Iýmit maddalarynyň toplanmagy we paýlanmagy mör-möjekleriň iýmit gözlegini we ýaşaýyş taryhynyň aýratynlyklaryny birleşdirýär. Dürli ýaşaýyş tapgyrlarynda belli bir iýmit maddalarynyň ýetmezçiligini öwezini dolmak üçin mör-möjekler bu iýmit maddalaryny goşmaça iýmitlendirmek arkaly, mysal üçin, kölçükler diýlip atlandyrylýan prosesde oňurgaly haýwanlaryň bölünip çykarýan maddalary bilen iýmitlenmek arkaly alyp bilerler. Anopheles arabiani çybynlary iýmit ýetmezçiligine uçraýar we şonuň üçin hem metabolizm, hem-de köpelmek üçin iýmit maddalaryna mätäç. Bu gözlegiň maksady iýmit maddalaryny almak üçin sygyr siýdiginde An. arabiensis garyşdyrmagynyň ýaşaýyş taryhynyň aýratynlyklaryny gowulandyrýandygyny ýa-da gowulandyrmaýandygyny bahalandyrmakdy.
Howpsuzlygyna göz ýetiriň. arabiensis täze, 24 sagatlyk, 72 sagatlyk we 168 sagatlyk sygyr siýdiginiň ysyna özüne çekdi we öý eýesini gözleýän we gan bilen iýmitlenen (gan iýiminden 48 sagat soň) dişiler Y-trubkaly olfaktometrde ölçeldi we göwreli dişiler ýumurtga çykarmak synagy üçin barlandy. Soňra dört ýaş toparynda hem sygyr siýdigindäki bioaktiw birleşmeleri kesgitlemek üçin utgaşdyrylan himiki we elektrofiziologiki analiz ulanyldy. Bioaktiw birleşmeleriň sintetiki garyndylary Y-trubkaly we meýdan synaglarynda barlandy. Sygyr siýdigini we onuň esasy azot saklaýan karbamid birleşmesini bezgek ýokuşdyryjylary üçin mümkin bolan goşmaça iýmit hökmünde öwrenmek üçin iýmit parametrleri we ýaşaýyş taryhynyň aýratynlyklary ölçeldi. Dişi çybynlaryň paýy we siňdirilen sygyr siýdigi we karbamid mukdary bahalandyryldy. Iýmitlendirilenden soň, dişileriň ýaşaýşy, baglanyp uçuşy we köpelmegi bahalandyryldy.
Hojanyň ganyny we iýmitini gözläň. Laboratoriýa we meýdan barlaglarynda araplar täze we garry sygyr siýdiginiň tebigy we sintetiki ysyna gyzyklandylar. Göwreli aýallar ýumurtga dökülýän ýerlerde sygyr siýdiginiň reaksiýalaryna biperwaý garadylar. Hoja gözleýji we gan sorujy aýallar sygyr siýdigini we karbamidini işjeň özleşdirýärler we bu serişdeleri uçuş, ýaşamak ýa-da köpelmek üçin fiziologik ýagdaýyň funksiýasy hökmünde ýaşaýyş taryhynyň özara gatnaşygyna görä paýlaýarlar.
Anopheles arabinis sygyr siýdiginiň ýaşaýyş taryhynyň aýratynlyklaryny gowulandyrmak üçin toplanmagy we paýlanmagy. Sygyr siýdigini goşmaça iýmitlendirmek gündelik ýaşaýyş we wektor dykyzlygyny ýokarlandyrmak arkaly wektor kuwwatyna gönüden-göni täsir edýär, uçuş işjeňligini üýtgetmek arkaly bolsa gytaklaýyn täsir edýär we şonuň üçin geljekki modellerde göz öňünde tutulmalydyr.
Iýmit maddalarynyň alynmagy we paýlanylyşy mör-möjekleriň iýmitlenmegini we ýaşaýyş taryhynyň aýratynlyklaryny öz içine alýar [1,2,3]. Mör-möjekler iýmiti saýlap we satyn alyp, iýmitiň elýeterliligine we iýmit maddalaryna bolan talaplara esaslanyp, kompensasiýa iýmitlendirmegi amala aşyryp bilýärler [1, 3]. Iýmit maddalarynyň paýlanylyşy ýaşaýyş taryhynyň prosesine baglydyr we mör-möjekleriň dürli ýaşaýyş tapgyrlarynda iýmitiň hiline we mukdaryna dürli talaplara sebäp bolup biler [1, 2]. Aýratyn iýmit maddalaryndaky ýetmezçilikleriň öwezini dolmak üçin mör-möjekler bu iýmit maddalaryny goşmaça iýmitlendirmek arkaly, mysal üçin, palçykdan, oňurgaly haýwanlaryň dürli hapa we bölünip çykarylýan böleklerinden we ölen haýwanlardan alyp bilerler, bu bolsa kölçeler diýlip atlandyrylýan prosesdir [2]. Esasan, dürli kebelek we güýe görnüşleri beýan edilse-de, suwaryş ýerleri beýleki mör-möjek toparlarynda hem duş gelýär we bu görnüşli serişdelere çekilmek we olar bilen iýmitlenmek saglyga we ýaşaýyş taryhynyň beýleki aýratynlyklaryna uly täsir edip biler [2, 4, 5, 6], 7]. Mazmyr çybyny Anopheles gambiae sensu lato (sl) "iýmitlenmedik" ulular hökmünde peýda bolýar [8], şonuň üçin suwarmak onuň ýaşaýyş taryhynyň häsiýetlerinde möhüm rol oýnap biler, ýöne bu hereket şu wagta çenli gözardy edildi. Bu möhüm ulagda iýmit maddalarynyň kabul edilişini artdyrmak üçin gyjyndyryjy serişde hökmünde ulanylmagy üns bermäge mynasypdyr, sebäbi munuň möhüm epidemiologik netijeleri bolup biler.
Uly ýaşly urkaçy Anopheles çybynlarynyň azot sarp edilişi, liçinka döwründen daşalýan pes kaloriýa gorlary we gan ununyň netijeli ulanylmazlygy sebäpli çäklidir [9]. Urkaçy Ann.gambiae sl adatça munuň öwezini goşmaça gan unlary bilen doldurýar [10, 11], şeýdip has köp adamy kesel ýokuşma howpuna salýar we çybynlary ýyrtyjylyk howpuna salýar. Başgaça aýdylanda, çybynlar beýleki mör-möjekler tarapyndan görkezilişi ýaly [2], uýgunlaşmany we uçuş manewriýasyny güýçlendirýän azotly birleşmeleri almak üçin oňurgaly haýwanlaryň zyňyndylarynyň goşmaça iýmitlenmegini ulanyp bilerler. Şu babatda, An. Gambiýa sl görnüş toplumynyň içinde dogan görnüşleriň biriniň, täze we garry sygyr siýdigi Anopheles arabinis [12,13,14], güýçli we aýdyň özüne çekijiligi gyzyklydyr. Anopheles arabinis öz eýeleriniň isleglerinde mümkinçilikli we mallar bilen baglanyşyklydygy we iýmitlenýändigi mälim. Sygyr siýdigi azotly birleşmelere baý çeşme bolup, täze siýdikdäki umumy azotyň 50-95% -ni karbamid düzýär [15, 16]. Sygyr siýdigi garraýarka, mikroorganizmler bu serişdeleri 24 sagadyň dowamynda azotly birleşmeleriň çylşyrymlylygyny azaltmak üçin ulanýarlar [15]. Organiki azotyň azalmagy bilen baglanyşykly ammiagyň çalt artmagy bilen, alkalofil mikroorganizmler (olaryň köpüsi çybynlar üçin zäherli birleşmeleri öndürýär) ösýär [15], bu bolsa dişi Ann.arabiensis 24 sagat ýa-da ondan az ýaşda siýdigi has köp özüne çekýär [13, 14].
