Gbígbà àti pínpín oúnjẹ pọ̀ mọ́ àwọn ànímọ́ wíwá kòkòrò àti ìtàn ìgbésí ayé. Láti san àbùkù àwọn èròjà pàtàkì ní àwọn ìpele ìgbésí ayé ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀, àwọn kòkòrò lè gba àwọn èròjà wọ̀nyí nípasẹ̀ oúnjẹ àfikún, fún àpẹẹrẹ, nípa jíjẹ àwọn èròjà onípele nínú ìlànà kan tí a mọ̀ sí àwọn adágún omi. Ó dàbí pé ẹ̀fọn Anopheles arabiani kò ní oúnjẹ tó dára, nítorí náà, ó nílò àwọn èròjà oúnjẹ fún ìṣiṣẹ́ ara àti ìbísí. Ète ìwádìí yìí ni láti ṣe àyẹ̀wò bóyá ìgbìyànjú An. arabiensis lórí ìtọ̀ màlúù fún gbígbà oúnjẹ mú kí àwọn ànímọ́ ìtàn ìgbésí ayé sunwọ̀n síi.
Rí i dájú pé ó wà ní ààbò. arabiensis ní òórùn ìtọ̀ màlúù tuntun, wákàtí 24, wákàtí 72, àti wákàtí 168, àti àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá ọmọlé àti tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀ (wákàtí 48 lẹ́yìn oúnjẹ) ni a wọn nínú ohun èlò ìwádìí Y-tube olfactometer, a sì ṣe àyẹ̀wò àwọn obìnrin tí wọ́n lóyún fún ìdánwò ìbímọ. Lẹ́yìn náà, a lo àgbéyẹ̀wò kẹ́míkà àti electrophysiological láti dá àwọn èròjà bioactive nínú ìtọ̀ màlúù mọ̀ ní gbogbo àwọn ọjọ́-orí mẹ́rin. A ṣe àyẹ̀wò àwọn èròjà bioactive nínú àwọn ìdánwò Y-tube àti pápá. Láti ṣe àyẹ̀wò ìtọ̀ màlúù àti urea compound pàtàkì rẹ̀ gẹ́gẹ́ bí oúnjẹ afikún fún àwọn vector malaria, a wọn àwọn pàrámítà oúnjẹ àti àwọn ànímọ́ ìtàn ìgbésí ayé. A ṣe àyẹ̀wò ìpín àwọn efon obìnrin àti iye ìtọ̀ màlúù àti urea tí a gbà. Lẹ́yìn tí a fún wọn ní oúnjẹ, a ṣe àyẹ̀wò àwọn obìnrin fún ìwàláàyè, ìfò tí a so mọ́ ara wọn, àti ìbímọ.
Wá ẹ̀jẹ̀ àti oúnjẹ àlejò. Nínú ìwádìí yàrá àti pápá, àwọn ará Lárúbáwá ní ìfẹ́ sí òórùn àdánidá àti ti ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti àgbà. Àwọn aboyún kò bìkítà sí ìdáhùn ìtọ̀ màlúù ní àwọn ibi tí wọ́n ti ń bímọ. Àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá àlejò àti tí wọ́n ń fa ẹ̀jẹ̀ máa ń fa ìtọ̀ màlúù àti urea ní gbogbo ìgbà, wọ́n sì máa ń pín àwọn ohun èlò wọ̀nyí sí ara wọn gẹ́gẹ́ bí ìyípadà ìtàn ìgbésí ayé gẹ́gẹ́ bí iṣẹ́ ti ipò ara fún ìrìnàjò, ìwàláàyè, tàbí ìbísí.
Anopheles arabinis gba ati pinpin ito malu fun awọn abuda itan igbesi aye ti o dara si. Ounjẹ afikun ti ito malu ni ipa lori agbara vector taara nipa jijẹ iwalaaye ojoojumọ ati iwuwo vector, ati ni aiṣe-taara nipa yiyipada iṣẹ-ṣiṣe ofurufu ati nitorinaa o yẹ ki a gbero ninu awọn awoṣe ọjọ iwaju.
Gbígbà àti pínpín oúnjẹ pọ̀ mọ́ àwọn ohun tí a fi ń wá kòkòrò àti àwọn ohun tí a fi ń gbé ìgbésí ayé [1,2,3]. Àwọn kòkòrò lè yan oúnjẹ kí wọ́n sì ra, kí wọ́n sì máa fún wọn ní oúnjẹ tó dá lórí wíwà oúnjẹ àti àwọn ohun tí a fi ń gbé oúnjẹ [1, 3]. Pínpín oúnjẹ da lórí ìlànà ìgbésí ayé àti ìtàn, ó sì lè yọrí sí onírúurú ohun tí a nílò fún dídára oúnjẹ àti iye rẹ̀ ní oríṣiríṣi ìpele ìgbésí ayé àwọn kòkòrò [1, 2]. Láti san àléébù àwọn ohun èlò oúnjẹ pàtó kan, àwọn kòkòrò lè gba àwọn ohun èlò oúnjẹ wọ̀nyí nípasẹ̀ oúnjẹ àfikún, bíi lórí ẹrẹ̀, onírúurú ìgbẹ́ àti ìtújáde àwọn ohun èlò ẹlẹ́gbẹ́, àti ẹran tí a fi ń gbé ẹran, ìlànà kan tí a mọ̀ sí àwọn adágún omi [2]. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé a ṣe àpèjúwe onírúurú labalábá àti irú kòkòrò, fífún omi ní ihò tún ń wáyé ní àwọn ìlànà kòkòrò mìíràn, àti fífún wọn ní àwọn ohun èlò wọ̀nyí lè ní ipa pàtàkì lórí ìlera àti àwọn ànímọ́ ìtàn ìgbésí ayé mìíràn [2, 4, 5, 6], 7].Ẹ̀fọn malaria Anopheles gambiae sensu lato (sl) farahàn gẹ́gẹ́ bí àgbàlagbà tí kò ní oúnjẹ tó dáa [8], nítorí náà fífún omi ní omi lè kó ipa pàtàkì nínú àwọn ànímọ́ ìtàn ìgbésí ayé rẹ̀, ṣùgbọ́n ìwà yìí ní títí di ìsinsìnyí ni a ti gbàgbé. Lílo ìdààmú gẹ́gẹ́ bí ọ̀nà láti mú kí oúnjẹ pọ̀ sí i nínú ọkọ̀ pàtàkì yìí yẹ fún àfiyèsí nítorí pé èyí lè ní àwọn àbájáde pàtàkì nípa àjàkálẹ̀-àrùn.
Oúnjẹ nitrogen tó wà nínú àwọn efon Anopheles obìnrin àgbàlagbà kò pọ̀ nítorí pé ìwọ̀nba kalori tó wà nínú wọn láti ìpele ìdin àti àìlo ẹ̀jẹ̀ tó dára tó [9]. Obìnrin Ann.gambiae sl sábà máa ń san án padà nípa fífi oúnjẹ ẹ̀jẹ̀ afikún kún un [10, 11], èyí sì máa ń fi àwọn ènìyàn púpọ̀ sí ewu kíkó àrùn náà àti fífi efon sí ewu pípa ẹran. Ní ọ̀nà mìíràn, efon lè lo oúnjẹ àfikún ti ìgbẹ́ vertebrate láti gba àwọn èròjà nitrogen tó ń mú kí ìyípadà àti ìṣíṣẹ́ ọkọ̀ pọ̀ sí i, gẹ́gẹ́ bí àwọn kòkòrò mìíràn ṣe fi hàn [2]. Ní ti èyí, ìfàmọ́ra tó lágbára àti tó yàtọ̀ síra ti ọ̀kan lára ​​àwọn ẹ̀yà arákùnrin nínú An. Ìṣọ̀kan àwọn ẹ̀yà Gambian sl, Anopheles arabinis, ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti ọjọ́ orí [12,13,14], jẹ́ ohun tó dùn mọ́ni. Anopheles arabinis jẹ́ àǹfààní nínú àwọn ohun tó fẹ́ràn láti gbàlejò, a sì mọ̀ pé ó máa ń so mọ́ màlúù àti láti máa jẹ ẹ́. Ìtọ̀ màlúù jẹ́ orísun tó ní nitrogenous compounds, pẹ̀lú urea tó jẹ́ 50-95% gbogbo nitrogen nínú ìtọ̀ tuntun [15, 16]. Gẹ́gẹ́ bí ìtọ̀ màlúù Àwọn ohun alumọ́ọ́nì tí ó wà ní ọjọ́ orí, àwọn ohun alumọ́ọ́nì tí ó wà ní ìpele yìí ń lo àwọn ohun alumọ́ọ́nì wọ̀nyí láti dín ìṣòro àwọn ohun alumọ́ọ́nì nitrogen kù láàrín wákàtí mẹ́rìnlélógún [15]. Pẹ̀lú ìbísí kíákíá nínú ammonia, tí ó ní í ṣe pẹ̀lú ìdínkù nínú nitrogen organic, àwọn ohun alumọ́ọ́nì alkalophilic (ọ̀pọ̀lọpọ̀ nínú wọn ló ń mú àwọn ohun alumọ́ọ́nì tí ó léwu sí efon) ń dàgbàsókè [15], èyí tí ó lè jẹ́ obìnrin Ann.arabiensis máa ń fà mọ́ ìtọ̀ ní ọjọ́ orí wákàtí mẹ́rìnlélógún tàbí kí ó dín sí i [13, 14].
