Қоректік заттарды алу және тарату жәндіктердің қоректенуін және тіршілік тарихының ерекшеліктерін біріктіреді. Өмірдің әртүрлі кезеңдеріндегі белгілі бір қоректік заттардың жетіспеушілігін өтеу үшін жәндіктер бұл қоректік заттарды қосымша қоректену арқылы, мысалы, шалшықтар деп аталатын процесте омыртқалы жануарлардың секрецияларымен қоректену арқылы ала алады. Anopheles arabiani масалары жеткіліксіз қоректенетін сияқты, сондықтан метаболизм мен көбею үшін қоректік заттарды қажет етеді. Бұл зерттеудің мақсаты An. arabiensis-ті қоректік заттарды алу үшін сиыр зәрінде араластыру тіршілік тарихының сипаттамаларын жақсарта ма, жоқ па, бағалау болды.
Қауіпсіз екеніне көз жеткізіңіз. arabiensis жаңа, 24 сағаттық, 72 сағаттық және 168 сағаттық сиыр зәрінің иісіне тартылды, ал иесін іздейтін және қанмен қоректенетін (қан ұнынан кейін 48 сағат) аналықтары Y-түтікше олфактометрінде өлшенді, ал буаз аналықтары уылдырық шашу сынағы үшін бағаланды. Содан кейін төрт жас санатындағы сиыр зәріндегі биоактивті қосылыстарды анықтау үшін біріктірілген химиялық және электрофизиологиялық талдау қолданылды. Биоактивті қосылыстардың синтетикалық қоспалары Y-түтікшеде және далалық сынақтарда бағаланды. Сиыр зәрін және оның негізгі азот құрамдас мочевина қосылысын безгек векторлары үшін әлеуетті қосымша диета ретінде зерттеу үшін қоректену параметрлері мен өмір сүру тарихының сипаттамалары өлшенді. Аналық масалардың үлесі және сіңірілген сиыр зәрі мен мочевина мөлшері бағаланды. Қоректенгеннен кейін аналықтардың тірі қалуы, байланған ұшуы және көбеюі бағаланды.
Иесінің қаны мен қорегін іздеңіз. Зертханалық және далалық зерттеулерде арабтар жаңа және қартайған сиыр зәрінің табиғи және синтетикалық иісіне тартылды. Жүкті аналықтар уылдырық шашатын жерлерде сиыр зәрінің реакцияларына немқұрайлы қарады. Иесінің зәрін іздейтін және қан соратын аналықтар сиыр зәрі мен мочевинаны белсенді түрде сіңіреді және бұл ресурстарды ұшу, тіршілік ету немесе көбею үшін физиологиялық күйдің функциясы ретінде өмір тарихының ымырасына сәйкес бөледі.
Anopheles arabinis сиыр зәрін алу және тарату, өмір сүру тарихын жақсарту үшін. Сиыр зәрін қосымша тамақтандыру күнделікті өмір сүру мен вектор тығыздығын арттыру арқылы тікелей вектор сыйымдылығына және жанама түрде ұшу белсенділігін өзгерту арқылы әсер етеді, сондықтан болашақ модельдерде қарастырылуы керек.
Қоректік заттарды алу және тарату жәндіктердің қоректенуін және тіршілік тарихының сипаттамаларын біріктіреді [1,2,3]. Жәндіктер қоректі таңдап, ала алады және қоректік заттардың қолжетімділігі мен қоректік заттарға деген қажеттіліктеріне байланысты өтемақылық қоректенуді жүзеге асыра алады [1, 3]. Қоректік заттардың таралуы тіршілік тарихы процесіне байланысты және жәндіктердің әртүрлі тіршілік кезеңдерінде тамақтану сапасы мен мөлшеріне әртүрлі талаптар қоюы мүмкін [1, 2]. Белгілі бір қоректік заттардың жетіспеушілігін өтеу үшін жәндіктер бұл қоректік заттарды қосымша қоректену арқылы, мысалы, балшықтан, омыртқалы жануарлардың әртүрлі нәжістерінен және бөлінділерінен және өлекселерден ала алады, бұл процесс шалшықтар деп аталады [2]. Көбелек пен көбелектің әртүрлі түрлері негізінен сипатталғанымен, суару орындары басқа жәндіктер отрядтарында да кездеседі, және осы ресурстарға тартылу және олармен қоректену денсаулыққа және басқа да тіршілік тарихының ерекшеліктеріне айтарлықтай әсер етуі мүмкін [2, 4, 5, 6], 7]. Безгек масалары Anopheles gambiae sensu lato (sl) «тамақтанбаған» ересек жануар ретінде пайда болады [8], сондықтан суару оның тіршілік тарихының сипаттамаларында маңызды рөл атқаруы мүмкін, бірақ Бұл мінез-құлық әзірге елеусіз қалды. Бұл маңызды құралда қоректік заттардың тұтынылуын арттыру құралы ретінде қозуды пайдалану назар аударуды қажет етеді, себебі бұл маңызды эпидемиологиялық салдарға әкелуі мүмкін.
Ересек аналық Anopheles масаларының азотты тұтынуы дернәсіл сатысынан алынған калория қорының төмендігіне және қан ұнын тиімсіз пайдалануына байланысты шектеулі [9]. Аналық Ann.gambiae sl әдетте мұны қосымша қан ұндарымен толықтыру арқылы өтейді [10, 11], осылайша көбірек адамдарды ауруды жұқтыру қаупіне ұшыратады және масалардың жыртқыштық қаупін арттырады. Балама ретінде, масалар басқа жәндіктер көрсеткендей [2] бейімделуді және ұшу маневрін жақсартатын азотты қосылыстар алу үшін омыртқалы жануарлардың нәжісін қосымша қоректендіруді пайдалана алады. Осыған байланысты, An. Гамбия sl түрлерінің кешеніндегі бауырлас түрлердің бірінің, жаңа және қартайған сиыр зәрінің, Anopheles arabinis [12,13,14] күшті және айқын тартымдылығы қызықты. Anopheles arabinis иесінің қалауы бойынша оппортунистік және ірі қара малмен байланысып, қоректенетіні белгілі. Сиыр зәрі - азотты қосылыстарға бай ресурс, мочевина жаңа зәрдегі жалпы азоттың 50-95%-ын құрайды [15, 16]. Сиыр зәрі қартайған сайын, микроорганизмдер бұл ресурстарды 24 сағат ішінде азотты қосылыстардың күрделілігін азайту үшін пайдаланады [15]. Органикалық азоттың төмендеуімен байланысты аммиактың тез артуымен сілтілік микроорганизмдер (олардың көпшілігі масаларға улы қосылыстар түзеді) жақсы дамиды [15], бұл аналық Ann.arabiensis 24 сағат немесе одан аз жаста зәрге көбірек тартылатынын білдіреді [13, 14].
Бұл зерттеуде иесі мен қанмен қоректенетін Ans ізделді. Алғашқы гонадотропин циклі кезінде arabiensis зәрді араластыру арқылы азотты қосылыстарды, соның ішінде мочевинаны алу үшін бағаланды. Әрі қарай, аналық масалардың бұл әлеуетті қоректік ресурсты тіршілік етуді жақсарту, көбею және одан әрі қоректену үшін қалай бөлетінін бағалау үшін бірқатар тәжірибелер жүргізілді. Соңында, жаңа және қартайған сиыр зәрінің иісі олардың иесі мен қанмен қоректенетін An үшін сенімді белгілер беретінін анықтау үшін бағаланды. Бұл әлеуетті қоректік ресурсты іздеу барысында arabiensis байқалған дифференциалды тартымдылықтың артындағы химиялық корреляцияларды анықтады. 24 сағаттық қартайған зәрде анықталған ұшпа органикалық қосылыстардың (ҰОҚ) синтетикалық иісті қоспалары далалық жағдайларда одан әрі бағаланды, зертханалық жағдайларда алынған нәтижелерді кеңейтіп, ірі қара мал зәрінің иісінің әртүрлі физиологиялық күйлерге әсерін көрсетті. Масалардың тартылуы. Алынған нәтижелер An. arabiensis-тің өмір сүру тарихының сипаттамаларына әсер ету үшін омыртқалы жануарлар зәрінде кездесетін азотты қосылыстарды алатынын және тарататынын растайды. Бұл нәтижелер ықтимал эпидемиологиялық салдарлар және оларды векторлық бақылау мен бақылау үшін қалай пайдалануға болатындығы тұрғысынан талқыланады.
