Придобиването и разпределението на хранителни вещества интегрира характеристиките на търсенето на храна и историята на живота на насекомите. За да компенсират дефицитите на специфични хранителни вещества на различни етапи от живота, насекомите могат да получат тези хранителни вещества чрез допълнително хранене, например чрез хранене със секрети на гръбначни животни в процес, известен като локви. Комарът Anopheles arabiani изглежда недохранен и следователно се нуждае от хранителни вещества както за метаболизма, така и за размножаването ion. Целта на това проучване беше да се оцени дали An.arabiensis разбъркването върху кравешка урина за набавяне на хранителни вещества подобрява характеристиките на историята на живота.
Уверете се, че е безопасно.arabiensis беше привлечен от миризмата на прясна, 24-часова, 72-часова и 168-часова кравешка урина и търсещи гостоприемник и хранени с кръв (48 часа след кръвно хранене) женски бяха измерени в олфактометър с Y-тръба, а бременните женски бяха оценени за тест за хвърляне на хайвера. След това беше използван комбиниран химичен и електрофизиологичен анализ за идентифициране на био активни съединения в урината на крава във всичките четири възрастови класа. Синтетичните смеси от биоактивни съединения бяха оценени в Y-тръба и полеви опити. За изследване на урината на крава и нейното основно азотсъдържащо съединение урея като потенциални допълнителни диети за вектори на малария, параметрите на хранене и характеристиките на историята на живота бяха измерени. Делът на женските комари и количеството абсорбирана урина и урея на крава бяха оценени. След хранене женските бяха оценени за оцеляване, вързан полет и възпроизводство.
Търсете кръвта и храната на гостоприемника. В лабораторни и теренни проучвания арабите бяха привлечени от естествения и синтетичен аромат на прясна и отлежала кравешка урина. Бременните женски бяха безразлични към реакцията на кравешката урина на местата за хвърляне на хайвера си. Търсещите гостоприемник и кръвосмучещите женски активно абсорбират кравешка урина и урея и разпределят тези ресурси според компромисите в жизнената история като функция на физиологичното състояние за полет, оцеляване val, или възпроизвеждане.
Anopheles arabinis Придобиване и разпределение на кравешка урина за подобрени характеристики на историята на живота. Допълнителното хранене с кравешка урина засяга директно капацитета на вектора чрез увеличаване на дневната преживяемост и плътността на вектора и косвено чрез промяна на летателната активност и следователно трябва да се има предвид в бъдещи модели.
Придобиването и разпределението на хранителни вещества интегрира характеристиките на храненето на насекомите и историята на живота [1,2,3]. Насекомите са в състояние да избират и придобиват храна и да извършват компенсаторно хранене въз основа на наличността на храна и нуждите от хранителни вещества [1, 3]. Разпределението на хранителните вещества зависи от жизнения процес и може да доведе до различни изисквания за качество и количество на диетата в различните етапи от живота на насекомите [1, 2]. За компенсиране на дефицитите в определени хранителни вещества ентите, насекомите могат да получат тези хранителни вещества чрез допълнително хранене, като кал, различни екскременти и секрети на гръбначни животни и мърша, процес, известен като локви [2]. Въпреки че са описани предимно различни видове пеперуди и молци, водоеми се срещат и в други групи насекоми, а привличането и храненето с тези видове ресурси може да има значителни ефекти върху здравето и други черти в историята на живота [2, 4, 5, 6 ] ,7]. Маларийният комар Anopheles gambiae sensu lato (sl) се появява като „недохранен“ възрастен [8], така че поливането може да играе важна роля в характеристиките на неговата жизнена история, но това поведение досега е било пренебрегвано. Използването на възбуда като средство за увеличаване на приема на хранителни вещества в този важен носител изисква внимание, тъй като може да има важни епидемиологични последици.
Приемът на азот при възрастни женски комари Anopheles е ограничен поради ниските калорични резерви, пренасяни от стадия на ларвите и неефективното използване на кръвното брашно [9]. Женските Ann.gambiae sl обикновено компенсират това чрез допълване с допълнителни кръвни хранения [10, 11], като по този начин излагат повече хора на риск от заразяване с болестта и излагат комарите на по-голям риск от хищничество. Като алтернатива, mos quitoes могат да използват допълнително хранене с екскременти на гръбначни животни, за да придобият азотни съединения, които подобряват адаптацията и маневреността на полета, както се демонстрира от други насекоми [2]. В това отношение, силното и отчетливо привличане на един от видовете братя и сестри в рамките на An. Gambian sl видове комплекс, Anopheles arabinis, прясна и отлежала кравешка урина [12,13,14], е интересно. Anopheles arabinis е опортюнистичен в предпочитанията на гостоприемника и е известно, че се свързва с и се храни с говеда. Урината на кравата е ресурс, богат на азотни съединения, като уреята представлява 50-95% от общия азот в прясната урина [15, 16]. С напредването на възрастта на урината на кравата микроорганизмите използват тези ресурси, за да намалят сложността на азотните съединения в рамките на 24 часа [15]. С бързото нарастване на амоняка, свързано с спад в органичния азот, алкалофилни микроорганизми (много от които произвеждат съединения, токсични за комарите) процъфтяват [15], което може да бъде женският Ann.arabiensis се привлича предимно от урина на възраст 24 часа или по-малко [13, 14].
В това проучване бяха търсени гостоприемници и хранени с кръв Ans. По време на първия си гонадотропинов цикъл, arabiensis беше оценен за придобиване на азотни съединения, включително урея, чрез смесване на урина. След това бяха проведени поредица от експерименти, за да се оцени как женските комари разпределят този потенциален хранителен ресурс за подобрено оцеляване, размножаване и по-нататъшно търсене на храна. И накрая, миризмата на прясно и ged кравешка урина беше оценена, за да се определи дали те предоставят надеждни улики за гостоприемник и хранени с кръв An. В търсенето си на този потенциален хранителен ресурс, arabiensis откри химически корелации зад наблюдаваната диференциална привлекателност. Синтетичните миризливи смеси от летливи органични съединения (ЛОС), идентифицирани в 24-часова отлежала урина, бяха допълнително оценени при полеви условия, разширявайки резултатите, получени при лабораторни условия и демонстрирайки ефекта на говежда урина от или върху различни физиологични състояния.Привличане на комари. Получените резултати потвърждават, че An.arabiensis придобива и разпространява азотни съединения, открити в урината на гръбначни, за да повлияе на характеристиките на историята на живота. Тези резултати се обсъждат в контекста на потенциалните епидемиологични последствия и как могат да се използват за наблюдение и контрол на векторите.