Nínú ìwádìí yìí, a wá àwọn Ans tí wọ́n gbàlejò àti àwọn tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀. Nígbà ìpele gonadotropin àkọ́kọ́ rẹ̀, a ṣe àyẹ̀wò arabiensis fún gbígba àwọn agbo nitrogenous, títí kan urea, nípa ìdàpọ̀ ìtọ̀. Lẹ́yìn náà, a ṣe àwọn àyẹ̀wò láti ṣe àyẹ̀wò bí àwọn efon abo ṣe ń pín àwọn ohun èlò oúnjẹ tó ṣeé ṣe yìí fún ìdàgbàsókè ìwàláàyè, ìbísí àti ìwákiri síwájú sí i. Níkẹyìn, a ṣe àyẹ̀wò òórùn ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti ọjọ́ orí láti pinnu bóyá àwọn wọ̀nyí pèsè àwọn àmì tó ṣeé gbẹ́kẹ̀lé fún An tí ó gbàlejò àti ẹni tí ó ń jẹ ẹ̀jẹ̀. Nínú ìwákiri wọn fún ohun èlò oúnjẹ tó ṣeé ṣe yìí, arabiensis ṣàwárí ìbáṣepọ̀ kẹ́míkà lẹ́yìn ìfàmọ́ra ìyàtọ̀ tí a rí. Àwọn àdàpọ̀ òórùn sísè tí a fi àwọn èròjà onígbàlódé ṣe (VOCs) tí a dá mọ̀ nínú ìtọ̀ wákàtí mẹ́rìnlélógún ni a tún ṣe àyẹ̀wò síwájú sí i lábẹ́ àwọn ipò pápá, ní fífún àwọn àbájáde tí a rí lábẹ́ àwọn ipò yàrá ìwádìí àti fífi ipa òórùn ìtọ̀ màlúù hàn lórí àwọn ipò ara ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀. Ìfàmọ́ra ẹ̀fọn. Àwọn àbájáde tí a rí jẹ́rìí sí i pé An. arabiensis ń gba àti pín àwọn èròjà nitrogenous tí a rí nínú ìtọ̀ vertebrate láti ní ipa lórí àwọn ànímọ́ ìtàn ìgbésí ayé. Àwọn àbájáde wọ̀nyí ni a jíròrò ní ìbámu pẹ̀lú àwọn àbájáde àjàkálẹ̀ àrùn àti bí a ṣe lè lò wọ́n fún ìṣọ́ra àti ìṣàkóso vector.
A tọju àwọn ẹranko arabican Anopheles (ìrísí Dongola) ní 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH àti ìyípo ìmọ́lẹ̀:dúdú ní wákàtí 12:12. A gbìn àwọn èèpo nínú àwọn àwo ike (20 cm × 18 cm × 7 cm) tí a fi omi tí a ti fọ́ kún, a sì fi oúnjẹ ẹja Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE) bọ́ wọn. A kó àwọn èèpo náà sínú agolo 30 milimita (Nolato Hertila, Åstorp, SE) lẹ́yìn náà a gbé wọn lọ sí àwọn àgò Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) láti jẹ́ kí àgbàlagbà jáde. A fún àwọn àgbàlagbà ní omi sucrose 10% títí di ọjọ́ mẹ́rin lẹ́yìn ìfarahàn (dpe), nígbà náà ni a fún àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá àlejò ní oúnjẹ lẹ́sẹ̀kẹsẹ̀ kí a tó ṣe ìdánwò náà, tàbí kí a fi omi tí a ti fọ́ lulẹ̀ pa wọ́n ní alẹ́ kí a tó ṣe ìdánwò náà, gẹ́gẹ́ bí a ti ṣàlàyé rẹ̀ ní ìsàlẹ̀ yìí. A pa àwọn obìnrin tí a lò fún àwọn ìdánwò ọkọ̀ òfurufú fún ìgbà 4-6 péré. pẹ̀lú omi àti libitum fún wákàtí mélòó kan. Láti pèsè àwọn efon tí ń fa ẹ̀jẹ̀ fún àwọn àyẹ̀wò bio tí ó tẹ̀lé e, a fún àwọn obìnrin 4 dpe ní ẹ̀jẹ̀ àgùntàn tí kò ní ìfàjẹ̀sí (Håtunalab, Bro, SE) nípa lílo ètò ìfúnni ní membrane (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK). Lẹ́yìn náà, a gbé àwọn obìnrin tí wọ́n ti kún fún ìfàjẹ̀sí lọ sí àwọn àgọ́ kọ̀ọ̀kan, a sì fún wọn ní oúnjẹ ní tààrà, gẹ́gẹ́ bí a ti ṣàlàyé rẹ̀ ní ìsàlẹ̀ yìí, tàbí 10% sucrose ad libitum fún ọjọ́ mẹ́ta ṣáájú àwọn àyẹ̀wò tí a ṣàlàyé ní ìsàlẹ̀ yìí. A lo àwọn obìnrin tí ó kẹ́yìn fún àwọn àyẹ̀wò bio tube flight tube, a sì gbé wọn lọ sí yàrá ìwádìí, lẹ́yìn náà a fi omi tí a ti yọ jáde fún wákàtí 4-6 kí àyẹ̀wò náà tó bẹ̀rẹ̀.
A lo àwọn àyẹ̀wò ìfúnni láti mọ iye ìtọ̀ àti lílo urea nínú àwọn obìnrin àgbàlagbà An.Arab. Àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá àlejò àti àwọn tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀ ni a pèsè oúnjẹ tí ó ní 1% ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti ọjọ́ orí tí a ti pò mọ́ omi, onírúurú ìwọ̀n urea, àti àwọn ìṣàkóso méjì (10% sucrose àti omi) fún wákàtí 48. Ní àfikún, a fi àwọ̀ oúnjẹ (1 mg ml-1 xylene cyanide FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) kún oúnjẹ náà, a sì pèsè rẹ̀ nínú matrix 4 × 4 nínú àwọn tube microcentrifuge 250 µl (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Àwòrán 1A) Kún un dé etí (~300 µl). Láti yẹra fún ìdíje láàárín àwọn efon àti àwọn ipa tí àwọ̀ àwọ̀ lè ní, gbé àwọn efon 10 sínú àwo Petri ńlá kan (12 cm ní ìwọ̀n ìlà àti 6 cm ní gíga; Semadeni, Ostermundigen, CH; Àwòrán 1A) nínú òkùnkùn pátápátá ní 25 ± 2 cm °C àti 65 ± 5% ìbáramu. ọriniinitutu. Awọn idanwo wọnyi ni a tun ṣe ni igba 5 si 10. Lẹhin ti o farada si ounjẹ, a gbe awọn efon si -20 °C titi di igba ti a yoo fi ṣe itupalẹ siwaju.
Wa ito ati urea ti abo olugbalejo ati obinrin ti o n fa ẹjẹ mu. Ninu idanwo ifunni (A), a pese ounjẹ awọn efon obinrin pẹlu ounjẹ ti o ni ito malu tuntun ati ti o ti dagba, ọpọlọpọ awọn ifọkansi urea, sucrose (10%), ati omi distilled (H2O). Awọn obinrin ti n wa alejo (B) ati awọn ti o n jẹ ẹjẹ (C) mu sucrose diẹ sii ju eyikeyi ounjẹ miiran ti a ti ṣe idanwo lọ. Ṣe akiyesi pe awọn obinrin ti n wa alejo gba ito malu wakati 72 ti o kere ju ito malu wakati 168 (B). Apapọ akoonu nitrogen apapọ (± iyatọ boṣewa) ti ito ni a fihan ninu atokọ naa. Awọn obinrin ti n wa alejo (D, F) ati awọn ti n mu ẹjẹ (E, G) mu urea ni ọna ti o da lori iwọn lilo. Iwọn apapọ ti a fa simu (D, E) pẹlu awọn orukọ lẹta oriṣiriṣi yatọ si ara wọn pupọ (ANOVA ọna kan nipa lilo itupalẹ Tukey lẹhin hoc; p < 0.05). Awọn ọpa aṣiṣe duro fun aṣiṣe boṣewa ti apapọ (BE). Ila taara duro fun laini regression log-linear (F, G)
Láti tú oúnjẹ tí ó ti gbà sílẹ̀, a gbé àwọn efon sínú àwọn páìpù microcentrifuge 1.5 milimita tí ó ní omi tí a ti tú jáde 230 µl, a sì da àsopọ̀ náà rú nípa lílo ẹ̀rọ pestle àti mótò tí kò ní okùn (VWR International, Lund, SE), lẹ́yìn náà a gbé centrifugation ní 10 krpm fún ìṣẹ́jú 10. A gbé supernatant (200 µl) lọ sí microplate 96-well (Sigma-Aldrich) a sì pinnu absorbance (λ620) nípa lílo spectrophotometer-based microplate reader (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm. Nígbà míìrán, a fi 1 milimita omi tí a ti tú jáde sínú omi tí a ti tú jáde, 900 µl nínú rẹ̀ ni a gbé lọ sí cuvette fún ìwádìí spectrophotometric (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Láti ṣe ìwọ̀n ìwọ̀n oúnjẹ tí a ń jẹ, a pèsè ìlà standard nípa lílo serial dilution láti mú 0.2 µl jáde. sí 2.4 µl ti 1 mg-1 xylene cyanide. Lẹ́yìn náà, a lo ìwọ̀n ojú tí a mọ̀ nípa àwọ̀ láti mọ iye oúnjẹ tí ẹ̀fọn kọ̀ọ̀kan jẹ.
A ṣe àyẹ̀wò ìwádìí ìwọ̀n nípa lílo ìṣàyẹ̀wò ìyàtọ̀ ọ̀nà kan (ANOVA) lẹ́yìn náà, a sì ṣe àfiwéra Tukey lẹ́yìn hoc (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Àwọn ìṣàyẹ̀wò ìyípadà ìlà ṣàlàyé ìwọ̀n urea tí ó sinmi lórí ìfọkànsí àti ìfiwéra àwọn ìdáhùn láàrín àwọn efon tí ń wá àlejò àti àwọn tí ń fa ẹ̀jẹ̀ (GraphPad Prism v8.0.0 fún Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
A so awọn ayẹwo ito to to 20 µl lati ọdọ awọn ọmọ-ori kọọkan sinu Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) a si fi sinu awọn kapusulu tin (8 mm × 5 mm). A fi awọn kapusulu sinu yara ijona ti oluyẹwo CHNS/O (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, US) lati pinnu akoonu nitrogen ninu ito tuntun ati ti o ti dagba gẹgẹbi ilana olupese. A ṣe iwọn apapọ nitrogen (g N l-1) da lori awọn ifọkansi urea ti a mọ ti a lo gẹgẹbi boṣewa.
