градот Маки, регионот Оромија, Етиопија (8° 11′ 08″ СГШ, 38° 81′ 70″ ИГД; Слика 6А). Студијата е спроведена помеѓу средината на август и средината на септември пред годишното прскање со остатоци во затворен простор, заедно со долгата сезона на дождови. За студијата беа избрани пет пара куќи (оддалечени 20-50 метри) лоцирани на периферијата на селото (Сл. 6А). Критериумите што се користеа за избор на куќите беа: не е дозволено внесување животни во куќата, не е дозволено готвење во затворен простор (на огревно дрво или јаглен) (барем за време на пробниот период) и куќи со максимум двајца жители, кои спијат во неинсектициди. под третираната мрежа против комарци. Етичко одобрение е дадено од Одборот за преглед на етика на институционалните истражувања (IRB/022/2016) на Факултетот за природни науки (CNS-IRB), Универзитет во Адис Абеба, во согласност со упатствата утврдени со Декларацијата на Светската медицинска асоцијација од Хелсинки. Согласност од секој глава на домаќинство е добиена со помош на здравствениот персонал. Целиот процес е одобрен од локалните администрации на ниво на округ и одделение („кебеле“). Експерименталниот дизајн следеше латински квадратен дизајн 2 × 2, во кој синтетичките смеси и контролите беа доделени на парни куќи во првата ноќ и заменети меѓу куќите во следната експериментална ноќ. Овој процес беше повторен десет пати. Дополнително, за да се процени активноста на комарците во избрани куќи, стапиците на CDC беа поставени да работат пет последователни ноќи на почетокот, средината и крајот на теренското испитување во исто време од денот.
Синтетичка смеса што содржи шест биоактивни соединенија беше растворена во хептан (97,0% растворувач со GC степен, Sigma Aldrich) и ослободена на 140 ng h-1 со помош на диспензер за фитил од памук [20]. Диспензерот за фитил овозможи сите соединенија да се ослободат во константни пропорции во текот на 12-часовниот експеримент. Хептанот беше користен како контрола. Ампулата беше суспендирана веднаш до влезната точка на светлосната стапица на Центрите за контрола и превенција на болести (CDC) (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Слика 6A). Стапиците беа закачени 0,8 - 1 m над земјата, во близина на подножјето на креветот, а волонтерот спиеше под нетретирана мрежа против комарци и работеше помеѓу 18:00 и 06:30 часот. Комарците заробени по пол и физиолошки статус (ненахранети, нахранети, полубремени и бремени [21] последователно беа скринирани со помош на анализа на полимеразна верижна реакција (PCR) за да се идентификуваат видовите морфолошки идентификувани како A. gambiae sl. Членови на комплексот [23]. Во Во теренска студија, заробувањето на парни куќи беше анализирано со користење на номинален логистички модел на вклопување, каде што привлекувањето беше зависна променлива, а третманот (синтетичка мешавина наспроти контрола) беше фиксен ефект (JMP® 14.0. 0. SAS Institute Inc.). Овде, ги прикажуваме χ2 и p-вредностите од тестот за однос на веројатност.
Оценете дали е безбедно. arabiensis успеа да добие урина, неговиот главен извор на азот, уреа, преку директно хранење, во рок од 48 часа од администрацијата во тек на 4 дена по (dpe) испитувањата за хранење на женки кои бараат домаќин и хранети со крв (Сл. 1А). И женките кои бараат домаќин и женките кои цицаат крв апсорбираа значително повеќе сахароза од која било друга диета или вода (F(5,426) = 20,15, p < 0,0001 и F(5,299) = 56,00, p < 0,0001, соодветно; Сл. 1Б,В). Понатаму, женките кои бараат домаќин јадеа помалку урина на 72 часа во споредба со урина на 168 часа (Сл. 1Б). Кога им беше понудена диета што содржи уреа, женките кои бараат домаќин апсорбираа значително поголема количина на уреа на 2,69 mM во споредба со сите други концентрации и вода, додека не се разликуваа од 10% сахароза (F(10,813) = 15,72, p <0,0001; Слика 1D). Ова беше спротивно на одговорот на женките хранети со крв, кои обично апсорбираа значително повеќе храна што содржи уреа отколку вода, иако значително помалку од 10% сахароза (F(10,557) = 78,35, p < 0,0001; Слика 1).1E). Понатаму, кога се споредуваа двете физиолошки состојби, флеботомизираните женки апсорбираа повеќе уреа од женките што бараат домаќин при најниски концентрации, а овие женки апсорбираа слични количини на уреа при повисоки концентрации (F(1,953) = 78,82, p < 0,0001; Сл. 1F, G). Додека внесот од диета што содржи уреа се чинеше дека има оптимални вредности (Сл. 1D, E), женките во обете физиолошки состојби беа во можност да ја модулираат количината на апсорбирана уреа во целиот опсег на концентрации на уреа на логаритамски линеарен начин (Сл. 1F, G). ).Слично на тоа, комарците се чини дека го контролираат внесувањето на азот со регулирање на количината на апсорбирана урина, бидејќи количината на азот во урината се одразува во апсорбираната количина (вметнувања на Слика 1Б, Ц и Б).
