Стицање и дистрибуција хранљивих материја интегрише исхрану инсеката и карактеристике животне историје. Да би надокнадили недостатке специфичних хранљивих материја у различитим животним фазама, инсекти могу да добију ове хранљиве материје кроз допунску исхрану, на пример, хранећи се излучевинама кичмењака у процесу познатом као локве. .Циљ овог истраживања био је да се процени да ли је Ан.арабиенсис агитација на крављи урин ради стицања хранљивих материја побољшава карактеристике историје живота.
Уверите се да је безбедно. Арабиенсис је привукао мирис свежег, 24-часовног, 72-часовног и 168-часовног старог крављег урина, а женке које су тражиле домаћина и храњене крвљу (48-часовни после крвног оброка) су мерене у олфактометру са И-цеви, а затим је процењена и коришћена електрофизичка анализа гравидних женки. и биоактивних једињења у урину крава у све четири старосне класе. Синтетичке мешавине биоактивних једињења су процењене у И-цеви и теренским испитивањима. Да би се истражио крављи урин и његово главно једињење које садржи азот као потенцијална додатна исхрана за векторе маларије, мерени су параметри исхране и карактеристике животне историје. Женке су процењене на преживљавање, привезани лет и репродукцију.
Потражите крв и храну домаћина. У лабораторијским и теренским студијама, Арапи су били привучени природним и синтетичким мирисом свежег и одлежалог крављег урина. Трудне женке су биле равнодушне према одговорима крављег урина на местима мријеста. , или репродукција.
Анопхелес арабинис аквизиција и дистрибуција крављег урина за побољшане карактеристике историје живота. Додатна исхрана крављим урином утиче директно на капацитет вектора повећањем дневног преживљавања и густине вектора, а индиректно променом активности лета и стога би требало да буде разматрано у будућим моделима.
Стицање и дистрибуција хранљивих материја интегрише исхрану инсеката и карактеристике историје живота [1,2,3]. Инсекти су у стању да бирају и добијају храну и обављају компензаторно храњење на основу доступности хране и потреба за хранљивим материјама [1, 3]. Дистрибуција хранљивих материја зависи од процеса животне историје и може довести до различитих захтева за квалитетом и количином исхране у исхрани и квантитетом у специфичним нутријентима у различитим животним фазама, цомпенсатес нутриици1 [цомсецтс нутриентс дефенцес 1]. инсекти могу добити ове хранљиве материје кроз допунску исхрану, као што је блато, различити измет и излучевине кичмењака, и стрвина, процес познат као локве [2]. Иако су различите врсте лептира и мољаца првенствено описане, појилице се јављају и у другим редовима инсеката, а привлачност и храњење на ове врсте исхране, здравља и других трава могу имати значајне ефекте [5]. 7].Маларични комарац Анопхелес гамбиае сенсу лато (сл) појављује се као 'неухрањена' одрасла особа [8], тако да заливање може играти важну улогу у карактеристикама његове животне историје, али је ово понашање до сада било занемарено. Употреба агитације као средства за повећање уноса хранљивих материја може имати важне последице у овом важном епидемиолошком фактору.
Унос азота код одраслих женки комараца Анопхелес је ограничен због ниских калоријских резерви које се преносе из ларве и неефикасног искоришћења крвног оброка [9]. Женка Анн.гамбиае сл то обично компензује суплементацијом са додатним крвним оброцима [10, 11], чиме се више људи доводи у опасност од болести и ризик од заразе. кичмењаци могу да користе допунску исхрану излучевинама кичмењака да би стекли азотна једињења која побољшавају адаптацију и маневрисање лета, као што показују други инсекти [2]. У том погледу, интересантна је снажна и изразита привлачност једне од сродних врста у оквиру Ан. Комплекс гамбијских сл врста, Анопхелес арабинис, свежа и остарела, кравља урина, оп. његове преференције домаћина и познато је да се повезује са говедом и храни се њоме. Крављи урин је ресурс богат азотним једињењима, при чему уреа чини 50-95% укупног азота у свежем урину [15, 16]. Како крављи урин стари, микроорганизми користе ове ресурсе да смање сложеност азота у року од 14 сати. опадањем органског азота, напредују алкалофилни микроорганизми (од којих многи производе једињења токсична за комарце) [15], што може бити женка Анн.арабиенсис првенствено привлачи мокраћу стару 24 сата или мање [13, 14].
У овој студији су тражени домаћини и крвљу храњени Анс. Током свог првог циклуса гонадотропина, арабиенсис је процењен на добијање азотних једињења, укључујући уреу, мешањем урина. Затим је спроведена серија експеримената да би се проценило како женке комараца распоређују овај потенцијални ресурс хранљивих материја, као и да побољшају ко-продукт и даље преживљавање. урин је процењен да би се утврдило да ли су они дали поуздане трагове за домаћина и Ан који се храни крвљу. У потрази за овим потенцијалним нутритивним ресурсом, арабиенсис је открио хемијске корелације иза уочене диференцијалне привлачности. Синтетичке мирисне мешавине испарљивих органских једињења (ВОЦ) идентификоване у 24-часовном урину одлежаном, додатно су процењени резултати порођаја у различитим условима рада говеда и даље су процењени резултати порођаја у различитим условима рада говеда. физиолошка стања.Привлачење комараца. Добијени резултати потврђују да Ан.арабиенсис преузима и дистрибуира азотна једињења која се налазе у урину кичмењака како би утицала на карактеристике историје живота. Ови резултати се разматрају у контексту потенцијалних епидемиолошких последица и како се могу користити за надзор и контролу вектора.