Bu gözlegde, eýe we gan bilen iýmitlenýän Ans gözlenildi. Ilkinji gonadotropin sikliniň dowamynda, arabiensis, siýdik garyşdyrmak arkaly azotly birleşmeleriň, şol sanda karbamidiň alynmagy üçin bahalandyryldy. Soňra, urkaçy çybynlaryň bu mümkin bolan iýmit serişdesini ýaşamagy gowulandyrmak, köpelmek we mundan beýläk iýmit tapmak üçin nähili bölüp berýändigini bahalandyrmak üçin birnäçe tejribe geçirildi. Ahyrsoňy, täze we garry sygyr siýdiginiň ysy, olaryň eýe we gan bilen iýmitlenýän An üçin ygtybarly alamatlar berip-bermeýändigini kesgitlemek üçin bahalandyryldy. Bu mümkin bolan iýmit serişdesini gözlemekde arabiensis synlanan tapawutly çekijiligiň arkasyndaky himiki korrelasiýalary tapdy. 24 sagat garry siýdikde anyklanan uçujy organiki birleşmeleriň (UOC) sintetiki ysly garyndylary meýdan şertlerinde has-da seljerildi, barlaghana şertlerinde alnan netijeleri giňeltdi we sygyr siýdiginiň ysynyň dürli fiziologiki ýagdaýlara täsirini görkezdi. Çybyn çekijiligi. Alnan netijeler An. arabiensis-iň ýaşaýyş taryhynyň aýratynlyklaryna täsir etmek üçin oňurgaly siýdikde tapylan azotly birleşmeleri özleşdirýändigini we paýlaýandygyny tassyklaýar. Bu netijeler mümkin bolan epidemiologik netijeler we olaryň wektor gözegçiligi we gözegçilik üçin nähili ulanylyp bilinjekdigi kontekstinde ara alnyp maslahatlaşylýar.
Anopheles arabicans (Dongola ştammy) 25 ± 2 °C, 65 ± 5% nisbi howa we 12:12 sagat ýagtylyk: garaňky siklde saklandy. Liçinkalar distillenen suw bilen doldurylan plastik tabaklarda (20 sm × 18 sm × 7 sm) ösdürilip ýetişdirildi we Tetramin® balyk iýmiti (Tetra Werke, Melle, DE) berildi. Kukuruzlar 30 ml käselerde (Nolato Hertila, Åstorp, SE) ýygnaldy we soňra ulularyň çykmagy üçin Bugdorm torlaryna (30 sm × 30 sm × 30 sm; MegaView Science, Taýçžun, Taýwan) geçirildi. Ululara çykandan 4 gün soň (dpe) 10% saharoza ergini ad libitum berildi, şol wagtda öý gözleýän dişilere tejribeden öň iýmit berildi ýa-da aşakda beýan edilişi ýaly tejribeden öň distillenen suw bilen gijesine açlyk berildi. Uçuş turbasy tejribeleri üçin ulanylan dişiler diňe 4-6 gün açlyk berildi. suw bilen sagatlar ad libitum. Gan sorýan çybynlary indiki biosynaglar üçin taýýarlamak üçin, membran iýmitlendirme ulgamy (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, Beýik Britaniýa) ulanylyp, 4 dpe urkaçysyna defibrotik goýun gany (Håtunalab, Bro, SE) berildi. Doly dykylan urkaçylar soňra aýratyn torlara geçirildi we aşakda beýan edilişi ýaly gönüden-göni iýmit berildi ýa-da aşakda beýan edilýän tejribelerden 3 gün öň 10% saharoza ad libitum berildi. Soňky urkaçylar uçuş turba biosynaglary üçin ulanyldy we laboratoriýa geçirildi, soňra tejribeden 4-6 sagat öň distilled suw ad libitum berildi.
Uly ýaşly An.Arab zenanynda siýdik we karbamid sarp edilişini kesgitlemek üçin iýmitlendirme synaglary ulanyldy. Hoja gözleýän we gan bilen iýmitlenýän zenanlara 48 sagatlap 1% suwuklandyrylan täze we garry sygyr siýdigi, dürli konsentrasiýadaky karbamid we iki gözegçilik (10% saharoza we suw) bolan iýmit berildi. Mundan başga-da, iýmite iýmit reňkleýjisi (1 mg ml-1 ksilol sianid FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stokholm, SE) goşuldy we 250 µl mikrosentrifuga turbalarynda 4 × 4 matrisada berildi (Axygen Scientific, Union City, CA, ABŞ; 1A surat). Gyrasyna çenli dolduryň (~300 µl). Çybynlaryň arasyndaky bäsdeşligiň we boýag reňkiniň mümkin bolan täsirleriniň öňüni almak üçin, 10 çybyn uly Petri gapjygyna (diametri 12 sm we beýikligi 6 sm; Semadeni, Ostermundigen, CH; 1A surat) 25 ± 2 sm °C we 65 ± temperaturada doly garaňkylykda goýuň. 5% otnositel çyglylyk. Bu tejribeler 5-10 gezek gaýtalandy. Iýmit bilen täsirlenenden soň, çybynlar goşmaça seljermä çenli -20 °C temperaturada goýuldy.
Hoja we gan sorýan urkaçy Anopheles arabianus tarapyndan siňdirilen sygyr siýdigini we karbamidini gözläň. Iýmitlendirmek synagynda (A) urkaçy çybynlara täze we garry sygyr siýdiginden, dürli konsentrasiýadaky karbamidden, saharozadan (10%) we distilled suwdan (H2O) ybarat iýmit berildi. Hoja gözleýän (B) we gan bilen iýmitlenen (C) urkaçylar synagdan geçirilen beýleki iýmitlerden has köp saharoza siňdirdiler. Hoja gözleýän urkaçylaryň 72 sagatlyk sygyr siýdigini 168 sagatlyk sygyr siýdiginden (B) az siňdirendigini belläň. Siýdigiň ortaça umumy azot mukdary (± standart çykgyt) goşmaçada görkezilen. Hoja gözleýän (D, F) we gan sorýan (E, G) urkaçylar karbamidini doza bagly görnüşde kabul edýärler. Dürli harp atlary bolan ortaça dem alyş möçberleri (D, E) biri-birinden düýpli tapawutlanýardy (Tukeýiň post-hoc analizini ulanyp, birtaraplaýyn ANOVA; p < 0.05). Ýalňyşlyk çyzyklary ortaçanyň standart ýalňyşlygyny (BE) görkezýär. Düz kesik çyzyk log-çyzykly regressiýa çyzygy (F, G) görkezýär.
Siňdirilen iýmiti çykarmak üçin, çybynlar aýratynlykda 230 µl distillenen suw saklaýan 1,5 ml mikrosentrifuga turbalaryna ýerleşdirildi we dokumalar bir gezek ulanylýan pestle we simsiz motor (VWR International, Lund, SE) arkaly bölündi, soňra 10 minutlap 10 krpm tizlikde santrifuga edildi. Üstki gatlak (200 µl) 96 guýulyk mikroplastinka (Sigma-Aldrich) geçirildi we siňdiriş (λ620) spektrofotometr esasly mikroplastinka okaýjy (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm arkaly kesgitlenildi. Başgaça aýdylanda, çybynlar 1 ml distillenen suwda üweldi, onuň 900 µl-i spektrofotometriki analiz üçin küwete geçirildi (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Iýmit sarp edilişini kesgitlemek üçin, 0,2 µl-den 2,4-e çenli yzygiderli suwuklandyrmak arkaly standart egri taýýarlanyldy. 1 mg ml-1 ksilol sianidiň µl. Soňra her bir çybyn iýýän iýmitiň mukdaryny kesgitlemek üçin belli boýag konsentrasiýalarynyň optiki dykyzlygy ulanyldy.
Göwrüm maglumatlary birtaraplaýyn dispersiýa analizi (ANOVA) arkaly seljerildi, soňra Tukeýiň post hoc jübüt deňeşdirmeleri (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, ABŞ, 1989–2007) ulanyldy. Çyzyk regressiýa analizleri konsentrasiýa bagly karbamid kabul edilişini beýan etdi we öý eýesini gözleýän we gan sorýan çybynlaryň arasyndaky jogaplary deňeşdirdi (GraphPad Prism v8.0.0 for Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, ABŞ).
Her ýaş toparyndan takmynan 20 µl siýdik nusgalary Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) bilen baglanyp, galaýy kapsulalara (8 mm × 5 mm) gaplanyldy. Öndürijiň protokolyna laýyklykda täze we köne siýdikdäki azotyň mukdaryny kesgitlemek üçin kapsulalar CHNS/O analizatorynyň (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABŞ) ýanma kamerasyna girizildi. Umumy azot (g N l-1) standart hökmünde ulanylan belli karbamid konsentrasiýalaryna esaslanyp kesgitlenildi.
