Mantenugaien eskuratzeak eta banaketeak intsektuen bilaketa eta bizi-zikloaren ezaugarriak integratzen ditu. Bizi-etapa desberdinetan mantenugai espezifikoetan dauden gabeziak konpentsatzeko, intsektuek mantenugai horiek elikadura osagarriaren bidez lor ditzakete, adibidez, ornodunen jariakinez elikatuz, putzu izeneko prozesu batean. Anopheles arabiani eltxoa desnutrizioan dagoela dirudi eta, beraz, mantenugaiak behar ditu bai metabolismorako bai ugalketarako. Ikerketa honen helburua An. arabiensis-en behi-gernuan mantenugaiak eskuratzeko astintzeak bizi-zikloaren ezaugarriak hobetzen dituen ebaluatzea izan zen.
Ziurtatu segurua dela. arabiensis behi-gernu freskoaren usainak erakarri zuen, 24 orduko, 72 orduko eta 168 ordukoek, eta ostalariaren bila zebiltzan eta odolez elikatutako (odol-janaren ondorengo 48 orduko) emeak Y-hodi formako olfaktometro batean neurtu ziren, eta eme haurdunak errunaldi-proba egiteko ebaluatu ziren. Ondoren, analisi kimiko eta elektrofisiologiko konbinatu bat erabili zen behi-gernuan konposatu bioaktiboak identifikatzeko lau adin-klaseetan. Konposatu bioaktiboen nahasketa sintetikoak Y-hodi formako eta landa-probetan ebaluatu ziren. Behi-gernua eta bere nitrogeno-konposatu nagusia den urea ikertzeko, malaria-bektoreentzako dieta osagarri potentzial gisa, elikadura-parametroak eta bizi-historiaren ezaugarriak neurtu ziren. Eme-eltxoen proportzioa eta xurgatutako behi-gernu eta urea kopurua ebaluatu ziren. Jan ondoren, emeen biziraupena, hegaldi lotuta eta ugalketa ebaluatu ziren.
Bilatu ostalariaren odola eta elikagaiak. Laborategiko eta landa-ikerketetan, arabiarrak behi-gernu fresko eta zahartuaren usain natural eta sintetikoarekiko erakarrita zeuden. Eme haurdunek axolagabeak ziren behi-gernuaren erantzunekiko errunaldi-guneetan. Ostalariaren bila dabiltzan eta odola xurgatzen duten emeek aktiboki xurgatzen dituzte behi-gernua eta urea, eta baliabide horiek esleitzen dituzte bizitza-historiaren arabera, hegaldirako, biziraupenerako edo ugalketarako egoera fisiologikoaren arabera.
Anopheles arabinis-ek behi-gernua eskuratzea eta banatzea bizi-zikloaren ezaugarriak hobetzeko. Behi-gernuaren osagarrizko elikadurak bektoreen gaitasunean eragiten du zuzenean, eguneroko biziraupena eta bektoreen dentsitatea handituz, eta zeharka, hegaldi-jarduera aldatuz, eta, beraz, etorkizuneko ereduetan kontuan hartu beharko litzateke.
Mantenugaien eskuratzeak eta banaketak intsektuen elikadura eta bizi-historiaren ezaugarriak integratzen ditu [1,2,3]. Intsektuak gai dira janaria hautatu eta eskuratzeko, eta konpentsazio-elikadura egin dezakete janariaren eskuragarritasunaren eta mantenugaien beharren arabera [1, 3]. Mantenugaien banaketa bizi-historiaren prozesuaren araberakoa da, eta dietaren kalitate eta kantitatearen eskakizun desberdinak sor ditzake intsektuen bizi-etapa desberdinetan [1, 2]. Mantenugai espezifikoen gabeziak konpentsatzeko, intsektuek mantenugai horiek elikadura osagarriaren bidez lor ditzakete, hala nola lokatzaren, ornodunen gorotz eta jariaketen eta sarraskiaren bidez, putzu izeneko prozesu bat [2]. Tximeleta eta sits espezie ugari deskribatzen diren arren, ur-zuloak beste intsektu-orden batzuetan ere gertatzen dira, eta baliabide mota hauek erakartzeak eta elikatzeak eragin handia izan dezake osasunean eta bizi-historiaren beste ezaugarri batzuetan [2, 4, 5, 6],7]. Anopheles gambiae sensu lato (sl) malaria-eltxoa heldu "desnutritu" gisa agertzen da [8], beraz, ureztatzeak zeregin garrantzitsua izan dezake bere bizi-historiaren ezaugarrietan, baina portaera honek hainbeste... Orain arte baztertua izan da. Ibilgailu garrantzitsu honetan mantenugaien ingesta handitzeko bitarteko gisa astindua erabiltzeak arreta merezi du, ondorio epidemiologiko garrantzitsuak izan baititzake.
Anopheles eltxo eme helduen nitrogeno-ingesta mugatua da larba-fasetik eramandako kaloria-erreserba txikiengatik eta odol-irinaren erabilera ez-eraginkorragatik [9]. Ann.gambiae sl emeek normalean hori konpentsatzen dute odol-otordu osagarriekin osatuz [10, 11], eta horrela jende gehiagok gaixotasuna hartzeko arriskua du eta eltxoak harraparitza-arrisku handiagoan jartzen ditu. Bestela, eltxoek ornodunen gorotzen elikadura osagarria erabil dezakete egokitzapena eta hegaldiaren maniobragarritasuna hobetzen dituzten konposatu nitrogenatuak eskuratzeko, beste intsektu batzuek erakusten duten bezala [2]. Zentzu honetan, interesgarria da An. Gambian sl espezieen konplexua, Anopheles arabinis, behi-gernu fresko eta zaharra [12,13,14], erakarpen sendo eta bereizgarria. Anopheles arabinis oportunista da bere ostalariaren lehentasunetan eta behiekin elkartzen eta haietatik elikatzen dela ezagutzen da. Behi-gernua konposatu nitrogenatuetan aberatsa den baliabidea da, urea gernu freskoko nitrogeno osoaren % 50-95 izanik [15, 16]. Behi-gernua zahartzen den heinean, mikroorganismoek baliabide horiek erabiltzen dituzte nitrogenodun konposatuen konplexutasuna 24 orduko epean murrizteko [15]. Amoniakoaren igoera azkarrarekin, nitrogeno organikoaren jaitsierarekin batera, mikroorganismo alkalofiloak (horietako askok eltxoentzat toxikoak diren konposatuak sortzen dituzte) ugaltzen dira [15], eta hori izan daiteke Ann.arabiensis emeak 24 ordu edo gutxiagoko gernua erakartzen duela lehentasunez [13, 14].
Ikerketa honetan, An ostalariak eta odolez elikatutakoak bilatu ziren. Bere lehen gonadotropina zikloan, arabiensis-ek konposatu nitrogenatuak, urea barne, eskuratzeko ebaluatu zen gernu nahasketaren bidez. Ondoren, esperimentu sorta bat egin zen eltxo emeek mantenugai baliabide potentzial hau nola esleitzen duten biziraupena, ugalketa eta janari gehiago bilatzeko ebaluatzeko. Azkenik, behi gernu freskoaren eta zahartuaren usaina ebaluatu zen, hauek ostalariaren eta odolez elikatutako An-en pista fidagarriak ematen zituzten ala ez zehazteko. Baliabide nutrizional potentzial honen bilaketan, arabiensis-ek behatutako erakargarritasun desberdinaren atzean dauden korrelazio kimikoak aurkitu zituen. 24 orduko gernu zahartuan identifikatutako konposatu organiko lurrunkorren (KOL) usain nahasketa sintetikoak gehiago ebaluatu ziren landa-baldintzetan, laborategiko baldintzetan lortutako emaitzak zabalduz eta behien gernu usainak egoera fisiologiko desberdinetan duen eragina erakutsiz. Eltxoen erakarpena. Lortutako emaitzek baieztatzen dute An. arabiensis-ek ornodunen gernuan aurkitutako konposatu nitrogenatuak eskuratzen eta banatzen dituela bizi-historiaren ezaugarrietan eragiteko. Emaitza hauek ondorio epidemiologiko potentzialen testuinguruan eta bektoreen zaintza eta kontrolerako nola erabil daitezkeen aztertzen dira.
