Pinagsasama ng pagkuha at pamamahagi ng sustansya ang mga katangian ng paghahanap ng insekto at kasaysayan ng buhay. Upang mapunan ang mga kakulangan sa mga partikular na sustansya sa iba't ibang yugto ng buhay, maaaring makuha ng mga insekto ang mga sustansyang ito sa pamamagitan ng pandagdag na pagpapakain, halimbawa, sa pamamagitan ng pagpapakain ng mga vertebrate secretion sa isang prosesong kilala bilang puddles. Ang lamok na Anopheles arabiani ay lumilitaw na malnourished at, samakatuwid, ang pag-aaral ng mga sustansya na ito ay mukhang malnourished at, samakatuwid, ang pag-aaral ng metabolismo.arabiensis agitation sa ihi ng baka para sa nutrient acquisition ay nagpapabuti sa mga katangian ng kasaysayan ng buhay.
Tiyaking ligtas ito. Naakit ang arabiensis sa amoy ng sariwa, 24-oras, 72-oras, at 168-oras na ihi ng baka, at ang host-seeking at blood-fed (48-hour post-blood meal) na mga babae ay sinukat sa isang Y-tube olfactometer, at ang mga buntis na babae ay tinasa para sa pinagsama-samang pagsusuri ng biolohikal na ihi at ginamit ang lahat ng electrophysiological na pagsusuri ng biolohikal na pag-aaral ng electrophysiological. apat na klase ng edad.Ang mga sintetikong pinaghalong bioactive compound ay sinusukat sa Y-tube at field trials.Upang imbestigahan ang ihi ng baka at ang pangunahing nitrogen-containing compound urea nito bilang mga potensyal na supplemental diet para sa malaria vectors, feeding parameters at life history na mga katangian ay sinusukat.Ang proporsyon ng babaeng lamok at ang dami ng baka ay na-assess ng ihi at urea, na na-assess ang flight ng mga babae, at na-absorb ng urea. duction.
Humanap ng dugo at pagpapakain ng host.Sa mga pag-aaral sa laboratoryo at field, ang mga Arabo ay naakit sa natural at sintetikong amoy ng sariwa at may edad na ihi ng baka. Ang mga buntis na babae ay walang malasakit sa mga tugon ng ihi ng baka sa mga lugar ng pangingitlog. Ang mga babaeng naghahanap ng host at sumisipsip ng dugo ay aktibong sumisipsip ng ihi ng baka at urea at inilalaan ang mga mapagkukunang ito para sa pagpapaandar ng buhay, pagbabagong-buhay, o pagbabagong-buhay.
Anopheles arabinis ang pagkuha at pamamahagi ng ihi ng baka para sa pinahusay na mga katangian ng kasaysayan ng buhay. Ang karagdagang pagpapakain ng ihi ng baka ay direktang nakakaapekto sa kapasidad ng vector sa pamamagitan ng pagtaas ng pang-araw-araw na kaligtasan at densidad ng vector, at hindi direkta sa pamamagitan ng pagbabago sa aktibidad ng paglipad at samakatuwid ay dapat isaalang-alang sa hinaharap na mga modelo.
Ang pagkuha at pamamahagi ng sustansya ay isinasama ang paghahanap ng mga insekto at mga katangian ng kasaysayan ng buhay [1,2,3]. Ang mga insekto ay nakakapili at nakakakuha ng pagkain at nagsasagawa ng compensatory feeding batay sa pagkakaroon ng pagkain at mga pangangailangan sa sustansya [1, 3]. Ang pamamahagi ng mga sustansya ay nakasalalay sa proseso ng kasaysayan ng buhay at maaaring humantong sa iba't ibang mga kinakailangan para sa kalidad at dami ng diyeta sa iba't ibang yugto ng buhay ng mga insekto. maaaring makuha ang mga sustansyang ito sa pamamagitan ng pandagdag na pagpapakain, tulad ng sa putik, iba't ibang dumi at pagtatago ng mga vertebrates, at bangkay, isang prosesong kilala bilang puddles [2]. Bagama't pangunahing inilarawan ang iba't ibang uri ng paruparo at gamu-gamo, ang mga butas sa tubig ay nangyayari rin sa iba pang mga order ng insekto, at pagkahumaling at pagpapakain sa mga ganitong uri ng mapagkukunan ay maaaring magkaroon ng makabuluhang epekto sa kalusugan, 4, mga katangian ng buhay [5] . Ang squito Anopheles gambiae sensu lato (sl) ay lumilitaw bilang isang 'malnourished' na nasa hustong gulang [8], kaya ang pagtutubig ay maaaring may mahalagang papel sa mga katangian ng kasaysayan ng buhay nito, ngunit ang pag-uugali na ito ay hanggang ngayon ay napapabayaan .Ang paggamit ng pagkabalisa bilang isang paraan ng pagtaas ng nutrient intake sa mahalagang sasakyang ito ay nangangailangan ng pansin dahil ito ay maaaring magkaroon ng mahalagang epidemiological na kahihinatnan.
Limitado ang paggamit ng nitrogen sa mga babaeng Anopheles na lamok na nasa hustong gulang dahil sa mababang caloric na reserbang dala mula sa yugto ng larval at hindi mahusay na paggamit ng pagkain ng dugo [9]. Karaniwang binabayaran ito ng Babae Ann.gambiae sl sa pamamagitan ng pagdaragdag ng mga pandagdag na pagkain sa dugo [10, 11], sa gayo'y naglalagay ng mas maraming tao sa panganib na magkaroon ng mas mataas na panganib ng sakit, at pagkalason. ay maaaring gumamit ng pandagdag na pagpapakain ng vertebrate excreta upang makakuha ng nitrogenous compounds na nagpapahusay sa adaptation at flight maneuverability, gaya ng ipinakita ng ibang mga insekto [2]. Sa bagay na ito, ang malakas at natatanging pagkahumaling ng isa sa magkapatid na species sa loob ng An.The Gambian sl species complex, Anopheles arabinis, fresh and old cow maneuverability [12,13,14] te with and feed on cattle.Ang ihi ng baka ay isang mapagkukunan na mayaman sa nitrogenous compounds, na ang urea ay bumubuo ng 50-95% ng kabuuang nitrogen sa sariwang ihi [15, 16]. Habang tumatanda ang ihi ng baka, ginagamit ng mga microorganism ang mga mapagkukunang ito upang bawasan ang pagiging kumplikado ng mga nitrogenous compound sa loob ng 24 na oras [15]. Sa mabilis na pagtaas ng mga microorganism na nakakalason sa ammonia, na nauugnay sa isang paghina ng organikong compound na almonika, na nauugnay sa isang paghina ng organikong compound ng ammonia. ang mga squitoes) ay umuunlad [15], na maaaring babaeng Ann.arabiensis ay mas gustong maakit sa ihi na may edad na 24 na oras o mas mababa pa [13, 14].