Láti ṣe àyẹ̀wò ipa oúnjẹ lórí wíwá àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá ẹ̀jẹ̀ àti wíwá wọn, a gbé àwọn efon sí orí àwọn àwo Petri ńláńlá (12 cm ní ìwọ̀n ìlà àti 6 cm ní gíga; Semadeni) pẹ̀lú ihò tí a fi àwọ̀n bò ní ìdérí (3 cm ní ìwọ̀n ìlà) pẹ̀lú Fún afẹ́fẹ́ àti ìpèsè oúnjẹ. A pèsè oúnjẹ tààrà lẹ́yìn 4 dpe, a sì ní 1% ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti ọjọ́ orí tí a ti pò mọ́, ìṣọ̀kan urea mẹ́rin, àti àwọn ìṣàkóso méjì, 10% sucrose àti omi. A fi gbogbo oúnjẹ sínú tampon eyín (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) tí a fi sínú syringe 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), a yọ plunger náà kúrò, a sì gbé e sí orí àwo petri kan (àwòrán 1).1A). Yí oúnjẹ rẹ padà lójoojúmọ́. Ṣe àbójútó yàrá gẹ́gẹ́ bí a ti ṣàlàyé rẹ̀ lókè. A ka àwọn efon tí ó yè ní ìgbà méjì lójúmọ́, nígbà tí a sọ àwọn efon tí ó kú nù títí tí efon tí ó kẹ́yìn fi kú (n = 40 fún ìtọ́jú kọ̀ọ̀kan). A ṣe àyẹ̀wò ìyókù efon tí a jẹ lórí onírúurú oúnjẹ nípa lílo àwọn ìlà ìyókù Kaplan-Meyer àti ipò log-rank. Àwọn ìdánwò láti fi wé àwọn àfiwé ìpínkiri ìwàláàyè láàárín oúnjẹ (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Ilé ìtajà efon tí a ṣe láti ọwọ́ Attisano àti àwọn ẹlẹgbẹ́ rẹ̀.[17], tí a fi àwọn pánẹ́lì acrylic tí ó nípọn 5 mm ṣe (10 cm fífẹ̀ x 10 cm gígùn x 10 cm gíga) láìsí àwọn pánẹ́lì iwájú àti ẹ̀yìn (Àwòrán 3: òkè). Àkójọpọ̀ ìṣàpẹẹrẹ pẹ̀lú pánẹ́lì inaro tí a fi ọwọ́ gas chromatography ṣe (0.25 mm id; 7.5 cm L) pẹ̀lú àwọn ìpẹ̀kun tí a so mọ́ abẹ́rẹ́ kòkòrò tí a so mọ́ àárín méjì àwọn mágnẹ́ẹ̀tì neodymium tí ó wà ní 9 cm sí ara wọn. Púùbù kan tí a fi ohun èlò kan náà ṣe (6.5 cm L) ya pánẹ́lì inaro náà sọ́tọ̀ láti ṣẹ̀dá apá tí a so mọ́ ara rẹ̀ àti apá kan tí ó gbé pánẹ́lì aluminiomu kékeré gẹ́gẹ́ bí àmì ìdádúró ìmọ́lẹ̀.
Àwọn obìnrin tí ebi ń pa fún wákàtí mẹ́rìnlélógún ni a fún ní oúnjẹ tí a kọ sí òkè yìí fún ìṣẹ́jú 30 kí a tó dá wọn dúró. Lẹ́yìn náà, a fi oògùn olóró pa àwọn obìnrin efon tí wọ́n jẹ ní àjẹyó lórí yìnyín fún ìṣẹ́jú 2-3, a sì so wọ́n mọ́ àwọn kòkòrò pẹ̀lú oyin (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) lẹ́yìn náà a so wọ́n mọ́ apá àwọn ọ̀pá ìrọ̀gbọ̀kú. Flying Mill. A gba àwọn ìyípadà fún ọkọ̀ òfurufú kọ̀ọ̀kan nípasẹ̀ olùtọ́jú ìwádìí ìwádìí tí a ṣe ní ọ̀nà àdáni, lẹ́yìn náà a tọ́jú wọn, a sì fi wọ́n hàn nípa lílo sọ́fítíwè PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). A gbé ilé ìwádìí ìfò òfurufú náà sí yàrá tí a ṣètò ojú ọjọ́ (12:12 h, ìmọ́lẹ̀: dúdú, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Láti fojú inú wo bí ìgbòkègbodò ọkọ̀ òfurufú ṣe rí, a ṣírò iye ìjìnlẹ̀ tí a fò (m) àti iye ìgbòkègbodò ọkọ̀ òfurufú tí a fi léraléra fún wákàtí kan láàárín àkókò wákàtí mẹ́rìnlélógún. Ní àfikún, a fi ìwọ̀n ìjìnlẹ̀ tí àwọn obìnrin kọ̀ọ̀kan fò wéra nínú àwọn ìtọ́jú, a sì ṣe àyẹ̀wò wọn nípa lílo ANOVA ọ̀nà kan àti ìwádìí lẹ́yìn hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), níbi tí a ti kà ìwọ̀n ìjìnlẹ̀ àròpín sí ohun tí ó gbẹ́kẹ̀lé, nígbà tí ìtọ́jú jẹ́ ohun tí ó dá dúró. Ní àfikún, a ṣírò iye ìyípo àròpín ní ìpele ìṣẹ́jú mẹ́wàá.
Láti ṣe àyẹ̀wò ipa oúnjẹ lórí iṣẹ́ ìbímọ An.arabiensis, a gbé àwọn obìnrin mẹ́fà (4 dpe) lọ tààrà sí àwọn àgọ́ Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) lẹ́yìn gbígba ẹ̀jẹ̀, lẹ́yìn náà a pèsè oúnjẹ ìdánwò fún wákàtí 48 gẹ́gẹ́ bí a ti ṣàlàyé rẹ̀ lókè. Lẹ́yìn náà, a yọ oúnjẹ kúrò, a sì fún wọn ní agolo (30 ml; Nolato Hertila) tí a fi 20 milimita omi tí a ti fọ́ kún ní ọjọ́ kẹta fún wákàtí 48, ní yíyípadà ní gbogbo wákàtí 24. Tun ìlànà oúnjẹ kọ̀ọ̀kan ṣe ní ìgbà 20-50. A ka ẹyin náà, a sì kọ wọ́n sílẹ̀ fún àgọ́ ìdánwò kọ̀ọ̀kan. A lo àwọn àpẹẹrẹ ẹyin láti ṣe àyẹ̀wò ìwọ̀n àti gígùn àwọn ẹyin kọ̀ọ̀kan (n ≥ 200 fún oúnjẹ kọ̀ọ̀kan) nípa lílo microscope Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) tí a fi Leica Camera (DFC) 320 R2 ṣe; Leica Microsystems Ltd., DE). A tọ́jú àwọn ẹyin tó kù sí yàrá tí a ń ṣàkóso ojú ọjọ́ lábẹ́ ipò ìtọ́jú déédéé fún wákàtí mẹ́rìnlélógún, a sì wọn àyẹ̀wò díẹ̀ lára ​​àwọn ìdin àkọ́kọ́ tí a ṣẹ̀ṣẹ̀ yọ jáde (n ≥ 200 fún oúnjẹ kọ̀ọ̀kan), gẹ́gẹ́ bí a ti ṣàlàyé rẹ̀ lókè yìí. A fi iye ẹyin àti ìwọ̀n ẹyin àti ìdin wéra láàárín ìtọ́jú àti nípa lílo ANOVA ọ̀nà kan ṣoṣo àti ìwádìí lẹ́yìn hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Àwọn èròjà ìyípadà orí láti inú àwọn èròjà tuntun (wákàtí kan lẹ́yìn ìṣàyẹ̀wò), ìtọ̀ tó ti pẹ́ fún wákàtí 24, wákàtí 72 àti wákàtí 168 ni a kó láti inú àwọn àpẹẹrẹ tí a kó láti ọ̀dọ̀ àwọn màlúù Zebu, Arsi. Fún ìrọ̀rùn, a kó àwọn àpẹẹrẹ ìtọ̀ ní kùtùkùtù òwúrọ̀ nígbà tí àwọn màlúù náà ṣì wà nínú àká. A kó àwọn àpẹẹrẹ ìtọ̀ láti ọ̀dọ̀ ènìyàn mẹ́wàá, a sì gbé 100-200 milimita ti àpẹẹrẹ kọ̀ọ̀kan lọ sí inú àpò ìyan polyamide kọ̀ọ̀kan (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) nínú ìlù ṣiṣu vinyl chloride 3 l. A kó àwọn èròjà ìyípadà orí láti inú àpẹẹrẹ ìtọ̀ màlúù kọ̀ọ̀kan yálà ní tààràtà (tútù) tàbí lẹ́yìn ìdàgbàsókè ní iwọ̀n otutu yàrá fún wákàtí 24, wákàtí 72 àti wákàtí 168, ìyẹn ni pé àpẹẹrẹ ìtọ̀ kọ̀ọ̀kan jẹ́ ààyò fún ẹgbẹ́ ọjọ́-orí kọ̀ọ̀kan.
Fún ìkójọ àwọn ohun tí ó lè fa àwọ̀ orí, a lo ètò tí a fi sé-loop ṣe láti yí ìṣàn gaasi tí a fi erogba yọ̀ (100 ml min-1) ká láti inú àpò polyamide kan sí orí ìfàmọ́ra fún wákàtí 2.5 nípa lílo fifa omi oníhò diaphragm (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Gẹ́gẹ́ bí ìṣàkóso, a ṣe ìkójọ àwọ̀ orí láti inú àpò polyamide tí ó ṣofo. A fi ọ̀pọ́ Teflon (5.5 cm x 3 mm id) ṣe ọ̀pọ́ ìfàmọ́ra náà tí ó ní 35 mg ti Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) láàárín àwọn ohun èlò irun dígí. Kí a tó lò ó, a fi n-hexane tí a ti yípadà 1 ml (Merck, Darmstadt, DE) àti pentane 1 ml (99.0% pure solvent GC grade, Sigma Aldrich) fọ ọ̀pọ́ náà. A fi 400 μl ti pentane tí a ti yọ̀ mọ́ àwọn ohun tí ó lè fa àwọ̀ orí. A kó àwọn ohun tí ó lè fa àwọ̀ orí jọ, lẹ́yìn náà a tọ́jú wọn sí -20°C títí a ó fi lò ó fún ìgbà díẹ̀ sí i. ìṣàyẹ̀wò.
