Bidh togail is sgaoileadh beathachaidh a’ toirt a-steach feartan sireadh biadhaidh bhiastagan agus eachdraidh-beatha. Gus dìoladh a dhèanamh airson gainnead ann am beathachadh sònraichte aig diofar ìrean beatha, faodaidh biastagan na beathachadh sin fhaighinn tro bhiadhadh a bharrachd, mar eisimpleir, le bhith ag ithe dìomhaireachdan veirteabra ann am pròiseas ris an canar lòintean. Tha e coltach gu bheil am mosgìoto Anopheles arabiani fo dhroch bheathachadh agus, mar sin, feumaidh e beathachadh airson metabolism agus ath-riochdachadh. B’ e amas an sgrùdaidh seo measadh a dhèanamh an robh gluasad An. arabiensis air fual bò airson togail beathachaidh a’ leasachadh feartan eachdraidh-beatha.
Dèan cinnteach gu bheil e sàbhailte. Bha arabiensis air a thàladh gu fàileadh fual bò ùr, 24-uair, 72-uair, agus 168-uair a dh'aois, agus chaidh boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd agus air am biathadh le fuil (48-uair às deidh biadh fala) a thomhas ann an olfactometer tiùb-Y, agus chaidh boireannaich a bha trom a mheasadh airson deuchainn sìolachaidh. Chaidh mion-sgrùdadh ceimigeach agus electro-fhiseòlasach còmhla a chleachdadh an uairsin gus todhar bith-ghnìomhach a chomharrachadh ann am fual bò anns na ceithir clasaichean aoise. Chaidh measgachaidhean sintéiseach de choimeasgaidhean bith-ghnìomhach a mheasadh ann an deuchainnean tiùb-Y agus achaidh. Gus sgrùdadh a dhèanamh air fual bò agus a phrìomh cho-thàthadh anns a bheil naitridean urea mar dhaitheadan a bharrachd a dh’ fhaodadh a bhith ann airson vectaran malaria, chaidh paramadairean beathachaidh agus feartan eachdraidh-beatha a thomhas. Chaidh co-roinn nam mosgìotothan boireann agus an ìre de fhual bò agus urea a chaidh a ghabhail a-steach a mheasadh. Às deidh biathadh, chaidh boireannaich a mheasadh airson mairsinn beò, itealaich ceangailte, agus ath-riochdachadh.
Lorg fuil is beathachadh an aoigh. Ann an sgrùdaidhean obair-lann is làraich, chaidh Arabaich a tharraing gu fàileadh nàdarra is fuadain fual bò ùr is sean. Cha robh boireannaich thorrach a’ gabhail cùram mu fhreagairtean fual bò aig làraichean sìolachaidh. Bidh boireannaich a bhios a’ sireadh is a’ suirghe fala a’ gabhail a-steach fual bò is urea gu gnìomhach agus a’ roinn nan goireasan sin a rèir co-rèiteachaidhean eachdraidh-beatha mar ghnìomh den staid fhiseòlasach airson itealaich, mairsinn no ath-riochdachadh.
Cruinneachadh is sgaoileadh fual bò le Anopheles arabinis airson feartan eachdraidh-beatha nas fheàrr. Bidh biathadh a bharrachd le fual bò a’ toirt buaidh dhìreach air comas vectar le bhith ag àrdachadh mairsinn làitheil agus dùmhlachd vectar, agus gu neo-dhìreach le bhith ag atharrachadh gnìomhachd itealaich agus mar sin bu chòir beachdachadh air ann am modalan san àm ri teachd.
Bidh togail is sgaoileadh beathachaidh a’ toirt a-steach feartan beatha is sireadh bhiastagan [1,2,3]. Tha biastagan comasach air biadh a thaghadh is fhaighinn agus biathadh dìolaidh a dhèanamh stèidhichte air ruigsinneachd bìdh is riatanasan beathachaidh [1, 3]. Tha sgaoileadh beathachaidh an urra ris a’ phròiseas eachdraidh-beatha agus dh’ fhaodadh e leantainn gu riatanasan eadar-dhealaichte airson càileachd is meud daithead ann an diofar ìrean beatha bhiastagan [1, 2]. Gus dìoladh a dhèanamh airson easbhaidhean ann am beathachadh sònraichte, faodaidh biastagan na beathachadh sin fhaighinn tro bhiadh a bharrachd, leithid air eabar, diofar eiscrimintean is dìomhaireachdan veirteabraich, agus carran, pròiseas ris an canar lòintean [2]. Ged a tha measgachadh de ghnèithean dealain-dè is leòmainn air an tuairisgeul sa mhòr-chuid, tha tuill uisgeachaidh ann an òrdughan bhiastagan eile cuideachd, agus faodaidh tàladh gu na seòrsaichean ghoireasan sin agus biathadh orra buaidh mhòr a thoirt air slàinte is feartan eachdraidh-beatha eile [2, 4, 5, 6], 7]. Bidh am mosgìoto malaria Anopheles gambiae sensu lato (sl) a’ nochdadh mar inbheach ‘le droch bheathachadh’ [8], agus mar sin dh’ fhaodadh uisgeachadh pàirt chudromach a ghabhail anns na feartan eachdraidh-beatha aige, ach tha an giùlan seo air a bhith air a dhearmad gu ruige seo. Tha cleachdadh gluasad mar dhòigh air in-ghabhail beathachaidh a mheudachadh san dòigh chudromach seo airidh air aire oir dh’ fhaodadh builean cudromach epidemio-eòlasach a bhith aige.
Tha in-ghabhail naitridean ann am mosgìotothan boireann inbheach Anopheles cuibhrichte air sgàth glèidhidhean calaraidh ìosal a thèid a ghiùlan bhon ìre larbha agus cleachdadh neo-èifeachdach de bhiadh-fala [9]. Mar as trice bidh Ann.gambiae sl boireann a’ dèanamh suas airson seo le bhith a’ cur ri biadh-fala a bharrachd [10, 11], agus mar sin a’ cur barrachd dhaoine ann an cunnart an galar a ghlacadh agus a’ cur mosgìotothan ann an cunnart nas motha creachaidh. Air an làimh eile, faodaidh mosgìotothan biadhadh a bharrachd de dh’ eisirean veirteabra a chleachdadh gus todhar naitridean fhaighinn a leasaicheas atharrachadh agus gluasad itealaich, mar a chithear le biastagan eile [2]. A thaobh seo, tha an tarraing làidir agus sònraichte aig aon de na gnèithean peathraichean taobh a-staigh An. Tha an co-thàthadh gnèithean sl Gambian, Anopheles arabinis, fual crodh ùr is sean [12,13,14], inntinneach. Tha Anopheles arabinis a’ gabhail brath air na roghainnean aoigheachd aige agus tha fios gu bheil e a’ ceangal ri crodh agus ag ithe. Tha fual crodh na ghoireas beairteach ann an todhar naitridean, le urea a’ dèanamh suas 50-95% den naitridean iomlan ann am fual ùr [15, 16]. Mar a aoisean fual crodh, bidh meanbh-fhàs-bheairtean a’ cleachdadh nan goireasan sin gus iom-fhillteachd choimeasgaidhean naitrideanach a lughdachadh taobh a-staigh 24 uairean [15]. Leis an àrdachadh luath ann an ammonia, co-cheangailte ri crìonadh ann an naitridean organach, bidh meanbh-fhàs-bheairtean alcalophilic (mòran dhiubh a’ dèanamh choimeasgaidhean puinnseanta do mosgìotothan) a’ soirbheachadh [15], agus is dòcha gur e Ann.arabiensis boireann a th’ ann, agus tha e air a thàladh gu fual a tha 24 uairean a dh'aois no nas lugha [13, 14].