Sa pag-aaral na ito, hinanap ang host at blood-fed Ans. Sa unang cycle ng gonadotropin nito, nasuri ang arabiensis para sa pagkuha ng mga nitrogenous compound, kabilang ang urea, sa pamamagitan ng paghahalo ng ihi. Susunod, isang serye ng mga eksperimento ang isinagawa upang masuri kung paano inilalaan ng mga babaeng lamok ang potensyal na mapagkukunan ng sustansya para sa pinabuting kaligtasan ng buhay, pagpaparami ng ihi, at pagtukoy kung sariwa pa ba ang mga ito. ang mga ito ay nagbigay ng maaasahang mga pahiwatig para sa host at dugo-fed An. Sa kanilang paghahanap para sa potensyal na mapagkukunang nutrisyon na ito, natuklasan ng arabiensis ang mga kemikal na ugnayan sa likod ng naobserbahang kaakit-akit na pagkakaiba.Atraksyon ng lamok.Ang mga resultang nakuha ay nagpapatunay na si An.ang arabiensis ay nakakakuha at namamahagi ng mga nitrogenous compound na matatagpuan sa vertebrate urine upang maimpluwensyahan ang mga katangian ng kasaysayan ng buhay. Ang mga resultang ito ay tinatalakay sa konteksto ng mga potensyal na epidemiological na kahihinatnan at kung paano sila magagamit para sa pagsubaybay at pagkontrol ng vector.
Ang Anopheles arabicans (Dongola strain) ay pinananatili sa 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH at isang 12:12 h light:dark cycle. Ang mga larvae ay pinalaki sa mga plastic tray (20 cm × 18 cm × 7 cm) na puno ng distilled water at pinakain ng Tetramin® na pagkain ng isda (No. rtila, Åstorp, SE) at pagkatapos ay inilipat sa mga kulungan ng Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) upang payagan ang paglitaw ng may sapat na gulang. Binigyan ang mga matatanda ng 10% sucrose solution ad libitum hanggang 4 na araw pagkatapos ng paglitaw (dpe), kung saan inilarawan ang host-seeking na babae sa naunang pag-eksperimento sa gabi, o ang mga babaeng naghahanap ng tubig ay agad-agad na inaalok sa nakaraang gabi na eksperimento, o sa ibaba ng naunang pag-eksperimento sa tubig. ang mga babaeng ginamit para sa mga eksperimento sa flight tube ay nagutom sa loob lamang ng 4-6 na oras na may tubig ad libitum. Para ihanda ang mga lamok na sumisipsip ng dugo para sa mga kasunod na bioassay, 4 na dpe na babae ang binigyan ng defibrotic na dugo ng tupa (Håtunalab, Bro, SE) gamit ang isang membrane feeding system (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK0, pagkatapos ay inilarawan nang direkta sa ibaba ng mga babae, at pagkatapos ay inilarawan ang mga indibidwal na congested na babae, at pagkatapos ay inililipat ang mga indibidwal na babae sa ibaba. % sucrose ad libitum para sa 3 araw bago ang mga eksperimento na inilalarawan sa ibaba. Ang mga huling babae ay ginamit para sa flight tube bioassays at inilipat sa laboratoryo, at pagkatapos ay nagkaroon ng distilled water ad libitum sa loob ng 4-6 na oras bago ang eksperimento.
Ginamit ang feeding assays upang mabilang ang pagkonsumo ng ihi at urea sa mga babaeng An.Arab na nasa hustong gulang. Ang mga babaeng naghahanap ng host at pinapakain ng dugo ay binigyan ng diyeta na naglalaman ng 1% na diluted na sariwa at may edad na ihi ng baka, iba't ibang konsentrasyon ng urea, at dalawang kontrol (10% sucrose at tubig) sa loob ng 48 h. Bilang karagdagan, pangkulay ng pagkain (1 mgSml-1 670ld; CA. rich, Stockholm, SE) ay idinagdag sa diyeta at ibinigay sa isang 4 × 4 matrix sa 250 µl microcentrifuge tubes (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Figure 1A) Punan sa gilid (~300 µl). taas; Semadeni, Ostermundigen, CH; Figure 1A) sa kumpletong kadiliman sa 25 ± 2 cm °C at 65 ± 5% relative humidity. Ang mga eksperimentong ito ay inulit ng 5 hanggang 10 beses. Pagkatapos ng exposure sa diet, ang mga lamok ay inilagay sa -20 °C hanggang sa karagdagang pagsusuri.
Maghanap ng ihi ng baka at urea na na-absorb ng host at ng babaeng sumisipsip ng dugo na Anopheles arabianus. Sa feeding trial (A), ang mga babaeng lamok ay binigyan ng diyeta na binubuo ng sariwa at matandang ihi ng baka, iba't ibang konsentrasyon ng urea, sucrose (10%), at distilled water (H2O).Host-seeking (B) at blood-seeking sa iba pang babaeng pinapakain ng dugo (C) na hindi sumisipsip ng iba pang babaeng host na diyeta na mas maraming babaeng pinapakain ng dugo (C) ed 72-oras na ihi ng baka na mas mababa sa 168-oras na ihi ng baka (B). Ang ibig sabihin ng kabuuang nitrogen content (± standard deviation) ng ihi ay kinakatawan sa inset. Ang mga babaeng naghahanap ng host (D, F) at sumisipsip ng dugo (E, G) ay kumukuha ng urea sa paraang nakadepende sa dosis. Mean inhaled volume (D, E) ay may malaking pagkakaiba sa bawat isa sa mga pangalan ng Tu. 0.05). Ang mga error bar ay kumakatawan sa karaniwang error ng mean (BE). Ang tuwid na dashed na linya ay kumakatawan sa log-linear regression line (F, G)
Upang palabasin ang hinihigop na pagkain, ang mga lamok ay isa-isang inilagay sa 1.5 ml microcentrifuge tubes na naglalaman ng 230 µl ng distilled water at ang tissue ay ginulo gamit ang isang disposable pestle at cordless motor (VWR International, Lund, SE), na sinusundan ng centrifugation sa 10 krpm para sa 10 min. -Aldrich) at absorbance (λ620) ay natukoy gamit ang spectrophotometer-based microplate reader (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Bilang kahalili, ang mga lamok ay giling sa 1 ml ng distilled water, 900 µl na kung saan ay inilipat sa isang cuvette (, λ 602m analysis). Para ma-quantify ang dietary intake, isang standard curve ang inihanda sa pamamagitan ng serial dilution para magbunga ng 0.2 µl hanggang 2.4 µl ng 1 mg ml-1 xylene cyanide. Pagkatapos, ginamit ang optical density ng mga kilalang konsentrasyon ng dye upang matukoy ang dami ng pagkain na natutunaw ng bawat lamok.
Sinuri ang data ng volume gamit ang one-way analysis of variance (ANOVA) na sinundan ng post hoc pairwise na paghahambing ni Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007).Linear regression analysis na inilarawan ang concentration-dependent urea intake at inihambing ang mga tugon sa pagitan ng host-seeking moraph. , GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Humigit-kumulang 20 µl ng mga sample ng ihi mula sa bawat pangkat ng edad ay nakatali sa Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) at naka-encapsulated sa mga kapsula ng lata (8 mm × 5 mm). Ang mga capsule ay ipinasok sa combustion chamber ng CHNS/O analyzer (Thermofic content S. at may edad na ihi ayon sa protocol ng gumawa. Ang kabuuang nitrogen (g N l-1) ay binibilang batay sa mga kilalang konsentrasyon ng urea na ginamit bilang pamantayan.