Àwọn ìdáhùn ìwà ti wíwá àti jíjẹ ẹ̀jẹ̀ An. Àwọn ìyọkúrò onípele tí a kó láti inú ìtọ̀ tuntun, wákàtí 24, wákàtí 72, àti wákàtí 168 ni a ṣe àyẹ̀wò fún àwọn ìyọkúrò onípele láti inú àwọn efon Arabidopsis nípa lílo olfactometer olfactomer ... olfactometer, pẹlu awọn iyipada ti nmu iwuri ni gbogbo iṣẹju 5. Fun itupalẹ, 10 μl ti iyọkuro aaye ori kọọkan, ti a ti dapọ ni iwọn 1:10, ni a lo gẹgẹbi iwuri. Iwọn kanna ti pentane ni a lo gẹgẹbi iṣakoso. A gbe awọn efon ti n wa alejo tabi ti n fa ẹjẹ sinu awọn agọ itusilẹ kọọkan ni wakati 2-3 ṣaaju ibẹrẹ idanwo naa. A gbe agọ itusilẹ si apa isalẹ ti olfactometer, a si gba awọn efon laaye lati baamu fun iṣẹju 1, lẹhinna a ṣii valve labalaba ti agọ naa lati tu silẹ. A ṣe itupalẹ ifamọra si itọju tabi iṣakoso bi ipin ti awọn efon ti o kan si orisun laarin iṣẹju 5 ti itusilẹ. A ṣe atunṣe gbogbo iyọkuro ati iṣakoso ori kọọkan ni o kere ju igba 30, ati lati yago fun awọn ipa ti eyikeyi ọjọ kan, nọmba kanna ti awọn itọju ati awọn iṣakoso ni a ṣe idanwo ni ọjọ idanwo kọọkan. Wa awọn idahun lati ọdọ olugbalejo ati ti o jẹun Ans. A ṣe itupalẹ awọn eto aaye ori Arabic lodi si ori nipa lilo regression nominal logistic atẹle pẹlu awọn afiwera pairwise fun awọn ipin odd (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Ìdáhùn ìbímọ. A ṣe àyẹ̀wò àwọn ìyọkúrò orí láti inú ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti àgbà nínú àwọn àgọ́ Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Àwọn agolo ṣiṣu (30 mL; Nolato Hertila) tí a fi omi dídì 20 mL kún fún omi tí a ti yọ jáde ló pèsè ìpìlẹ̀ ìbímọ náà, a sì gbé wọn sí àwọn igun òdìkejì ti àgọ́ náà, ní 24 cm sí ara wọn. A ṣe àtúnṣe àwọn agolo ìtọ́jú pẹ̀lú 10 μl ti ìyọkúrò orí kọ̀ọ̀kan ní ìdapọ̀ 1:10. A lo iye pentane kan náà láti ṣàtúnṣe agolo ìtọ́jú náà. A pàṣípààrọ̀ àwọn agolo ìtọ́jú àti ìdarí láàrín ìdánwò kọ̀ọ̀kan láti ṣàkóso fún àwọn ipa ipò. A tú àwọn obìnrin mẹ́wàá tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀ sí inú àwọn àgọ́ ìdánwò ní ZT 9-11, a sì ka àwọn ẹyin nínú àwọn ago ní wákàtí 24 lẹ́yìn náà. Àgbékalẹ̀ fún ṣíṣírò àtọ́ka ìbímọ ni: (iye ẹyin tí a gbé sínú ago ìtọ́jú – iye ẹyin tí a gbé sínú ago ìdarí)/(iye ẹyin tí a gbé). A tún ìtọ́jú kọ̀ọ̀kan ṣe ní ìgbà 8.
A ṣe àyẹ̀wò àwòrán antenna oní-ẹ̀rọ gaasi àti electron (GC-EAD) ti obìnrin An.arabiensis gẹ́gẹ́ bí a ti ṣàlàyé rẹ̀ tẹ́lẹ̀ [20]. Ní kúkúrú, a ya àwọn ohun tí ó ń yọ jáde ní orí tuntun nípa lílo Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) tí a fi ọ̀wọ̀n HP-5 (30 m × 0.25 mm id, fíìmù 0.25 μm nípọn, Agilent Technologies). àti ìtọ̀ tó ń dàgbà. Wọ́n lo Hídrójìn gẹ́gẹ́ bí ìpele ìṣiṣẹ́ pẹ̀lú ìwọ̀n ìṣàn línàá ti 45 cm s-1. A fún àpẹẹrẹ kọ̀ọ̀kan (2 μl) ní abẹ́rẹ́ fún ìṣẹ́jú 30 ní ipò tí kò pínyà pẹ̀lú ìwọ̀n ìwọ̀sí tí ó wà ní 225 °C. A ṣe ètò ìwọ̀n ìgbóná ààrò GC láti 35 °C (ìdúró ìṣẹ́jú 3) sí 300 °C (ìdúró ìṣẹ́jú 10) ní 10 °C min-1. Nínú splitter GC effluent splitter, a fi 4 psi ti nitrogen kún un a sì pín 1:1 nínú Gerstel 3D/2 low dead volume cross (Gerstel, Mülheim, DE) láàrín ẹ̀rọ ìwádìí ionization iná àti EAD. A gbé capillary GC effluent capillary fún EAD kọjá nípasẹ̀ ìlà gbigbe Gerstel ODP-2, èyí tí ó ń tọ́pasẹ̀ ìwọ̀n ìgbóná GC pẹ̀lú 5 °C, sínú páìpù gilasi kan (10 cm × 8 mm), níbi tí a ti dapọ̀ mọ́ afẹ́fẹ́ tí a fi carbon filtered, tí ó ní ọrinrin (1.5 l min−1). A gbé eriali náà sí. Ní ìwọ̀n 0.5 cm láti ibi tí ó ti jáde nínú páìpù náà. Ẹ̀fọn kọ̀ọ̀kan jẹ́ ọ̀kan lára ​​àwọn tí ó jọra, àti fún àwọn ẹ̀fọn tí wọ́n ń wá àlejò, ó kéré tán a ṣe àtúnṣe mẹ́ta lórí àwọn àyẹ̀wò ìtọ̀ ti ọjọ́ orí kọ̀ọ̀kan.
Ìdámọ̀ àwọn èròjà bioactive nínú àkójọ ìtọ̀ ẹran màlúù tuntun àti ti ọjọ́ orí nípa lílo GC àti mass spectrometer àpapọ̀ (GC-MS; 6890 GC àti 5975 MS; Agilent Technologies) láti mú kí àwọn ìdáhùn antenna jáde nínú ìṣàyẹ̀wò GC-EAD, tí ó ń ṣiṣẹ́ nínú ipò ionization ipa elekitironi ní 70 eV. GC náà ní ọ̀wọ̀n ìdìpọ̀ silica tí a fi HP-5MS UI bo (ìwọ̀n inú 60 m × 0.25 mm, ìwọ̀n fíìmù 0.25 μm) nípa lílo helium gẹ́gẹ́ bí ìpele alágbéka pẹ̀lú ìwọ̀n ìṣàn ìlà ti 35 cm s-1. A fi àpẹẹrẹ 2 μl sínú rẹ̀ nípa lílo àwọn ètò injector kan náà àti ìwọ̀n otútù ààrò gẹ́gẹ́ bí fún ìṣàyẹ̀wò GC-EAD. A dá àwọn èròjà mọ̀ nípa àkókò ìpamọ́ wọn (Àkójọ Kovát) àti ìwọ̀n mass ní ìfiwéra pẹ̀lú ìkàwé àṣà àti ìkàwé NIST14 (Agilent). A jẹ́rìí àwọn èròjà tí a dá mọ̀ nípa lílo àwọn ìlànà tí ó jẹ́ òótọ́ (Fáìlì Àfikún 1: Táblì S2). Fún ìwọ̀n, heptyl acetate (10 ng, 99.8% ìwẹ̀nùmọ́ kẹ́míkà, Aldrich) ni a fi abẹ́rẹ́ rẹ̀ gẹ́gẹ́ bí ìwọ̀n ìta.