Iýmitiň eýe gözleýän we gan sorýan zenanlaryň diri galmagyna täsirini bahalandyrmak üçin, çybynlar aýratynlykda uly Petri gaplaryna (diametri 12 sm we beýikligi 6 sm; Semadeni) ýerleşdirildi, gapagynda tor bilen örtülen deşik (diametri 3 sm) howa çalşyrmak we iýmit bilen üpjün etmek üçin ulanyldy. Iýmitler 4 dpe-den soň göni berildi we 1% suwuklandyrylan täze we garry sygyr siýdigi, dört konsentrasiýaly karbamid we iki gözegçilik topary, 10% saharoza we suw goşuldy. Her bir iýmit 5 ml şprise (Thermo Fisher Scientific, Göteborg, SE) goýlan diş tamponyna (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) pipetka bilen guýuldy, porşen aýryldy we Petri gapjygynyň üstüne goýuldy (1-nji surat).1A). Iýmitiňizi her gün üýtgediň. Laboratoriýada ýokarda beýan edilişi ýaly saklaň. Diri galan çybynlar günde iki gezek sanaldy, öli çybynlar bolsa soňky çybyn ölýänçä taşlandy (bejergi üçin n = 40). Dürli iýmitler bilen iýmitlenen çybynlaryň diri galmagy statistik taýdan seljerildi. Kaplan-Meýeriň ýaşaýyş derejesiniň egrileri we iýmitleriň arasyndaky ýaşaýyş derejesiniň paýlanyşyny deňeşdirmek üçin log-rank synaglary (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Attisano we beýlekileriň [17] esasynda döredilen, öň we arka panelleri bolmadyk, 5 mm galyňlykdaky (10 sm ini x 10 sm uzynlygy x 10 sm beýikligi) arassa akril panellerden ýasalan ýörite çybyn uçuryjy degirman (3-nji surat: ýokarky). Gaz hromatografiýa sütüninden (0,25 mm id; 7,5 sm L) ýasalan dik turbaly, uçlary 9 sm aralykda ýerleşýän neodim magnitleriniň arasynda asylgy duran mör-möjek iňňesine ýelmeşdirilen aýlaw gurluşy. Şol bir materialdan (6,5 sm L) ýasalan gorizontal turba dik turbany iki bölege bölüp, daňylan gol we ýagtylygy kesýän signal hökmünde kiçijik alýumin folga bölegini göterýän gol emele getirdi.
24 sagat aç galan dişi çybynlara saklanmazdan öň 30 minutlap ýokardaky iýmit berildi. Doly iýmitlenen dişi çybynlar soňra buzda 2-3 minutlap aýratynlykda anesteziýa edildi we ary mumy bilen mör-möjekleriň iňňelerine berkidildi (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) we soňra gorizontal turbalaryň gollaryna daňyldy. Uçuş degirmeni. Her uçuşdaky aýlanmalar ýörite gurlan maglumat ýazuw enjamy tarapyndan ýazylyp alyndy, soňra PC-Lab 2000™ programma üpjünçiligi (v4.01; Velleman, Gavere, BE) arkaly saklandy we görkezildi. Uçuş degirmeni howa şertlerine laýyk otagda ýerleşdirildi (12 sagat:12 sagat, ýagtylyk: garaňky, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% nisbi howa).
Uçuş işjeňliginiň nusgasyny göz öňüne getirmek üçin, 24 sagatlyk döwürde sagatda uçan umumy aralyk (m) we yzygiderli uçuş işjeňliginiň umumy sany hasaplandy. Mundan başga-da, her bir aýalyň uçan ortaça aralyklary bejeriş usullary boýunça deňeşdirildi we bir taraply ANOVA we Tukeýiň post hoc seljermesi (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) arkaly seljerildi, bu ýerde ortaça aralyk garaşly üýtgeýji hasaplandy, bejeriş bolsa garaşsyz faktor boldy. Mundan başga-da, tapgyrlaryň ortaça sany 10 minutlyk aralyklarda hasaplanýar.
An.arabiensis-iň köpeliş ukybyna iýmitiň täsirini bahalandyrmak üçin, gan alnandan soň alty urkaçy (4 dpe) gönüden-göni Bugdorm torlaryna (30 sm × 30 sm × 30 sm) geçirildi we soňra ýokarda beýan edilişi ýaly 48 sagatlap synag iýmitini berdi. Soňra iýmitler aýryldy we üçünji gün her 24 sagatda çalşyp, 20 ml distillenen suw bilen doldurylan ýumurtga çykaryş käseleri (30 ml; Nolato Hertila) 48 sagatlap berildi. Her iýmit tertibini 20-50 gezek gaýtalaň. Her synag torunyň ýumurtgalary sanaldy we ýazga alyndy. Leica kamerasy (DFC) 320 R2 bilen enjamlaşdyrylan Dialux-20 mikroskopy (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) arkaly aýry-aýry ýumurtgalaryň ortaça ululygyny we uzynlygyny (diýet üçin n ≥ 200) bahalandyrmak üçin ýumurtgalaryň kiçi nusgalary ulanyldy; Leica Microsystems Ltd., DE). Galan ýumurtgalar standart terbiýeleýiş şertlerinde howa gözegçiligi astynda otagda 24 sagat saklandy we ýokarda beýan edilişi ýaly, ýakynda çykan 1-nji ýaşdaky liçinkalaryň kiçi nusgasy (her iýmitde n ≥ 200) ölçeldi. Ýumurtgalaryň sany we ýumurtgalaryň we liçinkalaryň ululygy bejeriş usullarynyň arasynda we bir taraplaýyn ANOVA we Tukeýiň post hoc analizi (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) ulanylyp deňeşdirildi.
Zebu mallaryndan we Arsi jynslaryndan ýygnalan nusgalardan täze (nusga alnandan 1 sagat soň), 24 sagat, 72 sagat we 168 sagatlyk ýaşlanan siýdikden alnan uçujy maddalar ýygnaldy. Aňsatlyk üçin, siýdik nusgalary irden sygyrlar henizem ambarda wagty ýygnaldy. Siýdik nusgalary 10 adamdan ýygnaldy we her nusgadan 100-200 ml winilhlorid plastik barabanlarda gapakly 3 litrlik poliamidde aýratyn poliamid bişirýän haltalara (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) geçirildi. Her bir sygyr siýdik nusgasyndan alnan uçujy maddalar gönüden-göni (täze) ýa-da ýetişenden soň otag temperaturasynda 24 sagat, 72 sagat we 168 sagat ýygnaldy, ýagny her bir siýdik nusgasy her ýaş toparyna degişlidi.
Baş boşlugy uçujy maddalary ýygnamak üçin, diafragma wakuum nasosyny (KNF Neuberger, Freiburg, DE) ulanyp, aktiwleşdirilen kömür bilen süzülýän gaz akymyny (100 ml min-1) poliamid halta arkaly adsorbsiýa sütünine 2,5 sagatlap aýlamak üçin ýapyk aýlawly ulgam ulanyldy. Gözegçilik hökmünde, boş poliamid haltadan baş boşlugy ýygnamak amala aşyryldy. Adsorbsiýa sütüni aýna ýüň tıkaçlarynyň arasynda 35 mg Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, ABŞ) saklaýan Teflon turbalaryndan (5,5 sm x 3 mm id) ýasaldy. Ulanylmazdan öň, sütüni 1 ml gaýtadan distille edilen n-geksan (Merck, Darmstadt, DE) we 1 ml pentan (99,0% arassa ergin GC derejesi, Sigma Aldrich) bilen ýuwuldy. Adsorbsiýa edilen uçujy maddalar 400 μl pentan bilen elusiýa edildi. Baş boşlugynyň kolleksiýalary birleşdirildi we soňra goşmaça seljerme üçin ulanylýança -20°C-de saklandy.