Upang masuri ang epekto ng diyeta sa paghahanap ng host at pagsuso ng dugo ng babaeng kaligtasan ng buhay, ang mga lamok ay isa-isang inilagay sa malalaking Petri dish (12 cm ang lapad at 6 cm ang taas; Semadeni) na may butas na natatakpan ng mata sa talukap ng mata (3 cm ang lapad) na may Para sa bentilasyon at suplay ng pagkain. Ang mga diyeta ay ibinigay nang direkta pagkatapos ng 4 dpe at may kasamang 1% na konsentrasyon ng diluted na sariwa, at may kasamang 1% na diluted na diluted na 1% na sariwa na kontrol. sucrose at tubig. Ang bawat diyeta ay na-pipette sa isang dental tampon (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) na ipinasok sa isang 5 ml syringe (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), ang plunger ay inalis, at inilagay sa ibabaw ng isang petri dish (figure 1).1A). Baguhin ang iyong diyeta nang dalawang beses habang inilarawan ang iyong lab sa araw-araw. ang mga lamok ay itinapon hanggang sa ang huling lamok ay namatay (n = 40 bawat paggamot). Ang kaligtasan ng mga lamok na pinakain sa iba't ibang diyeta ay nasuri sa istatistika gamit ang Kaplan-Meyer survival curves at log-rank test upang ihambing ang mga paghahambing sa pamamahagi ng kaligtasan sa pagitan ng mga diyeta (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Isang custom na mosquito flying mill batay sa Attisano et al.[17], na gawa sa 5 mm makapal na malinaw na mga panel ng acrylic (10 cm ang lapad x 10 cm ang haba x 10 cm ang taas) na walang harap at likod na mga panel (Fig. 3: itaas). Isang pivot assembly na may vertical tube na gawa sa isang gas chromatography na column (0.25 mm na may L id) sa pagitan ng suspendido na kailangan ng isang pair na glued sa pagitan ng 7.5 mm L id; 7. neodymium magnets na 9 cm ang pagitan.Isang pahalang na tubo na gawa sa parehong materyal (6.5 cm L) ang naghati sa patayong tubo upang bumuo ng naka-tether na braso at isang braso na may dalang maliit na piraso ng aluminum foil bilang signal na nakakagambala sa liwanag.
Ang mga babaeng gutom na 24 na oras ay binigyan ng diyeta sa itaas sa loob ng 30 minuto bago ang pagpigil. Ang mga babaeng lamok na ganap na pinakain ay isa-isang nilagyan ng anesthetize sa yelo sa loob ng 2-3 min at ikinakabit sa mga insect pin na may beeswax (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) at pagkatapos ay itinali sa pamamagitan ng pasadyang paglipad ng armsFvolution sa pamamagitan ng pasadyang paglipad sa pamamagitan ng arm. -built data logger, pagkatapos ay iniimbak at ipinakita gamit ang PC-Lab 2000™ software (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Ang flight mill ay inilagay sa isang climate-regulated room (12 h:12 h, light: dark, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Upang mailarawan ang pattern ng aktibidad ng paglipad, ang kabuuang distansya na nilipad (m) at ang kabuuang bilang ng magkakasunod na aktibidad ng paglipad ay kinakalkula bawat oras sa loob ng 24 na oras. Bilang karagdagan, ang average na distansya na nilipad ng mga indibidwal na babae ay inihambing sa mga paggamot at sinuri gamit ang one-way na ANOVA at ang post hoc analysis ni Tukey (JMP Pro, v14.0.0, ang average na distansya ng SAS ay itinuturing na isang variable na distansiya, habang ang SAS ay itinuturing na isang average na distansiya, Inc.). ng mga round ay kinakalkula sa 10 minutong mga palugit.
Upang masuri ang epekto ng diyeta sa pagganap ng reproduktibo ng An.arabiensis, anim na babae (4 dpe) ang direktang inilipat sa mga kulungan ng Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) pagkatapos ng koleksyon ng dugo at pagkatapos ay ibinigay ang pang-eksperimentong diyeta sa loob ng 48 h tulad ng inilarawan sa itaas. Pagkatapos ay inalis ang mga diyeta at ang mga tasa ng pangingitlog (30 ml; Nolato Hertila) ay binibigyan ng tubig sa bawat pangatlong araw ng 2 ml bawat 820 ml. 4 na oras. Ulitin ang bawat dietary regimen 20-50 beses. Binibilang at naitala ang mga itlog para sa bawat experimental cage. Ginamit ang mga subsample ng mga itlog upang masuri ang ibig sabihin ng laki at haba ng pagkakaiba-iba ng mga indibidwal na itlog (n ≥ 200 bawat diyeta) gamit ang isang Dialux-20 microscope (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, DE 3 Camera);Leica Microsystems Ltd., DE). Ang natitirang mga itlog ay itinago sa isang silid na kinokontrol ng klima sa ilalim ng karaniwang mga kondisyon ng pagpapalaki sa loob ng 24 na oras, at isang subsample ng kamakailang lumitaw na 1st instar larvae (n ≥ 200 bawat diyeta) ay sinusukat, tulad ng inilarawan sa itaas. Ang bilang ng mga itlog at ang laki ng mga itlog at larvae ay inihambing sa pagitan ng mga paggamot at paggamit ng one-way na ANOP na paggamot at paggamit ng one-way na ANJMP0. SAS Institute Inc.).
Ang mga headspace volatiles mula sa sariwa (1 hr post-sampling), 24 hr, 72 hr at 168 hr aged na ihi ay kinolekta mula sa mga sample na nakolekta mula sa Zebu cattle, Arsi races. Para sa kaginhawahan, ang mga sample ng ihi ay kinokolekta ng maaga sa umaga habang ang mga baka ay nasa kamalig pa rin. Ang mga sample ng ihi ay nakolekta mula sa 10 indibidwal at 100 ml ng bawat sample ng polyp-freed (mga indibidwal na paglilipat ng 1 ml ng Coppfre) sco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) sa 3 l polyamide na may takip Sa vinyl chloride plastic drums. Ang headspace volatiles mula sa bawat sample ng ihi ng baka ay nakolekta nang direkta (sariwa) o pagkatapos ng pagkahinog sa temperatura ng kuwarto para sa 24 h, 72 h at 168 h, ibig sabihin, ang bawat sample ng ihi ay kinatawan ng bawat pangkat ng edad.
Para sa pagkolekta ng headspace volatiles, ginamit ang closed-loop system upang magpalipat-lipat ng activated carbon-filtered gas stream (100 ml min-1) sa pamamagitan ng polyamide bag patungo sa adsorption column sa loob ng 2.5 h sa pamamagitan ng paggamit ng diaphragm vacuum pump (KNF Neuberger, Freiburg, DE) 3 mm id) na naglalaman ng 35 mg ng Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) sa pagitan ng glass wool plug. ng pentane.Ang mga koleksyon ng headspace ay pinagsama-sama at pagkatapos ay inimbak sa -20°C hanggang magamit para sa karagdagang pagsusuri.