Anopheles arabicans (Dongola штамы) 25 ± 2 °C температурада, 65 ± 5% ылғалдылықта және 12:12 сағат жарық: қараңғы циклде ұсталды. Дернәсілдер тазартылған сумен толтырылған пластик науаларда (20 см × 18 см × 7 см) өсіріліп, Tetramin® балық жемімен (Tetra Werke, Melle, DE) берілді. Қуыршақтар 30 мл кеселерде (Nolato Hertila, Åstorp, SE) жиналып, ересек балықтардың шығуына мүмкіндік беру үшін Bugdorm торларына (30 см × 30 см × 30 см; MegaView Science, Тайчжун, Тайвань) ауыстырылды. Ересек балықтарға шығудан кейін 4 күнге дейін (dpe) 10% сахароза ерітіндісі берілді, бұл кезде иесін іздейтін аналықтарға эксперимент алдында бірден диета ұсынылды немесе төменде сипатталғандай эксперимент алдында түні бойы тазартылған сумен аштық берілді. Ұшу түтігімен эксперименттер үшін пайдаланылған аналықтар тек 4-6 күн аштықпен ұсталды. сумен сағаттар бойы еркін жүргізілді. Қан соратын масаларды кейінгі биоталдауларға дайындау үшін 4 dpe аналығына мембраналық қоректендіру жүйесін (Hemotek Discovery Workshops, Аккрингтон, Ұлыбритания) пайдаланып, дефибротикалық қой қаны (Håtunalab, Bro, SE) берілді. Толығымен тығыздалған аналықтар жеке торларға ауыстырылып, төменде сипатталғандай тікелей жем берілді немесе төменде сипатталған эксперименттерге дейін 3 күн бойы 10% сахароза еркін енгізілді. Соңғы аналықтар ұшу түтігінің биоталдаулары үшін пайдаланылып, зертханаға ауыстырылды, содан кейін экспериментке дейін 4-6 сағат бойы еркін тазартылған су берілді.
Ересек араб аналығының зәрі мен мочевина тұтынуын сандық бағалау үшін азықтандыру талдаулары қолданылды. Қожайын іздеуші және қанмен қоректенетін аналықтарға 48 сағат бойы 1% сұйылтылған жаңа және қартайған сиыр зәрі, мочевинаның әртүрлі концентрациясы және екі бақылау тобындағы (10% сахароза және су) диета берілді. Сонымен қатар, диетаға тағамдық бояғыш (1 мг мл-1 ксилол цианиді FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Стокгольм, Оңтүстік-Шығыс) қосылды және 250 мкл микроцентрифуга түтіктеріндегі 4 × 4 матрицада берілді (Axygen Scientific, Union City, CA, АҚШ; 1A сурет). Шетіне дейін толтырыңыз (~300 мкл). Масалар арасындағы бәсекелестік пен бояғыш түсінің ықтимал әсерін болдырмау үшін 10 масаларды үлкен Петри ыдысына (диаметрі 12 см және биіктігі 6 см; Semadeni, Ostermundigen, CH; 1A сурет) 25 ± 2 см °C және 65 ± температурада толық қараңғылықта салыңыз. 5% салыстырмалы ылғалдылық. Бұл тәжірибелер 5-10 рет қайталанды. Тамақтанғаннан кейін, масалар одан әрі талдауға дейін -20 °C температураға қойылды.
Қожайын мен қан соратын аналық Anopheles arabianus сіңірген ірі қара мал зәрі мен мочевинаны іздеңіз. Азықтандыру сынағында (A) аналық масаларға жаңа және қартайған сиыр зәрінен, мочевинаның әртүрлі концентрациясынан, сахарозадан (10%) және тазартылған судан (H2O) тұратын диета берілді. Қожайын іздейтін (B) және қанмен қоректенетін (C) аналық масалардың басқа тексерілген диеталарға қарағанда сахарозаны көбірек сіңіргенін ескеріңіз. Қожайын іздейтін аналықтардың 72 сағаттық сиыр зәрін 168 сағаттық сиыр зәрінен (B) аз сіңіргенін ескеріңіз. Зәрдің орташа жалпы азот мөлшері (± стандартты ауытқу) кірістірілгенде көрсетілген. Қожайын іздейтін (D, F) және қан соратын (E, G) аналық масалардың мочевинаны дозаға тәуелді түрде сіңіруі. Әр түрлі әріп атаулары бар орташа деммен жұту көлемдері (D, E) бір-бірінен айтарлықтай ерекшеленді (Tukey's post hoc талдауын пайдалана отырып, бір жақты ANOVA; p < 0,05). Қателік жолақтары орташа мәннің стандартты қателігін (BE) білдіреді. Түзу үзік сызық логарифмдік-сызықтық регрессия сызығын (F, G) білдіреді.
Сіңірілген тағамды шығару үшін масалар жеке-жеке 230 мкл дистилденген суы бар 1,5 мл микроцентрифуга түтіктеріне салынды және тіндер бір рет қолданылатын пестл мен сымсыз қозғалтқыш (VWR International, Lund, SE) көмегімен бөлшектелді, содан кейін 10 минут бойы 10 айналым/мин жылдамдықпен центрифугаланды. Супернатант (200 мкл) 96 ұңғымалы микропластинкаға (Sigma-Aldrich) ауыстырылды және сіңіру (λ620) спектрофотометр негізіндегі микропластинка оқу құрылғысын (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm пайдаланып анықталды. Балама ретінде, масалар 1 мл дистилденген суда ұнтақталған, оның 900 мкл спектрофотометриялық талдау үшін кюветаға ауыстырылған (λ 620 нм; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Тамақтану мөлшерін сандық бағалау үшін 0,2 мкл-ден 2,4-ке дейін сериялық сұйылту арқылы стандартты қисық дайындалды. 1 мг мл-1 ксилол цианидінің мкл. Содан кейін әрбір маса жейтін тағам мөлшерін анықтау үшін белгілі бояғыш концентрацияларының оптикалық тығыздығы пайдаланылды.
Көлемдік деректер бір жақты дисперсиялық талдау (ANOVA) арқылы талданды, содан кейін Tukey-дің post hoc жұптық салыстырулары жүргізілді (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, АҚШ, 1989–2007). Сызықтық регрессиялық талдаулар концентрацияға тәуелді мочевина қабылдауын сипаттады және иесін іздейтін және қан соратын масалар арасындағы реакцияларды салыстырды (GraphPad Prism v8.0.0 for Mac, GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, АҚШ).
Әр жас тобынан шамамен 20 мкл зәр үлгілері Chromosorb® W/AW (10 мг 80/100 меш, Sigma Aldrich) капсулаларына байланып, қалайы капсулаларына (8 мм × 5 мм) салынды. Өндірушінің хаттамасына сәйкес жаңа және ескі зәрдегі азот мөлшерін анықтау үшін капсулалар CHNS/O анализаторының (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, АҚШ) жану камерасына енгізілді. Жалпы азот (g N l-1) стандарт ретінде пайдаланылатын белгілі мочевина концентрацияларына негізделіп сандық түрде анықталды.