Anns an sgrùdadh seo, chaidh coimhead airson mosgìotothan aoigheil agus a fhuair biadh bho fhuil. Rè a’ chiad chearcall gonadotropin aige, chaidh arabiensis a mheasadh airson faighinn todhar naitrideanach, a’ gabhail a-steach urea, le measgachadh fual. An ath rud, chaidh sreath de dheuchainnean a dhèanamh gus measadh a dhèanamh air mar a bhios mosgìotothan boireann a’ roinn an stòras beathachaidh a dh’fhaodadh a bhith ann airson mairsinn beò, ath-riochdachadh agus tuilleadh sireadh biadh. Mu dheireadh, chaidh fàileadh fual bò ùr is sean a mheasadh gus faighinn a-mach an robh iad sin a’ toirt seachad sanasan earbsach airson mosgìotothan aoigheil agus a fhuair biadh bho fhuil. Anns an rannsachadh aca airson an stòras beathachaidh a dh’fhaodadh a bhith ann, lorg arabiensis co-dhàimhean ceimigeach air cùl an tarraing eadar-dhealaichte a chaidh fhaicinn. Chaidh measgachadh fàileadh synthetigeach de choimeasgaidhean organach luaineach (VOCn) a chaidh an comharrachadh ann am fual a dh’aois 24-uair a mheasadh tuilleadh fo chumhachan achaidh, a’ leudachadh nan toraidhean a fhuaireadh fo chumhachan obair-lann agus a’ sealltainn buaidh fàileadh fual bò air diofar staidean fiseòlasach. Tarraing mosgìotothan. Tha na toraidhean a fhuaireadh a’ dearbhadh gu bheil mosgìotothan arabiensis a’ faighinn agus a’ sgaoileadh todhar naitrideanach a lorgar ann am fual veirteabrach gus buaidh a thoirt air feartan eachdraidh-beatha. Tha na toraidhean seo air an deasbad ann an co-theacsa builean epidemio-eòlach a dh’fhaodadh a bhith ann agus mar as urrainnear an cleachdadh airson sgrùdadh agus smachd vectar.
Chaidh Anopheles arabicans (seòrsa Dongola) a chumail aig 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH agus cearcall solais:dorchadas 12:12 uair. Chaidh larbha a thogail ann an treallaich plastaig (20 cm × 18 cm × 7 cm) air an lìonadh le uisge grùide agus air am biathadh le biadh èisg Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE). Chaidh pupae a chruinneachadh ann an cupannan 30 ml (Nolato Hertila, Åstorp, SE) agus an uairsin air an gluasad gu cèidsichean Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) gus leigeil le inbhich nochdadh. Chaidh fuasgladh 10% siùcros a thoirt do dh’inbhich ad libitum gu 4 latha às deidh nochdadh (dpe), agus aig an ìre sin chaidh daithead a thabhann do bhoireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd dìreach ron deuchainn, no chaidh an acras thar oidhche le uisge grùide ron deuchainn, mar a tha air a mhìneachadh gu h-ìosal. Chaidh boireannaich a chaidh a chleachdadh airson deuchainnean tiùb itealaich a acras airson dìreach 4-6 uairean a thìde. le uisge ad libitum. Gus mosgìotothan a bhios a’ sùghadh fala ullachadh airson deuchainnean bith-eòlasach às dèidh sin, chaidh fuil chaorach dì-fhibrotach (Håtunalab, Bro, SE) a thoirt do 4 boireannaich dpe a’ cleachdadh siostam beathachaidh membran (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, RA). Chaidh boireannaich làn-dhùmhlaichte an uairsin a ghluasad gu cèidsichean fa leth agus fhuair iad daithead gu dìreach, mar a tha air a mhìneachadh gu h-ìosal, no 10% siùcros ad libitum airson 3 latha ron deuchainnean a tha air am mìneachadh gu h-ìosal. Chaidh na boireannaich mu dheireadh a chleachdadh airson deuchainnean bith-eòlasach tiùb itealaich agus chaidh an gluasad chun obair-lann, agus an uairsin fhuair iad uisge grùide ad libitum airson 4-6 uairean ron deuchainn.
Chaidh deuchainnean beathachaidh a chleachdadh gus tomhas a dhèanamh air caitheamh fual is urea ann am boireannaich inbheach An.Arab. Fhuair boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd agus air am biathadh le fuil daithead anns an robh 1% fual bò ùr is sean caolaichte, diofar dùmhlachdan de urea, agus dà smachd (10% siùcros agus uisge) airson 48 uair a thìde. A bharrachd air an sin, chaidh dath bìdh (1 mg ml-1 xylene cyanide FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) a chur ris an daithead agus chaidh a thoirt seachad ann am maitrís 4 × 4 ann an tiùban microcentrifuge 250 µl (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Figear 1A) Lìon chun oir (~ 300 µl). Gus farpais eadar mosgìotothan agus buaidhean a dh’ fhaodadh a bhith aig dath an datha a sheachnadh, cuir 10 mosgìotothan ann am mias Petri mòr (12 cm ann an trast-thomhas agus 6 cm ann an àirde; Semadeni, Ostermundigen, CH; Figear 1A) ann an dorchadas iomlan aig 25 ± 2 cm °C agus 65 ± 5% coimeasach taiseachd. Chaidh na deuchainnean seo ath-aithris 5 gu 10 tursan. Às dèidh dhaibh a bhith fosgailte do dhaithead, chaidh na mosgìotothan a chur aig -20 °C gus an deach an sgrùdadh tuilleadh.
Coimhead airson fual crodh is urea air an glacadh leis an aoigh agus leis a’ bhoireannach Anopheles arabianus a bhios a’ sùghadh fala. Ann an deuchainn beathachaidh (A), fhuair mosgìotothan boireann daithead anns an robh fual crodh ùr is sean, diofar dùmhlachdan de urea, siùcros (10%), agus uisge grùide (H2O). Ghlac boireannaich a bha a’ sireadh aoigh (B) agus air am biathadh le fuil (C) barrachd siùcros na daithead sam bith eile a chaidh a dhearbhadh. Thoir an aire gun do ghabh boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd fual crodh 72-uair nas lugha na fual crodh 168-uair (B). Tha susbaint naitridean iomlan cuibheasach (± claonadh àbhaisteach) fual air a riochdachadh san inset. Bidh boireannaich a bha a’ sireadh aoigh (D, F) agus a bhios a’ sùghadh fala (E, G) a’ gabhail suas urea ann an dòigh a tha an urra ris an dòs. Bha meudan cuibheasach analach (D, E) le diofar ainmean litrichean gu math eadar-dhealaichte bho chèile (ANOVA aon-shligheach a’ cleachdadh mion-sgrùdadh iar-dhòs Tukey; p < 0.05). Tha bàraichean mearachd a’ riochdachadh mearachd àbhaisteach a’ chuibheasaich (BE). Tha an loidhne dhìreach briste a’ riochdachadh an loidhne ath-tharraing log-loidhneach (F, G)
Gus biadh a chaidh a ghabhail a-steach a leigeil ma sgaoil, chaidh mosgìotothan a chur leotha fhèin ann an tiùban microcentrifuge 1.5 ml anns an robh 230 µl de dh’uisge grùide agus chaidh an clò a bhriseadh le bhith a’ cleachdadh pestle cuidhteasach agus motair gun sreang (VWR International, Lund, SE), agus an uairsin chaidh a centrifugachadh aig 10 krpm airson 10 mionaidean. Chaidh an supernatant (200 µl) a ghluasad gu microplate 96-tobar (Sigma-Aldrich) agus chaidh absorbance (λ620) a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh leughadair microplate stèidhichte air speactrophotometer (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Air neo, chaidh na mosgìotothan a mheileadh ann an 1 ml de dh’uisge grùide, agus chaidh 900 µl dheth a ghluasad gu cuvette airson mion-sgrùdadh speactrophotometric (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Gus in-ghabhail daithead a thomhas, chaidh lùb àbhaisteach ullachadh le caolachadh sreathach gus 0.2 µl gu 2.4 µl de 1 mg ml-1 xylene a thoirt gu buil. cianaid. An uairsin, chaidh dùmhlachd optaigeach dùmhlachdan dath aithnichte a chleachdadh gus faighinn a-mach dè an ìre bìdh a shluig gach mosgìoto.
Chaidh dàta meud a sgrùdadh le bhith a’ cleachdadh mion-sgrùdadh aon-shligheach air atharrachaidh (ANOVA) agus an uair sin coimeasan paidhir iar-chòdaichte Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Thug mion-sgrùdaidhean ath-tharraing loidhneach cunntas air in-ghabhail urea a bha an urra ri dùmhlachd agus rinn iad coimeas eadar freagairtean eadar mosgìotothan a bha a’ sireadh aoigh agus mosgìotothan a bha ag sùghadh fala (GraphPad Prism v8.0.0 airson Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Chaidh timcheall air 20 µl de shampaill fual bho gach buidheann aoise a cheangal air Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mogaill, Sigma Aldrich) agus an cur ann an capsalan staoin (8 mm × 5 mm). Chaidh capsalan a chur a-steach do sheòmar losgaidh inneal-anailis CHNS/O (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, US) gus susbaint naitridean ann am fual ùr is sean a dhearbhadh a rèir protocol an neach-dèanamh. Chaidh naitridean iomlan (g N l-1) a thomhas stèidhichte air dùmhlachdan urea aithnichte a chaidh a chleachdadh mar inbhe.