Anopheles arabicans (Dongola arraza) 25 ± 2 °C-tan, % 65 ± 5eko hezetasunean eta 12:12 orduko argi-iluntasun zikloan mantendu ziren. Larbak ur destilatuarekin betetako plastikozko erretiluetan (20 cm × 18 cm × 7 cm) hazi ziren eta Tetramin® arrain-janaria (Tetra Werke, Melle, DE) eman zitzaien. Pupak 30 ml-ko edalontzietan (Nolato Hertila, Åstorp, SE) bildu ziren eta ondoren Bugdorm kaioletara (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) eraman ziren helduak agertzeko. Helduei % 10eko sakarosa-soluzio bat eman zitzaien ad libitum agerraldiaren ondorengo 4 egunera arte (dpe), eta une horretan ostalari-bilatzaile diren emeei esperimentua baino lehen janaria eskaini zitzaien, edo gau osoan ur destilatuarekin gosez eman zitzaizkien esperimentua baino lehen, behean azaltzen den bezala. Hegaldi-hodiko esperimentuetarako erabilitako emeak 4-6 egunez bakarrik gosez eman ziren. Orduak ad libitum urarekin. Odola xurgatzen duten eltxoak ondorengo bioanalisietarako prestatzeko, 4 dpe emeri ardi-odol defibrotikoa eman zitzaien (Håtunalab, Bro, SE) mintz-elikadura sistema bat erabiliz (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, Erresuma Batua). Eme guztiz kongestionatuak banakako kaioletara eraman ziren eta janaria zuzenean eman zitzaien, behean deskribatzen den bezala, edo % 10eko sakarosa ad libitum behean deskribatutako esperimentuen aurreko 3 egunetan. Azken eme hauek hegaldi-hodi bioanalisietarako erabili ziren eta laborategira eraman ziren, eta gero ur destilatua ad libitum izan zuten esperimentua baino 4-6 ordu lehenago.
Elikadura-analisiak erabili ziren helduen An.Arab emeen gernu- eta urea-kontsumoa kuantifikatzeko. Ostalariaren bila zebiltzan eta odolez elikatutako emeei % 1eko behi-gernu fresko eta zahar diluitua, urea-kontzentrazio desberdinak eta bi kontrol (% 10 sakarosa eta ura) zituen dieta eman zitzaien 48 orduz. Horrez gain, elikagai-koloratzailea (1 mg ml-1 xileno zianuro FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) gehitu zitzaion dietan eta 4 × 4 matrize batean eman zen 250 µl-ko mikrozentrifuga-hodietan (Axygen Scientific, Union City, CA, AEB; 1A irudia). Bete ertzeraino (~300 µl). Eltxoen arteko lehia eta tindagai-kolorearen balizko efektuak saihesteko, jarri 10 eltxo Petri plaka handi batean (12 cm-ko diametroa eta 6 cm-ko altuera; Semadeni, Ostermundigen, CH; 1A irudia) iluntasun osoan 25 ± 2 cm °C-tan eta % 65 ± 5ean. hezetasun erlatiboa. Esperimentu hauek 5 eta 10 aldiz errepikatu ziren. Dietaren eraginpean egon ondoren, eltxoak -20 °C-tan jarri ziren analisi gehiago egin arte.
Bilatu ostalariak eta odol-xurgatzaile den Anopheles arabianus emeak xurgatutako behi-gernua eta urea. Elikadura-proban (A), eme eltxoei behi-gernu fresko eta zaharrez, urea kontzentrazio desberdinez, sakarosaz (% 10) eta ur destilatuaz (H2O) osatutako dieta eman zitzaien. Ostalaria bilatzen duten (B) eta odolez elikatutako (C) emeek probatutako beste edozein dietak baino sakarosa gehiago xurgatu zuten. Kontuan izan ostalaria bilatzen duten emeek 72 orduko behi-gernua 168 orduko behi-gernua baino gutxiago xurgatu zutela (B). Gernuaren batez besteko nitrogeno-eduki totala (± desbideratze estandarra) txertatutako irudian irudikatzen da. Ostalaria bilatzen duten (D, F) eta odol-xurgatzaile den (E, G) emeek urea dosiaren araberako moduan xurgatzen dute. Arnastutako batez besteko bolumenak (D, E) letra-izen desberdinak zituztenak nabarmen desberdinak ziren elkarrengandik (ANOVA norabide bakarrekoa Tukeyren post hoc analisia erabiliz; p < 0,05). Errore-barrek batez bestekoaren errore estandarra adierazten dute (BE). Lerro eten zuzenak erregresio log-linealaren lerroa adierazten du. (A, G)
Xurgatutako janaria askatzeko, eltxoak banan-banan 1,5 ml-ko mikrozentrifugazio-hodietan jarri ziren, 230 µl ur destilatu zituztenak, eta ehuna botatzeko makiltxo bat eta haririk gabeko motor bat erabiliz apurtu zen (VWR International, Lund, SE), ondoren 10 krpm-tan zentrifugatu zen 10 minutuz. Gainnatzailea (200 µl) 96 putzuko mikroplaka batera eraman zen (Sigma-Aldrich) eta absortzioa (λ620) espektrofotometro batean oinarritutako mikroplaka irakurgailu bat erabiliz zehaztu zen (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Bestela, eltxoak 1 ml ur destilatutan xehatu ziren, eta horietatik 900 µl kubeta batera eraman ziren espektrofotometriako analisietarako (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Elikagai-ingesta kuantifikatzeko, kurba estandar bat prestatu zen serieko diluzio bidez, 0,2 µl eta 2,4 µl artean 1 mg-ko... ml-1 xileno zianuro. Ondoren, koloratzaile-kontzentrazio ezagunen dentsitate optikoa erabili zen eltxo bakoitzak irentsi zuen janari-kopurua zehazteko.
Bolumen-datuak bariantzaren analisi unidirekzionala (ANOVA) erabiliz aztertu ziren, eta ondoren Tukey-ren post hoc bikoteka konparaketak egin ziren (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, AEB, 1989–2007). Erregresio linealaren analisiak kontzentrazio-menpeko urea-ingesta deskribatu zuen eta ostalariaren bila dabiltzan eta odola xurgatzen duten eltxoen arteko erantzunak alderatu zituen (GraphPad Prism v8.0.0 for Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, AEB).
Adin-talde bakoitzeko 20 µl inguruko gernu-laginak Chromosorb® W/AW-n (10 mg 80/100 sare, Sigma Aldrich) lotu eta eztainuzko kapsuletan (8 mm × 5 mm) sartu ziren. Kapsulak CHNS/O analizatzaile baten (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AEB) errekuntza-ganberan sartu ziren gernu freskoan eta zahartuan nitrogeno-edukia zehazteko, fabrikatzailearen protokoloaren arabera. Nitrogeno osoa (g N l-1) kuantifikatu zen, estandar gisa erabilitako urea-kontzentrazio ezagunetan oinarrituta.