Диетаның иесін іздейтін және қан соратын аналықтардың тірі қалуына әсерін бағалау үшін масалар жеке-жеке үлкен Петри ыдыстарына (диаметрі 12 см және биіктігі 6 см; Семадени) салынды, қақпағында торлы тесік (диаметрі 3 см) желдету және тамақпен қамтамасыз ету үшін пайдаланылды. Диеталар 4 дпеден кейін бірден берілді және оған 1% сұйылтылған жаңа және ескі сиыр зәрі, мочевинаның төрт концентрациясы және екі бақылау тобындағы 10% сахароза және су кірді. Әрбір диета 5 мл шприцке (Thermo Fisher Scientific, Гетеборг, SE) салынған тіс тампонына (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) пипеткамен құйылды, поршень алынып, Петри ыдысының үстіне қойылды (1-сурет).1A). Диетаны күн сайын өзгертіңіз. Зертхананы жоғарыда сипатталғандай ұстаңыз. Тірі қалған масалар күніне екі рет саналды, ал өлі масалар соңғы масалар өлгенше тасталды (емдеу кезінде n = 40). Әртүрлі диеталармен қоректенетін масалардың тірі қалуы статистикалық тұрғыдан талданды. Диеталар арасындағы өмір сүру ұзақтығының таралуын салыстыруға арналған Каплан-Мейердің өмір сүру қисықтары және логарифмдік рангтық тесттері (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Аттисано және т.б. [17] негізінде жасалған, қалыңдығы 5 мм мөлдір акрил панельдерінен (ені 10 см x ұзындығы 10 см x биіктігі 10 см) жасалған, алдыңғы және артқы панельдері жоқ арнайы жасалған маса ұшырғыш диірмен (3-сурет: жоғарғы жағы). Газ хроматографиясы бағанынан (0,25 мм; 7,5 см L) жасалған тік түтікшесі бар айналмалы құрастырма, ұштары бір-бірінен 9 см қашықтықта орналасқан неодим магниттерінің жұбының арасына ілінген жәндік инесіне желімделген. Сол материалдан (6,5 см L) жасалған көлденең түтік тік түтікті екіге бөліп, байланған қол мен жарықты үзетін сигнал ретінде алюминий фольганың кішкене бөлігін алып жүретін қолды қалыптастырды.
24 сағат бойы аш жүрген аналықтарға ұстау алдында 30 минут бойы жоғарыда аталған диета берілді. Толық тамақтанған аналық масалар мұзда 2-3 минут бойы жеке жансыздандырылып, балауызбен жәндіктердің түйреуіштеріне бекітілді (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE), содан кейін көлденең түтіктердің иіндеріне байланды. Ұшу диірмені. Ұшу кезіндегі айналымдар арнайы жасалған деректерді тіркеу құрылғысымен жазылды, содан кейін PC-Lab 2000™ бағдарламалық жасақтамасын (v4.01; Velleman, Gavere, BE) пайдаланып сақталды және көрсетілді. Ұшу диірмені климат реттелетін бөлмеге орналастырылды (12 сағат:12 сағат, жарық: қараңғы, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% ылғалдылық).
Ұшу белсенділігінің үлгісін визуализациялау үшін 24 сағаттық кезең ішінде сағатына жалпы ұшқан қашықтық (м) және қатарынан ұшу әрекеттерінің жалпы саны есептелді. Сонымен қатар, жеке аналықтардың ұшқан орташа қашықтықтары әртүрлі өңдеулер бойынша салыстырылды және бір жақты ANOVA және Tukey-дің post hoc талдауы (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) арқылы талданды, мұнда орташа қашықтық тәуелді айнымалы болып саналды, ал өңдеу тәуелсіз фактор болып табылады. Сонымен қатар, раундтардың орташа саны 10 минуттық қадамдармен есептеледі.
An.arabiensis көбею қабілетіне диетаның әсерін бағалау үшін алты аналық (4 dpe) қан алғаннан кейін тікелей Бугдорм торларына (30 см × 30 см × 30 см) ауыстырылды, содан кейін жоғарыда сипатталғандай 48 сағат бойы тәжірибелік диетамен қамтамасыз етілді. Содан кейін диеталар алынып тасталды және үшінші күні 20 мл тазартылған сумен толтырылған уылдырық шашатын тостағандар (30 мл; Nolato Hertila) 48 сағат бойы, әр 24 сағат сайын ауыстырылып берілді. Әрбір диета режимін 20-50 рет қайталаңыз. Әрбір тәжірибелік тор үшін жұмыртқалар саналып, жазылды. Leica камерасымен (DFC) 320 R2 жабдықталған Dialux-20 микроскопын (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) пайдаланып, жеке жұмыртқалардың орташа мөлшері мен ұзындығының өзгеруін (әр диетаға n ≥ 200) бағалау үшін жұмыртқалардың кіші үлгілері пайдаланылды; Leica Microsystems Ltd., DE). Қалған жұмыртқалар климаттық бақыланатын бөлмеде стандартты өсіру жағдайында 24 сағат бойы ұсталды, ал жақында пайда болған 1-ші жас дернәсілдерінің кіші үлгісі (рационға n ≥ 200) жоғарыда сипатталғандай өлшенді. Жұмыртқалар саны мен жұмыртқалар мен дернәсілдердің мөлшері емдеу әдістері арасында және бір жақты ANOVA және Tukey's post hoc талдауын (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) қолдану арқылы салыстырылды.
Зебу ірі қара малынан, Арси нәсілдерінен алынған үлгілерден жаңа (сынама алғаннан кейін 1 сағат), 24 сағаттық, 72 сағаттық және 168 сағаттық зәрден алынған ұшпа заттар жиналды. Ыңғайлы болу үшін, зәр үлгілері таңертең ерте, сиырлар қорада болған кезде жиналды. Зәр үлгілері 10 дарадан жиналды және әр үлгіден 100-200 мл қақпағы бар 3 л полиамидте винилхлоридті пластикалық бөшкелерде жеке полиамидті пісіру пакеттеріне (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) құйылды. Әрбір ірі қара мал зәрінің үлгісінен алынған ұшпа заттар тікелей (жаңа) немесе піскеннен кейін бөлме температурасында 24 сағат, 72 сағат және 168 сағат бойы жиналды, яғни әрбір зәр үлгісі әр жас тобына тән болды.
Бас кеңістіктегі ұшқыш заттарды жинау үшін, белсендірілген көмірмен сүзілген газ ағынын (100 мл мин-1) полиамидті қапшық арқылы адсорбциялық бағанға диафрагмалық вакуумдық сорғыны (KNF Neuberger, Фрайбург, DE) пайдаланып 2,5 сағат бойы айналдыру үшін тұйық циклді жүйе қолданылды. Бақылау ретінде бос полиамидті қапшықтан бас кеңістікті жинау жүргізілді. Адсорбциялық баған шыны жүн тығындарының арасында 35 мг Porapak Q (50/80 тор; Waters Associates, Милфорд, MA, АҚШ) бар тефлон түтікшесінен (5,5 см x 3 мм id) жасалған. Қолданар алдында баған 1 мл қайта айдалған n-гексанмен (Merck, Darmstadt, DE) және 1 мл пентанмен (99,0% таза еріткіш GC маркасы, Sigma Aldrich) шайылды. Адсорбциялық ұшқыш заттар 400 мкл пентанмен элюцияланды. Бас кеңістіктегі жинақтар біріктіріліп, одан әрі талдау үшін пайдаланылғанша -20°C температурада сақталды.