Анопхелес арабицанс (сој Донгола) одржавани су на 25 ± 2 °Ц, 65 ± 5% релативне влажности и циклусу светло:тамно од 12:12 х. Ларве су узгајане у пластичним посудама (20 цм × 18 цм × 7 цм) напуњеним дестилованом водом и храњене храном Тетрамин® В (Тетрамин®, рибама Тетрамин® В ДЕ). мл шољица (Нолато Хертила, Асторп, СЕ), а затим пребачени у кавезе Бугдорм (30 цм × 30 цм × 30 цм; МегаВиев Сциенце, Тајчунг, Тајван) да би се омогућило избијање одрасле особе. Одрасли су добијали 10% раствор сахарозе ад либитум до 4 дана након ницања, на којој је женки одмах понуђена звездана исхрана (дпе). дестилована вода пре експеримента, као што је описано у наставку. Женке које су коришћене за експерименте са цевима за летење су изгладњеле само 4-6 сати са водом ад либитум. Да би се припремили комарци који сишу крв за наредне биолошке тестове, 4 дпе женке су добиле дефибротичну овчију крв (Хатуналаб, Бро, СЕ) коришћењем мембранског система за храњење женки Ворксхоп, Ацулмотек Дисцовериингтон (Ворксхоп Цонвериингтон). затим пребачене у појединачне кавезе и обезбеђене исхране директно, као што је описано у наставку, или 10% сахарозе ад либитум током 3 дана пре доле описаних експеримената. Потоње женке су коришћене за биотестове на цеви за летење и пребачене у лабораторију, а затим су имале дестиловану воду ад либитум 4-6 сати пре експеримента.
Тестови храњења су коришћени да се квантификује потрошња урина и уреје код одраслих женки Арапа. Женке које траже домаћина и женке које се хране крвљу добијају исхрану која садржи 1% разблаженог свежег и старог крављег урина, различите концентрације урее и две контроле (10% сахарозе и воде) током 48 сати. -1; Сигма-Алдрицх, Стоцкхолм, СЕ) је додат исхрани и испоручен у матрици 4 × 4 у епруветама за микроцентрифугу од 250 µл (Акиген Сциентифиц, Унион Цити, Калифорнија, САД; Слика 1А) Напуните до ивице (~300 µл). Петријева шоља (12 цм у пречнику и 6 цм у висини; Семадени, Остермундиген, ЦХ; Слика 1А) у потпуном мраку на 25 ± 2 цм °Ц и 65 ± 5% релативној влажности. Ови експерименти су поновљени 5 до 10 пута. Након излагања дијети, комарци су стављени до даље анализе на -20 °Ц.
Потражите говеђи урин и уреу које апсорбује домаћин и женка која сише крв Анопхелес арабианус. У испитивању храњења (А), женке комараца су добиле исхрану која се састојала од свежег и остарјелог крављег урина, различитих концентрација урее, сахарозе (10%) и дестиловане воде (Х2О). -женке које траже апсорбују 72-часовни крављи урин мање од 168-часовног крављег урина (Б). Средњи укупни садржај азота (± стандардна девијација) у урину је представљен на инсету. Женке које траже домаћина (Д, Ф) и женке које сишу крв (Е, Г) узимају уреу на начин зависан од дозе, запремина у зависности од дозе. ОВА коришћењем Тукеи-еве пост хоц анализе; п < 0,05). Траке грешке представљају стандардну грешку средње вредности (БЕ). Права испрекидана линија представља линију лог-линеарне регресије (Ф, Г)
Да би се ослободила апсорбована храна, комарци су појединачно стављени у епрувете за микроцентрифугу од 1,5 мл које садрже 230 µл дестиловане воде и ткиво је разбијено помоћу тучка за једнократну употребу и акумулаторског мотора (ВВР Интернатионал, Лунд, СЕ), након чега је уследило центрифугирање на 10 µкрм у трајању од 10 минута. игма-Алдрицх) и апсорбанца (λ620) одређивани су коришћењем читача микроплоча базираног на спектрофотометру (СПЕЦТРОСтар® Нано, БМГ Лабтецх, Ортенберг, ДЕ) нм). Алтернативно, комарци су млевени у 1 мл дестиловане воде, од којих је 900 µл од чега је 900 µл 100 µл ултраљубичастог зрачења пребачено на спец. 800, Схимадзу, Киста, СЕ). Да би се квантификовао унос исхраном, припремљена је стандардна крива серијским разблажењем да би се добило 0,2 µл до 2,4 µл 1 мг мл-1 ксилен цијанида. Затим је коришћена оптичка густина познатих концентрација боје у храни за одређивање количине хране у свакој концентрацији.
Подаци о запремини су анализирани коришћењем једносмерне анализе варијансе (АНОВА) праћене Тукијевим пост хоц поређењем у пару (ЈМП Про, в14.0.0, САС Институте Инц., Цари, НЦ, УС, 1989–2007). Анализе линеарне регресије су описале унос уреје зависан од концентрације и упоређени одговори између домаћина и упоређених одговора у крви. 8.0.0 за Мац, ГрапхПад Софтваре, Сан Дијего, Калифорнија, САД).
Приближно 20 µл узорака урина из сваке старосне групе везано је на Цхромосорб® В/АВ (10 мг 80/100 месх, Сигма Алдрицх) и капсулирано у лимене капсуле (8 мм × 5 мм). хам, МА, САД) за одређивање садржаја азота у свежем и одлежаном урину према протоколу произвођача. Укупни азот (г Н л-1) је квантификован на основу познатих концентрација урее коришћених као стандард.