Dietak ostalari bila dabiltzan eta odola xurgatzen duten emeen biziraupenean duen eragina ebaluatzeko, eltxoak banan-banan Petri plaka handietan jarri ziren (12 cm-ko diametroa eta 6 cm-ko altuera; Semadeni), estalkian sare batez estalitako zulo batekin (3 cm-ko diametroa), aireztapenerako eta janari hornidurarako. Dietak 4 egun eman ondoren eman ziren eta % 1eko behi gernu fresko eta zahartu diluitua, lau urea kontzentrazio eta bi kontrol, % 10eko sakarosa eta ura barne hartzen zituzten. Dieta bakoitza pipeta batekin hortz-tanpoi batean (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) sartu zen, 5 ml-ko xiringa batean (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE) sartuta, enboloa kendu eta Petri plaka baten gainean jarri zen (1. irudia).1A). Aldatu dieta egunero. Mantendu laborategia goian deskribatutako moduan. Bizirik iraun zuten eltxoak egunean bi aldiz zenbatu ziren, eta hildako eltxoak baztertu ziren azken eltxoa hil arte (n = 40 tratamendu bakoitzeko). Dieta desberdinekin elikatu ziren eltxoen biziraupena estatistikoki aztertu zen Kaplan-Meyer biziraupen kurbak erabiliz. eta log-rank probak dieten arteko biziraupen-banaketaren konparaketak alderatzeko (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Attisano et al.-en [17] oinarritutako eltxo-hegalarien errota pertsonalizatua, 5 mm-ko lodierako panel akriliko gardenekin egina (10 cm zabal x 10 cm luze x 10 cm altu), aurrealdeko eta atzeko panelik gabe (3. irudia: goian). Gas kromatografia zutabe batez egindako hodi bertikal batekin (0,25 mm barne-diametroa; 7,5 cm luzera), muturrak 9 cm-ko distantziara dauden neodimio iman pare baten artean esekita dauden intsektu-orratz bati itsatsita dituen biraketa-muntaketa bat. Material bereko hodi horizontal batek (6,5 cm luzera) hodi bertikala erdibitzen zuen beso lotuta bat eta aluminiozko paper zati txiki bat zeraman beso bat osatzeko, argia eteteko seinale gisa.
24 orduz gose izan ziren emeei goiko dieta eman zitzaien 30 minutuz mugatu aurretik. Elikadura osoa jaso zuten eltxo emeak banan-banan anestesiatu ziren izotzean 2-3 minutuz eta intsektuen pintzelei lotu zitzaizkien erle-argizaria erabiliz (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) eta gero hodi horizontalen besoei lotu zitzaizkien. Hegalari-errota. Hegaldi bakoitzeko birak datu-erregistro pertsonalizatu batekin erregistratu ziren, ondoren gorde eta PC-Lab 2000™ softwarea erabiliz bistaratu ziren (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Hegalari-errota klima-erregulatutako gela batean jarri zen (12 h:12 h, argia: iluna, 25 ± 2 °C, 65 ± % 5 RH).
Hegaldi-jardueraren eredua bistaratzeko, hegaldi-distantzia osoa (m) eta jarraian egindako hegaldi-jardueren kopuru osoa kalkulatu ziren orduko 24 orduko epean. Horrez gain, eme bakoitzak egindako batez besteko distantziak tratamenduen artean alderatu eta ANOVA unidirekzionala eta Tukey-ren post hoc analisia (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) erabiliz aztertu ziren, non batez besteko distantzia aldagai mendekotzat hartu zen, tratamendua faktore independentea den bitartean. Horrez gain, txandenen batez besteko kopurua 10 minutuko gehikuntzetan kalkulatzen da.
An.arabiensis-en ugalketa-errendimenduan dietak duen eragina ebaluatzeko, sei eme (4 dpe) zuzenean Bugdorm kaioletara (30 cm × 30 cm × 30 cm) eraman ziren odola bildu ondoren, eta ondoren dieta esperimentala eman zitzaien 48 orduz, goian deskribatu bezala. Ondoren, dietak kendu eta erruteko edalontziak (30 ml; Nolato Hertila) eman zitzaizkien hirugarren egunean 48 orduz, 24 orduro aldatuz. Errepikatu dieta-erregimen bakoitza 20-50 aldiz. Arrautzak zenbatu eta erregistratu ziren kaiola esperimental bakoitzerako. Arrautzen azpilaginak erabili ziren arrautza indibidualen batez besteko tamaina eta luzeraren aldakuntza (n ≥ 200 dieta bakoitzeko) ebaluatzeko, Dialux-20 mikroskopio bat (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) erabiliz, Leica Kamera (DFC) 320 R2 batekin hornitua; Leica Microsystems Ltd., DE). Gainerako arrautzak klima-kontrolatutako gela batean gorde ziren hazkuntza-baldintza estandarretan 24 orduz, eta duela gutxi agertu ziren lehen estadioko larben azpilagin bat (n ≥ 200 dieta bakoitzeko) neurtu zen, goian deskribatu bezala. Arrautzen kopurua eta arrautzen eta larben tamaina tratamenduen artean alderatu ziren, ANOVA norabide bakarrekoa eta Tukey-ren post hoc analisia erabiliz (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Zebu behietatik eta Arsi arrazetatik jasotako gernu freskotik (laginketa egin eta ordu 1era), 24 orduko, 72 orduko eta 168 orduko gernu zahartuetatik jasotako laginetatik jaso ziren gernu-laginak. Erosotasunerako, gernu-laginak goizaldean bildu ziren, behiak ukuiluan zeudela. 10 gizabanakori gernu-laginak bildu zitzaizkien, eta lagin bakoitzeko 100-200 ml poliamidazko labeko poltsa indibidualetara eraman ziren (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE), 3 litroko poliamidazko estalkidunetan, binil klorurozko plastikozko upeletan. Behi-gernu-lagin bakoitzeko gernu-lagin bakoitzeko gernu-lagin lurrunkorrak zuzenean (fresko) edo giro-tenperaturan 24 orduz, 72 orduz eta 168 orduz heltze ondoren bildu ziren, hau da, gernu-lagin bakoitza adin-talde bakoitzaren ordezkaria zen.
Goi-espazioko lurrunkorrak biltzeko, zirkuitu itxiko sistema bat erabili zen karbon aktibatuz iragazitako gas-jario bat (100 ml min-1) poliamidazko poltsa batetik adsorzio-zutabera 2,5 orduz zirkulatzeko, diafragma-hutseko ponpa bat erabiliz (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Kontrol gisa, goi-espazioko bilketa poliamidazko poltsa huts batetik egin zen. Adsorzio-zutabea Teflon hodiz (5,5 cm x 3 mm diametroa) egina zegoen, 35 mg Porapak Q (50/80 sare; Waters Associates, Milford, MA, AEB) zituena beira-artilezko tapoien artean. Erabili aurretik, zutabea 1 ml birdestilatu destilatu den n-hexanoarekin (Merck, Darmstadt, DE) eta 1 ml pentanoarekin (% 99,0ko disolbatzaile purua GC maila, Sigma Aldrich) garbitu zen. Adsorzioko lurrunkorrak 400 μl pentanoarekin eluitu ziren. Goi-espazioko bildumak batu eta -20 °C-tan gorde ziren analisi gehiago egiteko erabili arte.