Қожайын іздеуші және қан жейтін An-ның мінез-құлық реакциялары. Жаңа, 24 сағаттық, 72 сағаттық және 168 сағаттық зәрден жиналған Headspace ұшпа сығындылары тік шыны түтікшелі олфактометрді пайдаланып Arabidopsis масаларынан ұшпа сығындыларды анықтау үшін талданды [18]. Тәжірибелер ZT 13-15 кезінде, An-ның үй іздеу белсенділігінің шыңы кезінде жүргізілді. Arab [19]. Шыны түтікшелі олфактометр (80 см × 9,5 см id) жоғарыдан 3 ± 1 люкс қызыл жарықпен жарықтандырылды. Көмірмен сүзілген және ылғалдандырылған ауа ағыны (25 ± 2 °C, 65 ± 2% салыстырмалы ылғалдылық) биоанализден 30 см с-1 жылдамдықпен өтті. Ауа тот баспайтын болаттан жасалған торлы экрандар сериясынан өткізіліп, ламинарлық ағын мен біркелкі түтік құрылымын жасайды. Тіс тампонының диспенсері (4 см × 1 см; Ұ: Д; DAB Dental AB), 5 см катушкадан ілінген. Олфактометрдің желге бағытталған жағы, стимулятор әр 5 минут сайын ауыстырылып отырады. Талдау үшін әрбір бас кеңістігінің 10 мкл сығындысы, 1:10 қатынасында сұйылтылған, стимул ретінде пайдаланылды. Бақылау ретінде тең мөлшерде пентан пайдаланылды. Жеке ие іздеуші немесе қан соратын масалар тәжірибе басталғанға дейін 2-3 сағат бұрын жеке босату торларына орналастырылды. Босату торы олфактометрдің желге қарай бағытталған жағына орналастырылды, ал масаларға 1 минут бойы бейімделуге мүмкіндік берілді, содан кейін тордың көбелек клапаны босату үшін ашылды. Емдеуге немесе бақылауға тартылу мүмкіндігі босатылғаннан кейін 5 минут ішінде көзбен жанасқан масалардың үлесі ретінде талданды. Әрбір бас кеңістігінің ұшпа сығындысы мен бақылау кем дегенде 30 рет қайталанды, және кез келген бір күннің әсерін болдырмау үшін әр тәжірибе күнінде бірдей мөлшердегі емдеу және бақылау сынақтары жүргізілді. Ие мен қанмен қоректенетін жануарлардан жауаптар іздеңіз. Жауап: Араб және бас кеңістігінің жиынтықтары номиналды логистикалық регрессияны қолдану арқылы талданды, содан кейін тақ қатынастар үшін жұптық салыстырулар жүргізілді. (JMP Pro, v14.0.0, SAS институты, Inc.).
Анның уылдырық шашу реакциясы. Жаңа және қартайған сиыр зәрінен алынған бас кеңістігінің сығындылары Бугдорм торларында (30 см × 30 см × 30 см; MegaView Science) талданды. 20 мл дистилденген сумен толтырылған пластикалық тостағандар (30 мл; Nolato Hertila) уылдырық шашу субстратын қамтамасыз етті және тордың қарама-қарсы бұрыштарына, 24 см қашықтықта орналастырылды. Өңдеу тостағандарына әрбір бас кеңістігінің 10 мкл сығындысы 1:10 сұйылтумен реттелді. Бақылау тостағанын реттеу үшін тең мөлшерде пентан қолданылды. Позиция әсерін бақылау үшін әр тәжірибе арасында емдеу және бақылау тостағандары ауыстырылды. ZT 9-11 кезінде тәжірибелік торларға қанмен қоректенетін он аналық ботқа жіберілді және тостағандардағы жұмыртқалар 24 сағаттан кейін саналды. Уылдырық шашу индексін есептеу формуласы: (өңдеу тостағанына салынған жұмыртқалар саны – бақылау тостағанына салынған жұмыртқалар саны)/(жұмыртқалардың жалпы саны). Әрбір өңдеу 8 рет қайталанды.
Аналық An.arabiensis-тің газ хроматографиялық және электронды антенналық үлгіні анықтау (GC-EAD) талдауы бұрын сипатталғандай [20] жүргізілді. Қысқаша айтқанда, жаңа бас кеңістігінің ұшпа экстракттары HP-5 бағанымен (30 м × 0,25 мм id, 0,25 мкм қабық қалыңдығы, Agilent Technologies) жабдықталған Agilent Technologies 6890 GC (Санта-Клара, Калифорния, АҚШ) көмегімен бөлінді. және зәрдің қартаюы. Жылжымалы фаза ретінде сутегі орташа сызықтық ағын жылдамдығы 45 см с-1 болатындай пайдаланылды. Әрбір үлгі (2 мкл) 225 °C кіріс температурасымен бөлінбейтін режимде 30 секунд бойы енгізілді. GC пешінің температурасы 35 °C (3 минуттық ұстау) бастап 300 °C (10 минуттық ұстау) дейін 10 °C мин-1 температурада бағдарламаланды. GC ағынды бөлгішінде 4 psi азот қосылды және жалын ионизациясы детекторы мен EAD арасында Gerstel 3D/2 төмен өлі көлемді айқас (Gerstel, Mülheim, DE) арқылы 1:1 қатынасында бөлінді. EAD үшін GC ағынды капилляры GC пешінің температурасын + 5 °C бақылайтын Gerstel ODP-2 беру желісі арқылы шыны түтікке (10 см × 8 мм) өткізілді, онда ол көміртегімен сүзілген, ылғалдандырылған ауамен (1,5 л мин−1) араластырылды. Антенна орналастырылды Түтіктің шығысынан 0,5 см қашықтықта. Әрбір масала бір қайталаудан келді, ал иесін іздейтін масалар үшін әр жастағы зәр үлгілерінде кемінде үш қайталау жасалды.
Жаңа және ескі ірі қара мал зәрінің бас кеңістік коллекцияларындағы биоактивті қосылыстарды GC-EAD талдауында антенналық жауаптарды алу үшін біріктірілген GC және масс-спектрометрді (GC-MS; 6890 GC және 5975 MS; Agilent Technologies) пайдаланып анықтау, 70 эВ кезінде электронды соққы ионизация режимінде жұмыс істейді. GC гелийді жылжымалы фаза ретінде 35 см с-1 орташа сызықтық ағын жылдамдығымен пайдалана отырып, HP-5MS UI жабыны бар балқытылған кремний диоксиді капиллярлық бағанымен (ішкі диаметрі 60 м × 0,25 мм, қабықша қалыңдығы 0,25 мкм) жабдықталған. 2 мкл үлгі GC-EAD талдауындағыдай инжектор параметрлері мен пеш температурасын пайдаланып енгізілді. Қосылыстар олардың сақталу уақытына (Коват индексі) және арнайы кітапханамен және NIST14 кітапханасымен (Agilent) салыстырғандағы масс-спектрлерге негізделген. Анықталған қосылыстар түпнұсқа стандарттарды енгізу арқылы расталды (Қосымша файл 1: S2 кестесі). Сандық анықтау үшін гептил ацетаты (10 нг, 99,8% химиялық тазалық, Aldrich) сыртқы стандарт ретінде енгізілді.