Ṣíṣàyẹ̀wò ipa ti adalu òórùn oníṣẹ́dá tí ó ní àwọn èròjà oníṣẹ́dá tí a mọ̀ nínú ìtọ̀ tuntun àti ti ọjọ́ orí láti fa àwọn olùwá-ẹ̀jẹ̀ àti olùfa ẹ̀jẹ̀ mọ́ra, nípa lílo olfactometer àti ìlànà kan náà gẹ́gẹ́ bí a ti sọ lókè. Àwọn èròjà oníṣẹ́dá náà fara wé àkójọpọ̀ àti ìwọ̀n àwọn èròjà nínú àwọn èròjà oníṣẹ́dá tí ó ní ìyípadà orí tí ó jẹ́ ti ìtọ̀ tuntun, wákàtí 24, wákàtí 48, wákàtí 72, àti wákàtí 168 (Àwòrán 5D-G; Fáìlì Àfikún 1: Táblì S2). Fún ìṣàyẹ̀wò, lo 10 μl ti ìfọ́pọ̀ 1:100 ti adalu oníṣẹ́dá tí ó jẹ́ pípé, pẹ̀lú ìwọ̀n ìtújáde gbogbogbò láti nǹkan bí 140-2400 ng h-1, fún ṣíṣe àyẹ̀wò ìfàmọ́ra sí àwọn efon olùgbàlejò àti olùfa ẹ̀jẹ̀. Lẹ́yìn náà, a ṣe ìdánwò náà lórí àwọn èròjà pípé, nínú èyí tí a ti yọ àwọn èròjà ìyọkúrò ti àwọn èròjà kan ṣoṣo ti adalu pípé kúrò. Wá ìdáhùn láti ọ̀dọ̀ olùgbàlejò àti olùfa ẹ̀jẹ̀. A ṣe àyẹ̀wò àwọn èròjà oníṣẹ́dá àti oníṣẹ́dá nípa lílo ìyípadà oníṣẹ́dá tí a tẹ̀lé pẹ̀lú àwọn àfiwéra méjì fún àwọn ohun tí kò dára àwọn ìpíndọ́gba (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Láti ṣe àyẹ̀wò bóyá ìtọ̀ màlúù lè ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí ibi tí àwọn efon ibà lè gbé, ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti àtijọ́, tí a kó jọ gẹ́gẹ́ bí a ti ṣàlàyé rẹ̀ lókè, a sì gbé omi sínú àwọn bọ́ọ̀kì tí a fi àwọ̀n mẹ́tà lítà mẹ́tà lítà mẹ́tà ààbọ̀ (100 milimita) tí a sì fi sínú àwọn ìdẹ ìjẹ. (Ẹ̀yà BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Àwọn ìdẹ mẹ́wàá tí a gbé sí 50 m sí ara wọn ní pápá oko, 400 m sí agbègbè abúlé (Silay, Ethiopia, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) àti pé kò sí màlúù, ní àwọn ibi ìbísí àti àwọn abúlé títí láé. Àwọn ìdẹ márùn-ún ni a gbóná láti ṣe àfarawé wíwà olùgbàlejò kan, nígbà tí a fi àwọn ìdẹ márùn-ún sílẹ̀ láìgbóná. A máa ń yí ibi ìtọ́jú kọ̀ọ̀kan ní gbogbo òru fún gbogbo òru márùn-ún. A fi iye àwọn efon tí a mú nínú àwọn ìdẹ tí a fi ìtọ̀ dẹ àwọn ọlọ́jọ́ orí ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ ṣe àfiwé nípa lílo ìyípadà logistic pẹ̀lú ìpínkiri beta binomial (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Ní abúlé kan tí àrùn ibà ti ń jà nítòsí ìlú Maki, agbègbè Oromia, Ethiopia (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Àwòrán 6A). Ìwádìí náà wáyé láàárín àárín oṣù kẹjọ sí àárín oṣù kẹsàn-án kí ó tó di pé a fún omi inú ilé lọ́dọọdún, pẹ̀lú àkókò òjò gígùn. A yan ilé márùn-ún (20–50 m sí ara wọn) tí ó wà ní ẹ̀yìn ìlú náà fún ìwádìí náà (Àwòrán 6A). Àwọn ìlànà tí a lò láti yan àwọn ilé náà ni: a kò gbà láàyè láti ṣe ẹranko nínú ilé, a kò gbà láàyè láti se oúnjẹ nínú ilé (fífa igi iná tàbí èédú) (ó kéré tán ní àkókò ìdánwò náà), àti àwọn ilé tí ó ní ènìyàn méjì tí ó pọ̀ jù, tí wọ́n ń sùn nínú àwọn kòkòrò. lábẹ́ àpò ìtọ́jú efon tí a tọ́jú. Ìgbìmọ̀ Àtúnyẹ̀wò Ìwà Rere ti fún ní àṣẹ ìwà rere láti ọwọ́ Ilé-iṣẹ́ Ìwádìí Àṣà (IRB/022/2016) ti Ẹ̀ka Ẹ̀kọ́ Ìmọ̀ Adánidá (CNS-IRB), Yunifásítì Addis Ababa, ní ìbámu pẹ̀lú àwọn ìlànà tí Ìkéde Àjọ Ìṣègùn Àgbáyé ti Helsinki gbé kalẹ̀. A gba àṣẹ láti ọ̀dọ̀ olórí ilé kọ̀ọ̀kan pẹ̀lú ìrànlọ́wọ́ àwọn òṣìṣẹ́ ìtẹ̀síwájú ìlera. Gbogbo ìlànà náà ni àwọn ìjọba agbègbè ní ìpele àgbègbè àti ẹ̀ka ('kebele') fọwọ́ sí. Apẹẹrẹ ìdánwò náà tẹ̀lé àwòrán onígun mẹ́rin Latin 2 × 2, nínú èyí tí a ti yan àwọn àdàpọ̀ àti ìdarí àdàpọ̀ sí àwọn ilé tí a so pọ̀ ní alẹ́ àkọ́kọ́ tí a sì yípadà láàrín àwọn ilé ní alẹ́ ìdánwò tí ó tẹ̀lé. A tún ṣe ìlànà yìí ní ìgbà mẹ́wàá. Ní àfikún, láti ṣe ìṣirò ìṣiṣẹ́ efon ní àwọn ilé tí a yàn, a ṣètò àwọn ìdẹkùn CDC láti ṣiṣẹ́ ní alẹ́ márùn-ún ní ìbẹ̀rẹ̀, àárín àti òpin ìdánwò pápá ní àkókò kan náà ní ọjọ́.
A da adalu sintetiki ti o ni awọn agbo ogun bioactive mẹfa sinu heptane (97.0% solvent GC grade, Sigma Aldrich) a si tu silẹ ni 140 ng h-1 nipa lilo ohun elo wick owu kan [20]. Ohun elo wick naa gba gbogbo awọn agbo ogun laaye lati tu silẹ ni awọn iwọn deede jakejado idanwo wakati 12. A lo Heptane gẹgẹbi iṣakoso. A so ago naa pọ mọ ibi iwọle ti idẹkùn ina ti Awọn Ile-iṣẹ fun Iṣakoso ati Idena Arun (CDC) (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Aworan 6A). A so awọn idẹ naa pọ mọ 0.8 – 1 m loke ilẹ, nitosi ẹsẹ ibusun, ati olufọkansi kan sun labẹ abọ efon ti a ko tọju ati ṣiṣẹ laarin 18:00 ati 06:30. Awọn efon ti a mu nipasẹ ibalopọ ati ipo ti ara (laisi ifunni, fifun, aboyun die, ati aboyun [21] ni a ṣe ayẹwo lẹhin naa nipa lilo itupalẹ polymerase chain reaction (PCR) lati ṣe idanimọ awọn eya ti a mọ ni apẹrẹ ti A. gambiae sl. Awọn ọmọ ẹgbẹ ti eka naa [23]. Nínú ìwádìí pápá, a ṣe àyẹ̀wò ìdẹkùn àwọn ilé tí a so pọ̀ nípa lílo àpẹẹrẹ ìbáramu oní-nọ́mbà, níbi tí ìfàmọ́ra jẹ́ oníyípadà tí ó gbẹ́kẹ̀lé àti ìtọ́jú (àdàlú síntẹ́ẹ̀tì vs ìṣàkóso) ni ipa tí a ti yàn (JMP® 14.0. 0. SAS Institute Inc.). Níbí, a ń ròyìn àwọn ìwọ̀n χ2 àti p láti inú ìdánwò ìpíndọ́gba ìṣeéṣe.
Ṣe àyẹ̀wò bóyá ó ní ààbò. arabiensis lè gba ìtọ̀, orísun nitrogen pàtàkì rẹ̀, urea, nípa fífún ní oúnjẹ tààrà, láàrín wákàtí 48 ti a lò fún ọjọ́ mẹ́rin lẹ́yìn ìwádìí fífún àwọn obìnrin ní ẹ̀jẹ̀ àti àwọn tí wọ́n fún ní ẹ̀jẹ̀ (Àwòrán 1A). Àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá ìtọ̀ àti àwọn tí wọ́n ń fa ẹ̀jẹ̀ mu ju oúnjẹ tàbí omi mìíràn lọ (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 àti F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, lẹ́sẹẹsẹ; Àwòrán 1B,C). Jù bẹ́ẹ̀ lọ, àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá ìtọ̀ jẹ díẹ̀ nínú ìtọ̀ ní wákàtí 72 ní ìfiwéra pẹ̀lú ìtọ̀ ní wákàtí 168 (Àwòrán 1B). Nígbà tí a fún wọn ní oúnjẹ tí ó ní urea, àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá ìtọ̀ gba ìwọ̀n urea tí ó pọ̀ ní 2.69 mM ní ìfiwéra pẹ̀lú gbogbo àwọn ìfọ́pọ̀ àti omi mìíràn, nígbàtí a kò lè yà wọ́n sọ́tọ̀ kúrò nínú 10% sucrose (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; Àwòrán 1D). Èyí yàtọ̀ sí ìdáhùn àwọn obìnrin tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀, tí wọ́n sábà máa ń mu oúnjẹ tí ó ní urea púpọ̀ ju omi lọ, bó tilẹ̀ jẹ́ pé ó kéré sí 10% sucrose (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; Àwòrán 1).1E). Jù bẹ́ẹ̀ lọ, nígbà tí a bá fi wéra láàárín àwọn ipò ìṣiṣẹ́ ara méjèèjì, àwọn obìnrin tí a ti yọ phlebotomized fa urea púpọ̀ ju àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá àlejò lọ ní àwọn ìwọ̀n tí ó kéré jùlọ, àwọn obìnrin wọ̀nyí sì fa iye urea kan náà ní àwọn ìwọ̀n tí ó ga (F(1,953)= 78.82, p < 0.0001; Àwòrán 1F, G). Bó tilẹ̀ jẹ́ pé jíjẹ oúnjẹ tí ó ní urea hàn gbangba pé ó ní àwọn ìwọ̀n tí ó dára jùlọ (Àwòrán 1D,E), àwọn obìnrin ní àwọn ipò ìṣiṣẹ́ ara méjèèjì lè ṣe àtúnṣe iye urea tí a gbà lórí gbogbo ìwọ̀n urea ní ọ̀nà log-linear (Àwòrán 1F,G). Bákan náà, àwọn efon máa ń ṣàkóso ìgba nitrogen wọn nípa ṣíṣàkóso iye ìtọ̀ tí wọ́n gbà, nítorí pé iye nitrogen tí wọ́n gbà nínú ìtọ̀ ni a máa ń rí nínú iye tí wọ́n gbà (Àwòrán 1B, C àti B insets).