Anopheles arabicans (щам Dongola) се поддържат при 25 ± 2 °C, 65 ± 5% относителна влажност и 12:12 h цикъл светлина:тъмнина. Ларвите се отглеждат в пластмасови тави (20 cm × 18 cm × 7 cm), пълни с дестилирана вода и хранени с храна за риби Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE). Какавидите се събират в чаша от 30 ml s (Nolato Hertila, Åstorp, SE) и след това прехвърлени в клетки на Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Тайван), за да се даде възможност за поява на възрастни. Възрастните бяха снабдени с 10% разтвор на захароза ad libitum до 4 дни след поникването (dpe), в който момент на търсещите гостоприемници женски беше предложена диета непосредствено преди експеримента или бяха гладувани цяла нощ с дестилирана вода преди експеримента, както е описано по-долу. Женските, използвани за експерименти с полетна тръба, бяха гладувани само за 4-6 часа с вода ad libitum. За да се подготвят кръвосмучещи комари за последващи биотестове, 4 dpe женски бяха снабдени с дефибротична овча кръв (Håtunalab, Bro, SE) с помощта на мембранна система за хранене (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK). Напълно задръстените женски след това бяха прехвърлени на отделни клетки и осигурена диета директно, както е описано по-долу, или 10% захароза ad libitum за 3 дни преди описаните по-долу експерименти. Последните женски бяха използвани за биотестове в полетна тръба и прехвърлени в лабораторията, след което бяха подложени на дестилирана вода ad libitum за 4-6 часа преди експеримента.
Използвани са тестове за хранене за количествено определяне на потреблението на урина и урея при възрастни женски от An.Arab. Търсещите гостоприемници и хранените с кръв женски получиха диета, съдържаща 1% разредена прясна и отлежала кравешка урина, различни концентрации на урея и две контроли (10% захароза и вода) за 48 часа. В допълнение, хранителни оцветители (1 mg ml-1 ксилен цианид FF; CAS 2650-17- 1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) беше добавен към диетата и доставен в матрица 4 × 4 в 250 µl микроцентрофужни епруветки (Axygen Scientific, Юниън Сити, Калифорния, САЩ; Фигура 1A) Напълнете до ръба (~300 µl). За да избегнете конкуренцията между комарите и потенциалните ефекти от цвета на багрилото, поставете 10 комара в голямо петриево блюдо (12 cm в диаметър и 6 cm височина; Semadeni, Ostermundigen, CH; Фигура 1A) в пълна тъмнина при 25 ± 2 cm °C и 65 ± 5% относителна влажност. Тези експерименти се повтарят 5 до 10 пъти. След излагане на диета, комарите се поставят при -20 °C до по-нататъшен анализ.
Потърсете говеда урина и урея, абсорбирани от гостоприемника и кръвосмучещата женска Anopheles arabianus. При опит за хранене (A), на женските комари беше осигурена диета, състояща се от прясна и отлежала кравешка урина, различни концентрации на урея, захароза (10%) и дестилирана вода (H2O). Търсещи гостоприемник (B) и хранени с кръв (C) женски поеха повече захароза от всяка друга тествана диета. Обърнете внимание, че гостоприемникът- търсещите женски абсорбират 72-часова кравешка урина по-малко от 168-часовата кравешка урина (B). Средното общо съдържание на азот (± стандартно отклонение) на урината е представено във вмъкването. Търсещите гостоприемник (D, F) и кръвосмучещите (E, G) женски поемат урея по дозозависим начин. Средните инхалирани обеми (D, E) с различни имена на букви се различават значително един от друг (еднопосочна ANOVA, използваща Post hoc анализ на Tukey; p <0,05). Лентите за грешки представляват стандартна грешка на средната стойност (BE). Правата пунктирана линия представлява линията на логаритмична линейна регресия (F, G)
За освобождаване на абсорбираната храна, комарите се поставят индивидуално в 1,5 ml микроцентрофужни епруветки, съдържащи 230 µl дестилирана вода и тъканта се разрушава с помощта на пестик за еднократна употреба и безжичен двигател (VWR International, Lund, SE), последвано от центрофугиране при 10 krpm за 10 min. Супернатантата (200 µl) се прехвърля в 96-ямкова микроплака (Sigma -Aldrich) и абсорбцията (λ620) се определят с помощта на четец на микроплаки, базиран на спектрофотометър (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Алтернативно, комарите се смилат в 1 ml дестилирана вода, 900 µl от която се прехвърлят в кювета за спектрофотометричен анализ (λ 620 nm; UV 1800, Shimad zu, Kista, SE). За количествено определяне на хранителния прием беше изготвена стандартна крива чрез серийно разреждане, за да се получат 0,2 µl до 2,4 µl от 1 mg ml-1 ксилен цианид. След това оптичната плътност на известните концентрации на багрилото беше използвана за определяне на количеството храна, погълнато от всеки комар.
Данните за обема бяха анализирани с помощта на еднопосочен дисперсионен анализ (ANOVA), последван от post hoc двойни сравнения на Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, САЩ, 1989–2007). Линейните регресионни анализи описват зависим от концентрацията прием на урея и сравняват реакциите между търсещи гостоприемник и кръвосмучещи комари (GraphPad Prism v8 .0.0 за Mac, софтуер GraphPad, Сан Диего, Калифорния, САЩ).
Приблизително 20 µl проби от урина от всяка възрастова група се свързват с Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) и се капсулират в калаени капсули (8 mm × 5 mm). Капсулите се вкарват в горивната камера на CHNS/O анализатор (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, Масачузетс, САЩ), за да се определи съдържанието на азот в прясна и отлежала урина съгласно протокола на производителя. Общият азот (g N l-1) се определя количествено въз основа на известни концентрации на урея, използвани като стандарт.