Да би се проценио ефекат исхране на преживљавање женки које траже домаћина и женке које сишу крв, комарци су појединачно стављени у велике Петријеве посуде (12 цм у пречнику и 6 цм у висину; Семадени) са рупом прекривеном мрежом на поклопцу (3 цм у пречнику) са За вентилацију и снабдевање храном. Дијете су обезбеђене непосредно након 4 дпе и четири контролне концентрације у 1% свеже и 1% контролне количине у уре. 10% сахарозе и воде. Свака дијета је пипетирана на зубни тампон (ДАБ Дентал АБ, Уппландс Васби, СЕ) уметнут у шприц од 5 мл (Тхермо Фисхер Сциентифиц, Гетеборг, СЕ), клип је уклоњен и стављен на петријеву посуду (слика 1. горе описана дијета). Бројани су два пута дневно, док су мртви комарци одбачени све док последњи комарац није угинуо (н = 40 по третману). Преживљавање комараца храњених различитим дијетама статистички је анализирано коришћењем Каплан-Меиерових кривуља преживљавања и тестова лог ранга за упоређивање поређења дистрибуције преживљавања између дијета.0.24 СПСС.0.0.0.
Прилагођени летећи млин за комарце заснован на Аттисано ет ал.[17], направљен од 5 мм дебелих прозирних акрилних панела (10 цм ширине к 10 цм дужине к 10 цм висине) без предњег и задњег панела (слика 3: врх). Окретни склоп са вертикалном цеви направљеном од гасне хроматографске колоне; потребно је обесити крај колоне за гасну хроматографију (0,25 мм до 5 цм па је потребно закачити лепак у Л и д). ир неодимијумских магнета на удаљености од 9 цм. Хоризонтална цев направљена од истог материјала (6,5 цм Л) је пресекла вертикалну цев да би формирала везану руку и руку која је носила мали комад алуминијумске фолије као сигнал који прекида светлост.
Женке које су биле изгладњеле 24 сата добијале су горенаведену исхрану 30 минута пре обуздавања. Потпуно храњене женке комараца су затим појединачно анестезиране на леду 2-3 минута и причвршћене за иглице инсеката са пчелињим воском (Јоел Свенссонс Вакфабрик АБ, Мунка Љунгби од стране хоризонталног лета у СЕ). снимљени су прилагођеним уређајем за бележење података, затим ускладиштени и приказани коришћењем софтвера ПЦ-Лаб 2000™ (в4.01; Веллеман, Гавере, БЕ). Млин за летење је постављен у просторију са регулисаном климом (12 х:12 х, светло: тамно, 25 ± 2 °Ц, 65 ± 5% РХ).
Да би се визуелизовао образац активности лета, укупна прелетена раздаљина (м) и укупан број узастопних летних активности израчунати су по сату током периода од 24 сата. Поред тога, просечне удаљености које су прелетеле појединачне женке су упоређене у различитим третманима и анализиране коришћењем једносмерне АНОВА и Тукеи-ове пост хоц анализе (ЈМП Про, в14.0.0), док је просечна раздаљина зависна од Института, док је третман зависан од Ад С. Поред тога, просечан број рунди се израчунава у корацима од 10 минута.
Да би се проценио ефекат исхране на репродуктивне перформансе Ан.арабиенсис, шест женки (4 дпе) је пребачено директно у Бугдорм кавезе (30 цм × 30 цм × 30 цм) након узимања крви, а затим су обезбедили експерименталну исхрану у трајању од 48 сати као што је горе описано. Дијета је затим уклоњена и чаше за мрешћење (30 мл; Нолато диспут Хертила сваких трећих сати пуњене су са 8 сати мењања воде, 20 мл) 24 сата. Поновите сваки режим исхране 20-50 пута. Јаја су пребројана и забележена за сваки експериментални кавез. Подузорци јаја су коришћени за процену средње величине и варијације дужине појединачних јаја (н ≥ 200 по исхрани) коришћењем микроскопа Диалук-20 (ДМ1000; Д Ветзлар ДЕФЦ, опремљен са Ветзлар ДЕ 3) 20 Р2;Леица Мицросистемс Лтд., ДЕ). Преостала јаја су држана у просторији са контролисаном климом у стандардним условима узгоја 24 х, а подузорак недавно изниклих ларви 1. степена (н ≥ 200 по исхрани) је измерен, као што је горе описано. Број јаја и величина једног јаја и јајета су упоређени коришћењем једног третмана и АН-ове анализе. (ЈМП Про, в14.0.0, САС Институте Инц.).
Хлапљиве материје из свежег простора (1 сат након узорковања), 24 сата, 72 сата и 168 сати старог урина су сакупљене из узорака сакупљених од говеда Зебу, расе Арси. Ради погодности, узорци урина су прикупљени рано ујутро док су краве још биле у штали. Узорци урина су сакупљени од 10 појединачних узорака од 10 појединачних узорака од којих је 10 јединки пребачено у 20 мл. Топпитс Цофресцо, Фрисцххалтепродукте ГмбХ анд Цо., Минден, ДЕ) у полиамиду од 3 л са поклопцем У пластичним бачвама од винил хлорида. Испарљиве материје из сваког узорка говеђег урина сакупљене су директно (свеже) или након сазревања на собној температури током 24 х, 72 х и 168 х, свака старосна група и била је репрезентативна за сваку старосну групу.
За сакупљање испарљивих материја у простору изнад простора, коришћен је систем затворене петље да циркулише струја гаса филтрираног са активним угљем (100 мл мин-1) кроз полиамидну врећу до адсорпционе колоне у трајању од 2,5 х коришћењем мембранске вакуум пумпе (КНФ Неубергер, Фрајбург, ДЕ). Као контрола, направљена је празна колона за хлађење, направљена је од празне колоне хеадспаце. инг (5,5 цм к 3 мм ид) који садржи 35 мг Порапак К (50/80 месх; Ватерс Ассоциатес, Милфорд, МА, УС) између чепова од стаклене вуне. Пре употребе, колона је испрана са 1 мл редестилованог н-хексана (Мерцк, Дармстадт, ДЕ) и 19 мл Сигграде Пента адсорб% 99 мл. испарљиве супстанце су елуиране са 400 μл пентана. Колекције у простору главе су обједињене и затим ускладиштене на -20°Ц док се не користе за даљу анализу.