Hoja gözleýji we gan iýiji An-iň özüni alyp barşyna jogap berýär. Täze, 24 sagatlyk, 72 sagatlyk we 168 sagatlyk siýdikden ýygnalan baş boşlugynyň uçujy ekstraktlary göni aýna turbaly olfaktometr arkaly Arabidopsis çybynlaryndan uçujy ekstraktlar üçin seljerildi [18]. Tejribeler An-iň öý gözleýji işjeňliginiň iň ýokary döwri bolan ZT 13-15 döwründe geçirildi. Arab [19]. Aýna turbaly olfaktometr (80 sm × 9.5 sm id) ýokardan 3 ± 1 lx gyzyl yşyk bilen ýagtylandyryldy. Kömür bilen süzülen we çyglylandyrylan howa akymy (25 ± 2 °C, 65 ± 2% otnositel çyglylyk) bioanalizden 30 sm s-1 tizlikde geçdi. Howa birnäçe poslamaýan polat tor ekranlaryndan geçirilýär, laminar akymy we birmeňzeş tüýjümek gurluşyny döredýär. Diş tampon dispenseri (4 sm × 1 sm; U:D; DAB Dental AB), 5 sm spiraldan asylgy. Olfaktometriň ýel tarapyndaky ujuna, stimulator her 5 minutda üýtgeýär. Analiz üçin, her bir baş boşlugy ekstraktynyň 10 μl, 1:10 gatnaşygynda suwuklandyrylan, stimul hökmünde ulanyldy. Deň mukdarda pentan gözegçilik hökmünde ulanyldy. Şahsy eýe gözleýän ýa-da gan sorýan çybynlar tejribe başlamazdan 2-3 sagat öň aýry-aýry goýberilýän torlara ýerleşdirildi. Çykarylýan tor olfaktometriň ýel tarapyna ýerleşdirildi we çybynlara 1 minutlap uýgunlaşmaga rugsat berildi, soňra toruň kebelek klapany boşadylmak üçin açyldy. Bejerişe ýa-da gözegçilik üçin özüne çekijilik boşadylandan soň 5 minut içinde çeşme bilen aragatnaşykda bolan çybynlaryň paýy hökmünde seljerildi. Her bir baş boşlugynyň uçujy ekstrakty we gözegçilik azyndan 30 gezek gaýtalandy we islendik bir günüň täsirinden gaça durmak üçin, her tejribe gününde şol bir mukdarda bejergi we gözegçilik synagdan geçirildi. Eýe we gan bilen iýmitlenenlerden jogaplary alyň. Jogap. Arap we baş boşlugy toplumlary nominal logistik regressiýa arkaly seljerildi, soňra tak gatnaşyklar üçin jübüt deňeşdirmeler geçirildi. (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
An-yň ýumurtga çykaryş reaksiýasy. Täze we garry sygyr siýdiginden alynýan baş boşlugy ekstraktlary Bugdorm kapasalarynda (30 sm × 30 sm × 30 sm; MegaView Science) seljerildi. 20 ml distillenen suw bilen doldurylan plastik käseler (30 ml; Nolato Hertila) ýumurtga çykaryş substratyny üpjün etdi we kapasanyň garşylykly burçlaryna, 24 sm aralykda ýerleşdirildi. Bejeriş käselerine her baş boşlugy ekstraktynyň 10 μl-i 1:10 suwuklandyrma bilen sazlandy. Gözegçilik käsesini sazlamak üçin deň mukdarda pentan ulanyldy. Gözegçilik täsirlerini gözegçilige almak üçin her synagyň arasynda bejergi we gözegçilik käseleri çalşyldy. ZT 9-11-de synag käselerine gan bilen iýmitlenen on sany dişi käse goýberildi we käselerdäki ýumurtgalar 24 sagatdan soň sanaldy. Ýumurtga çykaryş indeksini hasaplamagyň formulasy: (bejeriş käsesinde goýlan ýumurtgalaryň sany - gözegçilik käsesinde goýlan ýumurtgalaryň sany) / (goýulan ýumurtgalaryň umumy sany). Her bejergi 8 gezek gaýtalandy.
An.arabiensis dişileriniň gaz hromatografik we elektron antenna nusgasyny anyklaýyş (GC-EAD) analizi öň beýan edilişi ýaly geçirildi [20]. Gysgaça aýdylanda, täze baş giňişligi uçujy ekstraktlary HP-5 sütünli (30 m × 0.25 mm id, 0.25 μm plýonka galyňlygy, Agilent Technologies) Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, ABŞ) ulanyp bölündi. we garrama siýdigi. Hereketli faza hökmünde wodorod ortaça çyzykly akym tizligi 45 sm s-1 bolan ulanyldy. Her bir nusga (2 μl) giriş temperaturasy 225 °C bolan bölünmeýän re inimde 30 sekuntlap ​​sanjyldy. GC peç temperaturasy 35 °C-den (3 minut saklamak) 300 °C-e (10 minut saklamak) 10 °C min-1 tizlikde programmirlendi. GC zyňyndy bölüjisinde 4 psi azot goşuldy we alow ionizasiýa detektory bilen EAD-iň arasynda Gerstel 3D/2 pes ölü göwrümli çatrygynda (Gerstel, Mülheim, DE) 1:1 paýlandy. EAD üçin GC zyňyndy kapillýary GC peç temperaturasyny + 5 °C yzarlaýan Gerstel ODP-2 geçiriji liniýasyndan aýna turba (10 sm × 8 mm) geçirildi, ol ýerde uglerod süzgüçinden geçirilen, çyglylandyrylan howa (1,5 l min−1) garyldy. Antenna ýerleşdirildi Turbanyň çykyşyndan 0,5 sm uzaklykda. Her bir çybyn bir gaýtalanma, öý eýesini gözleýän çybynlar üçin bolsa her ýaşdaky siýdik nusgalarynda azyndan üç gaýtalanma geçirildi.
GC-EAD analizinde antenna jogaplaryny almak üçin 70 eV-de elektron täsirli ionizasiýa režiminde işleýän, täze we garry mal siýdiginiň baş giňişligindäki bioaktiw birleşmeleriň kesgitlenmegi GC we massa spektrometri (GC-MS; 6890 GC we 5975 MS; Agilent Technologies) arkaly utgaşdyrylan GC we massa spektrometri (GC-MS; 6890 GC we 5975 MS; Agilent Technologies) ulanylyp. GC, ortaça çyzykly akym tizligi 35 sm s-1 bolan geliýi hereketli faza hökmünde ulanyp, HP-5MS UI bilen örtülen erginleşdirilen silika kapillýar sütün (60 m × 0.25 mm içki diametri, 0.25 μm plýonka galyňlygy) bilen enjamlaşdyryldy. 2 μl nusga GC-EAD analizi üçin bolşy ýaly şol bir injektor sazlamalary we peç temperaturasy ulanylyp inýeksiýa edildi. Birleşmeler olaryň saklanma wagtyna (Kowat indeksi) we ýörite kitaphana we NIST14 kitaphanasy (Agilent) bilen deňeşdirilende massa spektrlerine esaslanyp kesgitlenildi. Anyklanan birleşmeler hakyky standartlary inýeksiýa etmek arkaly tassyklanyldy (Goşmaça faýl 1: S2 tablisa). Mukdar kesgitlemek üçin, geptil asetat (10 ng, 99.8% himiki arassalyk, Aldrich) daşarky standart hökmünde inýeksiýa edildi.