За да се оцени ефектът от диетата върху оцеляването на търсещите гостоприемници и кръвосмучещите женски комари, индивидуално поставени в големи петриеви панички (12 см в диаметър и 6 см височина; Semadeni) с покрит с мрежа отвор в капака (3 см в диаметър) с За вентилация и доставка на храна. Диетите бяха предоставени директно след 4 dpe и включваха 1% разредена прясна и отлежала кравешка урина, четири концентрации на урея и две контроли, 10% захароза и вода. Всяка диета се пипетира върху зъбен тампон (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE), поставен в спринцовка от 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), буталото се отстранява и се поставя върху петриево блюдо (фигура 1). 1A). Променяйте диетата си всеки ден. Поддържайте лабораторията, както е описано по-горе. Оцелели комари бяха преброени два пъти на ден, докато мъртвите комари бяха изхвърлени до смъртта на последния комар (n = 40 на третиране). Оцеляването на комарите, хранени с различни диети, беше статистически анализирано с помощта на криви на оцеляване на Kaplan-Meyer и log-rank тестове за сравняване на сравненията на разпределението на оцеляването между диетите (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Персонализирана летяща мелница за комари, базирана на Attisano et al [17], изработена от 5 mm дебели прозрачни акрилни панели (10 cm широки x 10 cm дълги x 10 cm високи) без предни и задни панели (фиг. 3: отгоре). Въртящ се възел с вертикална тръба, направена от газова хроматографска колона (0,25 mm id; 7,5 cm L) с краища, залепени към игла за насекоми, окачена между чифт неодимови магнити на разстояние 9 cm. Хоризонтална тръба, направена от същия материал (6,5 cm L), разполовява вертикалната тръба, за да образува вързано рамо и рамо, което носи малко парче алуминиево фолио като сигнал за прекъсване на светлината.
На 24-часово гладни женски беше дадена горната диета за 30 минути преди ограничаване. Напълно хранените женски комари след това бяха индивидуално анестезирани върху лед за 2-3 минути и прикрепени към игли за насекоми с пчелен восък (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) и след това завързани към рамената на хоризонталните тръби. Летяща мелница. Оборотите на полет бяха записани от специално създаден регистратор на данни, след това съхранен и показан с помощта на софтуер PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Полетната мелница беше поставена в стая с регулиране на климата (12 часа: 12 часа, светлина: тъмно, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
За да се визуализира моделът на полетната активност, общото прелетяно разстояние (m) и общият брой последователни полетни дейности бяха изчислени на час за период от 24 часа. В допълнение, средните разстояния, прелетени от отделни женски, бяха сравнени между леченията и анализирани с помощта на еднопосочна ANOVA и post hoc анализ на Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), където средното разстояние се считаше за зависима променлива, докато лечението е независим фактор. допълнително, средният брой рундове се изчислява на стъпки от 10 минути.
За да се оцени ефектът от диетата върху репродуктивната способност на An.arabiensis, шест женски (4 dpe) бяха прехвърлени директно в клетки на Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) след вземане на кръв и след това се осигури експериментална диета за 48 часа, както е описано по-горе. След това диетите бяха премахнати и чаши за хвърляне на хайвера (30 ml; Nolato Hertila), пълни с 20 ml дестилирана вода, бяха осигурени на третия ден в продължение на 48 часа, като се променяха на всеки 48 часа 24 часа. Повторете всеки хранителен режим 20-50 пъти. Яйцата бяха преброени и записани за всяка експериментална клетка. Подпроби от яйца бяха използвани за оценка на вариациите в средния размер и дължина на отделните яйца (n ≥ 200 за диета), като се използва микроскоп Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE), оборудван с камера Leica (DFC) 320 R2;Leica Microsystems Ltd., DE). Останалите яйца бяха държани в стая с контролиран климат при стандартни условия на отглеждане в продължение на 24 часа и беше измерена подпроба от наскоро появили се ларви от 1-ва възраст (n ≥ 200 на диета), както е описано по-горе. Броят на яйцата и размерът на яйцата и ларвите бяха сравнени между третиранията и с помощта на еднопосочен ANOVA и post hoc анализ на Tukey (JMP Pro, v 14.0.0, SAS Institute Inc.).
Летливи вещества от прясна (1 час след вземане на проби), отлежала 24 часа, 72 часа и 168 часа урина бяха събрани от проби, събрани от говеда Zebu, раси Arsi. За удобство пробите от урина бяха събрани рано сутрин, докато кравите бяха още в обора. Проби от урина бяха събрани от 10 индивида и 100-200 ml от всяка проба бяха прехвърлени в отделни полиамидни торби за печене ( Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) в 3 l полиамид с капак В пластмасови варели от винилхлорид. Летливите вещества от пространството на главата от всяка проба от говежда урина бяха събрани или директно (прясна), или след узряване при стайна температура за 24 часа, 72 часа и 168 часа, т.е. всяка проба от урина беше представителна за всяка възрастова група.
За събиране на летливи вещества в горното пространство беше използвана система със затворен цикъл за циркулиране на газов поток, филтриран с активен въглен (100 ml min-1) през полиамидна торба към адсорбционната колона в продължение на 2,5 часа с помощта на диафрагмена вакуумна помпа (KNF Neuberger, Фрайбург, Германия). Като контрола, събирането на газово пространство беше извършено от празна полиамидна торба. Адсорбционната колона беше направена от тефлонова тръба ( 5,5 cm x 3 mm id), съдържащ 35 mg Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, САЩ) между тапи от стъклена вата. Преди употреба колоната се промива с 1 ml редестилиран n-хексан (Merck, Darmstadt, DE) и 1 ml пентан (99,0% чист разтворител GC клас, Sigma Aldrich). Адсорът летливите вещества в слоя се елуират с 400 μl пентан. Колекциите от пространството на главата се събират и след това се съхраняват при -20°C, докато се използват за по-нататъшен анализ.