За да се проценат ефектите од урината и уреата врз преживувањето на комарците кои бараат домаќин и комарците кои цицаат крв, на женките им била дадена урина од сите четири возрасти (свежа, 24 часа, 72 часа и 168 часа по таложењето) и низа концентрации на уреа, како и дестилирана вода и 10% сахароза кои служеле како контрола (Слика 2А). Оваа анализа на преживување покажа дека исхраната имала значаен ефект врз вкупното преживување кај женките кои бараат домаќин (урина: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; уреа: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; Сл. 2Б, В) и женките хранети со крв (урина: χ2 = 93,0, df = 5, p < 0,0001; уреа: χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; Слика 2Д,Е). Во сите експерименти, женките биле хранети со Исхраната со урина, уреа и вода имаше значително пониски стапки на преживување во споредба со женките хранети со сахарозна диета (Слика 2Б-Е). Женките кои бараа домаќин и кои беа хранети со свежа и застоена урина покажаа различни стапки на преживување, при што оние кои беа хранети со 72-часовна застоена урина (p = 0,016) имаа најниска веројатност за преживување (Слика 2Б). Понатаму, женките кои бараа домаќин и кои беа хранети со 135 mM уреа преживеаа подолго од контролните групи со вода (p < 0,04) (Слика 2В). Во споредба со водата, жените хранети со свежа урина и 24-часовна урина преживеаа подолго (p = 0,001 и p = 0,012, соодветно; Слика 2Д), додека жените хранети со 72-часовна урина преживеаа подолго од оние кои беа хранети со женки со кратка свежа урина и 24-часовна урина (p < 0,0001 и p = 0,013, соодветно; Слика 2Д). Кога беа хранети со 135 mM уреа, женките хранети со крв преживеаа подолго од сите други концентрации на уреа и вода (p < 0,013; Слика 2Е).
Преживување на домаќинот и женките Anopheles arabinis кои цицаат крв и се хранат со кравја урина и уреа. Во биолошкиот тест (А), на женските комарци им беше дадена исхрана која се состоеше од свежа и зрела кравја урина, различни концентрации на уреа, сахароза (10%) и дестилирана вода (H2O). Преживувањето на комарците кои бараат домаќин (Б, В) и комарците кои цицаат крв (Д, Е) се бележеше на секои 12 часа сè додека сите женки кои се хранат со урина (Б, Д) и уреа (В, Е), и контролите, сахароза и вода, не умреа.
Вкупното растојание и бројот на кругови утврдени во тестот со мелница за летање во период од 24 часа се разликуваа кај комарците што бараат домаќин и оние што цицаат крв, кои покажаа помала активност на лет во целина (Сл. 3). Комарците што бараат домаќин и кои даваа свежа и стара урина или сахароза и вода покажаа различни модели на лет (Сл. 3), при што женките што се хранат со свежа урина беа поактивни во зори, додека оние што се хранат со комарци стари 24 и 168 часа, кои се хранат со урина, покажаа различни модели на лет и беа првенствено дневни. Женските комарци што даваа сахароза или 72-часовна урина покажаа активност во текот на 24-часовниот период, додека женките што даваа вода беа поактивни во средината на периодот. Комарците што се хранат со сахароза покажаа највисоки нивоа на активност доцна навечер и рано наутро, додека оние што внесоа урина стара 72 часа доживеаја постојан пад на активноста во текот на 24 часа (Слика 3).