An ostalariaren bila dabiltzan eta odola jaten dutenen portaera-erantzunak. Gernu freskotik, 24 orduko, 72 orduko eta 168 orduko adinetik bildutako buru-espazioko erauzkin lurrunkorrak aztertu ziren Arabidopsis eltxoen erauzkin lurrunkorrak beirazko hodi zuzeneko olfaktometro bat erabiliz [18]. Esperimentuak ZT 13-15 bitartean egin ziren, An-en etxea bilatzeko jardueraren gailurreko aldian. Arab [19]. Beirazko hodi olfaktometro bat (80 cm × 9,5 cm diodometroa) goitik 3 ± 1 lx argi gorriarekin argiztatu zen. Ikatz iragazki bidez iragazitako eta hezetutako aire-fluxuak (25 ± 2 °C, % 65 ± 2 hezetasun erlatiboa) bioanalisia gainditu zuen 30 cm s-1-tan. Airea altzairu herdoilgaitzezko sare-pantaila batzuen bidez pasatzen da, fluxu laminar bat eta luma-egitura uniforme bat sortuz. Hortz-tanpoi-banagailua (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), haizearen aldeko muturrean dagoen 5 cm-ko bobina batetik zintzilik. olfaktometroa, estimulatzailea 5 minuturo aldatuz. Analisirako, buru-espazioko erauzkin bakoitzeko 10 μl erabili ziren estimulu gisa, 1:10 proportzioan diluituta. Pentano kantitate berdina erabili zen kontrol gisa. Ostalarien bila edo odola xurgatzen zuten eltxoak askapen-kaioletan jarri ziren esperimentua hasi baino 2-3 ordu lehenago. Askapen-kaiola olfaktometroaren haizearen kontrako aldean jarri zen, eta eltxoei minutu 1ez egokitzen utzi zitzaien, eta gero kaiolaren tximeleta-balbula ireki zen askatzeko. Tratamenduarekiko edo kontrolarekiko erakarpena aztertu zen askapenaren 5 minututan iturriarekin kontaktuan jarri ziren eltxoen proportzio gisa. Buru-espazioko erauzkin lurrunkor bakoitza eta kontrola gutxienez 30 aldiz errepikatu ziren, eta egun bakar baten ondorioak saihesteko, tratamendu eta kontrol kopuru bera probatu zen esperimentu-egun bakoitzean. Bilatu erantzunak ostalarien eta odolez elikatutakoen artean. Arabiar multzoak eta buru-espaziokoak aztertu ziren erregresio logistiko nominala erabiliz, eta ondoren bikoteka alderatu ziren bakoitzen arteko erlazioetarako (JMP Pro, 14.0.0 bertsioa, SAS Institute Inc.).
An-en errunaldi-erantzuna. Behi-gernu fresko eta zaharretik ateratako buru-espazioko extraktuak Bugdorm kaioletan aztertu ziren (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). 20 ml ur destilatuz betetako plastikozko edalontziak (30 mL; Nolato Hertila) izan ziren errunaldi-substratua, eta kaiolaren kontrako izkinetan jarri ziren, 24 cm-ko distantziarekin. Tratamendu-edalontziak buru-espazioko extraktu bakoitzeko 10 μl-rekin egokitu ziren, 1:10 diluzioan. Pentano kantitate berdina erabili zen kontrol-kopa doitzeko. Tratamendu- eta kontrol-kopak trukatu ziren esperimentu bakoitzaren artean, posizio-efektuak kontrolatzeko. Odolez elikatutako hamar eme askatu ziren esperimentu-kaioletan ZT 9-11 bitartean, eta edalontzietan zeuden arrautzak 24 ordu geroago zenbatu ziren. Errinaldi-indizea kalkulatzeko formula hau da: (tratamendu-kopan jarritako arrautza kopurua - kontrol-kopan jarritako arrautza kopurua)/(jarritako arrautza kopuru osoa). Tratamendu bakoitza 8 aldiz errepikatu zen.
An.arabiensis emearen gas kromatografia eta antena elektronikoen patroien detekzio (GC-EAD) analisia aurretik deskribatu bezala egin zen [20]. Laburbilduz, espazioko lurrunkor freskoen erauzketak Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, AEB) bat erabiliz bereizi ziren, HP-5 zutabe batekin hornitua (30 m × 0,25 mm dia, 0,25 μm-ko film lodiera, Agilent Technologies). eta gernu zahartua. Hidrogenoa erabili zen fase mugikor gisa, 45 cm s-1-ko batez besteko fluxu linealarekin. Lagin bakoitza (2 μl) 30 segundoz injektatu zen zatiketarik gabeko moduan, 225 °C-ko sarrera-tenperaturan. GC labearen tenperatura 35 °C-tik (3 minutuko eutsia) 300 °C-ra (10 minutuko eutsia) programatu zen, 10 °C min-1-tan. GC efluente-banatzailean, 4 psi nitrogeno gehitu eta 1:1 zatitu zen Gerstel 3D/2 bolumen hil baxuko gurutze batean (Gerstel, Mülheim, DE), sugar ionizazio detektagailuaren eta EAD-aren artean. EAD-rako GC efluente-kapilarra Gerstel ODP-2 transferentzia-lerro batetik pasa zen, GC labearen tenperatura gehi 5 °C-ko jarraipena egiten duena, beirazko hodi batera (10 cm × 8 mm), non karbono-iragazkidun aire hezetuarekin nahastu zen (1,5 l min-1). Antena jarri zen Hodiaren irteeratik 0,5 cm-ra. Eltxo bakoitzak erreplika bat izan zuen, eta ostalari-bilatzaileen eltxoen kasuan, gutxienez hiru erreplika egin ziren adin bakoitzeko gernu-laginetan.
Behi-gernu fresko eta zahartuaren goi-espazioko bildumetan konposatu bioaktiboen identifikazioa GC eta masa-espektrometro konbinatu bat erabiliz (GC-MS; 6890 GC eta 5975 MS; Agilent Technologies), GC-EAD analisian antena-erantzunak lortzeko, 70 eV-tan elektroi-inpaktu ionizazio moduan funtzionatuz. GC-a HP-5MS UI-z estalitako silize urtuzko kapilar-zutabe batekin hornituta zegoen (60 m × 0,25 mm barne-diametroa, 0,25 μm-ko film-lodiera), helioa fase mugikor gisa erabiliz, 35 cm s-1-ko batez besteko fluxu-tasa linealarekin. 2 μl-ko lagin bat injektatu zen GC-EAD analisirako injektore-ezarpen eta labe-tenperatura berdinak erabiliz. Konposatuak haien atxikipen-denboraren (Kovát indizea) eta masa-espektroen arabera identifikatu ziren, liburutegi pertsonalizatuarekin eta NIST14 liburutegiarekin (Agilent) alderatuta. Identifikatutako konposatuak estandar autentikoak injektatuz baieztatu ziren (1. fitxategi gehigarria: S2 taula). Kuantifikaziorako, heptilo azetatoa (10 ng, % 99,8ko purutasun kimikoa, Aldrich) kanpoko estandar gisa injektatu zen.