Ang mga tugon sa pag-uugali ng paghahanap ng host at pagkain ng dugo na An.Headspace volatile extracts na nakolekta mula sa sariwa, 24-h, 72-h, at 168-h-aged na ihi ay sinuri para sa volatile extracts mula sa Arabidopsis mosquitoes gamit ang isang straight glass tube olfactometer [18]. Ang mga eksperimento ay isinagawa sa panahon ng ZT'9rabk-15. ang tube olfactometer (80 cm × 9.5 cm id) ay pinaliwanagan ng 3 ± 1 lx ng pulang ilaw mula sa itaas. Charcoal filtered at humidified air flow (25 ± 2 °C, 65 ± 2% relative humidity) nakapasa sa bioassay sa 30 cm s-1. Ang hangin ay lumilikha ng uling na na-filter at humidified na daloy ng hangin (25 ± 2 °C, 65 ± 2% relative humidity) na pumasa sa bioassay sa 30 cm s-1. Ang hangin ay lumilikha ng pantay-pantay na aspennar na screen, at hindi kinakalawang na asero na istraktura ng atamponnar ng daloy ng hangin. (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), na sinuspinde mula sa isang 5 cm na coil sa windward na dulo ng olfactometer, na may mga pagbabago sa stimulator tuwing 5 minuto. Para sa pagsusuri, 10 μl ng bawat headspace extract, diluted 1:10, ay ginamit bilang isang stimulus. Ang pantay na halaga ng pentane ay ginamit bilang isang control-seeking 2 na paglabas ng dugo. 3 oras bago magsimula ang eksperimento. Ang release cage ay inilagay sa downwind side ng olfactometer, at ang mga lamok ay pinahintulutang mag-aclimate sa loob ng 1 min, at pagkatapos ay ang butterfly valve ng cage ay binuksan upang palabasin. Ang pagkahumaling sa paggamot o kontrol ay sinuri bilang ang proporsyon ng mga lamok na napunta sa contact sa pinagmulan sa loob ng hindi bababa sa 5 minuto ng pag-release at ang ulo upang maiwasan ang paglabas sa loob ng 5 minuto ng pag-alis. ng alinman sa isang araw, ang parehong bilang ng mga paggamot at mga kontrol ay nasubok sa bawat araw na pang-eksperimento. Humingi ng mga tugon mula sa host at blood-fed Ans.Arabic versus headspace sets ay nasuri gamit ang nominal logistic regression na sinusundan ng pairwise na paghahambing para sa mga kakaibang ratios (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Ang pagtugon sa pangingitlog ni An. Ang mga extract ng headspace mula sa sariwa at may edad na ihi ng baka ay sinuri sa mga kulungan ng Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Ang mga plastik na tasa (30 mL; Nolato Hertila) na puno ng 20 mL ng distilled water na ibinigay ang pangingitlog na substrate at inilagay sa magkabilang sulok ng 20 cm at inilagay sa magkabilang sulok ng 20 cm. μl ng bawat headspace extract sa isang dilution na 1:10. Isang pantay na dami ng pentane ang ginamit upang ayusin ang control cup. Ang mga treatment at control cup ay ipinagpalit sa pagitan ng bawat eksperimento upang makontrol ang mga epekto sa posisyon. Sampung babaeng pinakain ng dugo ang pinakawalan sa mga experimental cage sa ZT 9-11 at ang mga itlog sa mga cup ay binibilang pagkalipas ng 24 na oras. Ang formula para sa spawning calculation ng mga itlog ay ang formula para sa spawningcalculate ng paggamot. inilatag sa control cup)/(ang kabuuang bilang ng mga itlog na inilatag).Ang bawat paggamot ay inulit ng 8 beses.
Ang pagsusuri ng gas chromatographic at electron antenna pattern detection (GC-EAD) ng babaeng An.arabiensis ay isinagawa tulad ng naunang inilarawan [20]. Sa madaling sabi, ang mga sariwang headspace volatile extract ay pinaghiwalay gamit ang isang Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) na nilagyan ng HP-5 column (30 m × 0.25 mm na kapal, Technologies, μm id).at pagtanda ng ihi.Ginamit ang hydrogen bilang mobile phase na may average na linear flow rate na 45 cm s-1. Ang bawat sample (2 μl) ay na-injected sa loob ng 30 segundo sa splitless mode na may inlet na temperatura na 225 °C. Ang temperatura ng GC oven ay na-program mula 35 °C (3 minutong paghawak) hanggang 300 °C na paghawak sa 100 °C sa 100 °C sa 100 °C na paghahati sa 100 °C. Ang 4 psi ng nitrogen ay idinagdag at hinati ang 1:1 sa isang Gerstel 3D/2 low dead volume cross (Gerstel, Mülheim, DE) sa pagitan ng flame ionization detector at ng EAD. Ang GC effluent capillary para sa EAD ay dumaan sa isang Gerstel ODP-2 transfer line, na sinusubaybayan ang GC oven temperature plus 5 °C, na may halo-halong carbonfil na tubo (1 mm), sa isang glass na temperatura ng oven plus 5 °C, na na-humidify sa isang glass na may 8 °C, na humid na air cm. 1.5 l min−1). Ang antenna ay inilagay 0.5 cm mula sa labasan ng tubo. Bawat indibidwal na lamok ay nagkakahalaga ng isang pagtitiklop, at para sa mga lamok na naghahanap ng host, hindi bababa sa tatlong pagkopya ang isinagawa sa mga sample ng ihi ng bawat edad.
Pagkilala sa mga bioactive compound sa mga koleksyon ng headspace ng sariwa at may edad na bovine urine gamit ang pinagsamang GC at mass spectrometer (GC-MS; 6890 GC at 5975 MS; Agilent Technologies) upang makakuha ng mga tugon ng antennal sa pagsusuri ng GC-EAD, na tumatakbo sa electron impact ionization mode sa 70 eV.The GC-GC5 ay nilagyan ng silica 6 na column na silica0MSUI. 0.25 mm inner diameter, 0.25 μm film thickness) gamit ang helium bilang mobile phase na may average na linear flow rate na 35 cm s-1. Ang 2 μl sample ay na-injected gamit ang parehong mga setting ng injector at temperatura ng oven gaya ng para sa GC-EAD analysis. Natukoy ang mga compound batay sa oras ng pagpapanatili ng mga ito (Kovát s-1 spectraified na library) at natukoy ang Kovát library index4 (pinasadyang index ng Kovát N. nakumpirma sa pamamagitan ng pag-iniksyon ng mga tunay na pamantayan (Karagdagang File 1: Talahanayan S2). Para sa dami, ang heptyl acetate (10 ng, 99.8% na kadalisayan ng kemikal, Aldrich) ay na-injected bilang isang panlabas na pamantayan.