Gus measadh a dhèanamh air buaidh daithead air mairsinneachd boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd agus a’ tarraing fala, chaidh mosgìotothan a chur leotha fhèin ann an soithichean Petri mòra (12 cm ann an trast-thomhas agus 6 cm a dh’àirde; Semadeni) le toll còmhdaichte le mogal anns a’ mhullach (3 cm ann an trast-thomhas) airson fionnarachadh agus solar bìdh. Chaidh daitheadan a thoirt seachad dìreach às deidh 4 dpe agus bha 1% fual bò ùr is sean caolaichte, ceithir dùmhlachdan de urea, agus dà smachd, 10% siùcros agus uisge annta. Chaidh gach daithead a phìobaireachd air tampon fiaclaireachd (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) a chuir a-steach do steallaire 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), am plugair air a thoirt air falbh, agus air a chuir air mullach mias petri (figear 1).1A). Atharraich do dhaithead a h-uile latha. Cùm suas an obair-lann mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd. Chaidh mosgìotothan a bha beò a chunntadh dà uair san latha, agus chaidh mosgìotothan marbh a thilgeil air falbh gus an do bhàsaich am mosgìoto mu dheireadh (n = 40 gach làimhseachadh). Chaidh mairsinneachd mosgìotothan a chaidh a bhiadhadh air diofar dhaitheadan a sgrùdadh gu staitistigeil a’ cleachdadh lùban mairsinneachd Kaplan-Meyer agus deuchainnean log-rank. gus coimeasan sgaoileadh mairsinneachd a choimeas eadar daitheadan (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Muileann-itealaich mosgìoto gnàthaichte stèidhichte air Attisano et al.[17], air a dhèanamh de phannalan acrylic soilleir 5 mm de thighead (10 cm de leud x 10 cm de dh'fhaid x 10 cm de dh'àirde) às aonais phannalan aghaidh is cùil (Figear 3: mullach). Co-chruinneachadh pivot le tiùb dìreach air a dhèanamh de cholbh cromagrafaidheachd gas (0.25 mm id; 7.5 cm L) le cinn air an glaodhadh ri snàthad bhiastagan crochte eadar paidhir de mhagnaidean neodymium 9 cm bho chèile. Roinn tiùb còmhnard air a dhèanamh den aon stuth (6.5 cm L) an tiùb dìreach na dhà gus gàirdean ceangailte agus gàirdean a chruthachadh a bha a’ giùlan pìos beag de foil alùmanaim mar chomharradh briseadh-solais.
Chaidh an daithead gu h-àrd a thoirt do bhoireannaich a bha air an acras airson 24 uair a thìde airson 30 mionaid mus deach an cumail fo smachd. Chaidh mosgìotothan boireann làn-bhiadhaichte an uairsin a thoirt fo anesthetis leotha fhèin air deigh airson 2-3 mionaidean agus an ceangal ri prìnichean bhiastagan le cèir-sheillean (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) agus an uairsin an ceangal ri gàirdeanan nan tiùban còmhnard. Muileann-itealaich. Chaidh cuairtean-adhair gach itealaich a chlàradh le clàraiche dàta a chaidh a thogail a dh'aon ghnothach, agus an uairsin an stòradh agus an taisbeanadh a’ cleachdadh bathar-bog PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Chaidh am muileann-itealaich a chuir ann an seòmar le gnàth-shìde air a riaghladh (12 uair:12 uair, solas: dorchadas, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Gus pàtran gnìomhachd itealaich a dhèanamh follaiseach, chaidh an astar iomlan a chaidh a sgèith (m) agus an àireamh iomlan de ghnìomhachdan itealaich leantainneach obrachadh a-mach gach uair thairis air ùine 24-uair. A bharrachd air an sin, chaidh na h-astaran cuibheasach a chaidh a sgèith le boireannaich fa leth a choimeas thar leigheasan agus an sgrùdadh a dhèanamh orra a’ cleachdadh ANOVA aon-shligheach agus mion-sgrùdadh iar-chothromach Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), far an deach beachdachadh air astar cuibheasach mar chaochladair eisimeileach, agus làimhseachadh na fhactar neo-eisimeileach. A bharrachd air an sin, tha an àireamh chuibheasach de chuairtean air a thomhas ann an àrdachaidhean 10-mionaidean.
Gus measadh a dhèanamh air buaidh daithead air coileanadh gintinn An.arabiensis, chaidh sia boireannaich (4 dpe) a ghluasad gu dìreach gu cèidsichean Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) às deidh dhaibh fuil a chruinneachadh agus an uairsin fhuair iad an daithead deuchainneach airson 48 uair a thìde mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd. An uairsin chaidh na daitheadan a thoirt air falbh agus chaidh cupannan sìolachaidh (30 ml; Nolato Hertila) làn de 20 ml de dh’uisge grùide a thoirt seachad air an treas latha airson 48 uair a thìde, ag atharrachadh a h-uile 24 uair a thìde. Dèan a-rithist gach clàr daithead 20-50 uair. Chaidh uighean a chunntadh agus a chlàradh airson gach cèidse deuchainneach. Chaidh fo-shampallan de uighean a chleachdadh gus measadh a dhèanamh air meud cuibheasach agus atharrachadh faid uighean fa leth (n ≥ 200 gach daithead) a’ cleachdadh miocroscop Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) uidheamaichte le Camara Leica (DFC) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., DE).Chaidh na h-uighean a bha air fhàgail a chumail ann an seòmar le smachd gnàth-shìde fo chumhachan àrach àbhaisteach airson 24 uair a thìde, agus chaidh fo-shampall de larbha 1d ìre a nochd o chionn ghoirid (n ≥ 200 gach daithead) a thomhas, mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd.Chaidh àireamh nan uighean agus meud nan uighean agus nan larbha a choimeas eadar làimhseachadh agus a’ cleachdadh ANOVA aon-shligheach agus mion-sgrùdadh iar-chleachdadh Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Chaidh luaineachdan ceann-àite bho fhual ùr (1 uair an dèidh samplachadh), 24 uair, 72 uair agus 168 uair a thìde a chruinneachadh bho shampaill a chaidh a chruinneachadh bho chrodh Zebu, rèisean Arsi. Airson goireasachd, chaidh sampallan fual a chruinneachadh tràth sa mhadainn fhad ‘s a bha na crodh fhathast anns a’ bhàrn. Chaidh sampallan fual a chruinneachadh bho 10 daoine fa leth agus chaidh 100-200 ml de gach sampall a ghluasad gu pocannan bèicearachd polyamide fa leth (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) ann an drumaichean plastaig polyamide 3 liotair le mullach ann an drumaichean plastaig vinyl chloride. Chaidh luaineachdan ceann-àite bho gach sampall fual crodh a chruinneachadh an dàrna cuid gu dìreach (ùr) no às deidh aibidh aig teòthachd an t-seòmair airson 24 uair, 72 uair agus 168 uair, ie bha gach sampall fual a’ riochdachadh gach buidheann aoise.
Airson cruinneachadh stuthan luaineach san àite-cinn, chaidh siostam lùb dùinte a chleachdadh gus sruth gas air a shìoladh le gualain gnìomhaichte (100 ml min-1) a chuairteachadh tro phoca polyamide chun cholbh adsorption airson 2.5 uair a thìde le bhith a’ cleachdadh pumpa falamh diaphragm (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Mar smachd, chaidh cruinneachadh an àite-cinn a dhèanamh bho phoca polyamide falamh. Bha an colbh adsorption air a dhèanamh de phìoban Teflon (5.5 cm x 3 mm id) anns an robh 35 mg de Porapak Q (mogal 50/80; Waters Associates, Milford, MA, US) eadar plugaichean clòimhe glainne. Mus deach a chleachdadh, chaidh an colbh a shruthladh le 1 ml n-hexane ath-dhriogadh (Merck, Darmstadt, DE) agus 1 ml pentane (ìre fuasglaiche GC 99.0% fìor-ghlan, Sigma Aldrich). Chaidh na stuthan luaineach adsorbed a dh’fhuasgladh le 400 μl de pentane. Chaidh cruinneachaidhean an àite-cinn a chruinneachadh agus an uairsin a stòradh aig -20°C gus an deach an cleachdadh airson tuilleadh mion-sgrùdaidh.