Поведенческите реакции на търсещи гостоприемници и хранещи се с кръв летливи екстракти An.Headspace, събрани от прясна, 24-h, 72-h и 168-h отлежала урина, бяха анализирани за летливи екстракти от комари Arabidopsis с помощта на олфактометър с права стъклена тръба [18]. Експериментите бяха проведени по време на ZT 13-15, пиковия период на активността на An за търсене на дом. rab [19]. Олфактометър със стъклена тръба (80 cm × 9,5 cm вътрешен диаметър) беше осветен с 3 ± 1 lx червена светлина отгоре. Филтриран с въглен и овлажнен въздушен поток (25 ± 2 °C, 65 ± 2% относителна влажност) премина биоанализа при 30 cm s-1. Въздухът преминава през серия от мрежести екрани от неръждаема стомана, създавайки ламинар поток и равномерна структура на струята. Дозатор за дентални тампони (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), окачен на 5 cm намотка в наветрения край на олфактометъра, със стимулатор, който се сменя на всеки 5 минути. За анализ се използват 10 μl от всеки екстракт от пространството на главата, разреден 1:10, като стимул. Равно количество пентан се използва като контрола. Индивидуално търсене на гостоприемник или кръв- смучещите комари бяха поставени в индивидуални клетки за освобождаване 2-3 часа преди началото на експеримента. Клетката за освобождаване беше поставена от страната на вятъра на олфактометъра и комарите бяха оставени да се аклиматизират за 1 минута, след което дроселната клапа на клетката беше отворена за освобождаване. Привличането към третиране или контрол беше анализирано като съотношение на комарите, които са влезли в контакт с източника в рамките на 5 минути след освобождаването. Le екстракт и контрола бяха повторени най-малко 30 пъти и за да се избегнат ефектите от който и да е ден, един и същ брой лечения и контроли бяха тествани на всеки експериментален ден. Търсене на отговори от гостоприемник и хранени с кръв Ans.Arabic срещу набори от пространство на главата бяха анализирани с помощта на номинална логистична регресия, последвана от сравнения по двойки за странни съотношения (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Отговор на хвърляне на хайвера на Ан. Екстракти от прясна и отлежала кравешка урина бяха анализирани в клетки на Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Пластмасови чаши (30 mL; Nolato Hertila), напълнени с 20 mL дестилирана вода, осигуриха субстрата за хвърляне на хайвера и бяха поставени в противоположните ъгли на клетката, на разстояние 24 cm. Чашите за третиране бяха регулирани с 10 μl от всеки екстракт от пространството на главата при разреждане 1:10. Равно количество пентан беше използвано за регулиране на контролната чаша. Третираните и контролните чаши бяха разменени между всеки експеримент, за да се контролират ефектите на позицията. Десет хранени с кръв женски бяха освободени в експериментални клетки на ZT 9-11 и яйцата в чашите бяха преброени 24 часа по-късно. Формулата за изчисляване на индекса за хвърляне на хайвера е: (броят на снесените яйца в чашата за третиране – броят на яйцата, снесени в контролната чаша)/(общият брой снесени яйца). Всяко третиране се повтаря 8 пъти.
Анализът с газова хроматография и откриване на модел на електронна антена (GC-EAD) на женски An.arabiensis беше извършен, както е описано по-горе [20]. Накратко, пресни летливи екстракти от пространството бяха разделени с помощта на Agilent Technologies 6890 GC (Санта Клара, Калифорния, САЩ), оборудван с HP-5 колона (30 m × 0,25 mm id, 0,25 μm дебелина на филма, Agilent Технологии).и стареене на урината. Водородът се използва като подвижна фаза със среден линеен дебит от 45 cm s-1. Всяка проба (2 μl) се инжектира за 30 секунди в режим без разделяне с температура на входа 225 °C. Температурата на GC пещта се програмира от 35 °C (3 минути задържане) до 300 °C (10 минути задържане) при 10 °C min-1. разделител, 4 psi азот беше добавен и разделен 1:1 в Gerstel 3D/2 кръст с малък мъртъв обем (Gerstel, Mülheim, DE) между пламъчно-йонизационния детектор и EAD. Капилярът за изтичане на GC за EAD беше прекаран през трансферна линия Gerstel ODP-2, която проследява температурата на пещта на GC плюс 5 °C, в стъклена тръба (10 cm × 8 mm), където беше смесен с въглерод - филтриран, овлажнен въздух (1,5 l min−1). Антената беше поставена на 0,5 cm от изхода на тръбата. Всеки отделен комар представляваше едно повторение, а за комарите, търсещи гостоприемник, бяха извършени най-малко три повторения върху проби от урина от всяка възраст.
Идентифициране на биоактивни съединения в колекции от прясна и отлежала говежда урина с помощта на комбиниран GC и масспектрометър (GC-MS; 6890 GC и 5975 MS; Agilent Technologies) за предизвикване на антенни отговори в GC-EAD анализ, работещ в режим на йонизация с електронен удар при 70 eV. GC беше оборудван с HP-5MS UI-покрита капилярна колона от разтопен силициев диоксид ( 60 m × 0,25 mm вътрешен диаметър, 0,25 μm дебелина на филма), като се използва хелий като подвижна фаза със среден линеен дебит от 35 cm s-1. Проба от 2 μl се инжектира, като се използват същите настройки на инжектора и температура на пещта, както за GC-EAD анализа. Съединенията бяха идентифицирани въз основа на тяхното време на задържане (индекс на Kovát) и масспектри в сравнение с персонализираната библиотека и библиотеката NIST14 (Agi Идентифицираните съединения бяха потвърдени чрез инжектиране на автентични стандарти (Допълнителен файл 1: Таблица S2). За количествено определяне беше инжектиран хептил ацетат (10 ng, 99,8% химическа чистота, Aldrich) като външен стандарт.