Ans.arabiensis ostalariaren bila dabiltzan eta odol-xurgatzaileak erakartzeko gernu fresko eta zahartuan identifikatutako konposatu bioaktiboez osatutako usain sintetiko nahasketa baten eraginkortasuna ebaluatzea, goiko olfaktometro eta protokolo bera erabiliz. Nahaste sintetikoek gernu fresko, 24 orduko, 48 orduko, 72 orduko eta 168 orduko gernu zahartuaren buru-espazioko lurrunkor nahasketako konposatuen osaera eta proportzioak imitatu zituzten (5D-G irudia; 1. fitxategi gehigarria: S2 taula). Analisirako, erabili nahasketa guztiz sintetikoaren 10 μl 1:100 diluzio, gutxi gorabehera 140-2400 ng h-1 arteko askapen-tasa orokorrarekin, ostalariaren eta odol-xurgatzaileen eltxoen erakargarritasuna ebaluatzeko. Ondoren, proba nahasketa osoetan egiten da, non nahasketa osoaren konposatu bakarreko nahasketa kengarriak kentzen diren. Ans. arabiensis ostalariaren eta odolez elikatutako eltxoen bilaketa-erantzunak bilatu ziren. Arab vs. nahasketa sintetikoak eta kengarriak erregresio logistiko nominala erabiliz aztertu ziren, eta ondoren bikoteka alderatu ziren bakoitietarako. ratioak (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Behi-gernua malaria eltxoentzako ostalari-habitat gisa balio dezakeen ebaluatzeko, goian deskribatutako moduan bildutako behi-gernu freskoa eta zaharra eta ura 3 litroko ontzietan (100 ml) jarri eta ostalari-beita-tranpetan jarri ziren. (BG-HDT bertsioa; BioGents, Regensburg, DE). Hamar tranpa larreetan 50 m-ko distantziara jarri ziren, herrixka-komunitatetik 400 m-ra (Silay, Etiopia, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) eta behirik gabe, hazkuntza-eremu iraunkorretan eta herrixketan. Bost tranpa berotu ziren ostalari baten presentzia simulatzeko, eta beste bost tranpa berotu gabe utzi ziren. Tratamendu-kokapen bakoitza gauero txandakatzen da, guztira bost gauez. Adin desberdinetako gernuarekin beitatutako tranpetan harrapatutako eltxoen kopuruak erregresio logistikoa erabiliz alderatu ziren, beta banaketa binomial batekin (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Maki herritik gertu dagoen malaria endemikoa den herrixka batean, Oromia eskualdean, Etiopian (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; 6A irudia). Ikerketa abuztuaren erdialdetik irailaren erdialdera bitartean egin zen, urteroko barruko ihinztadura hondar-ihinztaduraren aurretik, euri-sasoi luze batekin batera. Herriaren kanpoaldean kokatutako bost etxe bikote (20-50 m-ko distantziara) hautatu ziren ikerketarako (6A irudia). Etxeak hautatzeko erabilitako irizpideak hauek izan ziren: animaliarik ez sartzea etxean, barruko sukaldaritzarik ez egitea (egurra edo ikatza ateratzea) (gutxienez proba-aldian), eta gehienez bi biztanleko etxeak, intsektizidarik gabeko geletan lo egitea. tratatutako eltxo-sarearen azpian. Addis Abeba Unibertsitateko Zientzia Naturalen Fakultateko (CNS-IRB) Ikerketa Etika Berrikusteko Batzorde Instituzionalak (IRB/022/2016) eman du onespen etikoa, Helsinkiko Munduko Medikuntza Elkartearen Adierazpenak ezarritako jarraibideen arabera. Etxeburu bakoitzaren baimena lortu zen osasun-hedapeneko langileen laguntzarekin. Prozesu osoa tokiko administrazioek babesten dute barruti eta auzo ('kebele') mailan. Diseinu esperimentalak 2 × 2 karratu latindar diseinu bat jarraitu zuen, non nahasketa sintetikoak eta kontrolak etxe parekatuei esleitu zitzaizkien lehenengo gauean eta etxeen artean aldatu ziren hurrengo gau esperimentalean. Prozesu hau hamar aldiz errepikatu zen. Gainera, hautatutako etxeetako eltxoen jarduera kalkulatzeko, CDC tranpak bost gau jarraian martxan jartzeko konfiguratu ziren, landa-probaren hasieran, erdian eta amaieran, eguneko ordu berean.
Sei konposatu bioaktibo zituen nahasketa sintetiko bat heptanoan disolbatu zen (% 97,0ko GC disolbatzailea, Sigma Aldrich) eta 140 ng h-1-tan askatu zen kotoizko metxa-banagailu bat erabiliz [20]. Metxa-banagailuak konposatu guztiak proportzio konstanteetan askatzea ahalbidetu zuen 12 orduko esperimentuan zehar. Heptanoa kontrol gisa erabili zen. Fiala Gaixotasunen Kontrolerako eta Prebentziorako Zentroen (CDC) argi-tranparen sarrera-puntuaren ondoan zintzilikatu zen (John W. Hock Company, Gainesville, FL, AEB; 6A irudia). Tranpak lurretik 0,8-1 m-ra zintzilikatu ziren, ohearen oinetatik gertu, eta boluntario batek tratatu gabeko eltxo-sare baten azpian lo egin zuen eta 18:00etatik 06:30etara operatu zen. Sexuaren eta egoera fisiologikoaren arabera harrapatutako eltxoak (elikadurarik gabe, elikadurarekin, erdi-haurdun eta haurdun [21]) ondoren polimerasa-kate-erreakzioaren (PCR) analisia erabiliz aztertu ziren, A. gambiae sl gisa morfologikoki identifikatutako espezieak identifikatzeko. Konplexuko kideak [23]. Eremu-azterketan, etxe parekatuen tranpa-harpak logistika-egokitzapen nominal baten bidez aztertu ziren, non erakarpena mendeko aldagaia zen eta tratamendua (nahasketa sintetikoa vs. kontrola) efektu finkoa (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.). Hemen, χ2 eta p-balioak erakusten ditugu likelihood ratio probatik.
Ebaluatu segurua den ala ez. arabiensis-ek gernua, bere nitrogeno iturri nagusia, urea, zuzenean elikatuz lortu ahal izan zuen, administrazioaren ondorengo 48 orduetan, ostalariaren bilaketa eta odolez elikatutako emeen elikadura-saiakuntzen ondorengo 4 egunetan (dpe) (1A irudia). Bai ostalariaren bilaketa egiten duten emeek, bai odola xurgatzen dutenek, beste edozein dieta edo ur baino sakarosa askoz gehiago xurgatu zuten (F(5,426) = 20,15, p < 0,0001 eta F(5,299) = 56,00, p < 0,0001, hurrenez hurren; 1B eta 1C irudiak). Gainera, ostalariaren bilaketa egiten duten emeek gernuan gutxiago jan zuten 72 ordutan, 168 ordutan gernuarekin alderatuta (1B irudia). Urea zuen dieta bat eskaini zitzaienean, ostalariaren bilaketa egiten duten emeek urea kantitate nabarmen handiagoa xurgatu zuten 2,69 mM-tan, beste kontzentrazio guztiekin eta urarekin alderatuta, % 10eko sakarosatik bereiztezina izan arren. (F(10,813) = 15,72, p < 0,0001; 1D irudia). Hau odolez elikatutako emeen erantzunarekin kontrastatzen zen, normalean urea duten dietak ura baino askoz gehiago xurgatzen baitzituzten, nahiz eta % 10eko sakarosa baino nabarmen gutxiago izan (F(10,557) = 78,35, p < 0,0001; 1E irudia). Gainera, bi egoera fisiologikoak alderatzean, flebotomizatutako emeek urea gehiago xurgatu zuten ostalariaren bila zebiltzan emeek baino kontzentrazio baxuenetan, eta eme hauek urea kantitate antzekoak xurgatu zituzten kontzentrazio handiagoetan (F(1,953) = 78,82, p < 0,0001; 1F eta G irudiak). Urea duen dieta batetik hartutako kontsumoak balio optimoak zituela zirudien arren (1D eta E irudiak), bi egoera fisiologikoetan zeuden emeek xurgatutako urea kantitatea modulatu ahal izan zuten urea kontzentrazio-tarte osoan, modu log-linealean (1E irudia). 1F,G). ).Era berean, badirudi eltxoek nitrogeno-xurgapena kontrolatzen dutela xurgatzen duten gernu-kopurua erregulatuz, gernuan dagoen nitrogeno-kopurua xurgatutako kantitatean islatzen baita (1B, C eta B irudien txertaketak).