Pagsusuri sa bisa ng isang sintetikong pinaghalong amoy na binubuo ng mga bioactive compound na natukoy sa sariwa at may edad na ihi upang maakit ang naghahanap ng host at sumisipsip ng dugo na Ans.arabiensis, gamit ang parehong olfactometer at protocol tulad ng nasa itaas. Ginaya ng mga sintetikong mixture ang komposisyon at mga proporsyon ng mga compound sa halo-halong headspace na volatile extract ng sariwa, 24-oras, 728-oras, at 728-oras na oras. 5D-G; Karagdagang File 1: Talahanayan S2). Para sa pagsusuri, gumamit ng 10 μl ng 1:100 dilution ng ganap na sintetikong timpla, na may kabuuang rate ng paglabas mula sa humigit-kumulang 140-2400 ng h-1, para sa pagtatasa ng pagiging kaakit-akit sa host at mga lamok na sumisipsip ng dugo. Pagkatapos, ang mga pagsubok ay isinasagawa sa mga kumpletong pinaghalong pinaghalong pinaghalong. Ang pinaghalong dugo na Ans.Arab vs synthetic at subtractive mixtures ay nasuri gamit ang nominal logistic regression na sinusundan ng pairwise na paghahambing para sa mga kakaibang ratios (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Upang masuri kung ang ihi ng baka ay maaaring magsilbi bilang isang host habitat cue para sa malaria na lamok, sariwa at may edad na ihi ng baka, na nakolekta tulad ng inilarawan sa itaas, at ang tubig ay inilagay sa meshed 3 l na timba (100 ml) at inilagay sa mga bitag ng host bait.(Bersyon ng BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Sampung bitag ang inilagay sa layong 50 m sa pastulan, 400 m mula sa komunidad ng nayon (Silay, Ethiopia, 5°53′24′′N, 37°29′24′′E) at walang baka, sa mga permanenteng lugar ng pag-aanak at mga nayon. Limang bitag ang pinainit para sa isang gabing pinag-iinitan, habang ang hindi ginagamot na lugar ay naiwan para gayahin ang presensya ng E. sa kabuuan ay limang gabi. Ang mga numero ng lamok na nakuha sa mga bitag na pinain ng ihi ng iba't ibang edad ay inihambing gamit ang logistic regression na may beta binomial distribution (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Sa isang malaria-endemic village malapit sa bayan ng Maki, Oromia region, Ethiopia (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Figure 6A). Ang pag-aaral ay isinagawa sa pagitan ng kalagitnaan ng Agosto at kalagitnaan ng Setyembre bago ang taunang panloob na natitirang pag-spray, kasama ang isang mahabang panahon ng tag-ulan. ang pag-aaral (Larawan 6A). Ang mga pamantayang ginamit sa pagpili ng mga bahay ay: walang hayop na pinapayagan sa bahay, walang panloob na pagluluto (pagguhit ng kahoy na panggatong o uling) ay pinapayagan (hindi bababa sa panahon ng pagsubok), at mga bahay na may maximum na dalawang naninirahan, na natutulog sa unsecticides.sa ilalim ng ginagamot na kulambo.Ang etikal na pag-apruba ay ipinagkaloob ng Institutional Research Ethics Review Board (IRB/022/2016) ng Faculty of Natural Sciences (CNS-IRB), Addis Ababa University, alinsunod sa mga patnubay na itinatag ng World Medical Association Declaration of Helsinki. Ang pahintulot mula sa bawat pinuno ng sambahayan ay nakuha ang tulong ng mga lokal na pinuno ng sambahayan. ('kebele') level. Ang eksperimental na disenyo ay sumunod sa isang 2 × 2 Latin square na disenyo, kung saan ang mga sintetikong timpla at mga kontrol ay itinalaga sa mga ipinares na bahay sa unang gabi at nagpapalitan sa pagitan ng mga bahay sa susunod na pang-eksperimentong gabi. Ang prosesong ito ay inulit ng sampung beses. Bukod pa rito, upang matantya ang aktibidad ng lamok sa mga piling bahay, ang mga bitag ng CDC ay nakatakdang tumakbo sa simula ng gabi sa parehong oras ng pagsubok.
Ang isang sintetikong timpla na naglalaman ng anim na bioactive compound ay natunaw sa heptane (97.0% solvent GC grade, Sigma Aldrich) at inilabas sa 140 ng h-1 gamit ang cotton wick dispenser [20]. Pinahintulutan ng wick dispenser na mailabas ang lahat ng compound sa pare-pareho ang proporsyon sa buong 12 oras na eksperimento. Ang Heptane ay ginamit bilang isang control point ng Control CDC. light trap (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Figure 6A). Ang mga bitag ay isinabit nang 0.8 – 1 m sa itaas ng lupa, malapit sa paanan ng kama, at ang isang boluntaryo ay natulog sa ilalim ng hindi ginagamot na kulambo at pinaandar sa pagitan ng 18:00 at 06:30. Ang lamok ay nahuli, nahuli, at semi-pisyolohikal na katayuan sa pamamagitan ng pakikipagtalik, at semi-pregnant1 (hindi pa nababatid, at semi-physiological) kasunod na na-screen gamit ang pagsusuri ng polymerase chain reaction (PCR) upang matukoy ang mga species na morphologically na kinilala bilang A. gambiae sl. Mga miyembro ng complex [23]. Sa field study, sinuri ang trap trapping ng mga ipinares na bahay gamit ang nominal logistic fit model, kung saan ang pagkahumaling ay ang dependent variable at ang paggamot (synthetic mixture vs control) ay ang fixed effect (JMP.0® 14.0.0. SAS Institute Inc.).Dito, iniuulat namin ang χ2 at p-values ​​​​mula sa probabilidad na pagsubok sa ratio.
Suriin kung ito ay ligtas. Nakuha ng arabiensis ang ihi, ang pangunahing pinagmumulan ng nitrogen nito, ang urea, sa pamamagitan ng direktang pagpapakain, sa loob ng 48 h pagkatapos ng pangangasiwa sa loob ng 4 na araw pagkatapos (dpe) mga pagsubok sa pagpapakain ng host-seeking at pagpapakain ng dugo sa babaeng pagpapakain (Fig. 1A). 1 at F(5,299) = 56.00, p <0.0001, ayon sa pagkakabanggit; Fig. 1B, C). Higit pa rito, ang mga babaeng naghahanap ng host ay kumakain ng mas kaunti sa ihi sa 72 oras kumpara sa ihi sa 168 na oras (Fig. 1B). hindi matukoy ang pagkakaiba sa 10% sucrose (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; Figure 1D). Kabaligtaran ito sa tugon ng mga babaeng pinapakain ng dugo, na kadalasang sumisipsip ng mas maraming urea-containing diets kaysa sa tubig, kahit na mas mababa sa 10% sucrose (F7% 0.8, <5.0.0.8 = 5.5%, p. .Fig. 1F, G). Habang ang paggamit mula sa isang urea-containing diet ay lumilitaw na may pinakamainam na halaga (Fig. 1D, E), ang mga babae sa parehong physiological states ay nagawang baguhin ang dami ng urea na nasisipsip sa buong hanay ng mga konsentrasyon ng urea sa isang log-linear na paraan (Fig. 1F, G).).Katulad nito, ang mga lamok ay lumilitaw na kontrolin ang kanilang nitrogen uptake sa pamamagitan ng pag-regulate sa dami ng ihi na na-absorb, dahil ang dami ng nitrogen sa ihi ay makikita sa dami ng na-absorb (Figure 1B, C at B insets).