Оценяване на ефикасността на смес от синтетични миризми, състояща се от биоактивни съединения, идентифицирани в прясна и отлежала урина, за привличане на търсещи гостоприемници и кръвосмучещи Ans.arabiensis, като се използва същият олфактометър и протокол, както по-горе. Синтетичните смеси имитират състава и пропорциите на съединенията в смесени летливи екстракти от пресни, 24-часови, 48-часови, 72-часови и 1 68-часова отлежала урина (Фигура 5D-G; Допълнителен файл 1: Таблица S2). За анализ използвайте 10 μl от 1:100 разреждане на напълно синтетичната смес, с обща скорост на освобождаване, варираща от приблизително 140-2400 ng h-1, за оценка на привлекателността за гостоприемник и кръвосмучещи комари. След това тестът се извършва върху пълни смеси, в които субтрактивни смеси от единичните съединения от пълната смес се отстраняват. Потърсете отговори от гостоприемник и хранени с кръв Ans.Arab срещу синтетични и субтрактивни смеси бяха анализирани с помощта на номинална логистична регресия, последвана от сравнения по двойки за странни съотношения (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
За да се прецени дали урината на крава може да служи като сигнал за местообитание на маларийни комари, прясна и остаряла урина на крава, събрана, както е описано по-горе, и вода се поставят в мрежести кофи от 3 l (100 ml) и се поставят в капани за примамки на гостоприемници.(BG-HDT версия; BioGents, Регенсбург, Германия). Десет капана, поставени на 50 m един от друг на пасище, ​​на 400 m от селската общност (Silay, Етиопия, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) и без добитък, на постоянни места за размножаване и села. Пет капана бяха нагряти, за да симулират присъствието на гостоприемник, докато пет tra ps бяха оставени без отопление. Всяко място за третиране се сменя всяка вечер за общо пет нощи. Броят на комарите, уловени в капани, примамвани с урина от различни възрасти, беше сравнен с помощта на логистична регресия с бета биномно разпределение (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
В ендемично по малария село близо до град Маки, регион Оромия, Етиопия (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Фигура 6A). Проучването е проведено между средата на август и средата на септември преди годишното остатъчно пръскане на закрито, заедно с дълъг дъждовен сезон. Пет чифта къщи (20–50 m една от друга) ), разположени в покрайнините на селото, бяха избрани за изследването (фиг. 6A). Критериите, използвани за избор на къщите, бяха: не се допускат животни в къщата, не се допуска готвене на закрито (дърва за огрев или дървени въглища) (поне по време на пробния период) и къщи с максимум двама обитатели, спят в неинсектициди.Под третираната мрежа за комари. Етичното одобрение е предоставено от Институционалния съвет за преглед на етиката (IRB/022/2016) на Факултета по природни науки (CNS-IRB), Университетът Адис Абаба, в съответствие с указанията, установени от Декларацията за помощ на Хелзинки, в съответствие с указанията, установени от Декларацията за помощ на Хелзинки, която е получена от Всяко ръководство, с помощта на местната администрация с помощта на Хелзинки. ниво на отделение ('kebele'). Експерименталният дизайн следва 2 × 2 латино квадратен дизайн, в който синтетичните смеси и контроли бяха назначени на сдвоени къщи през първата нощ и се разменят между къщите в следващата експериментална нощ. Този процес се повтаря десет пъти. ден.
Синтетична смес, съдържаща шест биоактивни съединения, беше разтворена в хептан (97,0% разтворител GC клас, Sigma Aldrich) и освободена при 140 ng h-1 с помощта на дозатор за памучен фитил [20]. Дозаторът за фитил позволи всички съединения да бъдат освободени в постоянни пропорции през целия 12-часов експеримент. Хептанът беше използван като контрола. Флаконът беше окачен до входната точка на Centers for Dise светлинен капан за контрол и превенция (CDC) (John W. Hock Company, Gainesville, FL, САЩ; Фигура 6A). Капаните бяха окачени на 0,8 – 1 m над земята, близо до подножието на леглото, а доброволец спал под необработена мрежа против комари и работел между 18:00 и 06:30. Комари, уловени по пол и физиологично състояние (ненахранени) , нахранени, полу-бременни и бременни [21] впоследствие бяха скринирани с помощта на анализ на полимеразна верижна реакция (PCR), за да се идентифицират видовете, морфологично идентифицирани като A. gambiae sl. Членове на комплекса [23] В полевото проучване, улавянето на капани на сдвоени къщи беше анализирано с помощта на модел на номинално логистично прилягане, където привличането беше зависимата променлива, а третирането (синтетична смес срещу контрола) беше фиксираният ефект (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.).Тук отчитаме χ2 и p-стойностите от теста за съотношението на вероятността.
Оценете дали е безопасно.arabiensis успя да получи урина, своя основен източник на азот, урея, чрез директно хранене, в рамките на 48 часа от прилагането в продължение на 4 дни след (dpe) опити за хранене с търсене на гостоприемник и хранени с кръв женски (Фиг. 1A). И двете женски, търсещи гостоприемник, и кръвосмучещи, абсорбираха значително повече захароза, отколкото всяка друга диета или вода (F(5,426) = 20,15, p < 0 .0001 и F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, съответно; Фиг. 1B,C). Освен това, женските, търсещи гостоприемник, ядат по-малко в урината на 72 часа в сравнение с урината на 168 часа (Фиг. 1B). Когато им се предлага диета, съдържаща урея, женските, търсещи гостоприемник, абсорбират значително по-голямо количество урея при 2,69 mM в сравнение с всички останали концентрации и вода, докато не се различава от 10% захароза (F(10,813) = 15,72, p <0,0001; Фигура 1D). Това е в контраст с реакцията на хранени с кръв женски, които обикновено усвояват значително повече диети, съдържащи урея, отколкото вода, макар и значително по-малко от 10% захароза (F(10,557) = 78,35, p <0,00 01; Фигура 1).1E). Освен това, когато се сравняват двете физиологични състояния, флеботомизираните женски абсорбират повече урея от женските, търсещи гостоприемник, при най-ниските концентрации, а тези женски абсорбират подобни количества урея при по-високи концентрации (F(1,953)= 78,82, p <0,0001;Фигура 1F, G). Въпреки че приемът от диета, съдържаща урея, изглежда има оптимални стойности (Фигура 1D,E), женските и в двете физиологични състояния успяват да модулират количеството абсорбирана урея в целия диапазон от концентрации на урея по логаритмичен начин (Фигура 1F,G).).По подобен начин изглежда, че комарите контролират усвояването на азот чрез регулиране на количеството абсорбирана урина, тъй като количеството азот в урината се отразява в абсорбираното количество (Фигура 1B, C и B вмъквания).