Жоғарыдағыдай олфактометр мен хаттаманы пайдаланып, жаңа және ескі зәрде анықталған биоактивті қосылыстардан тұратын синтетикалық иіс қоспасының тиімділігін бағалау. Жоғарыдағыдай олфактометр мен хаттаманы пайдаланып, жаңа, 24 сағаттық, 48 сағаттық, 72 сағаттық және 168 сағаттық ескі зәрдің аралас бас кеңістігіндегі ұшпа сығындыларындағы қосылыстардың құрамы мен пропорцияларын имитациялады (5D-G суреті; Қосымша файл 1: S2 кестесі). Талдау үшін, иесі мен қан соратын масаларға тартымдылықты бағалау үшін толық синтетикалық қоспаның 1:100 сұйылтылуының 10 мкл пайдаланыңыз, жалпы бөліну жылдамдығы шамамен 140-2400 нг h-1 аралығында болады. Осыдан кейін сынақ толық қоспаларда жүргізіледі, онда толық қоспаның жеке қосылыстарының субтрактивті қоспалары алынып тасталады. Иесі мен қанмен қоректенетіндерден жауаптар іздеңіз. Араб vs синтетикалық және субтрактивті қоспалар номиналды логистикалық регрессияны пайдаланып талданды, содан кейін жұптық салыстырулар жүргізілді. тақ коэффициенттер (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Сиыр зәрі безгек масалары үшін қожайынның мекендеу ортасының белгісі бола алатынын бағалау үшін, жоғарыда сипатталғандай жиналған жаңа және қартайған сиыр зәрі мен су 3 литрлік шелектер (100 мл) торлы тұзақтарға салынып, қожайын жем тұзақтарына салынды. (BG-HDT нұсқасы; BioGents, Regensburg, DE). Он тұзақ жайылымда 50 м қашықтықта, ауыл қауымдастығынан (Силай, Эфиопия, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) 400 м қашықтықта және малсыз, тұрақты өсіру алаңдары мен ауылдарда орналастырылды. Қожайынның болуын модельдеу үшін бес тұзақ қыздырылды, ал бес тұзақ жылытылмады. Әрбір өңдеу орны түнде бес түн бойы ауысып отырады. Әртүрлі жастағы зәрмен қоректенген тұзақтарда ұсталған масалар саны бета биномдық үлестіріммен логистикалық регрессияны қолдана отырып салыстырылды (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Эфиопияның Оромия аймағындағы Маки қаласының маңындағы безгек таралған ауылда (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; 6A сурет). Зерттеу тамыз айының ортасы мен қыркүйек айының ортасы аралығында жыл сайынғы үй ішінде қалдық шашырату жұмыстары жүргізілгенге дейін, ұзақ жаңбырлы маусыммен қатар жүргізілді. Зерттеу үшін ауылдың шетінде орналасқан бес жұп үй (аралығы 20–50 м) таңдалды (6A сурет). Үйлерді таңдау критерийлері: үйге жануарларды кіргізуге болмайды, үйде тамақ пісіруге (отын немесе көмір жағуға) рұқсат етілмеді (кем дегенде сынақ кезеңінде) және ең көбі екі тұрғыны бар, инсектицидтерге қарсы препараттармен ұйықтайтын үйлер. өңделген маса торының астында. Аддис-Абеба университетінің Жаратылыстану ғылымдары факультетінің (CNS-IRB) институционалдық зерттеу этикасын шолу кеңесі (IRB/022/2016) Хельсинки декларациясында белгіленген нұсқауларға сәйкес этикалық мақұлдау алды. Әрбір отбасы басшысының келісімі денсаулық сақтау саласындағы кеңейту қызметкерлерінің көмегімен алынды. Барлық процесс аудандық және аудандық («кебеле») деңгейдегі жергілікті әкімшіліктермен мақұлданды. Тәжірибелік дизайн 2 × 2 латын шаршы дизайнына сәйкес жүргізілді, онда синтетикалық қоспалар мен бақылау элементтері жұптасқан үйлерге бірінші түнде тағайындалды және келесі тәжірибелік түнде үйлер арасында ауыстырылды. Бұл процесс он рет қайталанды. Сонымен қатар, таңдалған үйлердегі масалардың белсенділігін бағалау үшін CDC тұзақтары далалық сынақтың басында, ортасында және соңында күннің бір уақытында қатарынан бес түн жұмыс істеуге орнатылды.
Алты биоактивті қосылыстан тұратын синтетикалық қоспа гептанда (97,0% еріткіш GC дәрежесі, Sigma Aldrich) ерітіліп, мақта фитильді диспенсерді пайдаланып 140 нг h-1 концентрациясында босатылды [20]. Фитильді диспенсер барлық қосылыстардың 12 сағаттық тәжірибе барысында тұрақты пропорцияда босатылуына мүмкіндік берді. Гептан бақылау ретінде пайдаланылды. Құты Ауруларды бақылау және алдын алу орталықтарының (CDC) жарық тұзағының (John W. Hock Company, Гейнсвилл, Флорида, АҚШ; 6A сурет) кіру нүктесінің жанында ілулі тұрды. Тұзақтар жерден 0,8-1 м биіктікте, төсектің аяғына жақын жерде ілініп тұрды, ал ерікті өңделмеген масалар торының астында ұйықтап, сағат 18:00 мен 06:30 аралығында операция жасады. Жынысы мен физиологиялық мәртебесі бойынша ұсталған масалар (қоректенбеген, қоректенген, жартылай жүкті және буаз [21]) кейіннен A. gambiae sl ретінде морфологиялық тұрғыдан анықталған түрді анықтау үшін полимеразды тізбекті реакция (ПТР) талдауын пайдаланып тексерілді. Кешен мүшелері [23]. Далалық зерттеуде жұптасқан үйлердің тұзаққа түсуі номиналды логистикалық сәйкестік моделін қолдана отырып талданды, мұндағы тартылыс тәуелді айнымалы, ал өңдеу (синтетикалық қоспа vs бақылау) бекітілген әсер болды (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.). Мұнда біз ықтималдық коэффициенті сынағынан алынған χ2 және p-мәндерін көрсетеміз.
Қауіпсіз екенін бағалаңыз. arabiensis зәрін, оның негізгі азот көзі - мочевинаны (dpe) иесін іздеу және қанмен қоректендіретін аналықтарды тамақтандыру сынақтарынан кейін 4 күн ішінде енгізгеннен кейін 48 сағат ішінде тікелей қоректендіру арқылы ала алды (1A сурет). Иесін іздеуші де, қан соратын аналық та кез келген басқа диетаға немесе суға қарағанда сахарозаны айтарлықтай көп сіңірді (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 және F(5,299) = 56.00, p < 0.0001 сәйкесінше; 1B,C сурет). Сонымен қатар, иесін іздеуші аналық та 168 сағаттағы зәрмен салыстырғанда 72 сағат ішінде зәрде аз тамақтанды (1B сурет). Мочевинасы бар диета ұсынылған кезде, иесін іздеуші аналық та 2,69 мМ-де барлық басқа концентрациялар мен сумен салыстырғанда мочевинаның айтарлықтай көп мөлшерін сіңірді, бұл 10% сахарозадан айырмашылығы жоқ (F(10,813) = 15.72, p < 0,0001; 1D сурет). Бұл қанмен қоректенетін аналықтардың реакциясына қарама-қайшы болды, олар әдетте суға қарағанда мочевинасы бар диеталарды айтарлықтай көп сіңірді, бірақ 10% сахарозадан айтарлықтай аз (F(10,557) = 78,35, p < 0,0001; 1-сурет).1E). Сонымен қатар, екі физиологиялық күйді салыстырған кезде, флеботомияланған аналықтар ең төменгі концентрацияларда иесін іздейтін аналықтарға қарағанда мочевинаны көбірек сіңірді, ал бұл аналықтар жоғары концентрацияларда мочевинаның ұқсас мөлшерін сіңірді (F(1,953)= 78,82, p < 0,0001; 1F сурет, G). Мочевинасы бар диетадан қабылдау оңтайлы мәндерге ие болғанымен (1D, E сурет), екі физиологиялық күйдегі аналықтар мочевина концентрацияларының бүкіл диапазонында сіңірілген мочевина мөлшерін логарифмдік сызықты түрде модуляциялай алды (1F, G сурет). Сол сияқты, масалар зәрдегі азот мөлшері сіңірілген мөлшерде көрсетілгендіктен, сіңірілетін зәр мөлшерін реттеу арқылы азоттың сіңуін бақылайтын сияқты (1B, C және B суреттері).