Перформанси на лет кај женка од типот Anopheles arabinis која цица крв и бара лов, а се храни со кравја урина и уреа. Во тестот со мелница за летање, женките комарци кои се хранеле со свежа и стара кравја урина, различни концентрации на уреа, сахароза (10%) и дестилирана вода (H2O) биле врзани за хоризонтални, слободно ротирачки краци (горе). За женките кои бараат домаќин (лево) и женките кои цицаат крв (десно), вкупното растојание и бројот на летови на час за секоја диета во период од 24 часа е забележано (темно: сиво; светло: бело). Просечното растојание и просечниот број на напади се прикажани десно од графиконот на циркадијалната активност. Лентите за грешка претставуваат стандардна грешка на средната вредност. Статистичка анализа, видете го текстот.
Општо земено, целокупната активност на летање кај женките кои бараат домаќин следеше шема слична на онаа на растојанието на летање во период од 24 часа. Просечното растојание на летање беше значително засегнато од внесената исхрана (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), а женките кои бараат домаќин внесуваа 72 часа урина, летаа значително подолги растојанија во споредба со сите други диети (p < 0,0001), а комарците хранети со сахароза летаа подолго од комарците хранети со свежа (p = 0,022) и 24-часовна урина (p = 0,022). За разлика од шемата на активност на летање опишана од исхраната со урина, женките кои бараат домаќин хранети со уреа покажаа перзистентна активност на летање во период од 24 часа, достигнувајќи врв во втората половина од темната фаза (Сл. 3). Иако моделите на активност беа слични, женките кои бараат домаќин хранети со уреа значително го зголемија просечното растојание на летање во зависност од апсорбираната концентрација (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). Женките кои барале домаќин и биле хранети со која било концентрација на уреа летале подолго од женките хранети со вода или сахароза (p < 0,03).
Вкупната активност на летот на комарците крвопијци беше стабилна и одржувана во текот на 24 часа кај сите диети, со зголемена активност на урина во текот на втората половина од темниот период кај женките хранети со вода, како и кај женките хранети свежи и стари 24 часа (слика 3). Додека исхраната со урина значително влијаеше на просечното растојание на летот кај женките хранети со крв (F(5, 138) = 4,83, p = 0,0004), исхраната со уреа не влијаеше (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) со друга урина и контролна исхрана (свежа, p = 0,0091; 72 часа, p = 0,0022; 168 часа, p = 0,001; сахароза, p = 0,0017; dH2O, p = 0,036).
Ефектите од исхраната со урина и уреа врз репродуктивните параметри беа оценети во биолошки тестови за положување јајца (Слика 4А) и беа испитани според бројот на јајца положени од секоја женка, големината на јајцето и новоизведените ларви од првиот инстар. Бројот на положени јајца. Арапските женки хранети со урина варираа во зависност од исхраната (F(5,222) = 4,38, p = 0,0008; Сл. 4Б). Женките хранети со 24-часовен оброк од урина и крв положија значително повеќе јајца од женките хранети со други видови урина и беа слични на оние хранети со сахароза (Сл. 4Б). Слично на тоа, големината на јајцата положени од женките хранети со урина варираше во зависност од исхраната (F(5,209) = 12,85, p < 0,0001), при што женките хранети со 24-часовен оброк од урина и сахароза положуваа значително поголеми јајца од женките хранети со вода, додека јајцата на женките хранети со 168 часа урина беа значително помали (Сл. 4В). Покрај тоа, исхраната со урина значително влијаеше на големината на ларвата (F(5, 187) = 7,86, p < 0,0001), при што значително поголеми ларви излегуваат од јајца положени од женки хранети со урина стари 24 и 72 часа отколку од јајца положени од ларви од јајца. Женки хранети со вода и женки хранети со урина стари 168 часа (Слика 4D).