За да се оценят ефектите на урината и уреята върху оцеляването на търсещите гостоприемник и кръвосмучещите комари, женските бяха хранени с урина от всичките четири възрасти (прясна, 24 часа, 72 часа и 168 часа след отлагането) и диапазон от концентрации на урея, както и дестилирана вода и 10% захароза, послужили като контрола (Фигура 2А). Този анализ на оцеляването показа, че диетата има значителен ефект върху цялостното оцеляване при женски, търсещи гостоприемник (урина: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; урея: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; Фиг. 2B, C) и хранени с кръв женски (урина: χ2 = 93,0, df = 5, p < 0,0001; урея : χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; Фигура 2D,E). Във всички експерименти, женските, хранени с диета с урина, урея и вода, имат значително по-ниски нива на оцеляване в сравнение с женските, хранени със захароза (Фигура 2B-E). Женските, търсещи гостоприемник, хранени с прясна и застояла урина, показват различна степен на оцеляване, като тези, хранени със 72-часова престояла урина (p = 0.016) с най-ниска вероятност за оцеляване (Фиг. 2B). Освен това, женските, търсещи гостоприемник, хранени с 135 mM урея, оцеляват по-дълго от контролите с вода (p <0.04) (Фиг.2C). В сравнение с вода, жените, хранени с прясна урина и 24-часова урина, оцеляват по-дълго (p = 0,001 и p = 0,012, съответно; Фигура 2D), докато жените, хранени със 72-часова урина, оцеляват по-дълго от тези, хранени с женска къса прясна урина и 24-часова урина (съответно p <0,0001 и p = 0,013; Фигура 2D). Когато са хранени със 135 mM урея, хранените с кръв женски оцеляват по-дълго от всички други концентрации на урея и вода (p <0.013; Фигура 2E).
Оцеляване на гостоприемник и кръвосмучещи женски Anopheles arabinis, хранещи се с кравешка урина и урея. В биоанализа (А) женските комари получават диета, състояща се от прясна и отлежала кравешка урина, различни концентрации на урея, захароза (10%) и дестилирана вода (H2O). Оцеляването на търсещите гостоприемник (B, C) и кръвосмучещите (D, E) комари се записва на всеки 12 часа, докато всички женски, хранени с урина (B, D) и урея (C, E), и контролите, захароза и вода, умрат
Общото разстояние и броят на обиколките, определени в теста на летящата мелница за период от 24 часа, се различават между търсещите гостоприемник и кръвосмучещите комари, които показват по-малка летателна активност като цяло (фиг. 3). Комарите, търсещи гостоприемник, които предоставят прясна и отлежала урина или захароза и вода, показват различни модели на летене (фиг. 3), като женските, хранещи се с прясна урина, са по-активни на зазоряване, докато тези, хранени с 24- и Комарите на възраст 168 часа, които се хранеха с урина, показват различни модели на летене и са предимно дневни. Женските комари, които доставят захароза или 72-часова урина, показват активност през целия 24-часов период, докато женските, които осигуряват вода, са по-активни през средата на периода. Комарите, хранени със захароза, показват най-високи нива на активност късно през нощта и рано сутрин, докато тези, които поглъщат ted 72-часовата урина е имала постоянен спад в активността за 24 часа (Фигура 3).
Летателни характеристики на търсеща ловец кръвосмучеща женска Anopheles arabinis, хранеща се с кравешка урина и урея. При теста с летателна мелница женските комари, хранени с прясна и отлежала кравешка урина, различни концентрации на урея, захароза (10%) и дестилирана вода (H2O), бяха привързани към хоризонтални, свободно въртящи се ръце (горе). За женска, търсеща гостоприемник (вляво) и кръвосмучеща (вдясно) s, общото разстояние и броят полети на час за всяка диета за период от 24 часа бяха записани (тъмно: сиво; светло: бяло). Средното разстояние и средният брой пристъпи са показани вдясно от графиката на циркадната активност. Лентите за грешки представляват стандартна грешка на средната стойност. Статистически анализ вижте текста
Като цяло общата летателна активност на търсещите гостоприемници женски следва модел, подобен на този на разстоянието на полет за период от 24 часа. Средното разстояние на полета беше значително повлияно от поетата диета (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), а търсещите гостоприемници женски погълнаха 72 часа урина, летяха значително по-големи разстояния в сравнение с всички други диети (p < 0,0001) и хранени със захароза комарите летяха по-дълго от комарите, хранени с прясна (p = 0,022) и 24-часова урина (p = 0,022). За разлика от модела на летателна активност, описан от диетата с урина, хранените с урея търсещи гостоприемници женски показаха постоянна летателна активност за период от 24 часа, достигайки пик през втората половина на тъмната фаза (фиг. 3). Въпреки че моделите на активност бяха подобни, гостоприемникът -търсещите женски, хранени с урея, значително увеличават средното разстояние на полета в зависимост от абсорбираната концентрация (F(5, 138) = 1310,91, p <0,0001). Женските, търсещи гостоприемник, хранени с всякаква концентрация на урея, летят по-дълго от женските, хранени с вода или захароза (p <0,03).
Цялостната полетна активност на кръвосмучещите комари е стабилна и поддържана в продължение на 24 часа при всички диети, с повишена активност на урината през втората половина на тъмния период за женските, хранени с вода, както и при женските, хранени прясно и на възраст 24 часа (изображение 3). Докато диетата с урина повлиява значително средното разстояние на полета при хранени с кръв женски (F(5, 138) = 4,83, p = 0,0004), уреята диета не (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) .с друга урина и контролна диета (прясна, p = 0.0091; 72 часа, p = 0.0022; 168 часа, p = 0.001; захароза, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
Ефектите от храненето с урина и урея върху репродуктивните параметри бяха оценени в биотестове за снасяне на яйца (Фигура 4А) и бяха изследвани според броя на яйцата, снесени от всяка женска, размера на яйцата и новоизлюпените ларви от първи стадий на развитие. g. 4B). Женските, хранени с 24-часова урина, кръвно брашно, снасят значително повече яйца, отколкото женските, хранени с други диети с урина и са подобни на тези, хранени със захароза (фиг. 4B). По същия начин, размерът на яйцата, снесени от хранени с урина женски, варира в зависимост от диетата (F(5, 209) = 12,85, p < 0,0001), с 24-часова урина и женските, хранени със захароза, снасят значително по-големи яйца от женските, хранени с вода, докато яйцата на женските, хранени с 168 часа урина, са значително по-малки (фиг. 4C). В допълнение, диетата с урина значително повлиява размера на ларвите (F(5, 187) = 7,86, p <0,0001), със значително по-големи ларви, излизащи от яйца, снесени от 24- и 7 2-часови женски, хранени с урина, отколкото от яйца, снесени от яйца ларви. Хранени с вода и 168-часови женски, хранени с урина (Фигура 4D).