Láti ṣe àyẹ̀wò ipa ìtọ̀ àti urea lórí bí efon tó ń wá ọmọ ilé ìtura àti tó ń fa ẹ̀jẹ̀ ṣe ń wà láàyè, a fún àwọn obìnrin ní ìtọ̀ tó jẹ́ ọmọ ọdún mẹ́rin (tó tútù, wákàtí 24, wákàtí 72, àti wákàtí 168 lẹ́yìn ìyọkúrò) àti onírúurú ìwọ̀n urea, àti omi tí a ti yọ kúrò àti 10% sucrose tí a lò gẹ́gẹ́ bí ìdarí (Àwòrán 2A). Ìwádìí ìwàláàyè yìí fihàn pé oúnjẹ ní ipa pàtàkì lórí ìwàláàyè gbogbogbòò nínú àwọn obìnrin tó ń wá ọmọ ilé ìtura (ìtọ̀: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Àwòrán 2B, C) àti àwọn obìnrin tó ń jẹ ẹ̀jẹ̀ (ìtọ̀: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; Àwòrán 2D,E). Nínú gbogbo rẹ̀ Àwọn àyẹ̀wò, àwọn obìnrin tí wọ́n jẹ oúnjẹ ìtọ̀, urea, àti omi ní ìwọ̀n ìwàláàyè tó lọ sílẹ̀ gan-an ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn obìnrin tí wọ́n jẹ oúnjẹ sucrose (Àwòrán 2B-E). Àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá ilé ìtura tí wọ́n fún ní ìtọ̀ tuntun àti ti gbó fi ìwọ̀n ìwàláàyè tó yàtọ̀ síra hàn, pẹ̀lú àwọn tí wọ́n fún ní ìtọ̀ tó ti gbó fún wákàtí 72 (p = 0.016) tí wọ́n ní àǹfààní ìwàláàyè tó kéré jùlọ (Àwòrán 2B). Jù bẹ́ẹ̀ lọ, àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá ilé ìtura tí wọ́n fún ní urea 135 mM yè fún ìgbà pípẹ́ ju àwọn tí wọ́n ń ṣàkóso omi lọ (p < 0.04) (Àwòrán 2C). Ní ​​ìfiwéra pẹ̀lú omi, àwọn obìnrin tí wọ́n fún ní ìtọ̀ tuntun àti ìtọ̀ wákàtí 24 yè fún ìgbà pípẹ́ (p = 0.001 àti p = 0.012, lẹ́sẹẹsẹ; Àwòrán 2D), nígbà tí àwọn obìnrin tí wọ́n fún ní ìtọ̀ wákàtí 72 yè fún ìgbà pípẹ́ ju àwọn tí wọ́n fún ní ìtọ̀ tuntun obìnrin àti ìtọ̀ wákàtí 24 lọ (p < 0.0001 àti p = 0.013, lẹ́sẹẹsẹ; Àwòrán 2D). Nígbà tí wọ́n fún ní urea 135 mM, àwọn obìnrin tí wọ́n jẹ ẹ̀jẹ̀ yè fún ìgbà pípẹ́ ju gbogbo àwọn ìpìlẹ̀ urea àti omi mìíràn lọ (p <0.013; Àwòrán 2E).
Ìwàláàyè àwọn abo tí wọ́n gbàlejò àti tí wọ́n ń fa ẹ̀jẹ̀. Àwọn Anopheles arabinis tí wọ́n ń jẹ ìtọ̀ màlúù àti urea. Nínú ìwádìí bio (A), a pèsè oúnjẹ fún àwọn efon obìnrin tí ó ní ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti àtijọ́, onírúurú ìwọ̀n urea, sucrose (10%) àti omi tí a ti yọ kúrò (H2O). A ṣe àkọsílẹ̀ ìwàláàyè àwọn efon tí ń wá ìtọ́jú (B, C) àti tí ń fa ẹ̀jẹ̀ (D, E) ní gbogbo wákàtí 12 títí gbogbo àwọn obìnrin fi jẹ ìtọ̀ (B, D) àti urea (C, E), àti àwọn tí ń ṣàkóso, Sucrose àti omi, yóò kú.
Àpapọ̀ ìjìnnà àti iye àwọn ìyípo tí a pinnu nínú ìdánwò ọkọ̀ òfurufú láàárín wákàtí mẹ́rìnlélógún yàtọ̀ síra láàrín àwọn efon tí ń wá àlejò àti àwọn efon tí ń fà ẹ̀jẹ̀, èyí tí ó fi hàn pé ìgbòkègbodò ọkọ̀ òfurufú kéré sí i ní gbogbogbòò (Àwòrán 3). Àwọn efon tí ń wá àlejò tí wọ́n fúnni ní ìtọ̀ tuntun tàbí sucrose àti omi fi àwọn ìlànà ìfò tí ó yàtọ̀ hàn (Àwòrán 3), pẹ̀lú àwọn obìnrin tí ń jẹ oúnjẹ tuntun tí wọ́n ń ṣiṣẹ́ ní òwúrọ̀, nígbà tí àwọn tí wọ́n fúnni ní ìtọ̀ wákàtí mẹ́rìnlélógún àti mẹ́rìnlélógún tí wọ́n ń jẹ oúnjẹ ní ìtọ̀ hàn ní onírúurú ìlànà ìfò tí wọ́n sì jẹ́ ti ọjọ́ kan. Àwọn efon obìnrin tí wọ́n fúnni ní sucrose tàbí ìtọ̀ wákàtí mẹ́rìnlélógún fi ìgbòkègbodò hàn ní gbogbo àkókò wákàtí mẹ́rìnlélógún, nígbà tí àwọn obìnrin tí wọ́n fúnni ní omi ń ṣiṣẹ́ ní àárín àkókò. Àwọn efon tí wọ́n jẹ ní sucrose fi àwọn ìpele ìgbòkègbodò tí ó ga jùlọ hàn ní alẹ́ àti ní kùtùkùtù òwúrọ̀, nígbà tí àwọn tí wọ́n jẹ ìtọ̀ wákàtí méjìlélógún ní ìrírí ìdínkù nínú ìgbòkègbodò ní wákàtí mẹ́rìnlélógún (Àwòrán 3).
Iṣẹ́ ìrìnàjò àwọn obìnrin ọdẹ tí wọ́n ń fa ẹ̀jẹ̀, Anopheles arabinis, tí wọ́n ń jẹ ìtọ̀ màlúù àti urea. Nínú ìdánwò ọkọ̀ òfurufú, àwọn efon obìnrin tí wọ́n ń jẹ ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti ọjọ́ orí, onírúurú ìwọ̀n urea, sucrose (10%), àti omi tí a ti yọ (H2O) ni a so mọ́ apá tí ó wà ní ìpele tí ó ń yípo láìsí ìṣòro (lókè). Fún àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá ìtọ́jú (òsì) àti àwọn tí wọ́n ń fa ẹ̀jẹ̀ (ọ̀tún), gbogbo ìjìnnà àti iye ìfò fún wákàtí kan fún oúnjẹ kọ̀ọ̀kan láàárín àkókò wákàtí mẹ́rìnlélógún (dúdú: grẹ́ẹ̀sì; ìmọ́lẹ̀: funfun). Ìjìnnà àròpín àti iye ìjákulẹ̀ ni a fihàn ní apá ọ̀tún ti àwòrán ìṣiṣẹ́ circadian. Àwọn ọ̀pá àṣìṣe dúró fún àṣìṣe boṣewa ti àròpín. Ìṣàyẹ̀wò ìṣirò wo ọ̀rọ̀ náà
Ni gbogbogbo, gbogbo iṣiṣẹ ofurufu awọn obinrin ti n wa alejo tẹle ilana ti o jọra ti ijinna ofurufu laarin akoko wakati 24. Ipin apapọ ijinna ofurufu ni ipa pataki nipasẹ ounjẹ ti a jẹ (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), ati awọn obinrin ti n wa alejo ti o mu wakati 72 ti ito fò gigun pupọ ni akawe si gbogbo awọn ounjẹ miiran (p < 0.0001), ati awọn efon ti a jẹ sucrose fò gun ju awọn efon tuntun (p = 0.022) ati ito ti o ti jẹ wakati 24 (p = 0.022) lọ. Ni idakeji si ilana iṣiṣẹ ofurufu ti a ṣalaye nipasẹ ounjẹ ito, awọn obinrin ti n wa alejo ti o jẹun ti urea fihan iṣiṣẹ ofurufu ti o tẹsiwaju lori akoko wakati 24, ti o ga julọ lakoko idaji keji ti akoko dudu (Fig. 3). Botilẹjẹpe awọn ilana iṣiṣẹ jọra, awọn obinrin ti n wa alejo ti o jẹun ti o jẹun urea pọ si ijinna ofurufu apapọ ni pataki da lori ifọkansi ti o gba (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Àwọn obìnrin tí wọ́n ń wá àlejò fún oúnjẹ èyíkéyìí nínú ìwọ̀n urea tí ó bá fò lọ fún ìgbà pípẹ́ ju bí àwọn obìnrin ṣe fún omi tàbí sucrose lọ (p < 0.03).
Ìgbésẹ̀ ìrìnàjò gbogbogbòò ti àwọn efon tí ń fa ẹ̀jẹ̀ jẹ́ èyí tí ó dúró ṣinṣin tí ó sì dúró fún wákàtí mẹ́rìnlélógún ní gbogbo oúnjẹ, pẹ̀lú ìṣiṣẹ́ ìtọ̀ tí ó pọ̀ sí i ní ìdajì kejì àkókò òkùnkùn fún àwọn obìnrin tí a fi omi bọ́ àti àwọn obìnrin tí a fi omi bọ́ àti àwọn obìnrin tí wọ́n jẹ́ wákàtí mẹ́rìnlélógún (àwòrán 3). Bó tilẹ̀ jẹ́ pé oúnjẹ ìtọ̀ ní ipa pàtàkì lórí ìwọ̀n ìrìnàjò àárín àwọn obìnrin tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀ (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), oúnjẹ urea kò (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) .pẹ̀lú ìtọ̀ àti oúnjẹ ìṣàkóso mìíràn (tútù, p = 0.0091; wákàtí 72, p = 0.0022; wákàtí 168, p = 0.001; sucrose, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
A ṣe àyẹ̀wò ipa ìtọ̀ àti jíjẹ urea lórí àwọn pàrámítà ìbímọ nínú àwọn àyẹ̀wò ìṣẹ̀dá ẹyin (Àwòrán 4A) a sì ṣe ìwádìí rẹ̀ gẹ́gẹ́ bí iye ẹyin tí abo kọ̀ọ̀kan gbé, ìwọ̀n ẹyin, àti àwọn ìdin àkọ́kọ́ tí wọ́n ṣẹ̀ṣẹ̀ bí. Iye ẹyin tí wọ́n gbé. Àwọn abo Arab tí wọ́n bọ́ ìtọ̀ yàtọ̀ síra gẹ́gẹ́ bí oúnjẹ (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; Àwòrán 4B). Àwọn obìnrin fún ìtọ̀ wákàtí 24 ní oúnjẹ, oúnjẹ ẹ̀jẹ̀ fún ìtọ̀ pọ̀ sí i ju ti àwọn abo lọ, wọ́n sì jọ ti sucrose tí wọ́n fi bọ́ (Àwòrán 4B). Bákan náà, ìwọ̀n ẹyin tí àwọn abo tí wọ́n bọ́ ìtọ̀ máa ń gbé yàtọ̀ síra gẹ́gẹ́ bí oúnjẹ (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), pẹ̀lú ìtọ̀ wákàtí 24 àti àwọn abo tí wọ́n bọ́ ìtọ̀ ní wọ́n máa ń gbé ẹyin tí ó tóbi ju ti àwọn abo tí wọ́n fi omi bọ́ lọ, nígbà tí ẹyin àwọn abo tí wọ́n fi ìtọ̀ wákàtí 168 bọ́ kéré síi (Àwòrán 4C). Ní ​​àfikún, oúnjẹ ìtọ̀ ní ipa lórí ìwọ̀n ìtọ̀ (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), pẹ̀lú àwọn ìdínkù tó tóbi gan-an tó ń jáde láti inú ẹyin tí àwọn obìnrin tó jẹ́ wákàtí mẹ́rìnlélógún àti méjìléláàádọ́rin tó ń fún ìtọ̀ ń gbé ju àwọn ẹyin tó ń fún ìtọ̀ láti inú ẹyin lọ. Àwọn obìnrin tó ń fún ìtọ̀ ní omi àti àwọn obìnrin tó ń fún ìtọ̀ ní wákàtí mẹ́rìnléláàádọ́rin (Àwòrán 4D).