Репродуктивни перформанси на женски комарци од родот Anopheles arabinis кои се хранат со кравја урина и уреа. Женските комарци хранети со крв биле хранети со храна која се состоела од свежа и зрела кравја урина, различни концентрации на уреа, сахароза (10%) и дестилирана вода (H2O) 48 часа пред да се стават во биолошки тестови и да се добијат супстрати за положување јајца 48 часа (A). Бројот на јајца (B, E), големината на јајцата (C, F) и големината на ларвите (D, G) биле значително засегнати од обезбедената исхрана (кравја урина: BD; уреа: EG). Средните вредности за секој параметар мерени со користење на различни имиња на букви биле значително различни едни од други (еднонасочна ANOVA со користење на Tukey-ова post hoc анализа; p < 0,05). Грешките претставуваат стандардна грешка на средната вредност.
Како главна азотна компонента на урината, уреата, кога се давала како исхрана на женки хранети со крв, значително влијаела врз репродуктивните параметри во сите студии. Бројот на јајца положени од женки хранети со уреа, по крвен оброк, во зависност од концентрацијата на уреа (F(11, 360) = 4,69; p < 0,0001), женките хранети со концентрации на уреа помеѓу 134 µM и 1,34 mM положиле повеќе јајца (Слика 4E). Женките хранети со концентрации на уреа од 134 µM или повеќе положувале поголеми јајца од женките хранети со вода (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; Слика 4F), а големината на ларвите, иако под влијание на слични концентрации на уреа кај мајките (F(10, 3305) = 37,9; p < 0,0001) била попроменлива (Слика 4G).
Целокупна привлечност кон испарливи екстракти од урина од говеда што бараат домаќин. Arabiensis-от оценет во олфактометарот со стаклена цевка (Сл. 5А) беше значително засегнат од возраста на урината (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; Сл. 5Б). Пост хок анализата покажа дека мирисот на застоена урина по 24 часа предизвика значително повисоки нивоа на привлечност во споредба со сите други третмани (72 часа: p = 0,0060, 168 часа: p = 0,012, пентан: p = 0,00070), освен мирисот на свежа урина (p = 0,13; Слика 5Б). Иако целокупната привлечност на комарците што цицаат крв кон мирисот на урина не беше значително различна (χ2 = 8,78, df = 4, p = 0,067; Сл. 5В), се покажа дека овие женки се значително попривлечни за испарливи екстракти од урина во споредба со урината стара 72 часа во споредба со контролните единици (p = 0,0066; Слика 5В).
Однесувачки одговори на природни и синтетички мириси на кравја урина при потрага по домаќин и комарци хранети со крв Anopheles arabianus. Шема на олфактомерот од стаклена цевка (A). Привлекување на испарливи екстракти од хедпросторот од свежа и зрела кравја урина кон комарци домаќини (B) и комарци кои цицаат крв (C). Пронајдете ја реакцијата на пипалата на Lord An. Прикажани се екстракти од хедпростор изолирани од свежа (D), 24-часовна (E), 72-часовна (F) и 168-часовна (G) зрела кравја урина. Трагите од детекција на електронска антена (EAD) покажуваат промени на напонот како одговор на биоактивни соединенија во хедпросторот елуирани од гасниот хроматограф и детектирани со детектор за јонизација на пламен (FID). Лентата со скала ја претставува амплитудата на одговор (mV) наспроти времето на задржување (s). Прикажани се својствата и стапките на ослободување (µg h-1) на биолошки активните соединенија. Една ѕвездичка (*) означува конзистентен одговор со ниска амплитуда. Двојни ѕвездички (**) означуваат нерепродуктивни одговори. Пронајдете го домаќинот (H) и Крвоцицачкиот (I) An.arabiensis има различна привлечност кон синтетичките мешавини од мириси на свежа и стара кравја урина. Просечните пропорции на комарци привлечени од различни имиња на букви беа значително различни едни од други (еднонасочна ANOVA користејќи ја пост-хок анализата на Туки; p < 0,05). Грешките претставуваат стандардна грешка на скалата.
Женка Ann.arabiensis, 72 часа и 120 часа по крвното брашно, за време на мрестење, не беше покажана преференција за испарливи екстракти од хедспејс од свежа и зрела кравја урина во споредба со контролите со пентан (χ2 = 3,07, p > 0,05; Дополнителна датотека 1: Сл. S1).