Реакције понашања Ан.Хеадспаце испарљивих екстраката који траже домаћина и који једу крв анализирани су из свежег, 24-, 72-х и 168-часовног урина, анализирани су на испарљиве екстракте комараца Арабидопсис коришћењем олфактометра са равном стакленом цеви [18]. Араб [19]. Олфактометар са стакленом цеви (80 цм × 9,5 цм ид) био је осветљен са 3 ± 1 лк црвене светлости одозго. Угаљ филтриран и влажни проток ваздуха (25 ± 2 °Ц, 65 ± 2% релативне влажности) прошао је биолошки тест, стварајући серију од 30 м/с. минар проток и уједначену структуру перја. Дозатор за зубне тампоне (4 цм × 1 цм; Л:Д; ДАБ Дентал АБ), обешен на калем од 5 цм на ветровитом крају олфактометра, са променом стимулатора сваких 5 минута. За анализу, 10 μл сваког екстракта предњег простора, разблаженог 1:10, коришћено је као једнака количина стимулуса домаћина. или комарци који сишу крв стављени су у појединачне кавезе за ослобађање 2-3 сата пре почетка експеримента. Кавез за ослобађање је постављен на страну олфактометра који се налази низ ветар, а комарцима је остављено да се аклиматизирају 1 мин, а затим је лептир вентил кавеза отворен да би се ослободио. Привлачење до третмана или контроле је анализирано у року од 5 минута од третмана или контроле. .Сваки испарљиви екстракт и контрола простора у глави су реплицирани најмање 30 пута, а да би се избегли ефекти било ког дана, исти број третмана и контрола је тестиран сваког експерименталног дана. Тражити одговоре од домаћина и крвљу храњених Анс. Арапски у односу на хеадспаце скупови су анализирани коришћењем номиналне логистичке регресије праћене поређењем у паровима, в.0.0 Института (4АСМП Проф.10).
Ан-ов одговор на мријештење. Екстракти из свјежег и остарјелог крављег урина анализирани су у Бугдорм кавезима (30 цм × 30 цм × 30 цм; МегаВиев Сциенце). Пластичне чаше (30 мЛ; Нолато Хертила) напуњене са 20 мЛ дестиловане воде дале су подлогу за мријешћење, а затим су постављене у угао чашице за мријешћење насупрот 4 цм2. По 10 μл сваког екстракта у просторији у разблажењу 1:10. Једнака количина пентана је коришћена за подешавање контролне чаше. Третман и контролна чаша су размењиване између сваког експеримента да би се контролисали ефекти положаја. Десет женки храњених крвљу пуштено је у експерименталне кавезе на ЗТ 9-11 и јаја у шољама су пребројана 24 сата касније. ид у чаши за третман – број положених јаја у контролну чашу)/(укупан број положених јаја). Сваки третман је поновљен 8 пута.
Анализа помоћу гасне хроматографије и детекције дијаграма електронске антене (ГЦ-ЕАД) женки Ан.арабиенсис је обављена као што је претходно описано [20]. Укратко, свежи испарљиви екстракти из главе одвојени су коришћењем Агилент Тецхнологиес 6890 ГЦ (Санта Клара, Калифорнија, САД) опремљеног колоном ХП-5 × 2 мм дебљине филма, 30 µм А, дебљине филма 30,2 µм. позајмљене технологије).и старење урина. Водоник је коришћен као мобилна фаза са просечном линеарном брзином протока од 45 цм с-1. Сваки узорак (2 μл) је убризгаван 30 секунди у режиму раздвајања са улазном температуром од 225 °Ц. Температура ГЦ пећнице је програмирана од 35 °Ц (држање од 3 минута) до 100 минута задржавања на Г-1 °Ц на 100 °Ц мин. разделника, 4 пси азота је додато и подељено 1:1 у Герстел 3Д/2 крсту мале мртве запремине (Герстел, Мулхеим, ДЕ) између детектора јонизације пламена и ЕАД-а. ГЦ капилара ефлуента за ЕАД је пропуштена кроз Герстел ОДП-2 преносну линију, која прати температуру од 1 цм × 8 °Ц у стаклу, где је температура 1 цм × 8 °Ц помешан са влажним ваздухом филтрираним угљеником (1,5 л мин-1). Антена је постављена на 0,5 цм од излаза цеви. Сваки појединачни комарац представљао је једну реплику, а за комарце који траже домаћина, обављена су најмање три реплика на узорцима урина сваког узраста.
Идентификација биоактивних једињења у колекцијама свежег и остарелог говеђег урина коришћењем комбинованог ГЦ и масеног спектрометра (ГЦ-МС; 6890 ГЦ и 5975 МС; Агилент Тецхнологиес) да би се изазвали одговори антена у ГЦ-ЕАД анализи, која ради у режиму јонизације са електронским ударом. иларна колона (60 м × 0,25 мм унутрашњег пречника, 0,25 μм дебљине филма) користећи хелијум као мобилну фазу са просечном линеарном брзином протока од 35 цм с-1. Узорак од 2 μл је убризган коришћењем истих подешавања ињектора и температуре пећнице као за ГЦ-ЕАД анализу. 14 библиотека (Агилент). Идентификована једињења су потврђена убризгавањем аутентичних стандарда (Додатна датотека 1: Табела С2). За квантификацију, хептил ацетат (10 нг, 99,8% хемијске чистоће, Алдрицх) је убризган као екстерни стандард.