Iṣẹ́ ìbímọ àwọn obìnrin Anopheles arabini tí wọ́n ń jẹ ìtọ̀ màlúù àti urea. Àwọn efon obìnrin tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀ ni wọ́n fún ní oúnjẹ tí ó ní ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti àtijọ́, onírúurú ìwọ̀n urea, sucrose (10%), àti omi tí a ti yọ (H2O) fún wákàtí 48 kí wọ́n tó fi sínú àwọn ìwádìí bioasys kí wọ́n sì gba àwọn ohun èlò tí wọ́n ń fi ẹyin sí. Oúnjẹ tí a pèsè ní ipa lórí iye ẹyin (ìtọ̀ màlúù: BD; urea: EG). Àwọn ìwọ̀n fún gbogbo pàrámítà tí a wọ̀n nípa lílo orúkọ lẹ́tà tó yàtọ̀ síra yàtọ̀ sí ara wọn (ANOVA ọ̀nà kan nípa lílo ìwádìí Tukey lẹ́yìn hoc; p < 0.05). Àwọn ọ̀pá àṣìṣe dúró fún àṣìṣe boṣewa ti àròpọ̀ náà
Gẹ́gẹ́ bí èròjà pàtàkì nínú ìtọ̀, urea, nígbà tí a pèsè gẹ́gẹ́ bí oúnjẹ fún àwọn obìnrin tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀, ní ipa pàtàkì lórí àwọn ìlànà ìbímọ nínú gbogbo ìwádìí. Iye ẹyin tí àwọn obìnrin ń fún urea lẹ́yìn oúnjẹ ẹ̀jẹ̀, sinmi lórí ìwọ̀n urea (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), àwọn obìnrin ń fún ìwọ̀n urea láàrín 134 µM àti 1.34 mM ní ẹyin púpọ̀ sí i (Àwòrán 4E). Àwọn obìnrin tí wọ́n jẹ ìwọ̀n urea 134 µM tàbí jù bẹ́ẹ̀ lọ máa ń gbé ẹyin tó tóbi ju àwọn obìnrin tí wọ́n jẹ omi lọ (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Àwòrán 4F), àti ìwọ̀n ìdin, bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìwọ̀n urea dọ́gba kan náà ní ipa lórí àwọn ìyá (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001) jẹ́ ohun tó yàtọ̀ síra (Àwòrán 4G).
Ìfàmọ́ra gbogbogbò sí àwọn èròjà ìtújáde ìtọ̀ màlúù tí wọ́n ń wá láti inú ìtọ̀. A ṣe àyẹ̀wò arabiensis nínú gíláàsì tube olfactometer (Àwòrán 5A) ní ipa pàtàkì lórí ọjọ́ orí ìtọ̀ (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Àwòrán 5B). Lẹ́yìn ìwádìí fihàn pé òórùn ìtọ̀ tí ó ti pẹ́ ní wákàtí 24 fa ìfàmọ́ra gíga ní ìfiwéra pẹ̀lú gbogbo àwọn ìtọ́jú mìíràn (wákàtí 72: p = 0.0060, wákàtí 168: p = 0.012, pentane: p = 0.00070), Àyàfi òórùn ìtọ̀ tuntun (p = 0.13; Àwòrán 5B). Bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìfàmọ́ra gbogbogbò ti àwọn efon tí ń mu ẹ̀jẹ̀ sí òórùn ìtọ̀ kò yàtọ̀ ní pàtàkì (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; Àwòrán 5C), a rí i pé àwọn obìnrin wọ̀nyí ní ìfẹ́ sí àwọn èròjà ìtújáde ìtọ̀ orí ní ìfiwéra pẹ̀lú ìtọ̀ wákàtí 72 ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ìṣàkóso (p = 0.0066; Àwòrán 5C).
Àwọn ìdáhùn ìwà sí òórùn ìtọ̀ màlúù àdánidá àti ìṣẹ̀dá nínú wíwá àwọn olùgbàlejò àti àwọn tí ẹ̀jẹ̀ ń jẹ Anopheles arabianus. Àwòrán ti gíláàsì tube olfactometer (A). Ìfàmọ́ra àwọn ìyọkúrò orí láti inú ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti ọjọ́ orí sí àwọn efon olùgbàlejò (B) àti àwọn efon tí ń fa ẹ̀jẹ̀ (C). Wá ìṣesí tentacle ti Lord An. Àwọn ìyọkúrò orí tí a yà sọ́tọ̀ láti inú ìtọ̀ màlúù tuntun (D), wákàtí 24 (E), wákàtí 72 (F), àti wákàtí 168 (G) ni a fihàn. Àwọn àmì ìwádìí antenna elekitironi (EAD) fi àwọn ìyípadà foliteji hàn ní ìdáhùn sí àwọn ìṣọ̀kan bioactive nínú àyè orí tí a yọ kúrò nínú chromatograph gas tí a sì rí nípasẹ̀ ẹ̀rọ ìwádìí ionization iná (FID). Páàtì ìwọ̀n dúró fún àpọ̀jù ìdáhùn (mV) ní ìfiwéra àkókò ìpamọ́. Àwọn ohun-ìní àti àwọn ìwọ̀n ìtújáde (µg h-1) ti àwọn ìṣọ̀kan oníṣẹ́-abẹ ni a fihàn. Àmì ìràwọ̀ kan ṣoṣo (*) fi ìdáhùn ìlọ́po kékeré tí ó dúró déédé hàn. Àwọn ìràwọ̀ méjì (**) fi àwọn ìdáhùn tí a kò lè tún ṣe hàn. Wá host (H) àti àwọn tó ń fa ẹ̀jẹ̀ (I) An.arabiensis ní àwọn ìfàmọ́ra tó yàtọ̀ síra sí àwọn àdàpọ̀ ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti àtijọ́. Ìwọ̀n àròpọ̀ àwọn efon tí wọ́n fà mọ́ orúkọ lẹ́tà tó yàtọ̀ síra yàtọ̀ sí ara wọn (ANOVA ọ̀nà kan nípa lílo ìwádìí Tukey lẹ́yìn hoc; p < 0.05). Àwọn ọ̀pá àṣìṣe dúró fún àṣìṣe ìwọ̀n náà
Obìnrin Ann.arabiensis, wákàtí 72 àti wákàtí 120 lẹ́yìn oúnjẹ ẹ̀jẹ̀, nígbà tí wọ́n ń bímọ, kò sí ìfẹ́ sí àwọn ohun tí a yọ jáde láti inú ìtọ̀ màlúù tuntun àti ti àgbà ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ohun tí a fi ń darí pentane (χ2 = 3.07, p > 0.05; Àfikún fáìlì 1: Àwòrán S1).
Fún obìnrin Ann.arabiensis, àwọn àyẹ̀wò GC-EAD àti GC-MS ṣàfihàn àwọn èròjà oníṣẹ́-ara mẹ́jọ, mẹ́fà, mẹ́ta àti mẹ́ta (Àwòrán 5D-G). Bó tilẹ̀ jẹ́ pé a rí ìyàtọ̀ nínú iye àwọn èròjà tí ó fa ìdáhùn electrophysiological, ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn èròjà wọ̀nyí wà nínú èròjà oníṣẹ́-ara headspace kọ̀ọ̀kan tí a kó jọ láti inú ìtọ̀ tuntun àti ti ọjọ́ orí. Nítorí náà, fún èròjà kọ̀ọ̀kan, àwọn èròjà tí ó mú ìdáhùn ti ara jáde láti inú àwọn èròjà obìnrin tí ó wà ní òkè ààlà nìkan ni a fi kún àwọn àyẹ̀wò síwájú síi.
Iye itusilẹ iyipada ti awọn agbo ogun bioactive ninu gbigba aaye ori pọ si lati 29 µg h-1 ninu ito tuntun si 242 µg h-1 ninu ito wakati 168, pataki nitori p-cresol ati m-formaldehyde Phenol pọ si bakanna bi phenol. Ni idakeji, awọn oṣuwọn itusilẹ ti awọn agbo ogun miiran, bii 2-cyclohexen-1-one ati decanal, dinku pẹlu ọjọ-ori ito ti n pọ si, eyiti o ni ibatan pẹlu idinku ti a rii ninu kikankikan ifihan agbara (ọpọlọpọ) ninu chromatogram (Fig. 5D)-G apa osi) ati awọn idahun ti ara si awọn agbo ogun wọnyi (Fig. 5D-G apa ọtun).