Upang masuri ang mga epekto ng ihi at urea sa kaligtasan ng lamok na naghahanap ng host at sumisipsip ng dugo, ang mga babae ay pinakain ng ihi sa lahat ng apat na edad (sariwa, 24 h, 72 h, at 168 h post-deposition) at isang hanay ng mga konsentrasyon ng urea, pati na rin ang distilled water at 10 % sucrose ang nagsilbing kontrol (Ang figure 2 na ito ay nagpakita ng isang makabuluhang pag-aaral sa kaligtasan ng buhay sa babae). : χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Fig. 2B, C) at mga babaeng pinapakain ng dugo (ihi: χ2 = 93.0, χ2 = 93.0, χ2 = 0.0.0, df = 0.0. , df = 5, p <0.0001; Figure 2D, E). Sa lahat ng mga eksperimento, ang mga babaeng pinapakain ng ihi, urea, at tubig ay may makabuluhang mas mababang mga rate ng kaligtasan ng buhay kumpara sa mga babaeng pinapakain ng sucrose diet (Larawan 2B-E). (Larawan 2B). Higit pa rito, ang mga babaeng naghahanap ng host na pinapakain ng 135 mM urea ay nakaligtas nang mas mahaba kaysa sa mga kontrol ng tubig (p <0.04) (Fig.2C). Kung ikukumpara sa tubig, ang mga babaeng pinapakain ng sariwang ihi at 24 na oras na ihi ay nakaligtas ng mas matagal (p = 0.001 at p = 0.012, ayon sa pagkakabanggit; Figure 2D), habang ang mga babaeng pinapakain ng 72-oras na ihi ay nakaligtas nang mas mahaba kaysa sa mga pinapakain sa Babae na maiksing sariwang ihi at 24 na oras na may edad na ihi (p <0.000. 135 mM urea, ang mga babaeng pinapakain ng dugo ay nakaligtas nang mas mahaba kaysa sa lahat ng iba pang mga konsentrasyon ng urea at tubig (p <0.013; Larawan 2E).
Survival ng host at blood-sucking female Anopheles arabinis na nagpapakain ng ihi at urea ng baka. Sa bioassay (A), ang mga babaeng lamok ay binigyan ng diyeta na binubuo ng sariwa at matandang ihi ng baka, iba't ibang konsentrasyon ng urea, sucrose (10%) at distilled water (H2O). d sa ihi (B, D) at urea (C, E), at mga kontrol, Sucrose at tubig, ay patay na
Ang kabuuang distansya at bilang ng mga round na tinutukoy sa pagsubok sa flight mill sa loob ng 24 na oras ay naiiba sa pagitan ng naghahanap ng host at ng mga lamok na sumisipsip ng dugo, na nagpakita ng mas kaunting aktibidad sa paglipad sa pangkalahatan (Larawan 3). Ang mga lamok na naghahanap ng host na nagbibigay ng sariwa at may edad na ihi o sucrose at tubig ay nagpakita ng mga natatanging pattern ng paglipad (Larawan 3), na ang mga babae ay mas aktibo at pinapakain sa bagong 6 na oras ng 6 na oras. Ang mga lamok na nagpapakain ng ihi ay nagpakita ng iba't ibang pattern ng paglipad at pangunahing araw-araw. Ang mga babaeng lamok na nagbigay ng sucrose o 72-oras na ihi ay nagpakita ng aktibidad sa buong 24 na oras, habang ang mga babae na nagbibigay ng tubig ay mas aktibo sa kalagitnaan ng panahon. Ang mga lamok na pinapakain ng sucrose ay nagpakita ng pinakamataas na antas ng aktibidad sa gabi, habang ang mga lamok na natutunaw sa umaga ay mas aktibo sa gabi, habang ang mga lamok na nagpapakain ng sucrose ay nakaranas ng pinakamataas na aktibidad sa gabi, habang ang mga lamok sa umaga ay bumababa sa umaga, habang ang mga lamok na nagpapakain ng sucrose ay nakaranas ng pinakamataas na antas ng aktibidad sa gabi, habang ang mga lamok na humina sa isang oras ng umaga ay humina sa gabi. 24 na oras (Larawan 3).
Pagganap ng paglipad ng naghahanap ng dugong sumisipsip ng babaeng Anopheles arabinis na nagpapakain ng ihi at urea ng baka. Sa flight mill test, ang mga babaeng lamok na pinakain ng sariwa at may edad na ihi ng baka, iba't ibang konsentrasyon ng urea, sucrose (10%), at distilled water (H2O) ay itinali sa pahalang, malayang umiikot na mga braso (sa itaas ng kamay at babae) (nakatingin sa mga braso at babae sa itaas). bilang ng mga flight bawat oras para sa bawat diyeta sa loob ng 24 na oras na panahon ay naitala (madilim: kulay abo; maliwanag: puti). Ang average na distansya at average na bilang ng mga laban ay ipinapakita sa kanan ng circadian activity graph. Ang mga error bar ay kumakatawan sa karaniwang error ng mean. Statistical analysis tingnan ang text
Sa pangkalahatan, ang pangkalahatang aktibidad ng paglipad ng mga babaeng naghahanap ng host ay sumunod sa isang pattern na katulad ng distansya ng flight sa loob ng 24 na oras. Ang ibig sabihin ng distansya ng flight ay makabuluhang naapektuhan ng pagkain na natutunaw (F(5, 138) = 28.27, p <0.0001), at ang mga babaeng naghahanap ng host ay nakain ng 72 oras ng paglipad ng 72 oras ng ihi kumpara sa lahat ng iba pang mas mahahabang distansiya ng sucro. Ang mga quitoes ay lumipad nang mas mahaba kaysa sariwa (p = 0.022) at 24-h-aged na ihi (p = 0.022) na pinapakain sa mga lamok. Sa kaibahan sa pattern ng aktibidad sa paglipad na inilarawan ng diyeta sa ihi, ang mga babaeng pinapakain ng host-seeking ng urea ay nagpakita ng patuloy na aktibidad sa paglipad sa loob ng 24-h na panahon, ang peaking sa panahon ng ikalawang kalahati ng yugto ng pag-host3 ay may katulad na bahagi ng aktibidad ng babae. Ang urea ay makabuluhang tumaas ang ibig sabihin ng distansya ng paglipad depende sa nasipsip na konsentrasyon (F(5, 138) = 1310.91, p <0.0001). Ang mga babaeng naghahanap ng host na pinapakain ng anumang konsentrasyon ng urea ay lumipad nang mas mahaba kaysa sa mga babaeng pinapakain ng tubig o sucrose (p <0.03).
Ang pangkalahatang aktibidad ng paglipad ng mga lamok na sumisipsip ng dugo ay matatag at napanatili sa loob ng 24 na oras sa lahat ng mga diyeta, na may pagtaas ng aktibidad ng ihi sa ikalawang kalahati ng madilim na panahon para sa mga babaeng pinapakain ng tubig pati na rin sa mga babaeng pinapakain ng sariwa at 24 na oras na gulang (larawan 3). Bagama't ang diyeta sa ihi ay makabuluhang naapektuhan ang average na distansya ng paglipad sa mga babaeng pinapakain ng dugo (F(5, 4.0) = 138, p. hindi (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) .na may iba pang ihi at control diet (sariwa, p = 0.0091; 72 oras, p = 0.0022; 168 oras, p = 0.001; sucrose, p = 0.0017; dH2O, 36).