Процена ефикасности синтетичке смеше мириса која се састоји од биоактивних једињења идентификованих у свежем и одлежалом урину да привуче Анс.арабиенсис који тражи домаћина и крвопије, користећи исти олфактометар и протокол као горе. Синтетичке мешавине су опонашале састав и пропорције једињења у мешавини смеше у глави 2-х свежих 2-х хлапљивих 2-х,х 48 и 168-часовни стари урин (Слика 5Д-Г; Додатни фајл 1: Табела С2). За анализу користите 10 μл потпуно синтетичке смеше у размери 1:100, са укупном брзином ослобађања у распону од приближно 140-2400 нг х-1, за процену потпуне привлачности за домаћина и крвотока који се врши у тесту. иве смеше појединачних једињења из комплетне смеше су уклоњене. Тражити одговоре од домаћина и храњених крвљу Анс.Арап вс синтетичке и субтрактивне смеше су анализирани коришћењем номиналне логистичке регресије праћене поређењима у паровима за непарне односе (ЈМП Про, в14.0.0, САС Институте Инц.).
Да би се проценило да ли крављи урин може да послужи као знак станишта домаћина за маларичне комарце, свеж и остарели крављи урин, сакупљен као што је горе описано, и вода стављени су у канте од 3 л (100 мл) и постављене у замке за мамац домаћина.(БГ-ХДТ верзија; БиоГентс, Регенсбург, ДЕ). Десет замки постављених 50 м један од другог на пашњаку, 400 м од сеоске заједнице (Силаи, Етиопија, 5°53´24´´Н, 37°29´24´´Е) и без говеда, на сталном присуству домаћина и пет села, док су се узгајали симултано присуство говеда. замке су остављене незагрејане. Свака локација за третман се ротира сваке ноћи укупно пет ноћи. Број комараца ухваћен у замке мамценим урином различите старости упоређен је коришћењем логистичке регресије са бета биномном дистрибуцијом (ЈМП Про, в14.0.0, САС Институте Инц.).
У селу са ендемом маларије у близини града Маки, регион Оромиа, Етиопија (8° 11′ 08″ С, 38° 81′ 70″ Е; Слика 6А). Студија је спроведена између средине августа и средине септембра (пре него што почне годишња киша у затвореном простору, током 2000. године). 50 м један од другог) који се налази на периферији села су одабрани за истраживање (Сл. 6А). Критеријуми коришћени за одабир кућа су били: није дозвољено улазак животиња у кућу, није дозвољено кување у затвореном (вући огрев или ћумур) (барем током пробног периода), и куће са највише два становника, спавање у инсектицидима.под третираном мрежом против комараца. Етичко одобрење је дао Одбор за ревизију етике институционалног истраживања (ИРБ/022/2016) Факултета природних наука (ЦНС-ИРБ), Универзитета у Адис Абеби, у складу са смерницама утврђеним Декларацијом Светског медицинског удружења из Хелсинкија. Сагласност од стране локалног саветодавног особља добија се на крају од стране локалног особља за пружање помоћи на крају домаћинства. ниво округа и одељења ('кебеле'). Експериментални дизајн је пратио дизајн 2 × 2 латиничног квадрата, у коме су синтетичке мешавине и контроле додељене упареним кућама прве ноћи и замењене између кућа следеће експерименталне ноћи. Овај процес је поновљен десет пута. Поред тога, да би се проценила активност комараца у одабраним кућама, постављено је да је ЦДЦ трчао на средњем почетном пољу, а ЦДЦ покретао пет пута. исто доба дана.
Синтетичка смеша која садржи шест биоактивних једињења растворена је у хептану (97,0% растварач ГЦ квалитета, Сигма Алдрицх) и пуштена на 140 нг х-1 коришћењем диспензера за памучни фитиљ [20]. Дозатор за фитиљ је омогућио да се сва једињења отпусте у константним пропорцијама током 12-часовног уласка у контролну тачку. замка за контролу и превенцију (ЦДЦ) (Џон В. Хок компанија, Гејнсвил, Флорида, САД; слика 6А). Замке су биле окачене 0,8 – 1 м изнад земље, близу подножја кревета, а волонтер је спавао под нетретираном мрежом против комараца и радио је између 18.06. , храњени, полу-трудни и трудни [21] су накнадно прегледани коришћењем анализе ланчане реакције полимеразе (ПЦР) да би се идентификовале врсте које су морфолошки идентификоване као А. гамбиае сл. Чланови комплекса [23]. У теренској студији, хватање упарених кућа у замку анализирано је коришћењем номиналног модела логистичког уклапања, при чему је варијабилни третман зависан од логистике, а привлачење је зависно од фиксирања мешавине (В1, фиксирани ефекат контролне мешавине). .0.0. Институт САС Инц.).Овде извештавамо о χ2 и п-вредностима из теста односа вероватноће.
Процените да ли је безбедно. Арабиенсис је успео да добије урин, његов главни извор азота, уреу, директним храњењем, у року од 48 х од примене током 4 дана након (дпе) испитивања храњења женки које траже домаћина и крвљу (слика 1А). 0,0001 и Ф(5,299) = 56,00, п < 0,0001, респективно; слика 1Б,Ц). Штавише, женке које траже домаћина јеле су мање у урину 72 сата у поређењу са урином након 168 сати (слика 1Б). Када је понуђена исхрана која је садржала уреу која је садржала уреу, све жене-домаћине9 апсорбовале су значајно већу количину урее2 у односу на женке. друге концентрације и воду, док се не разликују од 10% сахарозе (Ф(10,813) = 15,72, п < 0,0001; Слика 1Д). Ово је било у супротности са одговором женки које су храњене крвљу, које су обично апсорбовале значајно више исхране која садржи уреу од воде, иако је суха значајно мање од 10,805 (5,80% сукрозе, 5,805) 0001; Слика 1).1Е). Штавише, када се упореде два физиолошка стања, флеботомизиране женке су апсорбовале више урее него женке које су тражиле домаћина у најнижим концентрацијама, а ове женке су апсорбовале сличне количине урее у вишим концентрацијама (Ф(1,953)= 78,82, п < 1;00.Слика 1Ф, Г). Док се чинило да унос из исхране која садржи уреу има оптималне вредности (Слика 1Д,Е), женке у оба физиолошка стања су биле у стању да модулишу количину апсорбоване урее у читавом опсегу концентрација урее на лог-линеарни начин (Слика 1Ф,Г).).Слично, изгледа да комарци контролишу унос азота регулацијом количине апсорбованог урина, пошто се количина азота у урину одражава у количини апсорбоване (Слика 1Б, Ц и Б уметци).