Ni gbogbogbo, adalu sintetiki naa ni ipin adayeba kanna ti awọn agbo ogun bioactive ti a ṣe idanimọ ninu awọn iyọkuro iyipada ti awọn aaye ori ito tuntun ati ti ogbo (Fig. 5D–G) ati pe ko han pe o fa ifamọra pataki ninu wiwa olugbalejo kan (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Fig. 5H) tabi awọn efon ti n fa ẹjẹ (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; Fig. 5I). Sibẹsibẹ, awọn afiwera lẹhin hoc laarin awọn itọju fihan pe awọn efon ti n wa olugbalejo jẹ ifamọra pupọ si adalu sintetiki ti ito ti ogbo wakati 24 ni akawe pẹlu awọn iṣakoso pentane (p = 0.0086; Fig. 5H).
Láti ṣe àyẹ̀wò ipa àwọn èròjà kọ̀ọ̀kan nínú àwọn àdàpọ̀ ìṣàpẹẹrẹ ti ìtọ̀ ọjọ́ mẹ́rìnlélógún, a ṣe àyẹ̀wò àwọn àdàpọ̀ ìṣàfihàn mẹ́fà pẹ̀lú àwọn àdàpọ̀ pípé nínú àyẹ̀wò Y-tube, nínú èyí tí a ti yọ àwọn èròjà kọ̀ọ̀kan kúrò. Fún àwọn efon tí ń wá ilé ìtura, yíyọ àwọn èròjà kọ̀ọ̀kan kúrò nínú àdàpọ̀ pípé ní ipa pàtàkì lórí àwọn ìdáhùn ìwà (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Fáìlì àfikún 1: Fáìlì S2A), gbogbo àwọn èròjà ìṣàyẹ̀wò jẹ́ ohun tó fani mọ́ra ju Kéré ju àwọn èròjà pípé lọ. Ní ìyàtọ̀ sí èyí, yíyọ àwọn èròjà kọ̀ọ̀kan kúrò nínú àdàpọ̀ ìṣàfihàn pípé kò ní ipa lórí àwọn ìdáhùn ìwà ti àwọn efon tí ń fa ẹ̀jẹ̀ (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), àyàfi decanal, èyí tí ó yọrí sí àwọn ìpele tí ó dínkù ní ìfiwéra pẹ̀lú Àmì Ìfàmọ́ra pípé (p = 0.022; Fáìlì Àfikún 1: Fáìlì S2B).
Ní abúlé kan tí ibà ti gbilẹ̀ ní Ethiopia, a ṣe àyẹ̀wò ipa tí àdàpọ̀ ìtọ̀ màlúù wákàtí mẹ́rìnlélógún ní ní fífà mọ́ àwọn efon lábẹ́ ipò pápá fún òru mẹ́wàá (Àwòrán 6A). Àròpọ̀ efon 4,861 ni a mú tí a sì dá mọ̀, nínú èyí tí 45.7% jẹ́ Anthropus.gambiae sl, 18.9% jẹ́ Anopheles pharoensis àti 35.4% jẹ́ Culex spp. (Fáìlì àfikún 1: Táblì S1). Anopheles arabinis ni ọ̀kan lára ​​àwọn ẹ̀yà An.Gambian tí a dá mọ̀ nípasẹ̀ ìwádìí PCR. Ní àròpín, a mú efon 320 ní òru kan, nígbà tí àwọn ìdẹ tí a fi àdàpọ̀ ìpara mú pọ̀ ju àwọn ìdẹ tí a so pọ̀ láìsí àdàpọ̀ lọ (χ2(0, 3196) = 170.0, p < 0.0001). Àwọn ìdẹ tí kò ní ìpakúpa ni a gbé kalẹ̀ sí ọ̀kọ̀ọ̀kan àwọn òru ìdarí márùn-ún ní ìbẹ̀rẹ̀, àárín, àti òpin ìdánwò náà. A mú iye efon kan náà nínú méjèèjì àwọn ìdẹkùn, tí ó fi hàn pé kò sí ẹ̀tanú láàárín àwọn ilé (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) àti pé kò sí ìdínkù iye ènìyàn ní àkókò ìkẹ́kọ̀ọ́ náà. Ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ìdẹkùn ìṣàkóso, iye àwọn efon tí a mú nínú àwọn ìdẹkùn tí ó ní àdàpọ̀ ìṣẹ̀dá pọ̀ sí i gidigidi: wíwá ìtọ́jú ...
Ìṣàyẹ̀wò pápá lórí ipa tí àdàpọ̀ òórùn ìtọ̀ màlúù oníṣẹ́ẹ́mọ́ ti wákàtí mẹ́rìnlélógún. Àwọn ìdánwò pápá ni a ṣe ní gúúsù àárín gbùngbùn Ethiopia (àwòrán), nítòsí ìlú Maki (fi sínú), nípa lílo ìdẹkùn ìmọ́lẹ̀ Centers for Disease Control (CDC) (ọ̀tún) ní àwọn ilé tí a so pọ̀, pẹ̀lú àwòrán onígun mẹ́rin ti Latin (àwòrán afẹ́fẹ́) (A). Àwọn fọ́tò CDC tí a fi òórùn ṣe tí a fi òórùn ṣe ń fà àti mú àwọn abo Anopheles arabesques (B), ṣùgbọ́n kìí ṣe Anopheles farroes (C), ní ọ̀nà mìíràn, ipa tí ó sinmi lórí ipò ara. Ní àfikún, àwọn ìdẹkùn wọ̀nyí gba iye àwọn efon Culex tí ó pọ̀ sí i. (D) Ní ìfiwéra pẹ̀lú ìṣàkóso. Àwọn ọ̀pá ní apá òsì dúró fún àkójọpọ̀ ...
A mú àwọn ẹ̀yà mẹ́ta náà ní ọ̀nà ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ nínú àwọn ìdẹkùn tí ó ní àwọn àdàpọ̀ oníṣọ̀kan. Ní wíwá olùgbàlejò (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), fífún ẹ̀jẹ̀ ní oúnjẹ (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) àti oyún (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) a dì mọ́ .arabiensis nínú ìdẹkùn tí ó tú àdàpọ̀ oníṣọ̀kan náà jáde (Àwòrán 6B), nígbà tí iye An kò yàtọ̀. A rí Pharoensis ní àwọn ipò ara ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ (Àwòrán 6C). Fún Culex, ìbísí pàtàkì kan ṣoṣo nínú iye àwọn efon tí ń wá olùgbàlejò ni a rí nínú àwọn ìdẹkùn tí a fi àdàpọ̀ oníṣọ̀kan náà dẹ (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; Àwòrán 6D), ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ìdẹkùn ìṣàkóso.
Àwọn ìdẹ ìjẹ tí a gbé síta àwọn ibi tí ó ṣeé ṣe kí ó wà láàárín àwọn ibi ìbímọ àti àwọn agbègbè ìgbèríko ní Ethiopia ni a lò láti ṣe àyẹ̀wò bóyá àwọn efon malaria ń lo òórùn ìwẹ̀ màlúù gẹ́gẹ́ bí àmì ibùgbé olùgbàlejò. Ní àìsí àmì olùgbàlejò, ooru, àti pẹ̀lú tàbí láìsí òórùn ìwẹ̀ màlúù, a kò rí efon kankan mú (Fáìlì àfikún 1: Àwòrán S3). Síbẹ̀síbẹ̀, ní iwájú ooru gíga àti òórùn ìwẹ̀ màlúù, a fà àwọn efon malaria obìnrin mọ́ra, bó tilẹ̀ jẹ́ pé wọ́n kéré, láìka ọjọ́ orí ìwẹ̀ sí (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Àfikún fáìlì 1: Àwòrán S3). Ní ​​ìyàtọ̀ sí èyí, àwọn ìṣàkóso omi kò gba àwọn efon malaria ní ìwọ̀n otútù gíga (Fáìlì àfikún 1: Àwòrán S3).
Àwọn efon ibà máa ń kó àwọn èròjà tí ó ní nitrogen sínú ara wọn nípasẹ̀ jíjẹ oúnjẹ lórí ìtọ̀ màlúù (ìyẹn, àwọn adágún omi) láti mú kí àwọn ànímọ́ ìtàn ìgbésí ayé sunwọ̀n síi, bíi àwọn kòkòrò mìíràn [2, 4, 24, 25, 26]. Ìtọ̀ màlúù jẹ́ ohun èlò tí ó rọrùn láti tún ṣe tí ó ní í ṣe pẹ̀lú àwọn ibi ìsinmi fún àwọn efon ibà, bíi àwọn pápá màlúù àti ewéko gíga nítòsí àwọn ilé ìgbèríko àti àwọn ibi ìbímọ. Àwọn efon obìnrin máa ń rí ohun èlò yìí nípasẹ̀ òórùn wọn, wọ́n sì lè ṣàkóso gbígbà àwọn èròjà nitrogen nínú ìtọ̀, títí kan urea, ohun èlò nitrogen pàtàkì nínú ìtọ̀ [15, 16]. Ní ìbámu pẹ̀lú ipò ara efon obìnrin, àwọn èròjà inú ìtọ̀ ni a pín láti mú kí ìgbòkègbodò ìrìn àti ìwàláàyè àwọn efon obìnrin tí wọ́n ń wá àlejò pọ̀ sí i, àti ìwàláàyè àti àwọn ànímọ́ ìbísí àwọn ènìyàn tí wọ́n ń jẹ ẹ̀jẹ̀ nígbà ìyípo gonadotropic àkọ́kọ́. Nítorí náà, ìdàpọ̀ ìtọ̀ ń kó ipa pàtàkì fún àwọn efon ibà tí wọ́n ti sé bí àwọn àgbàlagbà tí kò ní oúnjẹ tó [8], nítorí ó ń fún àwọn efon obìnrin ní agbára láti gba àwọn èròjà nitrogen pàtàkì nípa ṣíṣe oúnjẹ tí kò ní ewu púpọ̀. Wíwá yìí ní àwọn àbájáde àjàkálẹ̀ àrùn pàtàkì, bí àwọn obìnrin ṣe ń mú kí ìfojúsùn ìwàláàyè wọn pọ̀ sí i, ìṣiṣẹ́ wọn. àti ìṣẹ̀dá ìbímọ, gbogbo èyí tí ó ní ipa lórí agbára ìṣàyẹ̀wò. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, ìwà yìí lè jẹ́ àfojúsùn àwọn ètò ìṣàkóso ìṣàyẹ̀wò ọjọ́ iwájú.