Gernuak eta ureak ostalariaren bila dabiltzan eta odol-xurgatzaile eltxoen biziraupenean duten eragina ebaluatzeko, lau adin guztietako emeei gernua eman zitzaien (freskoa, 24 ordu, 72 ordu eta 168 orduko gernua) eta urea kontzentrazio sorta bat, baita ur destilatua eta % 10eko sakarosa ere, kontrol gisa erabili ziren (2A irudia). Biziraupenaren analisi honek erakutsi zuen dietak eragin nabarmena zuela ostalariaren bila dabiltzan emeen biziraupen orokorrean (gernua: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; urea: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; 2B eta C irudiak) eta odolez elikatutako emeen biziraupen orokorrean (gernua: χ2 = 93,0, df = 5, p < 0,0001; urea: χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; 2B eta C irudiak). 2D,E). Esperimentu guztietan, gernu, urea eta uraz osatutako dieta bat elikatu zuten emeek biziraupen-tasa nabarmen txikiagoak izan zituzten sakarosa dieta bat elikatu zuten emeekin alderatuta (2B-E irudia). Gernu freskoa eta zaharkitua elikatu zuten ostalariaren bila dabiltzan emeek biziraupen-tasa desberdinak erakutsi zituzten, 72 orduko gernu zaharkitua (p = 0,016) elikatu zutenek izan zutelarik biziraupen-probabilitate txikiena (2B irudia). Gainera, 135 mM urea elikatu zuten ostalariaren bila dabiltzan emeek ur-kontrolekoek baino gehiago bizirik iraun zuten (p < 0,04) (2C irudia). Urarekin alderatuta, gernu freskoa eta 24 orduko gernua elikatu zituzten emakumeek gehiago bizirik iraun zuten (p = 0,001 eta p = 0,012, hurrenez hurren; 2D irudia), eta 72 orduko gernua elikatu zuten emakumeek gernu fresko laburra eta 24 orduko gernu zaharra elikatu zituztenek baino gehiago bizirik iraun zuten (p < 0,0001 eta p = 0,013, hurrenez hurren; 2D irudia). 135 mM elikatu zirenean urea, odolez elikatutako emeek urea eta uraren beste kontzentrazio guztiek baino denbora gehiagoz bizirik iraun zuten (p < 0,013; 2E irudia).
Anopheles arabinis eme ostalariaren eta odol-xurgatzailearen biziraupena behi-geruzaz eta urez elikatzen direnean. Bioanalisian (A), eltxo emeei behi-geruza fresko eta zaharraz, urea kontzentrazio desberdinez, sakarosaz (% 10) eta ur destilatuaz (H2O) osatutako dieta eman zitzaien. Ostalariaren bila dabiltzan (B, C) eta odol-xurgatzaileen (D, E) eltxoen biziraupena 12 orduro erregistratu zen, eme guztiak geruzaz (B, D) eta ureaz (C, E) elikatu arte, eta kontrol-taldeak, sakarosaz eta ura, hil arte.
24 orduko epean hegaldi-errota proban zehaztutako distantzia osoa eta txanda kopurua desberdinak izan ziren ostalariaren bila zebiltzan eltxoen eta odola xurgatzen zuten eltxoen artean, eta hauek hegaldi-jarduera txikiagoa erakutsi zuten oro har (3. irudia). Gernu freskoa eta zaharra edo sakarosa eta ura eman zuten ostalariaren bila zebiltzan eltxoek hegaldi-eredu desberdinak erakutsi zituzten (3. irudia), gernu freskoaz elikatzen ziren emeak egunsentian aktiboagoak ziren bitartean, 24 eta 168 orduko adina zutenak. Gernuaz elikatzen ziren eltxoek hegaldi-eredu desberdinak erakutsi zituzten eta batez ere egunekoak ziren. Sakarosa edo 72 orduko gernua eman zuten eltxo emeek jarduera erakutsi zuten 24 orduko epean zehar, eta ura eman zuten emeak erdiko epean aktiboagoak izan ziren. Sakarosaz elikatzen ziren eltxoek jarduera-maila altuenak gauez berandu eta goizaldean erakutsi zituzten, eta 72 orduko gernua irentsi zutenek jardueraren beherakada etengabea izan zuten 24 ordutan zehar (3. irudia).
Ehiztari-bila dabiltzan Anopheles arabinis eme odol-xurgatzaileen hegaldi-errendimendua behi-geruza eta ureaz elikatzen direnean. Hegaldi-errotaren proban, eltxo emeek behi-geruza fresko eta zaharraz, urea, sakarosa (% 10) eta ur destilatuaz (H2O) kontzentrazio desberdinez elikatu ziren beso horizontal eta libreki biratzen ari zirenetara (goian). Ostalarien bila dabiltzan (ezkerrean) eta odol-xurgatzaileen (eskuinean) emeentzat, dieta bakoitzerako orduko distantzia osoa eta hegaldi kopurua erregistratu ziren 24 orduko epean (iluna: grisa; argia: zuria). Batez besteko distantzia eta saio kopurua jarduera zirkadianoaren grafikoaren eskuinaldean ageri dira. Errore-barrek batez bestekoaren errore estandarra adierazten dute. Analisi estatistikoa, ikusi testua.
Oro har, ostalarien bila dabiltzan emeen hegaldi-jarduera orokorra 24 orduko epean hegaldi-distantziaren antzeko eredua jarraitu zuen. Batez besteko hegaldi-distantzia irentsitako dietak eragin handia izan zuen (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), eta ostalarien bila dabiltzan emeek 72 orduko gernua irentsi zutenek distantzia nabarmen luzeagoak egin zituzten hegan beste dieta guztiekin alderatuta (p < 0,0001), eta sakarosaz elikatutako eltxoek denbora gehiagoz hegan egin zuten gernu freskoarekin (p = 0,022) eta 24 orduko gernuarekin (p = 0,022) elikatutako eltxoekin alderatuta. Gernu-dietak deskribatutako hegaldi-jarduera-ereduaren aldean, ureaz elikatutako ostalarien bila dabiltzan emeek hegaldi-jarduera iraunkorra erakutsi zuten 24 orduko epean, fase ilunaren bigarren erdian gailurra joz (3. irudia). Jarduera-ereduak antzekoak izan arren, ureaz elikatutako ostalarien bila dabiltzan emeek batez besteko hegaldi-distantzia nabarmen handitu zuten xurgatutako kontzentrazioaren arabera (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Urea kontzentrazio oroz elikatu ziren ostalaria bilatzen zuten emeek ura edo sakarosa elikatu ziren emeek baino denbora gehiagoz hegan egin zuten (p < 0.03).
Odola xurgatzen duten eltxoen hegaldi-jarduera orokorra egonkorra eta eutsi egin zitzaion 24 orduz dieta guztietan, gernu-jarduera handituz iluntasun-aldiaren bigarren erdian, bai urez elikatutako emeetan, bai fresko eta 24 orduko emeetan (3. irudia). Gernu-dietak eragin handia izan zuen odolez elikatutako emeen batez besteko hegaldi-distantzian (F(5, 138) = 4,83, p = 0,0004), baina urea dietak ez (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) beste gernu-dietarekin eta kontrol-dietarekin (freskoa, p = 0,0091; 72 ordu, p = 0,0022; 168 ordu, p = 0,001; sakarosa, p = 0,0017; dH2O, p = 0,036).
Gernu eta urea elikadurak ugalketa-parametroetan dituen eraginak arrautza-erruketa bioanalisietan ebaluatu ziren (4A irudia) eta eme bakoitzak jarritako arrautza kopuruaren, arrautzaren tamainaren eta lehen estadioko larba berrien arabera ikertu ziren. Arrautza kopurua. Gernuz elikatutako eme arabiarrak dietaren arabera aldatu ziren (F(5,222) = 4,38, p = 0,0008; 4B irudia). 24 orduko gernu- eta odol-irina elikatutako emeek beste gernu-dieta batzuk elikatutako emeek baino arrautza askoz gehiago jarri zituzten eta sakarosa elikatutakoen antzekoak ziren (4B irudia). Era berean, gernuz elikatutako emeek jarritako arrautzen tamaina dietaren arabera aldatu zen (F(5, 209) = 12,85, p < 0,0001), 24 orduko gernu- eta sakarosa-elikatutako emeek urarekin elikatutako emeek baino arrautza askoz handiagoak jarri zituzten, 168 orduko gernuarekin elikatutako emeen arrautzak, berriz, nabarmen txikiagoak ziren (4C irudia). Gainera, gernu-dietak larben tamainan eragin nabarmena izan zuen (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), 24 eta 72 orduko gernuz elikatutako emeek jarritako arrautzetatik larba nabarmen handiagoak ateratzen zirelarik, larba arrautzen arrautzetatik baino. Urarekin elikatutako eta 168 orduko gernuz elikatutako emeak (4D irudia).