За женскиот Ann.arabiensis, анализите со GC-EAD и GC-MS идентификуваа осум, шест, три и три биоактивни соединенија (Слика 5D-G). Иако беа забележани разлики во бројот на соединенија што предизвикаа електрофизиолошки одговори, повеќето од овие соединенија беа присутни во секој испарлив екстракт од хедспејс собран од свежа и стареена урина. Затоа, за секој екстракт, во понатамошните анализи беа вклучени само соединенија што предизвикаа физиолошки одговор од женските антени над прагот.
Вкупната стапка на ослободување на испарливи биоактивни соединенија во колекцијата „хедспејс“ се зголеми од 29 µg h-1 во свежа урина на 242 µg h-1 во урина стара 168 часа, главно поради p-крезол и m-формалдехид. Зголемувањето на фенолот, како и фенолот. Спротивно на тоа, стапките на ослободување на други соединенија, како што се 2-циклохексен-1-он и деканал, се намалија со зголемување на стареењето на урината, што е во корелација со забележаното намалување на интензитетот на сигналот (изобилство) во хроматограмот (сл. 5D)-G (лев панел) и физиолошките одговори на овие соединенија (сл. 5D-G (десен панел).
Генерално, синтетичката смеса имаше сличен природен сооднос на биоактивни соединенија идентификувани во испарливи екстракти од свежа и зрела урина (сл. 5D–G) и не изгледаше дека предизвикува значителна привлечност во потрагата по домаќин (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; сл. 5H) или комарци што цицаат крв (χ2 = 4,91, df = 4, p = 0,30; сл. 5I). Сепак, post hoc споредбите по парови помеѓу третманите покажаа дека комарците што бараат домаќин биле значително привлечни за синтетичката смеса од 24-часовна зрела урина во споредба со контролите со пентан (p = 0,0086; Слика 5H).
За да се процени улогата на поединечните компоненти во синтетичките мешавини од урина стара 24 часа, шест субтрактивни мешавини беа евалуирани во однос на комплетните мешавини во Y-цевчестата анализа, во која беа отстранети поединечните соединенија. Кај комарците што бараат домаќин, одземањето на поединечните соединенија од целосната мешавина имаше значаен ефект врз реакциите на однесувањето (χ2 = 19,63, df = 6, p = 0,0032; Дополнителна датотека 1: Слика S2A), сите субтрактивни мешавини беа попривлечни од помалите од целосно измешаните. Спротивно на тоа, отстранувањето на поединечните соединенија од целосно синтетичката мешавина не влијаеше на реакциите на однесувањето на комарците што цицаат крв (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), со исклучок на деканалот, што резултираше со пониски нивоа во споредба со целосната мешавина Attraction (p = 0,022; Дополнителна датотека 1: Слика S2B).
Во село во Етиопија каде што е ендемско маларијата, ефикасноста на синтетичка мешавина од 24-часовна кравја урина во привлекувањето комарци во теренски услови беше оценета десет ноќи (Сл. 6А). Вкупно беа заробени и идентификувани 4.861 комарци, од кои 45,7% беа Anthropus.gambiae sl, 18,9% беа Anopheles pharoensis и 35,4% беа Culex spp. (Дополнителна датотека 1: Табела S1). Anopheles arabinis е единствениот член на комплексот на видови An.Gambian идентификуван со PCR анализа. Во просек, беа заробени 320 комарци по ноќ, за кое време стапици со синтетичка мешавина од мамки фатија повеќе комарци отколку парни стапици без мешавина (χ2(0, 3196) = 170,0, p < 0,0001). Стапици без мамки беа поставени во секоја од петте контролни ноќи на почетокот, средината и крајот на испитувањето. Сличен број комарци беа заробени во секој пар од стапици, што укажува на отсуство на пристрасност помеѓу куќите (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0,05) и нема намалување на популацијата во текот на периодот на студијата. Во споредба со контролните стапици, бројот на комарци фатени во стапиците што ја содржат синтетичката смеса е значително зголемен: барање домаќин (χ2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), неодамнешно хранење со крв (χ2(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) и бременост (χ2(0, 228) = 6,27, p = 0,0123; Дополнителна датотека 1: Табела S1). Ова се рефлектира и во вкупниот број на заробени комарци: барање домаќин > крвопијци > бремена > полубремена > мажјак.