Репродуктивни характеристики на женски Anopheles arabinis, хранещи се с кравешка урина и урея. Хранени с кръв женски комари бяха хранени с диети, състоящи се от прясна и отлежала кравешка урина, различни концентрации на урея, захароза (10%) и дестилирана вода (H2O) в продължение на 48 часа преди поставяне в биотестове и получаване на субстрати за снасяне на яйца 48 часа (A). Брой яйца (B, E), размер на яйцата (C, F) ) и размерът на ларвите (D, G) бяха значително повлияни от предоставената диета (кравешка урина: BD; урея: EG). Средните стойности за всеки параметър, измерен с помощта на различни имена на букви, се различаваха значително едно от друго (еднопосочна ANOVA, използвайки post hoc анализа на Tukey; p <0,05). Лентите за грешки представляват стандартна грешка на средната
Като основен азотен компонент на урината, уреята, когато се предоставя като диета на хранени с кръв женски, повлиява значително репродуктивните параметри във всички проучвания. Броят на яйцата, снесени от женски, хранени с урея, след кръвно хранене, в зависимост от концентрацията на урея (F(11, 360) = 4,69; p < 0,0001), женските, хранени с концентрации на урея между 134 µM и 1,34 mM снасят повече яйца ( Фигура 4E). Женските, хранени с концентрации на урея от 134 µM или повече, снасят по-големи яйца от женските, хранени с вода (F(10, 4245) = 36,7; p <0,0001; Фигура 4F), и размерът на ларвите, въпреки че се влияе от подобни концентрации на урея при майките (F(10, 3305) = 37,9; p < 0 .0001) беше по-променлив (фиг. 4G).
Цялостно привличане към летливи екстракти от пространството на урината на говеда, търсещи гостоприемник. Arabiensis, оценен в олфактометър със стъклена тръба (фиг. 5A), е значително повлиян от възрастта на урината (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; фиг. 5B). Post hoc анализът показа, че миризмата на застояла урина след 24 часа причинява значително по-високи нива на привлекателност в сравнение с всички останали лечения (72 часа: p = 0,0060, 168 часа: p = 0,012, пентан: p = 0,00070), с изключение на миризмата на прясна урина (p = 0,13; Фигура 5B). Въпреки че общото привличане на кръвосмучещите комари към миризмата на урина не се различава значително (χ2 = 8,78, df = 4, p = 0,067 ; Фиг. 5C), е установено, че тези женски са значително по-привлекателни за летливите екстракти от пространството на главата в сравнение със 72-часовата урина в сравнение с контролите (p = 0,0066; Фигура 5C).
Поведенчески реакции към миризми на естествена и синтетична кравешка урина при търсене на гостоприемник и хранени с кръв Anopheles arabianus. Схема на олфактометър със стъклена тръба (A). Привличане на летливи екстракти от прясна и остаряла кравешка урина към гостоприемници (B) и кръвосмучещи (C) комари. Намерете реакцията на пипалото на Господ An. Екстракти от headspace, изолирани от пресни (D), 24-часови Показана е (E), 72-часова (F) и 168-часова (G) урина на крава. Следите от откриване на електронна антена (EAD) показват промени в напрежението в отговор на биоактивни съединения в горното пространство, елуирани от газовия хроматограф и открити от пламъчно-йонизационен детектор (FID). Скалата представлява амплитудата на реакцията (mV) спрямо времето на задържане (s). Свойствата и скоростите на освобождаване (µg h-1) на биологично активните съединения са показани. Една звездичка (*) показва постоянен отговор с ниска амплитуда. Двойните звездички (**) показват невъзпроизводими реакции. Намерете гостоприемника (H) и кръвосмучещия (I) An.arabiensis има различни призиви към синтетични смеси от миризми на прясна и отлежала кравешка урина. Средните пропорции на комарите, привлечени от имена с различни букви, са значително различни един от друг ( еднопосочна ANOVA, използваща post hoc анализа на Tukey;p < 0.05). Лентите за грешки представляват стандартна грешка на скалата
Женски Ann.arabiensis, 72 часа и 120 часа след кръвно брашно, по време на хвърляне на хайвера, не е показано предпочитание към летливи екстракти от прясна и остаряла кравешка урина в сравнение с контролите с пентан (χ2 = 3,07, p > 0,05; Допълнителен файл 1: Фиг. S1).
За женски Ann.arabiensis, GC-EAD и GC-MS анализи идентифицираха осем, шест, три и три биоактивни съединения (Фигура 5D-G). Въпреки че се наблюдават разлики в броя на съединенията, които предизвикват електрофизиологични реакции, повечето от тези съединения присъстваха във всеки летлив екстракт от пространството, събран от прясна и отлежала урина. Следователно, за всеки екстракт, само съединения, които предизвикват физиологичен отговор от женските антени над праговете бяха включени в по-нататъшни анализи.
Общата скорост на летливо освобождаване на биоактивни съединения в колекцията над пространството се увеличава от 29 µg h-1 в прясна урина до 242 µg h-1 в 168-часова отлежала урина, главно поради p-крезол и m-формалдехид Фенолът се увеличава, както и фенолът. За разлика от това, скоростите на освобождаване на други съединения, като 2-циклохексен-1-он и деканал, намаляват d с увеличаване на възрастта на урината, което корелира с наблюдаваното намаляване на интензитета на сигнала (изобилие) в хроматограмата (Фиг. 5D)-G ляв панел) и физиологичните отговори на тези съединения (Фиг. 5D-G десен панел).
Като цяло, синтетичната смес има подобно естествено съотношение на биоактивни съединения, идентифицирани в летливи екстракти от пресни и остарели уринни пространства (фиг. 5D–G) и не изглежда да предизвиква значителна привлекателност при търсенето на гостоприемник (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; фиг. 5H) или кръвосмучещи комари (χ2 = 4,91, df = 4, p = 0.30; Фигура 5I). Въпреки това, post hoc сравнения по двойки между леченията показват, че комарите, търсещи гостоприемник, са значително привлекателни за синтетичната смес от 24-часова урина в сравнение с контролите с пентан (p = 0.0086; Фигура 5H).