Freagairtean giùlain An a tha a’ sireadh aoigheachd agus ag ithe fala. Chaidh earrannan luaineach bhon àite-cinn a chaidh a chruinneachadh bho fhual ùr, 24-uair, 72-uair, agus 168-uair a dh'aois a sgrùdadh airson earrannan luaineach bho mosgìotothan Arabidopsis a’ cleachdadh olfactometer tiùb glainne dhìreach [18]. Chaidh na deuchainnean a dhèanamh rè ZT 13-15, an ùine as àirde de ghnìomhachd sireadh dachaigh An. Arab [19]. Chaidh olfactometer tiùb glainne (80 cm × 9.5 cm id) a shoillseachadh le 3 ± 1 lx de sholas dearg bho shuas. Chaidh sruthadh adhair air a shìoladh agus air a thaiseachadh le gual-fhiodha (25 ± 2 °C, 65 ± 2% taiseachd coimeasach) seachad air a’ bioassay aig 30 cm s-1. Tha èadhar air a thoirt tro shreath de scrionaichean mogaill stàilinn gun staoin, a’ cruthachadh sruthadh laminar agus structar pluma èideadh. Inneal-sgaoilidh tampon fiaclaireachd (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), crochte bho choil 5 cm air ceann gaoithe an olfactometer, le atharrachaidhean brosnachaidh gach 5 mionaidean. Airson mion-sgrùdadh, chaidh 10 μl de gach earrann àite-cinn, air a lagachadh 1:10, a chleachdadh mar bhrosnachadh. Chaidh meud co-ionann de pentane a chleachdadh mar smachd. Chaidh mosgìotothan fa leth a bha a’ sireadh aoigh no a’ suirghe fala a chur ann an cèidsichean fuasglaidh fa leth 2-3 uairean mus do thòisich an deuchainn. Chaidh an cèidse fuasglaidh a chur air taobh sìos na gaoithe den olfactometer, agus chaidh leigeil leis na mosgìotothan fàs cleachdte airson 1 mionaid, agus an uairsin chaidh bhalbha dealan-dè a’ chèidse fhosgladh gus an leigeil ma sgaoil. Chaidh tarraing gu làimhseachadh no smachd a sgrùdadh mar an co-roinn de mosgìotothan a thàinig an conaltradh ris an stòr taobh a-staigh 5 mionaidean bho bhith air an leigeil ma sgaoil. Chaidh gach earrann luaineach àite-cinn agus smachd ath-aithris co-dhiù 30 uair, agus gus buaidhean aon latha sam bith a sheachnadh, chaidh an aon àireamh de leigheasan agus smachdan a dhearbhadh air gach latha deuchainneach. Freagairtean sireadh bho aoigh agus Answers air am biathadh le fuil. Chaidh seataichean Arabais an aghaidh àite-cinn a sgrùdadh a’ cleachdadh ath-tharraing logistic ainmichte agus an uairsin coimeasan paidhir airson co-mheasan neònach (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institiùd Earranta).
Freagairt sìolachaidh An. Chaidh earrannan àite-cinn bho fhual bò ùr is sean a sgrùdadh ann an cèidsichean Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Thug cupannan plastaig (30 mL; Nolato Hertila) làn 20 mL de dh’uisge grùide an t-substrate sìolachaidh agus chaidh an cur ann an oiseanan mu choinneamh a’ chèidse, 24 cm bho chèile. Chaidh cupannan làimhseachaidh atharrachadh le 10 μl de gach earrann àite-cinn aig caolachadh 1:10. Chaidh meud co-ionann de pentane a chleachdadh gus an cupa smachd atharrachadh. Chaidh cupannan làimhseachaidh is smachd a iomlaid eadar gach deuchainn gus smachd a chumail air buaidhean suidheachaidh. Chaidh deich boireannaich air am biathadh le fuil a leigeil ma sgaoil ann an cèidsichean deuchainneach aig ZT 9-11 agus chaidh uighean ann an cupannan a chunntadh 24 uair a thìde às deidh sin. Is e am foirmle airson clàr-amais sìolachaidh obrachadh a-mach: (an àireamh uighean a chaidh a chur anns a’ chupa làimhseachaidh - an àireamh uighean a chaidh a chur anns a’ chupa smachd) / (an àireamh iomlan de uighean a chaidh a chur). Chaidh gach làimhseachadh ath-aithris 8 tursan.
Rinneadh mion-sgrùdadh cromatagrafaidheachd gas agus lorg pàtrain antenna dealanach (GC-EAD) air An.arabiensis boireann mar a chaidh a mhìneachadh roimhe [20]. Gu h-aithghearr, chaidh earrannan ùra luaineach bhon àite-cinn a sgaradh le bhith a’ cleachdadh Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) uidheamaichte le colbh HP-5 (30 m × 0.25 mm id, tighead film 0.25 μm, Agilent Technologies). agus fual a tha a’ fàs sean.Chaidh haidridean a chleachdadh mar an ìre gluasadach le ìre sruth loidhneach cuibheasach de 45 cm s-1.Chaidh gach sampall (2 μl) a stealladh a-steach airson 30 diogan ann am modh gun sgaradh le teòthachd in-ghabhail de 225 °C.Chaidh teòthachd àmhainn GC a phrògramadh bho 35 °C (cumail 3 mionaidean) gu 300 °C (cumail 10 mionaidean) aig 10 °C min-1.Anns an sgoltaiche sruth-uisge GC, chaidh 4 psi de naitridean a chur ris agus a sgaradh 1:1 ann an crois meud marbh ìosal Gerstel 3D/2 (Gerstel, Mülheim, DE) eadar an lorgaire ianachaidh lasair agus an EAD.Chaidh an capillary sruth-uisge GC airson EAD a thoirt tro loidhne gluasaid Gerstel ODP-2, a bhios a’ tracadh teòthachd àmhainn GC a bharrachd air 5 °C, a-steach do thiùb glainne (10 cm × 8 mm), far an deach a mheasgachadh le èadhar taisichte, air a shìoladh le gualain (1.5 l min−1).Chaidh an antenna a chuir 0.5 cm bho bheul an tiùba. Bha aon ath-aithris anns gach mosgìoto fa leth, agus airson mosgìotothan a bha a’ sireadh aoigheachd, chaidh co-dhiù trì ath-aithrisean a dhèanamh air sampallan fual de gach aois.
Comharrachadh choimeasgaidhean bith-ghnìomhach ann an cruinneachaidhean àite-cinn de dh’fhual crodh ùr is aosta a’ cleachdadh GC agus speactramair mais còmhla (GC-MS; 6890 GC agus 5975 MS; Agilent Technologies) gus freagairtean antennal fhaighinn ann am mion-sgrùdadh GC-EAD, ag obair ann am modh ianachaidh buaidh electron aig 70 eV. Bha an GC uidheamaichte le colbh capillary silica leaghte còmhdaichte le HP-5MS UI (trast-thomhas a-staigh 60 m × 0.25 mm, tiugh film 0.25 μm) a’ cleachdadh helium mar an ìre gluasadach le ìre sruth loidhneach cuibheasach de 35 cm s-1. Chaidh sampall 2 μl a stealladh a’ cleachdadh na h-aon shuidheachaidhean in-stealladh agus teòthachd àmhainn ri mion-sgrùdadh GC-EAD. Chaidh coimeasgaidhean a chomharrachadh stèidhichte air an ùine gleidhidh (clàr-amais Kovát) agus speactram mais an taca ris an leabharlann àbhaisteach agus leabharlann NIST14 (Agilent). Chaidh coimeasgaidhean a chaidh an comharrachadh a dhearbhadh le bhith a’ stealladh inbhean dearbhte (Faidhle a bharrachd 1: Clàr S2). Airson tomhas, acetate heptyl (10 ng, purrachd cheimigeach 99.8%, Aldrich) a stealladh a-steach mar inbhe taobh a-muigh.
A’ measadh èifeachdas measgachadh fàileadh synthetigeach anns a bheil todhar bith-ghnìomhach a chaidh an comharrachadh ann am fual ùr is sean gus Ans.arabiensis a tha a’ sireadh aoigheachd agus a’ tarraing fala a thàladh, a’ cleachdadh an aon olfactometer agus protocol ris an fhear gu h-àrd. Bha measgachaidhean synthetigeach ag atharrais air co-dhèanamh agus cuibhreannan todhar ann an earrannan luaineach measgaichte de fhual ùr, 24-uair, 48-uair, 72-uair, agus 168-uair a dh’aois (Figear 5D-G; Faidhle a bharrachd 1: Clàr S2). Airson mion-sgrùdadh, cleachd 10 μl de chaolachadh 1: 100 den mheasgachadh làn-shintéiseach, le ìre fuasglaidh iomlan eadar timcheall air 140-2400 ng h-1, airson measadh a dhèanamh air tarraingeachd do mosgìotothan aoigheachd agus a tha a’ tarraing fala. Às deidh sin, thèid an deuchainn a dhèanamh air measgachaidhean iomlan, anns a bheil measgachaidhean toirt air falbh de choimeasgaidhean singilte den mheasgachadh iomlan air an toirt air falbh. Freagairtean sireadh bho Ans aoigheachd agus air am biathadh le fuil. Chaidh measgachadh Arabach an aghaidh measgachaidhean synthetigeach agus toirt air falbh a sgrùdadh a’ cleachdadh ath-thionndadh logistic ainmichte agus an uairsin coimeasan paidhir airson co-mheasan neònach. (JMP Pro, v14.0.0, Institiùd SAS Inc.).