Да би се проценили ефекти урина и уреје на преживљавање комараца који траже домаћина и комараца који сишу крв, женке су храњене урином све четири старости (свеж, 24 х, 72 х и 168 х након таложења) и распоном концентрација уреје, као и дестилованом водом и 10 % контролне количине сахарозе (ова анализа преживљавања је показала значајан ефекат на преживљавање у исхрани 2). женке које траже домаћина (урин: χ2 = 108,5, дф = 5, п < 0,0001; уреа: χ2 = 122,8, дф = 5, п < 0,0001; слика 2Б, Ц) и женке које се хране крвљу (урин: χ3.0, п. 2 = 137,9, дф = 5, п < 0,0001; Слика 2Д,Е). У свим експериментима, женке су храњене урином, уреом и водом имале су значајно ниже стопе преживљавања у поређењу са женкама које су храњене сахарозом (Слика 2Б-Е). .016) са најмањом вероватноћом преживљавања (слика 2Б). Штавише, женке које су тражиле домаћина храњене 135 мМ урее преживеле су дуже од контроле воде (п < 0,04) (Сл.2Ц). У поређењу са водом, жене које су храњене свежим урином и 24-часовним урином преживеле су дуже (п = 0,001 и п = 0,012, респективно; Слика 2Д), док су жене храњене 72-часовним урином преживеле дуже од оних које су храњене. Д). Када су храњене 135 мМ урее, женке храњене крвљу преживеле су дуже од свих других концентрација уреје и воде (п < 0,013; Слика 2Е).
Преживљавање женки домаћина и крвосисача Анопхелес арабинис која се хранила крављим урином и уреом. У биолошком тесту (А), женкама комараца је обезбеђена исхрана која се састојала од свежег и старог крављег урина, различитих концентрација урее, сахарозе (10%) и дестиловане воде (Х2О). 2 сата док све женке храњене урином (Б, Д) и уреом (Ц, Е), и контроле, сахароза и вода, не буду мртве
Укупна раздаљина и број кругова који су утврђени у тесту у млину за летење током периода од 24 сата разликовали су се између комараца који траже домаћина и комараца који сишу крв, што је у целини показало мању активност лета (Сл. 3). Комарци стари 168 сати који су се хранили урином показали су различите обрасце лета и били су првенствено дневни. Женке комараца које су давале сахарозу или 72-часовни урин показале су активност током 24-часовног периода, док су женке које су давале воду биле активније током средњег периода. Урин стар 72 сата имао је стабилан пад активности током 24 сата (Слика 3).
Перформансе лета женке крвосиса Анопхелес арабинис која се храни ловцем која се храни крављим урином и уреом. У тесту у млину, женке комараца су се храниле свежим и старим крављим урином, различите концентрације урее, сахарозе (10%) и дестиловане воде (Х2О) биле су везане за руке (Х2О). код женки, забележена је укупна раздаљина и број летова по сату за сваку дијету у периоду од 24 сата (тамно: сиво; светло: бело). Просечна удаљеност и просечан број напада приказани су десно од графикона циркадијалне активности. Траке грешака представљају стандардну грешку средње вредности. Статистичка анализа види текст
Генерално, укупна активност лета женки које траже домаћина пратила је образац сличан оном на удаљености лета током периода од 24 сата. На средњу даљину лета значајно је утицала унесена исхрана (Ф(5, 138) = 28,27, п < 0,0001), а женке које су тражиле домаћина су прогутале 72 сата и урин је летео значајно дужим растојањем у поређењу са свим осталим дијетама (0000). Ови комарци су летели дуже од свежег (п = 0,022) и урина старости 24 х (п = 0,022) храњених комараца. За разлику од обрасца активности лета који је описан урином исхране, женке храњене уреом које су тражиле домаћина су испољиле упорну активност лета током друге половине периода активности током 24 сата (слика друге половине периода активности у мраку). , женке које траже домаћина храњене уреом значајно су повећале средњу удаљеност лета у зависности од апсорбоване концентрације (Ф(5, 138) = 1310,91, п < 0,0001). Женке које траже домаћина храњене било којом концентрацијом уреје лете дуже од женки које су храњене водом или сахарозом (п < 0,03).
Укупна активност лета комараца који сишу крв била је стабилна и одржавана током 24 сата на свим начинима исхране, са повећаном активношћу урина током друге половине мрачног периода за женке које су храњене водом, као и за женке које су храњене свеже и старе 24 сата (слика 3). Док је исхрана урина значајно утицала, средња удаљеност лета код женки храњених крвљу = 04 п138 (04 п138). дијета није била (Ф(5, 138) = 1,36, п = 0,24) .са другим урином и контролном исхраном (свежа, п = 0,0091; 72 сата, п = 0,0022; 168 сати, п = 0,001; сахароза, п = 0,0017, п = 0,0017);
Ефекти храњења урином и уреом на репродуктивне параметре процењени су у биотестовима полагања јаја (Слика 4А) и испитивани су према броју јаја која је положила свака женка, величини јаја и новоизлеженим ларвама првог узраста. Број положених јаја. 0008; Слика 4Б). Женке су се храниле 24-часовним урином, крвни оброк је полагао значајно више јаја него женке које су храниле друге дијете са мокраћом и биле су сличне онима које су храњене сахарозом (Слика 4Б). Исто тако, величина јаја које су положиле женке храњене урином варирала је у зависности од исхране, 02, 02, < 02, 02, < 0,5. Женке храњене 4 сата урином и сахарозом полажу значајно већа јаја од женки храњених водом, док су јаја женки храњених са 168 х мокраће била значајно мања (слика 4Ц). Поред тога, исхрана са урином значајно је утицала на величину ларве (Ф(5, 187) = 7.86, п. 24- и 72-часовне женке храњене урином него из јаја положених од ларви јаја. Женке храњене водом и 168-часовне женке храњене урином (слика 4Д).