Täze we garry siýdikde anyklanan bioaktiw birleşmelerden ybarat bolan sintetiki ysly garyndynyň netijeliligini bahalandyrmak, ýokardaky ýaly olfaktometr we protokol arkaly, eýe gözleýän we gan sorýan Ans.arabiensis-i özüne çekmek üçin. Sintetiki garyndylar täze, 24 sagatlyk, 48 sagatlyk, 72 sagatlyk we 168 sagatlyk garry siýdikiň garyşyk baş giňişligindäki uçujy ekstraktlaryndaky birleşmeleriň düzümini we paýlaryny gaýtalady (5D-G surat; Goşmaça faýl 1: S2 tablisa). Analiz üçin, eýe we gan sorýan çybynlar üçin özüne çekijiligi bahalandyrmak üçin umumy çykarylyş tizligi takmynan 140-2400 ng h-1 aralygynda bolan doly sintetiki garyndynyň 1:100 suwuklandyrmasynyň 10 μl ulanyň. Şondan soň, synag doly garyndylarda geçirilýär, onda doly garyndynyň ýeke birleşmeleriniň subtraktiw garyndylary aýrylýar. Eýe we gan bilen iýmitlenenlerden jogap gözleň Ans. Arab we sintetiki we subtraktiw garyndylar nominal logistik regressiýa arkaly seljerildi we soňra jübüt deňeşdirildi. tak gatnaşyklar (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Sygyr peşewiniň bezgek çybynlary üçin öý hojalygynyň alamaty bolup biljekdigini kesgitlemek üçin, ýokarda beýan edilişi ýaly ýygnalan täze we garry sygyr peşewi we suw 3 litrlik çeleklere (100 ml) goýuldy we öý haýwanlarynyň iýim duzaklaryna goýuldy. (BG-HDT wersiýasy; BioGents, Regensburg, DE). Öri meýdanynda 50 m aralykda, oba jemgyýetinden (Silay, Efiopiýa, 5°53´24´´D, 37°29´24´´G) 400 m uzaklykda we mallar ýok, hemişelik köpeltmek ýerlerinde we obalarda on duzak goýuldy. Öý haýwanynyň bardygyny görkezmek üçin bäş duzak gyzdyryldy, bäş duzak bolsa gyzdyrylmady. Her bir bejeriş ýeri her gije jemi bäş gije aýlanýar. Dürli ýaşdaky siýdik bilen iýimlenen duzaklarda tutulan çybynlaryň sany beta binomial paýlanyşy bilen logistik regressiýa arkaly deňeşdirildi (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Efiopiýanyň Oromiýa sebitiniň Maki şäheriniň golaýyndaky malariýa ýaýran obada (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; 6A surat). Bu gözleg awgust aýynyň ortalary bilen sentýabr aýynyň ortalary aralygynda, ýyllyk içerki galyndylaryň püskürdilmesinden öň we uzak ýagyş möwsümi bilen bilelikde geçirildi. Bu gözleg üçin obanyň çetinde ýerleşýän bäş jübüt öý (aralygy 20–50 m) saýlanyldy (6A surat). Öýleri saýlamak üçin ulanylan ölçegler: öýde haýwanlara rugsat berilmeýär, içerki nahar bişirmek gadagan edilýär (otun ýa-da kömür çekmek) (iň bolmanda synag döwründe) we iň köp iki ýaşaýjysy bolan, insektisidlere garşy serişdeler bilen ýatýan öýler. bejerilen çybyn torunyň aşagynda. Addis-Abeba uniwersitetiniň Tebigy ylymlar fakultetiniň (CNS-IRB) institutsional ylmy-barlag etikasyny gözden geçirmek boýunça geňeşi (IRB/022/2016) tarapyndan, Helsinki Bütindünýä lukmançylyk assosiasiýasynyň jarnamasy bilen kesgitlenen görkezmelere laýyklykda, ahlak taýdan tassyklanyldy. Saglygy goraýyş işgärleriniň kömegi bilen her bir maşgala başlygynyň razylygy alyndy. Tutuş proses etrap we etrap ('kebele') derejesindäki ýerli dolandyryş edaralary tarapyndan tassyklanyldy. Eksperimental dizaýn 2 × 2 latyn kwadrat dizaýnyna eýerdi, onda sintetiki garyndylar we gözegçilik maddalary birinji gije jübüt öýlere berildi we indiki eksperimental gije öýleriň arasynda çalşyryldy. Bu proses on gezek gaýtalandy. Mundan başga-da, saýlanan öýlerde çybyn işjeňligini kesgitlemek üçin, CDC duzaklary meýdan synagynyň başynda, ortasynda we ahyrynda günüň şol bir wagtynda bäş gije yzygiderli işlemeli edildi.
Alty sany bioaktiw birleşmeden ybarat bolan sintetiki garyndy geptanda (97.0% ergin GC derejesi, Sigma Aldrich) eredildi we pagta fitil dispenseri arkaly 140 ng h-1-de goýberildi [20]. Fitil dispenseri ähli birleşmeleriň 12 sagatlyk synagyň dowamynda üýtgewsiz proporsiýalarda goýberilmegine mümkinçilik berdi. Geptan gözegçilik hökmünde ulanyldy. Flakon Keselleriň öňüni almak we gözegçilik merkezleriniň (CDC) ýagtylyk duzagynyň giriş nokadynyň ýanynda asyldy (John W. Hock kompaniýasy, Geýnswil, FL, ABŞ; 6A surat). Duzaklar ýerden 0.8-1 m beýiklikde, düşegiň aýagynyň golaýynda asyldy we meýletinçi işlenilmedik çybyn torunyň aşagynda ýatdy we 18:00 bilen 06:30 aralygynda operasiýa edildi. Jynsy we fiziologik ýagdaýy boýunça tutulan çybynlar (iýmitlenmedik, iýmitlenen, ýarym göwreli we göwreli [21]) soňra polimeraza zynjyr reaksiýasy (PCR) derňewi arkaly barlandy we morfologik taýdan A. gambiae sl hökmünde kesgitlenen görnüşleri anyklady. Toplumyň agzalary [23]. Meýdan barlagynda jübüt öýleriň duzak tutmaklary nominal logistika laýyklyk modelini ulanyp seljerildi, bu ýerde özüne çekijilik garaşly üýtgeýji, bejergi bolsa (sintetiki garyndy we gözegçilik) üýtgewsiz täsir boldy (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.). Bu ýerde biz ähtimallyk gatnaşygy synagyndan alnan χ2 we p-bahalaryny görkezýäris.
Howpsuzdygyny ýa-da ýokdugyny bahalaň. arabiensis, öý eýelerini gözlemek we gan bilen iýmitlendirmek synaglaryndan soň 4 günüň dowamynda (dpe) berlenden soň 48 sagadyň dowamynda esasy azot çeşmesi bolan karbamid siýdigini gönüden-göni iýmitlendirmek arkaly alyp bildi (1A surat). Öý eýelerini gözlemek we gan sormak bilen meşgullanýan dişileriň ikisi hem beýleki iýmitlere ýa-da suwa garanda has köp saharoza siňdirdiler (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 we F(5,299) = 56.00, p < 0.0001 degişlilikde; 1B,C suratlar). Mundan başga-da, öý eýelerini gözlemek bilen meşgullanýan dişiler 72 sagatda siýdikde 168 sagatdaky siýdik bilen deňeşdirilende az iýdiler (1B surat). Karbamid saklaýan iýmit hödürlenende, öý eýelerini gözlemek bilen meşgullanýan dişiler 2.69 mM-de beýleki ähli konsentrasiýalara we suwa garanda has köp mukdarda karbamid siňdirdiler, şol bir wagtyň özünde 10% saharozadan tapawutlanyp bolmaýar (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; 1D surat). Bu, gan bilen iýmitlenýän zenanlaryň jogabyndan tapawutlydy, olar adatça suwdan has köp karbamid saklaýan iýmitleri özleşdirýärdiler, emma 10% saharozadan has az (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; 1-nji surat).1E). Mundan başga-da, iki fiziologik ýagdaýy deňeşdirende, flebotomlaşdyrylan zenanlar iň pes konsentrasiýalarda eýe gözleýän zenanlara garanyňda has köp karbamid özleşdirdiler we bu zenanlar ýokary konsentrasiýalarda karbamidiň meňzeş mukdaryny özleşdirdiler (F(1,953) = 78.82, p < 0.0001; 1F surat, G). Karbamid saklaýan iýmitden kabul etmek optimal gymmatlyklara eýe bolan ýaly görünse-de (1D, E surat), iki fiziologiki ýagdaýda hem zenanlar karbamid konsentrasiýalarynyň ähli diapazonynda özleşdirilen karbamidiň mukdaryny log-çyzykly görnüşde üýtgedip bildiler (1F surat, G). Şonuň ýaly-da, çybynlar siýdikdäki azotyň mukdary siňdirilen mukdarda şöhlelenýändigi üçin, siňdirilen siýdik mukdaryny düzgünleşdirmek arkaly azotyň özleşdirilmegini gözegçilikde saklaýan ýaly görünýär (1B, C we B suratlar).