Gus measadh a dhèanamh an gabhadh fual bò a chleachdadh mar chomharra àrainn aoigheachd airson mosgìotothan malaria, chaidh fual bò ùr is sean, air a chruinneachadh mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd, agus uisge a chur ann am bucaidean mogaill 3 liotair (100 ml) agus an cur ann an ribe biataidh aoigheachd. (Tionndadh BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Deich ribe air an cur 50 m bho chèile ann am pàirce, 400 m bho choimhearsnachd a’ bhaile (Silay, Ethiopia, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) agus gun chrodh, air àiteachan briodachaidh maireannach agus bailtean beaga. Chaidh còig ribe a theasachadh gus làthaireachd aoigheachd atharrais, agus chaidh còig ribe fhàgail gun teasachadh. Tha gach àite làimhseachaidh air a thionndadh gach oidhche airson còig oidhcheannan gu h-iomlan. Chaidh àireamhan mosgìotothan a chaidh a ghlacadh ann an ribe air an robh biatadh le fual de dhiofar aoisean a choimeas a’ cleachdadh ath-tharraing logistic le sgaoileadh beta binomial (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Ann am baile beag faisg air baile Maki, sgìre Oromia, An Etiòpia far a bheil malaria cumanta (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Figear 6A). Chaidh an sgrùdadh a dhèanamh eadar meadhan an Lùnastail agus meadhan an t-Sultain mus deach an spraeadh bliadhnail a-staigh a dhèanamh le stuth-spraeadh fuigheall, còmhla ri seusan fada fliuch. Chaidh còig paidhrichean de thaighean (20–50 m bho chèile) suidhichte air iomall a’ bhaile a thaghadh airson an sgrùdaidh (Figear 6A). B’ iad na slatan-tomhais a chaidh a chleachdadh gus na taighean a thaghadh: gun bheathaichean ceadaichte a-staigh an taighe, gun còcaireachd a-staigh (a’ tarraing connadh no gual-fhiodha) ceadaichte (co-dhiù rè na h-ùine deuchainn), agus taighean le dithis luchd-còmhnaidh aig a’ char as àirde, a’ cadal ann an dòighean gun bhiastagan-mharbhaidh. fo lìon mosgìoto a chaidh a làimhseachadh. Chaidh cead beusanta a thoirt seachad leis a’ Bhòrd Ath-bhreithneachaidh Beusachd Rannsachaidh Institiùideach (IRB/022/2016) aig Dàmh nan Saidheansan Nàdarra (CNS-IRB), Oilthigh Addis Ababa, a rèir nan stiùiridhean a stèidhich Dearbhadh Helsinki aig Comann Meidigeach na Cruinne. Fhuaireadh cead bho gach ceannard taighe le cuideachadh bho luchd-obrach leudachaidh slàinte. Tha am pròiseas gu lèir air aontachadh le rianachdan ionadail aig ìre na sgìre agus an uàrd ('kebele'). Lean an dealbhadh deuchainneach dealbhadh ceàrnagach Laideann 2 × 2, anns an deach measgachaidhean synthetigeach agus smachdan a shònrachadh do thaighean paidhir air a’ chiad oidhche agus an iomlaid eadar taighean air an ath oidhche deuchainneach. Chaidh am pròiseas seo ath-aithris deich tursan. A bharrachd air an sin, gus gnìomhachd mosgìoto a thomhas ann an taighean taghte, chaidh ribe CDC a shuidheachadh gus ruith còig oidhcheannan an dèidh a chèile aig toiseach, meadhan agus deireadh an deuchainn achaidh aig an aon àm den latha.
Chaidh measgachadh synthetigeach anns an robh sia todhar bith-ghnìomhach a sgaoileadh ann an heptane (97.0% ìre fuasglaiche GC, Sigma Aldrich) agus a leigeil ma sgaoil aig 140 ng h-1 a’ cleachdadh inneal-sgaoilidh buic cotan [20]. Leig an inneal-sgaoilidh buic leis na todhar uile a bhith air an leigeil ma sgaoil ann an co-mheasan cunbhalach tron ​​deuchainn 12 uair a thìde. Chaidh heptane a chleachdadh mar smachd. Chaidh am fial a chrochadh ri taobh puing inntrigidh ribe solais Ionadan airson Smachd agus Casg Galar (CDC) (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Figear 6A). Chaidh na ribe a chrochadh 0.8 - 1 m os cionn na talmhainn, faisg air bonn na leapa, agus chaidil saor-thoileach fo lìon mosgìoto gun làimhseachadh agus bha e ag obair eadar 18:00 agus 06:30. Chaidh mosgìotothan a chaidh a ghlacadh a rèir gnè agus inbhe fiseòlasach (gun bhiadh, air am biadhadh, leth-thorrach, agus trom [21] a sgrìonadh às deidh sin a’ cleachdadh mion-sgrùdadh ath-bhualadh slabhraidh polymerase (PCR) gus an gnè a chaidh a chomharrachadh gu morf-eòlach mar A. gambiae sl. Buill den cho-thàthadh [23] a chomharrachadh. Ann an Anns an sgrùdadh làraich, chaidh mion-sgrùdadh a dhèanamh air glacadh thaighean paidhir le bhith a’ cleachdadh modail freagarrachd logistic ainmichte, far an robh an tarraing mar an caochladair eisimeileach agus an làimhseachadh (measgachadh synthetigeach an aghaidh smachd) mar a’ bhuaidh sheasmhach (JMP® 14.0. 0. SAS Institute Inc.). An seo, tha sinn ag aithris na luachan χ2 agus p bhon deuchainn co-mheas coltachd.
Dèan measadh a bheil e sàbhailte. Bha arabiensis comasach air fual fhaighinn, am prìomh thùs naitridean aige, urea, le bhith ga bhiadhadh gu dìreach, taobh a-staigh 48 uair a thìde bho rianachd airson 4 latha às dèidh (dpe) deuchainnean beathachaidh boireann a bha a’ sireadh aoigheachd agus air am biathadh le fuil (Figear 1A). Ghlac boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd agus a bha a’ suirghe fala mòran a bharrachd siùcros na daithead no uisge sam bith eile (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 agus F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, fa leth; Figear 1B,C). A bharrachd air an sin, dh’ith boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd nas lugha ann am fual aig 72 uair an taca ri fual aig 168 uair (Figear 1B). Nuair a chaidh daithead anns an robh urea a thabhann dhaibh, ghabh boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd a-steach tòrr a bharrachd de urea aig 2.69 mM an taca ris a h-uile dùmhlachd agus uisge eile, agus cha robh e comasach eadar-dhealachadh a dhèanamh eadar e agus 10% siùcros (F(10,813)). = 15.72, p < 0.0001; Figear 1D). Bha seo eadar-dhealaichte bho fhreagairt bhoireannaich air am biathadh le fuil, a bha mar as trice a’ gabhail a-steach mòran a bharrachd de dhaitheadan anns an robh urea na uisge, ged a bha mòran nas lugha na 10% de shùcros ann (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; Figear 1).1E). A bharrachd air an sin, nuair a chaidh coimeas a dhèanamh eadar an dà staid fhiseòlasach, ghabh boireannaich air an deach flebotomachadh barrachd urea a-steach na boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd aig na dùmhlachdan as ìsle, agus ghabh na boireannaich sin a-steach meudan coltach ri chèile de urea aig dùmhlachdan nas àirde (F(1,953)= 78.82, p < 0.0001; Figear 1F, G). Ged a bha coltas gu robh luachan as fheàrr aig in-ghabhail bho dhaithead anns an robh urea (Figear 1D,E), bha boireannaich anns an dà staid fhiseòlasach comasach air an ìre de urea a chaidh a ghabhail a-steach atharrachadh thairis air an raon iomlan de dhùmhlachdan urea ann an dòigh log-loidhneach (Figear 1F,G). ).San aon dòigh, tha coltas gu bheil mosgìotothan a’ cumail smachd air an naitridean a thèid a ghabhail a-steach le bhith a’ riaghladh na tha de naitridean ann am fual air a nochdadh anns an ìre a thèid a ghabhail a-steach (dealbhan-steach Figear 1B, C agus B).