Зәр мен мочевинаның иесін іздейтін және қан соратын масалардың тіршілігіне әсерін бағалау үшін аналықтарға төрт жастағы зәр берілді (жаңа, тұндырылғаннан кейін 24 сағат, 72 сағат және 168 сағаттан кейін) және мочевина концентрациясының әртүрлі диапазоны, сондай-ақ дистилденген су және 10% сахароза бақылау ретінде пайдаланылды (2А сурет). Бұл тіршілік ету талдауы иесін іздейтін аналықтарда (зәр: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; мочевина: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; 2B, C сурет) және қанмен қоректенетін аналықтарда (зәр: χ2 = 93,0, df = 5, p < 0,0001; мочевина: χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; 2D, E суреті). Барлығында Тәжірибелерде зәр, мочевина және сумен қоректенетін аналықтардың өмір сүру деңгейі сахарозамен қоректенетін аналықтарға қарағанда айтарлықтай төмен болды (2B-E сурет). Жаңа және ескірген зәрмен қоректенетін қожайын іздеуші аналықтардың өмір сүру деңгейі әртүрлі болды, 72 сағаттық ескірген зәрмен қоректенгендерде (p = 0,016) өмір сүру ықтималдығы ең төмен болды (2B сурет). Сонымен қатар, 135 мМ мочевинамен қоректенетін қожайын іздеуші аналықтардың өмір сүру ықтималдығы су бақылау тобына қарағанда ұзағырақ болды (p < 0,04) (2C сурет). Сумен салыстырғанда, жаңа зәрмен және 24 сағаттық зәрмен қоректенетін әйелдер ұзағырақ өмір сүрді (сәйкесінше p = 0,001 және p = 0,012; 2D сурет), ал 72 сағаттық зәрмен қоректенетін әйелдер қысқа жаңа зәрмен және 24 сағаттық ескірген зәрмен қоректенетін аналықтарға қарағанда ұзағырақ өмір сүрді (сәйкесінше p < 0,0001 және p = 0,013; 2D сурет). 135 мМ мочевинамен қоректенген кезде, қанмен қоректенетін аналықтардың мочевина мен судың барлық басқа концентрацияларына қарағанда ұзақ өмір сүрді (p <0,013; 2E сурет).
Сиыр зәрі мен мочевинамен қоректенетін қожайын және қан соратын аналық Anopheles arabinis масаларының тірі қалуы. Биоанализде (A) аналық масаларға жаңа және қартайған сиыр зәрінен, әртүрлі концентрациядағы мочевинадан, сахарозадан (10%) және тазартылған судан (H2O) тұратын диета берілді. Қожайын іздейтін (B, C) және қан соратын (D, E) масалардың тірі қалуы зәрмен (B, D) және мочевинамен (C, E) қоректенетін барлық аналық масалар, ал бақылау тобы, сахароза мен сумен қоректенген барлық аналық масалар өлгенше әр 12 сағат сайын тіркеліп отырды.
Ұшу диірмені сынағында 24 сағаттық кезең ішінде анықталған жалпы қашықтық пен айналым саны қожайын іздейтін және қан соратын масалар арасында әртүрлі болды, олар жалпы ұшу белсенділігін аз көрсетті (3-сурет). Жаңа және ескі зәрді немесе сахароза мен суды беретін қожайын іздейтін масалар ұшудың әртүрлі үлгілерін көрсетті (3-сурет), жаңа зәрмен қоректенетін аналық масалар таңғы уақытта белсендірек болды, ал 24 және 168 сағаттық ескі масалар зәрмен қоректенетіндер әртүрлі ұшу үлгілерін көрсетті және негізінен тәуліктік болды. Сахароза немесе 72 сағаттық зәрмен қоректенетін аналық масалар 24 сағаттық кезең ішінде белсенділік көрсетті, ал сумен қоректенетін аналық масалар орта кезеңде белсендірек болды. Сахарозамен қоректенетін масалар түнде және таңертең ерте ең жоғары белсенділік деңгейін көрсетті, ал 72 сағаттық ескі зәрді жұтқандар 24 сағат ішінде белсенділіктің тұрақты төмендеуін байқады (3-сурет).
Аңшы іздеп, қан соратын аналық Anopheles arabinis сиыр зәрі мен мочевинамен қоректенетін ұшу өнімділігі. Ұшу диірменіндегі сынақта жаңа және қартайған сиыр зәрімен, мочевинаның әртүрлі концентрацияларымен (10%) және тазартылған сумен (H2O) қоректенетін аналық масалар көлденең, еркін айналатын қолдарға (жоғарыда) байланды. Қожайын іздеп (сол жақта) және қан соратын (оң жақта) аналық масалардың 24 сағаттық кезеңдегі әрбір диета үшін сағатына жалпы қашықтық және ұшу саны жазылды (қара: сұр; ашық: ақ). Орташа қашықтық және орташа шабуыл саны тәуліктік белсенділік графигінің оң жағында көрсетілген. Қателік жолақтары орташа мәннің стандартты қателігін білдіреді. Статистикалық талдау мәтінді қараңыз.
Жалпы алғанда, қожайын іздейтін аналықтардың жалпы ұшу белсенділігі 24 сағаттық кезеңдегі ұшу қашықтығына ұқсас үлгіні ұстанды. Орташа ұшу қашықтығына тұтынылған тағам айтарлықтай әсер етті (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), ал 72 сағат зәр қабылдаған қожайын іздейтін аналықтардың басқа барлық диеталармен салыстырғанда айтарлықтай ұзақ қашықтыққа ұшқандары (p < 0.0001), ал сахарозамен қоректенетін масалар жаңа (p = 0.022) және 24 сағаттық зәрмен (p = 0.022) қоректенетін масаларға қарағанда ұзағырақ ұшты. Зәрмен қоректенетін қожайын іздейтін аналықтардың зәрмен қоректенетін зәрмен қоректенетін масалардың ... 0,0001). Мочевинаның кез келген концентрациясымен қоректенген қожайын іздеуші аналықтар сумен немесе сахарозамен қоректенген аналықтарға қарағанда ұзағырақ ұшты (p < 0,03).
Қан соратын масалардың жалпы ұшу белсенділігі барлық диеталарда 24 сағат бойы тұрақты және тұрақты болды, қараңғы кезеңнің екінші жартысында сумен қоректенетін аналықтарда, сондай-ақ жаңа және 24 сағаттық жасында қоректенетін аналықтарда зәр белсенділігі артты (3-сурет). Зәрмен қоректенетін диета қанмен қоректенетін аналықтарда орташа ұшу қашықтығына айтарлықтай әсер еткенімен (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), мочевинамен қоректенетін диета басқа зәрмен және бақылау диетасымен (жаңа, p = 0.0091; 72 сағат, p = 0.0022; 168 сағат, p = 0.001; сахароза, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036) әсер етпеді.
Зәр мен мочевинамен қоректенудің көбею параметрлеріне әсері жұмыртқа салу биоталдауларында бағаланды (4A сурет) және әрбір аналықтың салған жұмыртқа санына, жұмыртқа өлшеміне және жаңадан шыққан алғашқы жас дернәсілдеріне байланысты зерттелді. Жұмыртқалар саны. Зәрмен қоректенетін араб аналықтары диетаға байланысты өзгерді (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; 4B сурет). 24 сағаттық зәрмен, қанмен қоректенетін аналықтары басқа зәрмен қоректенетін аналықтарға қарағанда айтарлықтай көп жұмыртқа салды және сахарозамен қоректенетіндерге ұқсас болды (4B сурет). Сол сияқты, зәрмен қоректенетін аналықтардың салған жұмыртқаларының мөлшері диетаға байланысты өзгерді (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), 24 сағаттық зәрмен және сахарозамен қоректенетін аналықтары сумен қоректенетін аналықтарға қарағанда айтарлықтай үлкен жұмыртқа салды, ал 168 сағаттық зәрмен қоректенетін аналықтардың жұмыртқалары айтарлықтай кішірек болды (4C сурет). Сонымен қатар, зәрмен қоректенетін диета дернәсіл мөлшеріне айтарлықтай әсер етті (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), 24 және 72 сағаттық зәрмен қоректенетін аналықтардың жұмыртқаларынан жұмыртқа дернәсілдерінен шыққан жұмыртқаларға қарағанда айтарлықтай үлкен дернәсілдер шығады. Сумен қоректенетін және 168 сағаттық зәрмен қоректенетін аналықтардың дернәсілдері (4D сурет).