Репродуктивне перформансе женки Анопхелес арабинис које се хране крављим урином и уреом. Женке комараца које су храњене крвљу храњене су исхраном која се састојала од свежег и одлежаног крављег урина, различитих концентрација урее, сахарозе (10%) и дестиловане воде (Х2О) током 48 сати пре стављања у биотестове, Егг стр. На величину (Ц, Ф) и величину ларви (Д, Г) значајно је утицала исхрана (крављи урин: БД; уреа: ЕГ). Средства за сваки параметар мерена коришћењем различитих назива слова су се значајно разликовала (једносмерна АНОВА коришћењем Тукеи-ове пост хоц анализе; п < 0,05). Траке грешке представљају стандардну грешку средње вредности.
Као главна азотна компонента урина, уреа, када се даје као исхрана женкама које су храњене крвљу, значајно је утицала на репродуктивне параметре у свим студијама. Број јаја која положе женке које су храниле уреу, после крвног оброка, у зависности од концентрације уреје (Ф(11, 360) = 4,69; п < 0,004 µМ концентрација урее), концентрација женке 0,004 µМ уреа М је положио више јаја (Слика 4Е). Женке храњене концентрацијом урее од 134 µМ или више полажу већа јаја од женки које су храњене водом (Ф(10, 4245) = 36,7; п < 0,0001; Слика 4Ф), и величина ларве, иако је погођена сличним концентрацијама урее, 3 0 09 ( 3 0 09). < 0,0001) је била варијабилнија (слика 4Г).
Укупна привлачност испарљивим екстрактима говеђег урина који траже домаћина. На арабиенсис процењен у олфактометру са стакленом цеви (слика 5А) значајно је утицала старост урина (χ2 = 15,9, дф = 4, п = 0,0032; слика 5Б). Слика 5Б). с (72 сата: п = 0,0060, 168 сати: п = 0,012, пентан: п = 0,00070), осим мириса свеже мокраће (п = 0,13; Слика 5Б). Иако је укупна привлачност комараца који сишу крв према мирису урина (χ2,07 = ф7,07) значајно различита. ; Слика 5Ц), показало се да су ове женке значајно привлачније за испарљиве екстракте у простору у поређењу са урином старим 72 сата у поређењу са контролама (п = 0,0066; Слика 5Ц).
Реакције понашања на природне и синтетичке мирисе крављег урина у потрази за домаћином и крвљу храњеним Анопхелес арабианус. Шема олфактометра са стакленом цеви (А). Привлачење испарљивих екстраката из свежег и одлежаног крављег урина домаћину (Б) и крвосисним (Ц) комарцима. Приказани су наш (Е), 72-часовни (Ф) и 168-часовни (Г) крављи урин. Трагови детекције електронске антене (ЕАД) показују промене напона као одговор на биоактивна једињења у предњем простору елуиране из гасног хроматографа и детектовани детектором пламене јонизације (ФИД). Трака скале представља брзину отпуштања брзине (својства отпуштања м³)µ. приказани су х-1) биолошки активних једињења. Једна звездица (*) означава конзистентан одговор ниске амплитуде. Двоструке звездице (**) означавају непоновљиве одговоре. Пронађи домаћина (Х) и крвопија (И) Ан.арабиенсис има различите привлачности за синтетичке мешавине свежих и старих мириса. Свако слово је значило различито слово од крава до крава значајно различито. други (једносмерни АНОВА користећи Тукеи-еву пост хоц анализу;п < 0.05). Траке грешака представљају стандардну грешку скале
Женка Анн.арабиенсис, 72 х и 120 х након крвног оброка, током мријешћења, није показана предност испарљивим екстрактима из свежег и старог крављег урина у поређењу са контролама пентана (χ2 = 3,07, п > 0,05; Додатни фајл 1: Слика С1).
За женку Анн.арабиенсис, ГЦ-ЕАД и ГЦ-МС анализе су идентификовале осам, шест, три и три биоактивна једињења (Слика 5Д-Г). Иако су уочене разлике у броју једињења која су изазвала електрофизиолошке одговоре, већина ових једињења је била присутна у сваком испарљивом екстракту у простору главе сакупљен из свежег и одлежаног екстракта женки, који је произвео само физиолошки одговор урина. праг су укључени у даље анализе.
Укупна испарљива брзина ослобађања биоактивних једињења у колекцији простора за главу порасла је са 29 µг х-1 у свежем урину на 242 µг х-1 у урину старом 168 сати, углавном због п-крезола и м-формалдехида, фенола се повећава, као и фенола. са повећањем старости урина, што је корелирало са уоченим смањењем интензитета сигнала (обиље) на хроматограму (слика 5Д)-Г левог панела) и физиолошким одговорима на ова једињења (слика 5Д-Г десни панел).
Све у свему, синтетичка смеша је имала сличан природни однос биоактивних једињења идентификованих у испарљивим екстрактима свежег и остарјелог урина (сл. 5Д–Г) и изгледа да није изазвала значајну привлачност у потрази за домаћином (χ2 = 8,15, дф = 4, п = 0,083; слика 5Х-тосуцкинг = χ, 4 мо 9) или крв. , п = 0,30; Слика 5И).Међутим, пост хоц поређење у паровима између третмана показало је да су комарци који траже домаћина били значајно привлачни за синтетичку мешавину урина од 24 сата у поређењу са контролама пентаном (п = 0,0086; Слика 5Х).