Siýdik we karbamidiň öý eýelerini gözleýän we gan sorýan çybynlaryň ýaşamagyna täsirini bahalandyrmak üçin, aýallara dört ýaşdaky (täze, çökündiden 24 sagat, 72 sagat we 168 sagat soň) we dürli karbamid konsentrasiýalary, şeýle hem distilled suw we 10% saharoza gözegçilik hökmünde berildi (2A surat). Bu ýaşaýş seljermesi iýmitiň öý eýelerini gözleýän aýallarda (siýdik: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; karbamid: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; 2B, C surat) we gan bilen iýmitlenýän aýallarda (siýdik: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; karbamid: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; 2D, E surat) umumy ýaşaýşa uly täsir edýändigini görkezdi. Ählisinde tejribelerde, siýdik, karbamid we suw bilen iýmitlenen zenanlaryň saharoza iýmitlenen zenanlara garanyňda ýaşaýyş derejesi has pes boldy (2B-E surat). Täze we köne siýdik bilen iýmitlenen eýe gözleýän zenanlaryň ýaşaýyş derejesi dürli boldy, 72 sagat köne siýdik bilen iýmitlenenler (p = 0.016) ýaşaýyş ähtimallygy iň pes boldy (2B surat). Mundan başga-da, 135 mM karbamid bilen iýmitlenen eýe gözleýän zenanlar suw gözegçilik toparyna garanyňda has uzak ýaşadylar (p < 0.04) (2C surat). Suw bilen deňeşdirilende, täze siýdik we 24 sagatlyk siýdik bilen iýmitlenen zenanlar has uzak ýaşadylar (degişlilikde p = 0.001 we p = 0.012; 2D surat), 72 sagatlyk siýdik bilen iýmitlenen zenanlar bolsa gysga täze siýdik we 24 sagatlyk köne siýdik bilen iýmitlenen zenanlara garanyňda has uzak ýaşadylar (degişlilikde p < 0.0001 we p = 0.013; 2D surat). 135 mM karbamid bilen iýmitlenende, gan bilen iýmitlenen zenanlar karbamid we suwuň ähli beýleki konsentrasiýalaryndan has uzak ýaşadylar (p <0.013; 2E surat).
Sygyr siýdigi we karbamid bilen iýmitlenýän öý eýesiniň we gan sorýan urkaçy Anopheles arabinis-iň diri galmagy. Biosynarda (A) urkaçy çybynlara täze we garry sygyr siýdiginden, dürli konsentrasiýadaky karbamidden, saharozadan (10%) we distilled suwdan (H2O) ybarat iýmit berildi. Öý eýesini gözleýän (B, C) we gan sorýan (D, E) çybynlaryň diri galmagy her 12 sagatda siýdik (B, D) we karbamid (C, E) bilen iýmitlenýän ähli urkaçylar, şeýle hem gözegçilik topary, saharoza we suw ölýänçä hasaba alyndy.
24 sagatlyk döwürde uçuş degirmeni synagynda kesgitlenen umumy aralyk we aýlawlaryň sany, umumylykda uçuş işjeňliginiň azdygyny görkezýän eýe gözleýän we gan sorýan çybynlaryň arasynda tapawutlandy (3-nji surat). Täze we garry siýdik ýa-da saharoza we suw bilen üpjün edýän eýe gözleýän çybynlar dürli uçuş görnüşlerini görkezdiler (3-nji surat), täze siýdik bilen iýmitlenýän dişiler daň atanda has işjeň bolýarlar, 24 we 168 sagatlyk garry çybynlar bolsa siýdik bilen iýmitlenýänler dürli uçuş görnüşlerini görkezdiler we esasan gündizki boldylar. Saharoza ýa-da 72 sagatlyk siýdik bilen üpjün edýän dişi çybynlar 24 sagatlyk döwürde işjeňlik görkezdiler, suw bilen üpjün edýän dişiler bolsa döwrüň ortasynda has işjeň boldular. Saharoza bilen iýmitlenýän çybynlar gijelerine we irden iň ýokary işjeňlik derejesini görkezdiler, 72 sagatlyk garry siýdik bilen iýmitlenenler bolsa 24 sagadyň dowamynda işjeňligiň yzygiderli peselmegine sezewar boldular (3-nji surat).
Awçy gözläp, gan sorýan urkaçy Anopheles arabinis-iň sygyr siýdigi we karbamid bilen iýmitlenýän uçuş görkezijileri. Uçuş degirmeninde synagda täze we garry sygyr siýdigi, dürli konsentrasiýadaky karbamid, saharoza (10%) we distilled suw (H2O) bilen iýmitlenýän urkaçy çybynlar gorizontal, erkin aýlanýan gollara (ýokarda) daňyldy. Öý eýesi gözläp (çepde) we gan sorýan (sagda) urkaçylar üçin 24 sagatlyk döwürde her bir iýmit üçin sagatda umumy aralyk we uçuş sany ýazylyp alyndy (garaňky: çal; açyk: ak). Ortaça aralyk we ortaça söweş sany sirkadian işjeňlik grafiginiň sag tarapynda görkezilýär. Ýalňyşlyk sütunlary ortaça standart ýalňyşlygy görkezýär. Statistik seljerme tekste serediň.
Umuman, öý eýelerini gözleýän dişileriň umumy uçuş işjeňligi 24 sagatlyk döwürde uçuş aralygyna meňzeş bir nusgada boldy. Ortaça uçuş aralygyna iýilýän iýmit düýpli täsir etdi (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001) we 72 sagat siýdik iýýän öý eýelerini gözleýän dişiler beýleki ähli iýmitlere garanyňda has uzak aralyklara uçdular (p < 0.0001) we saharoza bilen iýmitlenen çybynlar täze (p = 0.022) we 24 sagatlyk siýdik (p = 0.022) bilen iýmitlenen çybynlardan has uzak uçdular. Siýdik bilen iýmitlenen uçuş işjeňliginiň nusgasyndan tapawutlylykda, karbamid bilen iýmitlenen öý eýelerini gözleýän dişiler 24 sagatlyk döwürde dowamly uçuş işjeňligini görkezdiler we garaňky fazanyň ikinji ýarymynda iň ýokary derejä ýetdiler (3-nji surat). Işjeňlik nusgalary meňzeş bolsa-da, karbamid bilen iýmitlenen öý eýelerini gözleýän dişiler siňdirilen konsentrasiýa baglylykda ortaça uçuş aralygyny ep-esli artdyrdylar (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Islendik konsentrasiýadaky karbamid bilen iýmitlenen öý eýelerini gözleýän dişiler suw ýa-da saharoza bilen iýmitlenen dişilerden has uzak uçdular (p < 0.03).
Gan sorujy çybynlaryň umumy uçuş işjeňligi ähli iýmitlerde 24 sagadyň dowamynda durnukly we dowamly boldy, suw bilen iýmitlenen aýallarda, şeýle hem täze we 24 sagatlyk iýmitlenen aýallarda garaňky döwrüň ikinji ýarymynda siýdik işjeňligi ýokarlandy (3-nji surat). Siýdik bilen iýmitlenmek gan bilen iýmitlenen aýallarda ortaça uçuş aralygyna düýpli täsir etse-de (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), karbamid bilen iýmitlenmek beýleki siýdik we gözegçilik iýmiti bilen (täze, p = 0.0091; 72 sagat, p = 0.0022; 168 sagat, p = 0.001; saharoza, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036) täsir etmedi (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24).