Сиыр зәрі мен мочевинамен қоректенетін аналық Anopheles arabinis көбею көрсеткіштері. Қанмен қоректенетін аналық масалар биоталдауға орналастырмас бұрын және жұмыртқа салатын субстраттарды алмас бұрын 48 сағат бойы жаңа және қартайған сиыр зәрінен, мочевинаның әртүрлі концентрациясынан, сахарозадан (10%) және тазартылған судан (H2O) тұратын диеталармен 48 сағат бойы қоректенді (A). Жұмыртқа саны (B, E), жұмыртқа мөлшері (C, F) және дернәсіл мөлшері (D, G) берілген диетаға айтарлықтай әсер етті (сиыр зәрі: BD; мочевина: EG). Әр түрлі әріп атауларын пайдаланып өлшенген әрбір параметр үшін орташа мәндер бір-бірінен айтарлықтай ерекшеленді (Tukey's post hoc талдауын қолданатын бір жақты ANOVA; p < 0,05). Қателік жолақтары орташа мәннің стандартты қателігін білдіреді.
Зәрдің негізгі азотты компоненті ретінде мочевина қанмен қоректенетін аналықтарға диета ретінде берілгенде, барлық зерттеулерде репродуктивті параметрлерге айтарлықтай әсер етті. Қанмен қоректенген аналықтар қанмен қоректенгеннен кейін салатын жұмыртқалар саны мочевина концентрациясына байланысты (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), мочевина концентрациясы 134 мкМ және 1.34 мМ аралығында болғанда, мочевина концентрациясымен қоректенген аналықтар көбірек жұмыртқа салды (4E сурет). 134 мкМ немесе одан жоғары мочевина концентрациясымен қоректенген аналықтар сумен қоректенген аналықтарға қарағанда үлкенірек жұмыртқа салды (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; 4F сурет) және дернәсіл мөлшері, аналықтардағы мочевинаның ұқсас концентрациясына (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001) әсер еткенімен, өзгермелі болды (4G сурет).
Қожайын іздейтін ірі қара малдың зәрінің бас кеңістігіндегі ұшпа сығындыларына жалпы тартымдылық. Шыны түтікшелі олфактометрде бағаланған арабиенсиске (5A сурет) зәрдің жасы айтарлықтай әсер етті (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; 5B сурет). Кейінгі талдау көрсеткендей, 24 сағат ішінде ескірген зәрдің иісі барлық басқа емдеу әдістерімен салыстырғанда тартымдылықтың айтарлықтай жоғары деңгейін тудырады (72 сағат: p = 0,0060, 168 сағат: p = 0,012, пентан: p = 0,00070), жаңа зәрдің иісінен басқа (p = 0,13; 5B сурет). Қан соратын масалардың зәрдің иісіне жалпы тартымдылығы айтарлықтай ерекшеленбегенімен (χ2 = 8,78, df = 4, p = 0,067; 5C сурет), бұл аналықтардың 72 сағаттық ескірген зәрмен салыстырғанда бас кеңістігіндегі ұшпа сығындыларға айтарлықтай тартымды екені анықталды. басқару элементтері (p = 0,0066; 5C сурет).
Қанмен қоректенетін Anopheles arabianus-ты іздеудегі табиғи және синтетикалық сиыр зәрінің иістеріне мінез-құлық реакциялары. Шыны түтікшелі олфактометрдің схемасы (A). Жаңа және ескі сиыр зәрінен алынған бас кеңістігінің ұшпа сығындыларының иесіне (B) және қан соратын (C) масаларға тартылуы. Лорд Анның шатыр реакциясын табыңыз. Жаңа (D), 24 сағаттық (E), 72 сағаттық (F) және 168 сағаттық (G) ескі сиыр зәрінен бөлініп алынған бас кеңістігінің сығындылары көрсетілген. Электронды антеннаны анықтау (EAD) іздері газ хроматографынан бөлініп алынған және жалын ионизациясы детекторы (FID) арқылы анықталған бас кеңістігіндегі биоактивті қосылыстарға жауап ретінде кернеудің өзгеруін көрсетеді. Шкала жолағы жауап амплитудасын (мВ) ұстап тұру уақытына (с) қатысты көрсетеді. Биологиялық белсенді қосылыстардың қасиеттері мен босату жылдамдығы (мкг h-1) көрсетілген. Бір жұлдызша (*) тұрақты төмен амплитудалы жауапты көрсетеді. Қос жұлдызшалар (**) өндірілмейтін жауаптарды көрсетеді. Табыңыз иесі (H) және қансорғыш (I) An.arabiensis жаңа және ескі сиыр зәрінің иістерінің синтетикалық қоспаларына әртүрлі әсер етеді. Әртүрлі әріп атауларына тартылған масалардың орташа үлесі бір-бірінен айтарлықтай ерекшеленді (Tukey-дің post hoc талдауын қолданатын бір жақты ANOVA; p < 0,05). Қателік жолақтары шкала бойынша стандартты қателікті білдіреді.
Аналық Ann.arabiensis, қан ұйығаннан кейін 72 және 120 сағаттан кейін, уылдырық шашу кезінде, пентан бақылауымен салыстырғанда, жаңа және ескі сиыр зәрінен алынған бас кеңістігіндегі ұшпа экстракттарға артықшылық берілмеді (χ2 = 3.07, p > 0.05; Қосымша файл 1: S1 сурет).
Ann.arabiensis аналықтары үшін GC-EAD және GC-MS талдаулары сегіз, алты, үш және үш биоактивті қосылысты анықтады (5D-G сурет). Электрофизиологиялық реакцияларды тудыратын қосылыстар санындағы айырмашылықтар байқалғанымен, бұл қосылыстардың көпшілігі жаңа және ескі зәрден жиналған әрбір бас кеңістігіндегі ұшпа сығындыда болды. Сондықтан, әрбір сығынды үшін тек табалдырықтан жоғары аналық антенналардан физиологиялық реакция тудыратын қосылыстар ғана қосымша талдауларға енгізілді.
Бас кеңістігіндегі биоактивті қосылыстардың жалпы ұшпа босап шығу жылдамдығы жаңа зәрдегі 29 мкг сағ-1-ден 168 сағаттық зәрдегі 242 мкг сағ-1-ге дейін өсті, бұл негізінен p-крезол мен м-формальдегидтің, сондай-ақ фенолдың жоғарылауына байланысты болды. Керісінше, 2-циклогексен-1-он және деканал сияқты басқа қосылыстардың босап шығу жылдамдығы зәр жасының ұлғаюымен төмендеді, бұл хроматограммадағы сигнал қарқындылығының (молшылықтың) төмендеуімен (5D-сурет) және осы қосылыстарға физиологиялық реакциялармен (5D-G сурет оң жақ панель) корреляцияланды.