Да би се проценила улога појединачних компоненти у синтетичким мешавинама урина старе 24 х, шест суптрактивних смеша је процењено у односу на комплетне смеше у тесту И-цеви, у којем су појединачна једињења уклоњена. За комарце који траже домаћина, одузимање појединачних једињења из комплетне смеше имало је значајан утицај на бихејвиоралне одговоре (χ63 = 19:0. С2А), све субтрактивне мешавине су биле привлачније од Мање од потпуно помешане. Насупрот томе, уклањање појединачних једињења из потпуно синтетичке мешавине није утицало на бихевиоралне одговоре комараца који сишу крв (χ2 = 11,38, дф = 6, п = 0,077), са изузетком мањих вредности, што је резултирало нижим нивоом деканала, што је резултирало нижим нивоом датотеке 1 2 ( Слика 2 : 0 потпуна смеша; 0 С2Б).
У селу са ендемом маларије у Етиопији, ефикасност синтетичке мешавине 24-часовног крављег урина у привлачењу комараца у теренским условима процењивана је током десет ноћи (слика 6А). Укупно је ухваћен и идентификован 4.861 комарац, од којих је 45,761 комарац било Антхроп.18%. сис и 35,4% су Цулек спп. (Додатни фајл 1: Табела С1).Анопхелес арабинис је једини члан комплекса врста Ан.Гамбиан идентификован ПЦР анализом. У просеку је ухваћено 320 комараца по ноћи, током којег су замке са синтетичком мешавином мамаца ухваћене од више комараца, χ6 12 комараца без мешавине. 0, п < 0,0001) .Замке без мамца постављене су сваке од пет контролних ноћи на почетку, у средини и на крају испитивања. Сличан број комараца је ухваћен у сваком пару замки, што указује да нема пристрасности између кућа (χ2(0, 1665)-13 × децпарлине > 9.0 пцомпарлине током периода студије Уз контролне замке, број комараца ухваћених у замке које садрже синтетичку смешу је значајно повећан: тражење домаћина (χ2(0, 2107) = 138,7, п < 0,0001), недавно храњење крвљу (χ2(0, 650) = 32,2, п < 120 (χ2, п < 12)7 (χ2(0, 650) = 32,2, п < 120) = 0,0123;Додатни фајл 1: Табела С1). Ово се такође одражава на укупан број ухваћених комараца: тражи домаћина > крвопија > трудна > полутрудна > мужјак.
Теренска процена ефикасности 24-часовне синтетичке мешавине мириса крављег урина. Теренска испитивања су спроведена у јужно-централној Етиопији (мапа), у близини града Маки (уметак), коришћењем светлосне замке Центра за контролу болести (ЦДЦ) (десно) у упареним кућама, са латиничним квадратним дизајном (Аериал Скуаре) привлаче женку (Ц-С). Анопхелес арабескуес (Б), али не и Анопхелес фарроес (Ц), на другачији начин, ефекат зависан од физиолошког стања. Поред тога, ове замке су ухватиле значајно повећан број комараца домаћина Цулек.(Д) У поређењу са контролом. Траке са леве стране представљају просечни индекс селекције комараца комараца и комараца уловљених (индекс1 одпен паир ухваћених у) ), док траке на десној страни представљају просечан индекс селекције у паровима контролних замки (отворено; Н = 5).).Звездице означавају нивое статистичке значајности (*п = 0,01 и ***п < 0,0001)
Три врсте су ухваћене на различите начине у замкама које садрже синтетичке мешавине. Тражење домаћина (χ2(1, 1345) = 71,7, п < 0,0001), храњење крвљу (χ2(1, 517) = 16,7, п < 0,0001) и трудноћа (χ182(1, 1345) = 71,7, п < 0,0001), храњење крвљу (χ2 (1, 517) = 16,7, п < 0,0001) и трудноћа (χ182(1, 0,0) биенсис је био заробљен у замци ослобађајући синтетичку мешавину (слика 6Б), док се количина Ан није разликовала. Пронађена је фароенсис у различитим физиолошким стањима (слика 6Ц). За Цулек је само значајно повећање броја комараца који траже домаћине пронађено у замкама мамцима са синтетичком смешом (χ19;0.0.0.0.0, сл. 6Д), у поређењу са контролним замкама.
Замке за мамце домаћина које се налазе ван потенцијалних домаћина између места за размножавање и руралних заједница у Етиопији коришћене су да се процени да ли комарци маларије користе мирис крављег урина као знак станишта домаћина. У одсуству сигнала домаћина, топлоте и са или без присуства мириса крављег урина, није било комараца у хватању, без обзира на присуство комараца1Х3. и мирисом крављег урина, женке маларичних комараца су привучене и ухваћене, иако у малом броју, независно од старости урина (χ2(5, 25) = 2,29, п = 0,13; Додатни фајл 1: Слика С3). Насупрот томе, контроле воде нису ухватиле маларичне комарце на високим температурама (Слика С3).
Комарци маларије добијају и дистрибуирају једињења која садрже азот путем компензационог храњења крављим урином (тј. локвама) како би побољшали особине животне историје, слично другим инсектима. Женке комараца лоцирају овај ресурс мирисом и у стању су да регулишу унос азотних једињења у урину, укључујући уреу, главну азотну компоненту у урину [15, 16]. У зависности од физиолошког стања женке комараца, хранљиве материје у урину се алоцирају како би преживјеле у мокраћи, а хранљиве материје у мокраћи се добро распоређују како би преживеле. све и репродуктивне карактеристике јединки храњених крвљу током првог гонадотропног циклуса. Према томе, мешање урина игра важну нутритивну улогу за векторе маларије који су затворени као неухрањени одрасли [8], јер женкама комараца обезбеђује могућност да стекну важна азотна једињења ангажовањем у нискоризичном храњењу женки. од којих утичу на капацитет вектора. Штавише, ово понашање може бити мета будућих програма управљања векторима.