Anopheles arabinis emeen ugalketa-errendimendua behi-geruzaz eta ureaz elikatzen direnean. Odolez elikatutako eltxo emeei behi-geruza fresko eta zaharraz, urea kontzentrazio desberdinez, sakarosaz (% 10) eta ur destilatuaz (H2O) osatutako dietak eman zitzaizkien 48 orduz, bioanalisietan sartu eta arrautzak erruteko substratuak lortu aurretik (A). Arrautza kopurua (B, E), arrautza tamaina (C, F) eta larben tamaina (D, G) nabarmen eragin zituen emandako dietak (behi-geruza: BD; urea: EG). Letra-izen desberdinak erabiliz neurtutako parametro bakoitzerako batez bestekoak nabarmen desberdinak ziren elkarrengandik (ANOVA norabide bakarrekoa Tukey-ren post hoc analisia erabiliz; p < 0,05). Errore-barrek batez bestekoaren errore estandarra adierazten dute.
Gernuaren nitrogeno-osagai nagusia denez, urea, odolez elikatutako emeei dieta gisa ematen zitzaienean, ugalketa-parametroetan eragin nabarmena izan zuen ikerketa guztietan. Ureaz elikatutako emeek odol-jan baten ondoren errun zituzten arrautzen kopurua, urea kontzentrazioaren arabera (F(11, 360) = 4,69; p < 0,0001), 134 µM eta 1,34 mM arteko urea-kontzentrazioaz elikatutako emeek arrautza gehiago errun zituzten (4E irudia). 134 µM edo gehiagoko urea-kontzentrazioaz elikatutako emeek arrautza handiagoak errun zituzten uraz elikatutako emeek baino (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; 4F irudia), eta larben tamaina, amen urea-kontzentrazio antzekoek eraginda ere (F(10, 3305) = 37,9; p < 0,0001), aldakorragoa izan zen (4G irudia).
Behi-gernuaren buru-espazioko lurrunkorren erakarpen orokorra. Beirazko hodi olfaktometroan (5A irudia) ebaluatutako arabiensis-a gernuaren adinaren eragin nabarmena izan zuen (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; 5B irudia). Post hoc analisiak erakutsi zuen 24 ordutan gernu zaharkituaren usainak erakargarritasun maila nabarmen handiagoak eragiten zituela beste tratamendu guztiekin alderatuta (72 ordu: p = 0,0060, 168 ordu: p = 0,012, pentanoa: p = 0,00070), gernu freskoaren usaina izan ezik (p = 0,13; 5B irudia). Odola xurgatzen duten eltxoen gernu-usainarekiko erakarpen orokorra ez zen nabarmen desberdina izan arren (χ2 = 8,78, df = 4, p = 0,067; 5C irudia), eme hauek buru-espazioko lurrunkorren erakarpenarekiko nabarmen erakargarriagoak zirela ikusi zen 72 orduko gernu zaharkituarekin alderatuta, kontrol-taldearekin alderatuta (p = 0,0066; 5C irudia).
Behi-gernuaren usain natural eta sintetikoekiko portaera-erantzunak Anopheles arabianus ostalariaren eta odolez elikatutakoaren bilaketan. Beirazko hodi-olfaktometroaren eskema (A). Behi-gernu fresko eta zaharretik buruko espazioko lurrunkorren erauzkinak ostalariaren (B) eta odol-xurgatzaileen (C) eltxoetara erakartzea. Aurkitu Lord An-en garro-erreakzioa. Behi-gernu freskotik (D), 24 orduko (E), 72 orduko (F) eta 168 orduko (G) zaharretik isolatutako buruko espazioko erauzkinak erakusten dira. Antena elektronikoen detekzio-arrastoek (EAD) tentsio-aldaketak erakusten dituzte gas-kromatografotik eluitu eta sugar-ionizazio detektagailu batek (FID) detektatu dituen buruko espazioko konposatu bioaktiboei erantzunez. Eskala-barrak erantzun-anplitudea (mV) atxikipen-denboraren (s) arabera adierazten du. Konposatu biologikoki aktiboen propietateak eta askapen-tasak (µg h-1) erakusten dira. Asterisko bakar batek (*) anplitude baxuko erantzun koherentea adierazten du. Asterisko bikoitzek (**) erantzun erreproduziezinak adierazten dituzte. Aurkitu ostalaria (H) eta odol-xurgatzailea (I) An.arabiensis-ek behi-gernu fresko eta zaharreko usainen nahasketa sintetikoekiko erakargarritasun desberdinak ditu. Letra-izen desberdinek erakarritako eltxoen batez besteko proportzioak nabarmen desberdinak ziren elkarren artean (ANOVA norabide bakarrekoa, Tukey-ren post hoc analisia erabiliz; p < 0,05). Errore-barrek eskalaren errore estandarra adierazten dute.
Ann.arabiensis emeak, odol-janaren ondorengo 72 eta 120 orduetan, errunaldian zehar, ez zuen lehentasunik erakutsi behi-gernu fresko eta zaharretik ateratako buruko espazioko erauzkin lurrunkorrekiko, pentano kontrolekin alderatuta (χ2 = 3.07, p > 0.05; 1. fitxategi gehigarria: S1 irudia).
Ann.arabiensis emearentzat, GC-EAD eta GC-MS analisietan zortzi, sei, hiru eta hiru konposatu bioaktibo identifikatu ziren (5D-G irudia). Erantzun elektrofisiologikoak eragin zituzten konposatuen kopuruan aldeak ikusi ziren arren, konposatu horietako gehienak gernu freskotik eta zahartutik bildutako buru-espazioko lurrunkor-estraktu bakoitzean zeuden. Beraz, estraktu bakoitzerako, atalasearen gainetik antena emeetatik erantzun fisiologiko bat sortu zuten konposatuak bakarrik sartu ziren analisi gehiagotan.
Buruko espazioko bilduman konposatu bioaktiboen lurrunkor askapen-tasa osoa 29 µg h-1-tik gernu freskoan 242 µg h-1-ra igo zen 168 orduko gernu zahartuan, batez ere p-kresol eta m-formaldehidoaren ondorioz. Fenolaren eta fenolaren igoerak direla eta. Aitzitik, beste konposatu batzuen askapen-tasak, hala nola 2-ziklohexen-1-ona eta dekanala, gutxitu egin ziren gernu-adina handitu ahala, eta hori kromatograman (5D irudia)-G ezkerreko panela) seinale-intentsitatearen (ugaritasunaren) jaitsierarekin eta konposatu hauei emandako erantzun fisiologikoekin (5D irudia-G eskuineko panela) korrelazionatu zen.
Oro har, nahasketa sintetikoak gernu fresko eta zahartuaren buru-espazioetako erauzkin lurrunkorretan identifikatutako konposatu bioaktiboen proportzio natural antzekoa zuen (5D-G irudia) eta ez zirudien erakargarritasun esanguratsurik piztu ostalari baten bilaketan (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; 5H irudia) edo odola xurgatzen duten eltxoen bilaketan (χ2 = 4,91, df = 4, p = 0,30; 5I irudia). Hala ere, tratamenduen arteko post hoc bikoteka egindako konparaketek erakutsi zuten ostalaria bilatzen zuten eltxoak nabarmen erakargarriak zirela 24 orduko gernu zahartuaren nahasketa sintetikoarentzat, pentano kontrolekin alderatuta (p = 0,0086; 5H irudia).