Жалпы алғанда, синтетикалық қоспа жаңа және ескі зәрдің ұшпа сығындыларында анықталған биоактивті қосылыстардың табиғи қатынасына ұқсас болды (5D-G сурет) және иесін іздеуде (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; 5H сурет) немесе қан соратын масаларды (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; 5I сурет) айтарлықтай тартымдылық тудырмаған сияқты. Дегенмен, емдеу әдістері арасындағы жұптық салыстырулар иесін іздейтін масалардың пентан бақылауымен салыстырғанда 24 сағаттық ескі зәрдің синтетикалық қоспасына айтарлықтай тартымды екенін көрсетті (p = 0.0086; 5H сурет).
24 сағаттық зәрдің синтетикалық қоспаларындағы жеке компоненттердің рөлін бағалау үшін Y-түтікше талдауында алты субтрактивті қоспа толық қоспалармен салыстырылды, онда жеке қосылыстар алынып тасталды. Иесін іздейтін масалар үшін толық қоспадан жеке қосылыстарды алып тастау мінез-құлық реакцияларына айтарлықтай әсер етті (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Қосымша файл 1: S2A сурет), барлық субтрактивті қоспалар толық араласқаннан гөрі кішірек қоспаларға қарағанда тартымды болды. Керісінше, толық синтетикалық қоспадан жеке қосылыстарды алып тастау қан соратын масалардың мінез-құлық реакцияларына әсер еткен жоқ (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), деканалды қоспағанда, бұл толық қоспамен салыстырғанда төмен деңгейге әкелді (p = 0.022; Қосымша файл 1: S2B сурет).
Эфиопиядағы безгек таралған ауылда 24 сағаттық сиыр зәрінің синтетикалық қоспасының дала жағдайында масаларды тартудағы тиімділігі он түн бойы бағаланды (6А сурет). Барлығы 4861 масала ұсталып, анықталды, оның 45,7%-ы Anthropus.gambiae sl, 18,9%-ы Anopheles pharoensis және 35,4%-ы Culex spp. (Қосымша файл 1: S1 кестесі). Anopheles arabinis - ПТР талдауы арқылы анықталған An.Gambian түр кешенінің жалғыз мүшесі. Орташа есеппен бір түнде 320 масала ұсталды, бұл уақытта синтетикалық қоспа жемдері бар уақыт тұзақтары қоспасыз жұптасқан тұзақтарға қарағанда көбірек масаларды ұстады (χ2(0, 3196) = 170,0, p < 0,0001). Сынақтың басында, ортасында және соңында бес бақылау түнінің әрқайсысында жемсіз тұзақтар орнатылды. Ұқсас сандар Әрбір тұзақ жұбында масалар ұсталды, бұл үйлер арасында ешқандай ауытқу болмағанын көрсетеді (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0,05) және зерттеу кезеңінде популяцияның азаймағанын көрсетеді. Бақылау тұзақтарымен салыстырғанда, синтетикалық қоспасы бар тұзақтарға ұсталған масалар саны айтарлықтай өсті: иесін іздеу (χ2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), жақында қанмен қоректену (χ2(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) және буаздық (χ2(0, 228) = 6,27, p = 0,0123; Қосымша файл 1: S1 кестесі). Бұл сондай-ақ ұсталған масалардың жалпы санынан көрінеді: иесі іздеген > қансорғыш > жүкті > жартылай жүкті > еркек.
Сиыр зәрінің иісін анықтауға арналған синтетикалық қоспаның тиімділігін далалық бағалау. Далалық сынақтар Эфиопияның оңтүстік-орталық бөлігінде (карта), Маки қаласының маңында (кірістіру), Ауруларды бақылау орталықтарының (CDC) жарық тұзағын (оң жақта) жұптасқан үйлерде, латын шаршы дизайнымен (әуеден түсірілген сурет) (A) пайдаланып жүргізілді. Иіспен қоректенетін синтетикалық CDC фототұзақтары аналық Anopheles arabesques (B) масаларын тартады және ұстайды, бірақ Anopheles farroes (C) масаларын басқаша, физиологиялық күйге тәуелді әсермен ұстамайды. Сонымен қатар, бұл тұзақтар иесі Culex масаларының санының айтарлықтай артуын ұстады.(D) Бақылаумен салыстырғанда. Сол жақтағы жолақтар иіспен қоректенетін жем (жасыл) және бақылау (ашық) тұзақтарында (N = 10) ұсталған масалардың орташа іріктеу индексін көрсетеді, ал оң жақтағы жолақтар бақылау тұзақтарының жұптарындағы орташа іріктеу индексін көрсетеді (ашық; N = 5). Жұлдызшалар статистикалық маңыздылық деңгейлерін көрсетеді (*p = 0,01 және ***p < 0,0001)
Синтетикалық қоспалары бар тұзақтарда үш түр әртүрлі ұсталды. Иесін іздеу (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), қанмен қоректену (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) және буаздық (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) кезінде .arabiensis синтетикалық қоспаны шығарып, тұзаққа түсіп қалды (6B сурет), ал An мөлшері әр түрлі болмады. Әртүрлі физиологиялық күйлердегі Pharoensis табылды (6C сурет). Culex үшін бақылау тұзақтарымен салыстырғанда синтетикалық қоспамен жемделген тұзақтарда иелерін іздейтін масалар санының айтарлықтай өсуі ғана байқалды (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; 6D сурет).
Эфиопиядағы өсіру орындары мен ауылдық қауымдастықтар арасындағы әлеуетті иелерден тыс орналасқан жем тұзақтары безгек масаларының сиыр зәрінің иісін ие мекендеу ортасының белгісі ретінде пайдаланатынын бағалау үшін пайдаланылды. Ие белгілері болмаған кезде, жылу және сиыр зәрінің иісі болған кезде немесе болмаған кезде ешқандай масалар ұсталмады (Қосымша файл 1: S3 сурет). Дегенмен, жоғары температура мен сиыр зәрінің иісі болған кезде, аналық безгек масалары зәр жасына қарамастан аз мөлшерде болса да тартылып, ұсталды (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Қосымша файл 1: S3 сурет). Керісінше, су бақылаулары безгек масаларын жоғары температурада ұстамады (Қосымша файл 1: S3 сурет).
Безгек масалары басқа жәндіктер сияқты өмір сүру тарихын жақсарту үшін сиыр зәрімен (яғни, шалшықтармен) компенсаторлық қоректену арқылы азот құрамдас қосылыстарды алады және таратады [2, 4, 24, 25, 26]. Сиыр зәрі - безгек тасымалдаушыларының тыныштық орындарымен, мысалы, сиыр қораларымен және ауылдық үйлер мен уылдырық шашатын орындарға жақын биік өсімдіктермен тығыз байланысты оңай қолжетімді жаңартылатын ресурс. Аналық масалар бұл ресурсты иіс арқылы табады және зәрдегі азот қосылыстарының, соның ішінде зәрдегі негізгі азот құрамдас бөлігі болып табылатын мочевинаның сіңуін реттей алады [15, 16]. Аналық масалардың физиологиялық күйіне байланысты зәрдегі қоректік заттар қожайын іздейтін аналық масалардың ұшу белсенділігін және тіршілік етуін, сондай-ақ бірінші гонадотропты цикл кезінде қанмен қоректенетін даралардың тіршілік етуі мен репродуктивтік сипаттамаларын жақсарту үшін бөлінеді. Сондықтан зәрді араластыру тамақтанбаған ересектер сияқты жабық безгек тасымалдаушылары үшін маңызды қоректік рөл атқарады [8], себебі ол аналық масаларға төмен қауіпті қоректену арқылы маңызды азот қосылыстарын алуға мүмкіндік береді. Бұл жаңалық айтарлықтай эпидемиологиялық салдарға әкеледі, себебі аналық масалар көбейеді. олардың өмір сүру ұзақтығы, белсенділігі және көбею өнімділігі, мұның бәрі вектор сыйымдылығына әсер етеді. Сонымен қатар, бұл мінез-құлық болашақ векторларды басқару бағдарламаларының нысанасы болуы мүмкін.