Siýdik we karbamid bilen iýmitlenmegiň köpeliş parametrlerine täsiri ýumurtga goýýan biosynaglarda bahalandyryldy (4A surat) we her bir dişi jynsyň goýan ýumurtgalarynyň sanyna, ýumurtganyň ululygyna we täze çykan ilkinji ýaşdaky liçinkalaryna görä derňeldi. Goýlan ýumurtgalaryň sany. Siýdik bilen iýmitlenen arap dişileri iýmitine görä üýtgedi (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; 4B surat). 24 sagatlyk siýdik, gan ulumy bilen iýmitlenen dişiler beýleki siýdik bilen iýmitlenen dişilere garanyňda has köp ýumurtga goýdular we saharoza bilen iýmitlenenlere meňzeşdi (4B surat). Şeýle hem, siýdik bilen iýmitlenen dişileriň goýan ýumurtgalarynyň ululygy iýmitine görä üýtgedi (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), 24 sagatlyk siýdik we saharoza bilen iýmitlenen dişiler suw bilen iýmitlenen dişilere garanyňda has uly ýumurtga goýdular, 168 sagatlyk siýdik bilen iýmitlenen dişileriň ýumurtgalary bolsa has kiçi boldy (4C surat). Mundan başga-da, siýdik bilen iýmitlenmek liçinkanyň ululygyna ep-esli täsir etdi (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), 24 we 72 sagatlyk siýdik bilen iýmitlenýän dişileriň goýan ýumurtgalaryndan çykan ýumurtgalardan çykan ýumurtgalara garanyňda has uly liçinkalar çykýar. Suw bilen iýmitlenýän we 168 sagatlyk siýdik bilen iýmitlenýän dişiler (4D surat).
Anopheles arabinis urkaçylarynyň sygyr siýdigi we karbamid bilen iýmitlenmeginiň köpeliş ukyby. Gan bilen iýmitlenýän urkaçy çybynlara bioanalizlere ýerleşdirilmezden we ýumurtga goýýan substratlary almazdan 48 sagat öň täze we garry sygyr siýdiginden, dürli konsentrasiýadaky karbamidden, saharozadan (10%) we distilled suwdan (H2O) ybarat bolan iýmitler berildi, 48 sagat (A). Ýumurtgalaryň sany (B, E), ýumurtgalaryň ululygy (C, F) we liçinkalaryň ululygy (D, G) berlen iýmitden düýpli täsirlendi (sygyr siýdigi: BD; karbamid: EG). Dürli harp atlary bilen ölçenen her bir parametr üçin ortaça görkezijiler biri-birinden düýpli tapawutlanýardy (Tukeýiň post-hoc analizini ulanyp birtaraplaýyn ANOVA; p < 0.05). Ýalňyşlyk zolaklary ortaça görkezijiniň standart ýalňyşlygyny görkezýär.
Siýdikiň esasy azotly bölegi hökmünde, gan bilen iýmitlenýän aýallara iýmit hökmünde berlende, ähli barlaglarda reproduktiw parametrlere düýpli täsir etdi. Gan bilen iýmitlenenden soň, karbamid bilen iýmitlenen aýallar tarapyndan goýlan ýumurtgalaryň sany, karbamid konsentrasiýasyna baglylykda (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), 134 µM we 1.34 mM aralygynda karbamid konsentrasiýalary bilen iýmitlenen aýallar has köp ýumurtga goýdular (4E surat). 134 µM ýa-da ondan ýokary karbamid konsentrasiýalary bilen iýmitlenen aýallar suw bilen iýmitlenen aýallara garanyňda has uly ýumurtga goýýarlar (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; 4F surat) we liçinka ölçegleri, enelerde karbamidiň meňzeş konsentrasiýalaryna täsir etse-de (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001) has üýtgeýän boldy (4G surat).
Hoja gözleýän iri şahly sygyrlaryň siýdiginiň baş giňişligi uçujy ekstraktlaryna umumy çekijilik. Aýna turbaly olfaktometrde baha berlen arabiensis (5A surat) siýdigiň ýaşyna düýpli täsir etdi (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; 5B surat). Post-hoc analizi 24 sagatda köne siýdigiň ysynyň ähli beýleki bejergilere garanyňda has ýokary derejede çekijilige sebäp bolandygyny görkezdi (72 sagat: p = 0.0060, 168 sagat: p = 0.012, pentan: p = 0.00070), täze siýdigiň ysyndan başga (p = 0.13; 5B surat). Gan sorýan çybynlaryň siýdigiň ysyna umumy çekijiligi düýpli tapawutlanmasa-da (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; 5C surat), bu dişileriň 72 sagatlyk ýaşlanan siýdigi bilen deňeşdirilende baş giňişligi uçujy ekstraktlaryna has köp çekijidigi anyklandy. gözegçilikler (p = 0.0066; 5C surat).
Hojalyk ediji we gan bilen iýmitlenýän Anopheles arabianus gözlemekde tebigy we sintetiki sygyr siýdigi yslaryna bolan hereket reaksiýalary. Aýna turbaly olfaktometriň shemasy (A). Täze we garry sygyr siýdiginden alnan uçujy ekstraktlaryň hojalyk ediji (B) we gan sorujy (C) çybynlara çekilmegi. Lord An-yň çadyr reaksiýasyny tapyň. Täze (D), 24 sagatlyk (E), 72 sagatlyk (F) we 168 sagatlyk (G) garry sygyr siýdiginden bölünip alnan baş boşlugy ekstraktlary görkezilen. Elektron antennany anyklaýyş (EAD) yzlary gaz hromatografyndan aýrylan we alow ionizasiýa detektory (FID) tarapyndan anyklanan baş boşlugyndaky bioaktiw birleşmelere jogap hökmünde naprýaženiýe üýtgemelerini görkezýär. Ölçeg çyzygy jogap amplitudasyny (mV) saklamak wagtyna (s) garşy görkezýär. Biologiki aktiw birleşmeleriň häsiýetleri we boşadylyş tizlikleri (µg h-1) görkezilen. Ýeke ýyldyzjyk (*) yzygiderli pes amplitudaly jogaby görkezýär. Goşa ýyldyzjyklar (**) öndürilip bilinmeýän jogaplary görkezýär. Tapyň Hoja (H) we gan sorujy (I) An.arabiensis täze we garry sygyr siýdik yslarynyň sintetiki garyndylaryna dürli täsir edýär. Dürli harp atlaryna çekilen çybynlaryň ortaça paýy biri-birinden düýpli tapawutlanýardy (Tukeýiň post-hoc analizini ulanyp, birtaraplaýyn ANOVA; p < 0.05). Ýalňyşlyk sütünleri ölçegiň standart ýalňyşlygyny görkezýär
Ann.arabiensis urkaçysy, gan iýmitinden 72 sagat we 120 sagat soň, ýumurtga taşlama döwründe, pentan gözegçilik topary bilen deňeşdirilende täze we garry sygyr siýdiginden alnan uçujy ekstraktlara artykmaçlyk berilmedi (χ2 = 3.07, p > 0.05; Goşmaça faýl 1: S1 surat).
Urkaçy Ann.arabiensis üçin GC-EAD we GC-MS analizleri sekiz, alty, üç we üç bioaktiw birleşmeleri anyklady (5D-G surat). Elektrofiziologiki jogaplary döredýän birleşmeleriň sanynda tapawutlar syn edilse-de, bu birleşmeleriň köpüsi täze we köne siýdikden ýygnalan her bir kelle boşlugynda uçujy ekstraktda bardy. Şonuň üçin her bir ekstrakt üçin diňe bosagadan ýokary urkaçy antennalaryndan fiziologiki jogap döredýän birleşmeler goşmaça analizlere goşuldy.
Baş boşlugynyň kolleksiýasyndaky bioaktiw birleşmeleriň umumy uçujy bölünip çykma tizligi, esasan p-krezol we m-formaldegid, fenol we fenolyň artmagy sebäpli täze siýdikde 29 µg h-1-den 168 sagatlyk saklanan siýdikde 242 µg h-1-e çenli ýokarlandy. Tersine, 2-siklogeksen-1-on we dekanal ýaly beýleki birleşmeleriň bölünip çykma tizligi siýdik ýaşynyň ulalmagy bilen peseldi, bu bolsa hromatogrammada (5D surat) -G çep panel) we bu birleşmelere fiziologiki jogaplaryň (5D surat -G sag panel) syn edilen pese gaçmagy bilen baglanyşyklydy.
Umuman alanyňda, sintetiki garyndy täze we köne siýdik boşluklarynyň uçujy ekstraktlarynda ýüze çykarylan bioaktiw birleşmeleriň tebigy gatnaşygyna meňzeşdi (5D-G surat) we eýe gözlemekde (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; 5H surat) ýa-da gan sorýan çybynlarda (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; 5I surat) uly gyzyklanma döretmedi. Şeýle-de bolsa, bejerişleriň arasyndaky post-hoc jübüt deňeşdirmeleri, eýe gözlemekçi çybynlaryň pentan gözegçiliklerine garanyňda 24 sagat köne siýdikiň sintetiki garyndysyna ep-esli derejede özüne çekijidigini görkezdi (p = 0.0086; 5H surat).