24 orduko gernu-nahaste sintetikoetan osagai indibidualen eginkizuna ebaluatzeko, sei nahasketa kengarri ebaluatu ziren nahasketa osoen aurka Y-hodiaren analisian, non konposatu indibidualak kendu ziren. Ostalariak bilatzen dituzten eltxoentzat, konposatu indibidualak nahasketa osotik kentzeak eragin nabarmena izan zuen portaera-erantzunetan (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; 1. fitxategi gehigarria: S2A irudia), nahasketa kengarri guztiak erakargarriagoak izan ziren guztiz nahastuta baino txikiagoak. Aitzitik, konposatu indibidualak nahasketa guztiz sintetikotik kentzeak ez zuen eraginik izan odola xurgatzen duten eltxoen portaera-erantzunetan (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), dekanala izan ezik, zeinak maila baxuagoak eragin baitzituen nahasketa osoarekin alderatuta Erakarpenarekin (p = 0.022; 1. fitxategi gehigarria: S2B irudia).
Etiopiako malaria endemikoa den herrixka batean, 24 orduko behi-gernuaren nahasketa sintetiko baten eraginkortasuna eltxoak erakartzeko landa-baldintzetan hamar gauz ebaluatu zen (6A irudia). Guztira 4.861 eltxo harrapatu eta identifikatu ziren, eta horietatik % 45,7 Anthropus.gambiae sl ziren, % 18,9 Anopheles pharoensis eta % 35,4 Culex spp. (1. fitxategi gehigarria: S1 taula). Anopheles arabinis da PCR analisi bidez identifikatutako An.Gambian espezie-konplexuko kide bakarra. Batez beste, 320 eltxo harrapatu ziren gau bakoitzeko, eta denbora horretan, nahasketa sintetikodun beita zuten tranpek nahasketarik gabeko tranpa parekatuek baino eltxo gehiago harrapatu zituzten (χ2(0, 3196) = 170,0, p < 0,0001). Beitarik gabeko tranpak jarri ziren bost kontrol-gauetan, entseguaren hasieran, erdian eta amaieran. Eltxo kopuru antzekoa harrapatu zen eltxo bikote bakoitzean. tranpak, etxeen arteko alborapenik ez dagoela adieraziz (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) eta populazio jaitsierarik ez azterketa-aldian. Kontrol-tranpekin alderatuta, nahasketa sintetikoa zuten tranpetan harrapatutako eltxoen kopurua nabarmen handitu zen: ostalariaren bilaketa (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), odol-elikadura berri bat (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) eta haurdunaldia (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; 1. fitxategi gehigarria: S1 taula). Hori islatzen da harrapatutako eltxo kopuru osoan ere: ostalariaren bilaketa > odol-xurgatzailea > haurdun > erdi-haurdun > arrak.
24 orduko behi-gernu usain nahasketa sintetiko baten eraginkortasunaren ebaluazio eremua. Eremu-probak Etiopiako hego-erdialdean egin ziren (mapa), Maki herriaren ondoan (txertatu), Gaixotasunen Kontrolerako Zentroen (CDC) argi-tranpa bat erabiliz (eskuinean) etxe binakatuetan, diseinu karratu latindarrarekin (aireko irudia) (A). Usain-beita sintetikodun CDC fototranpek Anopheles arabesko emeak erakarri eta harrapatzen dituzte (B), baina ez Anopheles farroeak (C), modu ezberdinean, egoera fisiologikoaren araberako efektu bat. Gainera, tranpa hauek ostalari Culex eltxoen kopuru nabarmen handiagoa harrapatu zuten. (D) Kontrolarekin alderatuta. Ezkerreko barrek usain-beita (berdea) eta kontrol-tranpa (irekia) bikoteetan harrapatutako eltxoen hautaketa-indizearen batez bestekoa adierazten dute (N = 10), eta eskuineko barrek kontrol-tranpa bikoteetan (irekia; N = 5) batez besteko hautaketa-indizea adierazten dute. ). Asteriskoek esangura-maila estatistikoak adierazten dituzte (*p = 0,01 eta ***p < 0,0001).
Hiru espezieak modu ezberdinean harrapatu ziren nahasketa sintetikoak zituzten tranpetan. Ostalariaren bila (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), odol-elikadura (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) eta haurdunaldiaren bila (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) .arabiensis bat harrapatuta geratu zen nahasketa sintetikoa askatuz tranpan (6B irudia), An kantitatea ez zen desberdina izan bitartean. Pharoensis egoera fisiologiko desberdinetan aurkitu ziren (6C irudia). Culex-en kasuan, ostalarien bila zebiltzan eltxoen kopuruaren igoera esanguratsua baino ez zen aurkitu nahasketa sintetikoarekin amua jarritako tranpetan (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; 6D irudia), kontrol-tranpekin alderatuta.
Etiopiako hazkuntza-guneen eta landa-komunitateen artean ostalari potentzialetatik kanpo kokatutako ostalari-beita-tranpak erabili ziren malaria-eltxoek behi-gernuaren usaina ostalariaren habitataren seinale gisa erabiltzen duten ebaluatzeko. Ostalariaren seinalerik, berorik eta behi-gernuaren usainarekin edo gabe, ez zen eltxorik harrapatu (1. fitxategi gehigarria: S3 irudia). Hala ere, tenperatura altua eta behi-gernuaren usaina zeudenean, malaria-eltxo emeak erakarri eta harrapatu ziren, kopuru txikian izan arren, gernu-adina kontuan hartu gabe (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; 1. fitxategi gehigarria: S3 irudia). Aitzitik, ur-kontrolek ez zituzten malaria-eltxoak harrapatu tenperatura altuetan (1. fitxategi gehigarria: S3 irudia).
Malaria eltxoek nitrogenoa duten konposatuak eskuratzen eta banatzen dituzte behi-gernua (hau da, putzuak) konpentsazio bidez elikatuz, bizi-historiaren ezaugarriak hobetzeko, beste intsektu batzuek bezala [2, 4, 24, 25, 26]. Behi-gernua baliabide berriztagarria da, malaria bektoreen atsedenlekuekin estuki lotuta, hala nola behitegiekin eta landa-etxebizitzen eta errunaldi-guneen ondoan dauden landaredi altuekin. Eltxo emeek baliabide hau usaimenaren bidez aurkitzen dute eta gernuan dauden konposatu nitrogenatuen xurgapena erregulatu dezakete, urea barne, gernuko osagai nitrogenatu nagusia [15, 16]. Eltxo emearen egoera fisiologikoaren arabera, gernuko mantenugaiak esleitzen dira ostalariak bilatzen dituzten eltxo emeen hegaldi-jarduera eta biziraupena hobetzeko, baita odolez elikatutako banakoen biziraupena eta ugalketa-ezaugarriak hobetzeko ere, lehen ziklo gonadotropikoan. Beraz, gernu-nahasketak nutrizio-rol garrantzitsua du heldu desnutrituak bezala itxita dauden malaria bektoreentzat [8], eltxo emeei konposatu nitrogenatu garrantzitsuak eskuratzeko gaitasuna ematen baitie arrisku txikiko elikaduran parte hartuz. Aurkikuntza honek ondorio epidemiologiko garrantzitsuak ditu, emeek beren... bizi-itxaropena, jarduera eta ugalketa-irteera, eta horiek guztiek bektoreen gaitasunean eragina dute. Gainera, portaera hau etorkizuneko bektoreen kudeaketa-programen helburua izan daiteke.