За да се оцени ролята на отделните компоненти в синтетичните смеси от 24-часова урина, шест субтрактивни смеси бяха оценени спрямо пълни смеси в Y-тръбен анализ, в който отделните съединения бяха отстранени. За комари, търсещи гостоприемник, изваждането на отделни съединения от пълната смес имаше значителен ефект върху поведенческите реакции (χ2 = 19,63, df = 6, p = 0,0032; Допълнителен файл 1: Фигура S2A), всички субтрактивни смеси са по-привлекателни от По-малки от напълно смесени. За разлика от това, отстраняването на отделни съединения от напълно синтетичната смес не повлиява поведенческите реакции на кръвосмучещите комари (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), с изключение на деканал, което води до по-ниски нива в сравнение с пълната смес Привличане (p = 0,022; Допълнителен файл 1: Фигура S2B).
В ендемично по малария село в Етиопия, ефикасността на синтетична смес от 24-часова кравешка урина за привличане на комари при полеви условия беше оценена в продължение на десет нощи (фиг. 6A). Общо 4861 комара бяха уловени и идентифицирани, от които 45,7% бяха Anthropus.gambiae sl, 18,9% бяха Anopheles pharo ensis и 35,4% са били Culex spp. (Допълнителен файл 1: Таблица S1). Anopheles arabinis е единственият член на комплекса An.Gambian видове, идентифициран чрез PCR анализ. Средно 320 комара са били залавяни на нощ, през което време капаните със синтетични смесени примамки са уловили повече комари, отколкото сдвоените капани без смес (χ2(0, 3196) = 170.0 , p < 0,0001). Капаните без примамки бяха поставени на всяка от петте контролни нощи в началото, средата и края на опита. Подобен брой комари бяха уловени във всяка двойка капани, което показва липса на пристрастия между къщите (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0,05) и липса на спад на популацията по време на периода на изследването. В сравнение с контролни капани, броят на комарите, уловени в капаните, съдържащи синтетичната смес, е значително увеличен: търсене на гостоприемник (χ2(0, 2107) = 138,7, p <0,0001), скорошно хранене с кръв (χ2(0, 650) = 32,2, p <0,0001) и бременност (χ2(0, 228) = 6,27, p = 0 .0123;Допълнителен файл 1: Таблица S1). Това също се отразява в общия брой на уловените комари: търсещ гостоприемник > кръвосмучещи > бременни > полубременни > мъжки.
Полева оценка на ефикасността на 24-часова смес от синтетична миризма на кравешка урина. Проведени са полеви опити в южна централна Етиопия (карта), близо до град Маки (вмъкване), като се използва светлинен капан на Центъра за контрол на заболяванията (CDC) (вдясно) в сдвоени къщи, с латински квадратен дизайн (въздушно изображение) (A). Синтетичните CDC фотокапани с примамка за миризма привличат и улавят женски Anopheles arabesques (B), но не и Anopheles farroes (C), по различен начин, ефект, зависим от физиологичното състояние. В допълнение, тези капани уловиха значително увеличен брой комари гостоприемници Culex. (D) В сравнение с контролата. Лентите отляво представляват средния индекс на селекцията на комари, уловени в двойки капани с миризлива примамка (зелено) и контролни (отворени) капани (N = 1 0), докато лентите вдясно представляват средния индекс на селекция в двойки контролни капани (отворени; N = 5).). Звездичките показват нива на статистическа значимост (*p = 0,01 и ***p < 0,0001)
Трите вида са уловени по различен начин в капани, съдържащи синтетични смеси. Търсене на гостоприемник (χ2(1, 1345) = 71,7, p <0,0001), хранене с кръв (χ2(1, 517) = 16,7, p <0,0001) и бременност (χ2(1, 180) = 6,11, p = 0,0134) a .ara biensis беше уловен в капана, освобождавайки синтетичната смес (Фиг. 6B), докато количеството An не се различава. Бяха открити Pharoensis в различни физиологични състояния (Фиг. 6C). За Culex беше установено само значително увеличение на броя на комарите, търсещи гостоприемници, в капани, примамвани със синтетичната смес (χ2(1,1319) = 12,6, p = 0,0004; Фиг. 6D), в сравнение с контролните капани.
Използвани са капани за примамки за гостоприемници, разположени извън потенциални гостоприемници между местата за размножаване и селските общности в Етиопия, за да се прецени дали маларийните комари използват миризмата на кравешка урина като сигнал за местообитание на гостоприемника. При липса на сигнали за гостоприемник, топлина и със или без наличие на миризма на кравешка урина, не са уловени комари (Допълнителен файл 1: Фигура S3). Въпреки това, при наличие на висока температура и миризма на кравешка урина, женски маларийните комари бяха привлечени и уловени, макар и в малък брой, независимо от възрастта на урината (χ2 (5, 25) = 2, 29, p = 0, 13; Допълнителен файл 1: Фигура S3). За разлика от тях контролите на водата не уловиха маларийни комари при високи температури (Допълнителен файл 1: Фигура S3).
Маларийните комари придобиват и разпространяват азотсъдържащи съединения чрез компенсаторно хранене с кравешка урина (т.е. локви), за да подобрят жизнените черти, подобно на други насекоми [2, 4, 24, 25, 26]. Кравешката урина е лесно достъпен възобновяем ресурс, тясно свързан с местата за почивка на вектори на малария, като краварници и висока растителност близо до селски домове и хайвер Женските комари локализират този ресурс по миризмата и са в състояние да регулират усвояването на азотни съединения в урината, включително урея, основният азотен компонент в урината [15, 16]. В зависимост от физиологичното състояние на женския комар, хранителните вещества в урината се разпределят, за да подобрят летателната активност и оцеляването на женските комари, търсещи гостоприемник, както и оцеляването и репродуктивни характеристики на хранени с кръв индивиди по време на първия гонадотропен цикъл. Следователно смесването на урината играе важна хранителна роля за векторите на малария, които са затворени като недохранени възрастни [8], тъй като осигурява на женските комари способността да придобиват важни азотни съединения чрез хранене с нисък риск. Това откритие има значителни епидемиологични последици, тъй като женските увеличават продължителността на живота, активността и репродуктивната си продукция, всички от които засягат векторния капацитет. Освен това, това поведение може да бъде целта на бъдещи програми за управление на вектори.