Ang mga epekto ng pagpapakain ng ihi at urea sa mga parameter ng reproductive ay tinasa sa mga egg-laying bioassays (Figure 4A) at inimbestigahan ayon sa bilang ng mga itlog na inilatag ng bawat babae, laki ng itlog, at bagong hatched na unang instar larvae. Ang bilang ng mga itlog na inilatag.Urine-fed Arab females) iba-iba ayon sa diyeta (F = 40.82, F = 4.0.82). B). Ang mga babae ay nagpakain ng 24 na oras na ihi, ang pagkain ng dugo ay naglagay ng mas maraming itlog kaysa sa mga babae na pinapakain ng iba pang mga diyeta sa ihi at katulad ng mga pinapakain ng sucrose (Larawan 4B). Gayundin, ang laki ng mga itlog na inilatag ng mga babaeng pinapakain ng ihi ay nag-iiba ayon sa diyeta (F(5, 209) = 12.85, p <0.004 na may mas malaking ihi ng babae at sucrosef na may mas malaking ihi kaysa sa 0.004 na babae. mga babaeng pinapakain ng tubig , habang ang mga itlog ng mga babae na pinapakain ng 168 h ng ihi ay makabuluhang mas maliit (Fig. 4C). Bilang karagdagan, ang diyeta sa ihi ay makabuluhang nakaapekto sa laki ng larval (F(5, 187) = 7.86, p <0.0001), na may makabuluhang mas malaking larvae na umuusbong mula sa mga itlog na inilatag ng 24-oras na babae-at 7 na mga itlog na inilatag ng 24-oras na mga itlog. pinakain at 168-h na babaeng pinapakain sa ihi (Larawan 4D).
Reproductive performance ng babaeng Anopheles arabinis na nagpapakain ng ihi ng baka at urea. Ang mga babaeng lamok na pinapakain ng dugo ay pinapakain ng mga diyeta na binubuo ng sariwa at may edad na ihi ng baka, iba't ibang konsentrasyon ng urea, sucrose (10%), at distilled water (H2O) sa loob ng 48 oras bago ilagay sa bioassays at pagkuha ng Egg-layer (B) na dami ng substrate (B, B) na substrate. at laki ng larvae (D, G) ay makabuluhang naapektuhan ng ibinigay na diyeta (ihi ng baka: BD; urea: EG). Ang ibig sabihin para sa bawat parameter na sinusukat gamit ang iba't ibang mga pangalan ng titik ay makabuluhang naiiba sa bawat isa (one-way ANOVA gamit ang post hoc analysis ni Tukey; p <0.05). Ang mga error bar ay kumakatawan sa karaniwang error ng mean
Bilang pangunahing nitrogenous na bahagi ng ihi, ang urea, kapag ibinigay bilang diyeta sa mga babaeng pinapakain ng dugo, ay makabuluhang nakaapekto sa mga parameter ng reproduktibo sa lahat ng pag-aaral. Ang bilang ng mga itlog na inilatag ng mga babaeng pinapakain ng urea, pagkatapos ng pagkain sa dugo, depende sa konsentrasyon ng urea (F(11, 360) = 4.69; p <0.0001, ang mga babae na pinakain sa pagitan ng 1.0001 at 4M na konsentrasyon ay higit pa sa 3 mµM na babae. mga itlog (Larawan 4E). Ang mga babaeng pinapakain sa mga konsentrasyon ng urea na 134 µM o higit pa ay nangingitlog ng mas malaking itlog kaysa sa mga babaeng pinapakain sa tubig (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Figure 4F), at laki ng larva, bagama't apektado ng mga katulad na konsentrasyon ng urea sa mga ina, = 0.3 (10.9; 1) ay mas variable (Fig. 4G).
Pangkalahatang atraksyon sa naghahanap ng bovine urine headspace volatile extract. 0.0060, 168 oras: p = 0.012, pentane: p = 0.00070), Maliban sa amoy ng sariwang ihi (p = 0.13; Larawan 5B). ay natagpuang mas kaakit-akit sa mga pabagu-bagong extract ng headspace kumpara sa 72-oras na may edad na ihi kumpara sa mga kontrol (p = 0.0066; Figure 5C).
Mga tugon sa pag-uugali sa natural at sintetikong amoy ng ihi ng baka sa paghahanap ng host at pinapakain ng dugo na Anopheles arabianus.Schematic of the glass tube olfactometer (A).Attraction of headspace volatile extracts from fresh and old cow urine to host (B) at blood-hits (C) mosquitoes.Find the tentacleHeadated reaction of the Lord An.Dhours, (Hanapin ang tentacleHeadspace extracts na An.2hours), (Hanapin ang tentacleated na reaksyon ng Panginoong An.Dhours) Ipinapakita ang -hour (F), at 168-hour (G) na may edad na ihi ng baka. Ang mga bakas ng electron antenna detection (EAD) ay nagpapakita ng mga pagbabago sa boltahe bilang tugon sa mga bioactive compound sa headspace na na-eluted mula sa gas chromatograph at na-detect ng isang flame ionization detector (FID). Ang scale bar ay kumakatawan sa response amplitude (mV) kumpara sa mga aktibong compound na oras (h) na ipinapakita kumpara sa µlogical na oras ng paglabas ng mga compound (h). .Ang isang solong asterisk (*) ay nagpapahiwatig ng pare-parehong mababang amplitude na tugon. Ang mga dobleng asterisk (**) ay nagpapahiwatig ng mga hindi maaaring kopyahin na mga tugon.Hanapin ang host (H) at ang sumisipsip ng dugo (I) An.arabiensis ay may iba't ibang mga apela sa mga sintetikong pinaghalong sariwang at may edad na mga amoy ng ihi ng baka. Ang ibig sabihin ng mga proporsyon ng mga lamok na may magkaibang mga pangalan ay naakit sa AN. pagsusuri;p < 0.05). Ang mga error bar ay kumakatawan sa karaniwang error ng sukat
Babaeng Ann.arabiensis, 72 h at 120 h pagkatapos ng pagkain ng dugo, sa panahon ng pangingitlog, walang kagustuhan na ipinakita para sa headspace volatile extracts mula sa sariwa at may edad na ihi ng baka kumpara sa mga kontrol ng pentane (χ2 = 3.07, p > 0.05; Karagdagang file 1: Fig. S1).
Para sa babaeng Ann.arabiensis, GC-EAD at GC-MS na pag-aaral ay natukoy ang walo, anim, tatlo at tatlong bioactive compound (Figure 5D-G). ay kasama sa mga karagdagang pagsusuri.
Ang kabuuang pabagu-bagong rate ng paglabas ng mga bioactive compound sa koleksyon ng headspace ay tumaas mula 29 µg h-1 sa sariwang ihi hanggang 242 µg h-1 sa 168-oras na ihi na may edad na, pangunahin dahil sa p-cresol at m-formaldehyde Phenol ay tumataas pati na rin sa phenol. Sa kaibahan, ang mga rate ng paglabas ng iba pang mga uri ng ihi-cyclone, at de-koryenteng corgen ay bumababa, tulad ng pagtaas ng 2 uri-cyclone, at de-koryenteng corgen. nauugnay sa naobserbahang pagbaba sa intensity ng signal (kasaganaan) sa chromatogram (Larawan 5D)-G kaliwang panel) at mga tugon sa pisyolohikal sa mga compound na ito (Larawan 5D-G kanang panel).
Sa pangkalahatan, ang synthetic mixture ay may katulad na natural na ratio ng bioactive compounds na kinilala sa volatile extracts ng fresh and old urine headspaces (Fig. 5D–G) at hindi lumilitaw na nakakakuha ng makabuluhang apela sa paghahanap ng host (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Fig. 5H) o quit-sucking = χ2 = 9. 0.30; Fig. 5I). Gayunpaman, ang post hoc pairwise na paghahambing sa pagitan ng mga paggamot ay nagpakita na ang mga lamok na naghahanap ng host ay makabuluhang kaakit-akit sa sintetikong pinaghalong 24-h na may edad na ihi kumpara sa mga kontrol ng pentane (p = 0.0086; Figure 5H).