Теренска евалуација на ефикасноста на 24-часовна синтетичка мешавина од мирис на кравја урина. Теренските испитувања беа спроведени во јужно-централна Етиопија (мапа), во близина на градот Маки (вметнете), користејќи светлосна стапица на Центрите за контрола на болести (CDC) (десно) во парни куќи, со латински квадратен дизајн (воздушна слика) (A). Синтетичките фотостапици на CDC со мирис привлекуваат и фаќаат женски Anopheles arabesques (B), но не Anopheles farroes (C), на поинаков начин, ефект зависен од физиолошката состојба. Покрај тоа, овие стапици фаќаат значително зголемен број на комарци домаќини Culex. (D) Во споредба со контролната. Лентите лево го претставуваат просечниот индекс на селекција на комарци фатени во парови миризливи мамки (зелена) и контролни (отворени) стапици (N = 10), додека лентите десно го претставуваат просечниот индекс на селекција во парови контролни стапици (отворени; N = 5). Ѕвездичките означуваат нивоа на статистичка значајност (*p = 0,01 и ***p < 0,0001)
Трите вида беа заробени различно во стапици што содржат синтетички смеси. Барајќи домаќин (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), хранење со крв (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) и бременост (χ2(1, 180) = 6,11, p = 0,0134), .arabiensis беше заробен во стапицата ослободувајќи ја синтетичката смеса (Сл. 6B), додека количината на An не се разликуваше. Pharoensis во различни физиолошки состојби беше пронајден (Сл. 6C). За Culex, само значително зголемување на бројот на комарци што бараат домаќини беше пронајдено во стапици мамки со синтетичката смеса (χ2(1,1319) = 12,6, p = 0,0004; Сл. 6D), во споредба со контролните стапици.
За да се процени дали комарците од маларија го користат мирисот на кравја урина како сигнал за живеалиште на домаќинот, помеѓу местата за размножување и руралните заедници во Етиопија, беа користени стапици за мамка на домаќинот, кои се наоѓаат надвор од потенцијалните домаќини, помеѓу местата за размножување и руралните заедници. Во отсуство на сигнали од домаќинот, топлина и со или без присуство на мирис на кравја урина, не беа заробени комарци (Дополнителна датотека 1: Слика S3). Меѓутоа, во присуство на висока температура и мирис на кравја урина, женските комарци од маларија беа привлечени и заробени, иако во мал број, независно од возраста на урината (χ2(5, 25) = 2,29, p = 0,13; Дополнителна датотека 1: Слика S3). Спротивно на тоа, контролите за вода не ги заробија комарците од маларија на високи температури (Дополнителна датотека 1: Слика S3).
Маларичните комарци ги стекнуваат и дистрибуираат соединенијата што содржат азот преку компензаторно хранење со кравја урина (т.е. барички) за да ги подобрат карактеристиките на животниот тек, слично на другите инсекти [2, 4, 24, 25, 26]. Кравјата урина е лесно достапен обновлив ресурс тесно поврзан со местата за одмор на векторите на маларија, како што се шталите за крави и високата вегетација во близина на руралните домови и местата за мрестење. Женските комарци го лоцираат овој ресурс преку мирис и се способни да го регулираат внесувањето на азотни соединенија во урината, вклучувајќи ја и уреата, главната азотна компонента во урината [15, 16]. Во зависност од физиолошката состојба на женскиот комарец, хранливите материи во урината се распределуваат за да се подобри активноста на летот и преживувањето на женските комарци што бараат домаќин, како и преживувањето и репродуктивните карактеристики на единките хранети со крв за време на првиот гонадотропен циклус. Затоа, мешањето на урината игра важна нутритивна улога за векторите на маларија кои се затворени како неухранети возрасни [8], бидејќи им обезбедува на женските комарци можност да стекнуваат важни азотни соединенија преку вклучување во хранење со низок ризик. Ова откритие има значајни епидемиолошки последици, бидејќи женките го продолжуваат својот животен век. очекуваното траење, активноста и репродуктивниот капацитет, кои сите влијаат на векторски капацитет. Понатаму, ова однесување може да биде цел на идните програми за управување со вектори.