Gus measadh a dhèanamh air buaidh fual agus urea air mairsinneachd mosgìotothan a bhios a’ sireadh aoigh agus a’ tarraing fala, chaidh boireannaich a bhiadhadh le fual de na ceithir aoisean (ùr, 24 uair, 72 uair, agus 168 uair às dèidh tasgadh) agus bha raon de dùmhlachdan urea, a bharrachd air uisge grùide agus 10% siùcros, nan smachd (Figear 2A). Sheall an anailis mairsinneachd seo gu robh buaidh mhòr aig daithead air mairsinneachd iomlan ann am boireannaich a bha a’ sireadh aoigh (fual: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Figear 2B, C) agus boireannaich air am biathadh le fuil (fual: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; Figear 2D,E). Anns a h-uile deuchainn, bha ìrean mairsinn mòran nas ìsle aig boireannaich a fhuair daithead fual, urea, agus uisge an taca ri boireannaich a fhuair daithead siùcros (Figear 2B-E). Sheall boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd a fhuair biadh ùr is sean ìrean mairsinn eadar-dhealaichte, leis an fheadhainn a fhuair biadh 72-uair sean (p = 0.016) leis an coltachd mairsinn as ìsle (Figear 2B). A bharrachd air an sin, mhair boireannaich a bha a’ sireadh aoigheachd a fhuair biadh 135 mM urea nas fhaide na smachdan uisge (p <0.04) (Figear 2C). An taca ri uisge, mhair boireannaich a fhuair biadh ùr is fual 24-uair nas fhaide (p = 0.001 agus p = 0.012, fa leth; Figear 2D), agus mhair boireannaich a fhuair biadh 72-uair nas fhaide na an fheadhainn a fhuair biadh ùr goirid boireann is fual 24-uair a dh'aois (p <0.0001 agus p = 0.013, fa leth; Figear 2D). Nuair a fhuair boireannaich a fhuair biadh 135 mM urea, mhair boireannaich a fhuair biadh fuil... mhair e nas fhaide na a h-uile dùmhlachd eile de urea agus uisge (p < 0.013; Figear 2E).
Maireannachd mosgìotothan aoigh is boireannaich a bhios a’ sùghadh fala Anopheles arabinis ag ithe fual bò is urea. Anns a’ bhith-dheuchainn (A), fhuair mosgìotothan boireann daithead anns an robh fual bò ùr is sean, diofar cho-chruinneachaidhean de urea, siùcros (10%) agus uisge grùide (H2O). Chaidh mairsinneachd mosgìotothan a bhios a’ sireadh aoigh (B, C) agus a bhios a’ sùghadh fala (D, E) a chlàradh a h-uile 12 uair gus an robh a h-uile boireannach a bha air am biathadh le fual (B, D) agus urea (C, E), agus smachdan, siùcros agus uisge, marbh.
Bha an t-astar iomlan agus an àireamh de chuairtean a chaidh a dhearbhadh anns an deuchainn muileann-itealaich thar ùine 24-uair eadar-dhealaichte eadar mosgìotothan a bha a’ sireadh aoigh agus mosgìotothan a bha a’ suirghe fala, a sheall nas lugha de ghnìomhachd itealaich san fharsaingeachd (Figear 3). Sheall mosgìotothan a bha a’ sireadh aoigh a thug seachad fual ùr is aoisichte no siùcros agus uisge pàtrain itealaich eadar-dhealaichte (Figear 3), le boireannaich ag ithe fual ùr nas gnìomhaiche aig briseadh an latha, agus an fheadhainn a fhuair biadh 24- agus 168-uair a dh'aois. Sheall mosgìotothan a bha ag ithe fual pàtrain itealaich eadar-dhealaichte agus bha iad sa mhòr-chuid làitheil. Sheall mosgìotothan boireann a thug seachad siùcros no fual 72-uair a thìde gnìomhachd tron ​​​​​​ùine 24-uair, agus bha boireannaich a thug seachad uisge nas gnìomhaiche rè meadhan na h-ùine. Sheall mosgìotothan a fhuair biadh siùcros na h-ìrean gnìomhachd as àirde anmoch air an oidhche agus tràth sa mhadainn, agus bha crìonadh cunbhalach ann an gnìomhachd an fheadhainn a shluig fual 72-uair a dh'aois thar 24 uair (Figear 3).
Coileanadh itealaich mosgìotothan boireann Anopheles arabinis a bhios a’ sireadh fala agus ag ithe fual bò agus urea. Anns an deuchainn muilinn itealaich, chaidh mosgìotothan boireann a bha ag ithe fual bò ùr is sean, diofar dùmhlachdan urea, siùcros (10%), agus uisge grùide (H2O) a cheangal ri gàirdeanan còmhnard, a’ rothladh gu saor (gu h-àrd). Airson boireannaich a bhios a’ sireadh aoigh (clì) agus a’ sùghadh fala (deas), chaidh an astar iomlan agus an àireamh de thursan san uair airson gach daithead thairis air ùine 24-uair a chlàradh (dorcha: liath; aotrom: geal). Tha an t-astar cuibheasach agus an àireamh chuibheasach de bhuillean air an sealltainn air taobh deas graf gnìomhachd circadian. Tha bàraichean mearachd a’ riochdachadh mearachd àbhaisteach a’ chuibheasaich. Mion-sgrùdadh staitistigeil faic teacsa
San fharsaingeachd, lean gnìomhachd itealaich iomlan boireannaich a bha a’ sireadh aoigh pàtran coltach ri astar itealaich thar ùine 24-uair. Bha buaidh mhòr aig daithead a chaidh a shlugadh air astar itealaich cuibheasach (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), agus dh’itealaich boireannaich a bha a’ sireadh aoigh a shlugadh 72 uair de dh’fhual astaran mòran nas fhaide an taca ri daitheadan eile uile (p < 0.0001), agus dh’itealaich mosgìotothan air am biathadh le siùcros nas fhaide na mosgìotothan ùra (p = 0.022) agus air am biathadh le fual 24-uair (p = 0.022). An coimeas ris a’ phàtran gnìomhachd itealaich a tha air a mhìneachadh leis an daithead fual, sheall boireannaich a bha a’ sireadh aoigh a chaidh a bhiadhadh le urea gnìomhachd itealaich leantainneach thar ùine 24-uair, a’ ruighinn an ìre as àirde rè an dàrna leth den ìre dhorcha (Figear 3). Ged a bha pàtrain gnìomhachd coltach ri chèile, mheudaich boireannaich a bha a’ sireadh aoigh a chaidh a bhiadhadh le urea astar itealaich cuibheasach gu mòr a rèir an dùmhlachd a chaidh a ghabhail a-steach (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Bha boireannaich a bha a’ sireadh aoigh agus a fhuair biadh de dh’ urea ann an dùmhlachd sam bith ag itealaich nas fhaide na boireannaich a fhuair biadh de dh’uisge no de shiùcros (p < 0.03).
Bha gnìomhachd itealaich iomlan nam mosgìotothan a bha a’ suirghe fala seasmhach agus air a chumail suas thairis air 24 uair a thìde thar gach daithead, le barrachd gnìomhachd fual rè an dàrna leth den ùine dhorcha airson boireannaich air am biathadh le uisge a bharrachd air ann am boireannaich air am biathadh ùr agus 24 uair a thìde a dh'aois (dealbh 3). Ged a thug daithead fual buaidh mhòr air astar itealaich cuibheasach ann am boireannaich air am biathadh le fuil (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), cha do rinn daithead urea (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) le fual eile agus daithead smachd (ùr, p = 0.0091; 72 uair a thìde, p = 0.0022; 168 uair a thìde, p = 0.001; siùcros, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
Chaidh buaidh beathachadh fual is urea air paramadairean gintinn a mheasadh ann am bio-assays breith uighean (Figear 4A) agus chaidh an sgrùdadh a rèir an àireamh uighean a chuir gach boireannach, meud uighe, agus larbha ciad ìre ùr a rugadh. Bha an àireamh uighean a chaidh a chur. Bha boireannaich Arabach air am biathadh le fual ag atharrachadh a rèir daithead (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; Figear 4B). Bha boireannaich air am biathadh le min-fala fual 24-uair a’ breith mòran a bharrachd uighean na boireannaich air am biathadh le daithead fual eile agus bha iad coltach ris an fheadhainn air am biathadh le siùcros (Figear 4B). San aon dòigh, bha meud nan uighean a chuir boireannaich air am biathadh le fual ag atharrachadh a rèir daithead (F(5, 209) = 12.85, p <0.0001), le boireannaich air am biathadh le fual is siùcros 24-uair a’ breith uighean mòran nas motha na boireannaich air am biathadh le uisge, agus bha uighean bhoireannaich air am biathadh le 168 uair de fhual mòran nas lugha (Figear 4C). A bharrachd air an sin, bha buaidh mhòr aig daithead fual air meud larbha. (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), le larbha mòran nas motha a’ tighinn a-mach à uighean a chaidh a bhreith le boireannaich a chaidh a bhiadhadh le fual 24- agus 72-uair a dh'aois na bho uighean a chaidh a bhreith le larbha uighean. Boireannaich a chaidh a bhiadhadh le uisge agus boireannaich a chaidh a bhiadhadh le fual 168-uair a dh'aois (Figear 4D).