24 sagatlyk siýdikiň sintetiki garyndylarynda aýratyn komponentleriň roluny bahalandyrmak üçin, Y-truba synagynda alty sany subtraktiw garyndy doly garyndylara garşy bahalandyryldy, bu synagda aýratyn birleşmeler aýryldy. Hoja gözleýän çybynlar üçin, doly garyndydan aýratyn birleşmeleri aýyrmak hereket reaksiýalaryna uly täsir etdi (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Goşmaça faýl 1: S2A surat), ähli subtraktiw garyndylar Kiçi garyndydan doly garyndydan has özüne çekiji boldy. Tersine, doly sintetiki garyndydan aýratyn birleşmeleri aýyrmak, gan sorýan çybynlaryň hereket reaksiýalaryna täsir etmedi (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), dekanaldan başga, bu bolsa doly garyndynyň özüne çekijiligine garanyňda has pes derejä getirdi (p = 0.022; Goşmaça faýl 1: S2B surat).
Efiopiýadaky bezgek keseliniň ýaýran obasynda, meýdan şertlerinde çybynlary özüne çekmekde 24 sagatlyk sygyr siýdiginden ýasalan sintetiki garyndynyň netijeliligi on gije bahalandyryldy (6A surat). Jemi 4861 çybyn tutuldy we anyklandy, olaryň 45,7% Anthropus.gambiae sl, 18,9% Anopheles pharoensis we 35,4% Culex spp. (Goşmaça faýl 1: S1 tablisa). Anopheles arabinis, PZR analizi arkaly anyklanan An.Gambiýa görnüş toplumynyň ýeke-täk agzasydyr. Her gije ortaça 320 çybyn tutuldy, şol wagt sintetiki garyndyly ýemler garyndysyz jübütlenen duzaklara garanyňda has köp çybyn tutdy (χ2(0, 3196) = 170,0, p < 0,0001). Synagyň başynda, ortasynda we ahyrynda bäş gözegçilik gijesiniň her birinde ýemsiz duzaklar goýuldy. Meňzeş sanlar Her bir jübüt duzakda çybynlaryň sany tutuldy, bu bolsa öýleriň arasynda hiç hili tapawut ýokdugyny görkezýär (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) we gözleg döwründe ilatyň sanynyň azalmadygyny görkezýär. Gözegçilik duzaklary bilen deňeşdirilende, sintetiki garyndyny öz içine alýan duzaklarda tutulan çybynlaryň sany ep-esli artdy: öý eýesini gözleýän (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), ýakynda gan içýän (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) we göwrelilik (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Goşmaça faýl 1: S1 tablisa). Bu, tutulan çybynlaryň umumy sanynda hem öz beýanyny tapýar: öý eýesini gözleýän > gan sorýan > göwreli > ýarym göwreli > erkek.
24 sagatlyk sintetiki sygyr siýdigi ysly garyndysynyň netijeliliginiň meýdan bahalandyrmasy. Meýdan synaglary Efiopiýanyň günorta-merkezi böleginde (karta), Maki şäheriniň golaýynda (goýuň), Keselleriň Gözegçiligi Merkeziniň (CDC) ýagtylyk duzagyny (sagda) jübüt öýlerde, latyn kwadrat dizaýny bilen (howadan düşürilen surat) ulanylyp geçirildi (A). Sintetiki ysly CDC fototuzaklary dişi Anopheles arabesques-i özüne çekýär we tutýar (B), ýöne Anopheles farroes-i däl (C), başgaça usulda, fiziologik ýagdaýa bagly täsir bilen. Mundan başga-da, bu duzaklar eýe Culex çybynlarynyň sanynyň ep-esli artandygyny tutdy.(D) Gözegçilik bilen deňeşdirilende. Çepdäki sütunlar ysly ysly ysly ysly (ýaşyl) we gözegçilik (açyk) duzaklarynda tutulan çybynlaryň ortaça saýlama indeksini görkezýär (N = 10), sagdaky sütunlar bolsa gözegçilik duzaklarynyň jübütlerinde (açyk; N = 5) ortaça saýlama indeksini görkezýär. ). Ýyldyzlar statistik ähmiýetlilik derejelerini görkezýär (*p = 0.01 we ***p < 0.0001)
Üç görnüş sintetiki garyndylary öz içine alýan duzaklarda dürli görnüşde tutuldy. Eýe gözlemek (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), gan bilen iýmitlenmek (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) we göwrelilik (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) sintetiki garyndyny goýberýän duzakda .arabiensis tutuldy (6B surat), An mukdary bolsa tapawutlanmady. Dürli fiziologik ýagdaýlarda Pharoensis tapyldy (6C surat). Culex üçin, gözegçilik duzaklary bilen deňeşdirilende, eýe gözleýän çybynlaryň sanynyň diňe ep-esli artandygy anyklandy (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; 6D surat).
Efiopiýada köpelýän ýerler bilen oba jemgyýetleriniň arasynda mümkin bolan eýeleriň daşynda ýerleşýän eýe iým duzaklary, bezgek çybynlarynyň sygyr siýdiginiň ysyny eýe ýaşaýyş jaýynyň alamaty hökmünde ulanyp-ulanmaýandygyny bahalandyrmak üçin ulanyldy. Eýe alamatlary, yssylyk we sygyr siýdiginiň ysy bolanda ýa-da bolmadykda, hiç bir çybyn tutulmady (Goşmaça faýl 1: S3 surat). Şeýle-de bolsa, ýokary temperatura we sygyr siýdiginiň ysy bolanda, dişi bezgek çybynlary çekildi we tutuldy, siýdigiň ýaşyna garamazdan, az sanly bolsa-da (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Goşmaça faýl 1: S3 surat). Tersine, suw gözegçilikleri ýokary temperaturada bezgek çybynlaryny tutmady (Goşmaça faýl 1: S3 surat).
Bezgek çybynlary, beýleki mör-möjekler ýaly [2, 4, 24, 25, 26], ýaşaýyş taryhynyň aýratynlyklaryny güýçlendirmek üçin sygyr siýdigi (ýagny, kölçeler) bilen kompensasiýa iýmitlenme arkaly azot saklaýan birleşmeleri özleşdirýärler we paýlaýarlar. Sygyr siýdigi, oba öýleriniň we ýumurtga çykaryş ýerleriniň golaýyndaky sygyrhanalar we beýik ösümlikler ýaly bezgek wiktorlarynyň dynç alyş ýerleri bilen ýakyn baglanyşykly elýeterli gaýtadan dikeldilýän çeşmedir. Urkaçy çybynlar bu çeşmäni ys arkaly tapýarlar we siýdigiň esasy azotly bölegi bolan karbamid bilen birlikde siýdigiň azotly birleşmeleriniň özleşdirilmegini kadalaşdyryp bilýärler [15, 16]. Urkaçy çybynlaryň fiziologiki ýagdaýyna baglylykda, siýdigiň içindäki iýmit maddalary, eýe gözleýän urkaçy çybynlaryň uçuş işjeňligini we ýaşaýşyny, şeýle hem birinji gonadotropik siklde gan bilen iýmitlenýän şahslaryň ýaşaýşyny we köpeliş aýratynlyklaryny ýokarlandyrmak üçin bölünip berilýär. Şonuň üçin siýdigiň garyşmagy, iýmit ýetmezçilik çekýän ulular ýaly ýapyk bolan bezgek wiktorlary üçin möhüm iýmit rolyny oýnaýar [8], sebäbi ol urkaçy çybynlara pes töwekgelçilikli iýmitlenme arkaly möhüm azotly birleşmeleri özleşdirmäge mümkinçilik berýär. Bu tapyndynyň epidemiologiki netijeleri uly, sebäbi urkaçylar köpelýär. olaryň ömrüniň dowamlylygy, işjeňligi we köpeliş möçberi, bularyň hemmesi wektor kuwwatyna täsir edýär. Mundan başga-da, bu hereket geljekki wektor dolandyryş maksatnamalarynyň nyşany bolup biler.