Upang masuri ang papel ng mga indibidwal na sangkap sa synthetic mixtures ng 24-h-edad na ihi, anim na subtractive mixtures ang nasuri laban sa kumpletong mga mixtures sa Y-tube assay, kung saan ang mga indibidwal na compound ay tinanggal.Para sa host-s-s-squitoes, ang pagbabawas ng mga indibidwal na mga compound mula sa kumpletong pinaghalong ay may isang makabuluhang epekto sa mga responsibilidad sa pag-uugali (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Ang mga traktibo na mixtures ay mas kaakit-akit kaysa sa mas maliit kaysa sa ganap na halo-halong.in kaibahan, ang pag-alis ng mga indibidwal na compound mula sa ganap na sintetikong halo ay hindi nakakaapekto sa mga tugon ng pag-uugali ng mga lamok ng dugo (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), na may pagbubukod sa decanal, na nagreresulta sa mas mababang antas kumpara sa kumpletong atraksyon ng pinaghalong (p = 0.022;
Sa isang malaria-endemic village sa Ethiopia, ang bisa ng isang sintetikong pinaghalong 24-oras na ihi ng baka sa pag-akit ng mga lamok sa ilalim ng mga kondisyon sa bukid ay nasuri sa loob ng sampung gabi (Fig. 6A). May kabuuang 4,861 na lamok ang nahuli at natukoy, kung saan 45.7% ay Anthropus.gambiae% . lex spp.(Karagdagang file 1: Talahanayan S1).Ang Anopheles arabinis ay ang tanging miyembro ng An.Gambian species complex na natukoy sa pamamagitan ng PCR analysis.Sa karaniwan, 320 lamok ang nahuhuli kada gabi, kung saan ang mga bitag na may synthetic mixture na pain ay nakahuli ng mas maraming lamok kaysa ipinares na mga bitag na walang pinaghalong (χ2(0, .N-1.0). ang mga bitag ay itinakda sa bawat isa sa limang gabi ng kontrol sa simula, gitna, at pagtatapos ng pagsubok. Ang mga katulad na bilang ng mga lamok ay nakuha sa bawat pares ng mga bitag, na nagpapahiwatig ng walang pagkiling sa pagitan ng mga bahay (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) at walang pagbaba ng populasyon sa bilang ng mga nahuli sa panahon ng pag-aaral. makabuluhang nadagdagan: naghahanap ng host (χ2(0, 2107) = 138.7, p <0.0001), kamakailang pagpapakain ng dugo (χ2(0, 650) = 32.2, p <0.0001) at pagbubuntis (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.Karagdagang file 1: Talahanayan S1).Nakikita rin ito sa kabuuang bilang ng mga nahuli: host na naghahanap > sumisipsip ng dugo > buntis > semi-buntis > lalaki.
Field evaluation ng efficacy ng 24-hour synthetic cow urine odor mixture. Ang mga field trial ay isinagawa sa south-central Ethiopia (mapa), malapit sa bayan ng Maki (insert), gamit ang Centers for Disease Control (CDC) light trap (kanan) sa magkapares na mga bahay, na may disenyong parisukat sa Latin (aerial image) (A). Synthetic odorspheles Bbaites na nakakaakit ng mga babaeng Anotrappheles at arabe na nakakakuha ng CDC na malayong Anotraples (A). (C), sa ibang paraan, isang physiological state-dependent effect. Bilang karagdagan, ang mga traps na ito ay nakakuha ng makabuluhang pagtaas ng bilang ng host Culex mosquitoes.(D) Kung ikukumpara sa control.Ang mga bar sa kaliwa ay kumakatawan sa average na index ng pagpili ng mga lamok na nahuli sa mga pares ng amoy na pain (berde) at control (bukas) na mga bitag (N = 10) sa kanan; 5).).Ang mga asterisk ay nagpapahiwatig ng mga antas ng istatistikal na kahalagahan (*p = 0.01 at ***p < 0.0001)
Ang tatlong species ay nakuha nang magkaiba sa mga bitag na naglalaman ng mga sintetikong mixture. Naghahanap ng host (χ2(1, 1345) = 71.7, p <0.0001), pagpapakain ng dugo (χ2(1, 517) = 16.7, p <0.0001) at pagbubuntis (χ2(1, = 6.10). s ay nakulong sa bitag na naglalabas ng sintetikong pinaghalong (Larawan 6B), habang ang halaga ng An ay hindi nag-iiba. Ang Pharoensis sa iba't ibang pisyolohikal na estado ay natagpuan (Larawan 6C). Para sa Culex, isang makabuluhang pagtaas lamang sa bilang ng mga lamok na naghahanap ng host ang natagpuan sa mga bitag na binansagan ng sintetikong timpla (χ2(1,60). ), kumpara sa mga control traps.
Ang mga Host bait traps na matatagpuan sa labas ng mga potensyal na host sa pagitan ng mga breeding site at rural na komunidad sa Ethiopia ay ginamit upang masuri kung ang malaria na lamok ay gumagamit ng amoy ng ihi ng baka bilang isang host habitat cue. Kung wala ang host cues, init, at mayroon man o wala ang presensya ng amoy ng ihi ng baka, walang mga lamok ang nakuha (Karagdagang file 1: Figure S3 ang presensya ng malaria, mataas na temperatura ng ihi, at ang ihi ng babae). at nakunan, kahit na sa maliit na bilang, independiyente sa edad ng ihi (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Karagdagang file 1: Figure S3 ).Sa kabaligtaran, ang mga kontrol ng tubig ay hindi nakakuha ng malaria na lamok sa mataas na temperatura (Karagdagang File 1: Larawan S3).
Ang mga lamok ng malaria ay nakakakuha at namamahagi ng mga compound na naglalaman ng nitrogen sa pamamagitan ng compensatory feeding sa ihi ng baka (ibig sabihin, mga puddles) upang pahusayin ang mga katangian ng kasaysayan ng buhay, katulad ng iba pang mga insekto [2, 4, 24, 25, 26]. .Nahanap ng mga babaeng lamok ang mapagkukunang ito sa pamamagitan ng amoy at nagagawang i-regulate ang uptake ng mga nitrogenous compound sa ihi, kabilang ang urea, ang pangunahing nitrogenous component sa ihi [15, 16]. Depende sa physiological state ng babaeng lamok, ang mga nutrients sa ihi ay inilalaan upang mapahusay ang aktibidad ng paglipad at kaligtasan ng buhay ng mga babaeng naghahanap ng host pati na rin ang mga babaeng lamok na naghahanap ng buhay. Samakatuwid, ang paghahalo ng ihi ay gumaganap ng isang mahalagang papel sa nutrisyon para sa mga malaria vectors na sarado tulad ng mga malnourished adult [8], dahil nagbibigay ito sa mga babaeng lamok ng kakayahang makakuha ng mahahalagang nitrogenous compound sa pamamagitan ng paggamit sa mababang-panganib na pagpapakain. Ang paghahanap na ito ay may makabuluhang epidemiological na kahihinatnan, habang ang mga babae ay tumataas ang kanilang pag-asa sa buhay, aktibidad at reproductive output, na lahat ay maaaring makaapekto sa target ng vector sa hinaharap na pag-uugali.