Coileanadh gintinn boireannaich Anopheles arabinis ag ithe fual bò agus urea. Chaidh daitheadan a bhiadhadh do mosgìotothan boireann a chaidh a bhiadhadh le fuil anns an robh fual bò ùr is sean, diofar dùmhlachdan de urea, siùcros (10%), agus uisge grùide (H2O) airson 48 uair a thìde mus deach an cur ann am bio-aistean agus fo-stratan breith uighean fhaighinn airson 48 uair a thìde (A). Bha buaidh mhòr aig an daithead a chaidh a thoirt seachad air àireamh uighean (B, E), meud uighean (C, F) agus meud larbha (D, G). Bha na meadhanan airson gach paramadair a chaidh a thomhas a’ cleachdadh diofar ainmean litrichean gu math eadar-dhealaichte bho chèile (ANOVA aon-shligheach a’ cleachdadh mion-sgrùdadh iar-chunntais Tukey; p < 0.05). Tha bàraichean mearachd a’ riochdachadh mearachd àbhaisteach a’ mheadhain.
Mar am prìomh phàirt naitrideanach de dh’fhual, thug urea, nuair a chaidh a thoirt seachad mar dhaithead do bhoireannaich air am biathadh le fuil, buaidh mhòr air paramadairean gintinn anns a h-uile sgrùdadh. Bha an àireamh uighean a chaidh a bhreith le boireannaich air am biathadh le urea, às deidh biadh fala, a rèir dùmhlachd urea (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), a’ breith boireannaich air am biathadh le dùmhlachdan urea eadar 134 µM agus 1.34 mM a’ breith barrachd uighean (Figear 4E). Bha boireannaich air am biathadh le dùmhlachdan urea de 134 µM no nas àirde a’ breith uighean nas motha na boireannaich air am biathadh le uisge (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Figear 4F), agus meud larbha, ged a bha buaidh aig dùmhlachdan coltach ri urea ann am màthraichean (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001) nas caochlaideach (Figear 4G).
Tarraing iomlan gu earrannan luaineach àite-cinn fual crodh a tha a’ sireadh aoigheachd. Bha buaidh mhòr aig aois fual air an arabiensis a chaidh a mheasadh anns an olfactometer tiùb glainne (Figear 5A) (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Figear 5B). Sheall mion-sgrùdadh post hoc gun robh fàileadh fual sean aig 24 uair ag adhbhrachadh ìrean tarraingeachd mòran nas àirde an taca ris a h-uile làimhseachadh eile (72 uair: p = 0.0060, 168 uair: p = 0.012, pentane: p = 0.00070), ach a-mhàin fàileadh fual ùr (p = 0.13; Figear 5B). Ged nach robh tarraing iomlan mosgìotothan a bhios a’ suirghe fala gu fàileadh fual gu math eadar-dhealaichte (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; Figear 5C), chaidh faighinn a-mach gu robh na boireannaich seo gu math nas tarraingiche do earrannan luaineach àite-cinn an taca ri fual 72-uair a dh'aois an taca ri smachdan (p = 0.0066; Figear 5C).
Freagairtean giùlain ri fàilidhean fual bò nàdarrach is synthetigeach ann an rannsachadh airson Anopheles arabianus aoigh is fuil. Dealbh sgemataigeach den olfactometer tiùb glainne (A). Tarraing earrannan luaineach àite-cinn bho fhual bò ùr is sean gu mosgìotothan aoigh (B) agus fuil-shùghaidh (C). Lorg freagairt tentacle an Tighearna An. Tha earrannan àite-cinn air an sgaradh bho fhual bò ùr (D), 24-uair (E), 72-uair (F), agus 168-uair (G) sean air an sealltainn. Tha lorgan lorg antenna electron (EAD) a’ sealltainn atharrachaidhean bholtaids mar fhreagairt do choimeasgaidhean bith-ghnìomhach anns an àite-cinn air an sgaoileadh bhon chromatagraf gas agus air an lorg le lorgaire ianachadh lasair (FID). Tha am bàr sgèile a’ riochdachadh meud freagairt (mV) an aghaidh ùine gleidhidh (s). Tha feartan agus ìrean fuasglaidh (µg h-1) nan todhar bith-ghnìomhach air an sealltainn. Tha rionnag singilte (*) a’ comharrachadh freagairt cunbhalach ìosal-meud. Tha rionnagan dùbailte (**) a’ comharrachadh freagairtean nach gabh ath-riochdachadh. Lorg an aoigh (H) agus Tha diofar tharraingeachd aig an fhìonag fala-shùghaidh (I) An.arabiensis an taca ri measgachaidhean synthetigeach de fhàilidhean fual bò ùr is sean. Bha na cuibhreannan cuibheasach de mosgìotothan a chaidh a tharraing gu diofar ainmean litrichean gu math eadar-dhealaichte bho chèile (ANOVA aon-shligheach a’ cleachdadh mion-sgrùdadh iar-chòd Tukey; p < 0.05). Tha bàraichean mearachd a’ riochdachadh mearachd àbhaisteach na sgèile.
Ann.arabiensis boireann, 72 uair agus 120 uair an dèidh biadh-fala, rè sìolachadh, cha deach roghainn sam bith a nochdadh airson earrannan luaineach headspace bho fhual bò ùr is aoisichte an taca ri smachdan pentane (χ2 = 3.07, p > 0.05; Faidhle a bharrachd 1: Figear S1).
Airson Ann.arabiensis boireann, chomharraich mion-sgrùdaidhean GC-EAD agus GC-MS ochd, sia, trì agus trì todhar bith-ghnìomhach (Figear 5D-G). Ged a chaidh eadar-dhealachaidhean fhaicinn ann an àireamh nan todhar a dh’ adhbhraich freagairtean electro-fhiseòlasach, bha a’ mhòr-chuid de na todhar sin an làthair anns gach earrann luaineach headspace a chaidh a chruinneachadh bho fhual ùr is aoisichte. Mar sin, airson gach earrann, cha deach ach todhar a dh’ adhbhraich freagairt fhiseòlasach bho na h-antennaichean boireann os cionn na stairsnich a ghabhail a-steach ann an tuilleadh mion-sgrùdaidhean.
Mheudaich an ìre sgaoilidh luaineach iomlan de choimeasgaidhean bith-ghnìomhach anns a’ chruinneachadh headspace bho 29 µg h-1 ann am fual ùr gu 242 µg h-1 ann am fual a dh’aois 168-uair, gu h-àraidh air sgàth àrdachadh ann am p-cresol agus m-formaldehyde Phenol a bharrachd air phenol. An coimeas ri sin, lùghdaich ìrean sgaoilidh choimeasgaidhean eile, leithid 2-cyclohexen-1-one agus decanal, le aois fual ag àrdachadh, a bha co-cheangailte ris an lùghdachadh a chaidh fhaicinn ann an dian an t-soidhne (pailteas) anns a’ chromatagram (Figear 5D)-G pannal clì) agus freagairtean fiseòlasach dha na coimeasgaidhean sin (Figear 5D-G pannal deas).
Gu h-iomlan, bha co-mheas nàdarra coltach ri chèile de choimeasgaidhean bith-ghnìomhach aig a’ mheasgachadh synthetigeach a chaidh an comharrachadh ann an earrannan luaineach de chinn-fànais fual ùr is aoisichte (Figear 5D–G) agus cha robh coltas gu robh e a’ tarraing mòran aire ann an rannsachadh airson aoigh (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Figear 5H) no mosgìotothan a bha a’ tarraing fala (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; Figear 5I). Ach, sheall coimeasan paidhir às dèidh làimhe eadar leigheasan gu robh mosgìotothan a bha a’ sireadh aoigh gu math tarraingeach don mheasgachadh synthetigeach de fhual aois 24-uair an taca ri smachdan pentane (p = 0.0086; Figear 5H).
Gus measadh a dhèanamh air àite nam pàirtean fa leth ann am measgachaidhean sintéiseach de dh’ fhual 24-uair a dh’aois, chaidh sia measgachaidhean toirt air falbh a mheasadh an aghaidh measgachaidhean iomlan anns an deuchainn tiùb-Y, anns an deach todhar fa leth a thoirt air falbh. Airson mosgìotothan a bha a’ sireadh aoigheachd, bha buaidh mhòr aig toirt air falbh todhar fa leth bhon mheasgachadh iomlan air freagairtean giùlain (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Faidhle a bharrachd 1: Figear S2A), bha a h-uile measgachadh toirt air falbh nas tarraingiche na Nas lugha na làn mheasgachadh. An coimeas ri sin, cha do chuir toirt air falbh todhar fa leth bhon mheasgachadh làn shintéiseach buaidh air freagairtean giùlain mosgìotothan a bha a’ suirghe fala (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), ach a-mhàin decanal, a lean gu ìrean nas ìsle an taca ris an Tarraingeachd measgachadh iomlan (p = 0.022; Faidhle a bharrachd 1: Figear S2B).
Ann am baile beag ann an Etiòpia far a bheil malaria cumanta, chaidh èifeachdas measgachadh synthetigeach de dh’fhual bò 24-uair a thìde ann a bhith a’ tàladh mosgìotothan fo chumhachan làraich a mheasadh airson deich oidhcheannan (Figear 6A). Chaidh 4,861 mosgìoto a ghlacadh agus a chomharrachadh gu h-iomlan, agus b’ e Anthropus.gambiae sl a bh’ ann an 45.7% dhiubh, b’ e Anopheles pharoensis a bh’ ann an 18.9% agus b’ e Culex spp. a bh’ ann an 35.4% (Faidhle a bharrachd 1: Clàr S1). Is e Anopheles arabinis an aon bhall de ghnèithean An.Gambian a chaidh a chomharrachadh le mion-sgrùdadh PCR. Air cuibheasachd, chaidh 320 mosgìoto a ghlacadh gach oidhche, agus rè na h-ùine sin ghlac ribe le biataichean measgachadh synthetigeach barrachd mosgìotothan na ribe paidhir às aonais measgachadh (χ2 (0, 3196) = 170.0, p < 0.0001). Chaidh ribe gun bhiathadh a shuidheachadh air gach aon de na còig oidhcheannan smachd aig toiseach, meadhan agus deireadh na deuchainn. Chaidh àireamhan coltach ri mosgìotothan a ghlacadh anns gach paidhir de ribe, a’ nochdadh nach robh claonadh eadar taighean (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) agus gun chrìonadh sluaigh rè na h-ùine sgrùdaidh. An coimeas ri ribe smachd, bha àireamh nam mosgìotothan a chaidh an glacadh anns na ribean anns an robh am measgachadh sintéiseach air a dhol am meud gu mòr: aoigh a’ sireadh (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), biadhadh fala o chionn ghoirid (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) agus torrachas (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Faidhle a bharrachd 1: Clàr S1). Tha seo cuideachd ri fhaicinn anns an àireamh iomlan de mosgìotothan a chaidh an glacadh: aoigh a’ sireadh > a’ deoghal fala > torrach > leth-thorrach > fireannach.
Measadh achaidh air èifeachdas measgachadh fàileadh fual crodh synthetigeach 24-uair. Chaidh deuchainnean achaidh a dhèanamh ann an ceann a deas meadhan na h-Etiòpia (mapa), faisg air baile Maki (cuir a-steach), a’ cleachdadh ribe solais Ionadan airson Smachd Galar (CDC) (deas) ann an taighean paidhir, le dealbhadh ceàrnagach Laideann (dealbh adhair) (A). Bidh ribe-dhealbhan CDC le biathadh fàileadh synthetigeach a’ tàladh agus a’ glacadh Anopheles arabesques boireann (B), ach chan e Anopheles farroes (C), ann an dòigh eadar-dhealaichte, buaidh a tha an urra ri staid fiseòlasach. A bharrachd air an sin, ghlac na ribean sin àireamhan mòran nas àirde de na mosgìotothan aoigheachd Culex. (D) An coimeas ri smachd. Tha na bàraichean air an taobh chlì a’ riochdachadh clàr-amais taghaidh cuibheasach mosgìotothan a chaidh an glacadh ann am paidhrichean de ribe biathadh fàileadh (uaine) agus smachd (fosgailte) (N = 10), agus tha na bàraichean air an làimh dheis a’ riochdachadh clàr-amais taghaidh cuibheasach ann am paidhrichean de ribe smachd (fosgailte; N = 5). Tha rionnagan a’ comharrachadh ìrean cudromachd staitistigeil (*p = 0.01 agus ***p < 0.0001)
Chaidh na trì gnèithean a ghlacadh ann an diofar dhòighean ann an ribe anns an robh measgachaidhean sintéiseach. A’ lorg aoigh (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), biathadh fala (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) agus torrachas (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) chaidh .arabiensis a ghlacadh anns an ribe a’ leigeil ma sgaoil am measgachadh sintéiseach (Figear 6B), agus cha robh meud An eadar-dhealaichte. Lorgar Pharoensis ann an diofar staidean fiseòlasach (Figear 6C). Airson Culex, cha deach ach àrdachadh mòr a lorg ann an àireamh nam mosgìotothan a bha a’ sireadh aoighean ann an ribe air an robh am measgachadh sintéiseach air a bhiathadh (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; Figear 6D), an taca ri ribe smachd.
Chaidh ribean-bìdh aoigheachd a bha suidhichte taobh a-muigh aoighean a dh’fhaodadh a bhith ann eadar làraichean briodachaidh agus coimhearsnachdan dùthchail ann an Etiòpia a chleachdadh gus measadh a dhèanamh an robh mosgìotothan malaria a’ cleachdadh fàileadh fual bò mar chomharra àrainn aoigheachd. Mura robh comharran aoigheachd ann, teas, agus le no às aonais fàileadh fual bò, cha deach mosgìotothan sam bith a ghlacadh (Faidhle a bharrachd 1: Figear S3). Ach, nuair a bha teòthachd àrd agus fàileadh fual bò ann, chaidh mosgìotothan boireann malaria a thàladh agus a ghlacadh, ged a bha àireamhan beaga ann, neo-eisimeileach bho aois fual (χ2 (5, 25) = 2.29, p = 0.13; Faidhle a bharrachd 1: Figear S3). An coimeas ri sin, cha do ghlac smachdan uisge mosgìotothan malaria aig teòthachd àrd (Faidhle a bharrachd 1: Figear S3).
Bidh mosgìotothan malaria a’ faighinn agus a’ sgaoileadh todhar anns a bheil naitridean tro bhith ag ithe fual crodh mar dhìoladh (ie, lòintean) gus feartan eachdraidh-beatha a neartachadh, coltach ri biastagan eile [2, 4, 24, 25, 26]. Tha fual crodh na ghoireas ath-nuadhachail a tha ri fhaighinn gu furasta agus a tha ceangailte gu dlùth ri àiteachan fois airson vectaran malaria, leithid seadaichean crodh agus fàsmhorachd àrd faisg air dachaighean dùthchail agus làraichean sìolachaidh. Bidh mosgìotothan boireann a’ lorg an ghoireis seo le fàileadh agus tha iad comasach air gabhail ri todhar naitridean ann am fual a riaghladh, a’ gabhail a-steach urea, am prìomh phàirt naitridean ann am fual [15, 16]. A rèir staid fiseòlasach a’ mhosgìoto boireann, tha beathachadh anns an fhual air a riarachadh gus gnìomhachd itealaich agus mairsinneachd mosgìotothan boireann a tha a’ sireadh aoigheachd a leasachadh, a bharrachd air feartan mairsinneachd agus gintinn dhaoine fa leth a tha air am biathadh le fuil rè a’ chiad chearcall gonadotropic. Mar sin, tha measgachadh fual a’ cluich pàirt beathachaidh chudromach airson vectaran malaria a tha dùinte mar inbhich le dìth beathachaidh [8], oir tha e a’ toirt comas do mosgìotothan boireann todhar naitridean cudromach fhaighinn le bhith a’ gabhail pàirt ann am biathadh ìosal-chunnart. Tha builean mòra epidemio-eòlach aig an lorg seo, leis gu bheil boireannaich a’ meudachadh am beatha. dùil-breith, gnìomhachd agus toradh gintinn, agus tha iad sin uile a’ toirt buaidh air comas vectar. A bharrachd air an sin, is dòcha gur e an giùlan seo targaid phrògraman riaghlaidh vectar san àm ri teachd.